ISSN 1668–4834

Volumen 33, número 2, 2022

FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE
CORRIENTES, ARGENTINA

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INDICE
Rev. vet. 33: 2, 2022

TRABAJOS DE INVESTIGACIÓN

Microrganismos acido lácticos y levaduras como suplemento en las raciones para el engorde de cuyes (Cavia
porcellus) Ayacucho, Perú
Andía, V.A.; Quijano, V.P.; Peña, G.R. .......................................................................................................... 123
Fertilización química con corrección de pH en suelos ácidos y rendimiento por hectárea de Brachiaria
brizantha
Britos, A.; Alonso, N.; Álvarez, R ........................................................................................................................ 130
Digestión de láminas foliares de Paspalum notatum sometidas a diferentes tiempos de
incubación ruminal en bovinos
Slanac, A.L.; Balbuena, O.; Peichoto, M.C.; Kucseva, C.D. ........................................................................ 136
Laminitis equina in vitro inducida por veneno entero y Fosfolipasa A2 de serpiente
Bothrops alternatus de Argentina
Teibler, G.P.; Maruñak, L.S.; Bogado, E.F.; Pollitt, C. ................................................................................. 146
Evaluación de la tasa de preñez al transferir embriones bovinos utilizando dos métodos de sincronización
Ninabanda, J. ................................................................................................................................................ 152
Análisis retrospectivo de aspiraciones foliculares sucesivas según cantidad y calidad de ovocitos de
bovinos brangus
Alvarez, R.; Garcete, M.; Arreseigor, C. ....................................................................................................... 160
Infecciones respiratorias causadas por agentes bacterianos en bovinos y ovinos de Corrientes, Argentina
Della Rosa, P.; Sala, J.M.; Morel, V.; Gómez, S.; Caspe, S.G. ..................................................................... 164
Efecto de la glutamina y aminoácidos de cadena ramificada en los parámetros de cachorros caninos
Mena, R.P.; Llumiquinga, T.I.; Quisirumbay, J.R.; Villanueva, M.E. ........................................................... 169
Casos de anaplasmosis, babesiosis y tripanosomiasis bovina registradas en el INTA Rafaela (2012-2019)
Mazzucco, P.M.; Novoa, M.B.; Sarli, M.; Signorini, M.; Echaide, I.E. ........................................................ 177
Ornamentos sexuales y caracteres productivos en gallinas Campero Casilda
Romera, B.M.; Fernández, R.; Advínculo, S.A.; Canet, Z.E.; DiMasso, R.J. ............................................... 183
Streptococcus uberis y su importancia como agente causal de la mastitis bovina
Stempler, A.; Muñoz, A.J.; Lucas, M.F. ......................................................................................................... 192
Caracterización del perfil citológico de la mucosa vaginal durante el ciclo estral en ovejas Santa Inês
Arbues, R.; Flores, Q.C.; Yáñez, E. .............................................................................................................. 202
Evaluación del desempeño reproductivo en vacas y vaquillonas cruza índica con protocolo
convencional y J-Synch
Navarro, L.M.; Yostar, E.J.; Capellari, A. ..................................................................................................... 208
Ultra-structural characterization of Diplostomum sp metacercarian in Orestias luteus from Lake Titicaca, Peru
Montesinos, J.A.; Serrano, E.; Tantaleán, V.M.; Yañez, J.; Flores, R. .......................................................... 215
Linking epidemiology, biostatistics and animal welfare science
Mata, F. ......................................................................................................................................................... 220
Infección por Trypanosoma cruzi en caninos de Acambuco (Salta, Argentina)
Simón, M.L.; González, P.G.; Mora, M.C.; Barrio, A.B.; Sánchez, N.O. ..................................................... 223
Efecto de la densidad de alojamiento y la zona del galpón sobre indicadores de bienestar en pollos parrilleros
Gallard, E.A.; Menichelli, M.L.; Dimasso, R.J.; Revidatti, F.A. ................................................................... 230
Ultrasonografía musculo-esquelética con doppler de poder asociado al modo B en el equino
Ferreira, V.; Boffa, M.F.; Monina, M.I. ......................................................................................................... 235
Suplementación de glutamina sobre el desempeño productivo y variables bioquímicas en lechones destetados
Cortéz, L.; More, M.; Aragón, E.; Mena, R.; Quisirumbay, G.J. .................................................................. 241
Hepatozoonosis en caninos domésticos del Gran Buenos Aires
Martin, P.L.; Pintos, M.E.; Aquino, S.; Vidal, D.A.; Arauz, M.S. ................................................................. 246
Sustitución de ingredientes proteicos y su efecto
Peralta, J.; Aquino, L.F.; Alvarez, R.; Valiente, O.L...................................................................................... 253
Evaluación de mutagenicidad de herbicida glifosato
Caramello, C.S.; Jorge, L.C. ......................................................................................................................... 258
Babesiosis bovina
Del Río Álvarez, F.R.; Peichoto, M.E.; Palma, S.; Maletto, B.; Lozina, L. .................................................. 266
 Andía, V.A. et al.: Engorde de cuyes.. Rev. Vet. 33: 2, 123-129, 2022 123

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 123-129, 2022

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Microrganismos acido lácticos y levaduras como suplemento en las

raciones para el engorde de cuyes (Cavia porcellus) Ayacucho, Perú
Andía, V.A.1; Quijano, V.P.2; Peña, G.R.2

1
Laboratorio de Microbiología Industrial y de Alimentos. 2Laboratorio de Evaluación Nutricional. Facultad
de Ciencias Agrarias. Laboratorio de Biología Celular y Molecular. Facultad de Ciencias Biológicas.
Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga. E-mail: vidandia@yahoo.es

Resumen
Andía, V.A.; Quijano, V.P.; Peña, G.R.: Microrganismos acido lácticos y levaduras como
suplemento en las raciones para el engorde de cuyes (Cavia porcellus) Ayacucho, Perú. Rev.
Vet. 33: 2, 123-127, 2022. Los microorganismos ácido lácticos poseen un efecto benéfico en el
engorde de los cuyes, al mejorar la degradación de la materia orgánica y prevenir la salmonelosis.
El objetivo fue evaluar los microrganismos acido lácticos y levaduras como suplemento en las
raciones para el engorde de cuyes (Cavia porcellus) en Ayacucho. Se activaron las bacterias en
caldo lactosado a 37°C por 48 horas en anaerobiosis, a través de diluciones consecutivas se sembró
en agar Rogosa sharpe incubándose a 37°C por 24 a 48 horas para recuento del número de células
vivas/ml. Se utilizaron 20 gazapos machos destetados con tamaño y peso homogéneos. Se tuvo 5
tratamientos suplementando con bacterias ácido lácticas al alimento balanceado: T1 (Lactobacillus
acidophilus), T2 (Lactobacillus casei), T3 (Lactobacillus acidophilus y Lactobacillus casei) y
T5 (testigo), brindándose a libre discreción y alfalfa al 10% de su peso vivo más agua. Como
unidad experimental se planteó bajo el diseño completamente randomizado con 5 tratamientos,
2 repeticiones y 2 cuyes. Los resultados mostraron que para el peso vivo y la ganancia de peso
resultaron no significativos (p<0.05) y para el consumo de alimento y la conversión alimenticia
fueron significativas. Por la prueba de Tukey resultó que los tratamientos con la combinación
T3 Lactobacillus acidophilus + Lactobacillus casei y T2 Lactobacillus casei fueron mejores
lográndose peso comercial para el mercado en ocho semanas de tratamiento, además mejores
rendimientos de carcasa. Con ello se puede intuir que los microorganismos influyen positivamente
en el desarrollo de los cuyes.

Palabras clave: Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, levaduras, engorde, Cavia porcellus.

Abstract
Andía, V.A.; Quijano, V.P.; Peña, G.R.: Lactic acid microorganisms and yeasts as a supplement
in fattening rations for cuyes (Cavia porcellus) Ayacucho, Peru. Rev. Vet. 33: 2, 123-127, 2022.
Lactic acid microorganisms have a beneficial effect on the fattening of guinea pigs by improving
the degradation of organic matter and preventing salmonellosis. The objective was to evaluate the
lactic acid and yeast microorganisms as a supplement in the rations for the fattening of guinea
pigs (Cavia porcellus) in Ayacucho. The bacteria were activated in lactose broth at 37°C for 48
hours in anaerobiosis, through consecutive dilutions, they were seeded on Rogosa sharpe agar
and incubated at 37°C for 24 to 48 hours to count the number of live cells/ml. We used 20 weaned
male kits with homogeneous size and weight. There were 5 treatments supplementing with lactic
acid bacteria to the balanced food: T1 (Lactobacillus acidophilus), T2 (Lactobacillus casei),
T3 (Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus casei) and T5 (control) was provided at free
discretion and alfalfa at 10% of their live weight plus water. It was proposed under the completely

Recibido: Octubre 2021. Aceptado: Diciembre 2021.

124 Andía, V.A. et al.: Engorde de cuyes.. Rev. Vet. 33: 2, 123-129, 2022

randomized design with 5 treatments, 2 repetitions and 2 guinea pigs as an experimental unit.
The results shown for live weight and weight gain were not significant (p<0.05) and for feed
consumption and feed conversion were significant and by the Tukey test it was found that the
treatments with the combination T3 Lactobacillus acidophilus + Lactobacillus casei and T2
Lactobacillus casei were better, achieving commercial weight for the market in eight weeks
of treatment, as well as better carcass yields, with this it can be intuited that microorganisms
positively influence the development of guinea pigs.

Key words: Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, yeast, fattening, Cavia porcellus.

INTRODUCCIÓN

Cavia porcellus “cuy” es una especie originaria
de la zona andina de Perú, Ecuador, Colombia y Bolivia
3
, que se adapta en todas las regiones solo con darle el
confort que necesita. Ellos destacan cualidades como
prolificidad, rusticidad y precocidad. Su carne está
siendo demandada no sólo en nuestra región sino en
el país entero e incluso en el extranjero, por la calidad
con altos niveles de proteína (20,3%), bajo nivel graso
(7,8%), por la carne tierna, jugosa y agradable al
paladar, así como su exquisito sabor nacional 3, 13.
Sin embargo, uno de los mayores riesgos
sanitarios en las crianzas familiar y comercial es la
presencia de enfermedades infecciosas, especialmente
salmonelosis 1, 4 ; la salmonelosis causa tasas de
morbilidad de hasta 52.7% y elevados índices de
mortalidad reportándose hasta un 95% en diversas
edades o condición productiva 9 y un 8,5% de nacidos
muertos.
La respuesta a las pérdidas actuales de esta
enfermedad ha sido el uso de antibióticos como medida
preventiva en las granjas de producción de cuyes.
Además, la práctica indiscriminada de antibióticos
está generando problemas de salud pública debido
a la posibilidad de residuos de antibióticos en los
productos y subproductos animales y al riesgo de
generación de resistencia 3 .
El uso de antibióticos en forma preventiva o
como promotora de crecimiento motivó la búsqueda
de nuevas opciones de prevención y control de
problemas sanitarios gastrointestinales, siendo
una de las alternativas más promisorias el uso de
probióticos 3, 4, 9, 11. Los probióticos son considerados
microorganismos vivos que poseen la característica
de tener efectos beneficiosos al ser consumidos o
administrados en cantidades adecuadas como parte
del alimento 3.
Entre los organismos probióticos más comunes
figuran Lactobacillus, Streptococcus, Enterococcus,
Bacillus y Saccharomyces, los cuales tienen efectos
benéficos y están asociados a tres mecanismos
aparentes: a) exclusión competitiva por el substrato y
sitios de adhesión del epitelio intestinal, b) secreción
de sustancias antimicrobianas, y c) estimulación de la
inmunidad del hospedero 14 .
Estos mecanismos parecen explicar no solo
un efecto positivo general de los probióticos sobre
un gran número de condiciones gastrointestinales
en humanos, sino también sobre el comportamiento
productivo de especies como pollos 3, 4, 12 .
La explotación pecuaria pretende
permanentemente obtener una tasa de natalidad
elevada, excelente ganancia de peso y mayor rapidez
en el crecimiento. No obstante, la mayoría de las
granjas de cuyes son manejadas tradicionalmente y
no llegan a cumplir con los objetivos y para lograrlos
en la actualidad están utilizando los probióticos con
resultados alentadores tanto para el productor como
para el consumidor.
La transformación de los azucares y
carbohidratos a ácido láctico, sirve como estabilizador,
suprime a los microorganismos patógenos e incrementa
la descomposición de la materia orgánica aumentando
su degradación haciendo que sus componentes -como
la lignina y celulosa- sean solubilizadas por el ácido
láctico producido 8 .
MATERIAL Y MÉTODOS
Realización del trabajo
La investigación se desarrolló en el Laboratorio
de Microbiología Industrial y de Alimentos de la
Facultad de Ciencias Biológicas y el Programa de
Investigación de Pastos y Ganadería de la Facultad
de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional de San
Cristóbal de Huamanga, Perú.
El trabajo se realizó con 20 cuyes (gazapos
machos) destetados a los 14 ± 2 días de edad, con cepas
nativas de Lactobacillus acidophilus y Lactobacillus
casei aisladas de yogures de elaboración artesanal
de la ciudad de Ayacucho y levadura Sacharomices
cereviseae, las que se activaron y multiplicaron las
bacterias ácido lácticas y levaduras en caldo lactosado,
incubándose a 37°C por 48 horas en condiciones de
anaerobiosis.
Para ello se realizó una serie de diluciones
consecutivas, para luego sembrar en agar Rogosa
sharpe incubándose a 37°C por 24 a 48 horas. Con
Andía, V.A. et al.: Engorde de cuyes.. Rev. Vet. 33: 2, 123-129, 2022 125

ello se realizó el recuento del número de células Unidades experimentales

vivas/ ml, el cual se empleó en los tres tratamientos
respectivamente.
Las instalaciones de la crianza de cuyes
El galpón se encuentra en el Programa de
Investigación en Pastos y Ganadería, cuya área es 60
m2 y dentro están las 20 pozas que fueron construidas
a base de malla metálica con columnas de madera,
cuyas dimensiones son de 0,50 m de largo, 0,40 m
de ancho y 50 cm de altura. En su interior se fijó un
bebedero bañado con porcelana y un comedero de
arcilla con capacidad de 500 ml.
La unidad experimental fue “2 cuyes”, con
lo cual se empleó un total de 20 gazapos machos
destetados a los 14 ± 2 días de edad, los cuales han
sido seleccionados por su tamaño y peso homogéneo.
Tratamientos
En la Tabla 1 se muestran los tratamientos que
se aplicaron a cada unidad experimental, donde al
alimento balanceado antes de brindar a los cuyes se
pesaba la cantidad aproximada para el día, y luego se
mezclaba con los microorganismos dependiendo del
tratamiento propuesto.

Tabla 1. Tratamientos usados en los cuyes.

tratamientos alimentos concentración
alimento balanceado + alfalfa al 10% de su peso vivo
T1 +Lactobacillus acido-philus y agua 50 x 1010
alimento balanceado + alfalfa al 10% de su peso vivo +
T2 50 x 1010
Lactobacillus casei y agua
alimento balanceado + alfalfa al 10% de su peso vivo
T3 50 x 1010
++Lactobacillus aci- dophilus +Lactobacillus casei y agua
alimento balanceado + alfalfa al 10% de su peso vivo +
T4 50 x 1010
sacharomices cere- viciae y agua

(testigo): alimento balanceado + al-falfa al 10% de su peso

T5 0,0*
vivo y agua
*concentración en solución, 50 ml

Alimentación Para la alimentación de los cuyes, se pesó la

La ración fue formulada y preparada en las cantidad aproximada del alimento para cada poza y
instalaciones del Programa de Investigación en Pastos luego se mezcló con los microorganismos para llenar a
y Ganadería. La misma se muestra en la Tabla 2. los comederos en cada tratamiento. Además se brindó
una base forrajera de alfalfa en verde equivalente al
Tabla 2. Fórmula de la ración. 10% del peso corporal, brindándose en dos tiempos:
ingredientes % en la mañana y en la tarde. El alimento balanceado se
brindó ad libitum o a libre discreción, pero la cantidad
pancamel 31,2 de alimento se incrementó de acuerdo a la edad y
peso, evaluándose los parámetros evaluados.
sub-producto de trigo 19,8
torta de soya 20,0 Consumo de alimento
Se determinó por diferencia entre la cantidad
maíz 14,3 suministrada durante la semana y la cantidad residual
de la semana evaluada. Para tal efecto se le ofreció
harinilla de subproducto trigo 9,5
bajo peso una ración durante los días de consumo.
pasta de algodón 2,9
Ganancia de peso del animal en gramos
carbonato de calcio 1,3 Los cuyes se pesaron cada 7 días. Para ello, a
aceite de soya 0,9 las 06:00 p.m. del día anterior el alimento balanceado
se retiró de las pozas con la finalidad de que los
premix 0,1 animales sean pesados en ayunas. Con estos datos
registrados, se calculó la ganancia de peso acumulado
T 0 TAL 100,0
y peso final.
126 Andía, V.A. et al.: Engorde de cuyes.. Rev. Vet. 33: 2, 123-129, 2022

Conversión alimenticia RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Se determinó relacionando el consumo
acumulado del alimento (materia seca) y la ganancia
de peso vivo acumulado de los cuyes, respectivamente
para cada tratamiento.
Rendimiento de carcasa
Se determinó la relación entre la carcasa y el
peso vivo por 100.
Análisis de datos
El trabajo fue planteado bajo el diseño
completamente al azar que estuvo conformado por
5 tratamientos con dos repeticiones y 2 cuyes como
unidad experimental para el cual se realizó el análisis
de varianza (ANOVA) con un nivel de significancia
de 0,05 y para la comparación de los promedios se
aplicó la prueba de contraste de Tukey. Para las tablas
y figuras se usó el programa Excel.
1. Consumo de alimento
En la Tabla 3 se observa que el análisis de
varianza (p<0,05) resultó significativo para todos
los tratamientos, y en la comparación del promedio
indican que hubo mayor consumo de alimento con
la suplementación de bacterias ácido lácticas la T1
(Lactobacillus acidophilus) con 3296,65 ± 36,27a y
T2 (Lactobacillus casei con 3286,18 ± 2,55a que son
similares.
Ellos fueron seguidos con el T3 (Lactobacillus
acidophilus y Lactobacillus casei) con 3299,56 ±
16,55b, el T4 (Sacharomices cereviciae) 3073,01 ±
22,91b y el T5 testigo con 2859,97 ± 57,28c, esto es
corroborando (Figura 1) que los microorganismos
propician el mayor consumo con las bacterias acido
lácticas y superan al suplementado con levaduras y
al testigo.
Además se observó un consumo normal y no
hubo problemas en el crecimiento de los cuyes.

Tabla 3. Resumen de resultados de los parámetros evaluados por tratamiento.

TRATAMIENTOS
PARAMETROS
T1 T2 T3 T4 T5
peso vivo (g) 844±5,66a 834,5±40,31a 819±43,83a 805±21,21a 818±93.34a

ganancia de peso (g) 616±7,07a 555,5±22,58a 601,5±40,31a 571,5±33,23a 587±97,58a

consumo de alimento (g) 3296,65±36a 3286,18±2,55a 3299,56 ±16,55b 3073,01±22,91b 2859,97±57,28c

conversión alimenticia 5,35±0,01ab 5,94±0,29a 4,76±0,29ab 4,04±0.20b 4,95±0,92ab

rendimiento carcasa (%) 70,64± 72,76± 71,29± 70,12± 69,57±

Al comparar con otros editores 6 se encontraron

valores de consumo menores al trabajo usando como
suplementos Lactobacillus acidophilus con mejor
consumo que B. subtilis. Otros afirman que la adición
de Lactobacillus como probiótico no es tan eficiente
para la reducción de afecciones intestinales 5 .
Algunos señalan valores menores que los
encontrados en consumo de materia seca con 1863
g en cuyes enteros alimentados con una ración
comercial, en comparación a los cuyes alimentados
con una ración local que consumieron 1932 g 7 .
Otros encontraron que los cuyes consumen
mayor cantidad de alimento seco si en su ración diaria
existe forraje más agua de bebida 2 . Por otro lado,
se indica que el consumo de materia seca en cuyes
Figura 1. Consumo acumulado de alimentos
con diferentes niveles de probióticos no aumenta el
suplementado con bacterias ácido lácticas en el
consumo 8 .
engorde de Cavia porcellus “cuy”
Andía, V.A. et al.: Engorde de cuyes.. Rev. Vet. 33: 2, 123-129, 2022
2. Ganancia de peso del cuy
Los cuyes lograron el peso comercial
(Tabla 3) a las ocho semanas de crianza (56 días)
utilizando alimento suplementado con bacterias
lácticas del T1 al T5 de 616,0, 555,5, 601,5, 571,5
y 587,0 respectivamente, observándose que los
microorganismos suplementados influyeron
positivamente en ganancia de peso de los cuyes.
El análisis de varianza resultó no significativa,
si bien no se observó una tendencia de acuerdo al
volumen de suplemento. Sin embargo, los tratamientos
con las bacterias (Lactobacillus acidophilus) y T2
(Lactobacillus casei + Lactobacillus acidophilus)
son los que poseen mayor diferencia numérica que los
otros tratamientos.
Se observa (Figura 1) que en el T4 la respuesta
no es la mejor con la levadura, que también se observó
en el consumo, al igual que en el trabajo realizado
con levadura y componentes en su pared celular como
la quitina, que la hace indigerible, aunque ayuda a la
degradación de la materia orgánica, por ello se afirma
que los microorganismos influyen en la ganancia de
peso de los cuyes 8 que hace que los nutrientes están
más biodisponibles en el intestino.
Figura 3. Efecto del tratamiento sobre la ganancia
de peso.
Otros señalan que la mayor ganancia de peso
se presentó en los cuyes del T3 con 493,67 g y un
peso final de 894,33 g así como la menor ganancia
presentaron los cuyes del T4 con 474,25 g 6 . Sin
embargo, no hubo diferencia significativa entre
tratamientos.
Otros 10 lograron pesos de 950,8 g, al utilizar
harina de tarwi + harina de sangre + cebada +
suplamín en 12 semanas de alimentación. Quintana
reportó pesos de 750 g utilizando harina de cebada
+ bloque mineral en 10 semanas 12 . Molina 8 logró
en cuyes alimentados con L. acidophilus hasta 691,67
g en comparación al testigo con 628,55 g a las once
semanas de investigación.
127
3. Conversión alimenticia
Este parámetro indica cuanto alimento
consumió el animal para ganar un kilo de peso vivo,
y es la relación consumo en materia seca entre la
ganancia de peso, por lo cual a menor índice mejor
será la respuesta del cuy. En la Tabla 2 se muestra que
la conversión acumulada a las ocho semanas para los
tratamientos del T1 al T5 y fue de 5,35, 5,95, 4,76,
4,04 y 4,96, respectivamente.
El análisis de varianza resultó significativo
y al someter a la prueba de contraste de Tukey el
tratamiento T4 resultó ser más eficiente (Figura 2). Si
bien es un resultado de eficiencia, sin embargo no es
contundente puesto que puede ser que posea menor
consumo y menor peso y este es un índice.
Para los otros tratamientos continúa el
tratamiento T3, que es la unión entre las bacterias ácido
lácticas, demostrando que estos microorganismos
hacen que sea más eficiente el alimento en convertir
la carne.
Figura 2. Efecto del tratamiento sobre el Índice de
conversión alimenticia
Un referente logró la conversión alimenticia
de 5,6 a 5,7 al utilizar harina de cebada más bloque
mineral y un tiempo de 10 semanas 12 , mientras que
otro, utilizando harina de papa en la ración alimenticia
y en 8 semanas, reportó resultados inferiores. Los
resultados se asemejan con los que reportaron la
mejor conversión alimenticia de los cuyes 6 que fue
en T2 (dieta + levadura), T4 (dieta + lactobacillus
+ levadura) con 4,6 en comparación a los T1 y T3.
Los resultados obtenidos también son similares a los
reportados por Jara 7, quien obtuvo conversiones de
4,5 a 6,7 en su trabajo de engorde de cuyes mejorados.
A su vez, Ortiz 10 también obtuvo 4,8 a 5,7 al utilizar
un concentrado local en un periodo de 13 semanas.
128
4. Rendimiento de carcasa
El rendimiento de carcasa es el parámetro
que determina realmente cuanto de alimento se
convirtió en carne, medida real que permite saber cual
alimento es mejor en rendimiento. En la Tabla 2 se
observa que los resultados de los tratamientos del T1
al T5 fueron de 70,64, 72,77, 71,29, 70,13 y 69,57,
respectivamente.
También se observa (Figura 4) que el mejor
rendimiento de carcasa fue con el tratamiento T2
seguido del T3, que básicamente son las bacterias
Lactobacillus acidophilus y la unión entre el
Lactobacillus casei + Lactobacillus acidophilus.
Con ello se puede inferir que las bacterias
ácido lácticas mejoran la performance de los cuyes en
engorde, lo cual determinó con los trabajos efectuados
3, 9, 14
, viendo como los productos o los promotores de
crecimiento hicieron que se incremente el volumen
de estas bacterias, en detrimento de las bacteria
patógenas.
Figura 4. Rendimiento de carcasa del engorde
de Cavia porcellus “cuy” utilizando alimento
suplementado con bacterias ácido lácticas
Varios peruanos 6 en 2014 reportaron que el
mejor rendimiento de carcasa fue en el control con
un rendimiento de 71,2% en comparación al T2 con
62,5% estadísticamente significativo.
Un ecuatoriano 8 en 2008 reportó que el mejor
rendimiento de carcasa fue mayor para el tratamiento
con Lactobacillus acidophilus. En el caso de Anas
platyrynchos, se indicó que los mayores rendimientos
de carcasa se lograron utilizando alimentados
suplementados con probióticos.
Andía, V.A. et al.: Engorde de cuyes.. Rev. Vet. 33: 2, 123-129, 2022
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130 Britos, A. et al.: Fertilización de Brachiaria brizanthas. Rev. Vet. 33: 2, 130-135, 2022

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 130-135, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Fertilización química con corrección de pH en suelos ácidos

y rendimiento por hectárea de Brachiaria brizantha
Britos, A.1; Alonso, N.2; Álvarez, R.1
1
Univ. Nac. Canindeyú, Fac. Cs. Agrop. y Ambient., Curuguaty, Paraguay.
2
Univ. Nac. Asunción, Fac. Cs. Veterinarias, San Lorenzo, Paraguay.
E-mail: roshanita@gmail.com

Resumen
Britos, A.; Alonso, N.; Álvarez, R.: Fertilización química con corrección de pH en suelos
ácidos y rendimiento por hectárea de Brachiaria brizantha. Rev. Vet. 33: 2, 130-135 2022. La
investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto de la fertilización química y corrección del pH
del suelo, sobre el rendimiento por hectárea y la composición bromatológica del genero Brachiaria,
especie Brachiaria brizantha cv brs Piatã, sometidos a cuatro tratamientos y evaluados en tiempos
iguales de corte, simulando un pastoreo rotativo. El mismo fue llevado a cabo en la ciudad de San
Lorenzo, Paraguay. Los cortes se realizaron cada 35 días después de la siembra, ajustando el pH
más la fertilización de acuerdo a las recomendaciones técnicas, dispuestas en 4 tratamientos por
bloque: T1 testigo sin aplicación de fertilizantes ni corrección del pH, T2 corrección de pH sin
fertilizantes, T3 corrección del pH y aplicación de fertilizantes y T4 fertilización sin corrección de
pH. En el rendimiento de materia verde, según el análisis de varianza (ANAVA) que fue aplicado al
promedio obtenido de cada corte según los tratamientos, siguiendo el modelo estadístico bloques al
azar, arrojó diferencias significativas con un nivel de confianza del 95% y aplicando el test Tuckey
para comparación de medias (p<0,05) a favor del T3 con relación a los demás tratamientos. Sobre
la composición bromatológica, en cuanto al porcentaje de materia seca se evidenciaron diferencias
estadísticas significativas entre tratamientos. El analisis de varianza del contenido de proteina
bruta (PB), demostro que no existieron diferencias significativas tanto entre los tratamientos con
CV: 5,29%, asi como con el contenido de FDN entre los tratamientos con 2,81% (CV).

Palabras clave: pasturas tropicales, Brachiaria brizantha, fertilización química.

Abstract
Britos, A.; Alonso, N.; Álvarez, R. Chemical fertilization with pH correction in acidic soils and
average per hectare of Brachiaria brizantha. Rev. Vet. 33: 2, 130-135, 2022. The objective of the
research was to evaluate the effect of chemical fertilization and soil pH correction, on the yield per
hectare and the bromatological composition of the genus Brachiaria, Brachiaria brizantha cv brs
Piatã species, subjected to four treatments and evaluated in equal cutting times, simulating a rotary
grazing. It was carried out in the city of San Lorenzo, Paraguay. The cuts were made every 35
days after sowing, adjusting the pH plus fertilization according to the technical recommendations,
arranged in 4 treatments per block: T1 Control without application of fertilizers or pH correction,
T2 Correction of pH without fertilizers, T3 pH correction and application of fertilizers and T4
Fertilization without pH correction. In the performance of Green Matter, according to the analysis
of variance (ANAVA) that was applied to the average obtained from each cut according to the
treatments, following the random blocks statistical model, it showed significant differences with a
confidence level of 95% and applying the Tuckey test for comparison of means (p<0.05) in favor
of T3 in relation to the other treatments. Regarding the bromatological composition, regarding the
percentage of dry matter, significant statistical differences between treatments were evidenced.
The analysis of variance of the crude protein (CP) content, showed that there were no significant
differences both between the treatments with CV: 5.29%, as well as with the NDF content between
the treatments with 2.81% (CV).

Key words: tropical pastures, Brachiaria brizantha, chemical fertilization.

Britos, A. et al.: Fertilización de Brachiaria brizanthas. Rev. Vet. 33: 2, 130-135, 2022
INTRODUCCIÓN
La explotación ganadera en los países tropicales
se basa predominantemente en la alimentación del
ganado a campo sobre gramíneas adaptadas a diversos
ecosistemas. La proyección de la ganadería con la
incorporación de nuevas variedades de pasturas y la
creciente demanda de la carne, promueven la búsqueda
de alternativas para un mejor aprovechamiento de los
recursos 1 .
Básicamente, se apunta a la transformación
de la cobertura vegetal natural asociada al cambio
en el uso y manejo de la tierra e implantación de
nuevas pasturas 2 . Las áreas destinadas a la ganadería
son aquellas consideradas improductivas para la
agricultura; sin embargo, ocupan un lugar destacado en
el mundo del agro-negocio debido a la incorporación
de tecnologías y la utilización de recursos que se
hacen tangibles en poco tiempo con el aumento de las
superficies destinadas a la implantación de pasturas,
propendiéndose a la eficiencia productiva de las
mismas 2 .
Son varias las tecnologías y/o estrategias
de manejo propias que se pueden utilizar como
alternativas para incrementar la producción animal;
se visualiza el reemplazo paulatino del pasto nativo
por especies introducidas, principalmente adaptadas
a suelos ácidos de baja fertilidad, acompañados
de técnicas de manejo que incluyen: fertilización
estratégica, formación de potreros, reducidos días
de uso con descanso, así como también ajuste de la
carga animal durante el año, control de malezas, uso
de bancos de proteínas, utilización del recurso bosque
y suplementación estratégica, entre otros 3 .
La interacción de todos estos factores redunda
en menores costos anuales y mayor productividad
por hectárea 4 . En ese sentido algunos 10 sostienen
que las características productivas, morfogénicas y
estructurales de la Brachiaria brizantha cv Piatã,
responde de forma incremental hasta una dosis de 300
kg/ha de nitrógeno, independientemente de la fuente
utilizada 5 .
De la misma manera, el uso de fertilizantes
nitrogenados promueve aumentos en la producción
de materia seca en el pasto Tifton 85, la combinación
de éste y el pasto Piatã consorciado con guandú eleva
los tenores de proteína y reduce el contenido de fibra
detergente neutro, debido a la participación de la
leguminosa en el cultivo del forraje producido 6, 9 .
El objetivo general del presente trabajo
fue evaluar el efecto de la fertilización química y
corrección del pH del suelo, sobre la composición
bromatológica y el rendimiento por hectárea de B.
brizantha cv brs Piatã, en la ciudad de San Lorenzo,
Paraguay.
131
MATERIAL Y MÉTODOS
Durante la época de otoño hasta la de primavera
se realizaron análisis de suelo para la obtención de la
composición del mismo, así como las recomendaciones
necesarias para la implementación de pasturas. Para
ello, fueron necesarias 8 sub-muestras enviadas al
laboratorio de análisis de suelo. Las recomendaciones
realizadas para el trabajo fueron, la incorporación
de cal agrícola al suelo además de los fertilizantes a
utilizar en cada tratamiento (urea, superfosfato triple
y cloruro de potasio).
Los tratamientos fueron divididos de la
siguiente manera: T1 = testigo, sin aplicación de
fertilizantes ni corrección del pH; T2 = con corrección
del pH (2 kg de cal agrícola), T3 = corrección del pH
(2 kg de cal agrícola) y aplicación de fertilizantes (urea
90 g, superfosfato triple 260 g, cloruro de potasio 134
g) y T4 fertilización (urea 90 g, superfosfato triple 260
g, y cloruro de potasio 134 g), sin corrección de pH.
Para la siembra fueron utilizadas semillas de
una gramínea forrajera B. brizantha cv BRS Piatã,
a razón de 50 gramos para cada parcela, dispersión
en las mismas de las 20 preparadas, simulando una
siembra convencional al boleo, luego de 2 meses de
la incorporación de la cal agrícola.
En cuanto a los cortes realizados, el primero se
efectuó a los 75 días y luego cada 35 días, es decir; a
los 75, 110, 145, 180 y 205 días completando 5 cortes,
en 7 meses, los cuales fueron promediados para el
análisis de rendimiento en MV, MS, PB y FDN.
El corte para la obtención de la muestra
se realizó con una desmalezadora con la cuchilla
convenientemente afilada simulando un pastoreo
rotativo a una altura de corte de 10 cm del suelo en
cada parcela. El material recogido se dispuso en una
bolsa de polietileno para facilitar el pesaje a campo
de la MV.
Seguidamente fueron separados en sub
muestras de 500 g cada una, que fueron cortadas y
acondicionadas en sobres de papel e identificadas por
tratamientos y repeticiones (bloques), y posteriormente
llevadas al laboratorio de Bromatología, Nutrición
y Alimentación Animal para la obtención de datos
como: materia seca (MS), proteína bruta (PB) y fibra
neutro detergente (FDN).
Los resultados de las variables analizadas
(materia verde, materia seca, proteína bruta, fibra
neutro detergente), fueron sometidos al análisis de
varianza (ANAVA) utilizando el programa estadístico
INFOSTAD 7 y siguiendo el modelo matemático de
bloques al azar, además del test de comparación de
medias de Tukey, para probar las diferencias existentes
entre las medias de los tratamientos.
132 Britos, A. et al.: Fertilización de Brachiaria brizanthas. Rev. Vet. 33: 2, 130-135, 2022
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En el rendimiento de materia verde (MV) los
resultados obtenidos en cuanto al rendimiento de
B. brizantha cv BRS Piatã, con la combinación de
corrección de pH del suelo y aplicación de fertilizantes
como tratamientos, demuestran que en un promedio
de 5 cortes, existen diferencias estadísticas (p<0,01)
entre tratamientos según el análisis de varianza
(ANAVA), siendo el mejor el T3 (17610 kg.ha-1),
seguido del T4 (17610 kg.ha-1), T2 (12042 kg.ha-1) y
por último el T1 (11078 kg.ha-1).
En el Cuadro 1 se demuestra la media del
rendimiento en materia verde y la correspondiente
comparación de medias de según el test de Tukey
al 0,05% de probabilidad de error, resaltando
nuevamente que los mejores tratamientos fueron el
T3 y T4.
Cuadro 1: Media ordenada de rendimiento de
materia verde.
tratamiento media Tukey
(C.V. 8,9%) (kg.ha-1) . suelo, inmediatamente ya estuvieron disponibles
con corrección de
Trat. 3 pH y aplicación de 17610 A en cantidades pertinentes.
fertilizantes
aplicación de fertilizan
Trat. 4 tes sin corrección del 16448 A comparado con el tratamiento T2 y de 6532 kg.ha-1
pH
con corrección de pH y
Trat. 2 sin aplicación de 12042 B
fertilizantes
Trat. 1 testigo 11078 B estuvieron disponibles para el forraje los elementos
*Valores con letras similares no varían entre sí, y
valores con letras diferentes son esta-
dísticamente significativas según el Test de Tukey al
0.05% de probabilidad de error.
En el Gráfico 1 se demuestra el comportamiento
del rendimiento en materia verde en un promedio de
5 cortes, lo cual indica que el tratamiento T1 testigo
en este experimento, presentó promedio de 11078
kg.ha-1 de rendimiento de MV, seguidamente con
un leve ascenso en el rendimiento se presenta el
tratamiento T2 con 12042 kg.ha-1 de MV, llegando
a un pico máximo de rendimiento en el tratamiento
T3, el cual presentó un promedio de 17610 kg.ha-1
de rendimiento y posteriormente se presentó una
pequeña disminución en el tratamiento T4 con 16448
kg.ha-1 de MV respectivamente.
Gráfico 1. Comportamiento promedio del
rendimiento de MV según tratamientos.
Se evidencia que la escasa diferencia en
valores de rendimiento entre el tratamiento T2 y T1,
se deba al solo hecho de aplicar un correctivo en el
suelo, que en este caso constituye el calcáreo aplicado
en el tratamiento T2, dando un rendimiento marginal
de 964 kg.ha-1 de MV comparado con el testigo T1
sin la aplicación de ningún tipo de enmiendas ni
correctivos, esto demuestra que al regular el pH del
algunos elementos presentes en el mismo, aunque no
Seguidamente se observa un salto hasta un
valor máximo de rendimiento en el tratamiento T3,
con un rendimiento marginal de 5568 kg.ha-1 de MV
del testigo, este salto de rendimiento, se presume que
podría deberse a la aplicación del correctivo para
regular el pH del suelo y al mismo tiempo la aplicación
de fertilizantes químicos NPK en el tratamiento T3.
Ello significa que al regular el pH del suelo, ya
que estaban presentes en el suelo, sin embargo con la
aplicación adicional del fertilizante ya mencionado,
las plantas llegaron a aprovechar de forma eficiente
estos elementos, observándose las consecuencias en
el aumento máximo del rendimiento.
Por último se encuentra el tratamiento T4, que
evidenció un pequeño decaimiento en el rendimiento
comparado con el tratamiento T3, cuya diferencia se
traduce en 1162 kg.ha-1 menos.
Sin embargo con un rendimiento marginal
de 4406 kg.ha-1 comparado con el tratamiento T2
y de 5370 kg.ha-1 frente al testigo, este fenómeno
manifestado en el rendimiento posicionado entre
el tratamiento T2 y T3, indica que la aplicación de
fertilizantes sin una previa corrección del pH del
suelo, aumenta la producción de MV comparado con
el tratamiento que presentó una corrección previa del
pH pero no la aplicación del fertilizante.
Britos, A. et al.: Fertilización de Brachiaria brizanthas. Rev. Vet. 33: 2, 130-135, 2022 133

