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lvfEXICO: Luz Saviñon No. 1027 - 4 Col. Narvanc

Deleg. Benito Juárez C.P. 03020 México, D.f.
Tel. ( 5255) 5672 0359, 5543 1960 Tel./Fax: 5672 0388
peproinex@prodigy.net.inx smvw.peprotech.com

NOTA IMPORTANTE

Este kit contiene un frasco con Avidin HRP el cual debe

manejarse según las siguientes instrucciones:

¡NO US7$4f LA AVIDINA PEROXIDASA

D$4tECTAMENTE DEL FRASCO!

Frasco con 60uL de Avidin HRP Conjugada el cual debe

ser alicuatado en 10 viales de 5.5uL cada uno y
almacenar a -20o C (menos veinte grados centígrados).
Estas alícuotas congeladas a -20O C (menos veinte grados
centígrados) son estables al menos 2 años. Esta Avidina
debe ser utilizada exclusivamente con ABTS

Hoja de datos
Kit de desarrollo ELISA ABTS estándar para IL-10 murina
Catal0g# 900-K53
. koi# 0fi12_05j
Descripción: El kit de desarrollo ELISA IL-10 murina contiene
componentes clave' necesarios para la medición cuantitativa deEstándar/Muestra: Diluir estándar de 3,0ng/ml a cero en
IL-10 murina natural y recombinante en un diluyente ELISA sándwich.
pocillo
dentro del intervalo de 39-5000pg/ml. Utilizando el ELISA
protocolo descrito a continuación. las nñcroplacas, reactivos y
soluciones recomendados. los componentes suministrados en este
kit son suficientes para ensayar IL-10 murina en
aproximadamente 1000 pocillos de placa ELISA.
Anticuerpo de Captura: 200pg de Rabbit Anti-Murine IL-10
2.5mg D-mannitol. Centrifugar el vial antes de abrirlo.
Reconstituir en lml de agua estéril para una concentración de
200qg/ml.
Anticuerpo de detección: 50;ig de anticuerpo de conejo biotinilado
contra la IL- 10 murina + 2,5mg de D-manitol. Centrifugar cial
antes de abrir.
Reconstituir en 0,50ml de agua estéril para una
concentración de 100pg/nil.
IL-10 murina estándar: I pg de IL-10 murina recombinante +
2,2 mg de BSA + 11,0 mg de D-manitol. Centrifugar el vial antes de
abrirlo. Reconstituir en lml de agua estéril para una concentración estándar cero, o 1,3 unidades para la concentración estándar más
$f3
Nota: Los componentes reconstituidos son estables durante 2 semanas durante aproximadamente 15 minutos. Las lecturas de D.O.
almacenados a 2-8°C. Los componentes reconstituidos y
alicuotados pueden conservarse a -20 °C hasta 6 meses.
Conjugado avidina-IUA: vial 60g1. Una vez recibido, el
conjugado avidina-HRP debe alicuotarse en diez viales de 6p1 y
almacenarse a <- 20'C. Las alícuotas almacenadas congeladas a
F20'C son estables hasta 2 años desde la fecha de recepción. Evitar
más de un ciclo de congelación-descongelación.
La avidina debe utilizarse iii únicamente con ABTS.
MATERIALES RECOMENDADOS ..t .
Microplacas ELISA (Nunc MaxiSorp Prod. # 439454, o Corning Prod
# 3590);
Tween-20 (Sigma Cat. # P-7949);
BSA (Sigma Cat # A-7030);
ABTS Liquid Substrate Solution (Sigma Cat. # A3219);
Dulbecco's PBS [10-1 (Gibco BRL Cat. # 14200-075).
frincctnn fJusincsS f'ark, 5 Crescent Avc., P O. Box 27a
Rocky Hill, NJ 08553 EE.UU.
Tel: 609.497.0253 F8x: 609.497.0321
we p "protcch com Email: in*^ !P¥.Pr 0-*'+
Exención de un año a partir de la fecha de recepción
..,. ,, : " ELISA PROT9<.OL "¿. ..". ,. '.. :...â...:
diluyente. Añada inmediatamente l00pl de estándar o s-mple a cada
por triplicado. Incubar a temperatura ambiente durante al menos 2 horas.
Detección: Aspirar y lavar la placa 4 veces. Diluir el anticuerpo
de detección en diluyente hasta una concentración de 0,50pg/ml.
Añadir l00pl por pocillo. 1ncubar a temperatura ambiente durante
Avidina-HRP Con jupado: Aspirar y lavar la placa 4 veces. Diluir
5,5p1 de conjugado avidina-HRP I:2000 en diluyente para un
volumen total de 11ml. Añadir l00pl por pocillo. Incubar 30
minutos a temperatura ambiente.
ABTS Liouid S u b s t r a t o -
(El sustrato ABTS debe estar a temperatura ambiente antes de
su uso) Aspirar y lavar la placa 4 veces. Añadir 100 ml de
solución de sustrato a cada pocillo. Incubar a temperatura
ambiente para el desarrollo del color.
Controlar el desarrollo del color con un lector de placas ELISA a 405 nm.
con corrección de longitud de onda a 650 nm.
NOT£: Se obtienen curvas estándar fiables cuando las lecturas
de D.O. no superan 0,2 unidades para las concentraciones
alta. La placa debe monitorizarse a intervalos de 5 minutos
pueden variar.
Cuando se probaron a 50 ng/m1, los siguientes antígenos
mostraron una reactividad cruzada inferior al 10%:
IL-10 de rata
Cuando se probaron a 50ng/ml, los siguientes antígenos mostraron
una reactividad cruzada inferior al 2%:
IL-10 humana
Cuando se probaron a 50ng/ml los siguientes antígenos no mostraron

