Departamento de Fisiología – Facultad de Medicina

NEUROCIENCIA – MÓDULO 3 – CICLO BÁSICO-CLÍNICO COMUNITARIO

TALLER EXPERIMENTAL
“ESTUDIO ELECTROFISIOLÓGICO IN VITRO DEL NERVIO CIÁTICO DE BATRACIO”

INSTRUCTIVO PARA EL DESARROLLO DE LA

OM
PRIMERA ACTIVIDAD VIRTUAL (TE-1)

El Taller Experimental se desarrollará en DOS INSTANCIAS (según calendario

disponible en el Entorno Virtual de Aprendizaje). Para el desarrollo de la primera
instancia virtual del taller experimental (TE-1) es necesario que previamente (como

• .C
tarea domiciliaria) el estudiante:

Mire y analice los videos N°1 y N°2 y responda las preguntas (1), (2) y (3) del
DD
repartido TE-1.
• Mire y analice el video N°3, responda la pregunta (4.a) y complete el cuadro
presentado en la pregunta (4.b).
• Luego de realizadas las tareas indicadas en los puntos anteriores:
1. Mire y analice el video N°4 y responda la pregunta (5.a).
LA

2. Mire y analice el video N°5 y responda la pregunta (6.a).

• De forma opcional, mire y analice el video N°6 y responda la pregunta (8.a) del
ANEXO.
FI

Se recomienda seguir la secuencia de actividades propuesta. La actividad ha sido

planificada tomando en cuenta que la adquisición de información y destrezas prevista
para cada una de ellas facilitará el análisis de la siguiente y con ello el desempeño del
estudiante. Se espera que el desarrollo de la actividad según lo previsto en este


material provea al estudiante de los conocimientos y destrezas requeridos para

abordar le actividad prevista en el TE2. EN LAS INSTANCIAS NO SE LLEVARÁ
FORZOSAMENTE A CABO EL ABORDAJE EXHAUSTIVO DE TODAS Y CADA UNA DE LAS
PREGUNTAS DEL REPARTIDO. EN DICHAS INSTANCIAS, EN CAMBIO, SE PRIORIZARÁ
LA DISCUSIÓN Y JERARQUIZACIÓN DE ASPECTOS FUNDAMENTALES DE LA ACTIVIDAD
EXPERIMENTAL PRESENTADA EN EL MATERIAL AUDIOVOSUAL E INTERPRETACIÓN DE
LOS RESULTADOS, ASÍ COMO DARÁ RESPUESTA A CONSULTAS FORMULADAS POR
LOS ESTUDIANTES, SURGIDAS EN EL DESARROLLO DE LA ACTIVIDAD DOMICILIARIA
RECOMENDADA PREVIAMENTE.

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TALLER EXPERIMENTAL (1)

“ESTUDIO ELECTROFISIOLÓGICO IN VITRO DEL NERVIO CIÁTICO DE BATRACIO”

OM
MATERIAL PARA EL TRABAJO DOMICILIARIO Y
PRIMERA INSTANCIA VIRTUAL (TE 1)

(1)

.C
En el VIDEO N°1: INTRODUCCIÓN AL TALLER EXPERIMENTAL se muestra la ligadura del Nervio
Ciatico de la Rana catesbiana, tras su exposición mediante la disección del animal de
experimentación. En el momento en que se practica esta maniobra, tiene lugar un fenómeno de
interés biológico:
DD
a. Describa el fenómeno observado con énfasis en las características del estímulo utilizado y de
la respuesta muscular observada.
LA
FI

b. De acuerdo a lo planteado por los operadores en el video (limitando el análisis a los

fenómenos que ocurren a nivel del tronco nervioso): ¿cuáles podrían ser los mecanismos por
los cuales el estímulo aplicado pudo haber generado la respuesta observada?


c. ¿Qué estrategia proponen los experimentadores a los efectos de verificar su hipótesis

interpretativa?

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d. ¿Qué ventajas y desventajas presenta el tipo de diseño experimental seleccionado por los
experimentadores?

OM
e. ¿Qué ventajas ofrece la utilización de una preparación biológica procedente de un anfibio?

.C
DD
(2) En el VIDEO N°2: DISPOSITIVO EXPERIMENTAL se presenta el conjunto de componentes que
constituyen el dispositivo a través del cual se procederá a la estimulación eléctrica extracelular
bipolar del preparado, y al registro extracelular bitópico de las respuestas provocadas. En el es-
quema a continuación se presenta el dispositivo.

a. Complete los espacios (numerados del 1 al 5 dentro del esquema) con el nombre de los
LA

componentes señalados.
FI


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b. Complete la siguiente lista (de acuerdo al número correspondiente en el esquema), con la(s)
función(es) de los distintos componentes.

1.

OM
2.

3.

.C
DD
4.