Sin embargo aún no expresa su máximo

potencial como ocurre en el tratamiento que recibió
una corrección previa del pH del suelo acompañado
posteriormente con la aplicación de fertilizantes
químicos, hecho que demuestra el máximo rendimiento
de materia verde por hectárea. Esto coincide con
lo expresado por Orrico et al. 10 quienes sostienen
que las características productivas, morfogénicas y
estructurales de la B. brizantha cv piatã, responde de
forma incremental hasta una dosis de 300 kg ha de
Grafico 2: Contenido promedio de MS por
nitrógeno, independientemente de la fuente utilizada.
El análisis de varianza exhibió que los tratamientos.
resultados del contenido de materia seca (MS),
presentan diferencias estadísticamente significativas Comparando los resultados de materia verde
entre tratamientos (p<0,05), siendo el de mayor y materia seca, se puede apreciar que aquellos
porcentaje (T2) con 20,414% seguido por el T1, T4 tratamientos con buen rendimiento de MV presentan
y por último el T3 (Cuadro 2). El siguiente cuadro bajo contenido de MS y lo mismo ocurre con aquellos
demuestra la diferencia existente entre medias de que presentan alto contenido de MS, pero con bajo
tratamientos según el test de Tukey al 0,05% de rendimiento en MV.
probabilidad de error. Esto significa que: tratamientos con mayores
rendimientos de MV, desarrollan forrajes más tiernos,
Cuadro 2. Media ordenada del contenido de materia con mayor contenido de humedad en su estructura,
seca (%). proporcionando consecuentemente mayor ganancia
de peso por unidad de superficie. Sin embargo, una
vez evaporada la humedad que posee, deja como
Tratamiento Media resultado menor porcentaje de MS 8 .
Tukey
(%) MS Cabe destacar que la MS está expresada en
Con correc. de pH porcentajes, no obstante, eso no significa que presentan
Trat. 2 = y sin aplicación de 20,414 A menor peso por unidad de superficie traducido a kg.ha-1.
fertilizantes Los resultados precedentes se ajustan a lo
obtenido por Navajas 8, que en un trabajo realizado
Trat. 1 = Testigo 20,26 AB sobre el efecto de la fertilización sobre la producción de
biomasa y la absorción de nutrientes en B. decumbens
Aplicación de y B. híbrido Mulato, encontró que hubo diferencias
Trat. 4 = fertilizantes sin 18,966 BC significativas entre tratamientos, generando mayor
corrección del pH
contenido de materia seca en el Brachiaria híbrido cv.
Mulato con fertilización y cortado a las 15 semanas
Con corrección de después de la emergencia.
Trat. 3 = pH y aplicación de 18,136 C En cuanto al contenido de proteína bruta (PB),
fertilizantes el análisis de varianza revela que no existen diferencias
estadísticas significativas entre tratamientos con un
CV= 5,29%, siendo el T3 el de mayor contenido de
CV 3,75%. *Valores con letras similares no PB (12,274%) en promedio, resultado similar presenta
varían entre sí, y valores con letras diferentes son el T4 con 12,2636%, siguen T1 y T2 con contenidos
estadísticamente significativas según el Test de inferiores, lo cual se refleja en el Gráfico 3.
Tukey al 0.05% de probabilidad de error.

Siguiendo con el análisis, podemos observar

en el Gráfico 2, la tendencia del porcentaje de materia
seca (MS) según los tratamientos, siendo el de mayor
porcentaje el T2 (20,414%), seguido del T1 (20,26%),
similares matemáticamente, luego el T4, y finalmente
el T1 con un tenor inferior en el contenido de MS.

Gráfico 3: Contenido promedio de proteína bruta

(%) por tratamientos.
134 Britos, A. et al.: Fertilización de Brachiaria brizanthas. Rev. Vet. 33: 2, 130-135, 2022
En el Gráfico 3 se puede observar que el
tratamiento que recibió una corrección previa del pH
y posterior aplicación de fertilizante (T3) presentó
mayor contenido de PB, similares resultados fueron
obtenidos con el tratamiento que recibió solo la
aplicación de fertilizantes (T4) sin previa corrección
de pH. Este comportamiento probablemente se deba
a que la aplicación de fertilizantes con urea, aportó
nitrógeno suficiente disponible para aprovechar la
síntesis de aminoácidos y consecuentemente aumentó
el contenido de proteínas.
Por otro lado, se encuentran los tratamientos
que no recibieron aplicación de fertilizantes, que
presentaron contenidos inferiores de proteínas
presumiblemente por la ausencia de cantidades
suficientes de nitrógeno para la síntesis de
aminoácidos, aunque estadísticamente no difieren de
los demás tratamientos.
De modo general, la composición relativa de
proteína bruta, es alta en todos los tratamientos en
comparación con lo obtenido por Gómez; Burgos, y
Peralta 5, que en un experimento realizado sobre la
determinación de la composición bromatológica de
dos variedades de pasto (B. brizantha, cv brs Piatã
y Marandú y B. ruziziensis), hallaron que el cv Piatã
presentó el menor contenido de PB con 9,3% frente
al 9,9% de Marandú y 11,5% de la B. ruziziensis sin
diferencias estadísticas.
En lo referente a los resultados de fibra
detergente neutro (FDN), se demuestra por el test
ANOVA que no existen diferencias estadísticamente
significativas entre tratamientos con CV= 2,81%,
siendo el T4 con aplicación de fertilizante sin previa
corrección de pH el de mayor contenido de FDN
(Gráfico 4), seguido por el T3 el cual recibió una
previa corrección de pH del suelo y posteriormente la
aplicación de fertilizantes y por último se encuentran
el T1 Testigo y T2 el cual recibió la aplicación de
calcáreo como corrección de pH del suelo, como se
observa en el siguiente gráfico.
Gráfico 4. Contenido en % de fibra detergente
neutro (FDN).
Aunque los resultados presentados en el
gráfico no demuestran significancia estadística, estos
tratamientos con aplicación de fertilizantes, mostraron
mayor contenido de FND de los que no lo recibieron.
El contenido promedio global de FND en
este experimento fue de 65,8%. En líneas generales
se puede decir que es bajo en comparación con
resultados obtenidos por otros 5 que evidenciaron que
el cv Piatã presentó el mayor contenido en FND con
71,4 % frente al 70,7% de Marandú y 65,6% de B.
ruziziensis.
Por otro lado, la calidad forrajera se ve
influenciada por el ajuste en la fertilización según la
necesidad del cultivo, en este sentido Días 3 aseveró
que al equilibrar la nutrición en el forraje perenne,
se puede aumentar la calidad y producción forrajera
reduciendo costos.
CONCLUSIÓN
En base a los resultados obtenidos tanto
del rendimiento de materia verde, como en la
composición bromatológica (MS, PB, FDN), se
observaron variaciones en los tratamientos que
recibieron fertilización con y sin corrección del pH
del suelo, recomendando de esta manera que para una
buena producción forrajera se deberían previamente
realizar análisis de suelos para luego implementar los
fertilizantes adecuados.
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136 Slanac,A.L. et al.: Digestión en bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 136-145, 2022

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 136-145, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Digestión de láminas foliares de Paspalum notatum sometidas

a diferentes tiempos de incubación ruminal en bovinos

Slanac, A.L.1; Balbuena, O.2; Peichoto, M.C.3; Kucseva, C.D.4

1
Cátedra de Fisiología, 2Cátedra de Nutrición, Fac. Cs. Veterinarias UNNE, 3Fac. Cs. Agrarias, UNNE,
Corrientes. 4INTA Col. Benítez, Chaco, Argentina.
E-mail: alslanac@vet.unne.edu.ar

Resumem
Slanac, A.L.; Balbuena, O.; Peichoto, M.C.; Kucseva, C.D.: Digestión de láminas foliares de
Paspalum notatum sometidas a diferentes tiempos de incubación ruminal en bovinos. Rev. Vet.
33: 2, 136-145, 2022. Con el objetivo de evaluar la degradación ruminal de Paspalum notatum
(pasto horqueta) en rumen de bovinos en distintas épocas del año, en un campo del nordeste
argentino se recolectaron muestras de dicha pastura a los 15, 30 y 45 días de rebrote, se cortaron y
colocaron 5 g en bolsas de dacrón, para ser introducidas en el rumen a 120; 72; 48; 24; 12; 6; 3 y
0 horas, y retiradas al mismo tiempo. Una alícuota se fijó en solución de formol aceto-alcohólica
(FAA), se deshidrató con acetona y montó en lámina de aluminio y metalizó para observación en
microscopio de barrido (MEB). Se determinó la degradación de los tejidos según el estado de las
paredes celulares. Se establecieron cuatro categorías: D: altamente degradado; DA: degradación
avanzada; PD: parcialmente degradado; ND: no degradado. En otoño, el corte de 15 días a 12 h, la
desaparición del clorénquima (mesófilo) fue avanzado, y el floema comenzó a ser digerido. Luego
de 48 h algunas células paranquimáticas de la vaina del haz permanecieron sin digerir. A 30 días
y 48 h de incubación, mesófilo y floema sufrieron degradación completa. A 45 días en cambio
solo mostró una digestión completa para el clorénquima, el floema presentó digestión avanzada.
En invierno, a 24 hs solo permanecieron los tejidos xilemáticos y casquete de esclerénquima
abaxial. Al cabo de 48 h en rumen lo único no digerido fue xilema, esclerénquima y vaina del haz.
El mesófilo y el floema, a los 15 días y 24 horas, se digirieron en un 100%, para 30 y 45 días, se
observó una digestión avanzada. En primavera las tres edades, mostraron clorénquima, floema, y
vaina del haz parcialmente degradados a las 12 h, el in situ de 24 h reveló degradación avanzada
y digestión completa luego de 48 h. El xilema, se degradó totalmente a 48 h de incubación en
el corte de 15 días, en cambio para 30 y 45 días, la degradación fue avanzada. En verano el
comportamiento fue similar a primavera. En términos generales las características anatómicas
observadas, en las tres edades de corte y distintas estaciones fueron variables para esta especie.

Palabras clave: Paspalum notatum, degradación ruminal, pastizales, anatomía foliar.

Abstract
Slanac, A.L.; Balbuena, O.; Peichoto, M.C.; Kucseva, C.D.: Digestion of leaflets of Paspalum
notatum subjected to different ruminal incubation times in cattle at different times of the year.
Rev. Vet. 33: 2, 136-145, 2022. In order to evaluate the ruminal degradation of Paspalum notatum
(grass pasture) in rumen of bovines at different times of the year, in a field of northeastern Argentina,
samples of this pasture were collected at 15, 30 and 45 days of regrowth, were cut and placed 5 g
in dacron bags, to be introduced in the rumen at 120, 72, 48, 24, 12, 6, 3 and 0 hours, and removed
at the same time, an aliquot was fixed in aceto-alcoholic formalin solution (FAA), dehydrated with
acetone and mounted on aluminum foil and metallized for observation in scanning microscope
(MEB). The degradation of the tissues was determined according to the state of the cell walls.

Recibido: Enero 2022. Aceptado: Abril 2022.

Slanac,A.L. et al.: Digestión en bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 136-145, 2022 137

Four categories were established: D: highly degraded; DA: advanced degradation; PD: partially
degraded; ND: not degraded. In autumn, the cut from 15 days to 12 hours, the disappearance of
the chlorenchyma (mesophyll) was advanced and the phloem beganto be digested. After 48 hours,
some paranchymal cells of the beam sheath remained undigested. At 30 days and 48 hours of
incubation, mesophyll and phloem suffered complete degradation. At 45 days instead, he only
showed a complete digestion for the chlorenchyme, the phloem presented advanced digestion. In
winter, at 24 hours on lythex ylem tissues and abaxial sclerench y maremained. After 48 hours
in rumen the only thing not digested was xylem, sclerenchyma and sheath of the beam. The
mesophyll and the phloem, at 15 days and 24 hours, were digested 100%, for 30 and 45 days,
advanced digestion was observed. In spring, the three ages showed chlorenchyme, phloem, and
partially degraded sheath at 12 hours, the 24-hour the reveal e advanced degradation and complete
digestion after 48 hours. The xylem, was degraded in it sentir et y to 48 hours of the cut of 15 days,
instead for 30 and 45 days, the degradation was advanced . In summer the behavior was similar
to spring. In general terms the anatomical characteristics observed, in the thre eages of cut and
different seasons were variable fort his species.

Key words: Paspalum notatum, rumen degradability, grasslands, foliar anatomy.

INTRODUCCIÓN . Las paredes celulares muy delgadas (0,1 a 0,2 um),

Los rumiantes obtienen de los forrajes
la energía necesaria para su metabolismo por
fermentación microbiana de los tejidos vegetales 1 .
Elevadas ganancias diarias de peso vivo requieren de
un gran consumo de forrajes y alta digestibilidad de
las paredes celulares.
La organización estructural de los tejidos que
integran los órganos de las plantas influyen sobre el
consumo a través de su efecto sobre la tasa de pasaje
por el rumen, del tamaño y naturaleza de la partícula
producida, y además afecta la digestibilidad de la
materia seca por medio de las características de la
pared celular, las que determinan la disponibilidad
de sus polisacáridos para los microorganismos del
rumen 3, 23 .
Todos los forrajes están compuestos de un
conjunto heterogéneo de tipos celulares, cada uno de
los cuales tiene una pared celular con características
únicas 6 . En las hojas, las células están organizadas
en tejidos especializados que definen tres sistemas: el
dérmico, que comprende a la epidermis, una envoltura
protectora externa que recubre el cuerpo de la planta;
el vascular, compuesto por el xilema como conductor
de agua y el floema como conductor de savia; y el
fundamental, que incluye los tejidos básicos de la
planta con distintos grados de especialización como
es el caso del clorénquima y el esclerénquima 10 .
Este último, junto al xilema son los principales
tejidos de sostén, con paredes gruesas y lignificadas 6
. La disminución de la digestibilidad en los forrajes
está asociada al incremento de pared celular y a la
lignificación de los tejidos a medida que maduran 16, 29
primarias y no lignificadas del clorénquima y floema,
no constituyen un problema para su digestión 25 .
El xilema y el esclerénquima, tienen paredes
celulares secundarias (de 1 a 3 um de espesor),
lignificadas, y representan un obstáculo para su
degradación en el rumen 24 . La proporción de los
tejidos foliares, el espesor de las paredes celulares y
el grado de lignificación pueden ser modificados por
factores ambientales y el manejo agronómico.
Se ha observado que el adelanto de las fechas
de siembras 14 , la fertilización nitrogenada y el
adecuado suministro de agua 5 , tienen una relación
positiva con la cantidad de tejidos no lignificados y la
digestibilidad de los forrajes.
Los tejidos de baja digestibilidad se
correlacionan negativamente con los tenores de
proteína bruta y digestibilidad, positivamente con
tenores de fibra y lignina 7 . Los porcentajes de tejidos
foliares lentamente o no digestibles proporcionan una
buena estimación del valor nutritivo de las especies
forrajeras 9 .
Así, a partir de la década del 60 comienzan a
realizarse estudios de evaluación de calidad forrajera
basados en la estimación de la resistencia de los
tejidos foliares a la acción de la microbiota ruminal 2 ,
ya que la determinación de los porcentajes de tejidos
es una herramienta útil del mejoramiento genético al
permitir una rápida selección de especies 9 .
Las plantas en general, y en especial las
gramíneas, presentan una importante tendencia
a disminuir la digestibilidad de la materia seca
producida en la medida en que avanzan en el estado
de madurez, debido a alteraciones en la anatomía y en
138
la composición de los tejidos 17 . Esas variaciones en
la estructura anatómica podrían explicar los cambios
observados en la digestibilidad a lo largo del ciclo de
desarrollo de la planta y entre diferentes componentes
de la misma 18 .
Cuantificar la proporción en que cada tejido se
encuentra presente en las diferentes partes de la planta
podría ser una alternativa para estimar la variación
observada en la digestibilidad de la materia seca 21
. Sin embargo, la degradación varía entre especies,
cultivares y/o entre las fracciones hoja y tallo, aún
dentro de una misma fracción, según demostraron en
varias especies C3 y C4 20, 10 .
Estas diferencias se deben, en parte, a
características anatómicas tal como el área ocupada
por cada tejido en órganos de la planta 8, 22 . La cantidad
de tejidos lignificados en láminas y tallos reducen la
digestibilidad de las especies 19 .
El objetivo del presente trabajo fue evaluar la
degradación de tejidos foliares de Paspalum notatum
Flüggé, pasto horqueta, a diferentes tiempos de
incubación ruminal en bovinos, en distintas épocas
del año. Paspalum notatum es una gramínea perenne,
de ciclo estivo-otoñal y un importante recurso de los
campos naturales del Centro y Noreste Argentino, Sur
de Brasil y Paraguay 13 .
MATERIAL Y MÉTODOS
El material vegetal evaluado fue recolectado
en un campo del nordeste argentino (latitud sur 27º
10’; longitud oeste 58º 57’). Las muestras de pasto
horqueta (Paspalum notatum), se tomaron por medio
de cortes con tijeras a 5 cm de altura de todo el
material disponible en condición de pastoreo, dentro
de un marco de 50 cm x 50 cm.
El método utilizado fue el de exclusión del
pastoreo por medio de alambrado perimetral, con
cortes a los 15, 30 y 45 días del corte de limpieza,
en cada una de las estaciones del año. Las muestras
de pastos, se colocaron en bolsas de papel limpias
y puestas a secar en estufa de aire forzado a 60ºC
durante 48 a 72 horas, luego fueron sometidas a
procesamientos con una licuadora para obtener
fracciones de 1,5 a 2,5 cm de longitud a efectos de
simular la masticación.
Luego 5 g de material seco de las distintas
muestras del pasto, se colocaron en bolsas de dacrón
que fueron introducidas en el rumen en forma
secuencial (120; 72; 48; 24; 12; 6; 3 y 0 horas), y
retiradas al mismo tiempo.
De las muestras sometidas a degradación
ruminal, y que fueron lavadas con agua fría hasta
que el líquido efluente salió incoloro, se tomó una
alícuota que se colocó en solución de formol aceto-
alcohólica (FAA), para inhibir totalmente la actividad
Slanac,A.L. et al.: Digestión en bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 136-145, 2022
microbiana sobre el material y así conservar intacta
su estructura.
De este residuo, se tomaron muestras para
ser preparadas y observadas con microscopio
electrónico de barrido (MEB). Del material fijado
se realizaron cortes transversales de la lámina foliar
de aproximadamente 1 mm de espesor. Los cortes
obtenidos fueron deshidratados en una serie creciente
de acetona para el secado a punto crítico.
Una vez seco el material se montó sobre
una lámina de aluminio y posteriormente fueron
recubiertas con una película de oro utilizando un
metalizador marca Denton, en atmósfera de argón,
observadas y obtenidas las microfotografías con
microscopio electrónico de barrido marca JEOL LV-
5800.
Sobre éstas se determinó el grado de
degradación de los tejidos según el estado de las
paredes celulares. Se establecieron cuatro categorías
de acuerdo a trabajos previos 11, 12 : D: altamente
digerido, el tejido está ausente; DA: digestión
avanzada, se observan restos de paredes sin digerir;
PD: parcialmente digerido, las paredes muestran
escasa digestión; ND: no digerido, las paredes no
presentan signos de digestión y están intactas.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En la época otoñal, las láminas foliares con 3
y 6 h de incubación ruminal no presentaron digestión
apreciable de los tejidos vegetales, tanto de los
fácilmente digestibles como el clorénquima (mesófilo)
y floema, como de los pobres o lentamente digestibles:
xilema, esclerénquima, vaina parenquimática y
epidermis.
Luego de 12 h de incubación ruminal (Tabla
1), de las muestras que fueron cortadas a 15 días de
crecimiento, la desaparición del mesófilo fue avanzado
pero no se completó, y el floema comenzó a ser
digerido en algunos haces. La vaina parenquimática
de los haces vasculares permaneció intacta o apenas
digerida en los haces mayores, mientras que en los
haces menores su desaparición fue más importante.
La epidermis adaxial apareció intacta y
en las zonas en que estaba ausente se debió a su
desprendimiento, mientras que la epidermis abaxial
presentó algún grado de digestión quedando en
algunas células sólo sus paredes tangenciales externas
y otras sin degradar. Al cabo de 24 h los únicos tejidos
que permanecieron sin digerir fueron el xilema,
esclerénquima y la vaina del haz.
Después de 48 h de incubación, algunas células
de la vaina parenquimática permanecieron sin degradar,
en la zona adyacente a los casquetes de esclerénquima
que se desprendieron. En algunas regiones estaban
ausentes las paredes tangenciales internas de la
Slanac,A.L. et al.: Digestión en bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 136-145, 2022
epidermis abaxial. Solamente permanecieron los
tejidos xilemáticos rodeados por algunas células de la
vaina y casquete de esclerénquima abaxial (Figura 1A).
Para el corte de 30 días de rebrote, y a las 48
h de incubación, las paredes celulares del mesófilo y
del floema fueron degradadas totalmente, y a las 24
h mostraron una degradación avanzada (Figura 1B).
Para el corte de 45 días (Figura 1C), en cambio
solo mostró una digestión completa el clorénquima,
el floema que a las 12 h de incubación se mostró
indigestible, a las 48 h tuvo una degradación avanzada.
Xilema y epidermis en estas dos edades de rebrote no
sufrieron ataque microbiano por lo que se presentaron
sin modificación en todos los horarios de incubación.
En invierno, en las láminas foliares con 3 y
6 h de incubación ruminal no se observó digestión
apreciable de los tejidos vegetales, tanto de los
fácilmente digestibles (clorénquima y floema), como
de los pobres o lentamente digestibles (xilema,
esclérenquima, vaina del haz y epidermis), para
las distintas edades de corte. A las 24 horas solo
permanecieron los tejidos xilemáticos (Tabla 2),
rodeados por su vaina y el casquete de esclerénquima
abaxial, dichas unidades de tejido se mantuvieron
unidas únicamente por las paredes tangenciales
internas de la epidermis abaxial.
Al cabo de 48 horas de incubación ruminal
(Figura 2), los únicos tejidos que permanecieron
indigeridos fueron xilema, esclerénquima y vaina
del haz. Tampoco se observaron grandes diferencias
respecto del estado de las láminas a las 24 h, excepto
que los haces aparecieron solitarios, con presencia de
uno solo de los casquetes esclerenquimáticos y las
paredes exteriores de unas pocas células epidérmicas
relacionadas a éstos. En esta especie estudiada, el
mesófilo y el floema fueron digeridos en un 100%
después de las 24 horas para el corte de 15 días y
mostraron una digestión avanzada los cortes de 30 y
45 días (Tabla 2).
En la época primaveral (Tabla 3), para las
tres edades de rebrote y para 12 h de incubación en
el rumen, el clorénquima, floema y la vaina del haz
fueron en todos los casos parcialmente degradados,
sufriendo una degradación avanzada para el in situ de
24 h, observándose una digestión completa luego de
48 h de incubación.
En cuanto al xilema, para el rebrote de 15
días y a las 48 h de incubación fue degradado en
su totalidad, en cambio para los rebrotes de 30 y 45
días a las 48 h de incubación, permaneció con una
degradación avanzada (Figuras: 3 A, B y C). A las
72 h de incubación mostró una degradación total. La
epidermis permaneció sin degradar aún a las 120 h de
incubación.
En la época estival (Tabla 4), esta especie
mostró un comportamiento similar que en la época
139
primaveral, donde podemos observar que clorénquima,
floema y vaina del haz, para las tres edades de corte y
para el in situ de 12 h, fueron parcialmente digeridos,
con degradación avanzada para el in situ de las 24 h,
y ya a las 48 h de incubación presentaron una pérdida
total de clorénquima y floema, comparada con una
hoja sin digerir.
El xilema, en cambio, para el rebrote de 15
días, resultó ser indigerible a las 12 h de incubación,
parcialmente digerible a las 24 h de incubación y a las
48 h (Figura 4), mostró una digestión avanzada. En
los rebrotes de 30 y 45 días para todos los horarios de
incubación fue indigerible. El mismo comportamiento
los mostró la epidermis para todas las edades de
rebrote y todos los horarios de incubación.
La digestión de los tejidos foliares para P.
notatum concuerdan mayormente con el patrón
de digestión característico de gramíneas reportado
previamente 13, 15 donde observaron que en todas
las especies, el mesófilo (clorénquima) y el floema
habían desaparecido en más del 80% luego de 24
horas de incubación, el resto de los tejidos solo se
vió afectado después de este tiempo, excepto tejidos
como el xilema y la vaina interna del haz que no se
degradaron.
La composición y organización molecular de
las paredes celulares es la mayor determinante en
la tasa y extensión de la degradación de las paredes
celulares de células aisladas; sin embargo ese
comportamiento no se observa in vivo, debido a que
las células que integran los tejidos y la estructura de
éstos puede tener más influencia en su degradación en
el rumen que la propia composición química de sus
paredes 28 .
La accesibilidad a los carbohidratos de las
paredes celulares por la microflora del rumen está
limitada por el arreglo estructural de cada tipo de
tejido y por la química de las paredes celulares 4 . Así,
tejidos altamente ordenados y de paredes secundarias
lignificadas como el esclerénquima y el xilema tienen
una doble barrera física y química que impide su
digestión 28 .
Sin embargo, la pared secundaria lignificada
en gramíneas puede ser digerida cuando se facilita el
acceso de los microorganismos del rumen a ellas. La
pobre digestibilidad es debida a los límites impuestos
por la estructura. El conjunto formado por la laminilla
media y la pared primaria, es el sitio donde comienza
la deposición de lignina, que es indigestible 26, y
constituye una de las limitantes mayores a la digestión
de las gruesas paredes secundarias lignificadas.
A su vez, la laminilla media une las células
adyacentes, consecuentemente las fibras forman
grandes partículas multicelulares, muchas de las
cuales no tienen extremos rotos, por lo que resultan
completamente indigestibles 11 .
140
En trabajos donde se caracterizó la degradación
de tejidos foliares de Elymus breviaristatus y E.
scabriglumis en estado vegetativo y reproductivo
durante 24, 48 y 72 h de digestión in situ, se
observó que el clorénquima fue en todos los casos
parcialmente degradado hasta las 48 h 19, similar a
lo hallado en el presente trabajo. Las características
histológicas del clorénquima y su arreglo estructural
permiten su rápida degradación 7 . De allí que en el
patrón secuencial de digestión sea uno de los tejidos
que primero se digiere, habiéndose observado su
degradación casi completa luego de 8 h de digestión
en el rumen, y 12 o 24 h en varias Festucoideas 26 .
En estimaciones realizadas 19, el mínimo
porcentaje de clorénquima degradado fue medido
a las 24 h, alcanzando casi en todos los casos un
100% de degradación al término del ensayo a las 72
h. Nuestros resultados evidencian que en el corte de
mayor edad estudiado (45 días), una digestibilidad
total, en otoño, primavera y verano, no así en invierno
donde solo observamos digestibilidad avanzada.
La diferencia en la tasa de degradación
del clorénquima en las distintas edades, podría
estar relacionado con la deposición diferencial de
inhibidores de la digestión microbiana en las paredes
de células cercanas, como la lignina. Las diferencias
en el contenido relativo de tejido esclerenquimático
de difícil digestión, y probablemente lignificado a
medida que avanza la edad de la planta adyacente con
el clorénquima, pueden ser parcialmente responsables
de los resultados obtenidos en la degradación de este
último tejido 19 .
Las características propias de las células
esclerenquimáticas explican su resistencia física
a la digestión 7, como lo observado en la especie
estudiada aquí, y lo reportado para el agropiro criollo,
el cual posee bajo porcentaje de este tipo de tejido 9,
18
. En base a caracteres histológicos se estudiaron las
limitaciones estructurales de los distintos tejidos a la
acción de la microbiota ruminal 28.
Los autores analizaron la relación entre la
superficie de la pared celular de cada tejido y el
volumen celular, la tasa de digestión bacteriana
y la accesibilidad de éstas a la pared celular. En el
caso del parénquima esclerénquima, la organización
en bloques de fibras requiere mayor tiempo de
difusión microbiana a través del tejido y el tiempo
de degradación es mayor que en otros tejidos 7, 27, 30 .
Por lo tanto, es razonable encontrar una degradación
más lenta del parénquima y esclerénquima que del
clorénquima, tal como la mencionada en este estudio
y lo reportado para el agropiro criollo 19. Sin embargo,
en orden secuencial, el parénquima es de los primeros
tejidos en ser degradado 21. El floema es uno de los
tejidos vasculares que se menciona como de rápida
Slanac,A.L. et al.: Digestión en bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 136-145, 2022
digestión tanto para gramíneas de áreas templadas
como tropicales 2, 11, 12 .
En este trabajo el tejido evidenció una digestión
parcial ya a partir de las 12 h en casi todas las épocas,
con un comportamiento similar a Setaria lachnea
(moha perenne) que luego de 24 h fue completamente
degradado 12 y contrariamente a lo reportado para el
agropiro criollo 19, que fue totalmente no degradado a
las 24 h en todos los casos, aunque a las 48 h fue en
general más degradado que el xilema y hasta el final
de las 72 h permaneció degradado en forma parcial.
Las variaciones en el desarrollo de la planta
y de tipo climáticas por cambios de humedad y
temperatura, conlleva a variaciones químicas de las
paredes de estas, que modifican el accionar de los
distintos microorganismos ruminales, lo que hace que
se modifique el aprovechamiento de la pastura por
parte del animal.
La degradabilidad de tejidos como xilema,
esclerénquima y vaina del haz, varió en la especie aquí
estudiada. Trabajos realizados con Moha perenne, a la
que incubaron durante 24 y 48 h en rumen, se observó
que luego de 48 h de incubación, solo quedaron
remanentes del xilema rodeado por la vaina Kranz y
fragmentos de epidermis abaxial unidos a casquetes
de esclerénquima 12.
En general, la vaina de Kranz, es digerible
muy lentamente 2, pero es completamente degradable
variando los tiempos de digestión 27. Resulta destacar
la elevada proporción de vaina del haz en Setaria
lachnea que está en relación con el mayor número
de haces vasculares por lámina que presentan las
especies C4 12.
Al respecto se hace hincapié en la importancia
de los factores extramuros que estarían restringiendo
dicho acceso 28. Estos autores citan como factores de
este tipo a la cutícula, a capas de cera y a la laminilla
suberizada de la vaina Kranz. Aspectos estos
relacionados, en el caso de los dos primeros, con la
epidermis adaxial y abaxial, y el tercero con la vaina
Kranz. Tejidos que aparecen en mayor proporción
en S. lachnea y que son los determinantes de la
mayor cantidad de tejido digeridos lentamente o no
digeribles 13.
En términos de porcentajes se mencionan
valores de 13 a 32% de degradación de xilema en
Poaceas tropicales luego de 48 h de digestión 29, datos
que concuerdan en general, con estudios reportados
sobre la proporción relativa de los distintos tejidos
foliares, de gramíneas que integran los pastizales
de la Provincia de Santa Fe 14; como ser Setaria
cordobensis, Urochloa lorentziana, Pappophorum
caespitosum, P. vaginatum, Sorghastrum pellitum,
Sporobolus indicus y Paspalum plicatum, donde
observaron que los porcentajes de los distintos tejidos
Slanac,A.L. et al.: Digestión en bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 136-145, 2022 141

foliares, la tendencia en la proporción y velocidad de que la diferencia mencionada en la degradación del

digestión, coincide con la regla general reportada para
las gramíneas 2,27,14, mesófilo y floema (rápidamente
degradados), epidermis, vaina parenquimática del haz
(lentamente degradados), esclerénquima (lentamente
a no degradado), cutícula y xilema (no degradado).
Trabajos realizados con gramíneas invernales
en el Uruguay, se califica como de buena digestibilidad,
a aquellas que poseen en sus láminas menos del 15%
de esclerénquima y más del 50% de clorénquima
10
. Esta clasificación se basa, en el hecho de que,
mientras el esclerénquima es un tejido considerado
mayormente indigestible, el clorénquima es el tejido
de máxima digestión en el rumen 2 .
La variación en la digestión de tejidos como
xilema, esclerénquima y vaina del haz, responden
tanto al estado fenológico como a la estación del año
donde se realizó la toma de muestra. Los resultados
obtenidos en capim-elefante 5 donde se estudiaron
las alteraciones histológicas ocurridas en cultivares
de capim-elefante en 4, 8 e 16 semanas de rebrote
demostraron que la proporción de tejidos lignificados
aumenta con la madurez del material, siendo más
acentuado en tallos y láminas foliares.
La lignificación de la pared celular ocurre
con el envejecimiento de las plantas, acompañando
la reducción de áreas de degradación de tejidos. Esta
variación en la degradabilidad de los tejidos ocurre
según aumenta la edad de la planta y la disminución
en la digestibilidad de la materia seca y proteína bruta
de la especie bajo ensayo, es lo que lleva a sugerir
que el porcentaje de tejidos digeribles lentamente y
no digestibles es un buen estimador del valor nutritivo
de gramíneas C3 y C4 19.
La epidermis, cuyas células pueden estar más
cutinizadas con la mayor edad de la planta, también
dificulta el acceso de microorganismos 20. Es probable
tejido vascular se deba también al porcentaje lignifi-
cado de las células epidérmicas o a la presencia de
cutícula en ellas. En las especies estudiadas, a las 12 h
de exposición ruminal el parénquima y parte del teji-
do vascular habían comenzado a ser degradadas, pero
la epidermis permanecía intacta.
En otras especies, tales como Cynodon dac-
tylon y Festuca arundinacea la epidermis también
permaneció sin degradar aún después de siete días
de incubación 3, quizás debido a la presencia de com-
puestos fenólicos. Por el marcado engrosamiento ob-
servado en las paredes celulares de las especies en es-
tudio, dicha presencia fue probablemente la causa de
su permanencia sin degradar en el material incubado
en rumen, coincidiendo con los reportes hechos por
otros autores 4, 19, 26.
En conclusión, en términos generales las car-
acterísticas anatómicas observadas, en las tres edades
de corte y distintas estaciones fueron variables para
esta especie. La organización estructural o anatomía
de los órganos de las plantas como así sus tejidos con-
stituyentes, además de incidir en el consumo, también
influyen en la digestibilidad de la pared celular, pro-
porcionando mayor o menor acceso de los microor-
ganismos ruminales a los polisacáridos. Esto permite
comprender la degradación preferencial, su relación
con la calidad nutritiva y su comparación con otras
especies de uso potencial en los sistemas de produc-
ción ganadera.
La determinación de la proporción de los teji-
dos, asociado a la definición de objetivos de manejo
de la pastura podría ser una alternativa para mejorar
los índices de producción, donde el forraje podría ser
cosechado en el estado óptimo, con el máximo posible
de tejidos de alta digestibilidad.

