Fisiología P2

FISIOLOGÍA GENERAL 2023: PRUEBA 2
C s 19: Mét se F i gía 3

Estación de trabajo para electrofisiología 3
Registros intracelulares con microelectrodos 3
Registros de Patch clamp 4
Registros extracelulares de campo local 6
Registros extracelulares multiunitarios 7
C s 13.1: S ña a ón i a u 9
Receptores 9
Señal o ligando 11
Transporte de la señal hacia la célula objetivo 11
Detección de la señal por una proteína receptora específica 11
Tipos de receptores de membrana según tipo de efector 12
Cambio del metabolismo 17
Eliminación de la señal 17
Amplificación en cascada enzimática de señalización 18
C s 13.2: S ña a ón p c i ys h o s 18
Rol del calcio en señalización intracelular 18
C s 14: T n r o yB b 19
Transporte de moléculas no permeables a través de la membrana celular 19
Transportadores: GLUT 22
Bombas: ATPasas 24
Bomba Sodio-Potasio 25
Calcio ATPasa 29
Transportador de Sodio-Glucosa 31
Transporte de aminoácidos 34
C s 17: A p i oE i ión-C t c ón I: C c 35
Circuito organismo y su medio 35
Musculatura 35
Acoplamiento excitación-contracción 36
Potencial eléctrico de membrana en células musculares 37
Arquitectura celular de las Células Musculares 39
Arquitectura celular: Miofibrillas 40
Canales de Calcio: Receptores de Dihidropiridina 43
Canales de Calcio: Receptores de Rianodina 45
Acoplamiento excitación-contracción: Diferencias esquelético y cardiaco 47
Acoplamiento excitación-contracción I 49
C s 18.1: A . E i ión-C t c ón I : C t c ón M c r 50
Sarcómeros 50
Miofilamentos gruesos: Miosina 54
Miofilamentos delgados: Actina 61
Acoplamiento excitación-contracción II 64
C s 18.2: T o d F r M c r 64
Unidad Motora 64
Fibras rápidas y lentas 65
Cuatro fibras musculares en mamíferos 66
Fisiología General 2023 1 Paula Lisboa Zambrano
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Distribución de los tipos de fibras 66

Diferencias en el Acoplamiento Excitación - Contracción 67
C s 20: T n c ón S s a :O a 70
Sistema olfatorio en humanos 70
Estímulo 70
Sensores 71
Transducción sensorial: Olfato 71
Percepción 74
Codificación olfatoria 74
C s 21: T n c ón S s a : A i ón y M án C l 75
Discriminación de frecuencias en la cóclea 76
Mecanotransducción en las células ciliadas de la cóclea 84
C s 22: T n s ón S áp a I: S a s E éc c 91
Sinapsis eléctrica 92
Filtro pasabajo en sinapsis eléctrica 95
GAP junctions 98
GAP junctions son modulables intracelularmente 100
Funcionalidad de la sinápsis eléctrica 101
C s 23: T n s ón S áp aI 103
Antecedentes de Sinapsis Química 103
Estudios neuromusculares de Sinapsis Química 105
Temporalidades de la transmisión sináptica química 115
Liberación vesicular independiente de Calcio 116
S ña a ón p C c : D ám s, H e a yR o a ón 119

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Clase 19: Métodos en Fisiología

Thursday, 11 May 2023
Estación de trabajo para electrofisiología

‣ Estación de trabajo electrofisiología
๏
El microscopio depende del tipo de nuestra
- Si son células disociadas o tejido no muy denso basta con microscopio invertido > Patch clamp
célula única
- Cuando el tejido es más denso conviene usar otro tipo de micro > microscopio no invertido, como
con una rebanada de brain
- La iluminación es distinta y los objetivos también, permiten observar mejor
• Lo importante es tener control visual de la célula
• Contraste diferencial
‣ Aparatos
๏
Patch Clamp Amplifier > Cabezal contiene el amplificador I-V
๏
Pipette holder > permite succionar para unir la pipeta a la célula (el giga seal)
๏
Micromanipulador 3D > para controlar el movimiento manualmente de a muy pocos micrones
‣ Pipetas para registros electrofisiológicos
๏
La forma del electrodo, la pipeta estirada hace diferencias en por ej la configuración de whole cell,
porque hay una resistencia al paso de iones
- Pipeta para Patch clamp > 0,8 um y R de 3 MOhm
- Micropipeta intracelular > muy fina y R de 100 MOhm
• la menos moderna, antes del patch clamp
- Pipeta de Macro patch > 8 um y R de 200 kOhm
๏
Para hacer pipetas en tamaños intermedios uno puede regularla puliendo con calor y llevarlo al
tamaño necesario por el experimento
Registros intracelulares con microelectrodos
‣ Registros intracelulares de potencial mediante electrodos de punta
๏
Sus características de punta depende del experimento
๏
Al introducir el electrodo de punta en la célula inevitablemente se provoca un daño en la
membrana (un orificio alrededor del electrodo), lo que abre paso a iones que es artefactual
- Para que lo que registramos sea fiel reflejo del potencial de membrana, la resistencia
correspondiente a este orificio (Rs) tiene que ser mucho mayor que la resistencia de la
membrana, de modo que a través de ella caiga idealmente todo el potencial; es decir el daño
tiene que ser el mínimo posible
• Si el orificio es muy grande ocurrirá que el potencial medido se verá disminuido, alejándose el
potencial medido del de membrana
๏
La pipeta en si misma tiene una R al paso de iones, y cuando rompen la celula (registro intracel) se
puede producir fuga de iones por el borde de la pipeta
- Esto se disminuye mucho con el patch clamp, porque se sella
‣ Voltage clamp con dos microelectrodos intracelulares
๏
La célula está penetrada por un electrodo que
sirve para medir el voltaje y el otro para pasar
corriente. El círculo denominado Vm corresponde
al amplificador con alta resistencia de entrada y
ganancia 1, cuya salida es igual a la entrada y
está conectado al amplificador de control, que es
el que pasa la corriente par mantener fijo el
voltaje
- Corrientes totales > V-clamp
- Potenciales de acción > I-clamp
Registros de Patch clamp
‣ Técnica de patch clamp: potenciales o corrientes de membrana en células individuales
๏
En el circuito de abajo se pusieron dos amplificadores, como es el caso real (en el de arriba
también, excepto que no se muestra)
- El segundo sustrae el pulso de potencial (comando) que aplicamos al primer amplificador para
cambiar el voltaje en su entrada positiva y de esta forma cambiar el potencial al que queremos
mantener la membrana durante el pulso
- Lo que obtenemos a la salida del primer amplificador corresponde al voltaje que es proporcional
a la corriente (V0 = Irf) más tiene sumado el potencial del pulso, el que debemos sustraer para
que podamos tener estrictamente el registro
- Esto es lo que hace el segundo amplificador, a cuya salida obtenemos la señal que nos interesa
(la corriente a través de la membrana, expresada en forma de voltaje, por supuesto)
๏
Sello de baja resistencia antes de adherir totalmente la membrana, es un tipo de registro
extracelular de potencial de acción
๏
Tener inside out permite controlar tanto el medio intra como el extracelular
‣ Registros de corriente a través de canales de iones
๏
Aquí pretendo presentarles varios tipos de canales, para que vean que uno puede distinguirlos
muchas veces fácilmente en un registro

- Muchas veces uno se encuentra con más de un tipo de canal en un mismo patch
- Fíjense que tienen distinta selectividad a iones (ya sea a K, Na en esta muestra, pero también
los hay selectivos a Ca y a Cl), importantes diferencias en su cinética (tiempo que permanecen
abiertos, fluctuaciones de la corrientes mientras el canal está abierto, inactivación en el caso del
canal de Na) y en la amplitud de las corrientes a través de ellos
‣ Capilares de vidrio de varios cañones para aplicar distintas soluciones
๏
Cuando una misma micropipeta tiene varias divisiones internas o tubos separados para poder tener
soluciones diferentes compartimentalizadas en la misma punta
‣ Patch clamp en rebanadas de cerebro
๏
Se usa un microscopio directo que Ilumina con luz IR no con espectro visible completo, porque el
rojo penetra mejor en un tejido, se dispersa menos (efecto scattering)
- Requiere de una cámara infrarroja para verlo
๏
Para poder hacer experimentos hay que mantener viva toda esa red neuronal (de la rebanada),
suministrando oxigeno, manteniendo pH, con glucosa, etc > Se puede mantener bien por horas
Registros extracelulares de campo local
‣ Potenciales de campo locales sumados de una población de neuronas
๏
Lo que se ve son potenciales generados por cientos de neuronas que quedan rodeados por la pipeta
- La resistencia entre el interior y el exterior de la pipeta es muy baja, por eso las magnitudes de
los registros son pequeñas
๏
Registro de eventos a nivel extracelular tiene que ver con las corrientes que van el extra al intra o
viceversa se debe al paso por la membrana así qué hay corriente en el extracelular al abrirse paso
por la membrana
- Como hay una R en el extracelular, a pesar de lo que vimos cuando hicimos ec cable, se puede
ver entonces El Paso de corriente, y una caída de potencial en el extracelular > voltajes mucho
mas pequeño, 2-3 ordenes de magnitud que el potencial de transmembrana, pero igual son
detectables
‣ Registro sináptico intracelular
๏
Se miden corrientes que despolarizan la célula, pero canales no dependientes de voltaje, sino que
por ligando y son ppal% de glutamato > Entra sodio y despolarización
‣ Potenciales sinápticos de campo

๏
Si los electrodos están afuera mido la diferencia entre el potencial del extracel con una tierra
- Las corrientes de entrada se sensan fuera por el movimiento de carga desde el extracel hacia la
zona de entrada a la célula > sumidero de corriente (cuando es de entrada)
- En otra zona habrán fuentes de corriente (salida) en otras sinapsis
๏
Con electrodo se registra un tipo de respuesta (signo, polaridad) dependiendo de si estamos cerca
de una zona de fuente o de sumidero

- Deficit de carga positiva (las positivas entran a la cel) es un cambio de potencial negativo por el
extracelular
- Recordar que es al revés que en el extracelular, la corriente de entrada en el extracelular son
una despolarización (mas positivo) y afuera es un potencial menos positivo
๏
Espigas > potenciales de acción detectados extracelularmente
Registros extracelulares multiunitarios

‣ Registros extracelulares de potenciales de acción de neuronas individuales (single units) en tejidos
nerviosos mediante “electrodos de punta”
๏
Multi-unit recording así que no es solo una neurona, algunos se ven más grandes por la ubicación
del electrodo en relación a las neurona
- Noten las magnitudes de los potenciales de
acción registrados extracelularmente,
conocidas como “espigas” , mucho menor (<1
mV) que un potencial de acción registrado
intracelularmente (aprox 100 mV). Esto se
debe a que en el primer caso se miden
diferencias de potencial entre dos
electrodos generada por la corriente que
pasa por la membrana y circula a través de
la resistencia extracelular entre ellos, que es
muy pequeña.
• Neuronas unitarias > una cél
• Neuronas multiunitarias > unas pocas céls

‣ Análisis de tamaño y forma del registro para comparar muchos eventos

๏
a, b y c representan un electrodo posicionado en a, b ó c, y
a la derecha como cambia la forma de espigas idénticas
(los potenciales de acción que genera la célula tienen todos
el mismo tamaño y forma, lo que veríamos si el electrodo
estuviera dentro de la célula) que se registra en cada
posición. Las corrientes extracelulares circulan desde el
soma al axón, de + a – a través de la resistencia externa.
‣ Hipocampo
๏
Un mapa del espacio al estar ubicado en cierto lugar Hay
determinadas células activadas preferentemente para cierto
lugar > “célula de lugar”
- No es que vengan programadas, son procesos de
plasticidad y entorno que permiten generar este mapa
como GPS
- Todo esto se sabe por este tipo de registros
‣ Resumen tipos de registro y funcionalidad
๏
Noten las diferentes escalas de amplitud, que se relacionan con el tipo de registro en cada caso

Clase 13.1: Señalización intracelular

Thursday, 13 April 2023
‣ Señalización intracelular son formas de comunicación entre células, que implican respuestas medibles/
observables en el receptor
๏
Proceso de conversión de señales extracelulares en respuestas celulares
- Son entonces mecanismos por los cuales diferentes células pueden comunicarse entre ellas pero
también mecanismos en que el medio externo puede generar perturbaciones y provocar cambios
en la célula
๏
En células como neuronas, una señal puede ser un estímulo que puede sensar (odorante, T°, etc)
- Si jerarquizamos el proceso, la señal o estímulo es lo primero que debe haber
- El estímulo puede ser por la comunicación entre 2 células y no por un agente externo > cuando
se comunican dos neuronas en sinapsis, la señal que una entrega a la otra puede ser un
neurotransmisor, siempre y cuando la segunda tenga un receptor para aquella molécula
• Los receptores se pueden ubicar a lo largo de la membrana, en el soma, dendrita, axones, etc
• También hay neuronas que se conectan a una misma cél en diferentes puntos, liberando
distintos tipos de señales
Receptores
‣ En general hay dos grades tipos
๏
Ionotrópicos > son de paso de especies iónicas
- Su estimulación puede ser el potencial eléctrico (activados por voltaje), por mecano-sensibilidad/
presión (somatosensitivos), por ligandos como neurotransmisores
• El magnesio bloquea los canales
- Cuando se activan se abren y permiten el paso de iones inmediatamente
๏
Metabotrópicos > como los acoplados a proteína G
- Cuando se activan se inicia una cadena de señalización intracelular mediada por segundos
mensajeros
• Un receptor que tenga acoplado una proteína G implica que esta última se activa cuando se
estimula el receptor, por un cambio conformacional, que desencadena procesos que resultan
en la producción de segundos mensajeros
‣ En neuronas
๏
En las dendritas pueden haber receptores tanto ionotrópicos activados por ligando
(neurotransmisores), como metabotrópicos que unen ligandos y río abajo generan una cascada de
señalización intracelular a través de proteína G, pero no hay canales dependientes de voltaje
๏
En el axón tenemos canales de sodio potencial dependiente, canales de potasio activados por
voltaje > ionotrópicos
๏
En el cono axónico se genera el PA que resulta en la liberación de neurotransmisores en el terminal
- Estos neurotransmisores pueden tener efectos en canales metabotrópicos o ionotrópicos de la
célula sgte, por ej un canal selectivo de Na
• Cuando se active un receptor ionotrópico como por ej un canal selectivo de Na+, va a haber
una despolarización de la membrana de la dendrita > aumenta el potencial en relación al Vr,
pero aquí no va a generarse un potencial de acción porque no hay canales de sodio sensibles
a potencial
- Mientras más canales de Na+ hayan, mayor la despolarización
- Potencial de reposo Vr es neuronal, a nivel de célula > es igual ya sea axón o dendrita
• El ion en solución difunde, por ende los iones que entran de Na+ del canal abierto van a
moverse hasta ocupar todo el espacio, no en una sola dirección, pero dentro de todo lo que
difunde puede llegar al punto donde comienza el axón, despolarizando la membrana en su
camino
- A medida que avanza, la amplitud de la despolarización va a disminuir porque el cambio de
potencial de membrana disminuye con la distancia, desde el punto de inyección de
corriente > potencial de membrana graduado, propagación pasiva
- Los canales ionotrópicos de sodio se activan de manera que haya tanto flujo de sodio que
genere una despolarización tal que, cuando este difunda al cono, consigan llegar a activar los
canales activados por voltaje
• Además, a lo largo que avanza por la célula se va perdiendo carga hacia el extracelular
‣ Existen distintos mecanismos de señalización intracelular, y son diferentes en cuanto a propiedades
espacio-temporales
๏
Una señal mediante canales ionotrópicos genera una perturbación en la membrana (o cualquier otra
respuesta) más rápida porque implica menos pasos que por metabotrópicos, sin embargo estos
últimos me permiten tener más puntos para alterar el mensaje
- Tener varios tipos de señalización permite la regulación diferencial de procesos celulares
- Que existan segmentos espaciales particulares de señalización, puede representar ventajas
evolutivas en una célula > que la composición receptora de la membrana sea diferencial y más
específica espacialmente es más positivo que tener los actores de señalización scattered around
• No todos los actores moleculares están presentes de forma ubicua y en [ ] homogénea en la
célula > hay segmentos, clusters o microdominios de activación de los receptores de
activación de cascada celular, la mayoría de las prot G en un espacio reducido, a pesar de que
pueden difundir y actuar en regiones menos cercanas, pero representa ventajas energéticas
mantener en cercanía diferentes moléculas que se deben comunicar
๏
Igual hay proceso mucho más largos, que llegan al núcleo y alteran la respuesta neuronal a más
largo plazo, o más directamente al axón, para lo cual tienen que viajar mucho
- El axón más largos de nosotros son de 60-80 cm de largo
- No es que sea una única molécula que viaje, pueden haber varios participantes
‣ Definición señalización
๏
La señalización intracelular es un mecanismo mediante el cual las células reciben, procesan y
transmiten señales desde su medio ambiente y ellas mismas > Proceso de conversión de señales
extracelulares en respuestas celulares
- Procesar es como transducir, convertir una señal para generar una respuesta distinta
- Señales como cambios de P°, fotones, neurotransmisor
‣ Pasos de la comunicación por señales extracelulares
๏
Síntesis de la molécula señal
- Liberación de la molécula señal por la célula productora
• Transporte de la señal hacia la célula objetivo (por eso mismo las sinapsis son a muy poca
distancia, para que la probabilidad de que las moléculas difunda hacia el receptor es muy alta,
de hecho hay un anclaje entre las neuronas sinápticas aunque haya un espacio entre ellas)
- Detección de la señal por una proteína receptora específica
• Cambio de metabolismo
- Eliminación de la señal > La respuesta puede frenarse de varias formas, no puedo
dejar activa la célula por siempre > degradación del neurotransmisor, inactivación de
los receptores o de proteínas más río abajo de la cascada de señalización mediante,
por ej desfosforilar > feedback negativo, varios niveles de potencial regulación)

‣ Ejemplos de comunicación en organismos por señales extracelulares

๏
Eucariontes > levaduras y protozoos
- Moléculas señales coordinan la agregación de células de vida libre para el apareamiento sexual
(feromonas)
๏
Eucariontes superiores > animales y plantas
- Mayor relevancia señales extracelulares que regulan procesos metabólicos intracelulares, el
crecimiento del tejido, la síntesis y secreción de proteínas, composición de fluidos intra y
extracelulares (también liberan feromonas)
Señal o ligando
‣ La unión de los ligandos al receptor provoca un cambio conformacional en dominio citosólico u otros
que genera una respuesta celular > este proceso se denomina transducción de señales
‣ Señales
๏
Ligandos: hormonas, factores de crecimiento, neurotransmisores, feromonas
๏
Cambios en la concentración de algún metabolito (oxígeno)
๏
Estímulo físico (presión, odorantes, temperatura)
Transporte de la señal hacia la célula objetivo
๏
Órdenes de magnitud en tamaño de estructuras
๏
Órdenes de magnitud temporales
- Los procesos asociados a micromolécula tienen una temporalidad mucho más rápida, cuando
aumenta la escala física de tamaño de la molécula involucrada incrementa también el tiempo
del proceso
Detección de la señal por una proteína receptora específica
‣ Un receptor de membrana también puede ser estimulado por señales de origen intracelular y ellos
también pueden activar los mecanismos de señalización intracelular
‣ Los receptores exhiben características muy diferentes entre ellos, hay un universo muy heterogéneo
de ellos porque son muy específicos
๏
Especificidad por su ligando o familia de ligandos
- Pero una misma molécula señal o ligando pude unirse más de un receptor y tener efectos
distintos en base al que se une
๏
Especificidad, en general, por la cascada de señalización intracelular
- Los receptores tienen especificidad pero siempre hay algo de crosstalk, por las cascadas de
señalización intracelular
๏
Muchas veces la respuesta celular máxima no necesariamente se obtiene con todos los receptores
unidos a su ligando
- Gráfico de fracción de unión máxima ó respuesta
celular en función de la [ligando] relativa
• Uno pensaría que mayor ligando, mayor
respuesta hasta que estén ocupados todos los
receptores, pero lo que se observa es que la
respuesta máxima celular se da mucho antes
de que la fracción de receptores estén en
unión con su ligando llegue a su máx
• La respuesta celular es casi máxima cuando
[ligando] es Kd (50% de unión de ligando)
- Esta mayor cantidad de receptores de los necesarios para gatillar la respuesta máx puede
explicarse porque sería mucho menos probable generar esta respuesta si se espera a que todos
se unan con su ligando > cuando una función es de importancia en un organismo celular tiende
a haber redundancia de procesos
๏
La sensibilidad de una célula por el ligando depende del número de receptores presentes en la
membrana plasmática
Tipos de receptores de membrana según tipo de efector
‣ Sin importar el tipo de efector, la flexibilidad estructural es la que permite que un cambio en la
membrana se transmita hacia el medio intracelular
๏
I Ligand-gated ion channels > receptores ionotrópicos
๏
II > Receptores con actividad guanilil-ciclasa intrínseca y III > Receptores con actividad tirosina-
kinasa intrínseca son receptores de membrana que generan cascada de señalización intracelular per
directamente activan enzimas que derivan a la px de 2dos mensajeros
๏
IV Receptores acoplados a proteína G > receptores metabotrópicos

‣ Cursos temporales dependientes del tipo de canal

๏
La respuesta celular se obtiene a distintas escalas temporales
- Ligand gated ion channels > timescale de milisegundos
- G protein couples receptor > timescale de segundos
- Receptores de unión a enzimas > timescale de horas
- Receptores transmembrana no enzimáticos > timescale de horas
- Receptores nucleares > timescale de horas/días
‣ Receptores a Glutamato (tetraméricos)
๏
Los receptores de glutamato pueden ser ionotrópicos o metabotrópicos, con diferentes
características y pueden ser modulados alostéricamente, lo cual es muy relevante para ambos tipos
๏
Diferentes tipos de receptores de glu
Na+, Ca++, K+
- Dentro de la familia de los receptores AMPARs, están conformados por determinadas

subunidades, que le otorgan características especificas para tipos celulares por ej
- Azules metabotrópicos y verdes ionotrópicos
๏
Rangos de activación en función de la concentración del ligando
- Los receptores, incluso dentro de una misma familia, tienen distintos rangos de activación según
los ordenes de magnitud de la concentración de su ligando > lo cual puede tener relevancia
biológica porque ayudar a modular la respuesta en base a las condiciones iniciales, gatillando
distintos procesos intracelulares (diferentes cascadas de señalización intracel) distintos según la
concentración
• Además, pueden estar ubicados en diferentes lugares de la cél > porque la concentración
puede ser distinta en dos partes de la superficie celular, y se llevan a cabo dos procesos
distintos simultanea%
- La diversidad de receptores para una misma molécula permite gatillar procesos metabólicos
distintos según la concentración y su ubicación en la superficie celular

- A veces, que hayan sólo receptores que sensan altas concentraciones del ligando es bueno,
porque esto implica que el proceso requiere que esta neurona/célula sea estimulada de
manera importante para perturbarla y generar una cascada río abajo
๏
Curso temporal de la activación de R-AMPA y R-NMDA cuando aumenta la [Glutamato]
- Los ionotrópicos tienen una activación más rápida, afectando poco a la plasticidad de corto plazo
- Los metabotrópicos tienen activación a mayor escala temporal, produciendo plasticidad tanto a
corto como largo plazo
๏
La mayoría de los neurotransmisores se pueden a unir receptores específicos de ambos tipos,
ionotrópicos y metabotrópicos, con alta heterogeneidad
‣ Receptores de acetilcolina > canal-R Acetilcolina nicotínico
๏
Pentamérico, no selectivo
- “Cell attached” con 1 µM Ach en la pipeta, +100 mV, neurona disociada
๏
Des-sensibilización del canal-R de acetilcolina
- Registro outside-out de canales de placa neuromuscular -34mV, pulso de Ach de 500 ms flechas

- Procesos de adaptación > gráfico de corriente en el tiempo (Whole cell patch clamp) que
muestra la respuesta de la célula en corriente por efecto de diferentes concentraciones de
acetilcolina (Ach)
• Deducciones del gráfico (escalas importantes)
- A mayor concentración hay más corriente, o sea aumenta la respuesta celular
- A medida que aumenta la concentración, disminuye el flickering > a menores
concentraciones hay mas apertura y cierre de canal único
- Se desensibiliza mas rápidamente, llega a un peak pero se pierde su señal pronto cuando
la concentración es alta, mientras que cuando es más baja la [ ], las respuestas se
mantienen por más tiempo
• Así, la respuesta no solo depende del tipo del receptor, de su ubicación, sino que también de
sus propiedades biofísicas
Receptores metabotrópicos
‣ Receptores acoplados a proteina G
๏
Su estructura de 7 segmentos transmembrana
๏
Esquema de lo que ocurre al activarse en términos
generales
- El receptor (verde), la prot G (celeste) y el efector
(rosado), distanciados pero cercanos
- Se activa el receptor y por ello la prot G
- Cambios conformacionales que escinden la subunidad
alfa de la beta-gamma y la alfa, que puede metabolizar
GDP a GTP, va a activar algún efector
๏
Alrededor de 20 tipos de subunidades alfa de Proteínas G
heterotriméricas
๏
GPCR: ciclo de actividad de proteínas G heterotriméricas
- Cambios de afinidad > tasa de encuentros

‣ Blancos citoplasmáticos y nucleares > PKA o proteína
kinasa A
Primero la subuniad alfa de la prot G activa la
๏
enzima AC (Adenilato Ciclasa) que transforma o

hidroliza ATP en cAMP
- Este último es un 2do mensajero que tiene la
capacidad de fosforilar una serie de proteínas
como la PKA
• PKA activada por AMPc > esta kinasa fosforila
diferentes sustratos para generar cambios a
nivel de expresión del DNA
‣ Cascada del PIP2
Dos ramas de la cascada del 4,5 fosfaditil inositol bifosfato
๏
- Estas cascadas de vías de señalización intracelular también pueden ellas mismas activar canales
de iones > hay canales que se pueden activar directamente por ligandos y otros por efecto de la
activación de una prot G
• Dentro de la cascada gatillada por la prot G puede haber activación de ionotrópicos
Cascada de señalización de PLC o fosfolipasa C
๏
- Ligando de unión a receptor acoplado a prot G > Prot G-alfa se escinde y une a enzima PLC
• PLC toma ácidos grasos como fosfolípido PIP2 de membrana lo metaboliza a diacilglicerol
DAG e IP3
- DAG tiene efectos en proteina PKC por ej, linazas
- IP3 activa canal de calcio del RE > salida de Ca++ al citoplasma
• El calcio también genera muchos procesos celulares
- Flujo citoplasmático desde este reservorio citoplasmático de calcio que son mucho más
concentrados que el citoplasma, puede generar cambio importante de [Ca++]
• El calcio puede salir de un reservorio intracelular como el RE para modular procesos en el
citoplasma
- El calcio es el 2do mensajero de todo un grupo investigativo, con impactos muy
importantes en la función celular
‣ Cascada de señalización intracelular acoplada a proteína G
Enorme cantidad de vías de señalización que son acopladas a prots G
๏
- Las importantes de aprender son las de la adenilato ciclasa y la fosfolipasa

- Hay gente que se dedica a estudiar los procesos de biocel > entender las combinaciones y
efectos de activar una vía vs otra, las ramificaciones, su efecto genético, etc
Cambio del metabolismo

‣ Primeros mensajeros > Ligandos
‣ Segundos mensajeros: aumentan, en general,
transitoriamente : 3,5-cyclic AMP, (cAMP) 3,5-
cyclic GMP (cGMP), 1,2-diacylglycerol (DAG),
Inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3), Ca+2
‣ En caso de adenilato ciclasa > ya vimos que los
receptores acoplados a prot G , dependiendo de la
G-alfa pueden activar AC pero este proceso puede
ser una vía de activación, como de inhibición si
activo algunos receptores metabotrópicos
๏
Entonces pueden haber vías de activación o
inhibición dependiendo de la prot G alfa que se
active > G alfa inhibitoria está acoplada
preferencialmente a receptores que al activarse
siempre tienen efectos inhibitorios en la cél
๏
Ejemplo > Receptor Prot G y AC > La activación genera AMPc
- Pero la activación de otros receptores con prot G-alfa inhibitoria inhibe a la AC > disminuye
[AMPc] > Hay un equilibrio así de la generación de cAMP
‣ Complejos de señalización “señalosoma”
๏
En general estas vías están en complejos proteicos ubicados con proteínas andamio que unen el
signalosoma / señalosoma donde la prot G se mantiene en cercanía del receptor, la AC también, etc
Eliminación de la señal
‣ Mecanismos de eliminación de señal o término de la respuesta
๏
Fosforilación cola citoplasmática del receptor
๏
Unión de arrestina
๏
Endocitosis en vesículas: degradación en lisosomas o reciclaje
๏
Señalización desde endosomas
๏
Desactivación de la proteína G
- Desactivación de un receptor acoplado a proteína G por fosforilación y ligamen de arrestina
- Adenilato y guanilato ciclasa generan AMPc y GMPc fosfodiestereasas los hidrolizan

Amplificación en cascada enzimática de señalización

‣ Si activo un receptor, genero cambios locales > la cascada de señalización amplifica la respuesta
๏
Una molécula puede activar a diferentes efectores en procesos de amplificaciones que implican
respuestas bien robustas
๏
La amplificación de la señal es una característica de la señalización intracelular por segundos
mensajeros
- El activar un receptor es un proceso local, pero la cascada permite ir amplificando la señal
porque una sola molécula activa a distintos efectores y la respuesta se vuelve mas robusta
Clase 13.2: Señalización por calcio y su homeostasis

Thursday, 13 April 2023
Rol del calcio en señalización intracelular

‣ El calcio, a diferencia de otros cationes, no solamente
es capaz de provocar diferencias en el potencial de
membrana > su capacidad de unirse a proteínas de
unión a calcio le confieren la capacidad de actuar
como segundo mensajero, regulando una gran variedad
de cascadas de señalización
๏
SERCA y PMCA son bombas de calcio dependientes
de ATP
‣ Reacciones ‘on’ favorecen el aumento de calcio intracelular (canales y cascadas de señalización que
provocan liberación desde el RE) y ‘off’ la disminución (buffers, bombas o transportadores)
‣ La cinética de las oscilaciones de calcio varía dependiendo del balance de reacciones on/off
๏
Cada tipo celular expresa un set único de componentes del sistema de señalización de calcio
(canales, buffers, transportadores), generando sistemas con distintas propiedades espaciales y
temporales.
Clase 14: Transportadores y Bombas