Todas las soluciones deben estar a temperatura ambiente antes de su uso. " °' ' IL-19, IL-20, IL-24 humanas
PBS: diluir l0xPBS a IxPBS, pH 7,20 en agua estéril. MurtDfl '7' IL- lo, IL- I §, IL-22, TNF-o
Tampón de lavado: 0,05% Tween-20 en PBS
Tampón de Bloqueo: 1% BSA en PBS -
Diluyente: 0,G5% Tween-20, 0. l% BSA en PBS *
• Filtrar estérilmente y conservar a 4'C hasta 1 veer.
J-LJTE PREPARATIJ3N
1. Diluir el anticuerpo de captura con PBS hasta una
concentración de 2,0pg/ml. Inmediatamente, añadir l00pl a
cada pocillo de la placa ELISA. Sellar la placa e incubar
toda la noche a temperatura ambiente.
2. Aspirar los pocillos para eliminar el líquido y lavar la placa 4
veces utilizando 300 ml de tampón de lavado por pocillo.
Tras el último lavado, invertir la placa para eliminar el _
tampón residual y secar con papel absorbente.
3. Añadir 300pl de tampón de bloqueo a cada pocillo. Incubar durante al
menos 1
hora a temperatura ambiente.
4. Aspirar la placa de lavado final 4 veces.
 Princeton Business Park, S Crescent Ave., P.O. B0x 275
Rocky Hill, NJ 08553 EE.UU.
Teléfono: 609.497.0253 Fax: 609.497.0321
riechc Correo electrónico: infofipeprotech
corn
Ficha técnica
IL-1§ Murina Estándar ABTS ELISA Kit de Desarrollo
Catálogo# 900-K47 . Eñpirption un año a partir de la fecha de reñ4ipt
Baja 0413ti47 ." , . , ' q .,.., . ," _ . .,. ......". ,. ... ..