Tabla 1: Grado de digestión de los tejidos foliares de P. notatum según el tiempo de permanencia en el rumen
(12, 24 y 48 horas), a diferentes edades de rebrote en otoño.

Edad de corte (días)

15 30 45
Tejido foliar
12 24 48 12 24 48 12 24 48

Clorénquima PD DA D PD DA D PD DA D

Floema PD DA D DA DA D ND PD DA
Vaina del haz PD PD DA PD PD D ND ND ND
Xilema ND PD PD ND ND ND ND ND ND
Epidermis ND ND ND ND ND ND ND ND ND

Referencias: ND: no digerido, no hay pérdida de tejido con respecto a una hoja sin digerir. PD: parcialmente
digerido, remoción parcial de ciertas regiones. DA: digestión avanzada, remoción significativa y general pero
sin pérdida total. D: totalmente digerido, pérdida total.
142 Slanac,A.L. et al.: Digestión en bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 136-145, 2022

A B C
Figura 1: Fotomicrografías con MEB de cortes transversales de láminas foliares de P. notatum sometidas a
digestión ruminal durante 48 h. Para cortes de 15 días (A), 30 días (B) y 45 días (C) en otoño. Aumentos 300x.

Tabla 2. Grado de digestión de los tejidos foliares de P. notatum según el tiempo de permanencia en
el rumen (12, 24 y 48 horas), a diferentes edades de rebrote en invierno.

Edad de corte (días)

15 30 45
Tejido foliar
12 24 48 12 24 48 12 24 48
Clorénquima DA D D PD DA D ND PD DA
Floema DA D D PD DA D ND PD DA
Vaina del haz PD ND ND PD ND ND ND ND ND
Xilema PD ND ND PD ND ND ND ND ND
Epidermis ND ND ND ND ND ND ND ND ND

Referencias: ND: no digerido, no hay pérdida de tejido con respecto a una hoja sin digerir. PD: parcialmente
digerido, remoción parcial de ciertas regiones. DA: digestión avanzada, remoción significativa y general pero
sin pérdida total. D: totalmente digerido, pérdida total.

A B C

Figura 2: Fotomicrografías con MEB de cortes transversales de láminas foliares de P. notatum sometidas a di-
gestión ruminal durante 48 h. Para cortes de 15 días (A), 30 días (B) y 45 días (C) en invierno. Aumentos 300x.
Slanac,A.L. et al.: Digestión en bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 136-145, 2022 143

Tabla 3. Grado de digestión de los tejidos foliares de P. notatum según el tiempo de permanencia en rumen
(12, 24 y 48 horas), a diferentes edades de rebrote en primavera.

Edad de corte (días)

15 30 45
Tejido foliar
12 24 48 12 24 48 12 24 48
Clorénquima PD DA D PD DA D PD DA D
Floema PD DA D PD DA D PD DA D
Vaina del haz PD DA D PD DA D PD DA D
Xilema PD DA D PD PD DA PD DA DA
Epidermis ND ND ND ND ND ND ND ND ND

Referencias: ND: no digerido, no hay pérdida de tejido con respecto a una hoja sin digerir. PD: parcialmente
digerido, remoción parcial de ciertas regiones. DA: digestión avanzada, remoción significativa y general pero
sin pérdida total. D: totalmente digerido, pérdida total.

A B C

Figura 3: Fotomicrografías con MEB de cortes transversales de láminas foliares de P. notatum sometidas a
digestión ruminal durante 48 h. Para cortes de 15 días (A), 30 días (B) y 45 días (C) en primavera. Aumentos
600x
Tabla 4: Grado de digestión de los tejidos foliares de P. notatum según el tiempo
de permanencia en rumen (12, 24 y 48 horas), a diferentes edades de rebrote en verano.

Edad de corte (días)

15 30 45
Tejido foliar
12 24 48 12 24 48 12 24 48
Clorénquima PD DA D PD DA D PD DA D
Floema PD DA D PD DA D PD DA D
Vaina del haz PD DA DA PD DA DA PD DA DA

Xilema ND PD DA ND ND ND ND ND ND
Epidermis ND ND ND ND ND ND ND ND ND

Referencias: ND: no digerido, no hay pérdida de tejido con respecto a una hoja sin digerir. PD: parcialmente
digerido, remoción parcial de ciertas regiones. DA: digestión avanzada, remoción significativa y general pero
sin pérdida total. D: totalmente digerido, pérdida total.
144
Figura 4: Fotomicrografías con MEB de cortes transversales de láminas foliares de P. notatum sometidas a
digestión ruminal durante 48 h. Para cortes de 15 días (A), 30 días (B) y 45 días (C) en verano. Aumentos 300x.
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146 Teibler, G.P. et al.: Laminitis equina inducida por serpiente. Rev. Vet. 33: 2, 146-151, 2022

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2,146-151, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Laminitis equina in vitro inducida por veneno entero

y Fosfolipasa A2 de serpiente Bothrops alternatus de Argentina

Teibler, G.P.1; Maruñak, L.S.1; Bogado, E.F.1; Pollitt, C.2

1
Facultad Cs. Veterinarias, UNNE, Corrientes, Argentina. 2School of Vet. Sci., Australian Eq.
Lam. Res. Unit. Queensland Univ. Gatton Campus, Australia.
E-mail: pteibler@vet.unne.edu.ar

Resumen
Teibler, G.P.; Maruñak, L.S.; Bogado, E.F.; Pollitt, C.: Laminitis equina in vitro inducida
por veneno entero y Fosfolipasa A2 de serpiente Bothrops alternatus de Argentina. Rev. Vet.
33: 2, 146-151, 2022. Bothrops alternatus (yarará grande, víbora de la cruz) es una serpiente
perteneciente a la familia Viperidae, y se encuentra ampliamente distribuida en Argentina. En el
nordeste de nuestro país, esta serpiente ocasiona el mayor número de accidentes. Existen reportes
de envenenamiento en equinos, siendo sus signos y síntomas más importantes: inflamación y
hemorragia, dermo y mionecrosis en el área de inoculación del veneno. Por otro lado, la acción
sistémica consiste en incoagulabilidad sanguínea, hemorragia y lesiones de órganos que pueden
comprometer la salud del animal. Una secuela, debida a la intoxicación por esta serpiente, es
la laminitis, que afecta la capacidad de trabajo del equino, independientemente del sitio de
inoculación del veneno, debido a la acción sistémica del mismo. Esta patología produce dolor,
claudicación, que luego puede progresar con deformación del casco. Se efectuó un estudio in vitro,
tomando como modelo experimental muestras (explantes) de pie equino. Estas fueron incubadas
con veneno entero y con Fosfolipasa A2 (PLA2) del mismo veneno con el objeto de reproducir
laminitis a los efectos de corroborar datos clínicos reportados en accidentes por yarará como así
también proponer una metodología de estudio de laminitis en explantes de pie equino. La laminitis
inducida por el veneno entero se caracterizó por la separación de la unión dermo–epidérmica,
desprendimiento de membrana basal y citotoxicidad y consecuentemente desprendimiento de
unión dermo–epidérmica, permaneciendo las células basales epidérmicas con alteraciones en
forma y tamaño de los núcleos, entre otras anormalidades. En contraste, las muestras incubadas
con PLA2, las células basales epidérmicas mostraron anomalías citoplasmáticas y nucleares, pero
con separación leve de la unión dermoepidérmica y presente solo en algunas áreas de las LES.

Palabras clave: veneno de serpiente, membrana basal, unión dermo-epidérmica.

Abstract
Teibler, G.P.; Maruñak, L.S.; Bogado, E.F.; Pollitt, C.: Equine laminitis in vitro induced by
whole snake poison and Fosfolipasa A2 of Bothrops alternatus from Argentina. Rev. Vet. 33: 2,
146-151, 2022. Bothrops alternatus (yarará grande, víbora de la cruz) is a snake belonging to the
Viperidae family and is widely distributed in Argentina. In the northeast, this snake group for the
majority of the snakebite accidents. There are reports about envenomation in horses with clinical
signs including swelling, hemorrhage, dermo and myonecrosis at the bite sight in addition to

Recibido: Abril 2022. Aceptado: Junio 2022.

Teibler, G.P. et al.: Laminitis equina inducida por serpiente. Rev. Vet. 33: 2, 146-151, 2022 147

systemic effects such as impaired blood coagulation, hemorrhage and damage to vital organs. An
additional consequence in the horse is laminitis which reduces the work capacity of the survivor
on a long-term basis. This occurs independent of the site where the venom was injected. laminitis
induces pain and claudication, and it can evolve to deform the hoof. This study uses explants
from freshly slaughtered horses as an in-vitro assay from the limbs of normal horses in order to
demonstrate the ability of Bothrops snake venom to cause laminitis. Explants were incubated with
whole venom and phospholipases A2 (PLA2). The objective was to reproduce laminitis in vitro
to corroborate the clinical data reported in snake venom accidents. Equine laminitis induced by
whole venom was characterized by damage to the lamellar dermo-epidermal junction, loosening
of the lamellar basement membrane and cytotoxic effects. Epidermal basal cells showed changes
in the shape and size of their nuclei and other abnormalities.

Key words: snake poison, basal membrane, dermo-epidermal union.

INTRODUCCIÓN

Numerosas condiciones clínicas, aparentemente
sin relación, se han vinculado a la fisiopatología de
la laminitis 5, todos los cuales en última instancia,
dan lugar a una histopatología característica 25. Sin
embargo, hasta la fecha no se ha logrado una teoría
unificadora que explique la patogenia de la laminitis 23.
Previo a este trabajo hemos demostrado que la
intoxicación causada por el veneno de serpientes del
género Bothrops, de Argentina, causa un fallo celular
que culmina con el desprendimiento de la unión
dermo-epidermico en el casco del pie equino 2.
La intoxicación por Bothrops se caracteriza por
sus efectos proteolítico, coagulante y hemorrágico
con el desarrollo de un importante daño tisular
caracterizado por dolor, edema, sangrado, ampollas,
mionecrosis y dermonecrosis. La hemorragia que
se presenta inicialmente es local, en el sitio de la
mordedura y posteriormente a nivel sistémico.
Las alteraciones más importantes son alteración
en la coagulación, falla renal aguda, insuficiencia
respiratoria aguda, shock and sepsis 6, 8, 30, 28, 12 y
laminitis 1.
El veneno es de constitución compleja, entre
cuyos componentes las proteínas más relevantes,
metaloproteinasas y fosfolipasa A2, fueron aisladas y
caracterizadas 10, 11 . El veneno de Bothrops alternatus
posee una metaloproteinasa, la que fue aislada y
denominada baltergin, de 55 kDa baltergin, con
importante actividad hemorrágica a nivel local y
sistémico 12. Las metaloproteinasas del veneno de
serpiente (SVMPs) juegan un relevante rol en la
patogénesis de la intoxicación por Bothrops. Son
proteinasas dependientes de zinc cuyo principal
efecto tóxico se deben a la alteración del sistema
hemostático. SVMPs induce la proteólisis de la
lámina basal de micro vasos por la degradación de
las principales proteínas de la matriz extracelular 3, 4.
Del veneno de serpiente Bothrops alternatus
del noreste argentino se aisló una proteína ácida con
actividad de la Fosfolipasa A2 (PLA2) con una masa
molecular de 14,2 kDa, llamado Ba SPII RP 10.
En el presente estudio, utilizamos este
modelo de laminitis in vitro para investigar el rol de
Fosfolipasa A2 y veneno de serpiente en la patogenia
de la laminitis.
El modelo in vitro con explantes lamelares es
una técnica válida para cribar numerosos factores
causantes de laminitis. En el presente estudio,
utilizamos este modelo de laminitis in vitro para
investigar el rol de Fosfolipasa A2 y veneno de
serpiente en la patogenia de la laminitis.
MATERIAL Y MÉTODOS
Venenos
El veneno de las serpientes Bothrops alternatus
adultas, se extrajo de 10 ejemplares de ambos sexos,
cuyas edades oscilaron entre 8 a 10 años de edad. La
extracción del veneno se llevó a cabo en el serpentario
de la provincia de Corrientes, Argentina. La
metodología utilizada fue manual mediante la técnica
de masaje y presión sobre la zona de ambas glándulas,
mientras sus colmillos eran colocados sobre recipientes
de vidrios estériles cubiertas de telas de nylon.
Posteriormente el veneno fue desecado y conservado
a -20ºC hasta el momento de su utilización. Cuando
fue necesario, el veneno se diluyó con solución salina
tamponada con fosfato, pH 7,2.
148 Teibler, G.P. et al.: Laminitis equina inducida por serpiente. Rev. Vet. 33: 2, 146-151, 2022
Aislamiento y purificación
La enzima PLA2 se aisló hasta homogeneidad
mediante tres pasos cromatográficos con las
modificaciones descritas por Vidal y Stopani 29.
Todos los pasos del procedimiento de purificación
se llevaron a cabo a temperatura ambiente (25°C).
El perfil de elución se controló a 280 nm y las
fracciones activas de PLA2se recogieron y utilizaron
para explantes de cultivo. Para analizar la pureza de
la enzima aislada, se realizó SDS-PAGE en geles en
placa de poliacrilamida al 12% siguiendo el método
de Laemmli 19. Los geles se tiñeron con azul brillante
de Coomassie R-250. Los marcadores de masa
molecular estándares fueron albúmina bovina (66
kDa), albúmina de huevo (45 kDa), gliceraldehído-
3-fosfato deshidrogenasa (36 kDa), anhidrasa
carbónica (29 kDa), tripsinógeno (24 kDa), inhibidor
de tripsina (20 kDa), y α-lactoalbúmina (14,20 kDa).
Los experimentos se realizaron de acuerdo con las
pautas del Comité de Ética Animal de la Universidad
de Queensland.
Obtención de explantes dermo-epidermico de pie
equino
Se trabajó con un total de doce pezuñas
de caballos normales, obtenidas de un matadero
comercial de la ciudad de Brisbane, Australia. Estos
fueron transportados en hielo seco a la sala de
disección de la School of Veterinary Science de la
University of Queensland, Australia. Se obtuvo de 8
a 10 explantes dermo-epidermico por cada miembro
y cada experiencia fue acompañada de muestras
controles. Los explantes median aproximadamente 6
mm por 6 mm y se extendían desde la pared interna de
la pezuña a través de la unión laminar, hasta el tejido
conectivo dérmico 25, 26.
Incubación de veneno entero y PLA2 de B.
alternatus en explantes de pie equino.
Los explantes previamente obtenidas del pie
de equinos fueron acondicionadas en recipientes
especiales para ser incubadas con medio de cultivo
D-MEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium),
para los controles y conteniendo 100 mg por ml de
veneno entero, igual procedimiento se realizó para
la incubación con 100 mg / ml de PLA2; en todas
las muestras se agregó gentamicina 0.1 mg/ml. Las
incubaciones se realizaron en estufa a 37ºC, 5% de
dióxido de carbono, 95% de humedad, por 48 hs.
Microscopía electrónica de trasmisión
Las muestras fueron fijadas en glutaraldehído
al 2,5% en tampón de cacodilato de sodio 0,067 M,
pH 7,4, durante 4 horas y se almacenaron en tampón
a 4ºC. El tejido se fijó posteriormente en tetróxido
de osmio al 1% en tampón cacodilato durante 1 ha
temperatura ambiente. Luego, en bloque en acetato de
uranilo acuoso al 5% ya que este procedimiento tiende
a extraer glucógeno. El tejido se deshidrató a través de
una serie de alcoholes, se aclaró en óxido de propileno
y se embebió en una mezcla de Epon-Araldita. Los
bloques se cortaron con un cuchillo de diamante
(Diatome) en un ultramicrótomo Reichert-Jung, se
tiñeron con citrato de plomo 27 y se observaron en un
microscopio electrónico Zeiss EM.
RESULTADOS
Cultivo de explantes controles
La ultraestructura de explantes de unión dermo-
epidérmicas del pie de equinos controles, fueron
estudiadas a través de la Microscopia Electrónica
de Trasmisión, con el objeto de obtener una mejor
comprensión de la fisiopatología de la laminitis
producida por componentes de venenos de serpientes.
En la unión dermo-epidérmica se observó la membrana
basal (MB), caracterizada por la coloración oscura
de la lámina densa cercana al contorno de las células
basales epidermales. Entre la lámina densa de la MB
y el plasmalema de las células basales se encuentra
la lámina lucida coloreada levemente. Las puntas
de las láminas epidérmicas secundarias (LES) se
caracterizan por ser redondeada y los núcleos ovalados,
de las células epidérmicas basales, presentan su eje
longitudinal en ángulo recto al eje longitudinal de la
LES (Figura 1A). En cada plasmalema de las células
basales se observó los hemidesmosomas, como placas
intracitoplasmaticas (Figura 1B).
Cultivo de explantes con veneno entero y PLA2 de
Bothrops alternatus
En los tejidos dermo-epidérmico de explantes
de pie equino incubado con 100 µg de veneno entero
de B. alternatus se observó el desprendimiento
de la membrana basal de las láminas epidérmicas
secundarias, presentándose como dos cordones bien
delimitados de color oscuro (Figura 2 A) y en contacto
entre sí en algunas zonas.
Entre cada cordón de MB se observó, en
algunas áreas, tejido dérmico con sus vasos sanguíneos
correspondientes. Al separarse, la MB del tejido laminar
epidérmico, permaneció unido al tejido dérmico,
presentándose con forma ondulada (Figura 2 B).
En los explantes incubados con 100 µg de
PLA2 de veneno de B. alternatus, las células basales
epidérmicas presentaron alteraciones citoplasmáticas
Teibler, G.P. et al.: Laminitis equina inducida por serpiente. Rev. Vet. 33: 2, 146-151, 2022
claramente evidenciadas por aumento de tamaño
celular, con aspecto de células tumefactas, en algunas
de ellas se observó vacuolas intracitoplasmáticas,
ausencia de núcleos o restos nucleares (Figura 3 A
y B). La membrana basal no se encontraba unida a
las células basales epidérmicas y los núcleos de las
células basales se encontraban alargadas y terminaban
en forma aguda (Figura 3B).
Figura 1 (A-B): microscopia electrónica de transmisión
(MET) de láminas epidérmicas secundarias (LES) de
pie equino control. A) Las LES están constituidas por
células epidérmicas basales (*) y células parabasales.
Se observa el extremo redondeado de las LES (flecha).
B) Se observa la lámina densa (flecha) paralela a las
células basales epidermales (bc). (TEM-Ax500–B)
x100.
Figura 2 (A-B): explantes de láminas dermo-
epidérmicas incubadas con 100 µg de veneno de
Bothrops alternatus. Ultraestructura de la zona donde
se encuentra la membrana basal (MB). A) Se observa 2
LES con separación de la MB, las cuales se muestran
como 2 hebras bien definidas y oscuras (flecha). B) Se
observa cambio en la forma de los núcleos de las células
basales de las LES, presentándose ovalados, redondos
o deformados (*). (MET- A) x1200 – B) x1500).
149
Figure 3 (A-B): Microscopia Electrónica de
Transmisión (MET). Sección de laminillas epidérmi-
cas secundarias (LES) de pezuña equina incubadas
con 100 µg de PLA6 de veneno de Bothrops alternatus
A) Se observa células epidérmicas basales de mayor
tamaño que el control y en algunas se evidenció ausen-
cia de núcleos y orgánulos citoplasmáticos (*). B) La
BM no estaba unida a las células basales epidérmicas y
los núcleos de las células basales se encontraban alar-
gados y terminaban en forma aguzada (flecha). (MET
- A) X 2000, B) X 2500).
DISCUSIÓN
Microscopía electrónica de transmisión
Las células basales epidérmicas de las
muestras de control se alinearon correctamente con
núcleos ovalados en posición central. Sin embargo,
las muestras incubadas con 100 µg de veneno de
B. alternatus, mostraron células afectadas en su
estructura con degeneración celular y gotitas lipídicas
sueltas en el citoplasma. Los núcleos se encontraban
deformados y mal posicionados de las células basales
y parabasales. En contraste, las muestras incubadas
con PLA2, las células basales epidérmicas mostraron
anomalías citoplasmáticas y nucleares pero con
separación leve de la unión dermoepidérmica y
presente solo en algunas áreas de las LES.
Del mismo modo, la microscopía electrónica
de transmisión nos permitió observar que las
láminas dérmicas al separarse de la epidermis
producen roturas proporcionando una clara evidencia
de desprendimiento de la membrana basal. Sin
embargo, las placas de unión entre las células basales
epidérmicas (desmosomas) y las células parabasales
no mostraron anomalías en nuestras condiciones
experimentales.
Por otro lado, los hemidesmosomas que
constituyen la placa de unión de las células basales
a las MB se rompieron y en algunas secciones se
150 Teibler, G.P. et al.: Laminitis equina inducida por serpiente. Rev. Vet. 33: 2, 146-151, 2022
superpusieron, evidencia clara de desprendimiento de
la membrana basal. Sin embargo, en algunas secciones
el BM permaneció intacto con la lámina lúcida, la
lámina densa y la capa reticular aún distinguibles.
Estudios in vivo de otros autores mostraron
lesiones similares a las mostradas en laminitis inducida
por sobredosis de oligofructosa, se redujo el número
de hemidesmosomas y aumentó la distancia entre la
membrana basal densa y los hemidesmosomas 24. French
& Pollitt 9 informaron lesiones de hemidesmosoma
similares en el modelo de inducción de oligofructosa.
Además, los estudios in vitro muestran que la falta
de glucosa reduce el número de hemidesmosomas y
provoca la desintegración del citoesqueleto de células
basales. Sin embargo, los filamentos de anclaje del
plasmalema que conectan las células basales con el
BM no se vieron afectados 9.
Acción de PLA2 de B. alternatus en explantes de
pie equino
Las fosfolipasas son un grupo diverso y ubicuo
de enzimas descritas por primera vez en 1967, 17. Se
demostró que inducen cambios en la composición de
la membrana celular, activan cascadas inflamatorias y
alteran las vías de señalización celular. Las PLA2 son
constituyentes comunes de los venenos de serpiente
Bothrops y este tipo de enzima se aisló de B. asper 13,
20, 21, 16, 22
de B. nummifer 14 B. jararacussu de Brasil
15,7
B. moojeni 21 B. alternatus de Argentina 10. Estas
enzimas bothrópicas, incluida la que se utiliza aquí,
no son capaces de degradar la membrana de los
eritrocitos, aunque pueden hidrolizar los fosfolípidos
de la membrana del músculo, induciendo su ruptura
y posterior rabdomiólisis. Este comportamiento
diferente de un mismo tipo de enzima, puede explicarse
por la posibilidad de que la PLA2 aislada no acceda
al sitio de hidrólisis de su sustrato en la membrana
plasmática del epitelio basal, sino que provoque
cambios en la organización de la membrana lipídica
que inducen una alteración de la permeabilidad, como
lo demuestra el aumento de la fragilidad osmótica en
los eritrocitos 18. Por tanto, las células de los explantes
expuestos a la fosfolipasa A2 están tumefactas, pero
no necróticas. Los efectos de PLA2 del veneno de
B. alternatus se pueden interpretar como un efecto
sobre la permeabilidad de la membrana con un influjo
de medio de cultivo que aumenta el tamaño del
citoplasma y deforma el núcleo.
CONCLUSIÓN
El presente trabajo estudia el efecto del
envenenamiento por serpientes utilizando el modelo
in vitro de laboratorio. Se utilizó un protocolo de
explantes de pezuñas para estudiar la enfermedad de
laminitis en el laboratorio in vitro por envenenamiento
de serpientes, incluso en ausencia de vasculatura y
suministro de sangre.
Asimismo, este modelo reprodujo los cambios
patológicos en la anatomía de los cascos como los
descritos para el pie de laminitis equina de diferente
etiología sin tener que inducir el sufrimiento del
animal.
Este estudio demostró que el veneno crudo y
PLA2 indujeron laminitis de explantes de pezuñas con
algunas diferencias histopatológicas creadas por las
diferentes etiologías. Los resultados aquí obtenidos
resaltan la importancia de considerar la complicada
patología asociada a la laminitis equina tras el
envenenamiento por B. alternatus.
Esta nueva información podría promover
estudios que involucren nuevas terapias específicas
para el tratamiento de esta condición discapacitante.
Este trabajo fue financiado por la Secretaría General de Ciencia
y Técnica, Universidad Nacional del Nordeste, Argentina
(Proyecto Nº 17BO17).
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152 Ninabanda, J.: Evaluación tasa preñez bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 152-159, 2022

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 152-159, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Evaluación de la tasa de preñez al transferir

embriones bovinos utilizando dos métodos de sincronización

Ninabanda, J.

Escuela Superior Politécnica de Chimborazo, Facultad de Ciencias

Pecuarias, Panamericana Sur km 1 1/2, Riobamba, Ecuador
E-mail: nina_jaky@hotmail.com

Resumen
Ninabanda J.: Evaluación de la tasa de preñez al transferir embriones bovinos utilizando dos
métodos de sincronización. Rev. Vet. 33: 2, 152-159, 2022. El objetivo de la presente revisión es
evaluar la tasa de preñez en vacas mestizas en la transferencia de embriones bovinos a través de
la utilización de dos métodos de sincronización de celo a tiempo fijo con hormona gonadotrofina
coriónica equina y con suero fisiológico (grupo control).La transferencia de embriones es una
técnica para el mejoramiento genético del ganado que actualmente está siendo muy difundida
a nuestro país; gracias a la existencia de programas de mejora genética y a la difusión de la
inseminación artificial, sin embargo, presenta dificultades en detección de celo y sobre todo bajos
índices de concepción. Para la recopilación de información fue necesaria la implementación de
la investigación metodológica más conocida como Metodology Research donde los criterios de
búsqueda fueron: “Tasa de preñez” + transferencia de embriones + vacas mestizas; Transferencia
de embriones + métodos de sincronización IATF + vacas mestizas, siendo así los criterios de
inclusión: Tasa de preñez + transferencia de embriones + vacas mestizas, Transferencia de
embriones + Métodos de sincronización IATF en vacas, Publicación desde 2016, finalmente los
criterios de exclusión fueron: Edad: por debajo de 30 meses y por encima de 60 meses, Ciclos
estrales irregulares (Anormal), Vacas sin identificación ni registro reproductivo, Problemas del
puerperio (metritis, endometritis vaginitis y piometra), para lo cual se consideró como los motores
de búsquedas a: Google académico.

Palabras clave: tasa de preñez, transferencia de embriones, sincronización de celos.

Abstract
Ninabanda J.: Assessment of pregnancy rate when transfering bovine embryos using two
synchronization methods. Rev. Vet. 33: 2, 152-159, 2022. The objective of this review is to evaluate
the pregnancy rate in crossbred cows in the transfer of bovine embryos through the use of two
methods of synchronization of heat at fixed time with equine chorionic gonadotropin hormone and
with physiological serum (control group). The transfer of embryos is a technique for the genetic
improvement of cattle that is currently being widely disseminated in our country; Thanks to the
existence of genetic improvement programs and the spread of artificial insemination, however,
it presents difficulties in heat detection and, above all, low conception rates. For the collection
of information, it was necessary to implement the methodological research better known as
Methodology Research where the search criteria were: “Pregnancy rate” + embryo transfer +
crossbred cows; Embryo transfer + IATF synchronization methods + crossbred cows, the inclusion
criteria being: Pregnancy rate + embryo transfer + cross-breed cows, Embryo transfer + IATF
synchronization methods in cows, Publication since 2016, finally the exclusion criteria were:
Age: below 30 months and above 60 months, Irregular estrous cycles (Abnormal), Cows without
identification or reproductive record, Postpartum problems (metritis, endometritis, vaginitis and
pyometra), for which it was considered as motor from searches to: academic Google. Since the

Recibido: Diciembre 2021. Aceptado: Marzo 2022.

