+ Catedra de Bacteriologia __ EAP. de Microbiologia y Pars! PREPARACION DE COLORANTES ¥ REACTIVOS 1, INTRODUCCION i. OBJETIVO * Preparar los colorantes y reactivos empleados en las principales técnicas de identificacién morfolégica en bacteriologia. Preparar los reactivos més comunes empleados en la desinfeccién de areas y material de trabajo en bacteriologia. II MATERIALES Y PROCEDIMIENTO a, COLORANTES Cristal Violeta - Oxalato de amonio de Hucker: Solucién A: Y Cristal violeta 28 > Etanol 95% 20 mL Solucién B: yOxalatode amonio 0.88 > Agua destilada 80 mL Preparar ambas soluciones por separado. Mezclar las dos soluciones y filtrar. Lugol débil (Gram) Jodo (quimicamente puro) 1g loduro de potasio 28 ‘Agua destilada 300 mL Disolver el KI (Yoduro de potasio) en pequefia cantidad de agua destilada, luego fadir y disolver completamente el Yodo. Agregar el resto de agua destilada, Escaneado con CamScannerMatissa Rodriguer Haro» Citedra de Bacterlologia Alcohol Acetona: » Acetona 20 mi. > Etanol 95% 80 mt. Mezclar Safranina (para coloracién Gram) » Safranina 258 + Nicohol etilico 95% | 10 ml. > Agua destilada 100 mL Mezclar, disolver y filtrar. 4 Safranina (para coloracién de esporas) + Safranina 5,08 > Agua destilada 100 mL Mezclar, disolver y filtrar. Verde de malaquita: > Verde de malaquita Se > Agua destilada Mezclar, disolver y filtrar. Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen lucién A: iS ' y Fucsina basica O38 yr Etanol 95% 10 mt Mezclar, disolver y filtrar, Soluci6n B: + Fenol (Ac. Fénico 0 Ac. Carbélico) + Agua destilada TAD, de Microbilo 100 mL. 56 95 mu 2 Escaneado con CamScannerDre iss ‘Gisuel he SS —— a (oa ela Mast odie aro ~ Gaede cen ERIC raat iaabiioaa Merclar ambas soluciones por separado. Mezclar las dos soluciones (soluci6n 6 en solucién A), dejar en reposo 24 horas y filtrar. Aleohol-acido (alcohol clorhidrico) + Acido clorhidrico concentrado 3Bmt > Etanol 95% 97 mt Medir en un recipiente la cantidad necesaria de etanol y luego ere8er lentamente el HCI concentrado por las paredes del recipiente por ser ™UY reactivo y mezclar suavemente. * Colorante Maneval > Fenol (Sol. Acuosa 5%) 30 mL > Ac. acético(Sol. Acuosa 20%) 10 mL. > Cloruro férrico (Sol. Acuosa 30%) 4 mL > Fucsina acida(Sol. Acuosa 1%) = 2mL Mezclar y disolver. + Rojo de Congo > Rojo de Congo 1g > Agua destilada 100 mt. Mezclar y disolver “ Colorante de Nigrosina o tinta china Nigrosina 58 Formalina 0,5 mt > Agua destilada 200mt Disolver la nigrosina en H:0 destilada caliente, luego enfriar y agregar la formalina. + Solucién A: Solucién Argéntica -Amoniaco de Fontana: > Nitrato de plata 58 > Solucién amoniaco al 10% 10 mL > Agua destilada 2100 mt Escaneado con CamScanner(Bras icea Marissa Roarigues Haro = ca I Disolver el AgNO; en agua destilada y luego agregar gota a gota [a solucién de NH) hasta que el precipitado se redisuelva. Continuar agregando hasta que se logre una tenue opalescencia. “> Solucién B: Solucién Mordiente de Fontana » Acido tanico SB > Fenol 0 dcido fénico 1g > Agua destilada 100 mt . Mezclary disolver + Solucién C: Solucién Fijadora de Fontana > Acido acético glacial mt > Formol al 40% 2mt + Agua destilada 100 mt Mezclar y disolver Tintura de iodo: Solucién saturada de loduro de potasio en agua destilada, luego agregar el lodo. Alcohol iodado: > Mezclar 3 partes de alcohol de 96% con 1 parte de agua destilada y se afiade la tintura de iodo hasta que éste tome un color pardo oscuro. “ Mezcla Sulfocrémica > Dicromato de potasio 100g » Acido sulfirico 100 mL > Agua destilada 100 mt ‘ Solucién para el lavado de laminas > Dicromato de potasio 1008 > Acido sulfirico 252 mL 300 mL. > Agua destilada Escaneado con CamScanner? (a isa Rod {cela Marissa Rodriguez Haro - Citedra de Bacteriologia EAP, de Microbiologia y Parasitolog Disolver el dicromato de potasio en agua destilada completamente si es posible Con ayuda de calor. Afiadir lentamente el dcido sulfirico por las paredes del recipiente con e! in de evitar una reaccién exotérmica entre el agua y el dcido, si fuera posible colocar el vaso de precipitacién donde se esté preparando la mezcla en hielo. Solucién Salina Fisiolégica: ¥ Cloruro de sodio 085g > Agua destilada 100 mt. Mezclar y disolver. b. PROCEDIMIENTO © Preparar los colorantes y reactivos segin la cantidad indicada al momento de la practica Iv. RESULTADOS V. COMENTARIO VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS s Escaneado con CamScanner