5.
LA

c. En relación a los electrodos de estimulación utilizados defina:

FI

Cátodo:
Ánodo:

d. ¿Cuales considera Ud. son los fundamentos de la elección del estímulo eléctrico como


estímulo adecuado para el estudio de excitabilidad del tronco nervioso?

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(3) En el VIDEO N°2: DISPOSITIVO EXPERIMENTAL se presenta el procedimiento de calibración del

dispositivo de registro.

a. ¿En qué consiste este procedimiento? ¿Cuál es su propósito?

OM
b. Ejercicio: En la figura presentada a continuación se muestra el resultado de la calibración

.C
del sistema de registro. El pulso de calibración aplicado al amplificador fue de 1 mV (=1 x
10-3 V), haciendo que G1 fuera negativo respecto a G2.
DD
LA
FI

Fig. 1


b.1. ¿En qué instante se aplica el pulso de calibración? Indíquelo en la figura

b.2. ¿Cuál es su duración?

b.3. De acuerdo al resultado ilustrado más arriba ¿En cuánto entiende Ud. ha sido fijada la
ganancia del amplificador? Justifique.

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c. Si la amplitud del pulso de calibración utilizado hubiera sido de 10 mV (en lugar de 1 mV) y se
hubiese obtenido un resultado similar al ilustrado más arriba ¿qué parámetro característico
del sistema de registro debería haber sido modificado? ¿Cuál sería su nuevo valor?

OM
(4) La siguiente figura corresponde al resultado experimental obtenido a través del procedimiento

.C
detallado en el VIDEO N°3: ESTIMULACIÓN DEL PREPARADO CON PULSOS DE AMPLITUD Y DU-
RACIÓN CONSTANTES. En este caso se presenta un promedio de 20 respuestas.
DD
LA

2
FI

1


Fig. 2

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a. ¿En qué consistió la maniobra experimental realizada?

OM
b. Examine en detalle el contenido del VIDEO 3 y complete el siguiente cuadro con un re-
sumen de diversos parámetros que permiten caracterizar primariamente la configuración
de los dispositivos de estimulación y registro utilizados:

.C PARÁMETRO

Distancia entre Cátodo y Ánodo

VALOR (unidades)

( )
DD
Distancia entre los electrodos de registro
( )
(G1 – G2)
LA

Ubicación de los electrodos de Extremo proximal □

estimulación en relación al Extremo distal □
preparado

Ubicación de los electrodos de registro Extremo proximal □

FI

en relación al preparado Extremo distal □

Distancia entre Cátodo y G1 ( )



c. ¿Cuál es la amplitud del estímulo aplicado? _

d. ¿Cuál es la duración del estímulo aplicado?

e. En la figura ilustrada en 5, ¿Qué valor toma el registro de voltaje en función del tiempo
[V(t)] en los instantes indicados por las flechas verticales?

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f. Indique cuál(es) de las siguientes situaciones podrían dar lugar al valor de V(t) consigna-
do por Ud. en la pregunta anterior. Fundamente brevemente.

i) Un voltaje bajo G1 (VG1) = 10 mV y un voltaje bajo G2 (VG2) = -10 mV

OM
ii) VG1 = 0 mV ; VG2 = 0 mV

iii) VG1 = 5 mV ; VG2 = 5 mV

.C
DD
g. Describa las señales V(t) indicadas con los recuadros “1” y “2” en la Fig. 2. En la siguiente
página encontrará una tabla, que puede completar introduciendo algunos de los
parámetros que usted entienda capaces de caracterizar y comparar cuantitativamente a
las seña- les “1” y “2” (por ejemplo: amplitud de la señal, duración, latencia, polaridad,
etc.). Se recomienda incluir para cada parámetro una breve DEFINICIÓN (por ejemplo: para
LA

el pará- metro AMPLITUD podría corresponder la DEFINICIÓN “diferencia entre los valores
máximo y mínimo alcanzados por la señal”)
FI


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Valor (unidades)
Parámetro Definición

Señal “1” Señal “2”

OM
( ) ( )

( ) ( )

.C ( ) ( )
DD
( ) ( )

( ) ( )
LA

( ) ( )
FI

( ) ( )

( ) ( )


( ) ( )

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h. ¿Cuáles podrían ser las causas capaces de explicar las características que diferencian a
ambas señales? Fundamente su respuesta.

OM
.C
DD
i. ¿Qué experimento(s) podría llevar a cabo para obtener evidencias que sustenten su res-
puesta a la pregunta anterior?
LA
FI


10

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(5) En la siguiente figura se presenta, en la parte superior, un esquema de dos configuraciones de

estimulación empleadas en el experimento detallado en el VIDEO N°4: INVERSIÓN DE LA POLA-
RIDAD DEL ESTÍMULO. En la parte inferior de la misma se presentan los resultados (promedios
de 20 respuestas) obtenidos en cada una de las dos configuraciones (“C”, inicial, y “A”, final). Las
señales del registro V(t) han sido identificadas por “1” y “2” en los recuadros de líneas
entrecortadas, tal como se ha presentado en la Fig. 2.

