UNAT- CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS Microbiología General 2022

Práctica Nro. 1

MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO I.-

GENERALIDADES:

Es de suma importancia reconocer los equipos y materiales que se utilizarán durante las
prácticas de Microbiología General, las cuales vendrán acompañadas de las reglas de bioseguridad a
seguir dentro del laboratorio. El conocimiento de los materiales y equipos nos ayudará a saber cual es su
uso correcto y el momento en que debemos utilizarlo; y así evitar obtener falsos resultados durante la
práctica.
No está por demás mencionar que cada estudiante se hará responsable del cuidado y limpieza
del material que se le proporcione y evitar deteriorar los equipos del laboratorio.
La mayor parte de los materiales de laboratorio están hechos de vidrio, plástico, acero inoxidable y
madera.

1.1 Material de Vidrio

El vidrio es empleado por su composición y calidad del mismo, las marcas kimax y Pyrex utilizan vidrio
de borosilicato, por tolerar hasta 510 oC sin deformarse.
Los frascos de vidrio color ambar son utilizados por reducirla cantidad de luz que llegan a las
sustancias contenidas en ellos.
El vidrio de cristal estándar se usa a temperatura ambiente o cercana a ellas, es relativamente fácil de
fundir y moldear. Algunos materiales son:
- Tubos de ensayo
- Placas petri
- Vasos de precipitación - Pipetas, etc

1.2 Material de plástico

Recientemente se ha introducido material plástico con diferentes propiedades, por la composición de

resinas que no sufren la acción corrosiva de álcalis y ácidos, así mismo existen plásticos resistentes a
temperaturas muy altas. Algunos materiales son: - Placas petri
- Micropipeta, etc

1.3 Materiales y equipos metálicos

El material metal empleado para la fabricación de equipos e instrumentos de laboratorio son de alta
calidad, preferentemente acero y aleaciones que toleran la actividad química de ácidos y álcalis y, son
resistentes a la manipulación y funcionamiento continuo.
Algunos materiales y equipos son:
- Centrífugas
- Agitador magnético
- Baño María
- Autoclave
- Refrigerador
- Estufa, etc
A continuación, se muestra diversas imágenes de materiales y equipos de laboratorio, las cuales tendrá
que indicar cuales son sus principales funciones y aplicaciones:

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MATERIALES DE VIDRIO:

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Tubo de ensayo ………………………………………………………………………………

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Matraz

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Placa petri ………………………………………………………………………………

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Pipeta ………………………………………………………………………………………..

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Probeta

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Vaso de precipitación

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Asa Drigalski ………………………………………………………………………………………..

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Bagueta

MATERIALES DE PORCELANA:

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MATERIALES DE PLÁSTICO

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Micropipeta

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Gotero

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Propipeta
MATERIAL Y EQUIPOS DE METAL

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Asa bacteriológica …………………………………………

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Espátula

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Mechero Bunsen

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Agitador magnético y barra magnética

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Autoclave

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Estufa de Laboratorio

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Campana de flujo laminar

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Baño María

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Contador de colonias
Práctica Nro. 2

MICROSCOPÍA.- DESCRIPCIÓN Y MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO I.-

GENERALIDADES:

El microscopio compuesto, es un instrumento fundamental e indispensable para la microbiología, nos

valemos de dicho instrumento para visualizar la morfología bacteriana, identificar hongos filamentosos,
protozoarios, actividades celulares etc.

1.1 Microscopio Compuesto.-

El microscopio compuesto -MC- es un instrumento óptico formado por dos sistemas de lentes
convergentes que posibilita la observación y examen de objetos imperceptibles a simple vista a través de
una imagen invertida, virtual y aumentada. El ojo humano puede distinguir entre dos puntos que están
separados por una distancia de mas de 0.2 mm, pero si la distancia disminuye a 0.1mm o menos,
entonces lo observará como un solo punto.