Monday, 17 April 2023
Transporte de moléculas no permeables a través de la membrana celular

Vamos a hablar de bombas y transportadores, sus diferencias de concepción y cinética de estos procesos,
en particular en algunos ejemplos de transportadores, sin embargo cada transportador, dependiendo de
su carga y su calidad, funcionan un poco distinto > veremos los ppios generales
‣ Moléculas a través de la membrana
Permeables > gases y moléculas muy pequeñas (polares, sin carga)
๏
- El agua que es parcialmente permeable > una parte importante de su transporte depende mucho
del tipo celular y la presencia de canales de agua)

๏
Impermeables > moléculas que por sus propiedades
químicas no atraviesan la membrana
- Moléculas grandes polares sin carga
• Azúcares, algunos lípidos grandes, nucleótidos
y aminoácidos
- Moléculas polares con carga
• Nucleótidos y aminoácidos (mucho menos los
acs nucleicos y proteínas)
- Iones > a pesar de ser impermeables existen
canales específicos para permear la mema
‣ Entonces, existen mecanismos de transporte asociados
a las moléculas impermeables > la única forma de
intercambiar con el medio y que estas sean
transportadas desde o hacia la cél es a través de
mecanismos de transporte, y todos son asociados a
proteínas
๏
El sentido del intercambio depende de la termodinámica del proceso, pueden ser ambos
๏
Proteínas de transporte que van a participar en la movilización de moléculas
‣ Transportadores
๏
Canales > también son transportadores, la única diferencia es que es difusión facilitada, porque
depende directamente de los gradientes electroquímicos
- También hay diferencias importantes en la cinética con los otros transportadores
• Los canales tienen órdenes de magnitud mayor en cuanto a carga transportada por segundo,
mientras que las bombas son las más lentas
- Los vemos como un canal de conducción con una tapa, de tal manera que si se abre, el canal
conduce > descripción de la cinética se relaciona con la estructura de la proteína
๏
Carriers > los transportadores como tal, hay de distintas formas
- 1° Active Transporters o Bombas > Todos aquellos transportan en contra del gradiente, lo que
normalmente implica que hay consumo de energía, por la termodinámica > el deltaG del proceso
de transporte tiene que ser negativo
• Si bien el transporte de la molécula per se es mayor que cero, si uno mira el mecanismo de
transporte completo sí es negativo, por el gasto de energía asociado al transporte > es por eso
que el transporte se da
• Se dividen de acuerdo al mecanismo de obtención de energía, como la hidrolisis del
pirofosfato (ATP), pero hay muchas otras formas de generación de energía
• Son las más lentas que los canales > por ej la Sodio-Potasio ATPasa o Bomba Na+/K+ mueve
hasta 10 a la 3 iones/segundo
- Transportadores o Carriers “como tal”
• Uniporter > transportadores en un sentido, como un tipo de transportador de glucosa >
transporte pasivo (difusión facilitada de moléculas a favor de su gradiente)
• 2° Active Transporters > transporte activo secundario o cotransporte, donde la energía es del
gradiente de una de las moléculas transportadas (acoplamiento energético) > exchangers o
intercambiadores
- Simporter > Cotransportan en un sentido
- Antiporter > Cotransportan en sentidos
opuestos
- En el caso de transportadores o bombas, se
tiene una cinética esquematizada como que
tienen 2 compuertas, de modo que se abren
una a la vez.
• Cuando se abre la compuerta externa,
ingresa la molécula al transportador, se
cierra la compuerta y luego se abre la
compuerta interna y permite el intercambio
- O viceversa, pero nunca tienes las dos
compuertas abiertas al mismo tiempo,
de modo que los carriers son más lentos
que canales > 10 a la 2-4 molécs/seg
‣ Entonces, en cuanto a nomenclatura, tenemos ATPasas como las bombas > muy relevantes en cuanto a
excitabilidad y señalización como 2dos mensajeros
๏
Dentro de la fisiología general y el funcionamiento de las neuronas, las más estudiadas son las
sodio-potasio ATPasas que es muy relevante en la generación y mantención del potencial de
membrana en reposo en el largo plazo > irrelevante en el orden de los minutos
- Esto en caso de las células excitables, aunque participan en la mayor parte de las células, pues
todas tienen: gradientes de iones, una [Na+] superior al extracelular, y potenciales de membrana
(desde los -10 mV en adelante, según tipo celular)
๏
Bombas de Calcio, que son relevantes tanto la bomba de membrana como de retículo son muy
importantes para la mantención de niveles intracelulares de Ca++, que son siempre del orden de pM
‣ Y por otro lado tenemos los carriers o transportadores que pueden ser
๏
Uniporters o transportadores equilibrativos > no son canales, porque tienen cinética de
transportador, pero transportan de acuerdo al gradiente de [ ] de lo que es transportado, para
equilibrar sus concentraciones
- Como los transportadores de glucosa, que hay de dos tipos (transportador y ATPasa ¿?)
• Equilibrativos > dependen simplemente de la

concentración de glucosa (de hexosas, en
general) y pueden transportarlas en ambos
sentidos según el gradiente, porque son
simple% equilibrativos > GLUT
๏
Simporte > está conduciendo o transportando dos
moléculas en mismo sentido
- Intercambiador Na+/neurotransmisor > En la
mayoría de vesículas sinápticas se tienen
transportadores de neurotransmisores que se co-
transportan con sodio, porque hay un gradiente
de sodio que se mantiene en la vesícula, porque
hay un intercambiador sodio/protón y una bomba
de protones > se mantiene el gradiente de sodio
en la vesícula, el cual permite que se rellenen
con neurotransmisores
• Como el intercambiador de GABA y dopamina
co-transportado con Na+
๏
Antiporter > contra-transporta dos moléculas, en sentidos opuestos > permiten el ingreso a través
de la membrana de algunas moléculas en contra de su gradiente, por eso se llama transporte activo
secundario
- Como el intercambiador de bicarbonato/cloruro > muy relevante ya que, considerando que el
resultado del metabolismo celular es CO2, éste en un medio acuoso lo acidifica, produciendo
protones y bicarbonato, el cual puede ser contra-transportado con Cl-, muy importante para al
función de los glóbulos rojos
- Otros intercambiadores > como Na+/Ca2+, entre otros
• Hay una cantidad y variedad muy grande pero cuyo funcionamiento es relativamente
equivalente, pues intercambian moléculas o transportan al mismo tiempo
Transportadores: GLUT
‣ Es una familia grande (+ de 12) de transportadores de hexosas en general, pero también algunas
pentosas, a favor de su gradiente de concentración, todos con una misma estructura
๏
Están compuestos de 12 segmentos transmembrana > un núcleo donde se une el sustrato (dos
segmentos, 10 y 11) y una cavidad en la estructura proteica que es por donde moviliza el azúcar
(imagen reconstrucción de GLUT-1)
- Son cambios conformacionales los que permiten
que entre el azúcar en condiciones normales >
este es el sentido típico del transporte, del extra
al intracel
• Por ej la glucosa libre intracelular se mantiene
porque al ingresar a la célula es fosforilada a
glucosa6-P > normalmente el gradiente que
hay permite el ingreso de glucosa desde el
exterior a través de estos transportadores
‣ Experimento (mucho más moderno) en ovocitos que expresan GLUT-1 > cuando no hay proteína GLUT,
hay muy poco uptake de glucosa, pero cuando el transportador es expresado, hay 100% de transporte
relativo al control
๏
Para estas mediciones de transporte se utilizan marcadores, porque es la forma de saber cuando se
están moviendo las moléculas de interés
๏
Además se ve cómo compiten por el transporte otros azúcares, que no están marcados y están a
20 veces la [ ] del transportado (deoxy-glucosa) > ves cuánto disminuye el transporte de glucosa
marcada cuando hay competencia/en presencia de

las otras
- La glucosa fría (s/marcar) interfiere claramente
con el transporte de glucosa marcada pero
además otros tipos de azúcares compiten por
ser transportados
• O sea no solo transporta sino que tiene
afinidad y a veces también pueden ser
modulados por la concentración extra o
intracelular de otras hexosas > tiene
especificidad pero no son absolutos de
glucosa
- Importante considerar que lo que se
transporta hacia la sangre en general es
glucosa, todas las otras azucares se
convierten en glucosa (¿para entrar a los
glóbulos rojos?)
- El mecanismo y las cinéticas de los transportadores GLUT son distintas y complicadas > y como
casi todas estas cosas, tienen afinidad
• Por ej hemos visto que los canales de sodio son mucho más permeables a sodio que a otros
iones, pero siempre hay cierto grado de fuga, dependiendo de la estructura y de lo que se
transporta
‣ Experimento del transporte de fructosa (marcada) en liposomas con y sin transportador en el tiempo
๏
Se ve un cierto transporte basal o de fuga sin transportador > es “lineal" y depende de la gradiente
de concentración, pero mucho mayor con el GLUT5
๏
Si la concentración de lo transportado se mantiene constante, en algún momento el transporte va a
saturar > el máximo dependerá de la cantidad de transportadores y de la concentración de lo que
está siendo transportado
- En comparación con otro transportador de la misma familia (GLUT4) vemos algo similar, pero las
cantidades transportadas dependen de la estructura de c/ transportador
๏
Curva para calcular Km y Vmáx > el transporte de fructosa en función de la concentración de la
misma, o sea, se grafica la carga transportada a distintas concentraciones de ella, después de un
mismo tiempo
- Cada transportador tiene su propia Km y Vmáx
‣ Experimento de GLUT en un hongo (Aspergillus)
๏
Tenemos las mismas moléculas transportadoras presentes no solo en células animales sino que en
vegetales también > velocidad de transporte vs concentración glucosa son saturables
‣ Recientemente, con el desarrollo de

técnicas analíticas, se han hecho
modelos de cinética y este está hecho
con la molécula transportada >
cristalización en distintos momentos y
también de distintas moléculas (de
rata, humano, etc)
๏
A pesar de la diferencia de su
origen, son estructuralmente muy
parecidos
๏
Se tiene el ciclo de cómo se une el
sustrato, entra y la “tapa” se cierra,
para luego ser liberado al
intracelular > I = inside, O = outside,
con el sustrato (S) y sin él
- Así, cuando se ve la estructura
tridimensional, esta se acerca al
modelo hecho hace muchos años,
que consiste en un conducto con
dos tapas abiertas x separado
Bombas: ATPasas
‣ Hay varios tipos de ATPasas, se dividen en familias
๏
Bombas o ATPasas clase P > donde la hidrólisis de ATP produce los cambios conformacionales que
permiten la movilización de moléculas en contra del gradiente de concentración
- Familia a la que pertenecen las sodio ATPasas y calcio ATPAsas
- Recordar que cuando hablamos de “contra” del gradiente de [ ] nos referimos en realidad al
mismo sentido del vector de la gradiente (hacia donde hay más [ ])
๏
Bombas o ATPasas clase V > movilizan protones (ppal%)
- Muy comunes en organelos intracelulares como lisosomas, en vesículas sinápticas, donde
mantienen gradientes
• La direccionalidad depende del contexto > en el lisosoma, el transporte es hacia su interior
๏
Bombas o ATPasas clase F > Bombas de protones que tienden a generar ATP > son ATPasas
funcionando en el sentido opuesto cuando se acopla a un gradiente de protones y su transporte a
favor del mismo
- Son la base de la generación de ATP a nivel mitocondrial > activación de las bombas por un
gradiente de protones a través de las membranas mitocondriales
๏
Superfamilia ABC > ATP Binding Cassette > producen la hidrólisis de ATP, lo que participa en el
transporte
- El cassette es igual/homólogo en todos los transportadores de la familia
- Muchos transportadores descritos > son importantes en procesos de detoxificación, en la
resistencia a antibióticos, o en resistencia a quimioterápicos en el caso de células cancerosas
(eliminan la molécula de tratamiento en quimioterapia), también en manejo de lípidos a nivel de
hepatocito > generación de ácidos y sales biliares
‣ Recordar que todas estas son ATPasas pero el sentido de esta reacción dependerá del gradiente,
puede generar la reacción opuesta (generar ATP) porque es termodinámica > el deltaG del proceso de
transporte tiene que ser negativo
๏
Si bien evolucionaron y se diferenciaron de acuerdo a los gradientes en los que estaban usualmente
inmersas, termodinámicamente hablando podrían funcionar en cualquiera de los dos sentidos
๏
Cuando invierto el gradiente, se invierte el sentido del transporte y also el de la reacción de ATP
‣ Bomba clase F > El aumento de concentración de H+ entre las dos membranas de la mitocondria y la
parte interna, produce la activación de la ATPsintetasa > que estructuralmente es similar a las ATPasas
๏
También hay otras que producen la hidrólisis > son bastante similares estructuralmente, pues
comparten varios componentes, la estructura general es muy similar, sólo que una funciona como
ATPasa y la otra como ATPsintetasa
Bomba Sodio-Potasio
‣ Bomba de Clase P
‣ Estudios ya antiguos en células excitables > usando un axón de jibia, de modo que se pueden cargar
con Na+ o K+ radiactivo y ver cómo se movilizaba desde el interior de la célula hacia afuera > estudio
del eflujo de sodio
๏
Se observa cómo sale el sodio marcado desde el interior del axón > al ser tan grandes se puede
poner una solución artificial dentro del axón > se ve la cantidad de sodio movilizado del interior al
exterior
๏
En determinado momento colocan cianuro de sodio, que es un bloqueador que para la cadena
transportadora de electrones, de modo que el eflujo de sodio disminuye > Lo que se interpreta
como que si la producción de ATP está disminuida, el eflujo de Na+ baja
- El cianuro tiene un efecto de interrupción de la cadena transportadora hacia el final, se pueden
generar metabolitos lo que lo hace más difícil de interpretar
- Al usar azida (N3-) de sodio se tiene un efecto parecido al cianuro, pues esta también es un
bloqueador de la cadena transportadora
- En cambio el DNP actúa mediante otro mecanismo de acción, rompiendo el gradiente, de tal
forma que la cadena transportadora sigue funcionando pero no hay generación de ATP
• El dinitrofenol, o DNP, es un protonóforo > se hacen hoyos a la membrana externa de la
mitocondria, rompiendo la gradiente y al aplicarlo, nuevamente se tiene una caída del flujo de
Na+ > en conclusión, a menor producción de ATP, hay una menor salida de sodio, por lo que se
infiere que la salida de Na+ depende de la presencia de ATP
๏
Para asegurar de que fuera el ATP el causante,
se midió la cantidad de ATP (o Arginina
fosfato, una forma indirecta de medir fosfato)
al poner cianuro de sodio y al poner
dinitrofenol > en ambos casos la producción de
ATP disminuye
- O sea lo que estaba disminuyendo en el exp
anterior es efectivamente el ATP formado
• En conclusión, se tiene un transporte de
sodio dependiente de ATP
๏
Si se hace lo mismo, envenenando con CN
disminuye el ATP, pero al inyectar ATP
intracelularmente a un axón que no produce su
propio ATP, se recupera la salida de sodio
desde el intracelular
- Al restaurar el ATP a un axón que no lo
produce, se recupera el transporte

- Es por esto que el cianuro es tóxico

๏
Los efectos que se ven con el cianuro que son importantes, pero los efectos en eflujo que estamos
observando se dan en escala de horas > como se moviliza el sodio, tendrá efecto sobre el potencial
de membrana, pero de largo plazo
- Los primeros experimentos de HH en axón perfundido, le ponían cianuro y luego de 3 horas, el
potencial de membrana cambió de -70 a -40 mV y vieron que ahí ya no podía generar potencial
de acción > después se estudió la cinética del canal y todo lo demás
• Pero no se perdió totalmente la capacidad de generar potencial de acción, sino que está
despolarizada, porque se incrementó la cantidad de sodio intracelular, pero los efectos son
muy lentos
• La relevancia de la sodio/potasio ATPasa en escala de segundos en el potencial de membrana
es irrelevante > pero a lo largo del tiempo, es muy importante, para generar y mantener el
gradiente
• Se ha visto que en axones si se para la px de ATP, y los estimulas, deben generar como 20
mil pot de acción antes de ver cambios significativos en el potencial de membrana > a largo
plazo, si se elimina la sodio-potasio ATPasa, el impulso nervioso se extinguiría
- Se puede tener actividad eléctrica/nerviosa en ausencia de la bomba Na/K, pero claro que
si la actividad es mucha y muy prolongada eventualmente se va a acumular sodio adentro
y potasio afuera hasta el punto en que la célula se despolariza mucho > pasan horas antes
de cesar la actividad nerviosa como tal
- Si se elimina la actividad de la bomba sodio ATPasa, se elimina la actividad nerviosa a largo
plazo, no a corto plazo
๏
Registrando el eflujo de sodio al sacar el potasio extracelular (queda muy poquito), el eflujo de
sodio disminuyó
- O sea, si bien el eflujo de sodio sigue dependiendo de ATP, además depende del potasio
extracelular > por lo tanto, esta es una bomba que moviliza sodio, pero depende del K
extracelular
๏
Gráficos de concentración de cationes muestra que el sodio sale, pero ingresa potasio > intercambia
estos cationes
- La fracción de sodio en el tiempo muestra que a medida que se disminuye la cantidad de
potasio, la cantidad de Na+ intracelular va aumentando > es decir [Na+] depende de K
extracelular
• O sea, este transporte moviliza sodio, consume ATP, pero además necesita potasio para que la
velocidad de extrusión sea mayor > la velocidad de extrusión en presencia de potasio es
mayor que en ausencia de K+, pero igual hay algo de salida de Na+
๏
Análisis gráfico del aumento del potasio en función de la disminución del sodio a nivel del axón que
está siendo perfundido > cuando cae el sodio, aumenta el potasio
- Es lineal, y la recta tiene pendiente 2/3 > relación de iones que se están movilizando
• Básicamente, cuando el Na disminuye en 3, el K aumenta en 2
- Esto es o que hace que la bomba sea electrogénica, porque mueve una cantidad de carga
neta > mueve moléculas cargadas pero la cantidad de carga en un sentido y otra es
diferente, o sea como resultado absoluto es un movimiento de carga > se podría medir una
corriente debido a la bomba
• Para saber que es efectivamente esa la corriente, podría bloquear todos los canales o,
de mejor manera, se bloquea la bomba (bloqueando la producción de ATP) > se modifica
la corriente y ya es medible en comparación al control
- Si aumento la [K+] extracelular podría por ej también acelerar el proceso y medir la
velocidad máxima
‣ Esquema actual de forma de la bomba y cómo funciona en relación a las moléculas de sodio y potasio
que moviliza > relación entre el esquema cinético de compuertas movilizándose y lo que ya sabemos
de la estructura de la bomba y los cambios conformacionales que sufre durante el proceso de
transporte
Calcio ATPasa
‣ PMCA o Plasma Membrane Calcium Pump > Bomba clase P
‣ Experimentación donde se mide la extrusión de calcio desde un compartimento con y sin Ca++ en el
medio > puedes ver el momento en que se tiene movilización
‣ Dependencia de ATP del transporte de Calcio > Cuando hay más ATP presente, más calcio se moviliza
en función del tiempo
‣ Experimentos de registro de uptake de Ca++ >
๏
Este aumenta sinusoidalmente en función de la concentración de calcio, con una [ATP] ctte
- Llega un momento en que se satura el transporte de moléculas

๏
En función de ATP-Mg que se pone en el sistema, con [Ca++] ctte, también aumenta el uptake
- ATP-Mg sirve para cuantificar la cantidad de ATP mejor
- O sea, hay una dependencia de la bomba a ATP y también a Calcio (¿intra o extracel?)
‣ Esta bomba no sólo está presente en mamíferos, sino también en vegetales > experimentación en
soybean
๏
Al agregar ATP en el sistema aumenta la captura de
calcio > se acumula hasta un nivel máximo dentro de la
célula
๏
El calcio depende de la producción de ATP > Al poner
bloqueadores de la cadena respiratoria, al reducir la
producción de ATP, el transporte del calcio disminuye
‣ En vertebrados, hay calcio ATPasa en dos lugares importantes
๏
En el retículo sarcoplásmico > SERCA
๏
En la membrana plasmática > PMCA
- Si bien las 2 son de tipo P, la diferencia sustancial es
que la de MP pareciera ser electrón neutra >
transportando un Ca++ y también protón en el sentido
opuesto, de forma que no había un cambio en la carga
total
• La de retículo es electrogénica > modifica el potencial dentro del retículo, porque moviliza una
carga neta (esto es relevante para la
movilización del resto de los iones como con el
canal DHPR a nivel del retículo)
• O sea, que sean de la misma familia no implica
que sean iguales
Transportador de Sodio-Glucosa
‣ Experimento de los 50 > Se invirtió el intestino, con el
interior dando hacia afuera, de forma que se podía ver
cómo se movilizaban las moléculas a través de las
células, midiendo diferencias entre el extra e intracelular
๏
Se colocó el intestino con una cierta concentración
de glucosa y ver cómo cambiaba luego de un tiempo

- Lado seroso es externo y mucoso es interno (epitelio intestinal) donde están enterocitos que son
los que transportan (absorben)
- Luego de un tiempo, se ve más glucosa en el lado seroso y menos en el mucoso > la glucosa
está pasando desde el interior hacia el exterior
• Si se suma, no debería ser igual, porque hay consumo de glucosa para el metabolismo celular
• Se evidencia que la glucosa pasa de un lado para otro, pero no por difusión, porque se
hubiese mantenido (¿la concentración ctte?), en cambio acá se acumula en un lado y no en el
otro
‣ Experimento en vesículas de membrana intestinales de perros y gatos > se mide la captura de glucosa
en función de la concentración del sustrato, y se ven diferencias para las sp
๏
También se calculó la velocidad
‣ En el marco del experimento de inversión del intestino, se midió el transporte en distintas condiciones
externas, equivalentes a lo que está dentro del intestino >
๏
En condiciones normales del extracelular (145 mM de
Na) hay cierto transporte de glucosa, pero al disminuir el
sodio extracelular, disminuye el transporte de glucosa
‣ SGLT o Sodium Glucose Transporter > medición el potencial
de los ovocitos que expresan SGLT-1 con Current Clamp
๏
Al agregar un azúcar transportada por este transportador
(aMDG), el potencial de membrana del ovocito llegó a
+40mV, es decir la célula no solo se despolarizó sino que
invirtió la polaridad, y se mantiene con esa polaridad
- Cuando se cambia el sodio por cloruro de colina (para
mantener la concentración de cloruro, y la colina no
permea por el canal de sodio), la membrana se
hiperpolarizó, más negativo que al basal
๏
Con Voltage Clamp > tienes un howling de -50 mV, con una corriente inicial 0 y al añadir el azúcar
se genera una corriente de entrada que se mantiene ctte
- Si cambio el sodio por la colina desaparece la corriente de entrada
• Esto sugiere que el transporte de esta azúcar viene acompañado por una corriente de sodio
(porque sin Na desaparece la corriente y diferencia de Vm) > También sugiere que hay un
transporte basal de sodio y de otros azúcares presentes en el medio porque cuando sacas
todo la célula se hiperpolariza más aún sobre el inicial
- Que al quitar el sodio no sólo afectas el transportador sino que también estás eliminando
una corriente basal de sodio
- Al sacar todos los iones sodio, se tiene un potencial aún más negativo > Si no hubiese
corriente de sodio basal, la corriente de membrana debería haber vuelto al original > hay
parte de la corriente basal que es sodio-dependiente
‣ En Voltage clamp ponen 10 mM del azúcar aMDG en presencia de sodio marcado (para medirlo)
๏
Se ve que cuando se pone el azúcar, hay
una corriente de sodio de entrada que
permanece estable > corriente sostenida
๏
La integral de la corriente es la carga
transportada > se graficó la carga o la
cantidad del azúcar transportada en
función de la cantidad de sodio y se vio
una relación lineal,
๏
Lo mismo cuando se ve la carga
transportada en función de la cantidad de
azúcar
- En este último, la pendiente es dos, lo
que significa que por cada mol de
molécula de azúcar hay un transporte
de 2 moles de carga > te da la
estequiometría del transporte
• En el extracelular hay 145 mM de sodio y en el intracelular entre 5 y 10 mM, de modo que
hay gradiente de sodio que genera una corriente de sodio a través del transportador SGLT >
se transporta glucosa a favor del gradiente de concentración del sodio
- Pero como se transportan 2 sodios a favor de su gradiente, el transporte de glucosa
debería disipar el gradiente de sodio, pero este se mantiene > esta mantención ocurre
gracias a la bomba sodio potasio
- Porque como estas células están polarizadas > transportadores SGLT están en la parte apical de
la célula (da hacia el lumen del intestino) y en la
parte vasolateral tenemos la sodio-potasio ATPasa,
la que mantiene el gradiente de sodio, el cual
permite le ingreso de glucosa hacia el interior
‣ Esquema típico del transporte de glucosa a nivel
intestinal, que depende del gradiente de sodio
mantenido por la bomba sodio-potasio >
๏
Aquí tiene GLUT también, por ende sale glucosa
equilibrativamente > como está entrando glucosa,
esta aumenta y después sale al extracelular x GLUT
(¿para viajar por las otras células hacia el exterior
del intestino?) > con algo de gasto para mantener el
metabolismo celular
Transporte de aminoácidos
‣ Todas las moléculas no permeantes se transportan con distintos transportadores
‣ Las células, para poderse mantener, necesita incorporar aá para formar proteínas > entran aá, ni
siquiera dipéptidos porque hay dipeptidasas en el tracto digestivo
๏
Se midió el potencial de membrana en reposo en células inmortalizadas de túbulo proximal de riñón
humano > sin nada es como -60 mV
๏
Al ponerle 1 mM de prolina, la célula se despolariza (a -10mV)
๏
Haciendo lo mismo en otra cél pero poniendo prolina en ausencia de sodio, no pasa nada
- O sea la Pro genera una despolarización en presencia de sodio > sugiere que hay una corriente
de entrada de sodio (por la despolarización) junto con la entrada de prolina
๏
Gráficos de los cambios del Vm producidos por distintos tipos de aminoácidos, según su acidez
- En casi todos ellos producen una despolarización cuando se ponen en el extracelular > el
gradiente de sodio permite el ingreso de aminoácidos, porque al eliminar el sodio, no ingresarían
aá > simporte Na+/aá
• La fuerza motriz del gradiente del ion facilita el transporte del aá
• Hay algunos aás que transportan con Cl-
- Claramente hay diferencias, los neutros
generan depolarizaciones mucho más
grandes
‣ Transportador de aspartato es similar, pero
con estequiometría diferente > simporte 3 de
Na+ y 1 Asp
‣ Esquema simplificado de todos los
transportadores en células hepáticas que
participan en la generación de bilis y ácidos
biliares > la mayoría son ABC
๏
En el funcionamiento celular estos
transportadores están muy presentes
Clase 17: Acoplamiento Excitación-Contracción I: Calcio