Ninabanda, J.: Evaluación tasa preñez bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 152-159, 2022
mid-1970s, embryo transfer technology has been used commercially to rapidly multiply animals of
valuable genetics. Subsequently, with the freezing of embryos, the possibility of moving animals
between countries with sanitary barriers is created.
Key words: pregnancy rate, embryo transfer, heat synchronization.
INTRODUCCIÓN
La ganadería de hoy exige a los productores
una mayor eficacia para dar mayor rentabilidad de
las explotaciones de ganado vacuno, en esta realidad,
la optimización de la eficiencia reproductiva es uno
de los principales factores que contribuyen a mejorar
las utilidades. No hay dudas que la tasa de preñez,
tienen un impacto muy importante sobre la situación
económica de un establecimiento de cría 8 .
La eficiencia de dicha técnica se puede ver
ampliamente afectada por factores muy diversos,
propios de los animales donantes o receptores y de las
acciones ejecutadas en la técnica de la transferencia,
lo cual genera que no se registren los beneficios
esperados y que la aplicación de la transferencia
ponga en riesgo la estabilidad de la explotación, en
vista a que es una práctica que conlleva altos costos 10.
En los últimos años se ha manejado la hormona
eCG dentro de los protocolos de sincronización por
su capacidad de estimular la producción de FSH
y LH lo que aumenta el reclutamiento de folículos,
crecimiento folicular y la ovulación, permitiendo el
incremento de la tasa de preñez.
Importancia de la transferencia embrionaria
La tecnología de la transferencia de embriones
(TE) en bovinos requiere de la selección y el manejo,
tanto físico como farmacológico, de las donadoras
y las receptoras, y también de la recolección y
transferencia de los embriones dentro de un periodo
corto y específico después del estro 45, 46.
Selección de receptoras
La selección de la receptora desde el punto
de vista genético no tiene mayor consecuencia en la
T.E.; aunque no se debe descartar el efecto que tiene
la habilidad materna (como carácter genético), las
óptimas condiciones de clima, el buen manejo y la
excelente alimentación sobre la implantación y el
desarrollo de los embriones transferidos.
Por tanto, concluye que toda vaquilla
sexualmente adulta y sin patologías reproductivas, así
como toda vaca sana y sin trastornos ginecológicos
153
puede ser tomada como una receptora. Las receptoras
deben ser cruzas de razas lecheras y razas cebuínas,
ya que las vacas receptoras cruzadas son animales
más fértiles, presentan una mayor habilidad materna
para la crianza de los terneros y también se adaptan
mejor a condiciones adversas del medio 34.
Los factores para considerar son los siguientes:
Animales sanos reproductivamente, Estado
nutricional (Condición corporal; ≥ 2,75 escala 1-5),
Tener una buena capacidad genética para así poder
alimentar a la cría y que la misma pueda expresar
todo su potencial genético, Tamaño adecuado para
evitar problemas al momento del parto y Presencia de
cuerpo lúteo funcional 17.
Métodos de selección de receptoras.
La receptora ideal es una vaca joven, libre
de enfermedades, de probada fertilidad y habilidad
materna, Además, debe tener un tamaño adecuado
para no presentar problemas al parto. El método más
común de selección está basado en la inspección
general, examen ginecológico de las hembras y en
los registros reproductivos. Aunque la raza no es un
factor importante, generalmente se acepta que las
vacas cruzadas tienen mayor fertilidad 47.
Manejo de receptoras, programa de nutrición
La receptora preñada no debe ser tratada como
cualquier otra vaca de cría sino, al menos, como lo
son las donantes 16.
La alimentación de una hembra destinada a la
recepción embrionaria comienza con la vaquillona
en crecimiento, algunos autores citan que en la
práctica de la transferencia de embriones a tiempo
fijo son las hembras multíparas probadas y con gran
capacidad reproductiva aquellas más adecuadas para
la recepción embrionaria 40.
Según Mapletoft et al.; citado por Cutini 17,
obtuvieron mayor porcentaje de preñez con receptoras
de condición corporal entre 2 y 3, (Tabla 1). La edad
de la receptora es un aspecto importante en el cual, sin
embargo, no hay coincidencias entre autores 5 .
154
Cuadro 1.3. Efecto de la condición corporal de la
receptora sobre el porcentaje de preñez después de la
transferencia no quirúrgica.
receptoras transferidas
condición corporal
n° % de preñez
>1 230 44
2 4860 53
3 633 55
<4 175 47
Fuente: Mapletoft y col.; citado por Cutini 17
En el cuadro 2 se analiza el efecto de la edad
de las receptoras sobre el índice de preñez. Las vaqui-
llonas tienen ventajas debido a que consumen menos
alimento, tienen mejor respuesta a la sincronización
con PG y se obtiene un índice de preñez 5% superior
a las vacas 52 .
Cuadro 2.3. Efecto de la edad de la receptora sobre el
índice de preñez de TE.
edad transferencias preñadas % Los factores que afectan una eficiente detec-
vaquillonas 2689 1887 70,2
vacas 2380 1 566 65,8
Fuente: (Munar, Mujica, Martin, Irouleguy, &Huter,
2013)
Nutrición durante el ciclo estral.
La esfera de influencia de sales minerales es
muy variada, sobre el ciclo ovárico con maduración
folicular, ovulación y celo ejercen acción especial-
mente el calcio, potasio, manganeso, zinc y yodo. Los
procesos en el momento de la recepción embrionaria
como transporte del embrión, implantación y desa-
rrollo resultan influidos por el manganeso y el cobre
(Crown, John. 2005).
Nutrición en periodo de gestación
Los requerimientos de una vaca en periodo de
gestación al inicio son iguales que en ciclo estral nor-
mal y aumentan paulatinamente, pero en los 2 últi-
mos meses los mismos aumentan considerablemente,
especialmente en la época seca del periodo de ges-
tación, de acuerdo a algunos autores, aumentan las
necesidades de manganeso, selenio y cobalto que in-
fluyen directamente en el interior desarrollo de la pla-
centa, feto y en procesos del parto, el aporte continuo
de sales minerales antes y después del parto debe ser
tomado con gran atención, por lo tanto la nutrición
Ninabanda, J.: Evaluación tasa preñez bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 152-159, 2022
debe ser estricta antes del periodo seco para así evitar
un exceso de alimentación en el mismo ya que ha-
brían problemas al momento del parto y se produciría
una degeneración del tejido mamario debido a la infil-
tración grasa en tal tejido.
Nutrición post periodo de gestación.
Las vacas sometidas a la recepción de embrio-
nes y que debido a su buena capacidad reproductiva
han cumplido un periodo de gestación normal pierden
de 100 a 125kg de peso corporal durante los prime-
ros 70 días de lactancia sin problemas, suponiendo un
15% de su peso antes de la parición (Crown, John.
2005).
Programa de sanidad
Para la inserción de una hembra como recepto-
ra dentro de un programa de transferencia de embrio-
nes a tiempo fijo se deben realizar exámenes clínicos
previos que abarquen todos los aspectos, sin impor-
tar si la hembra escogida es primeriza o es multípara.
Se debe evaluar directamente en la vaca: Expresión,
comportamiento y posición, Condición corporal,
Membranas mucosas visibles 40 .
Sincronización de receptoras
ción de celos incluyen mala interpretación de los
signos de celo, mala interpretación o mal uso de los
distintos elementos de ayuda en la detección de celos,
vacas preñadas que aparentemente en celo y se que-
dan quietas al ser montadas.
Los métodos para mejorar la eficiencia en la
detección de celos incluyen la sincronización de ce-
los, mejorar la observación y utilizar el tiempo míni-
mo adecuado de observación, uso de dispositivos que
ayudan a la detección y un control de los animales
para poder predecir cuándo ocurrirá el próximo celo.
Métodos de sincronización
Constan dos métodos básicos para la sincroni-
zar los ciclos estrales, los cuales dependen de la inhi-
bición de secreción de LH o de acortar el tiempo de
la vida del cuerpo lúteo y del inicio subsecuente del
estro y la ovulación.
Prolongación de la fase luteal: requiere la
administración de un progestágeno durante un perio-
do relativamente largo, de forma que el cuerpo lúteo
tenga una regresión natural durante el tiempo en que
la hormona se administra. Con este método, el pro-
gestágeno exógeno continúa ejerciendo retroalimen-
tación negativa en la secreción de LH después de la
regresión del cuerpo lúteo. Cuando se suspende el
progestágeno se observa crecimiento folicular, estro
y ovulación a los dos a ocho días.
Ninabanda, J.: Evaluación tasa preñez bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 152-159, 2022
Acortamiento de la fase luteal: induce la re-
gresión prematura del cuerpo lúteo cíclico (luteólisis).
Los dos agentes luteolíticos principales son el estró-
geno y prostaglandina F2a. Con una inyección de
PGF2a hay regresión del cuerpo lúteo, por lo general
en cuestión de 24 a 72 h, y el estro y la ovulación se
presentan dentro de los dos o tres días 38 .
Esto implica, sin embargo, que la PGF2a es
efectiva solamente cuando existe la presencia de un
cuerpo lúteo completamente desarrollado (días 7-18
del ciclo) y que el retiro de la progesterona exógena es
solamente efectivo si la regresión del cuerpo lúteo ha
ocurrido, ya sea de manera inducida o natural.
Se pueden presentar variaciones en la dinámi-
ca de las ondas foliculares que dificultan controlar de
manera precisa el momento del celo y de la ovulación
45
. La técnica de la Transferencia de Embriones inclu-
ye varias etapas, desde la selección de donadoras has-
ta la transferencia del embrión. Las principales etapas
relacionadas son:
* inducción de la superovulación (donadora)
* sincronización del ciclo estral (receptoras)
* recolección de los embriones (donadora)
* clasificación de los embriones
* almacenamiento por corto plazo y cultivo
* criopreservación
Transferencia de los embriones (recepto-
ras) 47 . La sincronización implica la manipulación
del ciclo estral o la inducción del celo, de manera tal
de provocar que un gran número de un grupo de hem-
bras, entren en celo en un tiempo predeterminado 47 .
Protocolos de sincronización con prosta-
glandinas. Las receptoras pueden ser seleccionadas
por un programa de detección de los celos naturales
o de celos inducidos cuando utilizan tratamientos de
sincronización 57 .
Aplicación única de prostaglandina. La
PGF2a no es efectiva para la inducción de luteólisis
en los primeros 5-6 días post-estro, y cuando el estro
es inducido efectivamente por la PGF2a, el celo re-
sultante se presentará dentro de los siguientes 6 días.
Esta variabilidad se debe al estatus folicular al mo-
mento del tratamiento 45 .
El método tradicional de utilización de las
prostaglandinas con el objetivo de sincronización de
celos, prevee la utilización de dos dosis de hormona
aplicada con un intervalo de 12 a 14 días. Las vacas
receptoras sincronizadas con PGF deben ser tratadas
12 a 24 h antes que las donantes porque el celo
inducido por la PGF ocurrirá a las 60 a 72 h en las
receptoras, pero a las 36-48 h después de la PGF en
155
las donantes superovuladas 43 . Además, la PGF2a
no es efectiva cuando las hembras están en anestro,
condición muy común en zonas tropicales.
El tratamiento más utilizado consiste en la
aplicación de dos dosis de PGF con 11 o 14 días
de intervalo y detección por 5-7 días después de
la segunda de PGF. Con este protocolo la tasa de
aprovechamiento (receptoras transferidas/receptoras
tratadas) es del 50%.
Protocolos con GnRH. Los protocolos de
tratamiento con GnRH han sido utilizados en gran
medida durante los últimos años para la IATF de
bovinos de carne 30 y leche en los Estados Unidos.
Estos protocolos están basados en la combinación
de GnRH y PGF2α y son conocidos como Ovsynch
y CoSynch. Además, los protocolos de tratamiento
consisten en una inyección de GnRH seguida de PGF
7 días más tarde y una segunda inyección de GnRH
48 h después del tratamiento con PGF2α.
El protocolo que se recomienda es el Ovsynch/
TAI y se basa en la administración de una dosis de
GnRH, en el día cero, seguida de una dosis de PGF2a
7 días más tarde, más una última dosis de GnRH 48
h posteriores a la inyección de PGF2a, llevándose a
cabo la inseminación 16 a 24 horas más tarde.
Este protocolo persigue lo siguiente Maldonado
47
: la primera inyección de GnRH induce la ovulación
de cualquier folículo grande que esté presente en los
ovarios, además de sincronizar el desarrollo de una
nueva onda folicular; la inyección de PGF2a causa la
regresión de cuerpo lúteo y por lo tanto la disminu-
ción de los niveles de progesterona en sangre. La se-
gunda inyección de GnRH busca sincronizar la ovula-
ción del folículo reclutado 9 días antes con la primera
inyección de GnRH.
Una vez conseguida la sincronización se pro-
cede a la transferencia de embriones a tiempo fijo 20 .
Protocolos con progesterona o progestáge-
nos. La progesterona (P4) es la hormona encargada
del mantenimiento de la gestación, ya que proporcio-
na el estímulo hormonal que es requerido para el de-
sarrollo uterino y posterior implantación placentaria,
además de mantener la inmovilidad uterina .
Comercialmente se encuentran dispositivos
intravaginales con diferentes concentraciones de pro-
gesterona para ser usados en los protocolos de IATF,
tales como: CIDR (1,9 g de progesterona), PRID
(1,55 g de progesterona), DIB (1 g de progesterona),
DISPOCEL (1 g de progesterona)(Domínguez, C.
2008).
El uso de progestágenos, sincroniza el estro en
corto tiempo, permitiendo establecer programas de in-
seminación artificial a tiempo fijo, la cual debería rea-
lizarse de 48 a 52 h después de retirar la fuente de P4.
156
El dispositivo CIDR (dispositivo intravaginal
con 1,9 g de progesterona) ha sido aprobado en varios
países, incluyendo Canadá, para la sincronización de
celo en vaquillonas.
MATERIAL Y MÉTODOS
Para la recopilación de información fue necesario
la implementación de la investigación metodológica
más conocida como MetodologyResearch donde los
criterios de búsqueda fueron: donde los criterios de
búsqueda fueron: “Tasa de preñez” + transferencia
de embriones + vacas mestizas; Transferencia de
embriones + métodos de sincronización IATF + vacas
mestizascomo los motores de búsquedas a: Google
académico.
La tasa de concepción de 45.2 % estos
resultados fueron comprobados a través del uso de
la ultrasonografía evaluados a los 40 días después de
la inseminación. Estos resultados fueron superados
por (Ezequiel, 2015), quien realizó un trabajo de
IATF con semen fresco vs semen crioprecervado en
donde se utilizó: semen fresco (790 vientres) y semen
crioprecervado (519 vientres).
Los resultados obtenidos del análisis, mostraron
diferencia significativa, obteniéndose un porcentaje
de preñez de 66% y 55.23% respectivamente, se
concluye que el uso de semen fresco en los rodeos
evaluados, logro incrementar los porcentajes de
preñez obtenidos en IATF, de manera significativa
sobre el uso de semen crioprecervado.
La estrategia de búsqueda para la identificación
de los estudios es: búsqueda pormenorizada en la web
Kwery:
h t t p s : / / r e p o s i t o r y. u c c . e d u . c o / b i t s -
tream/20.500.12494/11301/1/2019_actualizacion_pro-
tocolos_transferencia.pdf.;https://dspace.ups.edu.ec/
bits-tream/123456789/8129/1/UPS-CT004903.pdf.
http://181.176.222.66/bitstream/handle/
UNTRM/2340/Alva%20Tafur%20Gudelio.pdf?se-
quence=1&isAllowed=y
Google N°
criterio de búsqueda
schoolar artículos
balance energético negati-
vo bovinos “postparto”-re- 158 158
traso –ovul.2014-2017
Impacto del balance ener-
gético negativo en vacas
54 54
con somatotropina recom-
binante bovina. 2010-2017
balance energético negati-
vo bovinos “celo postpar- 25 25
to” 2010-2017
Ninabanda, J.: Evaluación tasa preñez bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 152-159, 2022
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La proporción de vacas seleccionadas como
receptoras y las tasas de preñez, como se muestra en
la tabla, no tuvieron diferencias significativas entre
los grupos (p> 0,1).
Cuadro 10.3. Índices de preñez en receptoras de em-
briones tratadas con DIB o con CIDR-B y transferen-
cia a tiempo fijo.
Transf/ Preñ/ Preñ/
Grupo N
Tratad Transf Tratad
DIB+EB+EB 37 20/30 13/20 13/37
(54%) (65%) (35,1%)
CIDR-B+EB+EB 30 16/30 10/16 10/30
(53,3%) (62,5%) (33,3%)
Los porcentajes no difieren (p>0,1)
Los resultados demostraron que los disposi-
tivos intravaginales de P4 combinados con EB+P4
al momento de la inserción y EB 24 h después su
remoción pueden ser utilizados para sincronizar la
ovulación y eliminar la necesidad de detección de ce-
los en grupos de receptoras, facilitando su manejo en
programas de transferencia de embriones 1 .
En la evaluación de preñez a los 40 días post
inseminación artificial utilizando los protocolos de
inseminación artificial a tiempo fijo con y sin eCG, se
puede observar que al utilizar el protocolo de sincro-
nización de celo con eCG, se obtuvo mayor porcen-
taje de vacas preñadas que al utilizar un protocolo sin
eCG. La diferencia entre vacas preñadas y vacías fue
visible pero no significativa.
CONCLUSIONES
Los porcentajes de preñez obtenidos para el T1
IATF con eCG fueron de 52,4% y para el T2 IATF
sin eCG fueron del 38,1%, lo que nos lleva a la con-
clusión de que el protocolo en el que se utilizó eCG
presentó una mayor tasa de concepción. No se deter-
minaron diferencias estadísticas significativas entre
los tratamientos, pero se observó que el tratamiento
con hormona gonadotrofina coriónica equina (eCG)
presentó mayor porcentaje de vacas preñadas.
La eficacia reproductiva óptima es crucial para
incrementar los rendimientos netos. Sin embargo, la
variabilidad de las respuestas a los tratamientos tradi-
cionales y el tiempo y esfuerzo que se requieren para
realizar la detección del celo han afectado al rendi-
miento reproductivo de los rodeos.
Ninabanda, J.: Evaluación tasa preñez bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 152-159, 2022
La incorporación de técnicas diseñadas para
controlar la dinámica de la onda folicular y la ovula-
ción, en los últimos años ha reducido los problemas
asociados con la detección del celo. Además, los tra-
tamientos con dispositivos de liberación de proges-
terona, estradiol y eCG han brindado la posibilidad
de aplicar la IATF con altas tasas de preñez en vacas
cíclicas y no cíclicas.
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Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 160-163, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Análisis retrospectivo de aspiraciones foliculares sucesivas

según cantidad y calidad de ovocitos de bovinos brangus

Garcete, M.1; Alvarez, R.1; Arreseigor, C.2

1
Facultad de Ciencias Agropecuarias y Ambientales, UNICAN, Curuguaty, Paraguay
2
Laboratorio BioNorte, Ciudad del Este, Departamento de Alto Paraná, Paraguay
E-mail: roshanita@gmail.com

Resumen
Garcete, M.; Alvarez, R.; Arreseigor, C.: Análisis retrospectivo de aspiraciones foliculares
sucesivas según cantidad y calidad de ovocitos de bovinos brangus. Rev. Vet. 33: 2, 160-163,
2022. Con el objetivo de realizar un análisis retrospectivo de las aspiraciones foliculares sucesivas
en vacas de la raza brangus en un establecimiento ganadero del departamento de Alto Paraná,
fueron utilizados registros de 10 vacas de la raza Brangus sometidas a siete aspiraciones foliculares
sucesivas sin previa estimulación hormonal. En el mismo fueron evaluadas la cantidad y calidad
de ovocitos obtenidos en las aspiraciones. Con respecto a la cantidad de ovocitos aspirados, en
intervado promedio de 45 días entre aspiraciones, se obtuvo un promedio de 207± 14 ovocitos.
Se realizó el análisis estadístico realizando una comparación al azar entre aspiraciones: primera
aspiración con la cuarta aspiración, no encontrando diferencias estadísticamente significativa
(p>0,05); luego se compararon la 4ta aspiración con la 7ma aspiración, resultando estadísticamente
significativo (p<0,05). Con respecto a la cantidad de ovocitos viables por aspiraciones se obtuvo
en promedio 206 ±30 ovocitos y 88 ovocitos no viables, los cuales comparando la primera con la
cuarta aspiración arrojan resultados estadísticamente significativos (p<0,05). En cuanto a calidad
de ovocitos los resultados demuestran mayor cantidad de ovocitos GIII, los mismos fueron
analizando estadísticamente de la siguiente manera: comparación entre la primera (22,4) y la cuarta
aspiración (20,1) de la calidad de ovocitos GI, GII, GIII, arrojando resultados estadísticamente no
significativos (p>0,05).

Palabras clave: aspiraciones foliculares sucesivas, OPU, calidad de ovocitos, cantidad de ovocitos.

Abstract
Garcete, M.; Alvarez, R.; Arreseigor, C.: Retrospective analysis of elusive follicular aspirations
taking into account the quantity and quality of oocytes in brangus bovines from a livestock
establishment in the Alto Paraná department. Rev. Vet. 33: 2, 160-163, 2022. In order to carry
out a retrospective analysis of successive follicular aspirations in brangus cows in a livestock
establishment in the Alto Paraná department, records of 10 Brangus breed cows subjected to seven
successive follicular aspirations without prior hormonal stimulation were used. In the same, the
quantity and quality of oocytes obtained in the aspirations were evaluated. Regarding the number
of aspirated oocytes, in an average interval of 45 days between aspirations, an average of 207 ± 14
oocytes was obtained. Statistical analysis was performed by making a random comparison between
aspirations: first aspiration with fourth aspiration, finding no statistically significant differences
(p> 0.05); then the 4th aspiration was compared with the 7th aspiration, resulting statistically
significant (p <0.05). Regarding the number of viable oocytes per aspiration, an average of 206
± 30 oocytes and 88 non-viable oocytes were obtained, which comparing the first with the fourth
aspiration yield statistically significant results (p <0.05). Regarding oocyte quality, the results
show a greater quantity of GIII oocytes, they were statistically analyzed in the following way:

Recibido: Febrero 2022. Aceptado: Mayo 2022

Alvarez, R. et al.: Análisis de ovocitos bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 160-163, 2022
comparison between the first (22.4) and the fourth aspiration (20.1) of the quality of GI oocytes,
GII, GIII, yielding statistically non-significant results (p> 0.05).
Key words: successive follicular aspirations, OPU, oocyte quality, number of oocytes.
INTRODUCCIÓN
En el Paraguay el desarrollo económico se
encuentra basado en la producción pecuaria, ya
que cuenta con mayor área potencial apto para la
explotación ganadera, estimativamente 60% del
área total del país, este rubro contribuye de manera
significativa con el PIB 1 .
El poco aprovechamiento de los recursos
genéticos en hembras bovinas de alto potencial
productivo representa una limintante, inclusive con la
implementación de la superovulación y transferencias
de embriones, dado que el número de embriones
transferibles producidos por el animal es reducido.
Con el propósito de superar estas limitantes
se desarrollo la aspiración folicular guida por
ultrasonido, una técnica que ha demostrado ser exitosa
y reproducible para la obtención de oocitos a partir de
vacas y vaquillas, y que acoplada a la producción in vitro
de embriones, es más eficiente que la superovulación y
la transferencia de embriones 2 .
La aspiración folicular transvaginal es una
técnica mediante la cual los ovocitos inmaduros son
recolectados de los folículos, para llevarlo a cabo se
requiere contar con un equipo de ultrasonografía, una
bomba de aspiración y un sistema de guía de la aguja,
el uso de esta técnica permite incrementar el número
de embriones transferibles y de preñeces por vaca por
año 3 .
El intervalo entre sesiones de OPU tiene una
influencia sobre la cantidad y calidad de los ovocitos
obtenidos. El periodo de tiempo entre dos aspiraciones
afecta, de forma significativa la tasa de producción
de ovocitos. Obteniéndose un mayor número con
intervalos de 7 días en comparación con la obtención
cada 3 o 4 días. Sin embargo, la calidad de ovocitos,
en cuanto al número de capas de células del cúmulo,
resulta mayor con OPU a intervalos de 3 días y menor
con intervalos de 7 días, viéndose también afectado el
desarrollo embrionario 4 .
La finalidad que tiene esta herramienta de
reproducción es la de crear un bancos de material
genético de animales en peligros de extinción,
también permite reutilizar a las vacas donantes
de ovocitos a intervalos más cortos de tiempo, el
material recolectado es de procedencia conocida y si
161
son vacas de alto valor genético conduce a mejorar la
productividad del rebaño 5 .
La eficiencia de recuperación de ovocitos en
bovinos a través de OPU, tanto en la cantidad como
en la calidad de los ovocitos aspirados está sujeta a
muchos factores relacionados a la donante 6, genética,
estado fisiológico, raza y condición corporal.
MATERIAL Y MÉTODOS
El análisis retrospectivo se llevó a cabo
en el Departamento de Alto Paraná – Paraguay,
utilizando 10 registros de vacas Brangus sometidas
a Aspiraciones foliculares sucesivas. Los registros
contenían informes de vacas sometidas a 7 aspiraciones
foliculares, teniendo en cuenta para el análisis de los
mismos, datos sobre la cantidad y calidad de folículos
aspirados.
Las mismas fueron aspiradas con intervalos
de 45 días en promedio. Los resultados de cantidad
de ovocitos fueron analizados con T- Student y para
calidad de ovocitos se utilizó Chi2, utilizando Infostad
versión estudiantil 7 .
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Cantidad de ovocitos: Se obtuvo un total de
2066 ovocitos con un promedio de 207 ovocitos ± 14
ovocitos por vaca (ver cuadro 1); comparado con el
trabajo realizado por Alvarado et al. 1 el cual menciona
que la cantidad de ovocitos obtenidos fue de 100,75
ovocitos en promedio por vaca, esta diferencia puede
deberse a que existen variabilidades entre donadoras
de ovocitos como ser: raza, estado nutricional, estrés
y/o época del ciclo (reserva ovárica), o la falta de una
previa estimulación hormonal.
162 Alvarez, R. et al.: Análisis de ovocitos bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 160-163, 2022

Cuadro 1: Cantidad de ovocitos aspirados de vacas de la raza Brangus obtenido por aspiraciones foliculares.
FCAA-UNICAN. 2020

Donantes Cantidad de ovocitos por aspiraciones Total Promedio DE

(RP)
1 2 3 4 5 6 7
401 24 41 27 20 17 23 10 162 23.1 9.6
357 84 41 58 56 50 55 60 404 57.7 13.2
218 30 25 32 27 23 15 15 167 23.9 6.7
137 44 47 91 65 54 29 30 360 51.4 21.6
358 34 24 21 37 25 44 26 211 30.1 8.4
5134 24 13 28 19 18 15 13 130 18.6 5.7
1784 14 19 36 9 20 19 15 132 18.9 8.5
31 22 6 30 24 25 13 19 139 19.9 8.1
32 19 22 47 37 32 33 21 211 30.1 10.1
98 15 12 29 39 15 15 25 150 21.4 9.9
Total 310 250 399 333 279 261 234 2066 Promedio DE
207 14

Analizando la cantidad de ovocitos obtenidos
por aspiraciones, se puede observar en el cuadro 1, que
todas las donantes obtuvieron buenos resultados en la
primera aspiración, no así en la segunda aspiración,
en la cual se presenta una disminución, llegando a
la tercera aspiración donde se presenta un pequeño
aumento en la cantidad de ovocitos aspirados, lo
cual disminuye nuevamente en la cuarta aspiración,
y esta comparando con los resultados de la primera
aspiración, no presenta diferencias significativas
estadísticamente (p>0,05).
Observando y comparando el resultado de
la primera con la séptima aspiración, se denota una
disminución en la cantidad de ovocitos aspirados,
siendo esta diferencia estadísticamente significativa
(p<0,05), mediante el t student.
En un estudio realizado en Perú sobre:
Aspiración folicular guiada mediante la
ultrasonografía con el transductor endovaginal
humano, para la colección de ovocitos en vacas brown
swiss en altura, en la cual se realizaron 6 sesiones de
aspirados en cuatro vacas, obteniendo un total de 72
folículos aspirados y 14 ovocitos recuperados, esto
no coincide con lo obtenido en el presente trabajo, ya
que se obtuvo mayor cantidad de folículos y ovocitos,
esta diferencia entre trabajos, puede deberse a que las
vacas pertenecientes a lo ejecutado por Quispe (2018:
9) recibieron estimulación hormonal previa, no así en
las vacas brangus pertenecientes al presente estudio.
cantidad total de ovocitos no viables fue de 88 ovocitos
en promedio con un desvío estándar de ± 32 ovocitos.
Se realizó la comparación al azar de la cantidad
de ovocitos viables entre la primera aspiración (219)
con la cuarta aspiración (201) donde se pudo observar
que hubo diferencias estadísticamente significativas,
así también se comparó la primera aspiración (219)
con la última aspiración (175) y arrojó resultados
estadísticamente significativos mediante la prueba chi
cuadrado.
En un trabajo realizado por Miranda 8 , sobre el
Efecto entre intervalo de aspiraciones foliculares en
calidad de ovocitos bovino en la raza Gir, el número
total de ovocitos viables fue de 130, el número total de
ovocitos inviables total fue de 156. Se puede observar
que se obtuvo mayores resultados en este trabajo, y
esta diferencia puede deberse a la raza que se utilizó
para el estudio.

Cantidad de ovocitos viables: En cuanto a

la cantidad de ovocitos viables (figura 1) al final de Figura 1: Cantidad de ovocitos viables y no viables
las 7 aspiraciones se obtuvo un total de 206 ovocitos extraídos en forma sucesiva a vacas de la raza
viables con un desvío estándar de ± 30 ovocitos y la Brangus. FCAA-UNICAN. 2020.
Alvarez, R. et al.: Análisis de ovocitos bovinos. Rev. Vet. 33: 2, 160-163, 2022
Calidad de ovocitos: En la figura 2 se presentan
los resultados de la clasificación de ovocitos viables
en Grado I, II y III, siendo los deseables para la
fertilización los de grado I y II. Se puede observar
que, en todas las aspiraciones, se obtuvieron mayor
cantidad de ovocitos G3 (49,1) igualmente deseable
para las fertilizaciones, pero no tan utilizados.
Los mismos fueron clasificados teniendo en
cuenta como referencia la morfología del citoplasma
y las células del cumulus (ver cuadro 1). En un trabajo
realizado por María Alejandra Ángel (11) obtuvieron
mejores resultados en el Grado l, seguida por Grado ll
y finalizando con Grado lll.
Figura 2: Aspiraciones foliculares. Clasificación
de ovocitos por aspiración, de un establecimiento
ganadero del dpto. de Alto Paraná. 2020.
En el mismo obtuvieron 33,6 % de ovocitos
viables, porcentaje muy por debajo de lo obtenido en
el presente estudio 11 . Los menores niveles obtenidos
pueden deber a factores tales como: diferentes niveles
de presión de vacío utilizado durante la aspiración
folicular, la preparación de las vacas donantes, la
alimentación, la pre estimulación y el número de
folículos aspirados (36).
Realizando una comparación de la calidad
según aspiración, se puede observar que en la primera
aspiración (22,4) se obtuvo más ovocitos G1(35), GII
(16) y GIII (17,3); en la cuarta aspiración, G1 (8),
GII (23), GIII (17), por otra parte, en la aspiración
7, se registra G1 (15), GII (12),GIII (14,8). Estas
diferencias arrojaron resultados estadísticamente no
significativos entre las primeras, cuarta y séptima
aspiraciones (p>0,05), mediante el Chi cuadrado.
En conclusión, las aspiraciones foliculares
sucesivas en intervalos promedio de 45 días afectan
la calidad y cantidad de ovocitos obtenidos. Esto
también puede deberse a que no existió estimulación
hormonal.
Se sugiere realizar aspiraciones en intervalos
promedio de 20 días previa estimulación hormonal,
haciendo coincidir con el ciclo estral de la vaca.
163
REFERENCIAS
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164 Della Rosa, P. et al.: Infecciones de bovinos y ovinos. Rev. Vet. 33: 2, 164-168, 2022

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 164-168, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Infecciones respiratorias causadas por agentes bacterianos

en bovinos y ovinos de la Provincia de Corrientes, Argentina

Della Rosa, P.1; Sala, J.M.1; Morel, V.1,2; Gómez, S.1; Caspe, S.G.1
1
EEA INTA Mercedes, Juan Pujol al este sin número, (W3470) Mercedes, Corrientes. 2CONICET. Godoy
Cruz 2290 (C1425FQB) CABA, Argentina.
Email: dellarosa.paola@inta.gob.ar

Resumen
Della Rosa, P.; Sala, J.M.; Morel, V.; Gómez, S.; Caspe, S.G.: Infecciones respiratorias
causadas por agentes bacterianos en bovinos y ovinos de la Provincia de Corrientes, Argentina.
Rev. Vet. 33: 2, 164-168, 2022. Mannheimia haemolytica, Trueperella pyogenes y Pasteurella
multocida son bacterias comensales de las vías respiratorias superiores de los rumiantes. Sin
embargo, cuando existen factores predisponentes pueden desencadenar enfermedades respiratorias
o incluso ocasionar la muerte. El objetivo de este estudio fue determinar las causas de morbilidad
y mortalidad en terneros y corderos de 4 establecimientos ubicados en la Provincia de Corrientes,
Argentina. Durante los meses de junio a agosto de 2021 se recibieron en el laboratorio de Sanidad
Animal del INTA Mercedes, Corrientes, 4 casos de enfermedades respiratorias, tanto en bovinos
(3), como en ovinos (1). En el caso de los bovinos, los lotes presentaban una morbilidad de 3,3%
(5/150), 3,5% (7/200) y 12,4% (56/450). Por su parte, el lote de ovinos expuestos contó con un
8% (4/50) de animales enfermos. Se realizó la necropsia de los ejemplares, tomando muestras de
pulmón y en los casos que estuvieron disponibles, abscesos pulmonares. Con dichas muestras, se
realizó el cultivo bacteriológico y análisis histológico. Mediante el cultivo bacteriológico se detectó
la acción de T. pyogenes (1), M. haemolytica (2) y P. multocida (1) coincidente con los hallazgos
macroscópicos y lesiones histológicas halladas. En nuestro estudio las neumonías por agentes
bacterianos representaron entre el 2 y 6% de las causas de mortalidad de los rodeos analizados, por
lo que deberían ser tenidas en cuenta como causante de muerte, a fin de implementar las maniobras
correctivas y preventivas necesarias.

Palabras clave: bovino, ovino, Mannheimia haemolytica, Trueperella pyogenes y Pasteurella

multocida.

Abstract
Della Rosa, P.; Sala, J.M.; Morel, V.; Gómez, S.; Caspe, S.G.: Respiratory infections caused
by bacterial agents in cattle and sheep in the Province of Corrientes, Argentina. Rev. Vet. 33:
2, 164-168, 2022. Mannheimia haemolytica, Trueperella pyogenes and Pasteurella multocida
are commensal bacteria of the upper respiratory tract of ruminants. However, in presence of
predisposing factors, they can trigger the disease and even lead to death. The objective of this study
was to determine the causes of morbidity and mortality in calves and lambs from 4 establishments
located in the Province of Corrientes, Argentina. During of the period between June and August
2021, 4 cases of respiratory diseases were received at the INTA Mercedes, Corrientes, Animal
Health Laboratory, both in cattle (3) and sheep (1). Incase of cattle, the morbidity in each the
herd was 3.3% (5/150), 3.5% (7/200) and 12.4% (56/450). In the sheep flock, the morbidity was
8% (4/50). In sick animals, necropsies were performed and samples of lung and lung abscess
were taken. In those samples, bacteriological culture and histological analysis were performed.
Bacterial agents including T. pyogenes (1), M. haemolytica (2) and P. multocida (1) were detected,

Recibido: Diciembre 2021. Aceptado: Marzo 2022.