El poder de resolución de MC depende de su abertura numérica y de la longitud de onda de la radiación

que se usa (luz visible). A menor longitud de onda mayor será el poder de resolución, esto explica por
qué el Microscopio electrónico, que usa un haz de electrones a altísima velocidad y con una longitud de
onda pequeñísima posee un poder de resolución de 10 a 20 Angstrom, a diferencia del MC que tiene una
resolución de 10 micras.

Objetivos específicos:

Al término de la práctica el alumno estará en condiciones de:

✓ Reconocer las diferentes partes del microscopio compuesto, así como las funciones de cada
una de ellas.

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✓ Realizar una correcta iluminación y un buen enfoque de los preparados microscópicos. ✓

Evitar el deterioro de este instrumento por un incorrecto traslado y manejo de él.

1.1.1 Descripción del Microscopio Compuesto. El microscopio compuesto presenta una parte óptica,
mecánica y por un sistema de iluminación.

➢ Parte óptica.
▪ Sistema de lentes: a) Lente Ocular y b) Lentes objetivos

a) Lente ocular. Pueden ser monoculares o binoculares. Es un sistema de dos lentes

planoconvexos. Por fuera y en su parte interior lleva una numeración (5x, 10x, 12x) que indica
el número de aumentos. Da una imagen virtual, derecha y aumentada.
b) Los objetivos. Van cerca al objeto a observar. Son tubos cilíndricos-cónicos que lleva en su
interior un sistema de lentes biconvexas que proporcionan una imagen real e invertida. La lente
de la parte inferior, la que se ubica en la porción cónica del tubo se denomina Lente frontal. En
la parte lateral del objetivo lleva inscrita el número de aumentos (10x, 40x, 100x).
Clase de objetivos:
▪ Objetivos a seco. Aquellos que entre la lente frontal y el objeto a observar no existe sustancia
alguna, excepto el aire, se usan en observaciones de preparados en fresco. Se clasifican en:

Objetivos de pequeño aumento, hasta 10x

Objetivos de mediano aumento, de 10x a 45x
Objetivos de gran aumento, entre 45x a menos de 100x
• Objetivos de inmersión. que entre la lente frontal y el objeto a observar se interpone una sustancia
líquida (comúnmente aceite de cedro), cuyo índice de refracción es igual o muy cercano a la del
vidrio (1.5), se usa para observar preparados en seco.
Características:
Ser el de mayor aumento
Tener la lente frontal mas pequeña

➢ Parte mecánica.
Función de soporte y ubicación a los elementos del sistema óptico – lentes y elementos de
iluminación. Está constituido por:

- Pie. Sostiene el microscopio, asegurando su estabilidad. Presenta diferente formas (herradura,

elíptica, rectangular, etc).
- Columna o brazo. Es la parte articulada al pie por una bisagra llamada charnela; sostiene a la
platina, tubo ocular y tornillos macro y micrométricos.
- La platina: es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u objeto que se va a
observar. Presenta un orificio, en el eje óptico del tubo, que permite el paso de los rayos
luminosos a la preparación. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmóvil; en otros
casos puede ser giratoria; es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir
movimientos circulares.

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- Las pinzas: son dos piezas metálicas que sirven para sujetar la preparación. Se encuentran en la
platina.
- Carro móvil: es un dispositivo que consta de dos tornillos y está colocado sobre la platina, que
permite deslizar la preparación con movimiento ortogonal de adelante hacia atrás y de derecha a
izquierda.
- El revólver: es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los objetivos. Al
girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posición de trabajo, lo
que se nota por el ruido de un piñón que lo fija.
- El tubo: tiene forma cilíndrica y está ennegrecido internamente para evitar los reflejos de la luz.
En su extremidad superior se colocan los oculares y en extremo inferior el revólver de objetivos.
El tubo se encuentra unido a la parte superior de la columna mediante un sistema de
cremalleras, las cuales permiten que el tubo se mueva mediante los tornillos.
- El tornillo macrométrico: girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio,
deslizándose en sentido vertical gracias a un mecanismo de cremallera. Estos movimientos
largos permiten el enfoque rápido de la preparación.
- El tornillo micrométrico: mediante el ajuste fino con movimiento casi imperceptible que
produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nítido de la preparación.
Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm., que se utiliza para precisar sus
movimientos y puede medir el espesor de los objetos.