Monday, 8 May 2023
Circuito organismo y su medio

‣ Todo organismo está inserto en un mundo exterior enriquecido por distintos elementos
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Muchos de estos elementos son capaces de interactuar con los organismos, lo cual depende del
organismo mismo, y a su vez el organismo puede cambiar elementos del exterior
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A través de las superficies sensoriales del organismo interactúa el ambiente con él
- Trayectoria endogenética nos permite estudiar a los organismos y en este contexto se enmarca
lo que llevados el curso
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Esquema expresado como un circuito cerrado
donde los elementos significativos del exterior
que pueden interactuar con la superficie
sensorial de los organismos generan cambios
por el acoplamiento estructural entre estos dos
sistemas, y a su vez el organismo a partir de
mecanismos efectores actúa sobre el exterior >
hoy veremos un ejemplo de mecanismos
efectores
- En los animales el sistema nervioso tiene un
rol primordial en este circuito, mediante
potenciales de acción de células excitables >
Podemos unir entonces la parte de potencial
eléctrico con cómo se logra generar
actividad motora de tal manera que se
modifica el mundo que los rodea
Musculatura
‣ Musculatura implica células contráctiles, hallamos estas en todo el mundo animal, pero los miocitos,
células musculares como tal están en grupo filogenético bilateria
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La base de contractilidad se basa en una maquinaria de actina y miosina
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Tenemos 2 principales tipos de células musculares:
- Células musculares estriadas donde la estructuración ordenada de actina y miosina está alineada,
genera estructura estriada > rayas transversales al microscopio
- Células musculares lisas > maquinaria desordenada > coloración uniforme al microscopio
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Esta división de tipos celulares es muy profunda a nivel filogenético > a través del estudio de la
evolución molecular mediante secuencias se ha identificado que el ancestro común de bilateria
poseía ambos de estos tipos celulares, y con la evolución y diversificación de los linajes animales,
estos tipos han ido cambiando pero se ha mantenido la división de cels estriadas y lisas
- Este árbol filogenético es de la trayectoria evolutiva de las proteínas, así que en el esquema hay
que diferenciar tanto la diversificación de especies como la de los tipos celulares, no son lo
mismo
‣ Clásicamente nos enseñan 3 tipos de células musculares:
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Células estriadas del músculo esquelético > sistema locomotor de vertebrados y tiene control a
través de las motoneuronas (también hay al final y al comienzo del tubo digestivo)
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Células estriada del corazón > cardiomiocitos
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Células musculares lisas en sistema visceral, en superficie de capilares
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Pero en otros linajes esta división es distinta > por ej moscas tienen células estriadas en casi todas
partes excepto por la vecindad de las gónadas
- Esto hizo suponer que la musculatura lisa sería entonces una innovación de los vertebrados, pero
reciente%, analizando tipos celulares mediante el aparato de expresión de los mismos, se
descubrió que ambos tipos celulares estaban presentes ya en el ancestro común de toda
bilateria pero en algún punto de la evolución de los artrópodos, el tipo celular liso adoptó una
conformación estriada, o sea en la práctica desarrollaron una organización estriada para “todo”, el
tejido liso adquirió una conformación como la esquelética o cardiaca nuestra
- Asimismo, nuestras células cardiacas vienen de un linaje liso pero en algún punto adoptaron la
estructura de estriación
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Diferencias entre ambos tipos celulares musculares
- Gatillación de la contracción (herencia de linaje)
• En relación a los linajes, en general las CM estriadas se contraen debido a estimulación
gatillada por señales de origen neurogénico > sinapsis neuromuscular por contacto sináptico
entre la célula y las motoneuronas (para el caso del m. esquelético)
• Por otro lado, la gatillación de la contracción puede también ser de origen miogénico, tanto
por actividad intrínseca de la célula muscular lisa como por células musculares especializadas
en el mismo tejido (como ocurre en el <3) donde células musculares aledañas son las que
generan activación > en este caso igual el tejido nervioso participa, pero muchas veces con
roles moduladores
- Estructura
• La velocidad de contracción es 10-100 veces mas rápida en CM estriadas que la de CM lisa
Acoplamiento excitación-contracción
‣ En el gráfico tenemos el curso temporal desde la señal eléctrica a la contracción muscular
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Una espiga o potencial de acción, cambio de pot celular que implica el aumento de la tensión
- La tensión es una medida de fuerza, la fuerza contráctil que usamos para estudiar la
musculatura y su capacidad contráctil > este es el mecanismo efector que hablamos, la
respuesta
- Entre el pico de señal eléctrica y la actividad contráctil, la tensión, tenemos un intermediario o
“puente” que serían las concentraciones intracelulares de calcio en este caso
- En términos basales la concentración interna de Ca++ es muy baja (orden de los nM), y
participa en las cascadas de señalización como segundo mensajero
- Aumenta la concentración intracelular de calcio por la señal de polarización de la
membrana, lo cual tiene directa relación con la actividad contráctil
‣ Hoy iremos completando los elementos estructurales y fisiológicos que unen una despolarización de la
membrana con un incremento en la [ Ca++ ]
Potencial eléctrico de membrana en células musculares
‣ De origen neurogénico
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La contracción de algunas CM es gatillada por estímulos eléctricos de origen neurogénico
- Si hablamos de CM esqueléticas de vertebrados sería gracias a la activación y propagación de un
pot acción en motoneuronas > el pot de acción se propaga por el axón neuronal y la
despolarización en terminales sinápticos gatilla la liberación de neurotransmisores, que en
vertebrados es acetilcolina
• Esta molécula es un ligando de un canal que se encuentra en el sector sináptico llamado
placa neuromuscular > interactúa con su receptor, que es un canal > cambio conformacional
que conlleva la apertura del canal y el paso de iones
- En particular este canal es permeable a cationes, ppal% de sodio > entra sodio y se
genera la despolarización localizada de la membrana en ese punto particular de la sinapsis
- La despolarización inicial, como hay canales de sodio dependiente de voltaje en la
membrana, implica su apertura, lo que genera el potencial de acción por la fibra muscular
‣ Identificar que tenemos dos corrientes y dos cambios de potencial distintos > las corrientes de sodio
que generan un potencial de acción (gatillando a su vez corrientes de potasio y así), y también una
corriente inicial, que pasa por los receptores (que puede ser por ej la corriente artificial que nosotros
aplicamos) y produce la despolarización local
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Esta despolarización inicial se conoce como EPP o Potencial de Placa Excitatorio (el cambio de
corriente por el ingreso inicial de sodio gracias a acetilcolina) que si supera el umbral de descarga,
gatilla el disparo de pot acción, que como se ve en la imagen es como de 100-120 mV
‣ Para poder estudiar el EPP, sin tener el potencial de acción entorpeciendo las señales, se utilizó curare
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El curare es un veneno, toxina de plantas sudamericanas que tiene un mecanismo de acción de
bloqueo de los canales nicotínicos de acetilcolina, estos receptores de la fibra muscular de
acetilcolina
- Si usamos mucho curare, se bloquean todos los canales y aunque llegue acetilcolina no se van a
dar por enterados y no habrá respuesta eléctrica en el músculo porque nunca hubo flujo de
corriente, aunque la motoneurona haya propagado un potencial de acción
- Pero, con una menor concentración de curare se puede afinar al punto justo en que algunos
canales estén abiertos (1,2 mg/mL), y con esto se pudo estudiar mejor EPP > estimulación
eléctrica de la motoneurona, liberación de acetilcolina, y apertura de canales de sodio, pero en
menor cantidad de tal manera que ahí no se alcanza la despolarización suficiente para gatillar el
potencial de acción, solo se ve el EPP pero no el potencial de acción
• Atenuamos la despolarización inicial del EPP de tal manera que no se genera pot acción >
comparando la curva del potencial de placa con el del pot de acción, vemos que el peak del
primero no pasa de un mV de amplitud
• Si tenemos varios electrodos de registro a lo largo de la fibra muscular, vemos decaimiento
especial del potencial eléctrico porque no hay propagación activa (no hay reglamentación de
la despolarización), solo la propagación pasiva del EPP por la entrada inicial de Na+ por los
canales receptores de acetilcolina
‣ De origen miogénico
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Pero como vimos, no todas las células musculares disparan potenciales eléctricos así, las que vienen
del linaje de tipos celular liso, son estimuladas por otros tipos celulares (no motoneuronas), ya sea
por si mismo o, como el caso del corazón, por poblaciones de cardiomiocitos aledaños
- El <3 está compuesto por una multiplicidad de miocitos, lo que hacen la mayor parte del trabajo
son los que se encuentran en las murallas del mismo, como cardiomiocitos ventriculares y
auriculares que hacen el bombeo, pero tienen múltiples nodos con actividad marcapaso
• La actividad marcapasos va a generar cierta actividad eléctrica que será transmitida por
cardiomiocitos especializados en conducción (H y PF en foto) y van a estimular eléctrica% los
a los miocitos generando el potencial de acción
- Estas poblaciones tienen una composición particular de canales de iones que les permite
que en cuanto vuelven a su estado basal luego de un pot de acción, empiezan a
despolarizarse de nuevo, gatillando un sgte pot de acción de manera autónoma, sin
estimulación, y a intervalos cttes
- Se denomina actividad marcapaso porque, sin necesidad de estimulación externa, generan

regular y cttemente picos eléctricos que son transmitidos por células de conducción
(también de carácter miogénico) a todos los otros cardiomiocitos, en particular a los
ventriculares
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En la imagen vemos un pot de acción de cardiomiocito ventricular > La estimulación genera la
despolarización clásica pero de acuerdo a particularidades de la célula el potencial de acción luce
distinto porque acá por ej hay corrientes de entrada de Ca++ y otros cationes que contrarrestan la
caída abrupta de hiperpolarización por la salida de potasio
- Cuando esos canales se cierran vuelve a su nivel basal
‣ Entonces este es un ejemplo de las diferencias que pueden tener estas células pero aún así lo
conservado del sistema es que el primer componente es el cambio en la polaridad de una zona de la
membrana del miocito, la despolarización que se puede propagar por la célula
Arquitectura celular de las Células Musculares
‣ Para entender el proceso, vamos a estudiar la estructura, que suele confundir porque la musculatura
tiene esta naturaleza fractal en el sentido que son muchos tubos dentro de otro

๏
El músculo es el órgano total, que se une a otras estructuras a través de los tendones y está
subdividido en fascículos
- Fascículos son ramos de fibras musculares
- Fibras musculares es como nos vamos a referir a los miocitos del músculo esquelético > la fibra
muscular es la célula
- Lo que envuelve a la fibra muscular es membrana plasmática, que se llama sarcolema
- Dentro de las fibras musculares (FM) hay otros componentes subcelulares llamados miofibrillas,
que agrupan cadenas polipeptídicas de actina y miosina ppal% y que son la base de la
maquinaria de contracción de estas céls
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Debido a la naturaleza estriada, al orden de la maquinaria molecular de estas células, y debido a
que estos polímeros no ocupan toda la extensión celular sino que están divididas en segmentos, es
que podemos observar una estructura repetitiva a lo largo de la miofibrilla llamada sarcómero >
discos Z separando cada sarcómero, dentro del cual vamos a tener miofilamentos de actina y de
miosina que producen las Bandas I y Bandas A, las que reciben su nombre por la coloración que
tienen en un tipo especial de microscopía
- Los discos Z son la estructura más oscura que se observa en la microscopía y tienen una
naturaleza proteica muy rica
Arquitectura celular: Miofibrillas
‣ En la figura se ve un segmento de la fibra muscular porque son células muy largas, de ancho y largo
variable dependiendo del tipo muscular. Dentro de cada fibra tenemos múltiples miofibrillas, cada una
de las cuales se subdivide en segmentos llamados sarcómeros, que tienen que ver con la estructura de
miosina y actina
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Entonces las miofibrillas son el componente compuesto por actina y miosina así que son las
responsables de la propiedad contráctil de las fibras musculares
๏
Las FM del músculo esquelético son células alargadas, polinucleadas, muy enriquecidas en
mitocondria y que además de tener muchas miofibrillas, tienen otras dos estructuras de interés
- Retículo sarcoplásmico que envuelve a cada miofibrilla y es uno de los ppales reservorios de
calcio intracelular
- Sistema tubular transverso > entradas de MP a lo largo de la extensión de las FM, generando
tubos “rellenos” del medio extracelular

Arquitectura celular: Sistema Tubular Transverso

‣ El sistema tubular transverso se compone de los túbulos T (TT)
‣ Desarrollo del sistema tubular transverso > las invaginaciones del sarcolema colonizan los espacios que
se encuentran en las miofibrillas. La estructura segmentada es consecuencia de la organización en
sarcómeros de la musculatura estriada
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Por ejemplo, en el video, que muestra un corte longitudinal de musculatura en pez zebra, se ve
cómo a lo largo del tiempo las fibras musculares que se ven uniformes, van adquiriendo una
estructura rallada, con intervalos constantes de entrada de la MP > las entradas generadas por el
sistema tubular transverso las llamaremos un disco del sistema tubular
‣ A lo largo de la FM hay invaginaciones de la MP (sarcolema) que
pone "en contacto” las partes internas o profundas de la fibra
muscular con el medio extracelular mediante estas estructuras
llamadas túbulos T
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Ingresan a la célula túbulos T dependiendo del punto de la
miofibrilla en que se encuentra, por ende tiene relación con la
estructura del sarcómero
๏
Cada una de las entradas de membrana le llamaremos discos del
sistema tubular transverso y se ven como lineas blancas en el
video
‣ Si hacemos un corte transversal justo a la altura de un disco, las
líneas que se apreciaban en el video, se ve como la foto >
๏
La MP entra generando ramificaciones que se extienden a lo
largo del interior de la célula
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Cada disco deja espacios cttes con el sgte, porque durante la
ontogenia de estas CM, cuando se forman los TT lo hacen entre
los espacios de miofibrilla, siguiendo la estructura interna de la
miofibrilla, envolviéndola
- Dentro de cada espacio blanco corre una miofibrilla
‣ Función de estos TT
๏
Cuando hay un potencial eléctrico, al contracción ocurre de manera simultánea en todas las
miofibrillas que corren por una FM, y gracias a estas estructuras como hay contacto con el
extracelular gracias a los TT, por estos tubos correrá el potencial de acción en la despolarización
localizada
๏
O sea, como toda la membrana va a experimentar la despolarización, las fibras centrales se van a
poder contraer simultáneamente a las fibras periféricas porque ahora están en “contacto” con el
exterior
- Porque sino no tendría la misma
temporalidad para las fibras periféricas de
las centrales
‣ Se llama Sistema Tubular Transverso porque
tiene ramificaciones transversas ppal% pero
también hay algunas ramificaciones que son
longitudinales, por eso la reconstrucción 2D no es
la mejor
‣ Dónde ingresan los TT depende de la estructura
del sarcómero
๏
El sarcómero está dividido por Discos Z, tiene
una Banda A y una Banda I, y dónde ingresan
estos túbulos T depende de la especie y del
músculo
- En rana los TT ingresan en el disco Z, pero en lagarto y algunos mamíferos lo hacen en la

interfaz de las Bandas A e I (justo donde terminan los miofilamentos gruesos). De manera
repetida dado que los sarcómeros se van repitiendo también
Arquitectura celular: Retículo sarcoplásmico
‣ Este es el retículo endoplásmico, un sistema reticular de cisternas aplanadas que se encuentra
envolviendo a toda la miofibrilla de la fibra muscular (el azul en la foto)
‣ Es un reservorio importante de Ca y por ende tiene en su membrana múltiples proteínas de transporte

de calcio
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Como el canal receptor de rianodina que da hacia el citoplasma y canales receptores de inositol
trifosfato (importante en señalización celular) y también proteínas de transporte que van a
bombear calcio del citoplasma hacia el interior del RS acopando el transporte de calcio a por ej la
hidrólisis de ATP
‣ Cisternas Terminales y Triada
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En el sitio de contacto del RS con el TT, el primero adquiere una cierta conformación donde se
hacen cisternas terminales que flaquean por ambos lados a un TT y tienen una composición
proteica particular
- A esta estructura de un TT y dos cisternas terminales se le llamó triada
• En el lagarto esto ocurre entre las bandas A-I
pero en rana ocurre a la altura de los discos Z
- Este flanqueamiento es importante para la
contracción como veremos más adelante
• En la imagen vemos esta estructura reticular
como puentes que unen los TT, la cisterna que
es solo la extensión final, una pequeña parte
del RS, después le sigue el cuello fenestrado
y otras estructuras
• Un pie es lo que une la cisterna terminal con el túbulo t, la conexión que una la triada y se
ven como las zonas oscuras alrededor del TT. Se llaman pies porque son dos por c/lado
- Los pies son los canales RyR de las CT
‣ Todo esto es característico de células estriadas (esquelético y cardiomiocitos), en la musculatura lisa

es diferente porque no es tan ordenado el RS, tampoco hay discos Z sino que cuerpos densos que
están repartidos a lo largo de la célula
‣ Veremos dos canales que van a unir estructural y funcionalmente estos procesos, cómo la señal
eléctrica resulta en un aumento de la concentración intracelular de calcio.
Canales de Calcio: Receptores de Dihidropiridina
‣ DHPR o Canal Receptor de Dihidropiridina > se encuentran en la MP de la fibra muscular, por ende
están en los TT y unen el espacio extracelular del citoplasma de la FM
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Se ha identificado que los TT son muy ricos en este receptor
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Fue descrito por primera vez en musculatura del crustáceo en 1953 y pertenece a la familia de los
canales permeables a calcio dependientes de voltaje (Ca_v)
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Este canal es permeable al catión de Ca++, esa es la especie iónica que permiten pasar a través del
poro, pero la activación de los canales es por voltaje
- Puede ocurrir que se activen además por una batería de otras moléculas endógenas (ATP,
ligandos, etc) y su actividad se puede ver modificada por especies exógenas como la DHP, que
en este caso lo bloquea
‣ Es un Cav1 (canal de calcio dep de voltaje tipo 1) o canal tipo L
๏
Hay Cav2 y 3 también > esta nomenclatura es la más moderna, con análisis de secuencia
๏
La nomenclatura L y T es más antigua, y se relaciona a sus características experimentales
- Grupo 1 también se llaman canales tipo L > Long lasting current (el tiempo que están abiertos y
durante el cual fluye calcio por ellos es mayor en relación a otros canales)
• Los del grupo 3 (Cav3) son tipo T > Transcient current
• Ambas nomenclaturas coinciden, las divisiones en el fondo son las mismas
‣ Se encontró que los TT eran muy ricos en este canal sensibles a la dihidropiridina, ubicado en los
canales grupo 1 dependiente de V
๏
Se aisló y expresó en suspensiones de membranas lipídicas para se estudiarlo
electrofisiológicamente con registros
Dependientes de Voltaje
‣ Estudio canal único en la imagen > V clamp a dos potenciales de mantención diferentes

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Al cambiar su polaridad la corriente invierte pero es de magnitud similar en entrada y salida; así se
determinó la conductancia unitaria de los canales (20 pS) y su permeabilidad catiónica
๏
Controlando el V vemos cómo invierte la corriente en 0, pero es porque estamos en niveles de
concentraciones no fisiológicas
- El potencial de inversión real del calcio es muy positivo, no 0, porque usualmente hay mucha
concentración de él afuera > O sea, esta es una manipulación experimental donde eliminamos la
diferencia de concentración para sólo estudiar la dependencia de voltaje, por eso es que el calcio
invierte en 0 V
• Un canal único en condiciones fisiológicas tiene comportamiento óhmico pero con la recta
desplazada, no pasaría por el 0
- Esto solo si lo hacemos independiente de la probabilidad de encontrar el canal abierto, si
no hacemos este ajuste/corrección no será óhmica (una recta) porque para voltajes muy
bajos la conductancia disminuiría
- La probabilidad de encontrar el canal abierto también cambia con el V, además de la
polaridad de la corriente
๏
Entonces en condiciones fisiológicas estos canales de activan por cambios en la diferencia de
potencial, por una despolarización en las FM
๏
Corrientes de compuerta
- Cuando hacemos inyecciones de corriente en la célula,
parte de ella se dirigen a cargar el condensador (la
membrana), las corrientes capacitivas, y otras corrientes
fluyen por la membrana, corriente iónica. Y en space
clamp, no habrá corriente longitudinal (creo)
• Si conseguimos eliminar estas dos corrientes,
capacitivas y de flujo iónico, veremos otra corriente >
corrientes de compuerta
- Corrientes de compuerta o intramembranales que son
como picos hacia arriba y abajo en la imagen > Voltage
Clamp con pot de manutención a -90 V, a partir del cual
se cambia a diferentes potenciales de membrana
(durante la barra de abajo) y luego se vuelve a los -90 V
• Vemos que al despolarizar hay una pequeña corriente
de salida, muy breve, que rápidamente decae y
cuando retornamos el potencial a su valor basal, hay
una corriente hacia adentro
- A mayor dif de potencial, más magnitud de
corriente
- Integración de la corriente en el tiempo resulta la carga, porque el área bajo la curva de los
peaks son la carga transportada en este periodo
de tiempo
• Como ambos picos son iguales, el movimiento
de cargas es igual para un lado y otro, la
integración es igual pero con el signo
cambiado
- Esta carga transportada corresponde al
movimiento de residuos aás cargados que se
encuentran en la estructura de estos canales
dependientes de V > helix sliding
- Al final es la corriente causada por el movimiento del cambio conformacional de los áás
con carga en la estructura misma los canales
- Estructuras y mecanismos compartidos por otros canales dependientes de V, como de K+
Estructura
‣ Heteropentámero constituido por distintas subunidades > alfa1, alfa2, beta, delta y gamma
๏
La subunidad alfa-1 es la más grande y tiene 4 dominios (rojo-naranjo en figura), cada uno de los
cuales tiene sensores de potencial, que se mueven de acuerdo a las difs de pot, y también forma el
poro por el cual fluye el calcio
- También tiene una estructura de particular relevancia, el loop 2-3 que une el dominio 2 y el 3 y
se extiende hacia el citoplasma e interactúa con el canal receptor de radiodina > cadena
polipeptídica que permite la interacción física entre canales
• Dependiendo de la isoforma del receptor, el loop adquiere distintas conformaciones,
estructuralmente esta parte permite el acoplamiento con el canal RYR
๏
Las otras también son importantes, por ej alfa- 2 tiene función moduladora, con sitios de unión a
moduladores endógenos y exógenos mientras que la beta tiene sitios de interacción también con
canal RYR
Canales de Calcio: Receptores de Rianodina
‣ RyR o canales receptores de Rianodina son canales de calcio
que se encuentran en la membrana del RS, en las cisternas
terminales, conectan el citoplasma con el lumen del RS
‣ Estudiando las corrientes de canal único se descubrió que no
solo transportan calcio, sino que además son modulados por
calcio > Calcio toma dos roles: activador y transportador de la
corriente
๏
También son sensibles a ATP, se ve que hay actividad al
agregar ATP por el lado citoplasmático
๏
Al agregar calcio y ATP vemos que está siempre en la
conformación abierta
Dependientes de Calcio
‣ Se identificó que el mismo receptor tenía diferentes respuestas de apertura a calcio
Hay tres formas de estos canales, distintos tipos con distintas dependencias a calcio (gráfico
๏
purified RyR)
- En el primero, al aumentar la [Ca++] por el lado citoplasmático vemos una leve subida de p
(probabilidad de encontrar canal abierto) seguida de una bajada
- En una segunda forma del receptor, la p aumenta más con la [Ca++], pero luego cae, como una
campana
- El tercer tipo de dependencia a Calcio es muy sensible, alcanzando a bajas [Ca++] una alta p, y
luego se mantiene al llegar a la p máxima
La p de encontrar canal abierto son distintas a medida que aumenta la concentración de Ca, y
๏
estas diferencias de dan por el estado de oxidación de los residuos de cisteína del canal >
modulación de la dependencia de calcio por e° de oxidación
- O sea exponerlo a oxidación puede hacer que un mismo canal cambie su respuesta a calcio (de
3ro a 2do), y una segunda exposición a oxidante hace que cambie de nuevo (de 2do a 1ro)
• Lo mismo ocurre en el sentido inverso, con la reducción de la cisteína > es reversible porque
si lo reduzco se devuelve
• Pero si lo oxidamos aún más, a un último e° de oxidación, el cambio ya es irreversible y nos
quedamos en una conformación muy dependiente de calcio (muy poco sensible a Calcio)
Estructura
‣ Molécula gigantesca, PM de 2 MDa (en comparación a alfa-1 del DHPR que era de 176 kDa)
‣ Es un homotetrámero, con múltiples sitios de modulación (pudiendo ser modulado por moléculas
endógenas como ATP y Ca++, y exógenos como la cafeína), sitios de fosforilación (en serinas y
treoninas que se hallan en el lado citoplasmático)
Gran parte de la masa del receptor está del lado citoplasmático
๏
๏
Pertenece a la familia CRC (Calcium Release Channels), junto al
receptor de inositoltrifosfato (que también es muy grande y
habita en las membranas sarcoplásmicas, permeable a calcio pero
activado por IP3)
‣ Vemos que en mamíferos hay diferentes familias > RyR RyR-1, 2 y 3
๏
Hay 3 variantes de receptores de rianodina y se expresan
diferencial% en distintos tejidos
- RyR-1 se halla en musculatura esquelética
- RyR-2 en musculatura cardiaca (en algunas células nerviosas
también)
- RyR.-3 en muchas células pero en bajo nivel, y en musculatura
esquelética del diafragma (liso ¿?)
Acoplamiento excitación-contracción: Diferencias esquelético y cardiaco
‣ Tres antecedentes que diferencian el AEC en la musculatura esquelética de la cardiaca
1. Distribución de DHPR y RYR
‣ Tenemos DHPR en TT que puede interactuar con RyR en RS, y tenemos mucho calcio dentro del RS
así como también en el extracelular
‣ Las imágenes son con técnica de criofractura que dejan expuestas superficies celulares y nos
permiten ver con buena resolución el paisaje físico de una membrana
๏
Acá se separó el TT de la CT y se dejó en evidencia la cara citoplasmática de ambos
- En el TT se ven anillos (DHPR) agrupados en tétradas y en la CT nubes “cuadradas” unidad por
sus esquinas, ordenadas y de gran tamaño (RyR)
- Se hizo un modelo de los RyR ordenados y se le superpuso la imagen de los DHPR, manteniendo
las proporciones > se observa que la distribución de los DHPR se colocaliza con los RyR > como 4
DHPR cada uno en una esquina del cuadrado del RyR
• Esta superposición es de músculo esquelético, y se ve ordenado, donde la tétrada DHPRs
acoplado al RyR ocurre RyR por medio
- Esto no se repite en el cardiaco, donde hay alta densidad de RyR pero muy pocos DHPR, que no
se ordenan en tétradas, sino que scattered en la superficie
2. Corrientes de calcio extracelular

‣ Estudiando células obtenidas de ratones disgénicos, que no son capaces de expresar DHPR, se insertó
un plásmido que portaba la sec de la variante esquelética y cardiaca del DHPR
‣ Se realizan estudios fisiológicos de corriente frente a un potencial de mantención > V clamp
๏
Analizando las corrientes de calcio extracelular se diferencian mucho el tejidos esquelético del
cardiaco > dos diferencias importantes
- La cinética > el DHPR cardiaco llega rápidamente a su peak mientras que el esquelético no
alcanzó a llegar a su máx, o sea que su cinética es mucho más lenta
- La magnitud/intensidad de corriente > por el DHPR cardiaco pasa mucho mas calcio (10 órdenes
de magnitud) que el esquelético
‣ También se midió la tensión > la respuesta contráctil a la estimulación eléctrica de la célula en
condiciones fisiológicas (solución de Ringer) que luego se lava a un medio sin Ca++ > para estudiar
cambios en la tensión de acuerdo al calcio presente en el extracelular
๏
En el esquelético, tanto en condiciones fisiológicas como sin calcio la tensión se mantiene > hay
contracción aunque no haya Ca++
๏
En el cardiaco no ocurre nada sin calcio, la contracción se anula completamente, así que se infiere
que requiere de Ca++ para generar tensión > cuando se vuelve al fisiólogico se recupera la tensión
3. Acoplamiento DHPR-RyR
‣ Se expresa la variante esquelética (línea gruesa) y
cardiaca (línea delgada)
๏
En condiciones fisiológicas hay tensión al estimular
eléctricamente en ambos, pero solo en esquelético sin
presencia de Ca++
‣ Se busca entender qué parte del receptor es capaz de
rescatar la actividad contráctil en ausencia de calcio >
suponiendo que una parte del DHPR esquelético posibilita
la contracción aun sin calcio extracelular
๏
Se generan 5 líneas quiméricas que expresan la
variante cardiaca pero con distintas partes del
esquelético, para observar su respuesta fisiológica a la
ausencia de calcio
- Se observa que al reemplazar los dominios
intracelulares se rescata
• Se fue reemplazando individualmente cada
dominio y se concluye que es el Loop 2-3 el que
posibilita el rescate de la dependencia del calcio
> el loop de interacción con RyR

‣ Entonces, tenemos que hay una diferente distribución visible de los receptores en estos tejidos,
estando mucho más ordenados y en mayor cantidad los DHPR en el esquelético. Vemos que la
conductancia de calcio de los canales DHPR en el cardiaco es mucho más alta y que es necesario el
Ca++ para la contracción en este tejido; además que es suficiente el linier 2-3 para rescatar la
independencia al calcio extracel del esquelético
Acoplamiento excitación-contracción I
‣ En miocito cardiaco, la despolarización es sensada por DHPR, generando un cambio conformacional

que abre el canal, entrando calcio a la célula, lo cual modula la activación de RyR, permitiendo la salida
de calcio desde el RS > esta interacción se llama CICR liberación de calcio inducida por calcio, y
resulta en que aumenta la concentración calcio intracelular
๏
Basta con que entre calcio para que se abran RyR por un cambio conformacional, por eso no es tan
necesario que estén unidos físicamente
๏
De hecho acá el Loop 2-3 es distinto, porque no requiere la comunicaron estérica
‣ En cambio en el miocito esquelético, la misma despolarización que genera el cambio conformacional
del DHPR activa físicamente la apertura de RyR, sin necesidad de que haya calcio
๏
El cambio conformacional es transmitido estructuralmente a través del loop 2-3, directamente al
RyR ya que hay acoplamiento estérico > activando RyR mecánicamente
- Saliendo así el calcio al citoplasma, por lo que puede haber contracción entonces sin necesidad
de que entre calcio por el DHPR, porque igual RyR se activará físicamente, y el calcio que salga
ahí puede activar a los canales que no están acoplados a un DHPR
๏
La despolarización de la membrana es sensada por las subunidades alfa-1 y ese cambio
conformacional es transmitido por el loop 2-3
Así unimos la señal eléctrica de despolarización a un aumento intracel de Ca++ en el miocito

Clase 18.1: Ac. Excitación-Contracción II: Contracción Muscular

La clase anterior unimos el cambio en la polaridad de voltaje en la membrana célula excitable contráctil
con la liberación de calcio desde el RS generando corrientes conocidas como transcientes de calcio,
porque es una elevación momentánea de la [Ca++] seguida de mecanismos de recaptación de calcio por
maquinaria del RS
Hoy veremos cómo este incremento de Ca++ va a modular la maquinaria de actina-miosina que se
expresa en cels contráctiles de animales para generar la fuerza y tensión que participa en todos los
procesos de movimiento como mecanismos efectores
Repaso Miofibrillas
‣ Un tipo particular de células contráctiles son las fibras musculares o células de músculo esquelético
en vertebrados > geometría alargada y está estructurada de tal manera que la maquinaria actomiosina
esta regularmente organizada, y al microscopio luce estriada
Unidades sarcoméricas separadas por discos Z
๏
‣ Vimos que según el tipo muscular y especie hay invaginaciones de la membrana que generan el
sistema tubular transverso que se conecta por las cisternas terminales del RS formando triadas de un
TT flanqueada por CTs
En la MP del TT habita una proteina, el DHPR canal dep de voltaje permeable a calcio, y
๏
dependiendo de si estamos en un cardiomiocito o un miocito esquelético, la entrada de calcio o la

interacción directa con RyR genera la apertura de este ultimo, liberando calcio del RS al citoplasma
Sarcómeros
Estructura y nomenclatura del sarcómero
‣ Primero, para entender la nomenclatura, debemos entender
las técnicas de microscopía de interferencia y el concepto
de anisotropía
Muchas muestras celulares no tienen coloración, y se
๏
desarrolló una tecnología de microscopía que permitía

diferenciar estructuras en estas muestras
Lente polarizador de la luz > filtro polarizador de tal
๏
manera que las ondas que vienen en múltiples ángulos

son filtradas así que solo pasa luz que está en una única
dirección/ang
- Cuando ponemos un segundo filtro en sentido
perpendicular al primero vamos a anular o bloquear
toda la luz, porque no tiene componentes en esa
segunda dirección
• Si se gira levemente, vamos a atenuar la luz >
menor amplitud porque el componente de la
primera onda en el ángulo de la segunda sí se va a transmitir a través del 2do
Las estructuras moleculares pueden ser isotrópicas como anisotrópicas respecto a su efecto en la
๏
luz incidente, de acuerdo a la distribución de los componentes moleculares

- Las isotrópicas van a permitir el paso de luz esta polarizada sin modificarla
- Pero si la luz polarizada pasa por estructuras anisotrópicas, que tienen cierta direccionalidad, va a
generar una división de esta onda generando que cambie el ángulo de la luz, separando los
componentes, variando el ángulo de incidencia