Descripción: El kit de desarrollo de IL- I § ELISA murino contiene la

componentes clave requeridos para la medición cuantitativa de IL-19
murina natural y/o recombinante en un formato ELISA sándwich
dentro del rango de 63-4000pg/ml. Utilizando el protocolo ELISA
descrito a continuación, las microplacas, reactivos y soluciones
recomendados, los componentes suministrados en este Int son
suficientes para ensayar IL-1§ murina en aproximadamente 1000
pocillos de placa ELISA.
-Reconstitnte los componentes 24 horas antes de su uso.
Anticuerpo de Captura: 200pg de Antimurino de Conejo IL-1§ +
2.5mg de D-mannitol. Centrifugar el vial antes de abrirlo.
Reconstituir en lml de agua estéril para una concentración de
200pg/ml.
Anticuerpo de Detección: 50pg de Antimurina de Conejo
Biotinilada IL- I§ + 2.5mg de D-mannito1. Centrifugar el vial antes
de abrirlo.
Reconstituir en 0,50m1 de agua estéril para una concentración de
l00pg/ml.
Estándar de IL-1§ murina: I qg de IL-I murina recombinante § +
2,2 mg de BSA + 11,0 mg de D-manitol. Centrifugar el vial antes de
abrirlo. Reconstituir en lml de agua estéril para una concentración de
log/ml.
Nota: Los componentes reconstituidos son estables durante 2
semanas si se almacenan a 2-8°C. Los componentes reconstituidos y
alicuotados pueden conservarse a -20 °C hasta 6 meses.
Conjugado avidina-HRP: vial de 60 pl. Una vez recibido, el
conjugado avidina-HRP debe alicuotarse en diez viales de 6 pl y
almacenarse a S-20'C. Las alícuotas almacenadas congeladas a S-
20'C son estables hasta 2 años desde la fecha de recepción. Las
alícuotas almacenadas congeladas a S-20'C son estables hasta 2
años a partir de la fecha de recepción. Evitar más de un ciclo de
congelación-descongelación.
La avidina sólo debe utilizarse junto con ABTS.
MATERIALES RECOMENDADOS ' '
Microplacas ELISA (Nunc MaxiSorp Prod. # 439454, o Coming
Prod # 3J90);
Tween-20 (Sigma Cat. # P-7949);
BSA (Sigma Cat # A-7030);
ABTS Liquid Substrate Solution (Sigma Cat. # A32l9);
Dulbecco's PBS [10x] (Gibco BRL Cat. # 14200-075).
Estándar/Salle: Diluir estándar de 4,0ng/ml a
diluyente. Añadir inmediatamente l00Jll de estándar o muestra a
cada pocillo por triplicado. Incubar a temperatura ambiente durante
al menos 2 liOWS.
Detección: Aspirar y lavar la placa 4 veces. Diluir el anticuerpo de
detección en diluyente hasta una concentración de 0,50pg/ml. Añadir
I 00p1 por pocillo. Incubar a temperatura ambiente durante 2 horas.
Avidina-HRP Con jugate: Aspirar y lavar la placa 4 veces. Diluir
5,5pl de conjugado avidina-HRP 1:2000 en diluyente para un
volumen total de 1 I ml. Añadir l00pl por pocillo. Incubar 30
minutos a temperatura ambiente.
temperatura.
Sustrato ABTS Liouid:
(El sustrato ABTS debe estar a temperatura ambiente antes de su uso)
Aspirar y lavar la placa 4 veces. Añadir l00pl de solución de sustrato
a cada pocillo. Incubar a temperatura ambiente para el desarrollo del
color. Monitorizar el desarrollo del color con un lector de placas
ELISA a 405nm con corrección de longitud de onda a 650nm.
NOTA: Se obtienen curvas estándar fiables cuando las lecturas de
D.O. no superan las 0,2 unidades para las concentraciones estándar
cero, o las 1,2 unidades para la concentración estándar más alta. La
placa debe monitorizarse a intervalos de 5 minutos durante
aproximadamente 50 minutos. Las lecturas de D.O. pueden variar.
Cuando se probaron a 50 ng/ml los siguientes antígenos mostraron una
completa
Saturación O.D:
IL-1§ de rata
Cuando se probaron a 50ng/ml, los siguientes antígenos no mostraron
una reactividad cruzada significativa:
IL-1", IL-I§, IL-2, IL-2R, IL-4, iL-4R humanas
Fit-3L murino, G-CSF, GM-CSF, IL-1a, IL-2, IL-4, IL-10, M-
CSF, SCF
Rata IL- la, IL-2, IL-4

SOLUCIONES RECOMENDADAS : '/,/ ., , .