➢ Sistema de Iluminación
Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la
preparación u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada. Comprende los
siguientes elementos:

- El espejo: necesario si la fuente de iluminación no está construida dentro del microscopio y ya

alineada con el sistema óptico, como suele ocurrir en los microscopios modernos. Suele tener dos
caras: una cóncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La cara cóncava
se emplea de preferencia con iluminación artificial, y la plana, para natural (luz solar). Los
modelos más modernos no poseen espejos sino una lámpara que cumple la misma función que el
espejo.
- Condensador: está formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos
luminosos sobre el plano de la preparación, formando un cono de luz con el mismo ángulo que el
del campo del objetivo. El condensador se sitúa debajo de la platina y su lente superior es
generalmente planoconvexa, quedando la cara superior plana en contacto con la preparación
cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliación). El condensador puede
deslizarse verticalmente sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo, bajándose para su
uso con objetivos de poca potencia.
- Diafragma: el condensador está provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura para
ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el contraste, lo
que se hace cerrándolo más de lo que conviene si se quiere aprovechar la resolución del sistema
óptico.

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1.2 Límite de Resolución (LR).-

Se define como la distancia mínima a la que se deben encontrar dos puntos para que puedan observarse
separados; y es inversamente proporcional al poder de resolución. Su fórmula es:

LR = 0.61 λ AN: Apertur a numérica, se encuentra indicado en cada objetivo; su

fórmula es. n.senα; donde “n” es el índice de refracción y α es el
AN
semiángulo de apertura.
λ: Longitud de onda de la luz utilizada

Resuelve el siguiente ejercicio:

Calcula el límite de resolución de cada objetivo del microscopio compuesto, si observamos a una
longitud de onda de 0.45 µm; A continuación identifique cual lente objetivo tiene mayor límite de
resolución y mayor poder de resolución

Lente objetivo aumento A.N L.R

Panorámico
Pequeño aumento
Mediano aumento
Inmersión

Lente con mayor límite de resolución:________________________________________________

Lente con mayor poder de resolución:________________________________________________

MICROSCOPIO COMPUESTO

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Coloque el nombre de cada uno de los elementos del Microscopio Compuesto:

A.- _______________________________ H.- ______________________________

B.- _______________________________ I.- _______________________________

C.- _______________________________ J.- _______________________________

D.- _______________________________ K.- _______________________________

E.- _______________________________ L.- _______________________________

F.- _______________________________ M.- ______________________________

G.- _______________________________ N- _______________________________

II. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

• De Robertis, E.D.P. 1996. Biología Celulary Molecular. 11 a Edición. Editorial “El Ateneo”.
Buenos Aires.

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• Green, E.R. y K. Bobrowsky. 1970. Laboratorio de Biología. Investigaciones y Publicaciones

Culturales S.A. Mexico. 246 pp.
Práctica Nro. 3

OBSERVACIÓN DE HONGOS FILAMENTOSOS Y LEVADURAS I.-

GENERALIDADES:

Los hongos son organismos eucarióticas uni o pluricelulares, no realizan fotosíntesis pues carecen de
clorofila, en su organización estructural poseen núcleo, vacuolas y mitocondrias. Este grupo está muy
difundido en la naturaleza y ejerce una profunda influencia sobre el medio en que viven. Incluye
organismos saprófitos, parásitos de plantas y animales, además especies útiles al hombre. Se pueden
dividir en hongos macroscópicos (setas) y hongos microscópicos (mohos y levaduras). (Robles, 2007)

1.1. Mohos.-

Denominados también hongos filamentosos. Los filamentos o hifas generalmente se ramifican y a ese
conjunto se denomina MICELIO. Éste micelio que presenta un aspecto algodonoso puede ser observado
a simple vista (observación macroscópica). A partir de ellas se forman las esporas o CONIDIOS. Cada
conidio al germinar, desarrolla una nueva hifa y luego un micelio.