๏
Si iluminamos la muestra del microscopio con luz polarizada en un ángulo y la capturamos abajo,
después de un segundo filtro polarizado completamente perpendicular al primero, será según la
estructura de la muestra si podremos o no verla
- Si es isotópica, no va a interactuar con la luz polarizada de tal manera que esta no cambiará de
ángulo y al llegar al 2do filtro se verá un campo oscuro, nada
- Si es anisotrópica podremos verla porque la luz polarizada que pasa por la muestra ya no es fully
perpendicular al 2do filtro, así que la componente en ese ángulo pasa por él
- También hay ciertas estructuras que dependiendo del ángulo que incide la luz va a tener
comportamiento isotrópico o anisotrópico, porque esto depende de la direccionalidad del orden
de los componentes en la muestra
‣ Por eso ahora somos capaces de ver estas estructura cuando ponemos muestras musculares bajo un
microscopio que utiliza esta tecnología
๏
Los colores están invertidos (edición posterior de la imagen) porque ahora lo más claro son de
carácter isotrópico, lo más oscuro es anisotrópico, lo que sí se pudo ver mejor
๏
Entonces en corte de musculatura vemos las fibras con su direccionalidad y se ve claramente su
estructura rayada
- La nomenclatura que se utilizó tiene que ver con cómo lucen con esta técnica microscópica > las
letras vienen del alemán y por esta vision
• Línea Z o del Disco Z, del alemán “entre” porque los sarcómeros están separados por estas
líneas de coloración más oscura
• Linea M o línea media justo a la mitad del sarcómero
• Zona H que es la parte más clara dentro del gran parche oscuro > son las tres bandas de al
medio, dos claras y una oscura en medio
• Banda A es porque es el parche anisotrópico, ya que es más oscura
• Banda I es porque es el parche isotrópico, ya que es más clara

‣ Esa es la estructura básica del sarcómero, si nos alejamos un poco más ya no somos capaces de
diferenciar las líneas y sólo se ven bandas claras y bandas oscuras
๏
El TT puede ingresar a la altura del disco Z o en la interfaz entre la banda A y la I
๏
Esta nomenclatura tiene una correlación con la composición molecular del componente en cada
zona > todo el componente celular separado por sarcómeros es la miofibrilla
๏
Estas células son muy ricas en mitocondrias y se ve una línea de ellas a lo largo entre dos
miofibrillas, y también se observan las triadas
Estructura del sarcómero: Contracción y relajación
‣ Desde más lejos no se distinguen las líneas Z o M, pero se ven las bandas claras de las oscuras y se
hicieron muchos estudios de la contracción en tejido muscular sin tener claros los mecanismos y el
proceso real que generan la contracción a nivel macroscópico
‣ A los cortes se aplicaron por un lado un estiramiento pasivo de la musculatura (aplicando fuerza sobre
la muestra), mientras que con la estimulación eléctrica se observa que hace un proceso de
contracción > procesos contrarios
๏
Estimulación tetánica > tren de estimulación eléctrica de alta frecuencia > es artificial, del
investigador, pero simula disparos de alta frecuencia de una motoneurona
๏
De ambas muestras se pueden ver que tenemos Bandas A y Bandas I, pero las A no cambian de
longitud, solo las I son las que crecen de tamaño al estirarse y disminuyen al contraerse la muestra
> las bandas claras cambian de tamaño en contracción y relajación
‣ Si miramos más cerca, a nivel microscópico podemos diferenciar lo que ocurre > estamos viendo la
zona H dentro de una gran Banda A y se visualizan (perpendicular a la línea M) dos tipos de
filamentos, uno grueso uno delgado > miofilamentos gruesos y a cada lado dos miofilamentos delgados
- El grueso cruza la línea M, mientras que la Zona H, la parte clara, es una zona con miofilamento
grueso pero sin miofilamento delgado
- En la banda A cohabitan los dos filamentos, en banda I solo los delgados
- Hay pequeños puentes entre los dos miofilamentos > periódicamente hay estructuras
perpendiculares a ellos que los unen
‣ Los miofilamentos delgados son de actina
๏
Proteína monomérica de un polímero, particularmente en su forma F, de cuando forman filamentos,
a diferencia de la G que es cuando es globular (como el rojo en foto)

‣ Los miofilamentos gruesos son de miosina ppalmente

๏
Hay de distintos tipos > la Miosina II participa en la contracción muscular
Diversidad
‣ No todos los tipos celulares presentan esta estructura estereotipada, solamente la musculatura
estriada (esquelética y cardiaca) nos permite ver estos componentes de forma alineada pero la
realidad es que hay mucha diversidad de estructuraciones para los filamentos
๏
En las células contráctiles de maquinaria menos ordenada, los ricos Z no existen como tal, y se ven
pequeños cuerpos densos unidos a los filamentos delgados, donde podemos encontrar filamentos
gruesos entre ellos
๏
Por ejemplo en tejido muscular liso (dijo cardiomiocito ¿?) se ve que no hay un patrón de estriación
como en la esquelética pero sí se observan cuerpos densos como manchas oscuras y entre cada
cuerpo denso vemos un filamento grueso > las interacciones que veremos ocurren también acá
entre los filamentos gruesos y delgados
Miofilamentos gruesos: Miosina

Biología estructural de la miosina
‣ Su ppal componente es la miosina, hay un segundo componente que no veremos
‣ Son proteínas ATPasas muy largas, con cierta nomenclatura
๏
La Miosina II comparte con otras miosinas que tiene dominios llamados cabezas, estructuras
globulares donde ocurre la hidrólisis de ATP, unida a esta región está la cola que son dos alfa
hélices enroscadas una sobre otra
๏
Las miosinas interactúan entre sí > en MII de forma espontánea estas se polimerizan, uniéndose
por la sección de la cola y generando una fibra compuesta por parte de la cola a la cual se le suma
esta región globular
- El filamento como tal es la interacción entre las colas y desde ahí sobresalen las cabezas
globulares como protuberancias
‣ La proteína no es una sola secuencia polipeptídica, sino que son 6 secuencias

๏
Cadena pesada > 2 secuencias, ocupa la mayor parte de la masa (cabeza y cola)
- A cada una de estas se le unen dos cadenas livianas distintas (a la altura del cuello)
• Cadena liviana esencial > 2 secuencias
• Cadena liviana regulatoria > 2 secuencias
‣ También existe una segunda división de acuerdo a la respuesta a tripsina del miofilamento grueso
๏
Tripsina, molécula de actividad proteolítica, corta las partes expuestas, así que identificamos la
sección de la cola que está inmersa en el filamento grueso de la parte que se asoma
- O sea se asoma la cabeza pero también algo de la cola
๏
Las dos secciones cortadas se denominaron
- Meromiosina liviana (cola) y meromiosina pesada (cabeza + un poco de la cola)
• A su vez, dentro de la MM pesada > El cuello es subunidad 2 o S2 y la cabeza sola es la
subunidad 1 o S1 > Cabeza y S1 es lo mismo entonces

‣ Estructura de la cabeza
๏
Como es una ATPasa, hay un dominio con un huesillo que unión a nt donde ocurre la hidrólisis del
ATP > Zona ATPasa
๏
Palanca > parte importante para la contracción, como el inicio del cuello
๏
Parte de interacción con la actina, en la punta de la cabeza > Zona unión actina
๏
Conversor > estructura que transmite los cambios conformacionales del dominio ATPasa hacia el
dominio del brazo o palanca
Miosina como ATPasa
‣ Hay múltiples ATPasas en las células, que ejercen una gran variedad funcional > ejemplos:
๏
Proteína ATPasa P97 que acopla la hidrólisis del ATP para separar proteínas (inmersas en
membranas o unidas a otras proteínas) para que sigan el camino de la proteólisis > regulación
metabólica de las proteínas
๏
ATPasa SERCA que son bombas que acoplan hidrólisis de ATP con transporte activo
‣ Así, distintas actividades celulares se acoplan a la misma hidrólisis de ATP y así como estas pueden
catalizar reacciones de separación de proteínas o transporte, acá se cataliza un movimiento, la
generación una fuerza acoplado a la energía liberada por la hidrólisis de ATP
Miofilamentos gruesos como motores moleculares
‣ Ahora veremos el ciclo de hidrólisis ATP y cómo se relaciona con el movimiento macroscópico, que es
la fuerza que ejerce el miofilamento grueso sobre el delgado
๏
En términos sencillos, la hidrólisis de ATP paga energéticamente por el proceso que consume
energía que es la generación de fuerza, pero estudiaremos el mec molecular
‣ Existe un modelo que intenta explicar este proceso, y consta de dos partes: la del Trinquete Browniano
o Flashing Ratchet y la de cambio conformacional que se genera a nivel molecular
๏
Flashing Ratchet es la alternación de trinquete browniando con espacios de libertad de movimiento
molecular
๏
En estos dos casos se necesita energía, donde participa la ATPasa
Trinquete browniano
‣ Es un modelo “mental” elaborado por un físico en discusión acerca de termodinámica y movimientos
moleculares
‣ Un eje de una estructura molecular pequeña que está sujeta a las fluctuaciones moleculares, o sea se
ve afectada por los golpes de las moléculas que la rodean > movimiento browniano
๏
En un extremo el eje tiene aspas, y como está inserto en un medio, les chocarán las otras
moléculas de tal manera que las aspas se mueven
๏
Si amarramos al medio el eje, un peso, tenemos que el peso se levanta con el giro de las aspas,
para luego caer > empujado por la rotación de las aspas, el torque levanta el peso
- Como el movimiento es aleatorio, no tiene direccionalidad definida así que el peso va a subir y
bajar rápidamente
๏
Así, se pensó que la solución para poder subir el peso era acoplar a este sistema un trinquete al
otro extremo del eje > un engrane con aspas, de características periódicas (repetición de las aspas)
y anisotrópicas (direccional), acoplado a una palanca que puede subir o bajar y que aplica
direccionalidad > sistema restringido que solo puede girar y generar movimiento en una dirección
(trinquete = engrane + palanca)
- Ahora cuando haya un golpe aleatorio de molécs sobre el aspa se tendrá un movimiento, pero
sesgado hacia un lado determinado, lo que permitirá la subida del peso > tenemos un fenómeno
de generación de trabajo a partir del movimiento natural de las moléculas, o sea la “nada” (muy
contraintuitivo)
- A esto se le llamó sistema periódico anisotrópico
‣ El físico identificó que en realidad este no es el caso, este modelo no es posible > porque si este es
un sistema molecular, el trinquete también se verá afectado por los choques de moléculas del
ambiente
๏
La transferencia de energía en particular sobre la
palanca genera que cada cierto tiempo la palanca se
levante, perdiendo la direccionalidad o dando la
libertad para ir en el otro sentido > la energía que se
requiere para mover el sistema es equiparable a la
energía necesaria para levantar la palanca
‣ Se identificó también que si uno establece un
gradiente de temperatura a lo largo del sistema, sí es
posible generar el trabajo > separando en dos cámaras
las aspas del trinquete, suponiendo que en perfecto
aislamiento hay una temperatura mayor en las aspas
que en el trinquete hay movimiento y se puede levantar
el peso
๏
Ahora hay más energía transferida al aspa que a la palanca, por los choques y T°, y muchas menos
ocasiones donde la palanca suba y el trinquete gire al otro lado > estamos acoplando un proceso
que gasta energía con un gradiente (grad de T es de energía)
- Esto llamó la atención a investigadores biológicos porque
permite hacer una analogía a lo que ocurre en un sistema
biológico donde se acopla un trabajo, la fuerza o movimiento
de miofilamentos con un gradiente de energía potencial, en
este caso dado por la hidrólisis de ATP
‣ Esto se ejemplifica en un gráfico de energía potencial del sistema
en función de la posición de una parte de él > dependiendo de la
posición tenemos distintas energías, igual que en sistemas
moleculares
๏
Todo sistema puede estar en distintos estados diferentes, y c/
e° tiene asociada una cierta energía potencial > Las estructuras
proteicas por ej generalmente se encuentran en las
conformaciones de menor energía
๏
En el gráfico hay puntos de energía mínima, donde la palanca
está en el fondo de los dientes (lo menos levantada posible) y
puntos de energía máxima > por eso las puntas del gráfico
‣ Fue difícil relacionar mecánicamente este fenómeno al ciclo de la miosina (y de hidrólisis del ATP)
porque las distancias tan pequeñas en estos sistemas microscópicos no nos permiten identificar
gradientes importantes de T
๏
Un primer análisis proponía que el gradiente era el aumento energético local producto de la
hidrólisis pero luego se propuso que dice que nuestro sistema está sesgado, en un e° de mínima
energía, pero luego ocurre algo que elimina las aspas, así que se puede mover a cualquier lado, es
libre de difundir (el movimiento aleatorio, como si levantáramos la palanca), para luego retornar al
sistema inicial, pero ahora como se movió, puede caer en la zona que hace que se mueva en los
sectores de mínima energía o puede haber pasado a otro de los dientes del gráfico
- Este proceso genera entonces un movimiento neto > así se pensó que el sistema se comporta
efectiva% como un trinquete, pero intercalado por los momentos de libre difusión que le permite
saltar esto > el movimiento está dado precisamente porque es asimétrico y anisotrópico, ya que
hay mucha más probabilidad de caer en el diente “sgte” que en el “anterior” (por la forma de las
aspas)
- Al levantar la palanca dejamos que el engranaje se mueva para ambos lados, y encontraremos
que a veces, cuando la palanca baje nuevamente, caemos en el mismo diento o en el sgte
‣ ¿Cómo se relaciona esta concepción teórica con la estructura física/molecular de actosina?

๏
Hay una configuración de la miosina, para cierta interacción con el ATP/ADP en que la miosina está
libre, interactuando muy débilmente con la actina
- Debido a que tenía una estructura de cuello que permitía cierta flexibilidad vamos a tener que
antes de unirse a la actina hay una serie de pasos por el movimiento aleatorio de las
fluctuaciones moleculares/energía cinética > va a ir posicionándose en distintas partes
interactuando con la actina, en c/ conformación asociada a una energía potencial del sistema
• Y dependiendo de qué tan flectada esté la molécula, o cómo sea la interfaz de interacción
entre actina y miosina (en una zona particular, el ándelo donde estas estructural% calzan) va
a generar que para distintas conformaciones tengamos distintos niveles de energía
๏
Sabemos que se mueven así porque se ha registrado > técnicas con pinzas láser que nos permite
registrar movimiento a nivel molecular y se observa el movimiento de miosina sobre filamentos de
actina
- Se ve que hay pequeños pasos que se dan, con una distancia de 5,5 nm, dentro de grandes
pasos de alrededor de 36 nm
- Además, la estructura de los filamentos es tal que cada ancho de un monómero de actina es de
5,5 nm y que una vuelta de la hélice completa es de 36 nm (c/ 36 nm tenemos una actina en la
misma posición que la anterior)
• La miosina se mueve cada 36 nm, explorando secuencialmente cada monómero de actina, y la
energía potencial en cada uno de esos estados es distinta
‣ Se ve que para ciertas posiciones la energía potencial es más baja, estando más “cómoda” la proteína,
con patos de mínima energía que son de justo la curvatura precisa de la proteína en la interfaz de
actina y miosina > todas las posiciones intermedias son un poco incómodas o de mayor energía > este
ciclo de monómeros ese repite a medida que da vueltas el filamento de actina
๏
Así, el gráfico se parece mucho al gráfico del Flashing Ratchet que se repite c/36 nm
๏
Entonces la teoría es la sgte, la miosina se encuentra unida a la actina, y por algún proceso es
capaz de desacoplarse, que genera la exploración del ambiente producto de que hay movimiento
aleatorio y cuando vuelve a interactuar con la actina, llega a un punto donde hay gradiente de esta
energía y se va movimiento hasta volver a encontrar el punto de menor energía > no es tan
direccionado, es un movimiento aleatorio pero se va a encontrar más frecuentemente al sistema en
este estado de mín energía
- Esto es molecularmente lo que va detrás del Flashing Ratchet, el TB interrumpido por periodos
de libre difusión
Brazada de poder: Cambio conformacional
‣ La segunda parte del modelo es que una vez unidos al filamento de actina, debe haber algún
elemento que genere el golpe de fuerza
๏
Se puede ver en un estudio que se hizo con microscopía de mucho poder (resolución nanométrica)
el ángulo que generaba la miosina (la palanca) en relación al filamento de actina
- En ausencia de nucleótidos (NF o nucleotide free), o sea sin ATP, se observa que el
desplazamiento medio es cero, no hay prácticamente
- Cuando se le agrega ATP, se da con mayor frecuencia pasos de una longitud, y también unos
pocos con una mayor longitud
• En presencia de ATP la miosina se desplaza sobre la actina en dos distancias diferentes
- Para cada imagen se midió qué ángulo formaba el brazo con el filamento delgado y se ve que
sin ATP hay ppalmente dos ángulos también, most a los 45° aprox y some a los 75°; pero con
ATP esto aumenta considerablemente > most a los 85°-90° y some a los 60°
• En otro gráfico son como la mayoría a 50-60° y otros de 100-120°
- Aqui el desplazamiento se mide por el centro de masa de la miosina, y es dependiendo de la
tasa de liberación de Pi o ADP que nos encontramos en un e° u otro

Entonces el modelo que se hizo fue que dada cierta configuración, en particular antes de liberar el
๏
Pi del ATP, y se da un primer gran paso (de aprox 6 nm) por el movimeinto de la palanca en
relación al filamento de actina (y al de miosina también) y se da un segundo paso, más corto (de
como 1,6 nm), cuando se libera el ADP
- Notar que aquí que la cabeza nunca se separa de la actina, está en todo momento unida al
mismo lugar, lo único que cambia es la conformación misma de la cabeza generando el
movimiento del brazo
- Como se requiere más tiempo para liberar el ADP, la probabilidad de encontrar cabezas que
hicieran ambas brazadas disminuye > por eso la diferencia en el nro de eventos de cada
distancia/ángulo
‣ Entonces, volviendo al modelo inicial y uniéndolo al ciclo de la hidrólisis de ATP
El primer paso, o la primera brazada (stroke) está generada por la liberación del fosfato inorgánico
๏
(o la liberación de fosfato es generada por la primera brazada, aún no se tiene claro cuál provoca a
cual, pero estos eventos son relativamente simultáneos)
- Seguida de una segunda brazada cuando se libera ADP, de menor magnitud
Ciclo eventos
๏
- Miosina liberada, no acoplada a la

actina, pero unida a ATP > Se genera
hidrólisis del ATP, en momento de
libre difusión, y esta reacción genera
que aumente la afinidad entre la
cabeza de miosina con el filamento
de actina > generando la unión entre
ambos, pero débil inicialmente
(acoplamiento)
- A este proceso le sigue la liberación
de Pi y la primera brazada > liberación
de ADP y segunda brazada > en esta
conformación, sin unión de nt es la
interacción/unión más fuerte entre
ambos (rigor mortis)
• Rigor mortis > cuando se aprietan
los músculos por ausencia de ATP
en los muertos
• Esta liberación permite la posterior
unión a ATP, lo que genera el
desacoplamiento entre la miosina y
el filamento de actina
- Durante este proceso es importante el cambio conformacional generado la liberación de Pi
en las braceadas, y los lugares de unión con su energía potencial
- Es la unión la que representa el punto de energía potencial más bajo > Entre el frame 2 y
3 no aparece union de de actina y miosina pero igual hay solo que muy débiles, no está
completamente desacoplado
Actividad enzimática ATPasa
‣ Propiedades de la actividad ATPasa de la miosina y cómo se relaciona a propiedades macroscópicas de
los músculos contráctiles
En una investigación de 1967 se encontró que la tasa de actividad ATPasa (qué tan rápido puede la
๏
miosina hacer un ciclo) tiene directa relación con la velocidad de acortamiento muscular (qué tan
rápida es su contracción muscular)

- Se ve la relación con distintos músculos en múltiples animales > relación directa entre la
actividad de una miosina ATPasa y la velocidad de acortamiento
• Esto supone que: (1) hay distintos tipos de miosina, c/u con distinta actividad catalítica o
velocidad, y (2) que cada músculo y especie expresa alguna variación de esta miosina
‣ Se midió en qué parte de este proceso está el paso limitante, el que determina la velocidad
๏
Se calcularon las cttes cinéticas de c/u de los pasos del ciclo de hidrólisis (dos de los pasos están
divididos, por eso son 8 y no 6 > dos estados AMD y dos AMT)
- Grafico como ciclo de estados > A = Actina, M = miosina, D = ADP, T = ATP, Pi = Pi)
- Por ejemplo en MT y MDPi no está asociado a actina, y entre ellos tenemos la hidrólisis del ATP
(proceso K_H)
• Le sigue la unión a actina > AMDPi > liberación del Pi > AMD > liberación del ADP > AM > la
unión a ATP > AMT
- También se muestra un paso intermedio que puede ocurrir donde la miosina no se disocia
de la actina > AMT a AMDPi > fosforila de inmediato el ADP unido (bypass)
- Velocidad de un paso a otro medida en cttes de reacción Kcat (mayor nro, mayor velocidad) para
distintos tipos de miosina
• Alfa y Beta isoformas de miosina cardiaca y el resto esquelético
- Beta también se expresa en FM de tipo I
- Las II son esquelético, en humanos IIb no se expresa
• Se identificaron 3 pasos más lentos (en gris) > en la mayoría de las isoformas el paso más
lento está en K_Pi, o sea el paso limitante sería la liberación de fosfato inorgánico
- Si dividimos la K_Pi/Kcat vemos que para most isoformas es un nro cercano a 2 > implica
que casi la mitad de todo lo que se demora el ciclo se debe al paso de K_Pi
- Tres pasos mas lentos: liberación Pi, liberación ADP (K_D*), hidrólisis ATP (K_H)
• Así podemos ver que las isoformas IIb son mucho más rápidas que las beta (I)

Miofilamentos delgados: Actina

Actina
‣ Su principal componente es la actina (también hay otros)
๏
Participa importantemente en los filamentos del citoesqueleto
๏
Es un monómero, una única cadena proteica que se divide en subdominios (SD) del 1 al 4
- El SD1 y el SD2 de actina globular tienen un origen evolutivo común, una secuencia conservada
que probablemente pasó por duplicación de genes y posterior neofuncionalización (pérdida de su
función y ganancia de otra) > modificación sobre las variables duplicadas
• O sea, su copia de SD1 y SD2 son muy parecidos estructuralmente, y a cada una se le asocia
otra subunidades que es distinta en su ex (también dijo S1 y S3 ¿?)
- Entre SD2 y SD3 hay un bolsillo de interacción con nt donde se une el ATP
• Durante el proceso de polimerización de estas fibras, tienen polaridad (un lado + y uno -)
debido a que sus unidades no son simétricas (las proteínas no son perfectas esferas)
- El lado + de la fibra tiene los subdominios 3 y los subdominios 2 son el lado -
- En el citoesqueleto tiene relevancia la polaridad de acuerdo a la tasa de recambio de
polarización de c/lado, pero en nuestro caso la polaridad tiene otro efecto, y es que la
polaridad establece una direccionalidad de giro, determinando la dirección de los dientes
de energía potencial
• A lo largo de esta clase hemos demostrado la intrínseca relación entre la estructura del
componente y su funcionalidad > por ahí va la pregunta de la prueba
- También tiene un sitio hidrofóbico que le permite la interacción con otros monómeros cuando
está unida a ATP > Se abre y queda expuesto cuando está con ATP
- Otro sitio de unión a miosina por las partes que miran hacia fuera de este filamento
‣ Un miofilamento delgado son 2 cadenas de polímeros de actina que forman una doble hélice
Tropomiosina y complejo troponina

‣ Los miofilamentos delgados no se componen sólo de actina, sino que también cuentan con el complejo
de troponinas y la tropomiosina
๏
Estos elementos están asociados rodeando toda la extensión de los miofilamentos delgados
- Tropomiosina es una proteína alargada con estructura de doble hélices (son dos doble hélice ¿?)
enroscadas
• No son tan largas pero se asocia su lado C-terminal con el N-terminal de otra y así generan
largas cadenas que bordean toda la extension del miofilamento delgado
• Se enrollan dos hélices alfa (en miosina y en tropomiosina) formando una doble hélice
- El complejo de troponina son 3 troponinas diferentes que se asocian en un complejo
• La C es más globular > C por sensor de calcio
- Se puede dividir en dos componentes
• La T es más extendida y es la de asociación a tropomiosina > T por tropomiosina
- Se puede dividir en 2 componentes, uno asociado al complejo y otro a la tropomiosina
- Se llama asociación a tropomiosina porque es esta la proteína que unirá el complejo al
miofilamento delgado, es el ancla
• La I también tiene extensión > I por inhibición
- Interactúa con TnC
Regulación por calcio

‣ La TnC es como un dominio EF (mano EF) que son muy reproducidos en la naturaleza, es un dominio
característico de interacción con calcio, permitiendo su unión
๏
Tiene el subdominio C-terminal y el N-terminal
- En N-terminal tiene dos sitios de unión a calcio de alta afinidad > aún con baja [Ca++]
citoplasmático, vamos a tener estos dos bolsillos unidos a calcio (inferior)
- En C-terminal, para la TnC de músculo esquelético (tipo II), hay otros dos sitios de unión a
calcio de baja afinidad > este es el sensor de calcio (superior)
• La afinidad es importante porque es el filtro de la concentración de calcio a la que hay que
llegar para activar toda la maquinaria
- La de alta afinidad (N, abajo) siempre esta unida a calcio, son parte estructural de la prot,
las de baja afinidad solo unen con mucha concentración de calcio (C, arriba-derecha) así
que funciona como switch > cuando [Ca++] es del orden de los nM está en una
conformación (izq) y si pasa a los mM cambia de conformación y une calcio
• Cuando se une a calcio expone dos alfa hélice (B y C) que se desplazan abriendo un pequeño
espacio hidrofóbico, que se une con la TnI > interacción fundamental
‣ La TnI está ubicada a lo largo del miofilamento delgado, cubriendo los sitios de unión entre la actina y
la miosina > bloqueo esteárico de los sitios de unión, evitando interacción fuerte entre miosina y actina
๏
Al activarse TnC, al unir calcio, va a interactuar con TnI, desplazándola y dejando libres los espacios
para que la miosina pueda interactuar con la actina y se genere el ciclo ATPasa
‣ Entonces en el esquema vemos que la TnT tiene dos elementos, y cómo TnI interactúa con el
filamento de actina cuando no hay calcio en TnC, pero al unir Ca++, se desplaza la TnI liberando los
espacios en el filamento de actina

๏
Además, esto fortalece la interacción entre la TnT y la Tm, permitiendo el desplazamiento de esta
ultima, lo que que también favorece el contacto entre actina y miosina
๏
Sin calcio, los sitios de unión actina y miosina están bloqueados por la TnI, evitando estéricamente
su contacto, pero cuando la TnC une calcio, interactúa con la TnI de tal manera que genera un
cambio conformacional en TnI que la desplaza, liberando los espacios para que se una actina y
miosina. Paralelamente hay un desplazamiento de la tropomiosina
๏
Para que ocurran interacciones entre proteínas muchas veces tenemos parches hidrofóbicos > aquí
el cambio conformacional de TnC libera uno de estos parches
- Movimiento de las alfa hélice de tal manera que la B y la C se alejan de la A, D y N abriendo un
parche hidrofóbico que interactúa con la TnI
Acoplamiento excitación-contracción II
‣ Entonces logramos unir el aumento de [Ca++] con la generación de tensión (contracción)
๏
La liberación de calcio permite su unión a TnC, que despeja sitios para interacción actina y miosina
de tal manera que esta ultima puede hacer su ciclo ATPasa si hay ATP
- En músculo esquelético el peak de tensión se alcanza a los 100 ms desde la descarga de
potencial de acción, y es más rápido que en cardiaco
• La velocidad depende también del tipo de FM
‣ Todo lo que hemos visto es para la contracción, en general el estiramiento o la relajación del músculo
está dado por la contracción del músculo opuesto > cuando el calcio disminuye y nos quedamos sin
espacios de contacto (o cuando nos quedamos sin ATP > rigor mortis)
๏
Igual hay mecanismos “activos” de estiramiento pero son menos importantes
Clase 18.2: Tipos de Fibras Musculares

Esta es una mirada más macroscópica de lo que ya vimos
‣ Fibras musculares > tipo celular de la musculatura esquelética
Unidad Motora
‣ Unidad motora > unidad mínima de control de músculo esquelético
๏
No es una estructura sola, sino que un conjunto de ellas, y en términos generales es una
motoneurona con todas las fibras musculares inervadas por ella

- El axón de una motoneurona se ramifica teniendo distintos sitios de sinapsis neuromuscular con
distintas FM (placa neuromuscular)
- EPP que vimos es End-Plate Potencial > potencial de placa neuromuscular excitatorio
๏
Cada fibra muscular es invervada por una sola motoneurona
- Las FM de una unidad no necesariamente son todas aledañas espacialmente, sino que están
dispersas por los músculos, aunque se asocien la misma motoneurona
• La unidad motora no es entonces como una unidad espacial del muscle
๏
Más allá del control central de la musculatura, estamos viendo todo lo que ocurre río abajo de la
estimulación x parte de la motoneurona
‣ Se identificó que cada unidad motora y cada FM de una misma unidad corresponde a un tipo de fibra
muscular común > las FM de una unidad motora son de la misma categoría
- Se puede tener distintos tipos de fibra muscular en un mismo músculo, pero dentro de una
unidad son todas del mismo tipo
Fibras rápidas y lentas
‣ Por observación histológica se identificaron Fibras Blancas y Fibras Rojas
๏
Coloraciones distintas para las fibras > difieren en color pero también en
- Volumen > rojas más delgadas, blancas más gruesas
- Nivel de vascularización > rojas más irrigadas por capilares que las blancas
- Temporalidad de respuesta > rojas más lentas que las blancas frente a estímulos
Tipos de estimulación
‣ Twitch > estimulación eléctrica puntual que genera una respuesta
๏
Estimulación por corriente de la motoneurona > pot acción > liberación acetilcolina > respuesta del
aumento en tensión en el tiempo (del músculo)
- Fibras blancas responden más rápido a los twitch que las rojas, aunque la amplitud de la
respuesta es relativamente similar
• Fibras rojas o lentas son tipo 1 y Fibras blancas o rápidas son tipo 2
‣ Estimulación tetánica > varios estímulos eléctricos seguidos, generan otro tipo de respuesta
๏
Aquí las FB o fibras tipo 2 (rápidas) se pueden dividir en dos tipos
- Aquí la estimulación es sostenida, por ende se observó que algunas células mantienen la tensión
ctte, mientas otras pasan por fatiga > Fibras musculares rápidas o tipo 2

• Las de tipo 1 no se fatigan, las de 2 sí pero con distinta resistencia a la fatigación