Della Rosa, P. et al.: Infecciones de bovinos y ovinos. Rev. Vet. 33: 2, 164-168, 2022
associated with the macroscopic findings and histological lesions. In our study, bacterial agents
were detected as causing pneumonia represent in between 2 and 6% of mortality in the herds
analyzed, so they should be considered as an important cause of death, in order to implement the
necessary corrective and preventive measures.
Key words: Cow, sheep, Mannheimia haemolytica, Trueperella pyogenes and Pasteurella
multocida
INTRODUCCIÓN
El complejo respiratorio bovino es una
afección multifactorial que causa pérdidas de miles de
millones de dólares en la industria ganadera mundial
10, 21
. Esta enfermedad puede estar asociada a bacterias
tales como Mannheimia haemolytica, Trueperella
pyogenes y Pasteurella multocida, las cuales son
comensales de la orofaringe y vías respiratorias
superiores de los rumiantes 15, 23 .
Sin embargo, cuando existen factores predi-
sponentes tales como estrés, inadecuado calostrado,
inclemencias climáticas, o infección por determina-
dos virus respiratorios puede producirse la supresión
de los mecanismos de defensa del huésped 13, 14, 17, 18, 22 .
Estas situaciones pueden generar un aumento
en la tasa de replicación de bacterias oportunistas del
tracto respiratorio superior, seguido por la inhalación
y colonización de los pulmones, ocasionando la
enfermedad que se caracteriza por fiebre alta, tos,
disnea, secreción nasal mucopurulenta, anorexia y
depresión 8, 21, 24.
A su vez, T. pyogenes también puede ocasionar
reacciones inmunitarias supurativas causando
abscesos, artritis, endocarditis, mastitis, metritis,
osteomielitis y vasculitis 3, 7.
El objetivo del presente estudio fue determinar
las causas de morbilidad y mortalidad en terneros
y corderos de 4 establecimientos ubicados en la
Provincia de Corrientes, Argentina.
MATERIAL Y MÉTODOS
Durante los meses de junio a agosto de 2021
se recibieron en el laboratorio de Sanidad Animal
del INTA Mercedes, Corrientes, 4 llamados por
brotes de enfermedades respiratorias en bovinos (3)
y ovinos (1), provenientes de la región centro sur de
la Provincia de Corrientes, Argentina. Los animales
se encontraban sobre campo natural en sistemas de
producción de tipo extensivo.
En el caso de los bovinos, los lotes
presentaban una morbilidad de 3,3% (5/150), 3,5%
(7/200) y 12,4% (56/450). Por su parte, el lote de
165
ovinos expuestos contó con un 8% (4/50) de animales
enfermos. La edad aproximada de los bovinos fue de
7 y 10 meses, mientras que el ovino correspondió a un
cordero de alrededor de 2 meses.
Los síntomas observados fueron, dificultad
respiratoria, secreción mucopurulenta por ollares, y
muerte, alcanzando una tasa de mortalidad de entre
el 2 y 6%. Se realizó la necropsia de los animales, los
cuales habían muerto entre 1 y 4 h antes. Se tomaron
muestras de pulmón y en los casos que estuvo
disponible, abscesos pulmonares.
Los mismos fueron colectados asépticamente
y colocados en bolsas estériles (Nasco, EEUU), a las
cuales se les adicionó 10 mL de PBS (pH 7) estéril.
Posteriormente los tejidos fueron macerados y una
alícuota fue sembrada, en placas con agar McConkey
(MC, aerobiosis) y agar sangre Columbia con 7% de
sangre bovina (ASC, en atmósfera con 10% de CO2)
incubándose durante 1 y 2 días respectivamente, en
estufa a 37°C.
Todas las colonias que desarrollaron en los
diversos medios fueron caracterizadas mediante
la tinción de Gram, morfología microscópica,
producción de hemólisis (α, β, γ) en ASC y pruebas
bioquímicas básicas tales como movilidad, oxido-
fermentación, pruebas de actividad catalasa, oxidasa,
ureasa y cultivo en medio Kligler.
Luego se realizaron otras pruebas de
identificación complementarias de acuerdo con los
resultados previamente obtenidos en las pruebas
bioquímicas básicas 12 . También se realizaron estudios
histológicos, fijando muestras de tejido pulmonar, por
inmersión en formalina tamponada al 10%.
Luego, fueron deshidratadas a través de
alcoholes graduados a xileno, y embebidas en
parafina 5 . Se obtuvieron secciones de tejidos de
4-5 μm mediante micrótomo, siendo montadas en
portaobjetos y teñidas con hematoxilina y eosina, para
su posterior examen histológico bajo microscopio
óptico (Nikon Microflex HFM, Japón).
166 Della Rosa, P. et al.: Infecciones de bovinos y ovinos. Rev. Vet. 33: 2, 164-168, 2022

RESULTADOS En 1/4 de los animales se halló hidropericardio

A la necropsia en los 4 casos analizados se
observó consolidación de los lóbulos pulmonares
apicales y cardíaco en su porción cráneo ventral, los
cuales presentaban consistencia firme y coloración
rojiza, observando además edema pulmonar en todo
el parénquima.
En 2/4 de los casos también se halló hidrotórax,
de los cuales en 1/2 también se hallaron adherencias a
la pared costal (Figura 1), engrosamiento de la pleura
y áreas recubiertas por un material caseoso de color
blanco (pleuritis).
y abundante espuma de color blanco en tráquea y
bronquios. A su vez, en 1/4 casos se hallaron acúmulos
con material purulento de hasta 1,5 cm de diámetro,
tanto en parénquima pulmonar como en peritoneo
(Tabla 1).
A partir del tejido pulmonar y abscesos
pulmonares fueron diagnosticadas mediante cultivo
bacteriológico y la apreciación de lesiones histológicas,
T. pyogenes (1), M. haemolytica (2) y P. multocida (1).
En el examen histopatológico se encontró neumonía y
bronconeumonía necrosupurativa generalizada severa
aguda a subaguda coincidente con los hallazgos
macroscópicos y aislamientos bactrianos.

Figura 1. Hallazgos patológicos en cordero con Mannheimia haemolytica. A: severa neumonía necrosupurativa
(H&E, 40×). B: cavidad torácica: adherencias a la pared costal con engrosamiento de la pleura y áreas
recubiertas por material blanco caseoso (pleuritis).

Tabla 1. Diagnóstico de Trueperella pyogenes (TP), Mannheimia haemolytica (MH) y Pasteurella

multocida (PM) por cultivo bacteriológico, histología y lesiones macroscópicas a la necropsia.

lesiones
cultivo eenfermos
especie expuestos histológicas necropsia
bacteriol. y muertos
compatibles
bovino TP 150 5/3 + A
bovino MH 200 7/4 + B
bovino PM 450 56/18 + C
ovino MH 50 4/3 + D

A: consolidación, edema y abscesos. B: consolidación y edema. C: consolidación, edema, hidropericardio,

hidrotórax, espuma en tráquea y bronquios. D: consolidación, hidrotórax con flóculos de fibrina y adherencia.
Della Rosa, P. et al.: Infecciones de bovinos y ovinos. Rev. Vet. 33: 2, 164-168, 2022
DISCUSIÓN
Se detectaron muertes por cuadros respiratorios
ocasionados por T. pyogenes, M. haemolytica y P.
multocida. Trabajos realizados por Besser et al. 1 y
Martínez et al. 17 indican que, si bien la enfermedad
respiratoria afecta a todas las categorías, los animales
jóvenes son los más susceptibles.
A su vez, en sistemas de producción extensivos
en los que las condiciones ambientales no son
controladas y donde se asocian a factores climáticos
estresantes tales como frío o lluvia, se produce
la mayor cantidad de muertes por enfermedades
respiratorias 6, 16, 19 .
En el presente trabajo las muertes ocurrieron en
animales jóvenes durante los meses con temperaturas
más bajas, sin embargo, factores estresantes y
concomitantes no fueron evaluados. La morbilidad
y posterior mortalidad de los animales pudo haber
estado asociada a factores tales como cambios bruscos
en la temperatura, mal calostrado, presencia de virus
respiratorios, lluvias o falta de refugios.
Donachie 9 indicó que los brotes en el rebaño
comienzan habitualmente con muertes repentinas,
con frecuencia en corderos jóvenes en los que la
enfermedad es sobreaguda y septicémica. En el
presente trabajo los animales fueron diagnosticados
en base a los hallazgos de necropsia, aislamientos
realizados y lesiones histológicas observadas, lo que
permitió determinar que las muertes fueron producto
de la neumonía y bronconeumonía severa.
En el cordero analizado en el cual se aisló M.
haemolytica, se observaron lesiones tanto a nivel
pulmonar como pleural. Trabajos realizados por
Biesheuvel 2 describieron pleuroneumonía aguda y
poliserositis en terneros y vacas lecheras afectados
con M. haemolytica lo que es coincidente con nuestros
hallazgos.
En el caso de T. pyogenes se logró el aislamiento
no solo de tejido pulmonar sino también de los abscesos
pulmonares, hallazgos previamente reportados 20 . En
el presente trabajo cada uno de los tres patógenos se
aisló en pureza, no presentando infecciones conjuntas,
observándose además las lesiones macroscópicas
y microscópicas características de la enfermedad
previamente reportadas 4, 11 .
En nuestro estudio las neumonías representaron
entre el 3,3 y 12,4% de morbilidad, llegando entre
el 2 y 6% de las causas de mortalidad en los rodeos
analizados. Por estos motivos, las enfermedades
respiratorias bacterianas deberían ser tenidas en
cuenta como causantes de muerte a fin de implementar
maniobras correctivas y preventivas adecuadas.
167
REFERENCIAS
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Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 169-176, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Efecto de la glutamina y aminoácidos de cadena ramificada

en los parámetros hematológicos y bioquímicos de cachorros caninos

Mena, R.P.1,2; Llumiquinga, T.I.1; Quisirumbay, J.R.1; Villanueva, M.E.2

Facultad Medicina Veterinaria y Zootecnia, Univ.Central del Ecuador, Quito.

1

Doct. Ciencia Anim., Facult. Zoot. Postgrado, Univ. Nac. Agr. La Molina, Lima, Perú.
2

E-mail: rpmena@uce.edu.ec.

Resumen
Mena, R.P.; Llumiquinga, T.I.; Quisirumbay, J.R.; Villanueva, M.E.: Efecto de la glutamina y
aminoácidos de cadena ramificada en los parámetros hematológicos y bioquímicos de cachorros
caninos. Rev. Vet. 33: 2, 169-176, 2022. El objetivo del estudio fue determinar la influencia de
glutamina (GLN) y BCAAs (leucina, isoleucina y valina) sobre los parámetros hematológicos y
bioquímicos de los cachorros. Se reclutaron 31 cachorros mestizos de 30 días, provenientes de
cuatro camadas. Aleatoriamente en cada camada se estableció un grupo control (sin suplemento)
y 3 tratamientos: T1 (GLN 0,5 g/kg/día/PO), T2 (BCAAs, 0,25 g/kg/día/PO) y T3 (GLN 0,5 g/
kg+BCAAs 0,25 g/kg/día/PO), que se mantuvieron 90 días en ambiente controlado en igualdad
de condiciones, alimentados dos veces al día individualmente, las muestras se tomaron a los 30
y 120 días de edad. Se aplicó un diseño en bloques al azar empleando a la camada como factor
de bloque, se realizaron estadísticas descriptivas y pruebas de normalidad, además ANOVA para
verificar variaciones entre tratamientos y Tukey para posicionar los tratamientos. A los 30 días las
medias y rangos de los parámetros hematológicos y bioquímicos fueron similares. A los 120 días
en los parámetros hematológicos se determinaron diferencias (p<0,05) en función del bloque, no
así del tratamiento (p>0,05), sin embargo, el promedio de leucocitos (10,33 10*9/L) y el promedio
de neutrófilos (7,17 10*9/L) del T2 fueron superiores al promedio del grupo control y de los otros
tratamientos mostrando diferencia significativa (p<0,05) solo a un IC del 90%. Los parámetros
de la bioquímica sanguínea no mostraron diferencias (p>0,05). En conclusión, se evidenció un
efecto positivo en la inmunidad innata, resultando favorable la suplementación con BCAAs, sin
evidencia de toxicidad.

Palabras clave: cachorros, células sanguíneas, aminoácidos, suplementación, hematología.

Abstract
Mena, R.P.; Llumiquinga, T.I.; Quisirumbay, J.R.; Villanueva, M.E.: Effect of glutamine and
branched-chain amino acid supplementation on hematological and biochemical parameters of
canine puppies. Rev. Vet. 33: 2,169-176, 2022. The objective of the study was to determine the
influence of glutamine (GLN) and BCCAs (leucine, isoleucine and valine) on the hematological
and biochemical parameters of the puppies. 31 mixed puppies of 30 days were recruited, from
four litters, randomly in each litter a control group was established (without supplement) and 3
treatments: T1 (GLN 0.5 g/kg/day/PO), T2 (BCAAs, 0.25 /kg/ day/PO) and T3 (GLN 0.5 g/kg +
BCAAs 0.25 g/kg/day/PO), were maintained for 90 days in a controlled environment under equal
conditions, fed twice daily individually, samples were taken at 30 and 120 days of age. A randomized
block design was applied using the litter as a block factor, descriptive statistics and normality tests
were performed, as well as ANOVA to verify variations between treatments and tukey to position
the treatments. At 30 days, the means and ranges of the hematological and biochemical parameters
were similar. At 120 days in the hematological parameters, differences were determined (p<0.05)

Recibido: Marzo 2022. Aceptado: Junio 2022.

170 Mena, R.P. et al.: Suplementación de cachorros caninos. Rev. Vet. 33: 2, 169-176, 2022

depending on the block, not the treatment (p>0.05), however, the average of leukocytes (10.33
10 * 9 /L) and the average of Neutrophils (7.17 10 * 9/L) of T2 were higher than the average of
the control group and of the other treatments, showing a significant difference (p<0.05) only at a
CI of 90%. The blood biochemistry parameters did not show differences (p>0.05). In conclusion,
a positive effect on the innate immunity was evidenced, with BCAAs supplementation being
favorable, with no evidence of toxicity.

Key words: puppies, blood cells, amino acids, supplementation, hematology.

INTRODUCCIÓN

Las enfermedades en los cachorros caninos y
sus índices de mortalidad presentan tasas variables
en dependencia de algunos factores de predisposición
intrínsecos (materno fetales) y también en dependencia
de factores extrínsecos como factores ambientales e
infecciosos que contribuyen al desarrollo de patologías
neonatales. Las tasas de mortalidad en cachorros de
entre 7-8 semanas se estima en aproximadamente
20% de neonatos nacidos vivos 27 .
Uno de los factores que contribuye a estas altas
tasas de mortalidad es el destete, etapa de transición
nutricional a la que son sometidos los cachorros entre
las 3–4 semanas de vida, los perros y otros animales
sufren a menudo de estrés nutricional, ambiental,
inmunológico y social, factores que pueden
influenciar de manera negativa en la morfología y
funcionalidad de la estructura intestinal del cachorro
36
, estos cambios pueden tener repercusiones en la
digestión y absorción de nutrientes importantes para
la síntesis de proteínas necesarias para fortalecer el
sistema inmunológico a nivel celular y humoral 14, 26 .
En todo el mundo las infecciones virales afectan
a un alto número de cachorros caninos, principalmente
a aquellos animales débiles e inmunodeprimidos,
por ello se proporcionan defensas contra parvovirus
canino a través de la vacunación temprana 5, 10 .
En un estudio realizado en Ecuador se
determinaron las variantes de parvovirus (PVC)
en cachorros infectados por esta enfermedad,
determinándose tres variantes antigénicas en los
animales en estudio con una prevalencia de PVC-2a
57,1 por ciento, PVC-2b 8,5 por ciento y PVC2c 34,3
por ciento, siendo este un problema muy serio ya que
las vacunas utilizadas en la mayor parte de América
Latina protegen solo para las variantes PVC-2a y
PVC2b 9 .
En varias especies de animales se ha
determinado el papel fundamental de la nutrición,
particularmente el rol que cumplen ciertos aminoácidos
en el fortalecimiento y en la activación temprana del
sistema inmune 3, 19, 20, de manera particular se ha
establecido que tanto el glutamato como la glutamina
tienen un efecto positivo en el sistema inmune de
lechones en la etapa del destete 4 .
En varios estudios se puntualiza su importancia
en la activación de la señalización de las células
de rapamicina (mTor) favoreciendo el recambio
de enterocitos y manteniendo la estructura de la
pared intestinal con enterocitos intactos, con menos
espacios entre ellos y vellosidades intestinales más
alargadas con criptas más profundas lo cual promueve
una buena función 7, 24 .
Otro grupo de aminoácidos que ha demostrado
fortalecer el sistema inmune humoral y celular son los
aminoácidos de cadena ramificada (BCAAs: Leucina,
Isoleucina y Valina) 33 , las células del sistema inmune
podrían incorporar BCAAs a través de la síntesis de
proteínas, expresar actividades de alfa-cetoácido-
deshidrogenasa de cadena ramificada y decarboxilasa
-por ejemplo la isoleucina- se encuentra en los
linfocitos en los eosinófilos y neutrófilos, elementos
hematológicos que son parte del sistema inmune
celular 30 .
El objetivo del estudio fue determinar el
comportamiento de los parámetros hematológicos y
bioquímicos en cachorros caninos suplementados con
glutamina, leucina, isoleucina y valina durante 90
días de tratamiento (30–120 días de edad).
MATERIAL Y MÉTODOS
Lugar del estudio
El estudio fue de tipo experimental. Para esto se
reclutaron 4 camadas de cachorros, los mismos que
fueron alojados en el Centro Experimental Uyumbicho
de la Universidad Central del Ecuador, ubicado en la
Provincia de Pichincha, Parroquia de Uyumbicho,
entre las coordenadas 23°23′00′′S 78°31′00′′O a 3725
m.s.n.m., la misma que presenta una temperatura
promedio de 18.5oC y una humedad relativa de
87%.
Mena, R.P. et al.: Suplementación de cachorros caninos. Rev. Vet. 33: 2, 169-176, 2022
Animales en estudio
Las camadas de cachorros aparentemente
sanos (examen clínico veterinario) de 25 días de
nacidos fueron obtenidas en hogares de zonas urbano
marginales de la ciudad de Quito, provinieron de
madres que se alimentaron durante su periodo de
gestación y lactancia con una dieta mixta, en base a
alimento balanceado comercial y dieta casera.
Se obtuvieron 31 cachorros: camada uno (C1)
con siete hermanos (5 hembras; 2 machos); camada
dos (C2) ocho hermanos (6 hembras; 2 machos);
camada tres (C3) ocho hermanos (4 hembras; 4
machos) y la cuarta camada (C4) ocho hermanos (4
hembras; 4 machos). A su ingreso al centro de crianza
los animales fueron identificados y registrados en un
expediente clínico individual.
Desde su ingreso y semanalmente, fueron
estimados a través de una exploración clínica completa
la cual incluyó la valoración por camada y la valoración
individual de cada cachorro. En la camada se valoró
el comportamiento, la homogeneidad y la condición
corporal asociada al estado nutricional. De manera
individual a cada neonato se lo examinó empleando
las técnicas básicas de exploración (observación,
palpación, palmopercusión y auscultación).
Se descartó la presencia de lesiones externas y de
ectoparásitos sobre la piel, se prestó especial atención
a la valoración de los reflejos de deglución, de retiro,
y de tos en los neonatos. En cada examinación, se
evaluaron las constantes fisiológicas de manera
individual, entre ellas la frecuencia cardiaca (FR),
frecuencia respiratoria (FR), pulso (P) y temperatura
(T), parámetros que se encontraban dentro de los
rangos establecidos por Grundy (2006) 15 .
Durante el tiempo que duró el experimento todos
los cachorros fueron vacunados y desparasitados
bajo el mismo esquema: vacuna Vanguard Plus ®
(Parvovirus-Cononavirus), 45 días de edad, Vacuna
Vanguard Plus 5/L® (Distemper, Adenovirus Tipo
2, Parainfluenza, Parvovirus, Leptospirosis) 66
días, Vacuna Vanguard Plus 5/L®, 87 días y Vacuna
Defensor® (Rabia), 108 días. Las desparasitaciones
se realizaron con cada vacuna empleando un
preparado comercial en base de embonato de pirantel
(equivalente a 5 mg de pirantel base), 14.4 mg;
febantel 15 mg; excipientes para 1 ml, a razón de 1
ml/kg de peso.
Dieta y suplementación
A la llegada, los cachorros tuvieron un período
de adaptación de 5 días en los cuales se les suministró
un sustituto de leche comercial mezclada con una
dieta comercial premium para cachorros, la cual fue
analizada y con la cual se alimentaron durante los 90
días que duró el experimento (ver Tabla 1).
171
Tabla 1. Composición nutricional del alimento base.
nutriente análisis proximal med.±DS
materia seca g/100g 93,89±0,63
proteína, g/100g 27,31±0,76
grasa (%) 10,96±1,06
humedad (%) 6,21±0,43
fibra (%) 3,26±0,65
cenizas (%) 6,83±0,68
Análisis Proximal Técnica NIRS
La alimentación se realizó dos veces al día
(de manera individual, en espacios separados) y la
cantidad proporcionada fue calculada semanalmente
de acuerdo a la cantidad recomendada por el
fabricante según su peso corporal, cumpliendo con
los requerimientos establecidos por la FEDIAF
(Federación Europea de Fabricantes de Alimentos
para Animales de Compañía, 2017) 11 . El consumo
de alimento fue registrado diariamente y los pesos
semanalmente.
A partir de los treinta días (inicio del experimento)
fueron suplementados con aminoácidos de acuerdo al
tratamiento correspondiente así: grupo control (sin
suplemento), tratamiento uno (T1: Glutamina 0,5 g/
kg de peso), tratamiento dos (T2: BCAAs Leucina,
Isoleucina y Valina proporción 2:1:1 a dosis de 0,25
g/kg de peso) y tratamiento tres (T3: Glutamina 0,5
gr/kg de peso – BCAAs 0,25 g/kg de peso).
Los suplementos empleados fueron: Glutamina
(Glutapure ®), BCAAs ® (leucina, isoleucina y
valina, proporción: 2.1.1) de la empresa Ultimate
Nutrition, las dosis fueron calculadas de acuerdo al
peso promedio semanal para cada tratamiento y fueron
administradas de manera individual por vía oral en
la ración de alimento de la mañana, aplicándose el
mismo protocolo para todos los animales.
Toma de muestras y análisis sanguíneos
Las muestras se colectaron de la vena yugular
con los animales en recumbencia esternal, se
obtuvieron 3 mL de sangre entera a los 30 y 120
días de edad. Suavemente 1 mL de la muestra fue
colocada y homogeneizada en un tubo MicroCollect®
conteniendo EDTA (ácido etilen-diamino-tetra-
acético), además, 2 mL de la muestra se colocaron en
un tubo sin anticoagulante para la obtención de suero.
Las muestras se identificaron y colocaron en
un cooler herméticamente cerrado, el cual preservó
las mismas durante 60 minutos a una temperatura de
2-4oC mientras fueron transportadas al Laboratorio
Clínico del Hospital Veterinario AllPets donde fueron
analizadas.
172 Mena, R.P. et al.: Suplementación de cachorros caninos. Rev. Vet. 33: 2, 169-176, 2022
Con la sangre entera se realizó un hemograma
completo en un analizador hematológico (DF 50,
Dymind, bajo el principio de impedancia para
determinación de células rojas y plaquetas y citometría
de flujo para el análisis diferencial de células blancas),
realizando el contaje total (WBC) e individual del
leucograma, neutrófilos (Neu), linfocitos (Lin),
monocitos (Mon), eosinófilos (Eos), basófilos (Bas).
Se evaluó el eritrograma con el contaje de
células rojas (RBC), concentración de hemoglobina
(HBG), volumen celular medio (MCV), cantidad
de hemoglobina globular (MCH), concentración
corpuscular media de hemoglobina (MCHC) y
finalmente el plaquetograma con el contaje de
plaquetas (PLT), volumen plaquetario medio (MPV),
ancho de distribución de plaquetas (PDW) y el
plaquetocrito (PCT).
Con los 2 ml de sangre colectada en el tubo de
tapa roja (sin anticoagulante) se obtuvo suero, con
el que se realizaron las pruebas bioquímicas en un
analizador colorimétrico (Pointcare® V3, MNCHIP),
se empleó un rotor para valorar y calcular: proteínas
totales (TP), albúmina (ALB), globulinas (GLO),
relación albúmina globulinas (A-G), bilirrubinas
totales (TBIL), alanino aminotransferasa (ALT),
aspartato aminotransferasa (AST), nitrógeno ureico
sanguíneo (BUN), creatinina (CRE), relación BUN-
CRE y glucosa (GLU).
Análisis Estadístico
El diseño empleado fue un esquema en bloques
completamente al azar (DBCA), así el factor de bloque
es la camada, dentro de cada camada de manera
aleatoria se asignó a dos animales por tratamiento.
Los datos obtenidos se analizaron mediante
estadísticas descriptivas, se realizó la prueba de
normalidad ShapiroWilk (Kruskall Wallis para
datos no paramétricos) y un ANOVA para verificar
las variaciones entre tratamientos, posteriormente
se realizó la prueba de Tukey para determinar las
diferencias significativas, en el caso de datos no
paramétricos se aplicó la prueba de Wilcoxon.
Un valor de α = 0,05 como nivel de significancia
fue empleado para todas las pruebas de hipótesis.
Los datos fueron analizados empleando el paquete
estadístico R Studio, versión 1.4.1103.
Aspectos Éticos
Este estudio fue avalado con base en el protocolo
de investigación aprobado por el comité de Ética de la
Universidad Central del Ecuador, mediante oficio Nº
127-CE-UCE-2019 con fecha 2 de abril del año 2019,
el cual cumple con las leyes de protección y bienestar
animal.
RESULTADOS
Al finalizar el estudio se evaluaron los cambios
en el hemograma y en la bioquímica sanguínea
después de la suplementación de 90 días de glutamina
y BCAAs, estos resultados se presentan en las Tablas
2 y 3, respectivamente.
Así, se observó que en el leucograma los
leucocitos (WBC) y sus componentes: neutrófilos
(Neu), linfocitos (Lin), monocitos (Mon), eosinófilos
(Eos) y basófilos (Bas) presentaron un efecto (p<0.05)
en el bloque (camada), sin embargo, no presentaron
diferencias (p>0,05) en relación al tratamiento a un
intervalo de confianza del 95%.
Aun así, se determinó que los WBC del T2
(BCAAs) presentaron un promedio de 10.33 (10⁹ /
L), el cual es superior al grupo control y al T1 y T3,
de igual manera se determinó que los caninos del T2
presentaron un mayor promedio de neutrófilos (7,17
10⁹ / L) el cual es superior a los demás tratamientos
(p=0,052) y de acuerdo a los resultados obtenidos en
R, si se emplea un intervalo de confianza del 90%
podría llegar a ser significativo (p<0,05), tal como se
expresa en la Tabla 3.
Las comparaciones de los parámetros de la
bioquímica sanguínea entre los tratamientos en
estudio y el grupo control no mostraron diferencias
ni interacciones (p<0,05) entre tratamientos o
entre bloques, pero sí se observaron diferencias del
promedio general de proteínas totales el cual fue
superior a los valores de referencia citados por otros
autores, tal como se muestra en la Tabla 3.
De igual manera con relación a estos valores,
los tres tratamientos y el grupo control presentaron
niveles ligeramente elevados de las enzimas hepáticas
(TBIL, ALT, AST y GGT) y de los metabolitos renales
(BUN y CREA).
DISCUSIÓN
Son escasos los reportes de valores
hematológicos de cachorros de 30 días (4 semanas)
por lo que la presente investigación constituye un
aporte significativo para los médicos veterinarios
dedicados a este campo, así quienes deben atender a
pacientes de esta edad no tendrán que interpretar los
resultados del hemograma con valores hematológicos
de animales adultos 2, 6 .
Los resultados hematológicos obtenidos a los 30
días de edad se comportaron de manera homogénea
entre los tratamientos, y fueron acordes a los
promedios y rangos de cachorros establecidos por
otros autores 16, 22, 31, 34 .
La suplementación oral de glutamina y BCAAs
por separado y en conjunto para evidenciar un efecto
Mena, R.P. et al.: Suplementación de cachorros caninos. Rev. Vet. 33: 2, 169-176, 2022 173

sinérgico, estos aminoácidos al ser empleados en
cachorros caninos en la etapa del destete tal como
se ha realizado en otras especies 17, 23, 37, teniendo
en cuenta que esta suplementación al momento del
destete en cachorros no ha sido evaluada.
En la Tabla 2 se observa un incremento en
el promedio de la población de leucocitos de los
individuos que pertenecen al T2 (BCAAs), de la
misma manera se determinó un promedio superior
en el contaje de neutrófilos de este tratamiento en
relación al grupo control y a los tratamientos 1 y 3
con los que a un IC del 90% mostró ser diferente
(p<0,05), sin embargo el efecto sinérgico de los
aminoácidos no fue observado en este estudio ya que
los individuos de T1 y T3 no mostraron variaciones
en referencia al grupo control, demostrando que la
suplementación con glutamina por si sola y junto a
los BCAAs no influencian en el desarrollo ni en el
sistema inmunológico de los cachorros al destete.

Tabla 2. Parámetros del hemograma por tratamiento a los 120 días de edad.

HEMOGRAMA 120 DIAS

p valor p valor
parámetro bloque tratamiento
control T1 T2 T3 media/DS
estandar*
WBC(10*9/L) 8,37 8,25 10,33 8,26
8,79 ±2,53 0,002** 0,317
(16,3) 5,45 - 9,48 5,33 - 10,25 8,08 - 16,72 5,18 - 13,25

Neu(10*9/L) 5,12 5,12 7,17 5,22

5,67±1,96 0,002** 0,052 .
(8,9) 3,55 - 7,40 3,11 - 7,01 4,96 - 13,28 3,30 - 8,02

Lin(10*9/L) 2,59 2,56 2,5 2,29

2,48 ±0,85 0,002** 0,456
(4,5) 1,43 - 4,80 1,85 - 3,87 1,76 - 3,28 1,43 - 3,65

Mon(10*9/L) 0,36 0,36 0,45 0,5

0,42 ±0,21 0,013* 0,302
(0,8) 0,19 - 0,68 0,16 - 0,57 0,34 - 0,76 0,22 - 1,06

Eos(10*9/L) 0,16 0,17 0,19 0,22

0,18±0,09 0,815 0,626
(0,3) 0,09 - 0,23 0,06 - 0,28 0,06 - 0,32 0,10 - 0,45

Bas(10*9/L) 0,05 0,04 0,03 0,04

0,04 ±0,02 0,002** 0,876
(--) 0,02 - 0,08 0,01 - 0,08 0,00 - 0,07 0,00 - 0,07

RBC(10*12/L) 5,01 4,45 4,52 4,56

4,62±0,74 0,502 0,831
(6,93) 3,96 - 6,81 3,91 - 5,22 3,84 - 4,99 3,25 - 6,17

HGB(g/dL) 11,17 9,78 9,94 10,1

10,22 ±1,81 0,236 0,794
(16,0) 8,4 - 16,2 8,3 - 11,6 8,7 - 10,9 7,5 - 13,8

HCT(%) 31,4 27,94 28,13 28,65

28,95 ±4,94 0,236 0,794
(43,0) 23,1 - 45,1 23,9 - 32,4 23,9 - 29,9 20,7 - 38,5

MCH(pg) 22,13 21,99 22 22,16

22,07 ±0,88 0,004** 0,75300
(23,5) 21,2 - 23,7 20,8 - 23,1 21 - 24 21,2 - 23

MCHC(g/dL) 35,46 34,99 35,36 35,28

35,26±0,99 0,000*** 0,362
(34,8) 33,4 - 36,7 33,9 - 36,5 33,5 - 36,6 34,1 - 36,1

PLT(10*3/uL) 350,57 328 329,13 359,63 0,000*** 0,706

341,55±97,64
(--) 307 - 500 176 - 530 194 - 422 192 - 518      

*Rangos estándar cachorros 120 días: Von Dehn (2014), Significancia: 0 ‘***’ 0,001 ‘**’ 0,01 ‘*’ 0,05 ‘,’ 0,1 ‘ ’ 1
174 Mena, R.P. et al.: Suplementación de cachorros caninos. Rev. Vet. 33: 2, 169-176, 2022

Tabla 3. Parámetros bioquímicos por tratamiento a los 120 días de edad

parámetro
BIOQUÍMICA 120 DIAS p valor p valor
estándar bloque trat.
control T1 T2 T3 media/DS

TP (g/L) 61,64 56,56 55,89 54,2

63,36 ±29,36 0,511 0,612
(46.5 - 48.8) 53,5 - 78,5 46,4 - 77 31,3 - 72,3 45,8 - 69,9
ALB (g/L) 32,96 31,04 30,5 28,96
32,89 ±10,09 0,510 0,589
(24,5 - 26,1) 28,3 - 41,8 26,5 - 41,9 18 - 37,4 23,5 - 36,2
GLO (g/L) 28,69 25,51 25,39 25,24
30,47 ±19,55 0,490 0,611
(23 - 39) 24,1 - 36,7 19,9 - 35,1 13,3 - 34,9 22,2 - 33,7
A,G 1,16 1,21 1,23 1,18
1,16 ±0,14 -- --
(0,78 - 1,46) 1,1 - 1,2 1,1 - 1,3 1,1 - 1,4 1,1 - 1,3
TBIL(mmol/L) 3,04 3,39 3,34 3,61
3,37 ±0,89 0,875 0,851
(1,7 - 5,16) 2,05 - 4,44 2,22 - 4,44 2,22 - 4,44 2,56 - 5,13
ALT(U/L) 43,71 42,86 36,86 35,25
43,97 ±22,68 0,229 0,599
(19,3 - 25,0) 28 - 71 24 - 71 14 - 50 21 -44
AST(U/L) 61,43 48 49 60,38
60,32 ±28,51 0,303 0,965
(26,2 - 31,2) 31 - 90 34 - 85 28 - 71 47 - 88
GGT(U/L) 1,14 1,13 0,9 1
2,25 ±5,17 0,557 0,647
(0 - 11) 0,1 - 1,9 0,1 - 1,9 0,1 - 1,8 0,3 - 1,8
BUN(mmol/L) 4,21 4,01 4,27 3,78
4,72±3,18 0,473 0,676
(2,47 - 4,16) 2,18 - 7,4 3,17 - 6,64 3 - 5,73 2,62 - 4,67
CRE(umol/L) 57,29 48 49,86 53,75 59,06 ±32,89 0,866 0,787
(40,1 - 48,4) 37 - 93 37 - 58 39 - 57 40 - 86      

*Rangos estándar cachorros 120 días: Brenten et al. (2016), Von Dehn (2014).