Los conidios constituyen las esporas asexuadas y pueden estar expuestas o estar incluidas en un
ESPORANGIO, son pigmentados y varían en tamaño, forma y color según las especies, constituyen una
forma muy importante de reproducción en este grupo microbiano. Son fácilmente dispersados por el aire
y de este modo contaminan los laboratorios y otros ambientes laborales. Algunos hongos también se
reproducen sexualmente.

Los mohos tienen un rol muy importante en la descomposición de materiales lignocelulósicos. Algunas
especies son usadas en la producción de antibióticos y otros en la producción de metabolitos como:
ácido cítrico; ácido glucónico, amilasas, etc. También hay especies patógenas y otros que alteran
diferentes productos alimenticios.

1..2 Levaduras.-

Son hongos unicelulares, sus células tienen formas esféricas, ovaladas o elipsoidales o ligeramente
cilíndricas. Por lo general se reproducen asexualmente por gemación, algunas especies se reproducen
sexualmente. No forman micelio. En relación a su tamaño son mas grandes que las bacterias, por lo
tanto no es necesario observarlas con objetivo de inmersión, y es suficiente un preparado en fresco. Las
levaduras están muy difundidas en la naturaleza y crecen fácilmente en frutas o en otras sustancias que
contengan azúcares. Se les puede encontrar fácilmente en suelos de huertas y viñedos.

Incluyen especies saprófitas, patógenas (causan enfermedad) y otras de importancia industrial, entre
ellas Saccharomyces cerevisiae, que es usada en panadería, obtención de etanol y, diversas bebidas
alcohólicas.

Objetivos:

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Al finalizar la práctica el alumno será capaz de:

✓ Identificar macroscópicamente micelios de hongos filamentosos

✓ Identificar microscópicamente las partes de un hongo filamentoso

✓ Observar la levadura Saccharomyces cerevisiae en su fase de reproducción por gemación

II. MATERIALES

2.1 Material biológico:

▪ Frutas con formaciones de hongos
▪ Moho de pan
▪ Levadura de pan

2.2 Material de vidrio:

▪ Láminas porta objeto
▪ Láminas cubre objeto
▪ Estilete
▪ Pipetas pasteur
▪ Gotero pasteur
▪ Tubo de ensayo
▪ Probeta de 50 mL
▪ Placas petri
▪ Mecheros

2.3 Reactivos:
▪ Azul de Lactofenol, azul de metileno
▪ Agua destilada
▪ Sacarosa

2.4 Equipos:
▪ Microscopio compuesto

2.5 Otros:
▪ Asa bacteriológica
▪ Ron de quemar

III. PROCEDIMIENTO

3.1 Observación de Hongos filamentosos:

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3.1.1 A partir frutas con formaciones de hongo de fruta y moho de pan

- Con el estilete coger una pequeña muestra y trasladarlo a lámina porta objeto.

- Agregar una gota de azul de lactofenol o azul de metileno o agua destilada.

- Cubrir con lámina cubre objeto

- Observar en microscopio con el objetivo de 10X o 40X. Esquematizar

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3.2 Observación de levadura:

3.2.1 Reproducción por gemación de Saccharomyces cerevisiae:

- Preparar una solución al 5% de sacarosa en un tubo de ensayo (5 gramos de sacarosa diluida en

100 mL agua destilada).

- Adicionar a la solución 0.5 g de levadura de panificación, agitar levemente y dejar reposar por
10 minutos.