- Resistentes a fatiga o tipo 2A > se fatiga mucho después, eventualmente se fatiga
- Fatigables o tipo 2B > se fatiga rápida% (como si fuera una sola estimulación/twitch)
Cuatro fibras musculares en mamíferos
‣ Luego se identificó que las distintas FB expresaban distintas isoformas de la cadena pesada de la
miosina
๏
Isoformas: un mismo tipo de proteína que ejerce la misma función es codificada por genes
distintos, con variaciones tanto a nivel funcional como sus secuencias promotoras que pueden
provocar una expresión diferencial según tipos celulares
๏
Hay tres tipos de fibra rápida o blanca
- Se descubrió posterior% la tipo 2X que expresa miosina distinta de las 2A y 2B, con una
respuesta a un nivel intermedio de fatigación > se fatiga pero más lento que la 2B
‣ Los distintos tipos de miosina tienen distinta tasa de actividad ATPasa
๏
Como vimos en el gráfico de distinta tasa de actividad de acuerdo a la velocidad de acortamiento,
tenemos que las muestras diferían por la isoforma
- Se tiene que las musculaturas más lentas expresan la isoforma más lenta (tipo I), seguida de la
tipo IIA y las musculaturas de mayor velocidad de contracción expresan los tipos más rápidos
‣ En un mismo músculo podemos tener distintos tipos de fibras lentas tipo 1 y rápidas tipo 2
๏
Va a depender de la funcionalidad del músculo, del e° de desarrollo, etc qué proporción tenemos de
cada tipo
๏
En vertebrados tenemos estas 4 categorías > 1 lenta y 3 rápidas
- Como son tipos celulares, hay muchas diferencias en términos de expresión y podemos encontrar
versiones intermedias de c/ tipo > pero estrictamente en cuanto a isoformas en músculo
esquelético de vertebrado encontramos solo estas 4
• Y en humanos solo 3, no expresamos la IIB aunque tenemos el gen (de hecho, por mucho
tiempo se describió la IIX como IIB en humanos)
Distribución de los tipos de fibras

‣ Qué tipos de fibras se expresan en cada musculatura depende de muchas cosas
๏
En este paper se dividen muy gruesamente distintas funciones motoras > 3 procesos de actividad
motora, que son posibilitados por distintos tipos y proporción de FMs (pic)
- Esto no solo depende del lugar del cuerpo, sino que también de especie
• La musculatura posterior en humanos (estabilización y postura) es muy enriquecida en FM
tipo 1 > porque son de reacciones no tan rápidas y son no fatigables, permitiendo tener el
músculo activado por gran cantidad de tiempo
• En bípedos las extremidades inferiores son más ricas en FM tipo 1 que las superiores, que
tienen más FM tipo 2
• En ratones la musculatura del diafragma es muy rica en FM tipo 2, de reacciones muy
rápidas, pero en mamíferos de mayor tamaño presenta más del tipo 1, por la mayor
dimensionalidad del órgano
Diferencias en el Acoplamiento Excitación - Contracción

‣ Pero estas diferencias entre FMs no sólo se deben a la expresión de miosina, sino que también en
distintos niveles del funcionamiento de la musculatura > Hay diferencias en el sistema de
acoplamiento excitación - contracción
๏
En el gráfico tenemos la respuesta en tensión a la diferencia de la concentración de calcio en
función del tiempo, para dos fibras (dos curvas)
- La cinética de respuesta es distinta > Las fibras lentas actúan después en tensión pero se
mantienen más en el tiempo que las rápidas, y el máximo de amplitud de ambas es como el
mismo
- Los transcientes de calcio también son distintos, varía dependiendo de la FM > la fibra lenta
tiene menor aumento de calcio (salida del RS) pero las FM rápidas tienen un Peak de [Ca++]
mucho mayor, en varios ordenes de magnitud
• Y el decaimiento de la [Ca++], que tiene que ver con la tasa de recaptura del calcio por parte
del RS es mucho más rápida en las FM rápidas (cae más abruptamente en el tiempo) que en
las de tipo lento
• Estas diferencias se relacionan/dependen de muchos factores:
- Pueden ser modificaciones post-traduccionales de los canales RyR, modificaciones post-
traduccionales de las bombas de calcio, isoformas también, etc > componentes que pueden
modificar la cantidad de calcio que aumenta un la célula, afectando el funcionamiento de
la maquinaria actosina
‣ Así, el componente de calcio puede modificar las propiedades macroscópicas de las FM, y, en cuanto a
la mantención metabólica del Ca en la cél, también afecta el nivel basal de calcio
๏
El calcio en e° basal es prácticamente inexistente en el citoplasma, en concentraciones del orden
de los nM, pero entre fibras tienen diferencias
- [Ca++] basal/en reposo es mayor en las fibras lentas de tipo 1 (50-60 nM) que las rápidas de
tipo 2 (30nM)
‣ Además, las fibras de tipo 2 son de 3 a 5 veces más densas en DHPR que las fibras tipo 1, lo que
puede afectar al mayor peak de calcio que experimentan las primeras
๏
Pero igual recordemos que, particularmente en el músculo esquelético, la entrada de calcio no se
debe tanto a los DHPR sino a los RyR
‣ Otra diferencia importante en el AEC entre estas FM, es la isoforma de las distintas proteínas,
particularmente las de la Troponina C
๏
TnC con sitios de alta afinidad en N-terminal (siempre unidos) y en C-terminal sitios de baja
afinidad que actúan de switch > esta isoforma está presente en las FM de tipo 2
๏
Las de tipo 1 expresan la misma isoforma que los cardiomiocitos > estructura similar, también tiene
dos subdominios EF (cada uno con dos hebras), pero en el C-terminal tiene solo un sitio de
unión calcio > basta con la unión de un solo calcio para generar el cambio conformacional y liberar
los sitios de unión de la miosina en la actina
- Recordando las tasas de actividad ATPasa en las isoformas
• La isoforma beta-cardiaca, que también está en las FM lentas tipo 1 > tiene una ctte de
reacción Kcat de 6
- Aquí se calculó que el paso limitante no es tanto la liberación de Pi sino que la hidrólisis
de ATP > hay algo en la cadena pesada de la miosina de la isoformas lenta que hace que la
hidrólisis sea el paso más lento que limita la velocidad del ciclo
• Las de tipo IIa y IIb > tasa mucho más rápida del ciclo, tienen mucho mayor Kcat
• Y como vimos, la velocidad con la que se cursa este ciclo tiene que ver también con la
velocidad de contracción
๏
Así como hay diferentes isoformas de TnC, también hay una isoforma lenta y una rápida de la
Troponina I
๏
Mientras, la tropomiosina y la TnT tienen múltiples isoformas cada una, y hay distintas
composiciones de cada fibra pero ahí es más difícil de asociar la isoforma a la actividad

‣ Así, tenemos que las FMs son distintas en cuanto los procesos de AEC, pero durante la contracción
ambos tipos de fibras son reclutadas, pero no por el reclutamiento de fibras únicas sino que el
reclutamiento de unidades motoras
๏
Uno no puede activar a nivel fisiológico una fibra única, uno activa las FMs a través de la
motoneurona, lo que va a implicar la activación de unidad completa
- Tenemos entonces motoneuronas que activan fibras rápidas y motoneuronas que activan fibras
lentas > este reclutamiento diferencial de motoneuronas está dado, durante el proceso de
contracción, por los tamaños neuronales papalmente
๏
La velocidad y cdad de corriente necesaria para la activación de las neuronas y la gatillación de
potencial de acción, depende de sus dimensiones
- El tamaño del soma implica el tamaño de la membrana plasmática de la neurona, y con eso su
resistencia
• Las más pequeñas tienen una mayor R de membrana, o sea se requiere poca corriente para
generar grandes cambios de Vm
• Las más grandes tienen menor Rm así que necesitan grandes corrientes para llegar a niveles
similares de cambio de Vm
- Así, si tengo una rampa de corriente, va aumentando progresivamente la corriente de
estimulación para ambas células (neuronas de dos tamaños), la chica dispara primero, por sus
dimensiones
- Pero también vimos que la velocidad de transmisión depende del área del axón
• Axones más grandes transmiten/propagan el potencial de acción mucho más rápido, por la
reducción más rápida de la R interna versus la reducción de Rm
• Axones más delgados propagan el potencial más lento
‣ Entendiendo esto, podemos ver que si bien una musculatura puede tener un patrón de tensión
particular, primero implica la activación de una unidad motora y luego, diferenciada en el tiempo, se
puede activar otra
๏
Si se activan primero las FM rápidas o las lentas va a depender de la dimensionalidad de la
neurona, de la musculatura, pero un mecanismo simple para entender estas diferencias de
temporalidad en el reclutamiento de unidades motoras, tiene que ver con la dimensionalidad que
tiene este campo > en general, primero se activarían las neuronas pequeñas y luego las más
grandes ¿?
- No es que todas las motoneuronas que inervan las fibras tipo 1 sean más pequeñas , pero no es
casualidad que una sea más grande y otra más pequeña
- Entonces el tamaño se relaciona al orden de reclutamiento y a la velocidad de propagación
‣ Esto tiene sentido porque cuando uno necesita hacer poca fuerza, basta con reclutar menos unidades
motoras, para lo cual necesitará menos corriente, que activa solo a las neuronas más pequeñitas, que
propagarán un potencial de acción y genera la contracción de todas las FMs de su unidad motora > si
son FM lentas o rápidas va a depender
- Las FM que se activan primero o después no depende tanto del tipo de fibra (rápida o lenta),
sino que más de la motoneurona
‣ Entonces > distintas unidades motoras pueden tener distintos tipos de fibras musculares, una misma
unidad con solo un mismo tipo de FM común
๏
Dado que el orden de reclutamiento no es simultáneo en el tiempo > uno recluta una motoneurona
y luego la sgte, mientras está activada la primera y así se van sumando
- Por eso las FM que se contraerán primero dependerán temporalmente más de la motoneurona a
la que se asocian que al tipo de fibra como tal
Prueba: Estudiar harto relación estructura-función (biología estructural) e isoformas > cómo los cambios
que se pueden visualizar producto de la historia evolutiva de estas moléculas afecta la fisiología celular
del proceso de AEC
Clase 20: Transducción Sensorial: Olfato

Monday, 15 May 2023
Estamos utilizando el SNC como electromodelo de procesos fisiológicos complejos

‣ Circuitos sensoriales > sistema olfatorio u olfativo
Comprender a través de la fisiología la interacción de los organismos con el medio
๏
Estímulos > cascada señalización > sistema sensorial particular

๏
Percepción sensorial se puede ir segmentando

๏
- Un primer elemento es el estímulo, que se pueden sentir por los elementos sensores, los cuales
ejercen un proceso de transducción del estímulo para que la información pueda ser más
adelante percibida en el último elemento que sería el SNC
Sistema olfatorio en humanos
‣ Características y funciones de la olfación en humanos
๏
Dangerous situation detection (i.e. gas, ripe food)
๏
Prompt approach and avoidance behavior
๏
Environmental odors can prime specific memories and emotions
๏
Shape perceptions of stress
๏
Humans can follow outdoor scent trails
- Even exhibit dog-like casting behavior when trails change direction
๏
Major, sometimes unconscious, role in communication between individuals
- Each person produces a distinct odor
๏
Odor perception is modified by individual experiences, such as after odor-cued aversive conditioning
‣ Codificación sensorial y olfación
Estímulo
‣ Estímulo: lo que el organismo detecta > siempre son estímulos físicos
๏
En humanos
- En el olfato/olfación son moléculas químicas volátiles llamadas odorantes por poder ser sensadas
- En sistema auditivo son onda mecánica sonora por perturbación de las ondas sonoras difundidas
por el aire
• En el oído interno tenemos el sistema vestibular donde, con los movimientos de soluciones y
células otolitos regula el equilibrio del cuerpo
- En sistema táctil y somatosensorial son presión y temperatura
- En visión son ondas electromagnética
- En gusto son moléculas químicas
• Las celulas sensoriales de la lengua últimas pueden sentir sodio, protones, entre otras
- Acidez se mide en pH, que es log[H] por lo tanto son los protones los que se sensan
๏
Otros organismos pueden tener sistemas sensoriales que detectan otro tipo de estímulos, como
campos electromagnéticos que les permiten moverse por el mundo sin ver/oír, detectar presencia
de presas (tiburones)
๏
Hay rangos limitados, físicos, en que los organismos pueden sensar estos estímulos físicos, por ej
nuestro rango visible que es diferente que a otros animales (algunos ven radiación térmica,
infrarroja, etc)
- Los estímulos pueden generar una perturbación en un organismo dentro de un rango, las
especies tienen diferentes sensores que permiten detectar estos estímulos
Sensores
‣ Sensores: Para que se genere una perturbación tiene que haber un sensor del estímulo
๏
Puede ser una célula sensorial o bien una neurona > con receptores de membrana
- Dos tipos dependen del desarrollo evolutivo de las células
- Como un pelo mecanosensible que es un sensor periférico
๏
Los sensores son específicos para traducir estímulos particulares, cada sensor tiene las estructuras
necesarias para traducir el estímulo de cierta naturaleza
๏
Tienen un rango de sensibilidad > son selectivos (dentro de los estímulos para el que es especifico
hay selectividad de los estímulos que lo activan)
๏
Para que sea eficiente debe poder detectar el estímulo la mayor cantidad de veces posible > tiene
que ser reproducible y de buena resolución
- Reproducible es decir que se pueda transducir la respuesta
Transducción sensorial: Olfato
‣ Transducción de estímulo: proceso que lleva a cabo el sensor > la célula sensorial, o neurona, con
receptor
๏
Hay sistemas sensoriales que no tienen
neuronas sensoriales periféricas sino
que células periféricas, como el gusto y
la audición. Mientras que el olfato y
visión tienen neuronas
๏
Estructura sistema olfativo
- En la nariz hay un epitelio olfatorio,
en la base superior de la nariz, y
unos huesos turbinados > entonces
entran las moléculas odorantes a la
nariz gracias mecánica de la
respiración (y la presión que genera)
a través del aire inhalado
• Los odorantes se siente en el
epitelio olfatorio, que tiene 3 tipos de céls, formando unidades sensoriales que se repiten
- Neurona sensorial olfatoria > tiene cilios, soma y el axón
• Botón en la parte apical (como un compartimento separado del soma, apical)
- Rodeando la neurona hay células de soporte o células sustentaculares, con vellocidades
- Células epiteliales formando una glándula de Bowman
• Esta glándula secreta mucosidad, la que recubre todo el epitelio y que hace que este no esté
expuesto al aire como tal
๏
Los receptores olfatorios están en los cilios de la neurona, y el odorante sería su ligando
- Se tratan de receptores metabotrópicos > acoplados a proteína G, de 7 dominios transmembrana
• Recordar que este receptor podría ser de dos grandes clases > metabotrópicos o ionotrópicos
(acoplados a prot G o de apertura/cerrado de canal)
• La unión del ligando induce cambio conformacional del receptor que hace que la subunidad
alfa de la proteína G se escinda de la beta-gamma y difunda para activar una adenilato
ciclasa muy particular en este caso > adenilato ciclasa III o tipo 3
- Esta es una enzima que metaboliza la conversión de ATP a AMPc > un 2do mensajero, es
decir, activa otras cascadas de señalización en la célula
• En este caso el cAMP activa un canal de calcio activado por nucleótidos cíclicos ubicado
en la membrana plasmática que permite que ingrese Ca++ a la célula, de tal manera que
el potencial de membrana se despolarizará pero sin lograr llegar al umbral, sin importar
cuánto calcio entre, requiere otro proceso
- Las neuronas olfativas tienden a estar un poco más hiperpolarizadas basalmente
๏
El calcio tiene también un rol de 2do mensajero entonces este activa otro proceso > activa un canal
de cloruro activado por calcio, de tal manera que el cloruro sale para que ocurra la despolarización >
para que esta sea la tendencia, la [Cl-] del medio externo debe ser menor que del interno, así, su
gradiente de concentración está invertido en comparación a otras céls
- En general en el SNC maduro al abrir un canal de Cl- la neurona se hiperpolariza porque el
cloruro tiende a entrar debido a su gradiente
- Lo que pasa es que en el moco la concentración de cloruro es muy baja
- Con esta salida de Cl- sí se llega al umbral de despolarización para desencadenar el potencial de
acción
• Por ejemplo, “GABA es un neurotransmisor inhibitorio” es incorrecto porque su rol puede ser
inhibitorio o excitatorio dependiendo del contexto/condiciones en el que está la célula y
diferencias de gradiente de cloruro
- De hecho GABA durante el neurodesarrollo tiene rol excitatorio porque los transportadores
de cloruro de la célula genera mas concentración de Cl- en el medio interno
- Porque los neurotransmisores solo cambian conformaciones, dependiendo del las
condiciones en que se esté será su efecto
๏
Entonces ya tenemos que el estimulo físico se transduce en un cambio electroqco dentro de la
neurona > la transducción es como un cambio de lenguaje, transformar el estímulo
๏
Esta diferencia de potencial viaja de forma graduada (potencial de membrana) desde el cilio y el
soma hasta el cono axónico, donde se descarga el PA porque hay muchos canales de sodio
dependientes de voltaje y canales de potasio dependientes de voltaje
- La perturbación de cambio de membrana ocurre en el ciclo el potencial de membrana va

disminuyendo con la distancia, porque la propagación es pasiva y no hay regeneración de la
diferencia de pot, porque hay fuga de cargas y no hay canales que se activen por V
- En el axón no, porque se va regenerando la diferencia de potencial con los canales V
- Eventualmente varios estímulos juntos se van a integrar en el cono axónico para alcanzar o no el
umbral en ese punto (el umbral son los -40 mV) > sumatoria de los efectos de diferentes
perturbaciones
• Si no existiera los canales de cloruro nunca se llegaría al umbral > el umbral es la diferencia
de potencial necesaria, cuánto se debe despolarizar la membrana, para activar los canales de
sodio dependientes de voltaje, por ende es en el punto donde estos se encuentran ubicados
que hay que llegar al umbral
• La diferencia de cargas difunde hasta llegar al cono axónico pero como no hay regeneración
las fugas de carga disminuyen la dif de pot que se alcanza > Recordar la ley del cable
- En un gráfico distancia (x) vs deltaVm (y) veremos que el potencial va a disminuir
exponencialmente en razón del tiempo
• Para que se alcance el umbral en el cono axónico, necesito que no haya tanta caída de
potencial > para que sea efectivo el cambio de potencial en el cilio debe haber una diferencia
tal de potencial ahí que igual se llegue al umbral en el cono > esto puede ocurrir de dos
formas:
- El estímulo puede ser tan potente que a pesar de la pérdida de carga se llegue al umbral
igual, pero esto no suele a ocurrir mucho
- Tenemos muchos receptores en los cilios y todos se activan, y como los potenciales pasivos
son sumativos igual se llega al umbral en el punto de descarga del potencial de acción >
suma de potenciales de receptor
• Para que se llegue al umbral existe sumación temporal y espacial de potenciales > la
primera es la suma por la frecuencia de activación alta de un mismo receptor o la
sumatoria de varios potenciales de receptores en distintos lugares al mismo tiempo
• Los animales o personas con mejor olfato puede ser que tengan más neuronas, que sean
más sensibles sus receptores, etc y qué concentración de odorantes requieren para
generar el potencial del receptor también
• Entonces si se llega o no a la propagación del potencial de acción depende tanto del odorante
y su concentración, como de la sensibilidad del receptor > codificación olfatoria
- Voluntariamente puedo aumentar la concentración de odorante en mi nariz, ya sea
respirando mas rápido o acercándome físicamente a la fuente del olor > mejora la
detección sensorial
- La frecuencia de activación es importante en sensorialidad > sumatoria temporal
• Anósmico = no produce olfación
๏
En el caso de sistemas periféricos como estos sensoriales, el proceso para percibir un estímulo solo
puede ocurrir ahí y desencadenar el potencial de acción en el cono de la neurona, no como en el
SNC donde tiene muchas conexiones y recibe inputs excitatorios e inhibitorios de muchas partes y
con más modulaciones
๏
Adaptación del estímulo > adaptación sensorial es el proceso en que, a pesar de la presencia de
estimulo físico, la neurona no transduce la información, o no la percibo
- Mecanismos de adaptación (propuestas)
• Se “secuestran” los canales iónicos por vesículas de la membrana > se salen de la MP hacia
vesículas dentro de la célula
- Ocurre, pero no acá, es en los procesos de plasticidad neuronal
• El gradiente de cloruro se invierte > pero esto es muy poco probable porque la escala
temporal de este cambio de concentración en todo el moco es muy lento
• Inactivación del canal > por cambios conformacionales generados por otra molécula como por
fosforilación de la estructura con kinasas > retroalimentación negativa por el aumento de la
actividad de la vía de la kinasa, se autoregula > esto sí ocurre acá
• Por un exceso de activación, se depleta el AMPc > eventualmente disminuye la concentración
de AMPc a tal nivel que ya no puede gatillar la cascada de señalización intracelular > como
que no le sigue el ritmo a la transducción y no puede activar río abajo > este también ocurre
acá
- Los sistemas de adaptación rápida ocurren por este mecanismo > depresión/depletion de
segundos mensajeros
- Los procesos de adaptación solo ocurren por exposición prolongada al estimulo
- Importante ecológicamente para que un estímulo sostenido no enmascare otros + relevantes
Percepción
‣ Procesamiento de la información en el SNC > percepción
๏
La información se transmite por sinapsis > las neuronas sensoriales olfatorias tienen que proyectar
sus axones al cerebro para mandar información hasta ahí
- El hueso de la nariz es poroso así que los axones de las neuronas pueden llegar directamente a
la región del cerebro llamado bulbo olfatorio, pasando por los poros, donde se procesa ya la
información
• En ratones por ej el bulbo es más grande, por eso se estudia más la olfación en este modelo,
ya que ellos sobreviven y se reproducen a través del sist olfatorio
Codificación olfatoria
‣ Selectividad y sensibilidad de receptores olfatorios (diapo)
Los humanos tienen 350 genes funcionales que codifican para receptores sensoriales olfatorios y
๏
cada neurona olfatoria solo expresa un mismo tipo de receptor olfatorio así que tenemos grupos de
neuronas para cada receptor de odorante > 350 familias distintas de neuronas en el epitelio
- Nosotros podemos oler más de 350 olores, esto es posible por la combinación de los estímulos >
¿qué se combina?
• Una molécula de odorante puede activar a mas de un tipo de receptor de odorante o
diferentes receptores de odorantes
• Un receptor puede detectar o ligar diferentes moléculas de odorantes
- Gráfico de odorantes y receptores que activa y a qué concentración lo hace > diferentes
odorantes se activan con diferentes odorantes en distintas sensibilidades
• Un mismo receptor es más sensible para un odorante que para otro, y requiere menos
concentración para su activación
• Un mismo odorante puede activar una variedad de receptores cuando a está a distintas
concentraciones
• Pero también hay receptores que son muy selectivos para un solo odorante, lo que
evolutivamente se puede deducir que era necesario para reaccionar a ese estimulo por
supervivencia
- Y un odorante puede activar muy pocos receptores
- En el ambiente los odorantes están como mezclas, mezclas complejas de varios odorantes,
algunos compuestos son preponderantes para tales olores pero siempre son muchos >
combinatoriedad
‣ Mapa olfatorio > odortopía
Dos familias de neuronas marcadas, cada una expresa receptores específicos > en el bulbo olfatorio
๏
del ratón si bien todas las neuronas de una familia expresan el receptor, cuando proyectan al
cerebro proyectan todas a un único punto > al glomérulo, que es una serie de neuronas donde
ocurre sinapsis
- Una misma familia proyecta sólo a un único punto en el bulbo > si tenemos 350 familias, hay
700 glomérulos (son dos por familia posiblemente para hacer más robusta la codificación
olfatoria)
- Todas las neuronas sensoriales olfatorias son glutamatérgicas, es decir, liberan glutamato cuando
se activan, y en el glomérulo hay una serie de otras neuronas que se activan con el glutamato
pues tienen receptores glutamatérgicos en sus dendritas (las que van río abajo)
• Las neuronas sensoriales olfato son glutamatérgicas, liberando glutamato en el glomérulo
donde hay neuronas con receptores para el glutamato, responden a este y proyectan a su vez
a la corteza olfatoria
- Pero también tenemos neuronas inhibitorias que también se van a activar inhibiendo las
primeras > circuitos que se activan por la liberación de Glu
- En el glomérulo hay neuronas dopaminérgicas que se activan, pero todas liberan glutamato
๏
The olfactory systems uses a combinatorial code
- Each OSN expresses only one type of OR > One OR binds to different odorants and one odorant
binds to more than one receptor
- OSN expressing one type or receptor project to one or two glomerulus in the OB
๏
Imagenología de Calcio (se ve la activación por la sinapsis) en bulbo olfatorio del ratón y se daba
olores para ver qué parte del bulbo olfatorio dorsal se activaba
- Se ve que un glomérulo se activa mucho con un odorante y menos con otro, y así para todos los
glomérulos > se puede hacer un mapa de activación glomerular en el bulbo olfatorio
• El mapa será único para cada mezcla de odorantes y para cada concentración de cada
odorante
• El mapa es la respuesta a la activación de las neuronas sensoriales olfatorias
- Neuronas solo con receptor M12, neuronas en azul que proyectan a un unico punto en el
glomérulo
- Cada glomérulo es para una familia de neuronas que expresan un mismo receptor
Clase 21: Transducción Sensorial: Audición y Mecánica Coclear

‣ Células receptoras de estímulos sensoriales externos

๏
Visión: en el caso de los bastones hay una predominancia del factor intensidad de la luz mientras
que los conos detectan diferencias de color
๏
Audición: existen células especializadas llamadas células ciliadas que son mecanorreceptores por
ende responden mediante un cambio eléctrico a un estímulo mecánico > no son neuronas
๏
Olfato: neurona olfatoria quimiorreceptora > descargan potenciales de acciones y sus axones
proyectan al SNC
๏
Gusto: célula gustativa quimiorreceptora
๏
Tacto: terminación nerviosa libre y corpúsculos de Meissner > mecanorreceptores
- Distinto tipo de células especializadas con inervación libre en la dermis (terminales de las
neuronas sensoriales que conectan hacia la médula espinal)
- También algunas responden a distintos tipos de presión, a T°/calor, dolor, etc
‣ Respuestas graduadas de las células receptoras

๏
Con un odorante se genera una corriente de entrada > Voltage clamp se ve una corriente negativa
de entrada y en Current clamp una despolarización que, si el estímulo es suficientemente intenso o
con la temporalidad necesaria, descarga unos potenciales de acción en la neurona, que se propaga
hacia el SNC
- Latencia del orden de los 100 ms
- Un estimulo umbral de odorante depende de la especie pero es en torno de decenas de
moléculas por ej como 20 molecs
๏
En caso de las células especializadas de la retina o fotorreceptores > Bastones en los vertebrados
es dif a los invertebrados pq el mecanismo de transducción visual es distinto
- En vertebrados, la luz y la union de fotones a proteínas receptoras de fotones, llamadas opsinas,
activan una cascada de señalización > al aplicar luz se producen corrientes de salida pq los
canales asociados a la respuesta a la luz están abiertos basalmente, y estimulados se cierran
- Hay una latencia del orden de los us, muy rápida en comparación al olfato
• Latencia > cuánto tiempo después de la app del estimulo se produce la respuesta
• Es decir, los canales se cierran muy rápidamente, no hay que activar toda la vía de
señalización
- El estímulo umbral es solo 1 fotón > basta un fotón para que exista una respuesta en la célula
fotorreceptora
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El sistema auditivo
- Las células ciliadas en el oido no tienen axón y no generan potencial de acción pero si tienen
respuestas como cambios en el voltaje que produce la liberación de neurotransmisores hacia
neuronas que propagarán potenciales de acción a centros especializados del SNC
• La respuesta será una corriente de entrada y que se desarrolla muy rápido, con latencia del
orden de los us, y con un umbral muy chico de 0,3 nm (dependiendo de sp) para generar
respuesta eléctrica de audición
- El umbral es la magnitud del estimulo capaz de generar una respuesta, está en nm porque
siendo una célula con el organillo especializado para la transición mecánica, son capaces de
responder al movimiento físico de las células ciliadas desde su posición basal, y el
resultado sobre el potencial y la cascada de señalización de esa célula (su respuesta)
depende de en qué sentido es el movimiento
- Esto tiene sentido términos de supervivencia supervivencia
- Cóclea > órgano especializado en la transducción sensitiva auditiva que permite detectar
diferentes tonos, en relación con una frecuencia
Discriminación de frecuencias en la cóclea
‣ Anatomía del oído
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Oído externo > la oreja y canal de oído
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Oído medio > tímpano
- Membrana que oscila ante cambios
de presión (fuerza x unidad de área)
que son estímulos mecánicos, lo que
produce vibraciones lo cual mueve los
3 huesillos interconectados a
continuación > martillo, yunque y
estribo
• El estribo es el último e interactúa
mecánicamente con la ventana
oval
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Oído interno
- Los canales semicirculares que es el órgano relacionado con
la transducción vestibular, es decir el sistema del equilibrio
• Sistema vestibular tiene 3 ramificaciones en diferentes
orientaciones perpendiculares entre sí que permiten
sentir el movimiento y eqo en todos los ejes > orientación
espacial (adelante-atrás, arriba-abajo, a los lados)
- Y la cóclea (nombre derivado de “caracol”) que es el órgano
donde están las células especializadas en la transducción de
sonidos > sensor de sonidos
‣ Ondas sonoras
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Los estímulos son ondas de sonido
- Las onda sonora son vibraciones del aire, en las moléculas
del aire se propaga y lo que va cambiando es la presión del
aire, en un sentido y el otro > onda sinusoidal
‣ Rangos sensoriales de sistemas auditivos
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Es diferente para distintas especies
- Campo auditivo humano está aprox desde los 20 Hz (ciclos/
seg) hasta los 20 kHz
• La voz humana tiene componentes en distintas
frecuencias de 0,5 a 2 kHz
- Los infrasonidos > más sensibilidad del elefante y el topo a
sonidos de menor frecuencia (pero menor rango)
- Los ultrasonidos > más sensibilidad del perro y gato a sonidos de mayor frecuencia
• Los murciélagos y delfines escuchan ultrasonidos muy extremos y un rango muy amplio de
sensibilidad de los sensores
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Como este rango es tan amplio, se describe en escala logarítmica, en potencias de 10
- Los decibeles dB, son en potencia de 10 y están relacionados a presión > unidades relativas a
nuestra presión umbral
• Decibel: intensidad del sonido relativa a la mínima detectable (umbral de audición)
- dB = 10*log(P1/P2)
• P1 es nuestra presión umbral y P2 la perturbación del sonido en el aire

- Cuando el dB aumenta en decenas, la proporción de las presiones aumenta en ceros