Todas las soluciones deben estar a temperatura ambiente antes de su
uso.
PBS: diluir 10xPBS io 1xPBS, pH 7,20 en agua estéril.
BufTer de lavado: 0,05% Tween-20 en PBS
Tampón de Bloqueo: l% BSA en PBS *.
Diluyente: 0,05% Tween-20, 0,1% BSA en PBS -
• Filtrar estérilmente y conservar a 4'C hasta 1 semana.

PE.A, P@EPARAJI.ON_ , _ .. , . ° '= '

1. Diluir el anticuerpo de captura con PBS hasta una concentración de "*" """"'
2,0pg/ml. Inmediatamente, añadir I 00p1 a cada pocillo de la placa ELISA.
Sellar la placa e incubar toda la noche a temperatura ambiente.
2. Aspirar los pocillos para eliminar el líquido y lavar la placa 4
veces utilizando 300 ml de tampón de lavado por pocillo. Tras
el último lavado, invertir la placa para eliminar el tampón
residual y secar con papel absorbente.
3. Añadir tampón de bloqueo 30091 a cada pocillo. Incubar durante
al menos 1 hora a temperatura ambiente.
4. Aspirar y lavar la placa 4 veces.

Ficha técnica
IL-6 murina estándar Kit de desarrollo ELISA ABTS
Catálogo# 900-K50
t# 011205f1 _
Din: Desarrollo de IL-6 ELISA murino
componentes clave necesarios el iiieasureinent cuantitativo de
para
natural y/o IL-6 murina recombinante en un ELISA tipo
sandwich
dentro del rango de 63-4000pg/ml. Utilizando el protocolo
ELISA descrito a continuación, las microplacas, reactivos y
soluciones recomendados, los componentes suministrados en
este kit son suficientes para ensayar IL-6 murina en
aproximadamente 1000 pocillos de placas ELISA.
RECONSTITUCIÓN Y ALMACENAMIENTO. . " , . '
.'.'.
Anticuerpo de Captura.- 200pg de Rabbit Anti-Murine lL-6 +
2.5mg D- manrtitol. Centrifugar el vial antes de abrirlo.
Reconstituir en 1ml de agua estéril para una concentración de
200;ig/nil.
Detección Aotibod'- 50pg de Rabbit Anti-Murine IL- 6 Biotinilado
+ 2.5mg D-mannitol. Centrifugar el vial antes de abrirlo.
Reconstituir en 0,50m1 de agua estéril para una concentración de
l00qg/ml.
Purina IL-6 Estándar: 1 pg de IL-6 murina recombinante +
2,2 mg de BSA + 11,0 mg de D-manitol. Centrifugar el vial antes de
abrirlo. Reconstituir en 1m1 de agua estéril para una
concentración de
Nota: Los componentes reconstituidos son estables durante 2
semanas si se almacenan a 2-8°C. Los componentes reconstituidos
y alicuotados pueden almacenarse a -20 °C hasta 6 meses.
Conjugado avidina-HRP: vial 60pl. Una vez recibido, el
conjugado avidina-HRP debe alicuotarse en diez viales 6q1 y
almacenarse aF 20'C. Las alícuotas almacenadas congeladas a
F20'C son estables hasta 2 años a partir de la fecha de recepción.
Evitar más de un ciclo de congelación-descongelación.
La avidina debe utilizarse en COn
MATER JALES RECOMENDADOS ., . ,'.
Microplacas ELISA (Nunc MaxiSorp Prod. # 439454, o Corning
Prod # 3590);
Tween-20 (Sigma Cat. # P-7949);
BSA (Sigma Cat # A-7030);
Solución de sustrato líquido ABTS (Sigma Cat. # A32l 9);