Similares resultados se obtuvieron en un estudio una influencia positiva en el sistema inmunológico

en el cual se suplementó a ratones anoréxicos con
glutamina y BCAAs, evidenciándose efectos en el
desarrollo solo en los ratones suplementados con
BCCAs 17 , confirmando así la no esencialidad de
la glutamina en animales cuyo requerimiento de
este aminoácido se encuentre cubierto con el aporte
nutricional adecuado 7, 19 .
Así, si la alimentación cumple con los
requerimientos de glutamina para los cachorros
en la etapa de desarrollo, el destete es un estresor
fisiológico cuyas consecuencias en el sistema
inmunológico y en el desarrollo de estos individuos.
no podrán ser estabilizadas tras la suplementación
de este aminoácido como sí se ha observado en
estudios realizados en personas 37 y en perros 18, en
donde la suplementación parenteral de glutamina en
pacientes convalecientes ha demostrado eficacia en la
disminución de los síntomas de algunas enfermedades
que cursan con estados hipercatabólicos (sepsis,
enfermedad inflamatoria intestinal, cáncer) y una
disminución en el tiempo de convalecencia 29 al
estimular la inmunidad celular de los mismos 18, 20 .
Los aminoácidos de cadena ramificada:
leucina, isoleucina y valina han demostrado tener
de personas y animales 3, 30 . Estos corresponden a
aminoácidos esenciales para el organismo, así el valor
fisiológico de estas moléculas es motivo de estudio
de muchos investigadores, principalmente se estudia
su función y los efectos de suplementación en varias
enfermedades como cáncer, diabetes e insuficiencia
renal, enfermedades que se presentan actualmente en
personas y animales 25 .
Los BCAAs regulan la síntesis de proteínas
por lo cual ejercen un efecto protectivo en pacientes
con enfermedad hepática o en aquellos pacientes que
cursan con cuadros de inmunodepresión 1, 33, desde
hace algunos años se ha evidenciado el efecto positivo
de los BCAAs por ejemplo en animales que sufrieron
varios tipos de trauma o infecciones, demostrando
su efecto regenerativo e inmuno regulador tras su
suplementación 1, 4, 12 .
En otros estudios se determinó un efecto positivo
de la suplementación de isoleucina en el sistema
inmunológico 23, en donde al igual que en este trabajo
se observó un incremento en el contaje de células
blancas y de los neutrófilos en los animales del T2,
sin embargo, en el estudio realizado por Mao et al. 23,
realizado en cerdos al destete afectados por rotavirus
Mena, R.P. et al.: Suplementación de cachorros caninos. Rev. Vet. 33: 2, 169-176, 2022
se evidenció también un incremento en la población
de linfocitos, lo cual se contrapone a lo encontrado
en esta investigación en donde no se observaron
diferencias (p<0,05) entre el grupo control y los tres
tratamientos en estudio.
Esta diferencia puede estar asociada a que en
nuestra investigación los animales se mantuvieron
en un entorno saludable durante los 90 días del
experimento, lo cual pudo influir para que este grupo
celular no presente variación entre los tratamientos.
Finalmente, en este trabajo se evaluó en los
cachorros el comportamiento de los parámetros de
la bioquímica sanguínea tras la suplementación de
90 días de glutamina y BCAAs determinándose que
las proteínas totales en el grupo control y en los tres
tratamientos en estudio fueron superiores a los rangos
de referencia establecidos por varios autores para
animales de esta edad, pero se resalta el incremento
observado en los animales del T2, desde el día 30
al día 120, que fueron los que mostraron un mayor
incremento en la concentración de las proteínas,
coincidiendo con varios estudios en donde se indica
un efecto positivo de la suplementación de BCAAs en
la síntesis de proteínas 3, 18, 30, 35 .
Las transaminasas hepáticas ALT, AST y GGT
presentaron niveles ligeramente superiores a los rangos
establecidos en animales sanos por otros autores 2, 16
tanto en el grupo control como en los tres tratamientos.
Así, estos niveles no reflejan una toxicidad asociada
a la suplementación de los aminoácidos en estudio,
lo cual coincide con un estudio en el que se evaluó
la tolerancia a la suplementación de BCAAs en seres
humanos y cerdos en donde se concluyó que bajo un
sustrato proteico adecuado la suplementación era muy
bien tolerada 1, 32, 34 .
Los parámetros que evalúan la función renal
(BUN y CRE) tuvieron un comportamiento similar
a las transaminasas hepáticas mostrando ligeros
incrementos en el grupo control y en los tres
tratamientos, descartando así que la suplementación
con glutamina y BCAAs a las dosis empleadas en este
estudio pudiesen llegar a producir un daño hepático o
renal de los animales en estudio.
CONCLUSIONES
La suplementación con BCCAs en cachorros
caninos tiene un efecto positivo en la inmunidad celular
de estos individuos, evidenciado por un aumento en
la población de neutrófilos en los animales de este
tratamiento. Se pueden emplear tales suplementos
en los cachorros por tiempos prolongados sin la
evidencia de efectos negativos para su salud.
Se recomiendan futuros estudios en animales
alimentados con alimentos con restos de alimentos de
175
casa o con alimentos económicos en los cuales una
deficiencia en el aporte de aminoácidos puede hacer
más evidente el efecto de la suplementación de los
aminoácidos aquí estudiados.
Agradecimientos: A la Facultad de Medicina
Veterinaria y Zootecnia y al Vicerrectorado de
la Universidad Central de Ecuador, por el apoyo
brindado a lo largo de la investigación.
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Mazzucco P.M. et al.: Anaplasmosis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 177-182, 2022 177

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 177-182, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Casos de anaplasmosis, babesiosis y tripanosomiasis bovina

registrados en el INTA Rafaela (2012-2019)

Mazzucco Panizza, M.1; Novoa, M.B.1; Sarli, M.1; Signorini, M.1; Echaide, I.E.2

Instituto de Investigación de la Cadena Láctea (INTA-CONICET), Ruta 34, km 227, Rafaela,

1

Santa Fe, Argentina. 2INTA-EEA Rafaela, Ruta 34 km 227 Rafaela, Santa Fe, Argentina. E-mail:
mazzuccopanizza.m@inta.gob.ar

Resumen
Mazzucco Panizza, M.; Novoa, M.B.; Sarli, M.; Signorini, M.; Echaide, I.E.: Casos de
anaplasmosis, babesiosis y tripanosomiasis bovina registrados en el INTA Rafaela (2012-2019).
Rev. Vet. 33: 2, 177-182, 2022. Anaplasmosis, babesiosis y tripanosomiasis de los bovinos son
enfermedades de importancia económica provocadas por Anaplasma marginale, Babesia bovis
y/o Babesia bigemina, y Trypanosoma vivax, respectivamente. En este trabajo se analizaron los
protocolos recibidos durante 2012-2019 en el laboratorio de hemoparásitos de la EEA Rafaela con
diagnóstico presuntivo de alguna de estas tres enfermedades. Se realizó diagnóstico etiológico de
los casos mediante la observación microscópica del agente causal. Signos clínicos y resultados
de pruebas serológicas y moleculares se consideraron como información complementaria. Se
analizó la relación entre casos de anaplasmosis (variable dependiente), estación del año y zona
con o sin presencia de Rhipicephalus microplus (variables independientes) mediante modelo lineal
generalizado utilizando distribución binomial. El 50% de los protocolos provino de la Provincia
de Santa Fe. Se arribó a un diagnóstico etiológico en el 48% (213/441) de los protocolos, de los
cuales un 73% resultó positivo a anaplasmosis, 16% a babesiosis y 11% a tripanosomiasis. En
zona libre de R. microplus se registraron 55 casos de anaplasmosis. La proporción de casos de
anaplasmosis resultó significativamente mayor en otoño respecto a verano (p<0,05). El análisis
conjunto de casos de anaplasmosis, estación del año y zona, no resultó significativo. La ocurrencia
de casos de anaplasmosis en zonas consideradas naturalmente libres de la enfermedad confirma
su estatus en expansión. Los brotes de babesiosis bovina continúan circunscriptos a las regiones
con R. microplus. La tripanosomiasis bovina también es una enfermedad en expansión y debe ser
considerada en el diagnóstico diferencial de enfermedades anemizantes.

Palabras clave: hemoparásitos, anemia, Anaplasma marginale, Babesia bovis, B. bigemina,

Trypanosoma vivax.

Abstract
Mazzucco Panizza, M.; Novoa, M.B.; Sarli, M.; Signorini, M.; Echaide, I.E.: Cases of bovine
anaplasmosis, babesiosis and trypanosomiasis registered at INTA Rafaela (2012 to 2019). Rev.
Vet. 33: 2, 177-182, 2022. Bovine anaplasmosis, babesiosis and trypanosomiasis are diseases
of economic importance caused by Anaplasma marginale, Babesia bovis and/or B. bigemina,
and Trypanosoma vivax, respectively. In this work, protocols received during 2012-2019 in the
laboratory of hemoparasites of the EEA Rafaela with a presumptive diagnosis of one of these
three diseases were analyzed. The confirmatory diagnosis was made by microscopic observation
of the causal agent. Clinical signs and results of serological and molecular tests were used as
complementary information. Association between cases of anaplasmosis (dependent variable), the
season of the year and area with or without the presence of Rhipicephalus microplus (independent

Recibido: Marzo 2022. Aceptado: Junio 2022.

178 Mazzucco P.M. et al.: Anaplasmosis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 177-182, 2022

variables) was analyzed with a generalized linear model using a binomial distribution. 50% of
the protocols came from Santa Fe. Confirmatory diagnosis was achieved in 48% (213/441) of
the protocols, of which 73% were positive for anaplasmosis, 16% for babesiosis and 11% for
trypanosomiasis. In the R. microplus free area, 55 cases of anaplasmosis were recorded. The
proportion of anaplasmosis cases was significantly higher in autumn compared to summer (p<0.05).
No significant differences were observed when anaplasmosis cases, the season of the year and area
were analyzed together. The occurrence of anaplasmosis cases in areas considered naturally free
of the disease confirms its expansion. Outbreaks of bovine babesiosis occurred in areas with R.
microplus. Bovine trypanosomiasis is also an expanding disease and should be considered in the
differential diagnosis of hemoparasitic diseases.

Key words: hemoparasites, anemia, Anaplasma marginale, Babesia bovis, B. bigemina,

Trypanosoma vivax.

INTRODUCCIÓN de A. centrale, especie de menor patogenicidad. No

La anaplasmosis, la babesiosis y la
tripanosomiasis de los bovinos son enfermedades
anemizantes severas y frecuentemente letales en
animales adultos. La anaplasmosis bovina es causada
por Anaplasma marginale, bacteria transmitida por
garrapatas, dípteros hematófagos y elementos corto-
punzantes contaminados con sangre de bovinos
portadores 3, 12 .
En Argentina es endémica al norte del
paralelo 33°S 5, 6 y se considera una enfermedad en
expansión, con ocurrencia de brotes esporádicos en
establecimientos localizados al sur del paralelo 33°S
7
. La babesiosis bovina es causada por Babesia bovis
y/o Babesia bigemina, protozoarios cuya transmisión
depende de su vector natural, la garrapata Rhipicephalus
microplus que habita al norte de los paralelos 31-32° S
con excepción de la región andina 13 .
La anaplasmosis y la babesiosis bovina
representan uno de los principales problemas
sanitarios del Noroeste y Noreste argentino, donde se
las suele agrupar en el complejo denominado “tristeza
bovina”.
En cuanto a la tripanosomiasis bovina,
es causada por Trypanosoma vivax, protozoario
transmitido por dípteros hematófagos. Fue
diagnosticado por primera vez en Argentina en el
año 2006, en la provincia de Formosa 16 . Los últimos
registros de brotes corresponden a las provincias de
Córdoba 11 y Santa Fe 1. A diferencia de Anaplasma y
Babesia, T. vivax no parasita los eritrocitos.
Sin tratamiento, los brotes causados por
estas enfermedades tienen elevados porcentajes de
mortalidad, causa principal de las severas pérdidas
económicas que producen 2, 4, 17 . La prevención de
la babesiosis se realiza mediante vacunas basadas en
cepas de Babesia cuya patogenicidad fue atenuada
in vivo. La anaplasmosis se previene por inoculación
se han desarrollado vacunas para la prevención de la
tripanosomiasis.
En el laboratorio de hemoparásitos de la EEA
Rafaela se reciben muestras para diagnóstico etiológico
de enfermedades, evaluaciones epidemiológicas
y controles post vacunales. En este trabajo se
analizaron los protocolos de casos recibidos para el
diagnóstico etiológico de anaplasmosis, babesiosis
y tripanosomiasis bovina, con el objetivo de aportar
información actualizada de la casuística regional.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se analizaron los protocolos recibidos entre los
años 2012-2019 de casos con diagnóstico presuntivo
de anaplasmosis, babesiosis o tripanosomiasis bovina.
Se ordenaron los protocolos según fecha, origen,
diagnóstico etiológico y zona libre o con presencia de
R. microplus.
Se consideró zona con presencia de R.
microplus al norte del paralelo 31°S (Córdoba y Santa
Fe) y 32°S (Entre Ríos). Para establecer los límites
de zona con garrapatas se tomaron como referencia
las Resoluciones 878/02 del SENASA, 1144/14 del
Ministerio de Producción Santa Fe y 426/17 del
Ministerio de Producción Entre Ríos; y lo establecido
por Guglielmone 13 .
Las muestras recibidas para el diagnóstico
de casos fueron i) extendidos e improntas de tejidos
(sangre, bazo, sistema nervioso central), ii) sangre
con anticoagulante y iii) suero. Los extendidos e
improntas fueron fijados con metanol, teñidos con
Giemsa (Biopur) al 10% en solución bufferada pH
7,0 durante 30 min y examinados con aumento 1000x
(microscopio óptico Olympus BH-2).
En todos los casos se estimó la parasitemia y se
identificaron las especies de Babesia y de Anaplasma.
Para la identificación de T. vivax, se observó la banda
Mazzucco P.M. et al.: Anaplasmosis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 177-182, 2022 179

de leucocitos (interfase entre eritrocitos y plasma en

un tubo de microhematocrito) de cada muestra con
aumento de 400x de acuerdo al método de Woo 21.
La determinación del índice de hematocrito y
la hematología celular fueron utilizadas como apoyo
al diagnóstico. Eventualmente se obtuvo información
complementaria individual y de rodeo mediante
pruebas serológicas: i) inmuno-fluorescencia indirecta
para identificación de Babesia (Nikon, Eclipse 90I),
ii) inmuno enzimáticas (diferentes ELISA para
anaplasmosis y babesiosis). Pruebas moleculares Nota: Se incluyeron los casos confirmados
(PCR) se utilizaron para diferenciar especies (A. cuya información de procedencia se encontraba
marginale de A. centrale). especificada en los registros (n=203).
Estas últimas pruebas permiten detectar
portadores, pero no necesariamente indican causalidad. Figura 1. Proporción de casos de anaplasmosis,
Los datos se resumieron y analizaron estadísticamente babesiosis y tripanosomiasis diagnosticados en zonas
con el programa Infostat (Universidad Nacional de con y sin presencia de Rhipicephalus microplus.
Córdoba) 8. Los casos confirmados de anaplasmosis
se separaron según época del año en que ocurrieron.
Para evaluar la asociación entre casos de
anaplasmosis y la estación del año y zona de
ocurrencia, se empleó un modelo lineal generalizado
con distribución binomial y función de enlace
logarítmico.

RESULTADOS

Se analizaron 441 protocolos con diagnóstico

presuntivo de anaplasmosis, babesiosis y/o
tripanosomiasis bovina de las provincias de Chaco,
Corrientes, Salta, Santiago del Estero y Tucumán
(donde estas enfermedades son endémicas); Nota: Se incluyeron los casos confirmados cuya
Catamarca, Córdoba, Entre Ríos y Santa Fe información de año de presentación se encontraba
(parcialmente endémicas) y Buenos Aires, La Pampa especificada en los registros (n=213).
y San Luis (libres).
El 50% de los protocolos provino de la Figura 2. Distribución anual de los casos confirmados
provincia de Santa Fe. Se arribó a un diagnóstico de anaplasmosis, babesiosis y tripanosomiasis bovina
etiológico en el 48% (213/441) de los casos ingresados, durante un período de 8 años.
de los cuales un 73% (n=156) resultaron positivos a
anaplasmosis, 16% (n=34) a babesiosis y 11% (n=23) Durante el período de 8 años observados, hubo
a tripanosomiasis. un incremento de casos de anaplasmosis en el año
De los 138 casos confirmados provenientes de 2015 (n=44) y de tripanosomiasis en los años 2017
la zona con R. microplus, el 67,4%, 23,9% y 8,7% (n=10), 2018 (n=4) y 2019 (n=8) (Figura 2).
correspondieron a los diagnósticos de anaplasmosis, El 68,5% (n=107) de los casos de anaplasmosis
babesiosis y tripanosomiasis respectivamente (Figura bovina ocurrieron en el primer semestre del año.
1). En zona libre de R. microplus el 84,6% de los casos Se evidenció una mayor presentación de casos
correspondieron a anaplasmosis (n=55), los cuales se de anaplasmosis en otoño, tanto en zona libre de
distribuyeron en las provincias de Santa Fe (n=30), garrapatas como en zona con ellas (Figura 3).
Córdoba (n=15), Buenos Aires (n=7), Entre Ríos
(n=2) y La Pampa (n=1). Los casos de tripanosomiasis
ocurrieron en la provincia de Santa Fe tanto al norte
como al sur del paralelo 31°S, con la excepción de un
caso del norte de Córdoba y otro caso de proveniencia
desconocida (Figura 1).
180
Figura 3. Distribución mensual de los casos de
anaplasmosis bovina diagnosticados entre 2012 y
2019 en zonas con y sin presencia de Rhipicephalus
microplus.
Nota: Se incluyeron los casos confirmados de
anaplasmosis cuya información de procedencia y mes
de presentación se encontraba especificada en los
registros (n = 147).
Al aplicar el modelo lineal generalizado para
casos de anaplasmosis en relación a la estación del
año, se observó una tendencia a la significancia
(p=0,093) con resultados no significativos cuando se
introdujo además la variable zona (p=0,25).
En la comparación por parejas de casos de
anaplasmosis entre estaciones del año se observó una
diferencia significativa en otoño respecto a verano y
una tendencia a la significancia en otoño respecto a
invierno y primavera (Tabla 1).
Tabla 1. Comparación por parejas de casos de
anaplasmosis bovina diagnosticados en diferentes
estaciones del año.
estación proporción (IC 95%)
Otoño a 0,44 (0,36 – 0,51)
Invierno b* 0,32 (0,23 – 0,43)
Primavera b* 0,31 (0,22 – 0,42)
Verano b** 0,31 (0,23 – 0,40)
Superíndices diferentes indican diferencias en la
comparación por parejas.  *0,05<P valor<0,1 **P valor
<0,05
Mazzucco P.M. et al.: Anaplasmosis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 177-182, 2022
DISCUSIÓN
Desde 12 provincias se describieron los casos
de anaplasmosis, babesiosis y tripanosomiasis bovina
recibidos para la confirmación diagnóstica en el
Laboratorio de Hemoparásitos de la EEA Rafaela,
Argentina.
El mayor porcentaje de muestras analizadas se
originó en la Provincia de Santa Fe por la ubicación
del laboratorio. En algunos protocolos se notificó el
tratamiento previo con antibióticos y quimioterápicos
de los animales muestreados, lo cual dificultó el
hallazgo del patógeno en sangre y por ende el
diagnóstico de certeza.
La anaplasmosis fue la enfermedad que
con mayor frecuencia requirió de los análisis
confirmatorios de laboratorio desde todas las regiones.
En la zona con presencia de R. microplus, la mayor
proporción de protocolos incluyó los casos positivos
a anaplasmosis (67,4%) seguido por los de babesiosis
(23,9%) y tripanosomiasis (8,7%).
Otros estudios de brotes provocados por
hemoparásitos, establecieron que entre el 29% y 44,3%
de los mismos fueron causados por A. marginale,
mientras que el resto fueron generados por B. bovis y/o
B. bigemina 6, 17 . En la zonas libres de R. microplus,
la proporción de diagnóstico de anaplasmosis se
vio incrementada por la ausencia de Babesia sp. De
acuerdo a diferentes relevamientos publicados, los
niveles de endemicidad de anaplasmosis se reducen
desde el paralelo 30°S hacia el 33°S y desde el
meridiano 60°O al 63°O.
En rodeos de bovinos para carne de la región
centro-litoral de Santa Fe (31°S y 60°O) se estableció
que el 62% de los rodeos relevados tenían animales
con anticuerpos contra Anaplasma sp 9. Mientras que
en otro estudio realizado en Santa Fe pero en rodeos de
leche, se detectaron anticuerpos contra A. marginale
30%, 23% y 5% de los tambos muestreados, según su
ubicación entre los paralelos 30-31°S, 31-32°S y 32-
33°S respectivamente 19 .
Un estudio realizado en la cuenca lechera
de Villa María, Córdoba (32,5°S y 63°O) reportó
serología positiva a Anaplasma sp en 19% de los
114 establecimientos relevados, con una prevalencia
intra-predial promedio de 11% ± 3,5 e identificación
de animales portadores de A. marginale por PCR 10 .
Este mismo estudio reveló mediante encuestas
la ocurrencia de brotes de anaplasmosis y vacunación
con A. centrale, especie que se expande por su uso
como inmunógeno vivo y en forma natural 20 . Los
estudios de sero-prevalencia mencionados y la
descripción de los casos de anaplasmosis confirmados
tanto en el laboratorio de hemoparásitos de la EEA
Rafaela como en otros laboratorios 7 , confirman la
Mazzucco P.M. et al.: Anaplasmosis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 177-182, 2022
presencia y expansión de A. marginale en zona libre
de R. microplus.
El movimiento comercial de bovinos sin
control sanitario, seguido de la acción de los insectos
hematófagos y las prácticas veterinarias sin medidas
higiénicas preventivas como el cambio de agujas
hipodérmicas entre animales, serían los principales
factores responsables de la expansión de la anaplasmosis
y tripanosomiasis en Argentina 15, 19, 20 .
La vacunación con A. centrale genera protección
contra las formas severas de la anaplasmosis, sin
embargo, no evita la co-infección A. marginale lo
cual podría enmascarar la presencia de portadores
de A. marginale contribuyendo a su dispersión. En
el presente trabajo, aunque el origen de las muestras
provenía de diversos contextos epidemiológicos,
el análisis reflejó variaciones anuales para las tres
enfermedades (Figura 2).
El análisis de los casos protocolizados
mostró un incremento continuo de casos anuales
de anaplasmosis, aunque con picos periódicos (año
2015), acompañados por una proporción menor de
casos de babesiosis, con variaciones cíclicas (sin
recepción de casos en el 2014) y un fuerte incremento
de los casos de tripanosomiasis en los últimos 3 años.
El INTA Balcarce reportó la ocurrencia de 6 brotes
de anaplasmosis en regiones ganaderas libres de
hemoparásitos durante el año 2015 7 . Ello coincide con
el año de mayor proporción de casos de anaplasmosis
observado en este trabajo.
Respecto a la variación estacional de los casos,
Späth reportó en zona endémica de R. microplus un
18
89% de ocurrencia de casos confirmados de tristeza
bovina entre enero y julio, y un pico en abril tanto
para babesiosis como para anaplasmosis.
Para el tema particular de la anaplasmosis
bovina, en el presente trabajo la proporción de
casos resultó significativamente mayor en otoño
respecto a verano (p<0,05) con valores cercanos a la
significancia respecto a primavera e invierno (p<0,1)
lo que demuestra estacionalidad en la presentación de
los casos (Figura 3).
Al introducir la variable zona en el modelo, se
observaron resultados no significativos con lo cual la
estacionalidad de los casos de anaplasmosis no estaría
relacionada a la presencia o ausencia de R. micoplus.
El aumento de casos de anaplasmosis
registrados en abril y mayo podría ser analizado en
relación a la vacunación de aftosa (marzo) tal lo
descrito por Vanzini y Ramirez 20 . Guglielmone14
sostuvo que en rodeos lecheros la aparición
sostenida de casos de anaplasmosis a lo largo del
año respondería a prácticas iatrogénicas. Mientras
que en rodeos de cría los casos de anaplasmosis
concentrados en verano y otoño coincidirían con un
181
probable pico de vectores hematófagos en los meses
previos. Se desconoce aún con precisión la dinámica
de las poblaciones de dípteros hematófagos (Tabanus
sp y Stomoxys calcitrans) en Argentina.
Los casos de tripanosomiasis por T. vivax
notificados en el presente trabajo y en anteriores,
indican que esta afección debería ser considerada en el
diagnóstico diferencial de enfermedades anemizantes.
Sería relevante contar con una herramienta de
diagnóstico serológico para la tripanosomiasis
bovina que permita detectar animales portadores y
monitorear la prevalencia de la enfermedad en los
rodeos afectados 1 .
Si bien los resultados presentados no
necesariamente reflejan la realidad de la región, dado
que derivan de un análisis retrospectivo y aleatorio,
este trabajo permitió describir la distribución temporal
y geográfica de los casos de anaplasmosis, babesiosis
y tripanosomiasis bovina recibidos, aportando
información actualizada de la casuística regional.
Agradecimientos
Las autoras y autores de este trabajo agradecen
a las personas responsables del diagnóstico de las
enfermedades en los años considerados: Alejandro
Abdala (EEA INTA Rafaela), Paola Amherdt (EEA
INTA Rafaela), Atilio Mangold (EEA INTA Rafaela),
Nicolás Morel (EEA INTA Rafaela), María Evangelina
Primo (IdICaL INTA-CONICET), Guillermo Suárez
(IdICaL INTA-CONICET), Carolina Thompson
(IdICaL INTA-CONICET) y Susana Torioni de
Echaide (EEA INTA Rafaela). Asimismo se agradece
la colaboración de Darío Manzoli (Facultad de
Ciencias Veterinarias, UNL) en su ayuda para efectuar
el análisis estadístico.
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Romera, B.M. et al.: Ornamentos de gallinas. Rev. Vet. 33: 2, 183-191, 2022 183

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 183-191, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Ornamentos sexuales y caracteres productivos

en gallinas Campero Casilda

Romera, B.M.1,3; Fernández, R.1; Advínculo, S.A.1; Canet, Z.E.1,2; DiMasso, R.J.1

1
Cátedra de Genética, Facultad Cs. Vet. UNR, Ovidio Lagos y Ruta 33. 2170 Casilda.
2
INTA Pergamino, Ruta 32, Km 109, 2700 Pergamino.3Becario PERHID.
E-mail: laboratoriojda@gmail.com

Resumen
Romera, B.M.; Fernández, R.; Advínculo, S.A.; Canet, Z.E.; DiMasso, R.J.: Ornamentos
sexuales y caracteres productivos en gallinas Campero Casilda. Rev. Vet. 33: 2, 183-191, 2022.
Con el objetivo de asociar el tamaño de los ornamentos sexuales con caracteres reproductivos y
productivos en gallinas del cruzamiento de tres vías Campero Casilda se calcularon, en 97 aves
de 30 semanas, los índices de cresta [IC: longitud x alto] y barbilla [IB: longitud x ancho]. Los
datos individuales se graficaron en un sistema de ejes cartesianos (X: IC; Y: IB) el que se dividió
en cuatro cuadrantes mediante dos rectas que intersectan a cada eje a nivel de los valores medios.
Se identificaron las aves con valores extremos de ambos índices [Cuadrante I (CI): > IC > IB y
Cuadrante III (CIII): < IC < IB] y, para cada una de ellas, se registraron los caracteres productivos
a la madurez sexual, cuatro indicadores de desarrollo óseo a las 30 y 71 semanas, los patrones
dinámicos del peso corporal y el peso del huevo y la relación de conversión en huevos en la
primera parte del ciclo de postura. Las aves con mayor desarrollo de los ornamentos sexuales
(a) fueron más precoces y comenzaron la postura con huevos de menor peso, pero con similar
regularidad y uniformidad, presentando (b) mayor longitud del tarso y del fémur en ambas edades,
mayor diámetro del tarso a las 30 semanas y mayor longitud de la tibia a las 71 semanas de
edad (c) mayor tasa de crecimiento exponencial entre la sexta y la vigésima semana pero similar
patrón de crecimiento global, (d) menor peso asintótico del huevo, menor tasa de maduración
para el carácter y menor peso teórico del primer huevo y (e) mayor número de huevos de menor
peso y similar relación de conversión entre las 26 y 35 semanas. La combinación del tamaño
de los ornamentos sexuales se presenta como una alternativa para la selección temprana de los
reproductores.
Palabras clave: índice de cresta, índice de barbilla, madurez sexual, crecimiento, peso del huevo,
relación de conversión.

Abstract
Romera, B.M.; Fernández, R.; Advínculo, S.A.; Canet, Z.E.; DiMasso, R.J.: Sexual ornaments
and productive traits in Campero Casilda hens. Rev. Vet. 33: 2,183-191, 2022. In order to associate
the size of sexual ornaments with reproductive and productive characters in hens from the three-
way cross Campero Casilda, the comb [CI: length x height] and wattle indices [BI: length x width]
were calculated. Individual data were graphed in a Cartesian system (X: IC; Y: IB) which was
divided into four quadrants by two lines that intersect each axis at the level of their mean values.
Birds with extreme values of both indices [Quadrant I (CI):> CI> IB and Quadrant III (CIII):
<CI <IB] were identified and, for each of them, the productive characters at sexual maturity, four
indicators of bone development at 30 and 71 weeks, the dynamic patterns of body weight and egg
weight and the ratio of feed conversion to eggs in the first part of the laying cycle, were recorded.
Birds with greater development of sexual ornaments (a) were precocious and began laying with
eggs of lower weight, but with similar regularity and uniformity and presented (b) greater length

Recibido: Marzo 2022. Aceptado: Junio 2022.

184 Romera, B.M. et al.: Ornamentos de gallinas. Rev. Vet. 33: 2,183-191, 2022

of the tarsus and femur in both ages, greater diameter of the tarsus at 30 weeks and greater length
of the tibia at 71 weeks of age, (c) higher exponential growth rate between the sixth and twentieth
week but similar global growth pattern, (d) lower asymptotic egg weight, lower maturation rate for
the character and lower theoretical weight of the first egg and (e) higher number of eggs of lower
weight and similar feed conversion ratio between 26 and 35 weeks. Size combination of sexual
ornaments is presented as an alternative for the early selection of the breeders.

Key words: comb index, wattle index, sexual maturity, growth, egg weight, feed conversion ratio.

población base para el desarrollo de una población

INTRODUCCIÓN sintética.

La cresta y las barbillas, apéndices carnosos MATERIAL Y MÉTODOS

desprovistos de plumas localizados en la cabeza de
gallos y gallinas, cumplen un rol en la termo-regulación
12
y, como ornamentos sexuales, representan estímulos
visuales vinculados con el comportamiento social en
tanto su tamaño afecta las decisiones de apareamiento
de machos y de hembras 17, 20 . En el antecesor silvestre
de la gallina doméstica es un indicador del rango
social de los machos y las hembras buscan aparearse
con aquellos machos con crestas más grandes 18, 26 .
La evolución de la ornamentación sexual está
asociada no solo a la elección de pareja sino también
con el mayor éxito reproductivo de los individuos con
ornamentos más grandes 4 . Las gallinas presentes en
lotes mixtos que no tienen información sobre el status
de dominancia social de los machos, permanecen
cerca de aquellos con crestas más grandes que el
promedio 15 .
La disminución del tamaño de los ornamentos
femeninos durante la incubación proporciona una
señal a los machos que evitan así a las hembras
sexualmente no receptivas 4 . También se correlaciona
con la masa ósea 24 .
El estudio genómico de la estructura genética
de la cresta demostró que la inversión somática
femenina en este ornamento refleja tanto su inversión
reproductiva como esquelética 24 : la primera a través
de un aumento en la producción de huevos, la segunda
por su correlación con la masa ósea, y el vínculo entre
ambas mediado por la movilización de minerales para
la producción de huevos 24, 25 .
Se dispone, asimismo, de evidencia que las
hembras con ornamentos sexuales de mayor tamaño
producen óvulos más grandes, asignan más recursos a
los embriones y están sujetas a una mayor competencia
de espermatozoides debido a que los machos invierten
esperma preferentemente en ellas 20 .
El objetivo de este trabajo fue asociar el
tamaño de los ornamentos sexuales con un conjunto
de caracteres reproductivos y productivos en gallinas
de un cruzamiento de tres vías a ser utilizado como
Aves
Se trabajó con una población de 97 hembras
Campero Casilda, cruzamiento de tres vías entre
machos de la población sintética paterna AH’ y
hembras producto del cruzamiento simple entre las
poblaciones sintéticas ES como padre y A como
madre.
Estas poblaciones sintéticas fueron generadas
y se mantienen en el Núcleo Genético de la Sección
Avicultura de la Estación Experimental Agropecuaria
“Ing. Agr. Walter Kugler” del Instituto Nacional de
Tecnología Agropecuaria, en la localidad bonaerense
de Pergamino.
Su composición genética es: Sintética AH’
(50% Hubbard 50% estirpe Anak grises), Sintética ES
(87,5% Cornish Colorado 12,5% Rhode Island Red)
y Sintética A (75% Cornish Colorado 25% Rhode
Island Red).
Desarrollo de los ornamentos sexuales
A las 30 semanas de edad se midieron en forma
individual, con calibre micrométrico, la longitud y el
ancho de los ornamentos sexuales cresta y barbilla 11
de cada ave según el siguiente detalle: longitud de la
cresta (distancia entre la inserción de la cresta en el
pico y el último lóbulo de la cresta) y ancho de la
cresta (distancia desde la punta de la espina central
hasta donde se inserta en el cráneo, si el número de
espinas resultó ser par se utilizó el más alto).
También la longitud de la barbilla (distancia
desde la inserción derecha de la barbilla en el pico,
sosteniendo la barbilla con una mano y dibujando una
línea recta hasta el fin de esta) y ancho de la barbilla
(distancia perpendicular a la longitud en el sector
más ancho de la barbilla). Se calcularon los índices
de cresta [IC (mm2) = longitud de la cresta x alto de
la cresta] y de barbilla [IB (mm2) = longitud de la
barbilla x ancho de la barbilla].
Romera, B.M. et al.: Ornamentos de gallinas. Rev. Vet. 33: 2, 183-191, 2022
Los datos individuales de ambos índices se
graficaron en un sistema de ejes cartesianos ortogonales
(X: IC; Y: IB) el que se dividió en cuatro cuadrantes
mediante dos rectas que intersectan a cada eje a nivel
de los valores medios de las variables respectivas
[Cuadrante I (CI): > IC > IB; Cuadrante II (CII): <
IC > IB; Cuadrante III (CIII): < IC < IB y Cuadrante
IV (CIV): > IC < IB]. Se identificaron las aves con
valores extremos de ambos índices -cuadrantes I y III-
y se registraron en ellas los siguientes caracteres de
interés productivo.
Caracteres productivos a la madurez sexual
En el momento de la puesta del primer huevo se
registró: la edad (días), como indicador de precocidad
sexual, el peso corporal (g), el peso del primer huevo
(g), el peso promedio de los 10 primeros huevos
(g), como indicador más fiable del peso del huevo
al inicio de la postura, el número de días necesarios
para poner los 10 primeros huevos, como indicador de
regularidad en el inicio de la postura, y el coeficiente
de variación del peso de los 10 primeros huevos (%),
como indicador de uniformidad en el inicio de la
postura.
Indicadores de desarrollo óseo
A las 30 y 71 semanas de edad se registró
en la extremidad derecha de cada ave, con calibre
micrométrico, la longitud del muslo = fémur [desde
la unión de la tibia con el fémur hasta la articulación
coxo-femoral], la longitud del tarso [desde la
articulación de la tibia hasta la articulación donde el
dedo de la pata forma un ángulo de 90 grados con el
tarso], el diámetro del tarso [desde atrás al frente, en
el medio del hueso metatarsiano, sin presionar la piel]
y la longitud de la tibia [desde su unión con el fémur
hasta la articulación tarso-metatarsiana].
Patrón dinámico de peso corporal
Todas las aves se pesaron en forma individual
a intervalos semanales entre el nacimiento y las 72
semanas de edad. El comportamiento del peso corporal
en función de la edad se evaluó con tres criterios:
Etapa 1 (nacimiento-semana 5 de crecimiento a
piso con alimentación ad libitum), Etapa 2 (semana
6 a semana 22 de crecimiento en jaula individual de
postura con restricción en el aporte de nutrientes) y
Etapa 3 (período total: nacimiento-semana 72).
Los datos individuales correspondientes a las
etapas 1 y 2 se ajustaron con el modelo exponencial
creciente Wt = Start exp (ki*t) 9 . La función comienza
en Start (inicio) y el valor de Wt (peso corporal en
el tiempo t) aumenta exponencialmente con una
tasa constante ki (tasa exponencial creciente: k1 -
subperíodo nacimiento-semana 5 y k2 – subperíodo
semanas 6 a 22) en función del tiempo t (semanas).
185
Los datos correspondientes al período total se
ajustaron con el modelo sigmoideo de Gompertz 8 :
Wt = A exp [-B exp (-k*t)], dónde: Wt = peso corporal
en el tiempo t, A = peso corporal asintótico (valor
de Wt cuando t → ∞), B = constante de integración,
parámetro de posición sin valor biológico, k = tasa
de maduración (velocidad de aproximación a A) y t =
edad cronológica (semanas).
Patrón dinámico del peso del huevo
Se registró diariamente y en forma individual
el peso de los huevos puestos por todas las aves entre
la madurez sexual y las 72 semanas de edad. Los datos
longitudinales peso promedio semanal del huevo (g)
versus edad de postura (semanas) se ajustaron con el
modelo exponencial asintótico de Weatherup & Foster
23
: W(t) = A –B *r^t, donde: W (t) = peso del huevo
(g), en el tiempo t, A = peso asintótico del huevo (g),
B = rango de aumento del peso del huevo (g) entre t
= 0 y A, r = tasa de aproximación del peso del huevo
al valor asintótico A y t = edad de postura (semanas).
Todos los ajustes se llevaron a cabo por regresión
no lineal y su bondad se evaluó utilizando cuatro
criterios: (a) la convergencia de las iteraciones en una
solución, (b) el valor del coeficiente de determinación
no lineal ajustado (R2), (c) la normalidad (prueba de
D’Agostino & Pearson) y (d) la aleatoriedad (test de
rachas o ciclos) de la distribución de los residuales.
A los efectos del análisis estadístico los
estimadores individuales de las tasas de crecimiento
exponencial k1 y k2y de los parámetros con
significado biológico de la función de Gompertz (A y
k) y de la función de Weatherup & Foster (A, r y B) se
consideraron nuevas variables aleatorias.
Relación de conversión en huevos en la primera
parte del ciclo de postura
Se registró el número total de huevos y el peso
individual de todos los huevos puestos por las aves
pertenecientes a los cuadrantes I y III entre las 25 y
las 36 semanas de edad.
Debido al manejo de restricción cuantitativa de
la oferta de alimento derivado de su condición de aves
pesadas, todas las gallinas recibieron y consumieron
una cantidad fija de alimento de 146 g/día. Para cada
ave se calculó la masa de huevos correspondiente al
período mencionado y la relación de conversión en
huevos (RC= alimento consumido/ masa de huevos).
Análisis estadísticos
La asociación entre los índices de cresta y
barbilla se evaluó a partir del cálculo del coeficiente
de correlación lineal producto-momento de Pearson.
La distribución de las aves en los cuatro cuadrantes
del plano cartesiano resultante de graficar en forma
186
conjunta los valores de ambos índices, se evaluó con
una prueba X2 de bondad de ajuste para una hipótesis
extrínseca a los datos (distribución uniforme). El
cumplimiento del supuesto de normalidad se puso a
prueba con el test ómnibus de D’Agostino & Pearson.
En el caso de las variables con distribución
normal, el efecto del cuadrante de pertenencia sobre el
valor promedio de cuatro de los caracteres registrados
a la madurez sexual (edad, peso corporal, peso del
primer huevo y peso de los 10 primeros huevos), de
los cuatro indicadores óseos medidos a las 30 y a las
70 semanas de edad, de los estimadores con valor
biológico de las funciones exponencial creciente,
Gompertz y Weatherup & Foster y de la relación de
conversión y dos de sus variables asociadas (peso del
huevo y masa de huevos) se evaluó con una prueba t
de Student para datos independientes.
Ante el rechazo de la hipótesis de normalidad,
el efecto del cuadrante de pertenencia sobre el valor
mediano del número de días requeridos para poner los
10 primeros huevos, el coeficiente de variación del
peso de los mismos y el número de huevos puestos
entre las 26 y 35 semanas de edad se evaluó con la
prueba U de Mann-Whitney para datos independientes.
En todas las comparaciones se utilizaron
hipótesis alternativas unilaterales consistentes con las
hipótesis biológicas que plantean direccionalidad en
el valor promedio o mediano de los indicadores en las
aves con mayor o menor desarrollo de los ornamentos
sexuales 23 .
1200
1100
1000
Índice de barbilla (mm2)
900
800
700
600
500
400
300
500 750 1000
Figura 1. Distribución de las aves en el plano cartesiano definido por la representación conjunta de los
índices de cresta y de barbilla en una población de gallinas Campero Casilda.
Romera, B.M. et al.: Ornamentos de gallinas. Rev. Vet. 33: 2,183-191, 2022
RESULTADOS
Se observó una asociación positiva (r = 0,507)
y significativa (p < 0,0001) entre ambos índices
(Figura 1).
En consonancia con dicha asociación, la
distribución de las aves no fue homogénea en los cuatro
cuadrantes (X2 = 19,8; p < 0,001), sino que se observó
un predominio de las mismas en los cuadrantes I y III
que asocian a ambos índices en el mismo sentido que
el signo de la correlación: Cuadrante I (CI > IC > IB)
n = 32, 33,0 %; Cuadrante II (CII < IC > IB) n = 11,
11,3 %; Cuadrante III (CIII < IC < IB) n = 38, 39,2%;
Cuadrante IV (CIV > IC < IB) n = 16, 16,5 %.
Las aves ubicadas en los cuadrantes I y III,
mostraron diferencias significativas en ambos índices
(media aritmética ± error estándar): IC – CI: 2167
± 72,4 mm2; CIII: 1401 ± 36,3 mm2, t = 9,915; p<
0,0001; IB - CI: 840 ± 15,3 mm2; CIII 586 ± 12,5
mm2, t = 12,97 p < 0,0001.
Caracteres productivos a la madurez sexual
La Tabla 1 resume la información
correspondiente a los caracteres evaluados al inicio
del ciclo productivo. Se constataron diferencias
significativas para la edad a la puesta del primer
huevo y el peso promedio de los 10 primeros huevos.
Cuadrante I
Cuadrante II
Cuadrante III
Cuadrante IV
1250 1500 1750 2000 2250 2500 2750 3000 3250 3500
Índice de cresta (mm2)
Romera, B.M. et al.: Ornamentos de gallinas. Rev. Vet. 33: 2, 183-191, 2022 187