(potencias de 10)
- Límite de nocividad sobre los 90 dB > sonidos de peligro para el sistema auditivo porque las
células ciliadas se van muriendo, y no se regeneran
• Sobre 120 dB generan daño irreversible
‣ La cóclea humana
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Es un tubo pero enrollado y dividido como un
laberinto, si lo estiro sería como un canal con líquido
denominado perilinfa que propaga la vibración del
estribo transmitida mecánicamente sobre la ventana
oval
- Estribo mueve la ventana oval y eso produce
movimiento del lqdo dentro la cóclea
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Organo de Corti (corte transversal)
- Región interna de la cóclea, ubicado en el centro
del tubo entre los dos compartimentos inferiores: el
ducto coclear y la scala timpánica > es donde se
encuentran las céls sensoriales especializadas y se
extiende a lo largo de la cóclea
• Scala timpanica y scala vestibuli son los espacios
rellenos de fluido perilinfa
- El ducto coclear está lleno de otro líquido, la endolinfa,
con la cual entran en contacto los cilios de las células
especializadas
• Endolinfa se llama la solución interna de la cóclea y
tiene características iónicas diferentes a la perilinfa
que son esenciales para la función de las células
- El órgano está empaquetado por membranas que sufren movimiento por el sonido
• Membrana tectorial adentro del órgano, sobre las células especializadas en el ducto coclear, y
membrana basilar bajo el órgano, en contacto con la perilinfa/scala timpánica
- En mamíferos está compuesto por células ciliadas internas y externas (por un proceso de
especialización), que tienen diferente forma y función
• Las internas son las sensoriales y hay solo
una fila de ellas a lo largo de la extensión
de la cóclea, mientras que las externas
no son sensoriales y hay 3 filas de ellas
- Las internas son los que se llaman
mecanorreceptores como tal, porque
dentro del sentido de la audición es
por estas células que se genera y
propagan descargas que irán por
neuronas hacia el SNC
• Ellas mismas no descargan, sino
que liberan un neurotransmisor que
van a activar neuronas que gatillan
PA hacia el SNC
• Los pelitos se llaman estereocilios y tienen una forma diferente en las internas y externas (se
ve al remover la mema tectorial) > si bien sus características funcionales son similares
(ambas tienen propiedad de mecanorreceptores), las conexiones desde y hacia el SNC son
diferentes, lo que determina una función distinta
- Las internas son las que envían señales el SNC (vía aferente) mientras que las externas
son las que reciben señales y conexiones desde el SNC (vía eferente)
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Desplazamiento de líquido en los conductos de la cóclea
- Entonces, el movimiento en la perilinfa es
la que genera perturbaciones mecánicas o
cambios de presión a lo largo de todo el
tubo y eso implica un movimiento de las
membranas > este sandwich que se forma
tendrá cambio en sus posiciones lo que
afecta la posición de los estereocilios
• La membrana basilar y la tectorial van a
tener el efecto de mover las células
ciliadas por el movimiento de lqdo en la
perilinfa > tiene impacto mecánico sobre
estereocilios, cuyas características
permitirán la mecanotrandsucción
‣ Selectividad de frecuencias a lo largo de la membrana basilar > tonotopía
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Este órgano es muy complejo en estructura y también en los procesos de cómo se mueven las
membranas y lo que pasa a nivel de las células ciliadas
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Los primeros estudios del cómo es el movimiento de membrana basilar fueron hechos x Békésy,
quien caracterizó el movimiento del martillo cuando se le aplica un “click”, que es un movimiento de
onda oscilante que se detiene rápidamente y también el efecto oscilante de este en la membrana
basilar a lo largo de la distancia de la cóclea desde el estribo (zona coclear basal hacia la apical) >
también reveló que hay una preferencia de frecuencias, o sea hay rangos medios donde se genera
la mayor oscilación
- Experimentos en humanos pero post-mortem
- La cóclea tiene como 3 cm de largo estirada

- Dependiendo la frecuencia del estímulo son otras regiones a lo largo de la cóclea las que tienen
la mayor respuesta > desde el ápice se produce oscilación para frecs mas bajas y en la base
para las más altas > tonotopía
• Esto por las propiedades del sistema y de la membrana basilar en particular
- Cada montaña en el gráfico amplitud relativa vs distancia es la reacción de la cóclea para un
click, y cada click tiene ppalmente una frecuencia > para una misma frecuencia, la respuesta
tiene amplitud máxima en una posición y disminuye adyacentemente
• Si se estimula con la misma amplitud pero otra frecuencia > igual responde toda una región
en la cóclea a un rango de frecuencias, pero la respuesta no será de igual magnitud > por eso
las montañas se sobrelapan > sintonización
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Bases de la tonotopía
- Propiedades mecánicas del tubito: diferencias en el tamaño y densidad de la membrana basilar
desde la base al ápice y eso tiene incidencia en la selectividad de frecuencias
• En la base la membrana basilar es mas delgada y tiesa, mientras que en el ápice es más
ancha y floppy

- La cóclea lo que hace es similar a lo que hace un piano, donde hay una tonotopía en
cuanto a la ubicación de las teclas y las notas, pues en la cóclea el sistema funciona
mecánicamente distinto según las frecuencias > En el piano las frecuencias
correspondientes a cada una de las teclas de un sonido se funden en un solo todo,
mientras que en la cóclea un sonido compuesto por diferentes frecuencias es
descompuesto en los componentes individuales.
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Sintonización de frecuencias y no linealidad en membrana basilar
- Antes de morir, in vivo, la cóclea funciona un poco distinto, hay selectividad de frecuencias como
hemos visto pero además mecanismos
- Midiendo la velocidad a la que se mueve la membrana basilar en una región específica de la
cóclea en función de la frecuencia (en el rango correspondiente a esa región), pero para
distintos decibeles
• La selectividad en cuanto a frecuencia de un punto de la cóclea se hace menos fina a

medida que aumenta la intensidad del tono
- Si aumento los dB ahora responde a un mayor rango de frecuencias > empeora la
sintonización porque está menos sintonizado para una cierta frecuencia > es menos
selectiva cuando subes el volumen
- Porque in vivo el sistema tiene un mecanismo para amplificar los sonidos menos intensos
• Post mórtem pasaría que con más decibeles cambia la amplitud del movimiento pero no la
sintonización, y la sintonización post mortem es amplia > o sea hay algo que permite
sintonizar mejor y que el mov de la cóclea responda a un rango más especifico de
frecuencias
- La ganancia es la razón entre la presión ejercida por la onda sonora sobre el estribo y la
velocidad de la membrana > velocidad por unidad de presión (mm/sPa)
• La magnitud de la presión tiene que ver con la intensidad del estimulo, y su frecuencia tiene
que ver con el tono
• La ganancia, es decir, relativo a cuánto la presión ejercida sobre el estribo, la respuesta en
velocidad de la membrana basilar > la ganancia es mayor para sonidos de baja intensidad que
para de alta intensidad, y además se desparrama el gráfico (a más decibeles más se mueve
por el eje x)
- O sea, dado un movimiento del estribo, la respuesta de la membrana será mayor para
frecuencias bajas > La ganancia es mayor para frecuencias bajas
- Efecto no es lineal, y la ganancia no es una ctte, es un aumento relativo
- Esto solo ocurre cuando el individuo está vivo, o sea depende de procesos
• Hay un mecanismo que permite amplificar, tener más ganancia para estímulos de
menos volumen >

- Si este fuese un proceso lineal, la respuesta mecánica de la membrana sería proporcional a

la intensidad o la presión, porque la ganancia o la respuesta sobre la presión no es ctte,
sino que es mucho mayor para estímulos de menor intensidad, comparado con los de
mayor intensidad
- Además se vuelve menos sintonizada en cuanto al lugar de la cóclea en que responde >
creo que eje x es eso, la distancia de la cóclea
- Esto tiene que ver con los componentes macro de la cóclea pero no es el mismo si es
organismo esta vivo o no
- Esto permite tener mas sensibilidad para los sonidos bajos (mejor sintonización y
selectividad, creo)
‣ Entonces cuando se da un click con cierta frecuencia se da una oscilación en un lugar muy particular
de la cóclea, se produce en distintas posiciones a lo largo de la cóclea pero es localizada por frec >
selectividad y tonotopía (gráf amplitud relativa vs frecuencia)
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Hay un cierto rango de frecuencias al que responde una ubicación, es tonotopía, no sonotopia > el
tono, la frecuencia, tiene expresión a lo largo de la cóclea que es específica (topía, de ubicación)
- El nivel de localización es otra cosa > rango al que responde de frecuencias, sintonización
• Para una misma ubicación en la cóclea, responde a todo un rango de frecuencias pero en
distinta amplitud
- Si mantengo el estimulo en una ubicación dada pero aumento la amplitud o la presión,
aumentaría la respuesta del movimiento de la membrana basilar, pero un proceso linear seria
que al doble de presión tengo doble de amplitud de movimiento, y la ganancia seria ahí con
pendiente uno (1) > gráfico cm/s en función de P o movimiento en función de la presión/
amplitud del estímulo sería una recta si fuese lineal, dada por la ecuación v=K*P con K ctte,
claramente K puede tener distintos valores y aun así seria lineal, porque la misma proporción en
que aumenta la P es la que aumenta el movimiento
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Cuando el org está vivo la ganancia es la pendiente de este gráfico, cuánto aumenta movimiento
por unidad de presión, y no es lineal por ende la pendiente no es fija
- Si fuera lineal graficaría una linea recta, donde la pendiente sería siempre ctte
- En el gráfico de ganancia se hace vs la frecuencia, así que no es tal cual lo mismo
• La amplitud del movimiento es máxima para una región de la cóclea
• Para un estímulo de la misma frecuencia, la respuesta es máxima para una amplitud pequeña
- La ganancia máxima para un sonido de baja intensidad en torno a los 8 Hz, selectividad entre
(8-9 Hz) > si aumento su amplitud se ve que la ganancia disminuye mucho y además la curva se
ensancha > se pierde la proporcionalidad (no es lineal) y además se hace menos sintonizada esa
región del espacio en relación a la frecuencia, menos selectiva para la frecuencia cuando
aumenta el volumen

• Que la ganancia sea mayor, en términos relativo, para estímulos de menos intensidad se
relaciona con la sensibilidad, el movimiento de la membrana tiene más respuesta relativa a
estímulos de baja intensidad, es mas sensible a ellos
‣ Sensibilidad de la membrana basilar ante estímulos de diferentes frecuencias
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Esto es el mismo fenómeno pero un exp distinto, en organismo vivo también
- Muestra cuál es el estímulo umbral del sonido > se puede hablar de decíbeles o de presión sobre
el tímpano, ambos son medidas de intensidad del estímulo
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Intensidad del estímulo umbral en función de la frecuencia, cuánta intensidad se requiere para
tener respuesta de movimiento de la membrana > cada color siendo una zona de la cóclea,
más cerca al ápice (verde, frec bajas) o a la base (rojo, frec altas)
- Selectividad > en el ápice, la intensidad del estimulo es mínimo de umbral a una frecuencia
específica en una región dada > el estimulo mín que hay que aplicar para que se mueva esa
región de la cóclea tiene una relación particular con la frecuencia > tiene selectividad porque
necesita un menor estímulo para una frec dada pero si se mueve en torno a esa frecuencia
puede responder pero hay que aplicar mayor intensidad > se requiere estímulo de intensidad
mayor para frecuencias que se alejan del optimo
- En la base, son otras frecuencias > hay una selectividad del estímulo para cierta frecuencia y el
estimulo umbral tiene un mínimo para una frecuencia mas delimitada en el otro extremo de la
curva > la membrana responde en un cierto rango pero hay que aplicar estímulos mucho más
altos cuando se alejan del óptimo, que también es una forma de selectividad > El estímulo
umbral necesario para mover la membrana es menor en la zona de mayor selectividad
‣ Frecuencia de potenciales de acción del nervio coclear

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No se mide el movimiento sino que la descarga de PA del nervio coclear > recordar que cuando se
produce transducción las cels especializadas liberan neurotransmisores que activan neuronas hacia
el SNC
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Gráfico de la frecuencia de descarga, espigas/seg de ese nervio en función de frecuencia de sonido
> hay selectividad en la respuesta, pues para cierta intensidad más baja hay mayor selectividad de
descarga pq es mas estrecho el rango de frecuencias al que dispara que para intensidades más
alta
- A medida que aumenta la intensidad se vuelve menos sintonizado, o sea la misma propiedad de
selectividad de membrana ocurre con la descarga de los nervios, se mantiene esta propiedad
hacia el SNC
- El rango de frecuencias a las que responde ese nervio es menor a menor intensidad
๏
Gráfico de estímulo umbral para descargar potencial de acción/intensidad (dB) (o cambiar la
frecuencia de descarga) en función de la frecuencia del estímulo > sensibilidad
- En una misma región de la cóclea, para una misma intensidad, hay una frecuencia para la cual el
umbral de descarga es menor
- También hay sensibilidad de frecuencia en lo que sale de la cóclea hacia el SNC, más sintonizada
para menores intensidad
• Sintonizada: responde a frecuencia más delimitada
• Selectividad es el ancho de la curva, en qué tanto rango de frecuencias de sonido hay
descarga de potencial asociada a ella
- Hay un máximo de respuesta en frecuencia de espigas para una frecuencia de sonido
específica, que depende de la intensidad del sonido, porque a más intensidad hay mas
rango de frecuencias de tono pero se pierde la sintonización, ya no es tan marcada la
frecuencia de sonido que lleva al máximo de espigas
- La sensibilidad tiene que ver con que al aumentar la intensidad se pierde la sintonización
- Así, este sistema la tonotopía se vuelve un cierto patrón de descarga
Mecanotransducción en las células ciliadas de la cóclea
‣ Estimulación mecánica en el órgano de Corti de la cóclea
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Cómo es que los axones que inervan una
localidad de la cóclea responden con mayor
frecuencia de potenciales de acción que
otros dependiendo de la frecuencia del
estímulo > qué hace que la membrana
basilar se mueva más en un cierto punto u
otro dependiendo de la frecuencia
๏
Cuando se mueve la perilinfa produce un
movimiento de la membrana basilar en
contacto con tal líquido, y tiene
propiedades de flexibilidad así que oscila
hacia arriba y abajo en forma compleja pero
dependiente de la frecuencia del estímulo
- También hay una solución en la
membrana tectorial que es distinta, la
endolinfa
๏
Se muestra la descarga de los nervios o
axones y se ve cómo las células ciliadas, las
que trandsucen estímulo mecánico por el
movimiento de los cilios, estimulan nervios
que van al SNC > aferencias desde la
periferia hacia el SNC > los axones
aferentes son estimulados o no por las
células internas
- Eferencias desde el SNC hacia la periferia, axones estimulados por las células externas
• Hay zonas donde esto no es tan claro en direccionalidad pero acá sí
- Ambos tipos de axones vienen por el mismo nervio
๏
Por un estímulo se deforma la membrana basilar que implica un movimiento sobre los estereocilios
en contacto con la membrana tectorial, así que al moverse eso, por el sandwich que están estas
células hay un movimiento relativo de este penacho de estereocilios y se desplazan, inclinándose
- Las respuestas eléctricas a ese movimiento están conservados en vertebrados en cuanto a
estructura y mecanotransudcción
‣ Las células ciliadas responden al desplazamiento de los estereocilios y la dirección del desplazamiento
es crítica
๏
De qué manera el potencial de la membrana
cambia respecto a la posición de los
estereocilios, qué pasa si los muevo
simultáneamente registrando su Vm
- Si la dirección es hacia la del estereocilio
mas alto (kinocilio), porque hay un gradiente
de tamaño > Si el movimiento es el
dirección de crecimiento de tamaño en una
frecuencia fija, se observa un cambio en el
V y este tiene una amplitud que es máxima
en comparación al movimiento en otras
direcciones
• Kinocilio es el cilio terminal o más grande
• Al moverlo hacia el kinocilio la cél se
despolariza y cuando va devuelta retorna
al reposo pero pasa un poco para abajo
- Si el movimiento no es en dirección exacta
del kinocilio mayor se tiene una respuesta
de voltaje de la misma frecuencia pero su
amplitud será menor
๏
Si es menos paralelo a la dirección del paralelo será cada vez menor la amplitud y cuando es
totalmente perpendicular ya no hay practica% respuesta aunque hay estímulo mecánico >
selectividad de la dirección del movimiento en cuando al proceso de transducción de una célula
- Selectividad del ángulo, si la membrana se mueve en forma compleja las células también, pero
los que generan respuesta efectiva son los en dirección mas paralela al eje del kinocilio, hacia un
lado u otro pero en ese eje del gradiente de tamaño
- No es trivial decir cómo se mueve el cilio en función de tal sonido, pero cuando la neurona está
aislada al menos la respuesta es máxima cuando la dirección es en el gradiente del tamaño de
los cilios
- Hay preferencia en cuanto a la dirección del movimiento así que lo que importa es la magnitud
del componente en esa dirección, porque si es diagonal hay un componente en el eje del
kinocilio, pero en perpendicular ya no tiene componente paralelo y por eso no hay respuesta
• Que no haya respuesta no implica que no podremos escuchar ese sonido porque ocurren
muchos fenómenos antes y es un proceso complejo, además no todas las células responden
igual al mismo movimiento por su ubicación en el sándwich
๏
Pero este fenómeno no es simétrico > si esto parte sin moverlo, con la célula aislada con un Vm en
torno a los -60 y haces un movimiento simétrico la respuesta es oscilatoria pero no simétrica en
torno al potencial de reposo, siempre el movimiento hacia el kinocilio mayor produce una mayor
deflexión del potencial mayor aunque igual hay algo hacia el otro lado pero no es simétrico
- No es el mismo cambio de V hacia la despolarización que hacia la hiperpolarización, aunque
mueva de igual forma en ese eje a ambos sentidos
๏
El resultado es que hay una selectividad de la frecuencia también en la descarga de los nervios
pero es muy difícil de comprender todo porque hay muchos procesos y no son lineales, no es fácil
saber las contribuciones relativas de cada componente porque tiene demasiados factores; por eso
nos estamos enfocando en una sola cél
๏
La respuesta oscilatoria del V no es simétrica aunque el movimiento sea simétrico y eso tiene que
ver con e proceso mismo dela transducción
‣ La corriente de la mecanotransducción
๏
Ahora el mismo exp pero vemos respuestas en corriente en lugar de V ahora, con estimulo como un
pulso mecánico cuadrado, sin frecuencia porque no es oscilante > la mayoría en la dirección mas
favorable
- Estimulo cuadrado seria empujar un poco el cilio no más y luego soltarlo
- Positivo cuando es en dirección del kinocilio y negativo en sentido opuesto
๏
Cambios en corriente al cambiar la posición de los esterocilios
- Los movimientos (del caso a) producen una serie de corrientes de entrada al moverlo en la
dirección del kinocilio pero al moverlo al otro lado (caso c), en contra del gradiente de tamaño
se tiene una corriente de salida pero es mucho mas pequeñita así que la respuesta no es lineal
en un sentido o en el otro
- En el graf de abajo vemos la latencia, que tan rápido se genera la respuesta de corriente > tau =
100 us, muy rápido
๏
Entonces hemos visto que no es simétrica en un sentido y otro, que la respuesta es muy rápida, y
que a mayor movimiento hay mas corriente y que la respuesta cambia con el tiempo a pesar de
que el estímulo esta presente, decae a lo largo del tiempo luego de llegar rápidamente a su peak
de corriente, esta es propiedad típica de sistemas sensoriales > adaptación de la respuesta o
desensibilización
- No es lo mismo pero es consistente con que nuestra capacidad de percibir un estímulo siempre
tiene procesos de adaptación, tiene la misma lógica de la adaptación de percepción > al final es
el mismo fenómeno que la adaptación macro a la luz o los sonidos pero ocurre acá con un
estimulo prolongado a escala “micro” de las células receptoras, ocurre tanto a nivel de descarga
y de recepción del estimulo, resultando en una desensibilización de percepción
๏
Gráfico de canales abiertos en función de desplazamiento
- Sin saber qué canales son, puedes ver que un desplazamiento produce una corriente que es
mayor a medida que se desplaza en la dirección favorable y decae mucho más rápidamente para
movimiento en el otro sentido, cuando va opuesto al kinocilio > no es simétrico
๏
A nivel de los nervios > espigas neurales de acuerdo al movimiento y potencial de memb
- Vemos que cuando el desplazamiento es 0, e° de reposo, hay un potencial ctte y cuando el
movimiento de los kinocilios es en un sentido favorable, se despolariza con una leve adaptación
también; y si mueve hacia el otro lado hay una hiperpolarización solo que de menor magnitud, y
vemos que hay mucha menor respuesta > asimétrico
• A estos cambios en el potencial se le llama potencial de receptor, en neuronas olfatorias
también
- Si registramos los nervios en torno a estas células, veremos que también hay relación con el
cambio en la frecuencia de descarga, cuando hay mas despolarización en la cel mecanoreceptora
hay mas frecuencia de descarga en los nervios aferentes, hacia el SNC > hay algo que activa
más o menos a los nervios
• Lo que hace la cel receptora sobre los nervios se relaciona a si se está hiperpolarizando o
despolarizando
- Cuando se despolariza descarga más PA, cuando se hiperpolariza lo hace menos
- La descarga de los nervios también se adapta, su frecuencia de disparo, igual que el V e
igual que la corriente
• Los nervios puede tener también una frecuencia de descarga basal, aunque no haya estímulo
> por las propiedades eléctricas internas (potenciales dependiente de potencial más
complejos)
‣ Evidencias del proceso de mecanotransducción
๏
Se observan en imágenes de microscopía
electrónica que hay filamentos proteicos
que unen el ápice de un estereocilio con
el lateral del estereocilio que viene,
adyacente, conexión proteica > Tip-link
๏
Se ha podido determinar que hay canales
asociados a este Tip-link proteico >
cuando se mueven las cels en una
dirección hay un cambio en la tensión de
esta estructura lo que se traduce en un
estímulo mecánico sobre un tipo de
canales sensible a ellos
- Canales mecano-transductores (MET): catiónicos no selectivos y permeables a Ca2+
- Cuánto tiene que ser el movimiento suficiente para tener respuesta eléctrica es del orden de
nanómetros > con 0,3 nanometros se detecta 0,1 V de respuesta, que es un ángulo muy chiquito
> o sea es extremadamente sensible a los movimientos
‣ Bases electroquímicas del movimiento
๏
Diferencias iónicas de las soluciones en la cóclea
- La perilinfa tiene baja concentración de K en extracelular
- La endolinfa tiene alta concentración de K en el extracelular
- Además esta composición causa una diferencia de potencial entre endolinfa y perilinfa, o sea
endolinfa tiene +80 mV de potencial en relación a la perilinfa (0 mV) > más complejidad aun al
sistema
๏
La membrana lateral de las células sensoriales están
bañadas por la perilinfa, mientras que los cilios entran
en contacto con la endolinfa
- Hay una división de medios porque hay una
superficie muy compacta en la zona apical de las
céls > no fluyen iones salvo a través de los
estereocilios entre una región y otra
๏
Entonces, los pelos no tienen el mismo extracelular que
el lateral de la cel > separación de espacios, porque es
como compacta la capa que generan las células, de
donde salen los cilios
- La perilinfa es más o menos similar a lo que
conocemos como medio extracelular en cuanto a
concentraciones iónicas, dentro de lo estándar
• Si pongo electrodo en perilinfa o zona basolateral
de las células, y otro adentro de la célula in situ
obtengo una diferencia de potencial como de -60
mV > potencial respecto perilinfa, con lo que está
en contacto con el basolateral
- La endolinfa tiene concentraciones de iones diferentes (alta [K+], baja [Na+], y menos [Ca++] que
perilinfa) con V = +80 mV respecto a perilinfa > esta es la solución de la región con la que esta
en contacto el estereocilio, que es donde están los canales así que es la zona que importa para
la respuesta eléctrica de la célula
• O sea que lo que pasa depende de las propiedades de los canales mecanosensibles y de los
iones que permean (su selectividad), o sea del gradiente electroquímico de los mismos
๏
Estos canales tienen un componente importante de corriente de K+ y de Ca++ > en realidad son no
selectivos porque conducen K+, Ca++ y Na+ pero cuánto pase para un lado y otro depende de la
diferencias de concentraciones y diferencias de potencial > se ha demostrado que lo que se más se
mueve es K+ y Ca+, aunque tenga la misma conductancia para los iones
- Está mas cerca del potencial de inversión del sodio así que por eso no pasa mucho ¿?
- Si el potencial de membrana celular fuera -60 mV respecto al extracelular de perilinfa, y la
endolinfa está a +80 mV respecto de la misma > la diferencia de potencial sería de -140 mV en
los estereocilios respecto a endolinfa
• El potencial de Nernst de K+ sería cerca de 0 mV porque las concentraciones son similares
adentro y afuera en la zona de estereocilios, pero como el potencial de transmembrana es de
140 mV más positivo afuera que adentro, la concentración quizás no afecta tanto al
movimiento del K+, que igual va a entrar si puede, por el gradiente electroquímico
• En cambio el sodio esta leve% más concentrado en el interior, y si calculo su potencial de
inversión, sería como -80 mV ahora > muy distinto a lo “normal”
• El potencial de inversión del Ca es +70 mV, no está tan lejos de su “estándar”
• Estos potenciales de Nerst son de acuerdo a lo que ocurre arriba, no en el basolateral (como
si adentro fuera Vm y afuera tenemos +80 mV)
- Entonces, este canal no selectivo en cuanto a la permeabilidad (conductancia) de iones
• Pero el mayor efecto aquí de corriente es el del K+ porque tiene una tremenda diferencia de
potencial (de -60 a +2 mV), y el potasio tendería a entrar
- El sodio podría tener algún efecto pero mínimo, tiende a salir
๏
Entonces, es un sistema muy distinto en cuanto a concentraciones y las dos fases que hay, y lo que
gatilla laco de canales es un estimulo mecánico, no una molécula o el potencial, y en cuanto a la
selectividad también de los canales

‣ Localización de los canales y la Ca++ATPasa en el haz de estereocilios

๏
Experimentos que muestra la localización de los canales usando microscopía confocal > se ven los
aumentos de calcio al mover el estereocilio, o sea los canales permiten entrada de calcio y como se
ve más en la zona apical se concluye que están ubicados ahí
- Primero aumenta el calcio en la zona del
esteriocilio y luego se difunde
๏
Se sabe que hay bombas de calcio que lo sacan
al exterior > especialización de ATPasa de calcio
que se ve cómo baja la concentración de Ca++
gracias a ella
‣ Posibles canales mecanosensibles: TMC1 y TMC2
(Trans Membrane Channel-like protein)
๏
Registro de canal único a posibles canales
mecanosenibles
- Se repite el exp y se usa un compuesto que
rompe los tip-links (BAPTA), de tal manera
que no se ve activación del canal > no
funciona el canal, se desestabiliza cuando
baja la [Ca++] también (procesos enzimáticos)
‣ Células ciliadas externas
๏
Por microscopía en ratones se vio que las células
externas tienen sistema de transducción similar al de las internas
๏
Canales mecanosensibles TMC1 y TMC2 reconstituidos en liposomas

- Aún está en discusión qué características tienen los canales, de qué son, y aquí hay algunos
candidatos que fueron reconstituidos en liposomas individualmente y se vio su activación por
pulso mecánico con la selectividad que mencionamos
‣ Mecanismo > El Tip link está unido mecánicamente al lateral de la célula sgte en la placa de inserción,
y hay una propiedad importante ahí
‣ Adaptación al estímulo mecánico
๏
Un estímulo largo produce una corriente de entrada pero que va disminuyendo su amplitud
- Este proceso permite que cuando el estímulo es muy largo, la placa de inserción es tirada hacia
abajo porque aumenta la tensión en el filamento > se abre el canal pero la tensión sigue así que
la zona de inserción se desplaza hacia abajo para disminuir la tensión sobre el filamento y así
poder cerrar los canales
‣ La asimetría de respuesta por el movimiento
๏
Mover en un lado y otro no produce el mismo efecto por esta propiedad de los tip-links

- Se ha demostrado que en la posición neutra existe una población de canales que están abiertos,
porque sino no habría cambio cuando disminuye la tensión, o sea el neutro/basal no está en cero,
pero sí está más tirado hacia abajo > en e° basal hay una pequeña fracción de los canales
abiertos (20%), un nivel de tensión basal en los filamentos, así que hay algo de respuesta
cuando disminuyo la tensión sobre el tip link > Cuando aumenta la tensión, se abren los canales
• Si la fracción fuera el 50% esto sería simétrico
• Si no hubiesen canales abiertos basalmente, esto se abriría solo en un sentido, solo cuando
aumenta la tensión
‣ Electro-movilidad de Células Ciliadas Externas
๏
Retrolimenta movimiento de la membrane basilar, contribuyendo a la amplificación y sintonización
๏
Entonces, había un proceso activo de amplificación con la ganancia, que tiene que ver con las
células externas > su transducción produce efecto sobre las membranas
- El mecanismo era pasivo en relación a la membrana de la cóclea post mortem, por eso cambia
cuando está vivo, hay un proceso metabólico
- Patch clamp en célula externa aislada con pulsos de potencial, V clamp > se ve que la cél
responde mecánicamente, elongándose y contrayéndose la misma célula, o sea ocurre
transducción en un sentido como respuesta eléctrica por kiniocilios de las células internas pero
también hay una respuesta de membrana lateral que la hace estirarse y encogerse
Clase 22: Transmisión Sináptica I: Sinapsis Eléctrica

Monday, 22 May 2023
‣ Hemos estado estudiando excitabilidad celular, con todo lo que es mantención de voltaje y generación
de potenciales que es la actividad de las neuronas > cada célula se comunica con otras células como
una efectora, pues en algún momento las actividades celulares individuales se convierten en actividad
de la neurona a continuación > el punto donde esto ocurre es la sinapsis, que corresponde a la
comunicación funcional de los elementos, ya sea interno del SN o con otros sistemas
๏
Históricamente, a la segunda mitad del siglo 19, se desarrolló la primera idea de comunicación de
células demostrada experimentalmente, e inicialmente se atribuyó Camilo Golgi la Teoría Reticular y
se basó fundamentalmente en una interpretación histológica > en 1873 él desarrolló la impregnación
argéntica, con la cual por primera vez se vieron neuronas completas gracias a esta tinción que
invento, y se observaba la cercanía entre neuronas
- Gerlach postuló que el SN era un sincicio, una continuidad celular, y Golgi lo refina y dice que las
células están en contacto estrecho y la
comunicación es directa > que es
entonces un sincicio funcional donde las
céls son individuales pero están
conectadas y se distribuía la actividad
eléctrica a través de ellas
- En realidad, la T. reticular fue planteada
inicialmente por Von Gerlach en 1871 >
postuló la toería como una unidad
reticular (una sola red grande), y Golgi
posteriormente lo separa en células
conectadas como un sincicio funcional
๏
Al mismo tiempo, Ramón y Cajal, usando y
perfeccionando la técnica de Golgi, concluye
que cada célula es una estructura individual,
sin continuidad > llegan los axones y están
en cercanía pero no hacen contacto