Dulbecco's PBS {l0x] (Gibco BRL Cat. # 14200-075).
-": L io :. .../. '
Todas las soluciones deben estar a temperatura ambiente antes de su
uso.
PBS: diluir 10xPBS en 1xPBS, pH 7,20 en agua estéril.
Mayordomo de lavado: 0,05% Tween-20 en PBS.
Tampón Bloch: I % BSA en PBS *
Diluyente: 0,05% Tween-20, 0,1% BSA en PBS -
* Filtro estéril y sfore a 4'C hasta 1 semana.
...+ ñ+Eâk<+A Tlp .:, ...._ .." /.....'. ..
I. Diluir el anticuerpo de captura con PBS hasta una concentración de
Inmediatamente, añadir l00pl a cada pocillo de la placa ELISA.
Sellar la placa e incubar toda la noche a temperatura ambiente.
2. Aspirar los pocillos para eliminar el líquido y lavar la placa 4
veces utilizando 300p1 de tampón de lavado por pocillo. Tras
el último lavado, invertir la placa para eliminar el tampón
residual y secar con papel absorbente.
Princeton Business Park, Avenida S Crescent, Apartado de
correos 878
Rocky H'ie, No 08533
EE.UU. Tele: 609.497.0253 Fax:
609.497.0321
www pcptotech coin Correo electrónico: f
Expirati'in.un año a partir de la fecha de recepción
Estándar/muestra: Diluir estándar de 4.0ng/f1ll t0 Z4fO en
diluyente. Añadir inmediatamente l 00p1 de estándar o muestra a cada
pocillo.
por triplicado. Incubar a temperatura ambiente durante al
menos 2 horas. Dirección: @spjrate y lave la placa 4 veces.
Diluir el anticuerpo de detección en diluyente hasta una
concentración de 0,50pg/fD1. Añadir l00pl por
bien. Incubar a temperatura ambiente durante 2 horas.
Avidina-HRP Con jugate: Aspirar y lavar la placa 4 veces. Diluir
5,5pl de conjugado avidina-HRP 1:2000 en diluyente para un volumen
total
de 1 lml. Añadir l00;il por pocillo. Incubar 30 minutos a temperatura
ABTS Li uid S b t t
(El sustrato ABTS debe estar a temperatura ambiente antes de su uso)
Aspirar y lavar la placa 4 veces. Añadir l00pl de solución de
sustrato a cada pocillo. Incubar a temperatura ambiente para el
desarrollo del color. Monitorizar el desarrollo de color con un
lector de placas ELISA a 405rim con corrección de longitud de
onda a 650nm.
NOTA- Se obtienen curvas estándar fiables cuando las lecturas
de D.O. no superan las 0,2 unidades para las concentraciones
estándar cero, o las 1,2 unidades para la concentración estándar
más alta. La placa debe monitorizarse a intervalos de 5 minutos
durante aproximadamente 45 minutos. Las lecturas de D.O.
pueden variar.
Cuando se probaron a 50 ng/ml los siguientes antígenos mostraron una
completa
saMación O.D:
IL-6 de rata
..
Cuando se probaron a 50ng/ml, los siguientes antígenos no
mostraron una reactividad cruzada significativa:
Cardiotrofina-1 humana, G-CSF, IL-3, IL-6, sIL-6Ro, IL-11,
Oncostatina M
Cardiotrofina-1 murina, G-CSA, IL-3, JL-12
Rata IL-3§
'
"2,0pg/ml.
3. Añadir 300pl de tampón de bloqueo a cada pocillo. Incubar
durante al menos 1 hora a temperatura ambiente.
4. Aspirar la placa md cash 4 veces.