Tabla 1. Caracteres productivos a la madurez sexual de gallinas Campero Casilda discriminadas en forma
conjunta por los valores de los índices de cresta y barbilla calculados a las 30 semanas de edad.

carácter productivo a la cuadrante contraste

madurez sexual I (n = 32) III (n = 38) estadístico probabilidad
1
edad (días) 180,8± 2,00 189,5 ± 1,98 t= 3,042 0,003
1
peso corporal (g) 2727 ± 60,0 2799 ± 41,3 t= 1,016 0,313
1
peso 1° huevo (g) 50,4 ± 1,42 52,1 ± 1,11 t= 0,958 0,342
1
peso 10 1° huevos (g) 52,0 ± 0,68 55,0 ± 0,70 t= 3,003 0,004
2
N° días 10 1° huevos 15 (13 - 17) 14 (12 - 15) U= 472,5 0,078
2
CV peso 10 huevos (%) 6,5 (5,0-8,1) 6,6 (5,2-8,0) U = 603 0,812

CI: Cuadrante I (valores de los índices de cresta Indicadores de desarrollo óseo

y barbilla mayores al promedio del lote). CIII:
Cuadrante III
(valores de los índices de cresta y barbilla menores
al promedio del lote). 1 Los valores corresponden a
la media aritmética ± error estándar. 2 Los valores
corresponden a la mediana (rango inter-cuartílico).
Las aves con mayor desarrollo de los
ornamentos sexuales (CI) fueron más precoces y
comenzaron la etapa productiva con huevos de menor
peso, pero con similar regularidad y uniformidad que
aquellas con menor desarrollo de los mismos (C III).
Las aves ubicadas en el Cuadrante I presentaron
mayores valores de los cuatro indicadores óseos en
las dos edades de registro (Tabla 2).
Dichas diferencias fueron estadísticamente
significativas para la longitud del tarso en ambas
edades y para el diámetro del tarso a las 30 semanas
y marginalmente significativas para la longitud del
muslo (fémur) en las dos edades de registro y para la
longitud de la tibia a las 71 semanas de edad.

Tabla 2. Indicadores de desarrollo óseo registrados en dos edades del ciclo productivo de gallinas Campero
Casilda discriminadas en forma conjunta por los valores de los índices de cresta y barbilla calculados a las 30
semanas de edad.

semana 30 contraste semana 71 contraste

CI C III CI C III
t p t p
n = 32 n = 39 n = 28 n = 38

Lonmus 102,3 100,5 108,3 106,6

1,490 0,071 1,366 0,088
(mm) ± 0,81 ± 0,85 ± 0,86 ± 0,89

Lontar 83,8 81,3 95,5 93,6

1,994 0,025 1,873 0,033
(mm) ± 0,90 ± 0,90 ± 0,92 ± 0,52

11,8 11,5 12,4 12,2

Diatar (mm) 2,041 0,023 0,945 1 0,175
± 0,14 ± 0,09 ± 0,16 ± 0,09

Lontib 134,2 132,8 139,2 136,8

0,967 0,169 1,526 0,066
(mm) ± 1,00 ± 1,09 ± 1,16 ± 1,04

C I: Cuadrante I (valores de los índices de cresta y barbilla mayores al promedio del lote). C III: Cuadrante III
(valo-res de los índices de cresta y barbilla menores al promedio del lote). Todos los valores corresponden a la
media aritmética ± error estándar. 1Con corrección de Welch por hetero-cedasticidad.
188 Romera, B.M. et al.: Ornamentos de gallinas. Rev. Vet. 33: 2,183-191, 2022

Patrón dinámico de peso corporal tasa de crecimiento exponencial correspondiente a la

La Tabla 3 presenta los valores de los etapa comprendida entre la sexta y la vigésima semana.
estimadores de los parámetros con significado Las gallinas con mayor desarrollo de los
biológico de las funciones utilizadas para el ajuste de ornamentos sexuales (CI) presentaron mayor tasa
los datos peso corporal - edad cronológica, en las tres de crecimiento previo al inicio de la actividad
etapas del ciclo. Los patrones dinámicos resultantes reproductiva que aquellas pertenecientes al CIII.
se muestran gráficamente en la porción izquierda de Tampoco se observaron diferencias
la Figura 2. significativas entre los valores promedio de los
No se observaron diferencias significativas en estimadores de la función de Gompertz que definen
la tasa de crecimiento exponencial inicial entre las la forma de la curva de crecimiento correspondiente
aves ubicadas en uno y otro cuadrante, pero sí en la al ciclo total.
Tabla 3. Tasas de crecimiento exponencial pre-postura y estimadores de la función sigmoidea de Gompertz de
gallinas Campero Casilda discriminadas en forma conjunta por los valores de los índices de cresta y barbilla
calculados a las 30 semanas de edad.

cuadrante contraste
variable
I (n = 32) III (n = 38) estadístico. probabilidad.

k1 (0-5 semanas) 0,439 ± 0,0019 0,441 ± 0,0022 t = 0,640 0,524

k2 (6-20 semanas) 0,0596 ± 0,00124 0,0542 ± 0,00104 t = 3,344 0,001

A (g) 3428 ± 101,7 3481 ± 105,0 t = 0,649 0,518

k (g-1) 0,085 ± 0,0028 0,081 ± 0,0022 t = 0,043 0,966

C I: Cuadrante I (valores de los índices de cresta y barbilla mayores al promedio del lote). CIII: Cuadrante III
(valores de los índices de cresta y barbilla menores al promedio del lote). Todos los valores corresponden a la
media aritmética ± error estándar. k1 y k2 tasas de crecimiento exponencial. A: peso corporal asintótico
(función de Gompertz). k tasa de maduración (función de Gompertz).

Patrón dinámico del peso del huevo

En la Tabla 4 se resumen los valores de los
estimadores con significado biológico de la función
de Weatherp & Foster. El comportamiento dinámico
del carácter se describe gráficamente en la porción
derecha de la Figura 2.
Las aves pertenecientes al Cuadrante I,
con mayor desarrollo de los ornamentos sexuales
presentaron menor peso asintótico del huevo, menor
tasa de maduración para el carácter y menor peso
teórico del primer huevo, sin diferir significativamente
de aquellas ubicadas en el Cuadrante III en el rango
de aumento del peso del huevo a lo largo del ciclo de
producción.

Tabla 4. Estimadores de la función exponencial asintótica de Weatherup & Foster de gallinas Campero Casilda
discriminadas en forma conjunta por los valores de los índices de cresta y barbilla calculados a las 30 semanas
de edad.

cuadrante contraste
variable
I (n = 32) III (n = 38) estadístico probabilidad
A (g) 69,8 ± 1,11 75,9 ± 1,60 t = 2,985 0,004

r (g-1) 0,915 ± 0,0121 0,945 ± 0,0042 t = 2,462 0,016

B (g) 20,9 ± 0,88 22,3 ± 1,26 t = 0,835 0,407

A-B (g) 48,9 ± 0,98 53,6 ± 0,70 t = 4,040 0,0001

I: cuadrante I (valores de los índices de cresta y barbilla mayores al promedio del lote). III: cuadrante III (valores de los
índices de cresta y barbilla menores al promedio del lote). Todos los valores corresponden a la media aritmética ± error
estándar. A: peso asintótico del huevo. r: tasa de maduración para peso del huevo. B: rango de peso del huevo. (A–B):
peso teórico del primer huevo.
Romera, B.M. et al.: Ornamentos de gallinas. Rev. Vet. 33: 2, 183-191, 2022 189

4000 75

3500

Peso promedio del huevo (g)

70
Peso corporal teórico (g)

3000
65
2500

2000 60

1500
55
1000
Cuadrante I 50 Cuadrante I
500
Cuadrante III Cuadrante III
0 45
0 8 16 24 32 40 48 56 64 72 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50
Edad cronológica (semanas) Edad de postura (semanas)

Figura 2. Patrones dinámicos de aumento de peso corporal (izquierda) y aumento de peso del huevo (derecha)
de gallinas Campero Casilda discriminadas por el tamaño de sus ornamentos sexuales.

Relación de conversión en huevos en la primera un mayor número de huevos los que, en promedio,
parte del ciclo de postura presentaron menor peso. La combinación de ambos
Los valores de relación de conversión de indicadores se tradujo en una diferencia marginalmente
alimento en huevos y las variables que la determinan significativa en la masa de huevos, favorable a las
(número de huevos x peso promedio del huevo = aves ubicadas en dicho cuadrante. Las aves de una y
masa de huevos) se presentan en la Tabla 5. otra categoría no se diferenciaron significativamente
Las aves pertenecientes al CI, con mayor en la relación de conversión.
desarrollo de los ornamentos sexuales, pusieron

Tabla 5. Número de huevos, peso promedio del huevo, masa de huevos y relación de conversión en huevos de
gallinas Campero Casilda discriminadas en forma conjunta por los valores de los índices de cresta y barbilla
calculados a las 30 semanas de edad.

cuadrante contraste
variable
I (n = 32) III (n = 38) estadístico probabilidad
número total de huevos
1
63 (54 - 67) 55 (48 - 61) U = 386,5 0,006
peso del huevo (g)
2
56,9 ± 0,60 59,2 ± 0,52 t = 2,944 0,004
masa de huevos (g)
2
3356±101,7 3089±105,0 t = 1,805 0,076
relación de conversión
2
3,68±0,161 3,69 ± 0,178 t = 0,043 0,966

I: Cuadrante I (valores de los índices de cresta y barbilla mayores al promedio del lote). III: Cuadrante III (valores de los
índices de cresta y barbilla menores al promedio del lote). 1Los valores corresponden a la mediana (rango intercuartílico).
2
Los valores corresponden a la media aritmética ± error estándar.

DISCUSIÓN disminuyen la edad de la madurez sexual 25 y que las

aves con crestas más grandes comienzan antes su
El aumento del tamaño de los ornamentos postura 5 .
sexuales de gallos y gallinas es un indicador de la En coincidencia con esta afirmación, las aves
proximidad de la madurez sexual 17 . A medida que las Campero Casilda con mayores valores de los índices
pollas avanzan hacia el inicio de la puesta, su cresta de cresta y barbilla fueron más precoces y comenzaron
comienza a agrandarse y, simultáneamente, aumentan la postura con nueve días de anticipación respecto de
los niveles plasmáticos de estrógeno 3, 14 . aquellas con menor desarrollo de los mismos.
En la gallina se ha demostrado que ciertos Ese adelanto en la madurez sexual no estuvo
alelos que aumentan el peso de la cresta también acompañado de diferencias en el peso corporal pero
190
se reflejó en un menor peso de los primeros huevos
sin afectar ni la regularidad ni la uniformidad del
inicio de la postura.
Las gallinas con crestas más grandes depositan
más calcio en la diáfisis de los huesos, lo que evidencia
la asociación positiva del tamaño de los ornamentos
sexuales con la asignación ósea 13 .
Debido a ello dichos ornamentos, en particular la
cresta por su facilidad de medición, presentan potencial
como indicadores de la propensión a la osteoporosis,
un carácter de dificultosa evaluación que se manifiesta
más tardíamente en la vida de las gallinas 4 .
La evidencia disponible acerca de la mayor
inversión esquelética por parte de las gallinas con
mayor desarrollo de los ornamentos sexuales, tuvo
su correlato en el comportamiento de los cuatro
indicadores utilizados para operacionalizar la variable
desarrollo óseo. Dicha relación se hizo evidente tanto
en el inicio del ciclo productivo como al final del
mismo.
En las gallinas, el tamaño de la cresta se
correlaciona también con la fecundidad y la calidad
de los huevos. Las ponedoras con crestas grandes
producen más huevos, lo que está potencialmente
regulado por hormonas 25 y muestran mayor facilidad
en la movilización de calcio hacia la cáscara del huevo.
Si bien en este trabajo no se evaluó la calidad
de la cáscara, sí se observó que aquellas gallinas
con mayor desarrollo de los ornamentos sexuales
pusieron mayor número de huevos al inicio del ciclo
productivo.
Dada la asociación negativa entre el número de
huevos puestos y el tamaño de los mismos, evaluado a
través del registro del peso 7, 10 , las aves de ese grupo
pusieron en promedio huevos más livianos pese a lo
cual la tendencia en la masa de huevos producida fue
favorable a las gallinas con mayores índices de cresta
y barbilla, sin diferencias significativas en la relación
de conversión.
El menor peso de los huevos puestos por las
gallinas con mayor desarrollo de cresta y barbillas,
se hizo evidente al evaluar el patrón dinámico de
este carácter productivo a lo largo de todo el ciclo.
Pese a la asociación también de signo negativo entre
crecimiento (peso corporal) y reproducción (postura)
descrita en gallinas 1, 6 no se observaron diferencias
en el patrón de crecimiento global de las gallinas con
diferente tamaño de los ornamentos sexuales.
Este resultado se explicaría porque las
correlaciones peso corporal-peso del huevo y peso
del huevo-número de huevos, no son perfectas y ya
sea que se deban a ligamiento factorial o a efectos
pleiotrópicos, existe en las poblaciones variancia para
cada uno de dichos caracteres independiente de la
variación en los caracteres restantes.
Romera, B.M. et al.: Ornamentos de gallinas. Rev. Vet. 33: 2,183-191, 2022
CONCLUSIÓN
Se ha postulado que dado los valores entre
moderados y altos de la heredabilidad del tamaño
de la cresta 22 , la facilidad de su acceso y medición,
así como las asociaciones con caracteres de interés
reproductivo y productivo, sería apropiado considerar
a este ornamento como criterio en procesos de
selección indirecta 21 .
Campero Casilda es un cruzamiento de tres
vías a ser utilizado como población base para la
producción de una población sintética de doble
propósito.
En el marco de una estrategia de selección por
niveles independientes de rechazo, la combinación
del tamaño de los ornamentos sexuales se presenta
como una alternativa para la elección temprana de los
reproductores en las sucesivas generaciones hasta el
momento de su estabilización.
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192 Stempler A. et al.: S. uberis en mastitis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 195-201, 2022

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 192-201, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Streptococcus uberis y su importancia

como agente causal de la mastitis bovina

Stempler, A.1,2; Muñoz, A.J.1,2; Lucas, M.F.1

1
Fac. Cs. Agr. y Vet. Univ. Salvador, Pilar, Prov. Buenos Aires, Argentina.
2
Fac. Cs. Vet. Univ. Buenos Aires, Argentina.
E-mail: mariana.lucas@usal.edu.ar

Resumen
Stempler, A.; Muñoz, A.J.; Lucas, M.F.: Streptococcus uberis y su importancia como agente
causal de la mastitis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 192-201, 2022. A nivel nacional e internacional, la
prevalencia relativa de mastitis causada por Streptococcus uberis fue aumentando a lo largo del
tiempo. S. uberis ha sido descripto como agente causal de mastitis bovina de origen ambiental,
aunque se lo considera potencialmente contagioso. Los términos “cepas bien adaptadas” o “cepas
poco adaptadas” al hospedador son utilizados para referirse a cepas contagiosas o ambientales,
respectivamente. La incorporación de técnicas moleculares ha permitido caracterizar distintos
perfiles genéticos de S. uberis como factores de virulencia asociados a su patogenicidad y en ese
contexto, los genes SUAM y pauA demostraron un alto grado de conservación e inmunogenicidad.
Aunque se identificaron diversos reservorios de S. uberis en el ambiente, las estrategias de
prevención de este tipo de mastitis no solo se basan en la reducción de la exposición ambiental,
sino que contemplan el riesgo de contagio durante el ordeño. En general los casos clínicos son
tratados con antimicrobianos durante el período de lactancia, mientras que las mastitis subclínicas
se combaten al momento del secado. Si bien se sabe que responden a la terapia local convencional,
se ha probado que el uso de terapia extendida durante 5 a 8 días mejora significativamente los
resultados en términos de cura bacteriológica. Existen reportes de resistencia a los antibióticos y
aunque los niveles hallados para betalactámicos, fluoroquinolonas y macrólidos son relativamente
bajos, a la fecha se ha detectado un incremento en la resistencia de S. uberis a tetraciclinas, llegando
de niveles moderados a altos.

Palabras clave: Streptococcus uberis, mastitis bovina.

Abstract
Stempler, A.; Muñoz, A.J.; Lucas, M.F.: Streptococcus uberis and its importance as a causal
agent of bovine mastitis. Rev. Vet. 32: 2, 192-201, 2022. Relative prevalence of mastitis caused
by Streptococcus uberis has been increasing over time, both nationally and internationally. S.
uberis has been described as an environmental mastitis causal, although it is considered potentially
contagious. The terms “well-adapted strains” or “poorly adapted strains” to the host are used to
refer to contagious or environmental strains, respectively. The molecular techniques incorporation
has made it possible to characterize S. uberis genetic profiles as virulence factors associated
with its pathogenicity. The SUAM and pauA genes showed a high degree of conservation and
immunogenicity. Although various reservoirs of S. uberis have been identified in the environment,
mastitis due to S. uberis must be prevented both by reducing environmental exposure and
transmission linked to milking. In general, clinical cases are treated during lactation, while
subclinical mastitis is preferably treated at drying off. It has been shown that, by using extended
therapy for 5-8 days, significantly better results are achieved in terms of bacteriological cure.

Recibido:Enero 2022. Aceptado: Abril 2022.