- Extraer una gota de la suspensión y trasladarlo a lámina porta objeto, cubrir con lámina cubre
objeto.

- Observar en microscopio con el objetivo de 10X o 40X. Esquematizar

IV RESULTADOS

A continuación esquematiza las muestras observadas, dibujando y coloreando, señalando las partes
observadas, finalmente escribe lo indicado en la etiqueta correspondiente:

Moho de mandarina
Muestra:……………………………………………………..
Partículas alargadas con forma
Observación………………………………………………..
de venas
Agua destilada
Colorante…………………………………………………….
10 x
Aumento……………………………………………………..

Preparado……………………………………………………
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Muestra:……………………………………………………..

Observación………………………………………………..

Colorante…………………………………………………….

Aumento……………………………………………………..

Preparado……………………………………………………
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Muestra:……………………………………………………..

Observación………………………………………………..

Colorante…………………………………………………….

Aumento……………………………………………………..

Preparado……………………………………………………

V DISCUSIÓN

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VI CONCLUSIÓN

VII REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

Green, E.R. y K. Bobrowsky. 1970. Laboratorio de Biología. Investigaciones, Publicaciones Culturales

S.A. México. 246 p.
Robles R. 2007. Manual de prácticas de Microbiología Industrial. Primera Edición. Perú. 76p.

CUESTIONARIO:

1.- ¿Por qué se utiliza una solución de sacarosa para los preparados en fresco de Saccharomyces
cerevisiae?

2.- ¿Redacta tres diferencias entre hongos filamentosos y levaduras?

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Práctica Nro. 4

OBSERVACIÓN DE PROTOZOARIOS I.-

GENERALIDADES:

Los protozoos son microorganismos eucarióticos que carecen de paredes celulares. Por lo general
son incoloros y móviles. Los protozoos se encuentran en una variedad de agua dulce y de agua de mar;
gran parte de ellos son parásitos de otros animales, incluyendo al hombre y algunos se encuentran
desarrollándose sobre la tierra o en hábitats aéreos, por ejemplo las superficies de los árboles
(Madigan y col. 2000).

Gran parte de los protozoos son móviles, gracias a estructuras especiales, los movimientos pueden
ser de tipo ameboides como los sarcodina; mediados por flagelos, como los mastigóforos; o por cilios
como los cilióforos. Los esporozoos, un cuarto grupo, generalmente no son móviles y son parásitos de
otros animales. Los protozoos de vida libre juegan un rol importante en la conservación del ambiente,
debido a su hábito alimentario, pueden digerir partículas orgánicas y microorganismos que se
encuentran en sistemas acuáticos como contaminantes. Por tal razón son usados en los sistemas de
depuración de agua por métodos biológicos. (Robles, 2000).

Objetivos:

Al finalizar la práctica el alumno será capaz de:

✓ Observar protozoos de vida libre

✓ Observar movimientos ameboides, flagelados y ciliados de protozoos

II. MATERIALES

2.1 Material biológico:

▪ Agua estancada

2.2 Material de vidrio:

▪ Láminas porta objeto
▪ Láminas cubre objeto
▪ Gotero pasteur

2.3 Equipos:
▪ Microscopio compuesto
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III. PROCEDIMIENTO

3.1 Observación de protozoos de vida libre

- Con el gotero pasteur, tomar unas gotas de agua estancada

- Transferir una gota a lámina porta objeto, cubrir con lámina cubre objeto,
- Observar con objetivos de 10X y 40X. Esquematizar

IV. RESULTADOS

A continuación esquematiza las muestras observadas, dibujando y coloreando, señalando las partes
observadas, finalmente escribe lo indicado en la etiqueta correspondiente:

Muestra:……………………………………………………..

Observación………………………………………………..

……………………………………………………………………

Aumento……………………………………………………..