OM
.C
DD
LA

1
FI


Fig. 3

a. ¿En qué consistió la maniobra experimental realizada al pasar de la configuración “C” a la

configuración “A”?

b. Estime, según el gráfico, cuál es la amplitud y la duración del estímulo utilizado en ambas
configuraciones

11

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c. ¿Se modifican estos parámetros en la maniobra?

d. Describa el resultado de la maniobra sobre las características de las señales “1” y “2”.
Puede emplear el cuadro presentado a continuación para comparar, empleando los
mismos parámetros definidos en (4.g), los aspectos de carácter cuantitativo que

OM
caracterizan alas señales 1 y 2 en las “C” (inicial) y “A” (final).

.C
DD
SEÑAL 1 SEÑAL 2
PARÁMETRO (unidades)
Config. “C” Config. “A” Config. “C” Config. “A”
( )
( )
( )
LA

( )
( )
( )
( )
( )
FI

( )
( )

e. ¿A qué atribuye las diferencias constatadas tras la maniobra experimental en las seña-


les? Fundamente.

12

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f. Proponga un experimento que le permita contrastar su hipótesis interpretativa delinea-

da en e.

OM
g. ¿Constituye el resultado presentado en la Fig.3 una evidencia en favor de la hipótesis
planteada por usted en el punto (4.h) en relación al origen de las señales “1” y “2”?

.C
Fundamente.
DD
LA
FI


13

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(6) En la siguiente figura se presenta el resultado obtenido tras la realización de la maniobra

experimental detallada en el VIDEO N°5: INTERCAMBIO DE LA POSICIÓN DE LOS ELECTRODOS DE
RE- GISTRO G1-G2.

OM
.C
DD
2
LA

1
FI

Fig. 4

a. ¿En qué consistió la maniobra experimental realizada?



14

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b. Complete el siguiente cuadro consignando:

i) Si la maniobra produce o no un efecto sobre los parámetros seleccionados

(mismos parámetros que los empleados en el cuadro (5.d).
ii) Una breve descripción de la modificación si correspondiere.

OM
AFECTACIÓN DEL PARÁ-
METRO POR LA REALIZA-
PARÁMETRO CIÓN DE LA MANIOBRA DESCRIPCIÓN
(Señal 1 o 2)
SI NO

( ) □ □

.C ( )

( )
□
□
□
□
DD
( ) □ □
( ) □ □
( ) □ □
LA

( ) □ □
( ) □ □
( ) □ □
FI

( ) □ □
( ) □ □


( )
□ □
( )
□ □
( )
□ □
( )
□ □
( )
□ □
( )
□ □

15

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c. Compare este resultado con el presentado en la Fig.3 (correspondiente a la pregunta (5).

¿Qué diferencias advierte?

OM
d. ¿Qué concluye tras el análisis de este resultado?

.C
DD
LA

(7) En este punto de la discusión, usted podrá haber:

a) Rechazado la hipótesis formulada por los experimentadores.

FI

b) Considerado que la evidencia de la que dispone es insuficiente para la confirmación

de la hipótesis, pero que los hallazgos son compatibles con la hipótesis y por lo tanto no
permiten rechazarla.
c) Confirmado la hipótesis.


Discuta con su grupo y el docente cuál de estas opciones es más adecuada, fundamentando su
elección.

FINALIZADA LA PRIMERA INSTANCIA VIRTUAL (TE-1), ES RECOMENDABLE QUE EL

ESTUDIANTE RESUELVA LOS PROBLEMAS DE REPASO INCLUIDOS AL COMIENZO DEL
REPARTIDO 2 (TE-2) ANTES DE ASISTIR A LA SEGUNDA INSTANCIA VIRTUAL.

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MATERIAL PARA EL TRABAJO DOMICILIARIO Y

PRIMERA INSTANCIA VIRTUAL (TE 1)

ANEXO

OM
(8) En la siguiente figura se presenta el resultado obtenido tras la realización de la maniobra
experimental detallada en el VIDEO N°6: SEPARACIÓN DE LOS ELECTRODOS DE REGISTRO G1-
G2. Noteque, de acuerdo al dispositivo experimental utilizado, la separación de los
electrodos de registro conlleva a la aproximación de G1 a los electrodos de estimulación.

.C
DD
LA
FI

Fig. 4


a. ¿En qué consistió la maniobra experimental realizada?

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b. Describa los resultados

OM
c.

.C
¿Cómo explica estos resultados?
DD
LA
FI


18

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