- Y esto es lo que permite la comunicación entre una cél y otra > doctrina neuronal, a diferencia
de la teoría reticular
๏
Ambos recibieron el premio Nobel al mismo año sin
reconocer el trabajo del otro
‣ La histología aporta muy fuerte la idea de que cada célula es
una unidad y llega a estar en relaciones muy cercanas con
otras, pero no hay continuidad directa entre célula y célula
๏
La teoría reticular (izquierda) fue desechada y al mismo
tiempo, a inicios del s. 20, se empiezan a describir
moléculas liberadas a nivel de comunicaciones en terminales
axonales y efectores, describiendo neurotransmisores como
adrenalina y moléculas que pueden bloquear la comunicación
> Doctrina neuronal (derecha) y doctrina de sinapsis química
- Eran mediadores qcas las que permiten la comunicación y
continuidad de actividad
๏
Pero también se describieron en invertebrados que en
algunos caso había sinapsis eléctrica donde sí hay
continuidad y sincicio funcional, pero mucho menos casos
‣ El desarrollo de la microscopía electrónica permitió dilucidar mucho este fenómeno > se pudo ver, sin
las limitaciones de la resolución microscopía óptica tradicional, cómo se contactaban las neuronas
๏
Se observó que habían contactos entre céls > presencia de estructuras a nivel comunicacional de
contacto/cercanía de componentes de sinapsis donde se veía cierta asimetría, vesículas y
densificaciones que sugirió una comunicación con direccionalidad desde el punto con vesículas al
punto sgte
๏
Esta microscopía inicialmente se usó mucho en estudios de retina y corteza > también se
encontraba que habían zonas con membranas celulares en contacto estrecho, sugiriendo que en
algunas partes estaban lo suificiente% cerca para comunicarse eléctricamente
- Que la actividad de una célula modificara la act eléctrica de la sgte > Pre y postsináptica es la
direccionalidad de la sinapsis
‣ Si uno piensa en dos axones en paralelo, la act eléctrica de un axón esta restringida a ese axón > las
corrientes que pasan por él no tienen efecto en la corriente que pasa
por la cél aledaña > cada elemento entonces es independiente
๏
Si uno registra células contiguas, vemos un pot de acción en una y
nada en la sgte
- En condiciones fisiológicas, no patológicas, no se generan
potenciales por la simple corriente que pasa por la célula aledaña
• El que la corriente que pasa por una célula es capaz de
generar cambios sustanciales en la otra de manera que gatilla
un pot de acción solo se da en patologías donde cambia la
cantidad y población de canales, situación muy particular
- En condiciones normales las céls se comportan como individuales
‣ En cambio en un sistema donde la corriente que circula por una
corriente es capaz de pasar a la célula continua, hay conexión física
entre neuronas > dependiendo de la cantidad de corriente que pasa
hacia la segunda, uno observa en la post-sináptica una fracción de la
señal eléctrica de la primera > acople eléctrico
Sinapsis eléctrica
‣ Registro de dos neuronas en cercanía, en el núcleo reticular del tálamo
(Current clamp) > cuando dan pulso depolarizante, se depolariza la
primera célula y con varios pulsos de cierta magnitud se pueden generar

trenes de pot de acción > cuando el pulso es hiperpolarizante, la cel se
hiperpolariza y luego también genera pot de acción (por la remoción de la
inactivación de los canales de Na+ dependientes de voltaje)
๏
En la célula dos se observa en cambio una depolarizacion con espículas; y
después la hiperpolarización también con espículas, pero no como AP
- En la cél acoplada se observa la misma calidad de respuesta pero en
una cantidad mucho menor (el mismo tipo de cambio pero muchos
menos mV, ver escala)
- Una fracción del cambio de potencial de la cél uno, con los elementos
espiculares reducidos
• O sea de alguna manera el pot de acción generado por la corriente
inyectada en la cél 1 produce cambios de pot en la cel acoplada
‣ Si tenemos dos céls y registramos al mismo tiempo, podemos inyectar
corriente en una y registrar las diferencia de voltaje en ambas
๏
Se inyecta corriente en cel 1, se despolariza y genera pot de acción y en
la segunda casi sin retardo hay una variación de potencial con una
cinética distinta y además es fraccional, como 1/10 del peak de la cel 1
๏
Si el pulso es hiperpolarizante y medimos al final del pulso de corriente el potencial, podemos
calcular la R o conductancia
๏
El cambio en la cel 2 dependerá del circuito equivalente entre ambas células
‣ Circuito eléctrico equivalente
๏
Hay una R de acople, Rj (junction) y la R de la cel 2 > la I que pasa por esa parte depende de la
suma de estas resistencias
- Como sabemos el V1 que estamos poniendo, V2 será

proporcional a la relación entre R2/(Rj+R2) > Ley de Ohm
- La corriente en la rama R2 es Rj/R2 (divisor de tensión)
- Pero la corriente de esta rama es igual a la que pasa por cada resistencia (T. manguera)
๏
Despejando obtenemos que el potencial en la cel acoplada es el potencial aplicado o V1 * r2/Rj+R2
๏
Cuanto menor sea R de acople, incluso el limite cuando Rj tiende a 0, V2 es V1, porque si no hay Rj
es como si estuvieran total% acoplada

- Esto no pasa, usualmente hay Rj

- R1 es la R de membrana, la total y R2 es la de la otra cel
๏
La Rm celular depende del tamaño de la misma, cél más grande tiene menos Rm (porque hay más
resistencias en paralelo) y la R total es menor, así, la R de las células grandes son menores que la
de las pequeñas
- Si esta R es muy baja, el potencial en 2 siempre será una fracción de V1
- Lo que se ha visto es que cuando se observa sinapsis eléctrica, usualmente el elemento
presináptico tiende a ser de mayor tamaño que el postsináptico, para que pase suficiente
cantidad de corriente a la 2 a pesar de la pérdida
• Si la cél 2 es muy grande pasaría muy poca corriente y la división de tensión es alta de tal
forma que la modificación de potencial en la célula acoplada sería mínima
๏
La relación V1/V2 en función de Rj/R2 es caída exponencial > si Rj es 0 la relación V1/V2 es 1 > en
general la R de acople tiende a ser más grande que la de membrana así que en V2 “siempre" se
tiene una fracción de V1
‣ Axones presentan acercamiento de la membrana donde prácticamente no se observa unión > GAP
junction o unión forada
๏
Esto se observado vertebrados e invertebrados se ha observado este tipo de sinapsis (eléctrica) y
en algunas partes es muy importante
‣ A una célula se inyectó un colorante fluorescente (de bajo peso molecular) y después de un tiempo el
colorante difundió hasta 3 células más allá así que hay contacto eléctrico pero también difusión de
ciertos tamaños moleculares entre células > hay paso de moléculas directamente entre células
๏
Células amacrinas retinales de Goldfish (Whole-cell C clamp) > conexión extensa entre las células
๏
Cuando pasan corriente se despolariza o
hiperpolariza y en la cel 2 se ve un
cambio de potencial que es fracción del
de célula 1
- Si se invierte el sentido de pre y post,
se observa lo mismo > en este caso el
acoplamiento es uniforme > A está
acoplada a B de la misma forma que B
está acoplada a A
‣ Acoplamiento en V clamp
๏
2 células acopladas haciendo cambio de potencial en la primera y midiendo la corriente en ambas
por efecto del voltaje
- El potencial es ctte y la corriente que mido es la I necesaria para mantener el V y por eso tiene
polaridad opuesta a la de la corriente real que fluye (no
está invertido)
• Se observan los pulsos de potencial y el cambio de
corriente causado > vemos que en 1 y dos es muy muy
parecido el cambio de corriente pero de menor amplitud
• En el otro sentido, desde 2 hacia 1, tenemos algo muy
muy parecido
๏
Cuando comparamos la relación de I vs V para la dirección 1-2
y 2-1, las curvas se superponen > la union es simétrica
- La conductancia también se superpone > es curva de
identidad (pendiente igual a uno) y la comunicación es
igual de 1 a 2 que de 2 a 1 >
๏
O sea, las céls están acopladas y el acoplamiento es simétrico
> esto no es el caso de all sinapsis
‣ Acoplamiento eléctrico en vertebrados (peces)

๏
Se estimula con corriente y se registra el cambio de
potencial > gráfico de cambio de potencial postsináptico
en función de los cambios de potencial en el presináptico
- Al estimular con corrientes depolarizantes > se
depolariza la segunda célula también pero con
hiperpolarización el cambio de potencial es muy bajo >
o sea, hay rectificación
- En el cuadrante 1 conduce corriente casi linealmente y
en el cuadrante 3 casi no conduce > si la corriente es
hiperpolarizante, no tiene efecto en la cel acoplada
๏
Esta sinapsis se comporta como diodo, conduce en un
solo sentido > algo hace que esta sinapsis no sea
simétrica necesariamente
๏
Originalmente se pensó que no era tan relevante esto en
mamíferos y vertebrados pero se ha ido demostrando que
en ellos hay > por ej en céls retinales o amacrinas hay
importante cantidad de uniones sinápticas eléctricas
‣ Núcleo olivar de rata, Current Clamp
๏
Con corriente hiperpolarizante, al final del pulso se genera un PA en 1 pero en cél 2 hay un muy
pequeño cambio
Rat inferio
- En el sentido opuesto, si hago inversión de roles, ocurre lo
mismo > puedo calcular el coeficiente de acoplamiento
con los cambios de V en una dividido en los cambios de V
en la otra, y es del orden del 1%
๏
Si hay sinapsis eléctrica en un población no implica que all
las células tengan la misma fuerza de sinapsis o eficiencia
- Pueden haber muchas variaciones y diversidad de sinapsis
eléctrica entre cels de un grupo celular supuestamente
homogéneo, tienen distinta conectividad entre ellas
‣ Se ha encontrado que sinapsis eléctrica no son iguales en all sp
๏
En rata tiene un coef de acoplamiento (CC) 0.87% y en
mono 1,55%
๏
Además, la p de encontrar neuronas conectadas también
cambia, en la rata era como el 50% de las cels que tienen Hoge et al., J Neurophys
comunicación eléctrica con otras de su cercanía pero en

mono son el 100%
- O sea el mono tiene mas cdad de sinapsis y el coef es
mayor, además todas las estudiadas son simétricas,
conducen en ambos sentidos > rata y mono, o sea eso se
conservó en la misma estructura en difs especies
‣ Los cambios en la cél acoplada no tiene el mismo curso
temporal que los de la primera, además de la reducción de la
amplitud > Se ve mas lenta, desfasada y mas pequeña, o sea
que hay una propiedad de la sinapsis produce estos cambios
Filtro pasabajo en sinapsis eléctrica
‣ En células bipolares de retina > inyección de corriente pequeña,
que no genera PA, pero sí potencial de membrana
๏
Inyectaron un sinusoide y se ven en negro los cambios en el presináptico y en gris el postsináptico
> distinta frecuencia corriente (ver escala de tiempo, por eso se ven igual)
- Tenemos que con 2 Hz hay una fracción del pot que se ve en la acoplada, como la mitad; pero
con 10 Hz cambia la relación, se reduce en la segunda, mientras que con 100 Hz la comunicación
esta muy muy reducida
๏
La razón de acoplamiento en función de la frecuencia > Es relativamente ctte el acoplamiento
hasta los 10 Hz pero si aumentamos la frecuencia, el acoplamiento cae
- O sea está filtrando la señal, cuando aumenta la frecuencia cae la comunicación
- Razón de acoplamiento = señal de salida/señal entrada
• Señal entrada es la del potencial de cél 1 y la de salida es la cél 2
๏
Además, en 2 Hz el punto temporal del máximo coincide con el max de la acoplada y a 10 el max
de la acoplada esta desfasado con respecto a la señal de entrada, o sea se reduce la amplitud pero
también hay desfase de la onda
- Gráfico cambio de fase señal de entrada y salida en función de la frec en escala logarítmica >
más frecuencia, más desfase
๏
Están pasando dos cosas con señal sinusoidal > reducción de amplitud con la frecuencia pero
también cambio de fase con la frec, es decir, el potencial se achica y desfasa
‣ El mismo experimento pero en céls amadrinas (Current clamp registrando cambios de V) >
observamos el mismo comportamiento general, cae el coef de acoplamiento y sube el desfase en
función de la frec
Goldfish retinal amacrine cells
Goldfish retinal bipolar cells
Veruki & Hartveit, Neuron, 33 (2002) 935-946
Arai et al., J Neurosci 30 (2010) 9260-9270
๏
No solo están acopladas sino que el acoplamiento depende de la frecuencia y la señal de entrada
se desfasa en el sistema
- Viendo el análogo eléctrico donde incluimos la capacidad de la membrana > tenemos una R de
acople y también un capacitor, pero al tenerlo con esta disposición, se comporta como filtro
pasabajo y a medida que aumenta la frec se cae el paso o la amplitud
• Este filtro está dado por la frecuencia de corte
- Depende de la R de acople y de la Capacitancia de la membrana
• R es de acople pero tb esta presente la de Rm solo que no se ve

๏
El capacitor a tierra implica que se filtra, reduce amplitud de la señal de frec altas y al mismo
tiempo produce cambio de fase porque una parte de corriente se va al condensador y esa ctte de
tiempo de carga del condensador implica que por la estructura de los componentes hay una
reducción de amplitud y un cambio de fase > por la estructura básica de la comunicación eléctrica
tenemos filtrado de frecuencias altas y por eso no se ve comunicación con señales de alta
frecuencia
- Así, la R de acople y la Cm son determinantes en la respuesta en frecuencia de la sinapsis, uno
puede ver cambios pero no se pueden seguir cambios muy rápidos en actividad de la
presináptica
- Para que hubiera filtro pasalto tendría que ser el capacitor el que conectara a la célula así que
no se puede :) siempre pasa bajo
‣ Si observamos los cambios espontáneos del Vm entre dos células acopladas
๏
Se ve que están sincronizadas las actividades o cambios de Inferior Olive
potencial de membrana basal entre dos cels, pero prob% las

frecuencias de sintonía dependen de la sp y según la
Turecek et al., J Neurosci 36 (2016) 6497-6502

estructura interna de esta comunicación
‣ También podemos ver en cels que generan espigas es condiciones
basales y la cel acoplada a ella también genera potenciales de
acción
๏
Análisis de la estructura temporal de estos cambios usando
sistema de correlaciones cruzadas o Cross correlation > básicamente se multiplican ambos registros
y se estandariza
Goldfish retinal amacrine cells
- Cuando están los registros coincidentes,
como son normalmente, hay un peak
Veruki & Hartveit, Neuron, 33 (2002) 935-946

muy grande
- Se desplaza un registro respecto al otro
hacia adelante y atrás una cantidad
determinada de segundos (time las) y
cuando la primera célula espiga, la otra
también lo hace en concordancia, o sea
la actividad de la segunda está
determinada por la presencia de una
espiga presináptica > activación a través
de sinapsis
๏
En cross corr en función del tiempo
(abajo) tenemos armónicos pero lo
importante es que en 0 tenemos el
máximo Long et al., Nature Neurosci 8 (2005) 61-66
- Cuando no están conectadas eléctricamente el cross corr es cero, y cada una funciona
individualmente de la otra
๏
La correlación cruzada en función del coef de acoplamiento muestra que hay una tendencia al
aumento de la correlación cuanto mayor sea el coef de acoplamiento
- Porque si el coef de acoplamiento es bajo los cambios de pot en la acoplada es muy bajo, si
aumenta este coef la postsinaptica sigue más cercanamente los cambios de V de la presinaptica
‣ Estudio en cels de corteza > se ven ciertas propiedades de filtro pero también variabilidad
๏
En presináptica son todas prácticamente iguales pero en postsináptica tenemos un promedio en
negro pero con desviación estándar, lo que puede depender de cambios espontáneos del pot de
membrana de la cel postsináptica (que va variando) y la respuesta es muy similar pero cambia algo
๏
Estas céls pueden generar descargas tónicas (abajo en tonic mode) > Los pots de acción están casi
totalmente filtrados por la sinapsis eléctrica
๏
Cuando hay trenes de potencial de acción (burst mode) > prácticamente ninguno de los potenciales
de acción individuales se ve en la postsináptica, pero el cambio “basal” sí se replica (ver escalas)
‣ Este fenómeno que parecía ser algo poco común, se ve en neuronas cerebelares, de retina, en corteza,
etc > o sea las sinapsis eléctricas se dan mas frecuentemente de lo que se creía antes
spiking (FS) cells: somatostatin-expressing
Low threshold-spiking (LTS) cells and fast-
inhibitory neocortical interneuron
← Mean
Mean±±SD
SD
Thalamic reticular neurons in tonically spiking
mode (left) and bursting mode
Connors & Long, Annu Rev Neurosci. 27 (2004) 393-418
‣ Potencial postsináptico excitatorio eléctrico

๏
Potencial postsináptico no alcanza a generar un pot de acción (escalas) y se dice que la
comunicación es instantánea pero siempre hay un lag por el filtro pasabajo y la comunicación en sí Goldfish Mauthner neuron
๏
En general se llama potencial postsináptico
excitatorio eléctrico ESPS pero claro que si la
cél se hiperpolariza, se observa hiper
polarización (inhibición de la act) de la post así
que no todo es como aparece en libros, puede
ser potencial postsináptico inhibitorio
- Igual hay que considerar que si la primera
célula se hiperpolariza en 10 mV, el cambio
que implicará en la postsináptica es muy
pequeño
GAP junctions
‣ ¿Cómo se genera la sinapsis eléctrica? > por la Smith & Pereda, PNAS 100 (2003) 4849-4854
presencia de GAP junctions > 6 conexinas forman un conexón y el contacto entre dos conexiones de
células distintas forma un GAP junction o uniones foradas
๏
Esto es lo que uno ve en corte transversal pero en freeze fraction se ven poblaciones de conexones
por el lado interno de la membrana > la unión eléctrica son parches de la membrana con múltiples
canales haciendo la conexión
‣ Eso sugiere que esa es la conexión pero para demostrar que la sinapsis eléctrica es mediada por los
GAP junction
๏
Lo más fácil es en Whole cell V clamp poner corriente
hiperpolarizante y ver que la sinapsis es simétrica, para
luego usar mefloquina MFQ, que es medicamento de
malaria > bloqueador de conexina (conexina 36 y 50)
๏
Con MFQ se hace lo mismo pero se tiene que no hay nada
de efecto en la cel 2 y al invertir no hay nada en la 1
- Bloquear farmacológicamente los GAP junction de tal
manera que ya no conducen (ni corrientes ni
moléculas) eliminó la sinapsis eléctrica
‣ Lo mismo se pude hacer con mutantes sin GAP junction y así
comparando las fluctuaciones espontáneas subumbrales del
pot de membrana
๏
En WT se encuentran muchas células acopladas cuya variación del pot está sincronizada con otras,
pero en mutante ya no están acopladas y no hay sincronización entre estas neuronas
- Cross corralograma (cross corr) las células WT están total% sincronizadas > si las ondas están en
contrafase no están sincronizadas. En las mutante nunca están sincronizadas
- Estas células igual presentan descargas y cuando hay, estas descargas también están siempre en
concordancia en WT pero son absolutamente independientes en el mutante
- O sea el que no haya conexina 36 elimina la sinapsis eléctrica
๏
En oliva bulbar, un núcleo cerebral, hay mucha sinapsis eléctrica, por eso se trabaja ahí
๏
Estas células tienen variaciones espontáneas de su potencial de membrana > No tienes que inyectar
corriente para trabajar aquí, usas una propiedad de la misma cel
‣ Larvas zebrafish > sinapsis qca y eléctrica al mismo tiempo así que hay pot post sináptico eléctrico
excitatorio y después viene uno qco
๏
Como la sinapsis eléctrica tiene grado muy bajo respecto al estimulo, parte de esto no se ve porque
está bajo del artificio del estímulo > estimularon varias cáls pero registraron una sola
๏
Eliminando conexinas 35 o 34 se ve que la primera parte, la eléctrica desaparece total% quedando
solo el pot qco
Zebrafish
- Las conexinas son la base de la sinapsis
eléctrica que permiten el paso > por GAP
junction pueden pasar iones pero
también cosas más grandes como ATP,
NADPH
‣ ¿Por qué hay sinapsis eléctricas que no
rectifican y otras si? Algunas conducen en un
sentido mejor que en el otro
๏
Comportamientos distintos, como que
cambiara la R de acople según el sentido >
si la corriente es depolarizante el cambio
era mayor que con corriente
hiperpolarizante, conducen de forma
asimétrica, de A a B mejor que de B a A
Lasseigne et al., Elife 10 (2021) e66898
- Podría ser que los dos conexones que forman el GAP

sean distintos > si las conexinas son distintas no
conducirán igual
‣ Experimento de cels que expresaban una u otra conexina
y tomaban una cél del cultivo A y le hacían patch, luego
hacían lo mismo a la cél B y después se ponían en
contacto y luego de un tiempo estudiaban la sinapsis
๏
Si ambas expresan conexina 32, la corriente es óhmica,
o sea la R es ctte. Lo mismo conconexina 26 la
corriente es ohmica, la R es ctte
๏
Luego juntaron céls con conexina26-conexina32
(distinta proteina de GAP en cel 1 y cel 2) y al
registrar se ve que Cx26/Cx32
la R no es ctte, la pendiente V-I
Suchyna et al., Biophys J, 77 (1999) 2968-2987
del registro de canal único

- Resistencia es mayor en el cuadrante 1 que en el 3,
o sea en una polaridad conducen mejor que en la
otra
- La simetría dependerá de los conexiones que
formen el canal y eso depende de cada tipo celular
๏
En células de expresión asimétrica se ve esto también
> la corriente macroscópica y es consistente con la
aproximación mutada, mouse
o seaneuroblastoma
en canales únicos y en
2A (N2A) cells
célula completa el tener un GAP compuesto por
distintas conexinas produce el mismo efecto
‣ Entonces tenemos que la sinapsis eléctrica conduce de
una cél a una cel acoplada, son pasabajos o sea tienen
respuesta frente a frecuencia (mantienen más las
apariciones de baja frecuencia), la magnitud de la
despolarización postsináptica depende de la R de acople y
mientras más GAP menos R entre cels y más
acoplamiento
GAP junctions son modulables intracelularmente
‣ Midieron la corriente para distintos potenciales > Se grafica la R de acople en condiciones control vs
al poner dopamina (DA), la cual produce cambios intracelulares de AMPc
๏
La pendiente se va casi a 0, así que aumenta mucho R, con dopamina, que está modificando la
comunicación eléctrica entre dos cels cuando aumenta el AMPc
๏
Si inyectas AMPc tenemos el mismo efecto en la conductancia, disminuye la conductancia entre
cels con el AMPc
๏
Poner colorante en la cel y después de un tiempo se ve que alrededor de ella muchas cels están
teñidas; pero si haces lo mismo con dopamina muchas menos céls están coloridas > o sea hay
menos comunicación
• Con un antagonista de la dopamina aumenta el área de la comunicación
• Al añadir AMPc en lugar de dopamina ocurre lo mismo, menos tinción
๏
Entonces, vemos que se reduce mucho o sea que hay modulación > hay moduladores así que el que
dos céls estén conectadas sinápticamente no implica que esta comunicación sea igual siempre,
depende de la historia de las cels involucradas
Funcionalidad de la sinápsis eléctrica
‣ Hemos visto que experimentalmente las céls están comunicadas pero no hemos visto si tiene
relevancia funcional
๏
Se hace estudio de la difusión entre cels de retina en distintas condiciones fisiológicas como
adaptación a la oscuridad > hay gran cdad de cels tiñéndose, o sea hay mucha comunicación x
sinapsis eléctrica pero con luz intermedia se redujo mucho la cantidad de área teñida (mesópico)
- Poniendo agonista D1 de dopamina, se reduce mucho más
- O sea hay un cambio funcional en la retina
๏
Hacer cambios funcionales de la retina, como adaptación a la oscuridad ello implica cambios de
acople eléctrico entre células > activar funcionalmente a la retina con más luz modifica la conexión
eléctrica entre céls, probablemente por liberación de dopamina, que en general reduce el
acoplamiento entre las céls
‣ Otro ejemplo funcional > vieron células acopladas del núcleo supraóptico que participan en el control
del reloj interno en ratones y se hizo un KO de una conexina que elimina el acoplamiento
(comprobación con current clump)
๏
Se hizo experimento conductual > registrando actividad de ratones en distintos días (superpuestos
verticalmente) y sincronizados por hora (horizontalmente) y se ponen 12 hrs de luz y 12 de
oscuridad > más actividad nocturna
- Los WT en la noche hay más actividad al inicio, se reduce y al día se acaba de nuevo > pero
cuando le apagas la luz los animales igual tienen día y noche, aunque no sea 24 hrs pero tienen
su reloj interno
• Sin claves externas tiene su propia noche durante la cual no hay actividad, y a pesar de que
no hay luz en el día igual descansa, su reloj
sigue funcionando y es sincronizado
- Con los KO el patrón se mantiene, pero
desordena un poco, con un algo más de actividad
en el día y actividad en la noche más dispersada
• Pero cuando le cortas la luz, no se reconoce
un reloj interno, mucho menos preservado y la
frecuencia además es distinta a la anterior
๏
O sea al sacar conexinas particulares, de una
población neural que expresa una proteína
relacionada con el ciclo circadiano, es suficiente
para tener cambio funcional muy importante o sea
las sinapsis eléctricas son relevantes funcionalmente
Long et al., Nature Neurosci 8 (2005) 61-66
‣ Pero no solo puede cambiar la frecuencia de

modulación sino que también por la misma actividad
๏
Goldfish con sistema de activación muscular de la

cola que permite arrancar rápidamente por unas céls particulares de gran axón > reflejo de
escapada, mediada por células con sinapsis qca y eléctrica en las mismas células, primero ESP
eléctrico y después químico
๏
Estimulación a alta frecuencia al presináptico por distintos tiempos (de 0 a 10 min) y vemos qué
pasa con la comunicación > el pot de comunicación eléctrico aumenta con el tiempo de la misma
estimulación
- Si no estimulan, la conductancia se mantiene en 1 pero al estimular con tal frecuencia por más
tiempo, aumenta el pot sináptico eléctrico hasta 40% > se alarga el peak (gráfico espiga)
Goldfish
Yang et al., Nature 348 (1990) 542–545.
4 min 6 min
• A esto se le llama Potenciación Post-tetánica > después del estimulo tetánico la sinapsis está
potenciada
๏
Así, si las propiedad intrínsecas pueden ser moduladas por otros moduladores, también la misma
actividad puede modificar la comunicación eléctrica entre células
‣ Se observan conexiones de sinapsis
eléctricas mediadas por GAP junctions
pero en la misma dendrita, y con
direccionalidad dada por las vesículas,
hay sinapsis qca
๏
La diferencia fundamental entre estas
sinapsis tenemos que es el curso
temporal
- LaHirudo medicinalis Welzel & Schuster, Sci Rep 8 (2018) 12579
eléctrica es prácticamente
instantánea pero la qca tiene un
retardo de 1,5 ms en el ejemplo
entre el inicio del pot presináptic y
el inicio de potencial postsináptico
> una de las cosas que separa la
sinapsis eléctrica de la qca es la
velocidad
- Instantánea en términos biológicos,
igual vimos un retraso y filtración y
todo eso
Clase 23: Transmisión Sináptica II

‣ Vimos que inicialmente se encontraron dos tipos de comunicación entre neuronas, o entre ellas con
sus efectoras; la transmisión eléctrica formando sincicio funcional o transmisión química entre los
sistemas donde la transmisión era menos continua
๏
Eléctrica es transmisión rápida de la actividad entre el pre y post sináptico
๏
Las GAP junctions son moduladas en el tiempo por una serie de elementos celulares > el
metabolismo puede modificar la eficiencia de la comunicación eléctrica celular
๏
El gráfico de la eléctrica es Current clamp, mostrando potencial; pero en la de sinapsis qca se ve la
corriente, es Voltage clamp > la actividad de la pre y genera un cambio en la acta de la
postsináptica, con un desfase temporal
- El sentido de la corriente está invertido, por la época del exp
‣ Si uno ve la presencia de las proteínas relacionadas con la comunicación en la filogenia > el proteoma
de uniones GAP se ve que a nivel de cordados son conexinas y panexinas pero hay moléculas
equivalentes en invertebrados que se llaman inexinas, cumplen la misma función y aparecen en
nidaria (el primer grupo donde hay SN)
๏
En pongeario (poriferas) no hay SN pero sí células excitables
‣ En cuanto al proteoma sináptico como tal se ve que las proteínas de sinapsis ya aparecen mucho más,
Ovsepian& Vesselkin, Rev Neurosci 25 (2014) 821–832
no solo animales
๏
Protosinapsis > hay componentes, pero no es sinapsis aun, moléculas que cumplen algunas funciones
equivalentes en mamíferos como citocinas
๏
Las prots de comunicación sináptica qca y eléctrica parecen como 750 M años atrás
๏
Evolución de este sistema sobre todo a nivel de especies
Antecedentes de Sinapsis Química
‣ Para la época del postulado original de Ramon y Cajal había una serie de evidencias pero la primera
demostración de la existencia de una comunicación química fue a través del experimento de Loewi
๏
Él hizo un exp que originó la idea de “aguas abajo” o “aguas arriba"
- Extraía corazones de anfibios junto con el nervio vago que lo inerva > estimulaba el vago y
registraba en quimógrafo (cilindro con papel que se rayaba para anotar las contracciones)