Preparado……………………………………………………

V. CONCLUSIÓN:

VI REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
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- Madigan M. T.; J.M.Martinko y J. Parker. 2000. Brock, Biología de los Microorganismos. 8 a

Edic. España
- Robles R. 2007. Manual de prácticas de Microbiología Industrial. Primera Edición. Perú. 76p.

Práctica Nro. 5

OBSERVACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS I.-

GENERALIDADES:

Las bacterias son organismos procariotas, que miden uno o varios micrómetros, las podemos
diferencias en dos grandes grupos: Las bacterias Gram positivas y bacterias Gram negativas. En
términos generales, las capas que rodean a la célula bacteriana, se conoce como envoltura celular o
pared celular. La estructura y organización de ésta difieren en las bacterias Gram positivas y Gram
negativas. El componente químico común en ambas es el péptidoglucano o mureína, que es el
responsable de la forma y consistencia de la pared celular. La cantidad de péptidoglucano de la pared de
las células bacterianas varía desde el 90% en la pared de algunas bacterias Gram-positivas hasta menos
del 10% en las bacterias Gram-negativas. La pared celular de las bacterias Gram-positivas contiene
pequeñas cantidades de proteínas y polisacáridos, a menudo también ácidos teicoicos (polímeros de
ribitolfosfato o glicerol-fosfato unidos mediante enlaces fosfodiéster) o de ácidos teicurónicos. Estos
ácidos están unidos al péptido-glucano por los fosfatos. En las proteobacterias, Gram-negativas, la capa
interna de la pared celular es pobre en péptidoglucano y la capa externa rica en lipoproteínas y
lipopolisacáridos, los cuales constituyen más del 80% del peso seco de la pared. El espacio entre la
membrana externa y la capa de péptidoglucano, llamado periplásmico, contiene un gran número de
proteínas enzimáticas (Carrillo, 2005).

A través de la coloración de Gram, podemos diferencias ambos grupos bacteriano; el

fundamento radica en la diferente estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram
postivas tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram- tienen
una capa de peptidoglicano más fina y una capa lipopolisacarídica externa. Tras la tinción con el primer
colorante (Cristal violeta) se efectúa un lavado con etanol que arrastrará al colorante sólo en las Gram
negativas, mientras que en las Gram postivas el colorante queda retenido y las células permanecerán
azules. Las células Gram negativas se teñirán después con un colorante de contraste (safranina) para que
puedan observarse. (Jawest, 2005).

Objetivos

Al finalizar la práctica el alumno será capaz de:

✓ Manipular adecuadamente la tinción diferencial de Gram

✓ Diferenciar frente al microscopio las bacterias Gram postivas y Gram negativas

II. MATERIALES

2.1 Material biológico:

▪ Yogurt natural

2.2 Material de vidrio:

▪ Láminas porta objeto
▪ Láminas cubre objeto
▪ Gotero pasteur
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▪ Mechero

2.3 Reactivos:
▪ Violeta de genciana
▪ Safranina
▪ Lugol
▪ Alcohol acetona
▪ Agua destilada
▪ Aceite de cedro

2.4 Equipos:
▪ Microscopio compuesto

2.5 Otros:
▪ Mondadientes estériles

III. PROCEDIMIENTO

3.1 Tinción de corpúsculos metacromáticos (Coloración diferencial de Gram)

- Tomar una muestra de un yogurt con el asa de siembra y colocar en un portaobjetos.

- Teñir con azul de metileno (descrito en coloración Gram), esperar 2 minutos

- Dejar secar y fijar por calor

- Colocarlo sobre un soporte y cubrirlo con una solución de violeta de genciana, esperar por 2
minutos

- Desechar el exceso del colorante y agregar lugol, esperar por 1 minuto.

- Desechar el exceso de colorante y agregar etanol-acetona para decolorar, esperar 20 segundos.

- Lavar con agua

- Añadir safranina (colorante de contraste), esperar 1 minuto

- Lavar con agua

- Esperar que seque y observar con objetivo de inmersión. Esquematizar.