• Él estimulaba el vago y después de un tiempo, dependiendo de la intensidad de estimulación,

ocurría bradicardia (disminución del ritmo cardiaco) o incluso paro cardiaco
- Conectó un corazón y el lqdo que salía de él lo perfundía en un segundo corazón (aguas abajo
del corazón 1) > estimulaba el corazón 1 y se producía bradicardia, y después de un tiempo el
segundo corazón, con el afluente del primero, también sufría bradicardia
• O sea, había algo que se liberaba por la estimulación del vago que producía en el corazón
aguas abajo el mismo efecto > lo llamó Vaggustoff = substancia del vago
๏
El estimular el vago inducía la liberación de una sustancia soluble que producía los mismo efectos
que producía la estimulación del vago
- Durante la superfusión con Ringer el corazón mantiene su frecuencia muchas horas más a pesar
de estar in vitro (en anfibios pasa eso)
• Cuando se superfunde con el líquido que viene del otro corazón hay bradicardia
• Al volver a Ringer vuelve al ritmo normal y cada vez que estimulaba el corazón aguas arriba
por el vago disminuía la frecuencia de actividad
๏
Esta es la base para pensar que hay un elemento qco que mediaba los efectos de la estimulación
eléctrica del vago sobre el corazón
- Al mismo tiempo se están juntando otros antecedentes de moléculas con efectos a nivel del SN
periférico autonómico como adrenalina, pero esta fue la primera demostración de una sinapsis
mediada por moléculas soluble
‣ Con la aparición del microscopio electrónico en los 50’ ya se puede ver
๏
Sinapsis centrales > La cantidad de vesículas presentes define al elemento presináptico
- Se ve la organización de la sinapasis > engrosamientos, vesículas que pueden ser de varios tipos,
espacio sináptico y una gran cdad de densidad electrónica mayor a nivel postsináptico y
presináptico
• Se ve más oscuro, más depósitos de la tinción (nitróxido de osmio) y ahora se sabe que esta
asociada a la cantidad de proteínas
• O sea se ve que la sinapsis es una estructura tal que si se hace fraccionamiento celular se
obtiene sinaptosomas, tanto pre y postsinápticos > estructura donde están anclados los
componentes pre y post, que se mantienen en el tiempo
‣ Al mirar estas vesículas se tenía la idea de que ahí está el contenido químico que se libera > exp
simple donde se toma el tejido nervioso y ven cómo luce normalmente
๏
En estado basal > Elementos pre y postsináptico, la membrana basal implica que son dos tejidos
distintos, prob% era periférico, se ven las vesícula y el espacio sináptico
๏
Después de estimular fijó rápidamente la muestra para ver qué pasaba
- Cuando se veía post la estimulación ya no solo se veían vesículas en presináptico, sino que se
veían los omegas, porque las vesículas están saliendo de la membrana
• O sea, sugería fuertemente que durante la estimulación había fusión de las membranas de la
vesícula con la MP > exocitosis
- Exocitosis del contenido, no de la vesícula, la vesícula queda asociada a la membrana y por
difusión sale el contenido al extracel
๏
Se observa entonces que después de estimulación el interior de la vesícula ya está en contacto con
el exterior
- Se concluye que durante la actividad se produce la fusión de la membrana vesicular con la MP y
una vez el contenido difunde produce cambios a nivel de la cel postsináptica
Estudios neuromusculares de Sinapsis Química
‣ Preparación neuromuscular > tiene la gran ventaja de que si vemos una FM con dada longitud, la
comunicación entre la fibra neuronal motora sobre la célula muscular esquelética es una fracción muy
pequeña y se llama placa motora
๏
Al teñir un nervio motor se ven unas placas rectangulares literalmente
๏
La relación > son varias FM por axón, pero cada FM es inervada por sólo un axón muscular
๏
Está tremendamente organizado > corte de terminación nerviosa sobre FM esquelética
- En toda la sinapsis neuromuscular se repite esta estructura
- Se ven pliegues de la MP de la fibra presináptica y se ve una zona de aumento de la densidad
con muchas vesículas asociadas > y esto está en concordancia con un plegamiento de la
membrana de la cél muscular, enfrentadas en la zona activa
- Esto se repite muchas veces > esquema de cintas de conexión entre el elemento pre y
postsináptico donde se organizan las vesículas que están enfrentando las hendiduras de la
membrana de la FM
‣ Usando una técnica de freeze fraction (congelación de tejido y quiebre para separar componentes) se
separaron los componentes pre de los postsinápticos para ver cómo están estructurados espacialmente
๏
Reconstrucción idealizada > Alrededor de la zona activa hay vesículas muy alineadas
- Está separada el componente intracelular de la presináptica donde se ven protuberancias que
serían las vesículas fusionando
- Y en la parte externa de la membrana se ven como prolongaciones en concordancia con bultos
en el componente interno de la membrana presináptica
- O sea esto significa que hay componentes estructurales asociados
• En presináptico tenemos vesículas muy organizadas pero al lado de ella componentes mucho
más chicos
• En postsináptico se ve algo similar con gran cantidad de partículas muy cerca y enfrentando
el lugar que es el sitio activo a nivel presináptico
๏
Años después, usando inmunofluorescencia se ve que todos los componentes muy organizados del
presináptico corresponden a proteínas y son canales, y las partículas de la postsináptica
corresponden a receptores
- Estructuración muy importante de los componentes participantes de la sinapsis, tanto a nivel pre
como postsináptico
• Igual esta es una simplificación porque hay muchas más moléculas que anclan la mebrana
pre de la postsináptica
‣ Preparación neuromuscular para estudiar cómo funciona la sinapsis
๏
Si estimulo el nervio conectado a la FM y permito que ocurran los fenómenos fisiológicos normales,
la fibra se contrae y ahí se me acaba el registro, por los electrodos
- Se trabajó en un sistema que permitiera registrar modificaciones de potencial sin generar pot
de acción en la célula postsináptica
๏
Se impidió que se generara pot de acción en la FM > luego estimularon eléctricamente el axón y
registrar desde donde se ve la placa muscular y también a varias distancias más a lo largo de la
FM (que son muy largas, cada cél va de tendón a tendón) > se tenía respuesta a nivel postsináptico
- A distintas distancias se veía que la amplitud de la respuesta caáa de acuerdo con la ctte de
espacio > o sea la act generada en la FM se genera a nivel de la placa y se conduce
electrotónicamente por el resto de la FM
๏
Esquema de la circulación de corriente y el equivalente en circuito de la cel donde la resistencia en
el extracel es 0 para hacer el calculo (Ley cable)
๏
Entonces, si ellos mantenían en Voltage clamp la célula muscular y estimulaban el axón
- Con V clamp puedo controlar el potencial postsináptico para evitar que se alcance el umbral y
hayan pot de acción por la FM excitable, pero sí podemos registrar la corriente asociada
- Se veía que el potencial postsináptico excitatorio (ESPS) era producido una corriente de entrada
a pot de membrana en reposo 11
• Esto sugiere la movilización de cationes > con pot de equilibro mayor que el de reposo la
célula
• Si registramos a cierta distancia cerca de la placa, se veía después de un retardo como un
hombro y después un pot de acción
• Si registramos lejos de la placa se ve solo el potencial de acción, y no el hombrito
- En condiciones normales la estimulación genera un ESPS que cuando llega al umbral descarga el
pot de acción, el hombro es solo el excitatorio y por eso se pierde con la distancia
• Acotación: esta es una preparación muy distinta al resto de las sinapsis que conocemos
porque la cantidad de neurotransmisores que se libere por un potencial de acción en la
presináptica siempre es supraumbral > cuando generas un pot de acción en la fibra nerviosa
que inerva el músculo se genera una liberación de neurotransmisores que siempre cause una
despolarización supraumbral y siempre se contrae la fibra muscular en condiciones normales
- Este ESPS se ve de 30-40 mV, pero muchas en las sinapsis los ESPS tienen de 1 a 5 mV
๏
Así, tenemos la generación de un ESPS que cuando alcanza el umbral gatilla un AP
‣ Tenemos los componentes > la actividad presináptica que liberaría un neurotransmisor que a través de
receptores específicos genera un pot postsináptico excitatorio de propagación electrotónica que
cuando alcanza el potencial umbral gatilla un potencial de acción
‣ ¿Qué hace que se produzca esta comunicación? > Exp con registro pre y postsináptico del voltaje se ve
el PA presináptico y luego el ESPS con un retardo
๏
Cuando estimulaban tenían una respuesta postsináptica que en condiciones normales era un
potencial de acción
- Como nos interesa estudiar la comunicación sináptica se colocó TTX para bloquear canales de
sodio dependientes de potencial
• Recordar que TTX es sobre este tipo de canales que tienen estructura de una sola molécula >
es un monómero con cuatro divisiones pero es solo una molécula
• Entonces se ve que hay cierto efecto presináptico, cae un poco el tamaño de su AP, pero
después de un tiempo cae la amplitud del potencial de acción a nivel postsináptico también, y
se nota más este hombro > tiempo después desaparece el PA pero tenemos el ESPS y sigue
cayendo el PA presináptico
• Al final ya esta muy deformado el PA presináptico y se produce igual un poco de ESPS hasta
que eventualmente no hay nada de respuesta postsináptica
+TTX
↓
Time
Katz & Miledi, J Physiol 192 (1967) 407-436

๏
A medida que disminuye la amplitud del pot presináptico disminuye la magnitud del postsináptico
excitatorio > entonces en términos de actores moleculares, el potencial post excitatorio no lo
producen los canales de sodio dependientes de potencial, sino que los neurotransmisores liberado
- Si disminuye la magnitud de ESPS una buena hipótesis es que se están liberando menos
neurotransmisores, o sea a medida que disminuye la magnitud del AP presináptico disiminuye la
cantidad de neurotransmisores > gráfico de la magnitud del ESPSen función de la magnitud del
PA presináptico
• A medida que cae el PA, cae el pot postsináptico excitatorio (en escala semi log que vuelve
la relación entre ellos lineal)
๏
Así, la primera idea original era que la cantidad de neurotransmisores dependía directamente del
potencial de acción > es cierto en alguna medida pero no es por el potencial como tal
- Igual el neurotransmisor cuando se libera al espacio sináptico, cómo se termina su acción > se
podría degradar por cosas en el medio extracelular para que acabe su efecto, se podrían
recapturar/capturar o simplemente difundir pero como el espacio sináptico es tan pequeño
llegan a los receptores
• Igual hay captación de otros sistemas, no solo de la misma cel que los libero
• La difusión se llama spillage o derrame > lo que se arranca de la sinapsis
๏
Entonces la magnitud del PA pre se correlaciona bien con la magnitud del ESPS
‣ Se hizo más o menos lo mismo > En presencia de TTX no hay PA TTX-dependiente
๏
Se ven cambios de la presináptica abajo y arriba la presináptica > se coloca una corriente de
entrada que produce cambio de V en la presináptica
- Como cambio la corriente, se puede relacionar la corriente que cambia el voltaje y la magnitud
del ESPS
• Se tiene un cambio de pot presináptico que no produce mayor cambio a nivel postsináptico y
cuando aumento la corriente inyectada el pot post sináptico aumenta
- Entonces, experimentalmente se produce una despolarización del elemento presináptico en
ausencia de PA pero igual se produce un efecto en post sináptico > o sea no es el PA en sí
mismo sino que la corriente que uno inyecta mientras cambie el potencial se tiene una
respuesta
๏
Para hacerlo más evidente, se hace con TTX y además TEA > como no hay corrientes repolarizantes
de potasio la cél presináptica se mantiene despolarizada mucho más tiempo y se ve que el ESPS
aumenta no solo en magnitud sino que también en duración > si aumenta la duración del potencial
presináptico aumenta la del ESPS también
+ TTX + TTX + TEA
- Van cayendo los potenciales presinápticos y de la misma manera caen los postsinápticos y la
relación en este caso es sigmoidea (posiblemente porque el rango de medición fue mayor)
• Entonces se tiene que los potenciales presinápticos de cierta magnitud, hasta como los 50
mV no producen un efecto en la postsináptica pero luego sí
- El potencial postsináptico depende de la magnitud pero también de la duración del pre y
la relación es sigmoidea
- TEA bloquea las corrientes de K+ voltaje dependientes que repolarizan por eso el potencial se
ensancha y dura más > delay rectifier
• No bloquea todas las corrientes de K+ por eso vuelve eventualmente al V basal
• Durante el tiempo que se mantiene despolarizada la pre, se mantiene el ESPS
- Entonces igual se liberan neurotransmisores pero no exactamente igual
๏
Así, la cantidad de neurotransmisor liberado al parecer depende de la magnitud de la
despolarización y de su duración, con una relación sigmoidea respecto al máximo de despolarización
- Estos exps hicieron inferir que lo que era relevante para la liberación de neurotransmisor era el
cambio de potencial y que el el potencial presináptico producía la fusión de las vesículas
‣ Para comprobar si es o no el potencial en sí > Estimular y registrar potencial pre y postsináptico y en

algún momento poner cloruro de cadmio 1 mM en el medio
๏
Registrar la respuesta 1, 3 y 5 min después del CdCl2
- Al min se ve que el ESPS alcanza el umbral y genera PA postsináptico
- A los 3 min hay ESPS pero no PA porque no alcanza el umbral
- A los 5 min el ESPS incluso menor
๏
Si fuese el pot presináptico lo que determina la transmisión sináptica entonces no tiene sentido
esto, porque el PA presináptico es igual en todos casos pero igual cambia el postsináptico,
disminuyendo > o sea, sugiere que no depende directamente del potencial sino que de algo que
este hace
- El cloruro de cadmio es una molécula que en solución acuosa se separa en iones cadmio (catión
divalente) y Cl- > de alguna manera parece reemplazar al calcio en cuanto a carga pero en
función hay algo distinto porque al tener cadmio presente se reducen los ESPS
• Si ponemos un catión bivalente (también sirve níquel y cobalto) siempre se tiene el mismo
efecto de que reducen o incluso, si se usa bastante, eliminan completamente el ESPS, y la
diferencia de función con el Ca++ tiene que ver con la conducción a través del poro (y su
radio hidratado)
1 mM-CdCl₂
BAPTA iontophoresis
- Lo que sugiere que no es el voltaje presináptico sino que es el calcio a nivel presináptico
que produce o modifica la liberación del neurotransmisor
๏
Se tiene también graficada la amplitud del ESPS en función de la concentración de Ca++
‣ Otro sistema, usando BAPTA, un quelante de calcio de alta afinidad, que baja su concentración
importantemente > se inyecta iontoforéticamente BAPTA en la célula presináptica, no en el medio 14
๏
Se ve que tiene cierto efecto pero muy poco, casi no cambia el PA presináptico, y de hecho
aumenta un poco
- Pero el ESPS se ve que se hace más lento y eventualmente es subumbral y no se gatilla PA
๏
O sea, si quito el calcio a nivel presináptico disminuye el ESPS > así que se puede interpretar como
que es el calcio de la cel presináptica la que genera el ESPS
‣ Entonces, mecanísticamente, si tuviéramos que explicar el sistema > el potencial de acción se propaga
por la fibra neuronal y cuando llega al terminal eso genera la salida del contenido vesicular, cuyo
gatillante podría ser calcio > la despolarización inducida por el PA produce apertura de canales de
calcio y esto produce entrada de corriente de calcio que al parecer es necesaria para la generación
del ESPS > o sea, no es el potencial sino que la apertura de canales de calcio durante la
despolarización del PA presinaptico lo que genera la liberación del neurotransmisor
‣ Se miden potenciales postsinápticos en distintas concentraciones de calcio
๏
A medida que van aumentando [Ca++] (de 0,2 a 0,3 mM), aumenta de a poco el ESPS
- La concentración intracelular de calcio es como de 1 mM
- Gráfico de la magnitud del ESPS en función de [Ca] > la magnitud depende de la concentración
de calcio intracelular del presináptico, porque la cantidad de calcio que entra cuando se abren
los canales depende del gradiente de calcio
๏
O sea no es el potencial en sí mismo, sino que el potencial que induce una corriente de calcio
‣ Se mide el voltaje en una situación experimental con calcio disminuido así que los ESPS no son muy
grandes para que uno pueda ver el ESPS como tal y no el PA generado por él 16
๏
Entonces estimulan o no con y sin calcio, en distinto orden
- Si estimulan el nervio en ausencia de calcio prácticamente no es nada la respuesta, pero si
ponen calcio un tiempo antes, y estimulan, tienen ESPS
- Si solo ponen calcio y no estimulan, no pasa nada
• O sea no es el calcio per se, sino que el calcio involucrado durante la generación de un
potencial presináptico
- Si estimulan previamente y luego ponen el calcio tampoco pasa nada
• O sea el calcio tiene que estar presente o haber estado presente durante la generación del
AP presináptico

- Recordemos que las FM tienen una estructura de tal

forma que si uno le da un pulso de calcio y luego lo
saco no es que la cél se quede sin calcio porque
este
๏
El calcio se pone en el sistema, el extracelular, porque si se
metiera calcio intracelular (que hoy se puede mediante
moléculas de calcio enjaulado) en el presináptico que por
fotólisis se libere el calcio ocurriría un potencial postsináptico
‣ En un experimento muy posterior que muestra con más claridad
este fenómeno, se eliminan las corrientes de sodio y potasio, se
ven los pulsos de potencial comando y se miden las corrientes
๏
Se ve que hay corrientes de entrada, como despolarizamos y
hay corrientes de entrada podemos asumir que serían de Ca+
+, y vienen con ESPS asociados >
- Aumenta la corriente de Ca++ y aumenta con ella la magnitud del ESPS
‣ Esquema de un exp donde se ve la corriente presináptica y se da una despolarización que produce una
corriente de entrada y se ve que hay un ESPS (A)
๏
Si dan depolarizaciones al pot equilibrio del calcio, no pasa nada en la postsináptica
๏
Pero si lo pasan a un V un poco superior se tiene una corriente de cola del ión que se esta
movilizando (B)
- Como está hecho con TTX y TEA, cuando la llevamos la célula

al pot de eqo la corriente es 0 porque no hay gradiente
electroqco, no hay fuerza motriz para la movilización del calcio,
que depende de la diferencia entre el Vm y el E de Ca++ > los
canales están abiertos eso sí, no conducen porque no hay
fuerza > la cinética de cerrado de los canales de calcio
๏
Cuando tenemos una corriente de calcio, tenemos un ESPS
- O sea la corriente de calcio per se es suficiente para de alguna manera generar la fusión
vesicular y liberación del contenido al extracelular
- Como la magnitud de la corriente es menor, por la menor carga movilizada, es menor la
magnitud del ESPS
‣ En el sgte exp tenemos que se ve el potencial presináptico o de acción, la corriente de calcio a nivel
presináptico y la corriente postsináptica que es la excitatoria, en 1 y 2 mM Ca++ extracelular
๏
En 1 mM de calcio hay cierta magnitud del cambio de potencial y de corriente postsináptica
excitatoria con cierta temporalidad
- Al aumentar el Ca++, la corriente de calcio presináptica es mayor y la postsináptica, causante del

ESP, también lo es
๏
Se muestra el retardo entre la generación del PA y la corriente de calcio (círculos); entre el inicio
de la corriente de Ca++ y el ESPS (cuadrado negro); y entre el PA con el ESPS (o su corriente) >
en función de la temperatura
- Tienen relaciones de dependencia lineales con la T° > como 1 ms de retardo a T° normal, que es
el retardo sináptico que uno ve generalmente
Rat
○ AP → ICa
◼ ICa → EPSC
◻ AP → EPSC
‣ En otro experimento lo que se hizo fue mostrar una estimulación y vemos corriente postsináptica o
sea que hay liberación (derecha)
๏
Pero si bien hay un aumento muy importante de la liberación también hay cierta cantidad de
neurotransmisor que se libera no sincrónicamente con el estímulo
- O sea algunas vesículas son movilizada por el estímulo pero hay otras que se continuan
movilizando algunos milisegundos después del estímulo, con otra cinética
‣ Entonces sabemos que la estimulación presináptica produce liberación del neurotransmisor por fusión
de vesículas en un proceso dependiente de calcio lo que, con un cierto retardo, genera un ESPS
๏
El retardo depende de los procesos intermedios desde el cambio de potencial hasta la activación
del receptor postsináptico > pero se sabe que son los procesos presinápticos a nivel de calcio y
fusión vesicular la ppal parte del retardo
‣ Si hago varias estimulaciones en frecuencia baja la variación de la respuesta es mínima y puede durar
así mucho tiempo produciéndose ESPSs > pero si doy dos estímulos y empiezo a acercarlos
temporalmente, podría modificar la liberación de neurotransmisores, ¿why?
๏
La cantidad de vesículas que se pueden liberar se mantiene relativamente ctte, así que no es esta
la causa
๏
Podría ser que los neurotransmisores sigan en receptor postsináptico, pero sabemos que en los
casos que estamos viendo los efectos del neurotransmisor son muy rápidos, porque hay cantidad
importante de enzimas que los rompen
๏
Puede ser que no se alcancen a restablecer las concentraciones de calcio intracelulares después de
la primera corriente de calcio
- El calcio aumenta con la corriente y se reduce a nivel intracelular por ATPasas en MP (PMSA) y
SERCA. Otro compartimento celular donde se almacena calcio son las mitocondrias, que hay en
gran cantidad a nivel de los terminales > Hay una cinética de desaparición del Ca++
๏
Supongamos > si la corriente de calcio fuese la misma pero había más calcio intracelular para la
segunda
- El calcio va a tener un poco menos de fuerza motriz pero la [Ca++] intracelular suele ser de los
nM y afuera como 1 mM así que no hay cambio fundamental del gradiente, o sea está entrando
prácticamente la misma cantidad de Ca++ por ende la [Ca++] va a aumentar más que con el
primero
‣ Entonces, esto vemos en el experimento > Dos
pulsos seguidos y el segundo ESPS es mayor que
el primero, y puede incluso alcanzar el umbral
‣ Más moderno, tenemos pulsos pareados y se miden
corrientes postsinápticas excitatorias
๏
Se grafica la facilitación (% de la diferencia de
amplitud de corriente entre el segundo-primero/
primero, o sea si son iguales es 0) en función
del delta de tiempo entre ellos
- Vemos que cuando están separado por 1 seg
(1000 ms), la segunda amplitud es igual a la
primera y la facilitación es 0, o sea son
eventos independientes
• Pero a medida que disminuye el tiempo
entre pulsos, aumenta la segunda corriente
- Esto con un limite porque si se acercan demasiado los potenciales de acción presinápticos
eventualmente el segundo PA no se va a dar porque va a caer al periodo refractario
absoluto > ya no hay segundo PA presináptico
- En general entonces el segundo ESPS es mayor que el primero
๏
Esto es fundamentalmente porque el calcio que ingresa está aumentando un nivel basal que es
mayor así que hay más calcio disponible para la liberación de vesículas
๏
La magnitud del ESPS aumenta con el segundo pulso, eso significa que hay más neurotransmisor
liberado y cuando es suficiente, produce un ESPS supraumbral > lo único que cambió es el tiempo
entre los pulsos
- Cdo pasas por ej de 400 a 200 ms de distancia aumenta casi al doble el ESPS
- A mayor distancia temporal, se alejan los ESPS y se vuelven independientes y cada pulso libera
la misma cantidad de neurotransmisor, sin efecto el primero en el segundo
• A medida que los acerco, el segundo produce mayor liberación de neurotrasnmisor que el
primero, porque aumenta la corriente postsináptica excitatoria
‣ Entonces tenemos hasta el momento: PA presináptico > despolarización del terminal > apertura de
canales de calcio voltaje dependientes > corriente de entrada de calcio > fusión de las vesículas >
liberación de neurotransmisores al extracelular > ESPS
‣ Existe una metodología para medir la capacidad de la membrana > durante la transmisión sináptica se
esperaría que el presináptico cambie su capacidad porque aumenta el área de la membrana (por
fusión de vesícula) y entonces aumenta la capacidad porque es como poner capacitores en paralelo
(así como hay capacidad por unidad de área) > Más membrana, más capacidad
๏
Expo donde tengo pulsos separados y se mide la corriente de calcio y la capacidad de la membrana
a nivel presináptico (izquierda)
- Aumenta la I y aumenta la capacidad rápidamente pero después de un tiempo disminuye de

nuevo
• Esto sugiere que de alguna manera la vesícula se fusiona y es “reciclada”
- Se acercan los pulsos, mayor frecuencia, y se ve que en el segundo crece más aun la
capacitancia, con tau como ctte de tiempo de la caída
• A mayor frecuencia, tenemos lo mismo, con mayores tau
๏
Entonces, La C aumenta durante transmisión sináptica y luego cae con el tiempo
2 Hz
20 Hz
333 Hz
๏
Se grafica tau en función de frecuencia > aumentan con la frecuencia de los pulsos pero igual
parte de los 100 ms aprox con frecuencia 0
- Después de que fusionan, las vesículas tardan cierta cantidad de tiempo basal en reciclarse
๏
En la derecha tenemos lo mismo pero ahora a frecuencias aún mayores
Temporalidades de la transmisión sináptica química
‣ Como resumen, las temporalidades de lo que aporta cada paso > el potencial de acción presináptico
produce una corriente de calcio en el terminal con un tiempo de 0,3 ms debido a la apertura de
canales y cambios conformacionales, corrientes de gating que eso implica > esto más la fusión de la
vesícula y apertura del poro y exocitosis es del orden de 0.8 ms, como el 70% del tiempo total de
retardo sináptico está dado por estos dos eventos > efectos de la corriente postsináptica excitatoria y
aparición de potencial, que tiene un retraso de 0.1 ms por la ctte de tiempo de la membrana celular
๏
Si lo sumamos se tiene un retraso de 1,5 ms entre el potencial de la célula presináptica y la
postsináptica, que más que nada depende de
- La corriente de calcio, que a su vez depende de la cinética de los canales y la cantidad de
canales activos (además del gradiente)
- También de la fusión vesicular
‣ O sea, el retraso se puede adjudicar más que nada a lo elementos presinápticos (vesiculares y de
corriente de Ca++) > 50% o más del tiempo asociado a la sinapsis
๏
Después esto difunde y tiene acción sobre un receptor, otra molécula con una cinética asociada y
responsable de la producción de los cambios a nivel postsinápticos
‣ Recordar que casi todo lo que hemos estudiado hoy esta estudiado en un tipo particular de sinapsis
donde la respuesta postsináptica es mediada por un receptor canal que cuando une el neurotransmisor
se abre y produce flujo iónico que produce cambios muy rápidos del pot de membrana, después
veremos ejemplos donde el efecto es del orden de los segundos
- Canales receptores ionotrópicos postsinápticos
Liberación vesicular independiente de Calcio
‣ Como todo buen dogma, que sería en nuestro caso que la sinapsis es calcio dependiente, se tiene la
“excepción” > Liberación vesicular Ca -independiente 22
++
๏
Si uno tiene una sinapsis como la neuromuscular y la somete a un medio hiperosmótico, se libera
neurotransmisor al espacio sináptico
- Cuando cambia una osmolaridad del medio con algo que no se puede transportar fácilmente uno
esperaría flujo de agua que cambia el volumen celular, disminuyéndolo
๏
Así, se ha demostrado que si uno es capaz de modificar la membrana mecánicamente también
puede modificar la fusión vesicular > mecanismo exacto no es conocido
- Modificando las relaciones de membrana con las vesículas también se puede lograr que se
fusionen las vesículas
‣ Aquí tenemos exp con céls cromafines que liberan adrenalina en médula suprarrenal, midiendo la
capacidad de la membrana cuando está en Voltage clamp
๏
Se depolariza la cél y secreta vesículas, lo que sé porque aumenta la capacidad de membrana
๏
Si el calcio es cercano a 0 (quito el calcio y además pongo EGTA) y despolarizo > no hay fusión de
vesículas a la MP
- O sea estas céls son muy buen modelo de liberación vesicular dependiente de calcio, que es
como un sinapsis (pero en realidad libera hormonas)

‣ Cuando usan DRG neurons > población pequeña de neuronas del ganglio de raíz dorsal
๏
Cuando hay calcio y la depolarizan, aumenta la capacidad; pero si se quita calcio y se añade EGTA,
igual aumenta la capacidad de membrana
- O sea se están fusionando igual vesículas en ausencia de calcio
‣ En el exp sgte se hace lo mismo pero para asegurarse se mide la corriente de calcio > cuando hay
calcio hay corriente y cuando no hay, no se ve corriente
๏
Pero interesantemente, cuando no hay calcio se
ve que en esta cél sí hay reducción de la fusión
de vesículas > o sea que aquí hay una parte de
la liberación que es calcio dependiente pero otra
es independiente >
๏
Si se ve lo que pasa con esta fusión al eliminar
ATP intracelular > se bloquea el aumento de Cm;
y con tripsina intracelular pasa lo mismo
- O sea a pesar de ser calcio dependiente hay
otros componentes metabólicos importantes
‣ Lo mismo en este experimento > Se mide la Cm y
liberación vesicular con y sin calcio, donde
pareciera que la fusión es independiente de calcio
๏
Usaron tapsigarguina (Tg) que depleta
reservorios intracelulares de calcio (para
asegurarnos de que no haya aumento
intracelular de calcio pero liberado desde el
retículo) pero no tiene efecto en la capacitancia
así que o sea que no es calcio dependiente
๏
Se hizo entonces registro de célula completa con BAPTA para estar bien seguros de que no se
modifica el calcio y aun así hay fusión vesicular

‣ Pero en otro experimento, usando la toxina del tétanos (TeNT) que rompe la sinaptobrevina de tal
forma que impide la fusión de las vesículas
๏
Cuando se aplica TeNT en la pipeta del Patch, se mide inmediatamente y luego 5 min después, para
que tenga efecto la toxina > muy disminuida la capacitancia
- Lo que indica que pesar de que es calcio independiente, esta liberación usa el mismo mecanismo
de fusión vesicular, aun no es claro por qué
๏
Aparentemente la fusión vesicular tiene mecanismo intracelular que para most casos es calcio
dependiente pero hay algunas sinapsis particulares que son independientes de calcio pero siguen
siendo sinapsis químicas
๏
Tetanus neurotoxin (TeNT) cleaves the vesicle-associated protein synaptobrevin
‣ Exp donde miden la liberación inducida por potasio > depolarizan la célula y no hay corriente de calcio
y se mide la liberación del neurotransmisor en forma electroquímica
‣ Hemos hablado siempre de liberación vesicular pero, ¿podría haber mediada por transportadores?
๏
Ya hablamos de la captación (además de la recaptación) o sea que hay transportadores de
neurotransmisores > hay algunas situaciones donde dependiendo de la relación de concentraciones,
los neurotransmisores pueden salir por transportadores de membrana
- Este tipo de liberación tiene otras cinéticas y temporalidades
‣ Más adelante veremos evidencias que muestras que son vesículas las que están liberando un
contenido relativamente concentrado

Señalización por Calcio: Dinámicas, Homeostasis y Remodelación



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