- En esta preparación se observan dos microorganismos: Lactobacillus (con los corpúsculos

metacromáticos en su interior) y Streptococcus (forman cadenas).
IV RESULTADOS

A continuación esquematiza las muestras observadas, dibujando y coloreando, señalando las

partes observadas, finalmente escribe lo indicado en la etiqueta correspondiente:

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Muestra:……………………………………………………..

Observación………………………………………………..

Colorante…………………………………………………….

Aumento……………………………………………………..

Preparado……………………………………………………

Muestra:……………………………………………………..

Observación………………………………………………..

Colorante…………………………………………………….

Aumento……………………………………………………..

Preparado……………………………………………………

V DISCUSIÓN

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VI CONCLUSIÓN

VII REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

- Carrillo L. 2005. Manula de microbiología Agrícola. Universidad Nacional de Jujuy.176p.

- Brooks G. 2005. Microbiología Médica de Jawetz, Melnick y Adelberg. 896p.

Práctica Nro. 6

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO I.-

GENERALIDADES:

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su

crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio
en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo.
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Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una
serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así
como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La
mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los
líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de
extractos de carne, peptona y/o triptona a la que se añadirán otros ingredientes. El Agar es un elemento
solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. En los diferentes medios de
cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre
completa, bilis, etc. Los hidratos de carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los
microorganismos que ayuden a identificarlos.(Madigan, 2004)

Los medios de cultivo preparados pueden ser clasificados por su aspecto en: Líquidos,
Semisólidos, Sólidos. Y por su uso en: Medios de cultivos básicos y Medios de cultivos especiales
como: mejorados, selectivos, diferenciales, de transporte.(Madigan, 2004)

Objetivos:

Elaborar medios de cultivo sólido y líquido para el crecimiento de microorganismos

II. MATERIALES

2.1 Insumos:
▪ Papa amarilla
▪ Sacarosa

2.2 Material de vidrio: ▪

Matráz de 250 mL
▪ Probeta de 100 mL
▪ Vaso de precipitación de 250 mL
▪ Placas petri

2.3 Reactivos: ▪
NaCl
▪ Agar
▪ Agua destilada
▪ NaOH 10N ▪ HCl 0.1N.

2.4 Equipos:
▪ Agitador magnético
▪ Barra magnética
▪ Balanza analítica
▪ Cocina eléctrica
▪ Autoclave
▪ Campana de flujo laminar
▪ Potenciómetro

2.5 Otros:
▪ Papel aluminio
▪ Espátula
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▪ Tela de nailon
▪ Papel craff
▪ parafilm

III. PROCEDIMIENTO

3.1 Medio Agar Papa

 Reactivos para medio Agar Papa

Papa 150g.
20g.
Sacarosa 7.5g.
Agar 50 mL
Agua destilada 6.8

pH

- Se cocinan las papas (peladas, pesadas previamente y cortadas en pedacitos) en 25 mL de agua

destilada hasta que se muestren cocidas.

- Colar el extracto de papa a través de varias capas de tela

- El filtrado mezclar con los demás ingredientes(sacarosa) ya disueltos en los 25 mL de agua

destilada restantes (excepto el agar)

- Corregir el pH hasta 6.8 con NaOH 10N, o HCl 0.1N.

- Disolver en caliente el agar

- Vaciar a viales de vidrio y cubrirlos con papel aluminio - Envolver los viales en paquetes

de 6 con papel craff.

- Esterilizar en autoclave a 15 lb, 120°C durante 15 min.

IV. RESULTADOS

A. A continuación, el estudiante deberá esquematizar, graficando y coloreando, el medio de cultivo

que preparó, indicando ordenadamente paso a paso como lo obtuvo.

B. Así mismo detallará las principales aplicaciones de todos los medios de cultivo preparados en
clase, haciendo énfasis si es un medio de cultivo básico o selectivo de acuerdo a sus propiedades
químicas.

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