Stempler A. et al.: S. uberis en mastitis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 195-201, 2022
There are reports of antimicrobial resistance and although the levels found for beta-lactams,
fluoro-quinolones and macrolides are relatively low, to date an increase in the resistance of S.
uberis to tetracyclines has been detected, reaching moderate to high levels.
Key words: Streptococcus uberis, bovine mastitis.
INTRODUCCIÓN
El propósito de esta revisión es describir
las principales características de S. uberis como
agente causal de mastitis bovina y las estrategias
de prevención y control para reducir las pérdidas
económicas vinculadas a la producción láctea.
Introducción
La mastitis bovina, o inflamación de la glándula
mamaria, generalmente sucede como resultado de una
infección intramamaria (IIM) causada por bacterias,
aunque existen mastitis asociadas a otro tipo de
microorganismos e incluso mastitis asépticas.
Es la enfermedad de mayor impacto sobre la
industria lechera a nivel mundial, debido a la reducción
en la calidad y la cantidad de la leche producida, y
a los costos vinculados al tratamiento de los casos,
incluyendo el descarte de leche asociado a la terapia,
los gastos derivados de honorarios veterinarios y
compra de medicamentos, el trabajo extra, el refugo
de vacas crónicas, la ocurrencia de enfermedades
concomitantes y las pérdidas por disminución en la
tasa de concepción 2, 19, 69.
Un estudio llevado a cabo en Argentina (Cuenca
Central de Córdoba) estimó que las pérdidas de las
mastitis en promedio representaron alrededor de un
16,2% de los ingresos brutos del tambo en un día, con
un 25% de tambos cuyo valor fue menor al 14% y
otro 25% superior al 20,9% 69.
La extensión de la pérdida ocasionada por
un caso de mastitis depende del agente causal, el
momento en el cual se produce la IIM y el tipo de
mastitis (clínica o subclínica). A partir de un estudio
multiparamétrico, se estimó que el costo promedio de
un caso de mastitis clínica causado por Streptococcus
spp. fue UDS 157 11.
En los últimos años, especialmente en países
con industrias lecheras más desarrolladas, la
prevalencia de mastitis por agentes contagiosos
ha disminuido considerablemente, aumentando la
incidencia relativa de la mastitis ambiental 22, 36, 65
. Este cambio se relaciona con la evolución de los
sistemas de producción hacia un modelo con mayor
intensificación y la consolidación del “plan de los
5 puntos para el control de la mastitis bovina” 38, 44
. Este mismo patrón se observa en Argentina, donde
193
los últimos reportes muestran un incremento en la
frecuencia de aislamiento de S. uberis a partir de
muestras de mastitis clínicas de distintas cuencas
lecheras de la Argentina, en detrimento de S. aureus o
Streptococcus agalactiae 9 .
A partir de un estudio internacional, que incluyó
9 países de la Unión Europea durante el período
2009-2012, se reportó una prevalencia de S uberis
del 20% 14 . Las publicaciones norteamericanas en
los últimos 15 años han reportado una frecuencia de
distribución promedio de 20% (rango de 13 a 32)
para estreptococos ambientales aislados de los casos
clínicos, siendo la segunda causa más frecuente de
mastitis después de coliformes (23%) 27 .
Paralelamente, a nivel nacional, los estudios de
prevalencia de microorganismos aislados a partir de
muestras de mastitis clínicas provenientes de distintas
cuencas lecheras entre el año 2007 y 2015, muestran
que la frecuencia de aislamiento de estreptococos
ambientales ha aumentado, llegando a un 44% de
S. uberis sobre el total de muestras con aislamientos
positivos 9 .
S. uberis se caracteriza por su comportamiento
invasivo, asociado a IIM recurrentes, con buena
respuesta terapéutica 21, 35 . Sin embargo, existe una
preocupación creciente acerca del origen de las
IIM prolongadas en el rodeo, sobre su condición
de persistencia o re-infección y sobre el rol de la
resistencia a los antimicrobianos (RAM) en estos
casos.
Fuentes de infección: contagioso/ambiental
Con referencia a la mastitis bovina, los términos
“cepas bien adaptadas” o “cepas poco adaptadas”
al hospedador son utilizados para referirse a cepas
contagiosas o ambientales, respectivamente.
S. uberis ha sido descrito como agente causal
de mastitis bovina de origen ambiental, aunque
se lo considera potencialmente contagioso 51, 72 .
Es omnipresente en el entorno de las vacas, con
capacidad de sobrevivir en medios diversos, como
el suelo, los forrajes, las heces y la piel de las vacas
7, 13
. En consecuencia, las glándulas mamarias están
expuestas continuamente a este patógeno, pero la
mayor incidencia de nuevas IIM está vinculada al
período de vaca seca y pre-parto.
Uno de los pilares sobre los cuales se basa la
teoría de su comportamiento contagioso es el hecho
de que las medidas de control aplicadas para evitar la
194
transmisión de IIMs entre cuartos mamarios y/o vacas
han reducido la incidencia de mastitis por S. uberis 74 .
No obstante, aunque existen reportes sobre la
eficacia de selladores post ordeño en el control de la
mastitis por S. uberis, el uso de desinfectantes pre-
ordeño, aplicados mayormente a combatir la mastitis
ambiental, también resultó ser una medida eficaz 40, 42 .
Es probable que, en algunos rebaños, la
transmisión a través de la máquina de ordeño juegue
un rol importante en la dinámica de las IIMs por
S. uberis, lo cual podría estar asociado con cepas
específicas 73. Incluso, hay estudios epidemiológicos
en los cuales los parámetros que evalúan la transmisión
de S. uberis fueron superiores a los de Streptococcus
agalactiae 28 .
La incorporación de las técnicas moleculares
y su aporte a la epidemiología de las enfermedades
infecciosas ha permitido caracterizar distintos perfiles
genéticos de S. uberis aislados de vacas con mastitis
en diversos rebaños lecheros a nivel mundial. La
presencia de IIMs en vacas de un mismo rebaño con la
misma cepa, o cepas estrechamente relacionadas de S.
uberis, sería resultado de una transmisión por contagio
74
. Mientras que un alto grado de heterogeneidad entre
dichas cepas indicaría que la fuente de infección es
ambiental 51, 71 .
Son de especial interés los casos en los cuales
las vacas sufren una infección inicial en un cuarto
mamario y durante la evolución de dicho caso surge
un nuevo episodio en otro/s cuarto/s. Si varios cuartos
de una misma vaca están infectados, las infecciones
gene-ralmente son causadas por la misma cepa,
sugiriendo un comportamiento contagioso 51, 73 .
La secuenciación completa del genoma
bacteriano permitió identificar factores de virulencia
en distintos aislamientos que podrían explicar
parcialmente el comportamiento de S. uberis 68 . Se
hallaron al menos dos genes (lacA, WP_000215993.1
y lacB, WP_000686149.1) asociados al metabolismo
catabólico de la lactosa, principal carbohidrato
presente en la secreción láctea, que explicarían la
adaptación de S. uberis a los tejidos mamarios 68 .
A través de un ensayo de infección experimental,
algunos lograron reproducir en vacas sanas, IIMs con
las mismas características observadas en las vacas
a partir de las cuales se habían aislado las cepas 61
. Esto incluyó por un lado a una cepa adaptada con
antecedentes de mastitis subclínica persistente y
de larga duración, y por el otro lado a una cepa no
adaptada aislada de vaquillonas periparto antes de su
primer ordeño y con una infección transitoria de corta
duración.
Los hallazgos de cepas con alta variabilidad
genética en muestras de leche bovina son consistentes
con la hipótesis de que el medio ambiente alberga
Stempler A. et al.: S. uberis en mastitis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 195-201, 2022
una gran variedad de cepas de S. uberis y actúa como
fuente de infección 29 . Sin embargo, la evidencia de
transmisión directa, la persistencia de la infección
y el predominio de cepas particulares en algunos
rebaños indican que las infecciones por S. uberis son
epidemiológicamente complejas.
Patogénesis de la mastitis causada por Streptococcus
uberis
S. uberis ingresa a la glándula mamaria a través
del canal del pezón. A partir de allí las bacterias se
diseminan rápidamente en el interior de la glándula
mamaria y aparecen en la luz de los conductos y
los alvéolos, pero también intracelularmente en
macrófagos y neutrófilos 46, 62 .
La respuesta clínica se caracteriza por una
inflamación progresiva detectable a partir de las 4
horas post inoculación. La respuesta máxima, basada
en un score clínico y evaluación de temperatura rectal,
se da a las 11 horas post inoculación, momento en el
cual se observan también cambios en la leche, la cual
aparece como una secreción serosa y amarilla 46 .
Sin embargo, si bien las IIMs causadas por S.
uberis pueden manifestarse clínicamente 49, 67 , también
se pueden presentar como infecciones subclínicas 5, 59
y varían ampliamente en cuanto a la duración, desde
episodios transitorios a mastitis recurrentes y crónicas
con eficacias terapéuticas muy diversas 73, 74 .
La respuesta inmune innata se da principalmente
por la infiltración de los neutrófilos 62 que se manifiesta
como un incremento en el recuento de células
somáticas (RCS). El aumento del RCS comienza a
las 7 horas post inoculación y responde al incremento
de las principales proteínas de fase aguda (amiloide
sérico A y haptoglobina) durante las primeras 6 horas
de la infección 46 .
El amiloide sérico A es el principal biomarcador
para la detección de mastitis aguda por S. uberis,
detectándose en muestras lácteas y séricas a las 6 y
a las 11 horas post infección, respectivamente. En
forma paralela al aumento del RCS, se observa una
reducción masiva del número total de monocitos
y neutrófilos en sangre, que comienza 5 horas post
inoculación y alcanza su mínimo en 4 horas 46 .
A nivel tisular, S. uberis invade la glándula y es
factible aislar bacterias a partir del cultivo de muestras
de parénquima. Adicionalmente se demostró que, a
medida que la glándula es invadida por leucocitos, el
número de bacterias en secreción disminuye, aunque
se desconoce si dicha disminución se produce como
consecuencia de la eliminación de las bacterias por
el sistema inmune o por la dispersión de estas en la
secreción
Macroscópicamente se pueden observar
lesiones en la ubre a partir de las 4 horas post
Stempler A. et al.: S. uberis en mastitis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 195-201, 2022
infección, con presencia de edema subcutáneo,
líquido amarillento y edema intersticial. Asimismo,
los linfonódulos mamarios y los inguinales profundos
se ven agrandados hasta 5 veces su tamaño normal 46 .
Los hallazgos histopatológicos característicos
muestran un aumento de neutrófilos en tejido
conectivo intralobular, conductos galactóforos y
acinos secretores. Pasadas 8 horas de la infección
también se observa edema tisular, presencia de fibrina
en conductos galactóforos y necrosis focal del epitelio
mamario, tanto en conductos como a nivel alveolar.
Esto puede generar oclusión parcial o completa
de los conductos, provocando retención de la secreción
láctea y limitando el ingreso de los antimicrobianos
que usualmente se aplican por la vía intra-mamaria.
No obstante, las lesiones son locales y no se han
hallado lesiones en tejidos extramamarios 46 .
Respecto a la duración de las IIMs, se ha
propuesto un período de 30 días como el de mayor
duración para las mastitis causadas por S. uberis 55, 65,
73
. Sin embargo, hay reportes de IIMs que alcanzaron
los 370 días de duración. Algunos mencionan que
las IIMs que comienzan como subclínicas son
significativamente más largas que las que comienzan
en forma clínica 73 .
La menor duración podría deberse al diagnóstico
y tratamiento más temprano de las mastitis clínicas
por parte de los tamberos u ordeñadores, o a
una mayor respuesta inmune que resulte en una
eliminación más rápida 73 . Sobre esto último, se
ha demostrado de manera experimental que hay
respuestas inmunológicas diferentes en vacas con
mastitis clínica y subclínica por S. uberis y que las
mastitis clínicas inducen una respuesta inmune pro-
inflamatoria significativa en la glándula mamaria 61 .
Una preocupación creciente es el conocer si
las IIMs prolongadas, y causadas por S. uberis, son
debidas a infecciones persistentes o reinfecciones. En
esta línea, hace tiempo se sabe que S. uberis es capaz
de producir infecciones crónicas 41, 70 y se ha sugerido
que tales IIMs juegan un papel epidemiológico
importante a través de la transmisión durante el
ordeño.
En los últimos 20 años los factores de virulencia
vinculados a la capacidad de colonización de la
glándula mamaria, como el activador de plasminógeno
A (pauA) y la molécula de adhesión de S. uberis
(SUAM), han tomado gran relevancia en parte debido
a su poder como inmunógenos 47 .
PauA se ha relacionado con la colonización
temprana de la glándula mamaria y es una proteasa
capaz de activar la plasmina y de degradar proteínas,
generando péptidos y aminoácidos disponibles
para ser utilizados por las bacterias como fuente de
nitrógeno 29. SUAM es una molécula relacionada
195
con la adherencia, la internalización a través de la
lactoferrina y la permanencia del S. uberis en células
del epitelio mamario 1 .
Un estudio llevado a cabo en Argentina sobre
aislamientos S. uberis 34 permitió demostrar que la
prevalencia del gen SUAM fue 79.41 % 16 . Previamente
se habían analizado 137 aislamientos S. uberis
obtenidos a partir de muestras de mastitis clínicas y
subclínicas, y las prevalencias de los genes SUAM
y pauA fueron 97,8% y 94,9%, respectivamente 47
. La elevada prevalencia encontrada a pesar de la
diversidad genética permitió sugerir que dichos
factores podrían ser utilizados como componentes en
el desarrollo de vacunas.
Respecto al comportamiento clínico o subclínico,
al momento no se halló asociación con la presencia de
SUAM y/o pauA. Incluso se ha reportado la presencia
de SUAM en 12 aislamientos relacionados tanto a
mastitis clínicas como subclínicas, y también en el
genoma de cepas de referencia 0140 J, una típica
cepa virulenta del Reino Unido y la cepa EF20,
representativa de cepa avirulenta 23 .
Existen reportes que indican que la edad de las
vacas no afecta significativamente a la incidencia de
IIM por S. uberis, a pesar de que se había encontrado
mayor incidencia en animales menores a dos años 35
. Incluso hay estudios posteriores que demostraron
mayor frecuencia de aislamiento de S. uberis en vacas
multíparas que en primíparas 31 . Por lo tanto, aún no
está del todo claro el impacto del factor edad en la
incidencia de este microorganismo.
Otros factores vinculados a las infecciones
causadas por S. uberis son el hábitat donde se
encuentran las vacas, siendo menor la frecuencia de
aislamientos cuando las mismas se encuentran bajo
un sistema pastoril en comparación con las épocas de
encierro, especialmente en los sistemas parcialmente
estabulados. Incluso se demostró que la frecuencia
de IIM persistentes, causadas por S. uberis, es mayor
hacia el final de la temporada de encierro en los
galpones 31 .
Identificación de Streptococcus uberis
La identificación fenotípica de los Streptococcus
spp causantes de mastitis bovina tiene como principal
desventaja que un porcentaje relativamente bajo de
aislamientos de S uberis podrían no ser detectados.
Estudios realizados sobre cepas ATCC de S. uberis
han demostrado que existen algunas diferencias
en los resultados obtenidos a través de las pruebas
bioquímicas y la fermentación de azúcares.
Basándose en ello, algunos proponen utilizar
como mínimo las siguientes pruebas: reacción de
Camp, hidrólisis de arginina, esculina e hipurato
de sodio, crecimiento en 6,5% de cloruro de sodio,
196
inulina, manitol, rafinosa, salicina y sorbitol 39 . El
esquema propuesto dio como resultado un número
relativamente bajo de identificaciones erróneas y
podría identificar tanto a las cepas de S. uberis típicas
como atípicas 39 .
Existen algunas especies de Streptococcus sp.
y de Enterococcus sp. causales de mastitis bovina y
fenotípicamente similares al S. uberis, que pueden
afectar al correcto diagnóstico. Si bien S. uberis
posee la habilidad de hidrolizar la esculina en un
alto porcentaje, hay autores que la definen como
esculina positiva o variable 8, 26 coincidiendo con otros
agentes como S. dysgalactiae, S. bovis, S. equinus y
E. faecalis, por lo que pueden confundirse durante la
identificación de S. uberis 20, 33 .
Algunos proponen una clasificación
convencional por 4 pruebas bioquímicas (hidrólisis
de hipurato y de esculina, crecimiento en bilis y en
cloruro de sodio al 6,5%) seguidas de la detección
del gen pauA 15 . Este gen también fue utilizado por
quienes demostraron que a partir de su detección
se identificó al 100% de los aislamientos sobre un
total de 40 S. uberis evaluados 57 . Posteriormente, se
comprobó que el mismo gen se encontraba en el 95%
de los 137 S. uberis evaluados 47 .
La técnica de espectrometría de masas
(Maldi-Tof) es utilizada como prueba de oro para
la identificación específica. Debido a los elevados
costos de la misma, son muy pocos los laboratorios
de diagnóstico que tienen esta tecnología disponible
a nivel nacional.
Las técnicas de biología molecular, además de
ser muy útiles para la identificación, son aplicadas
al estudio epidemiológico de los aislamientos de S.
uberis para discernir si existe o no un origen clonal
en los casos estudiados y evaluar la genética de la
población bacteriana asociada a la mastitis bovina en
un lugar determinado.
La caracterización genotípica puede ser realizada
por los siguientes métodos: VNTR (variable number
of tandem repeats o número variable de repeticiones
en tándem o mini satélites), MLVA (Multiple Loci
VNTR Analysis o Análisis multi-locus de número
variable de repeticiones en tándem), MLST (Multi
Locus Sequencing typing o Tipificación secuencial
multilocus), PFGE (Pulsed Field Gel Electrophoresis
o Electroforesis en gel de campo pulsado) y RAPD-
PCR (Random Amplified Polymorphic DNA-PCR o
amplificación aleatoria de ADN polimórfico).
La caracterización genotípica por PFGE resulta
una técnica confiable para la resolución de relaciones
clonales 24, 70, 73 . Algunos identificaron 18 patrones de
PFGE a partir de 32 cepas de S. uberis aislados de
195 vacas con mastitis subclínicas de 18 tambos de
Argentina 39 . Hasta el momento por la técnica del MLST
Stempler A. et al.: S. uberis en mastitis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 195-201, 2022
se encontraron 554 perfiles alélicos diferentes para S.
uberis siendo Reino Unido, Nueva Zelanda y Italia,
los tres países de mayor frecuencia de aislamientos
analizados en la base de datos internacional https://
pubmlst.org/bigsdb?db=pubmlst_suberis_isolates 25 .
Estrategias de prevención y control
Las medidas de control de la mastitis bovina
tienen por objetivo reducir la duración de las
infecciones existentes y prevenir la aparición de nuevas
IIMs. Aunque se identificaron diversos reservorios de
S. uberis en el ambiente, la significancia de estos y su
asociación con la ocurrencia de mastitis en un rodeo
es poco clara.
En consecuencia, a la luz de los conocimientos
actuales, la mastitis por S. uberis debe prevenirse a
través de todas las estrategias posibles, sea que apunten
a reducir la exposición ambiental o a minimizar el
contagio 51 .
Una alternativa poco difundida es el uso de
vacunas para la prevención de la mastitis bovina. Con
respecto a S. uberis, debido a la amplia variedad de
cepas que se asocian con la enfermedad, cualquier
vacuna debe mostrar una amplia protección cruzada.
La vacuna UBAC® S. uberis (Laboratorio
Hipra, SA.Amir, Girona, España) es una vacuna a
subunidades compuesta por ácido lipoteicoico (LTA)
proveniente de componente de adhesión biofilm
(BAC) de S. uberis cepa 5616. Esta vacuna redujo
de manera significativa y en un 50% la incidencia de
casos clínicos causados por S. uberis y aunque son
necesarios más estudios en condiciones de campo
para comprobar la eficacia de la vacuna, los resultados
obtenidos fueron alentadores 12 .
Otros candidatos vacunales propuestos
como posibles inmunógenos son los factores de
virulencia como pauA y SUAM, relacionados con
la supervivencia y adherencia respectivamente de
S. uberis en el tejido mamario. Los genes de estos
factores demostraron una elevada prevalencia y una
alta similitud de secuencias con las provenientes de
diferentes áreas geográficas del mundo 47, 48 .
Uno de los pilares de cualquier programa
de control de mastitis es la terapia antibiótica,
utilizándose tanto para el tratamiento de los casos
clínicos como subclínicos. En general los casos
clínicos son tratados durante la lactancia, mientras
que las mastitis subclínicas son preferentemente
tratadas al momento del secado 10. Sin embargo, el uso
excesivo e inapropiado de fármacos antibacterianos ha
llevado a un incremento en la RAM de Streptococcus
sp afectando a la eficacia clínica y bacteriológica 37, 53 .
Los antibióticos β-lactámicos, especialmente
la penicilina y las cefalosporinas, son los que se
indican con mayor frecuencia para el tratamiento de
Stempler A. et al.: S. uberis en mastitis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 195-201, 2022
los casos clínicos 37, 58 . Por lo general las especies
del género Streptococcus son altamente sensibles,
sin embargo, en los últimos años han aparecido
reportes de subespecies con resistencia a este grupo
de antibióticos 18, 66 .
Respecto a la penicilina, los porcentajes de
sensibilidad suelen ser elevados y cercanos al 100%
50, 54
aunque hay estudios que reportaron un nivel de
resistencia de hasta el 30% 63 . También se ha reportado
una alta sensibilidad frente a oxacilina, variando entre
el 85 y 90 % 3, 4, 37, 50 . Las cefalosporinas han demostrado
un elevado nivel de actividad in vitro, con porcentajes
de sensibilidad cercanos al 100% 32, 37, 54, 63 .
En una publicación más reciente que incluye
71 aislamientos provenientes de establecimientos
ubicados en Italia, se encontraron niveles de resistencia
relativamente bajos frente a β-lactámicos. En este
trabajo un 15,5% fue resistentes a la penicilina, 4% a
la oxacilina, sólo 1 aislamiento a las cefalosporinas de
primera generación y 2 aislamientos resistentes a las
cefalosporinas de tercera generación 37 .
En consecuencia, la penicilina sigue siendo
la primera opción terapéutica y los β-lactámicos
en general son la segunda opción. Sin embargo, es
necesario mantener la vigilancia epidemiológica
sobre S. uberis y su correspondiente sensibilidad
antibiótica.
Habitualmente los productos comerciales
disponibles para la terapia de la mastitis bovina
contienen aminoglucósidos como agente secundario,
acompañando por lo general a β-lactámicos,
macrólidos o lincosamidas. El género Streptococcus
es naturalmente resistente a los aminoglucósidos y,
en consecuencia, estos no serían un tratamiento de
elección.
A partir de estudios de eficacia comparada
entre penicilina sola y penicilina combinada con
aminoglucósidos, se comprobó que no hubo
diferencias en el tratamiento de la mastitis clínica por
S. uberis 35 . Tampoco detectó diferencia significativa
al comparar el tratamiento intra-mamario de mastitis
con una combinación de lincomicina y neomicina o
penicilina y dihidroestreptomicina 34 .
En cuanto a las tetraciclinas se observó un
aumento de la resistencia a lo largo del tiempo,
posiblemente debido al extenso uso de estos
antibióticos en lechería 32 . Resultados publicados
entre 2010 y 2018 indican un nivel de resistencia del
10% al 40% 3, 4, 14, 18, 63 . Posteriormente, se halló un
nivel de resistencia a tetraciclinas del 59% 32 mientras
que otros 64 reportaron resistencias en el 80% al 95%
de los aislamientos evaluados 37, 64 .
En relación con los antibióticos macrólidos se
han reportado valores de resistencia que van desde
niveles muy bajos 37, 50 hasta un 15 o 20 % 3, 4, 14, 18, 63
197
. Este grupo de compuestos se recomienda como la
tercera línea de antibióticos para tratar infecciones
por S. uberis, incluso los aislamientos que presentan
fenotipo L, es decir resistentes a lincosamidas y
sensibles a macrólidos 17 .
Las fluoroquinolonas son compuestos frente a
los cuales el género Streptococcus presenta resistencia
nula o muy baja, alcanzando un máximo de 8% entre
los aislamientos evaluados 4, 32, 37, 54 . Sin embargo, hay
al menos dos estudios que encontraron un nivel de
resistencia superior de alrededor del 40% 3, 50 .
Además de los factores vinculados al
antimicrobiano y la resistencia, existen factores
dependientes del hospedador que han demostrado
ser determinantes de la eficacia clínica en casos
de mastitis en general. Está comprobado que la
probabilidad de cura es mayor en vacas de primera
y segunda parición mientras que a partir de la tercera
lactancia disminuye.
Sobre esta observación se postuló que el aumento
en el volumen de la ubre podría ser responsable de la
baja tasa de cura a una misma dosis de antimicrobianos
60
. Esto se relaciona con el efecto que ejerce el nivel
de producción sobre la relación farmacocinética/
farmacodinámica (PK/PD) de los antimicrobianos
luego de la aplicación intramamaria 30 .
Asimismo, a mayor número de lactancias y a
más días en leche, mayor probabilidad de cronicidad y
menor cura bacteriológica. También se ha comprobado
que la cura es mayor durante el tratamiento del primer
caso en la lactancia versus los casos posteriores 52 y
que los casos clínicos responden mejor a la terapia
cuando no han sido precedidos por manifestaciones
de mastitis subclínica, es decir recuentos de células
somáticas elevadas 6, 35, 45, 52 .
Respecto a la duración de la terapia, se ha
demostrado que mediante el uso de terapia extendida
durante 5 a 8 días en lugar de 2 días, se logran
resultados significativamente mejores en términos
de cura bacteriológica 43 . En consecuencia, para
maximizar la eficacia, la duración del tratamiento
convencional de la mastitis por S. uberis debería
extenderse de manera rutinaria 56 .
Conclusiones
La mastitis bovina tiene un fuerte impacto
económico en la industria lechera a nivel mundial,
debido a la reducción en la calidad y cantidad de leche
producida y a los costos vinculados al tratamiento de
los casos. S. uberis, el microorganismo aislado con
mayor frecuencia en vaquillonas al pre y post parto,
aunque pueden ocurrir casos en cualquier momento
de la lactancia o el secado, tanto en vacas como en
vaquillonas.
198
La identificación fenotípica del S. uberis es
compleja y se requieren técnicas de biología molecular
para confirmar su identificación. La incorporación
de estas técnicas ha permitido caracterizar distintos
perfiles genéticos demostrando cierta asociación entre
dichos perfiles y datos observacionales a campo.
La presencia de IIMs en vacas de un mismo
rebaño con la misma cepa, o cepas estrechamente
relacionadas de S. uberis, ha sido asociada a un
comportamiento contagioso, mientras que un alto
grado de heterogeneidad se ha vinculado a una fuente
de infección ambiental.
Esta característica de agente causal de origen
ambiental con comportamiento contagioso impacta
en las medidas de manejo recomendadas para su
control. En cuanto a la terapia, los estudios de RAM
indican una baja tasa de resistencia, por lo cual se
recomiendan como primeras opciones terapéuticas a
los β-lactámicos y se prioriza la terapia extendida por
sobre la convencional.
Más allá de la baja resistencia actual, dada
la relevancia del S. uberis como agente causal de
mastitis y las pérdidas económicas asociadas a esta,
es importante mantener una constante vigilancia de
la RAM. De la misma manera se justifica trabajar
en la prevención a través de las buenas prácticas de
manejo y el desarrollo de una vacuna efectiva frente
a la diversidad de cepas existentes, basada en la
comprensión profunda de los procesos humorales y
celulares, la inmunidad intramamaria y los rasgos de
virulencia propios del S. uberis.
Agradecimientos
La presente revisión bibliográfica se llevó a
cabo en el marco del proyecto PI80020200100001US
del Instituto de Investigación en Veterinaria de la
Facultad de Ciencias Agrarias y Veterinarias de la
USAL. Se agradece la colaboración de todo el equipo
de investigadores: Eugenia Bosco Borgeat, Laura
Marchetti, Laura Araujo, Nora Mestorino y Federico
Sbrocco Pérez.
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Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 202-207, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Caracterización del perfil citológico de la mucosa vaginal

durante el ciclo estral en ovejas Santa Inês

Arbues, R.1; Flores, Q.C.1; Fernández, J.A. 3; Yáñez, E.2

1
Cátedra Histología y Embriología, 2Cátedra Nutrición y Alimentación.
Fac. Cs. Vet. Univ. Nac. Nordeste, 3Cátedra de Nutrición. Fac. Cs Agr. Univ. Nac., UNNE.
Corrientes 3400.
E-mail: carofloresq@gmail.com

Resumen
Arbues, R.; Flores, Q.C.; Fernández, J.A.; Yáñez, E.: Caracterización del perfil citológico de
la mucosa vaginal durante el ciclo estral en ovejas Santa Inês. Rev. Vet. 33: 2, 202-207, 2022.
El objetivo de trabajo fue caracterizar el ciclo del epitelio vaginal de ovejas de raza Santa Inês,
mediante estudio citológico. Se tomaron muestras de la mucosa vaginal a 10 borregas sexualmente
maduras, desde el primer día de celo y por 18 días. Las muestras se colorearon con Papanicolaou
y se observaron en microscopio óptico. Se reconocieron células parabasales, intermedias
profundas, intermedias superficiales y superficiales. Las células parabasales presentaron forma
redondeada, citoplasma escaso y núcleo grande, fueron escasas. Las intermedias profundas de
bordes redondeados, citoplasma más abundante y núcleo menor. Se observaron en mayor cantidad
que las parabasales. Las intermedias superficiales fueron las más abundantes en todo el estudio
y las de mayor diámetro. Presentaron forma poligonal y núcleo más pequeño. La identificación
de dos tipos de célula intermedia, coincide con trabajos en perras, vacas y alpacas, en tanto otros
trabajos describen un solo tipo. Las células superficiales se dividieron en dos subtipos, el A, con
forma poligonal y núcleo picnótico y el B, con citoplasma más pequeño e intensamente acidófilo
y núcleo picnótico. Este último no se encontró hasta el momento en otros trabajos con ovejas. Las
modificaciones de los tipos celulares no reflejaron de manera precisa la fase del ciclo estral.

Palabras clave: citología, hormonas, razas tropicales.

Abstract
Arbues, R.; Flores, Q.C.; Fernández, J.A.; Yáñez, E.: Characterization of the citológical profile
of the vaginal mucous during the estral cycle in the Santa Inês sheep. Rev. Vet. 33: 2, 202-207,
2022. The objective of the work was to characterize the cycle of the vaginal epithelium of sheep
of the Santa Inês breed, through a cytological study. Vaginal mucosal samples were taken from 10
sexually mature ewes, from the first day of estrus and for 18 days. The samples were stained with
Papanicolaou and observed under an optical microscope. Parabasal, de epintermediate, superficial
intermediate, and superficial cells were recognized. The parabasal cells presented a rounded shape,
little cytoplasm, and a large nucleus, they were scarce. The deep intermediate ones with rounded
edges, more abundant cytoplasm, and smaller nuclei. They were observed in greater quantity than
the parabasal ones. The superficial intermediate ones were the most abundant through out the
study and the one swith the largest diameter. They presented a polygonal shape and a smaller
nucleus. The identification of two types of intermediate cells coincides with works on dogs, cows,
and alpacas, while other works describe a single type. Superficial cells were divided into two
subtypes, A, with a polygonal shape and piknotic nucleus, and B, with a smaller and intensely
acidophilic cytoplasm and pyknotic nucleus. The latter has not been found so far in other works
with sheep. Changes in cell types did not accurately reflect the phase of the estrous cycle.

Key words: cytology, hormones, tropical race.

Recibido:Diciembre 2021. Aceptado: Marzo 2022.

Arbues R et al.: Mucosa vaginal en ovejas. Rev. Vet. 33: 2, 202-207, 2022
INTRODUCCIÓN
La citología vaginal es un método de estudio
simple y económico que permite la observación de
varios tipos celulares de la mucosa vaginal 13. Su
importancia surge por la extrema sensibilidad del
epitelio vaginal a las hormonas ováricas que inducen,
a lo largo del ciclo, a un cambio de espesor de los
estratos celulares que lo componen 18, 7.
El estrógeno tiene un efecto directo sobre el
epitelio vaginal de hembras mamíferas, estimulando
el incremento en el número de camadas celulares en
la vagina, lo que moviliza glucógeno en las células
y causa cornificación de las camadas superficiales 16.
Por otra parte, la disminución de la
concentración de estrógenos provoca una gran
descamación de las camadas superficiales y el epitelio
se mantiene de esta forma hasta la regresión del CL,
cuando el desarrollo folicular nuevamente ejerce su
influencia 2.
La técnica es empleada frecuentemente en
medicina humana como parte de los planes de salud
reproductiva de la mujer. En veterinaria el estudio de
la citología vaginal se utiliza para evaluar el estado
reproductivo de las hembras y seguir de forma precisa
el progreso de las distintas etapas del ciclo estral. El
mayor uso se hace en hembras caninas para poder
estimar el momento de la ovulación 17, 9 y hacer el
manejo correspondiente del servicio.
En hembras de interés productivo,
especialmente en la vaca, la oveja y la cabra, la técnica
se empleó en momentos muy diversos del ciclo. En
algunos trabajos se realizó sincronización de celo
mientras que en otros no, la utilización de diferentes
coloraciones y tiempos de permanencia de la muestra
en los mismos también es variable 1, 7, 8, 11.
La disparidad que hay en los procedimientos
dificulta las comparaciones y esto hace que los
resultados sean menos aprovechados. Sin embargo,
hay grandes avances en la biotecnología de la
reproducción y es ahí donde la citología vaginal podría
presentarse como una herramienta para auxiliar en la
identificación del estado reproductivo, posibilitando
el control del estro para favorecer la fecundación y
permitiendo la detección temprana de la gestación,
maximizando así los resultados en los programas de
reproducción.
Es la alternativa al uso de retajos antes de colocar
los carneros o realizar la inseminación artificial. Puede
ser también utilizada para diagnosticar precozmente
patologías del tracto genital femenino 13, 20.
En ovinos existe muy poca información
sobre citología vaginal exfoliativa que describa el
comportamiento de las células epiteliales durante
el ciclo estral completo. Además, la mayoría de los
203
trabajos se realizaron en razas originarias de latitudes
altas y climas templados 16, 11.
Por este motivo, la caracterización de las
modificaciones que ocurren en el epitelio vaginal
durante el ciclo estral en ovejas Santa Inês es
importante al aportar conocimientos que ayudarán a
afianzar el uso de la técnica en pequeños rumiantes.
Bajo la hipótesis que en ovejas tropicales es
posible determinar la fase del ciclo estral mediante el
estudio de las células del epitelio vaginal, este trabajo
tuvo como objetivo caracterizar el ciclo del epitelio
vaginal de ovejas de raza Santa Inês, mediante el
estudio citológico.
MATERIAL Y MÉTODOS
Lugar de trabajo
El trabajo se desarrolló desde el 20 de
marzo hasta el 10 de abril del mismo año en el
establecimiento agropecuario Don Donato, Colonia
Mota, departamento de Monte Caseros, Corrientes.
Su localización es 30º 30´ S y 58º 02´ O, con clima
subtropical húmedo y precipitaciones anuales
promedio de 1100 mm.
Animales y manejo de la majada
Se utilizaron 10 borregas Santa Inês,
sexualmente maduras no gestantes, de 18 meses de
edad y peso promedio 36 Kg. Todas fueron mantenidas
bajo las mismas condiciones dealimentación, la
que consistió en pastizal natural y agua ad libitum.
Además, recibieron suplementación alimentaria, la
misma estuvo compuesta por maíz picado y heno de
alfalfa. El manejo para llevar acabo la suplementación
fue el siguiente, las borregas permanecían en potreros
durante todo el día y al anochecer eran llevadas a
un corral para pasar la noche. La suplementación se
administraba en comederos, cada noche al momento
de traer los animales al corral. La sanidad de las
hembras consistió en desparasitación y calendario
sanitario acorde a la edad.
El PV se determinó a todas las hembras en
estudio al iniciar el ensayo. El registro se realizó con
balanza digital. La misma constó de una plataforma
para colocar al animal y una jaula de metal adaptada
para ovinos que se colocó arriba para minimizar la
movilidad del mismo.
Se tomaron muestras de mucosa vaginal a
todas las hembras desde el día que presentaron celo
y de allí en adelante todos los días, alrededor de las
7 y 30 horas de la mañana, durante 18 días. Para la
detección de celo se introdujeron machos detectores
en la majada a los que se les colocó pintura alrededor
del prepucio para que marquen a las hembras al
saltarlas. Una vez identificada la hembra en celo se
inició la toma de muestras.
204
La técnica utilizada para el muestreo fue la
recomendada por 9. Apartando los labios vulvares de
la oveja se introdujo un hisopo estéril previamente
humedecido con solución fisiológica, en la comisura
dorsal de la vulva, hasta una profundidad de unos 5 o
6 cm. Con el hisopo ubicado allí se realizaron suaves
movimientos rotatorios por las paredes de la vagina.
Una vez obtenida la muestra, se hizo rodar
el hisopo sobre un portaobjeto debidamente
identificado. Se fijó el material en alcohol 96º por
no menos de 5 minutos y se dejó secar al aire libre.
Una vez en el laboratorio, las muestras se colorearon
con Papanicolaou y se observaron en el microscopio
óptico.
Se obtuvieron 18 muestras por oveja (una por
cada día), en total 180 extendidos. En cada uno se
contaron 100 células, clasificándolas por su morfología
vagina de borregas Santa Inês.
tipo de células n citoplasma (µm)
parabasales 189
intermedias profundas 1.793
intermedia superficial 6.318
superficial A 4.412
superficial B 1.475
La Figura 1 presenta las frecuencias promedio
de cada tipo celular a lo largo del ciclo. Las células
parabasales, presentaron forma redondeada, con
citoplasma escaso y núcleo grande (Figura 2 A y B).
Este tipo celular fue escaso en todas las fases del
ciclo, no superando el 20%.
Figura 1. Frecuencias promedio de cada tipo celular
del epitelio de la vagina a lo largo del ciclo estral en
borregas Santa Inês..
Las células intermedias profundas presentaron
bordes redondeados, citoplasma más abundante y
núcleo menor que en el estadio anterior. Se la pudo
identificar en mayor cantidad que las parabasales, sin
embargo la frecuencia promedio no superó el 25%
(Figura 2 B, C y D).
Arbues R et al.: Mucosa vaginal en ovejas. Rev. Vet. 33: 2, 202-207, 2022
en parabasales, intermedias profundas, intermedias
superficiales y superficiales. Los extendidos se
fotografiaron y las células se midieron considerando
su diámetro total y el diámetro de su núcleo. Para
esto se utilizó el programa Image Pro Plus. El análisis
estadístico consistió en el uso de tablas de frecuencia,
cálculo de promedio y desvío estándar.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En el análisis de los frotis vaginales del
presente estudio se reconocieron los siguientes
tipos celulares: parabasales, intermedias profundas,
intermedias superficiales y superficiales. Los valores
morfométricos se presentan en la Tabla 1.
Tabla 1. Diámetro promedio y desvío estándar en
µm de los diferentes tipos de células epiteliales de la
núcleo (µm)
20 (3,6) 11,9 (1,89)
25,42 (2,82) 10,75 (1,75)
43,24 (8,24) 10,2 (1,57)
38,71 (6,58) 6,53 (1,01)
24,16 (3,36) 6,24 (1,16)
Las intermedias superficiales fueron las
más abundantes en todo el periodo estudiado y
las que alcanzaron mayor diámetro de citoplasma.
Presentaron forma poligonal y núcleo más pequeño
que en el estadio anterior (Figura 2 C, E y F).
Predominaron sobre los otros tipos celulares
los dos primeros días del ciclo, con una frecuencia
promedio de 55% y descendieron hasta el día 4
cuando alcanzaron un valor promedio de 40%. A
partir de allí se mantuvieron en valores entre 35 y
45% aproximadamente hasta el final del ciclo.
La identificación de dos tipos de célula
intermedia, profundas y superficiales coincide con los
trabajos de 15 en perras, quienes las llaman profundas
y superficiales, 14 en vacas, quien las describe como
células jóvenes y viejas y 12 en alpacas, las llama
células chicas y grandes. La descripción morfológica
de estos tipos celulares por los diferentes autores
indica que, aunque se denominaron de forma distinta,
se trata de dos estadios de la célula intermedia. Por
otra parte, 8, 3, 11, 22 describen un solo tipo de célula
intermedia.
Las células superficiales se dividieron en dos
subtipos de acuerdo a su morfometría. El primero,
denominado A, presentó forma poligonal y núcleo
picnótico (Figura 3 A y C). El subtipo B, presentó
citoplasma más pequeño que el A, e intensamente
acidófilo y núcleo picnótico (Figura 3 B, C y D).
Arbues R et al.: Mucosa vaginal en ovejas. Rev. Vet. 33: 2, 202-207, 2022
Al calcular las frecuencias de los dos
subtipos juntos, en los dos primeros días del ciclo
tuvieron menor proporción promedio que las células
intermedias superficiales, con un valor de 36 % y a
partir de allí fueron incrementándose hasta superar el
50 % al finalizar el ciclo.
En el presente estudio no se observaron células
anucleadas, al igual que en los trabajos de 8 con
ovejas Santa Inês, 11 también en ovejas de pelo y 12
en alpacas. La presencia de un subtipo celular B no
se encontró hasta el momento en otros trabajos con
ovejas. Sin embargo, en la vizcacha de llanura, se
describió recientemente un tipo celular denominado
“mucoso” cuyo diámetro del citoplasma y del núcleo
coincide con aquellos de la célula superficial B,
aunque las características morfológicas y tintoriales
son diferentes 6 .
La morfología de las células superficiales B
podría deberse a la pérdida de volumen y retracción
de los filamentos de queratina, eventos que ocurren
cuando la célula epitelial sufre apoptosis, que además
le confieren al citoplasma un tinte intensamente
eosinófilo5.
Otra explicación de este hallazgo sería que las
células superficiales se fragmentan perdiendo parte de
su citoplasma, por lo que parecen ser más chicas. Sin
embargo, en el análisis de muchas células se observa
un citoplasma de bordes nítidos, bien delineados que
no parece haber sufrido fragmentación. Además,
esta segunda opción explica únicamente el menor
tamaño pero no la intensa acidofilia observada en el
citoplasma.
Las células intermedias superficiales
predominaron los dos primeros días del ensayo,
durante el estro. Las superficiales por su parte
tuvieron una proporción menor en esta fase pero se
incrementaron hacia el siguiente estro.
En ovejas Santa Inês, 8 citaron que en el
proestro y estro predominan las células superficiales.
En tanto que en el metaestro y diestro lo hacen las
basales, superando el 80% aunque las parabasales
e intermedias fueron abundantes, alcanzando una
frecuencia de 70%. Esto difiere con el presente estudio,
ya que aquí las células parabasales no superaron
el 10% y las intermedias profundas tuvieron una
frecuencia promedio máxima de 23%.
Resultados similares se observaron en ovejas
autóctonas de Asia, en las cuales las células parabasales
e intermedias no superaron el 28% en ninguna fase
del ciclo 22 . En ovejas de pelo, 11 observaron que las
células superficiales predominaron en el estro y que las
intermedias lo hicieron en el diestro, pero como éstas
no se discriminaron entre intermedias superficiales
y profundas, la comparación con los resultados del
presente trabajo se dificulta.
En algunas ovejas del presente trabajo las células
superficiales se presentaron en pequeña cantidad en
205
todas las fases del ciclo, similar a lo observado por
3
en cabras. Los mismos también observaron que,
las células intermedias fueron significativamente
superiores a los demás tipos celulares en todas las
fases del ciclo. Los autores mencionan la dificultad
en la interpretación de los resultados de la citología
vaginal en cabras.
El predominio de las células intermedias
superficiales y superficiales en el presente trabajo
coincide con el realizado por 21 en cabras, donde
lacomposición de la citología vaginal exfoliativa no
mostró cambios específicos en las hembras evaluadas,
existiendo predominio de células intermedias y
superficiales (> al 60%) durante todos los estadios del
ciclo estral.
Esto podría estar relacionado con las
características del ciclo estral de las ovejas y cabras,
en las que existen dos o tres folículos dominantes en
cada ciclo. El estradiol proveniente de estos folículos
podría explicar el predominio de estos dos tipos
celulares, tal como se sugirió en vacas 14.
Los neutrófilos se observaron en 9 de las 10
ovejas analizadas (Figura 3 C y D). En 4 animales el
momento en el que éstos fueron abundantes coincidió
con el predominio de células intermedias profundas y
superficiales. En los demás animales, los neutrófilos
fueron moderados a abundantes en diferentes días
del ciclo, y esto fue indistinto al predominio celular.
En algunos casos sucedió con abundancia de células
intermedias superficiales y en otros casos con
abundancia de superficiales.
En cuanto a la morfometría de las células
analizadas, los resultados coinciden parcialmente con
el trabajo de 15 con la excepción que en el presente
ensayo el diámetro del citoplasma de las células
intermedias superficiales fue mayor que el de las
superficiales A. En las ovejas Santa Inês de este
estudio se observó mayor diámetro de citoplasma en
las células intermedias que el observado por 11 aunque
esto puede deberse a que los autores no clasificaron a
las células intermediarias en dos tipos.
El núcleo de las células superficiales fue
de menor diámetro que aquellos de las células
superficiales descriptas por 11 . Los diámetros de
citoplasma y núcleo de todos los tipos celulares
observados en el presente trabajo fueron mayores que
los descriptos por 12 en alpacas.
Las modificaciones que sufrieron las células
del epitelio vaginal no permitieron identificar de
manera precisa la fase del ciclo estral en el que se
encontraban las hembras. Sin embargo, al considerar
las frecuencias, se pudo observar con claridad que
existieron 2 grupos de células, las superficiales
e intermedias superficiales, que predominaron
durante todo el estudio, superando siempre el 30%,
sobre aquellas que se mantuvieron debajo del 25%,
(intermedias profundas y parabasales).
206 Arbues R et al.: Mucosa vaginal en ovejas. Rev. Vet. 33: 2, 202-207, 2022

Si bien la utilidad del estudio de citología

vaginal en reproducción de animales de compañía
es indiscutible, a partir de los resultados del presente
estudio se evidencia la necesidad de considerar
las diferencias que existen en la fisiología del ciclo
estral entre hembras de especies monoestricas (perras
y gatas) y especies poliestricas (ovejas, cabras,
vacas), debido a que los resultados no siempre son
extrapolables.
Por ejemplo, en la perra,la duración del estro
tiene un promedio de 9 días, periodo en el cual
ocurren las ovulaciones de forma asincrónica. En
Figura 3. Citología Vaginal de ovejas Santa Inês.
consecuencia el metaestro se superpone con el estro,
A: Célula superficial subtipo A (flechas) y subtipo
porque los eventos fisiológicos característicos de esta
B (asterisco). B: Células superficiales subtipo B
fase ocurren mientras la perra sigue en estro. Por lo
(flechas) C y D: Se observa predominio de neutrófilos
tanto solo debe referirse al diestro como la etapa de
y diferentes tipos celulares.
influencia progestacional 19 .
Por el contrario, en la vaca y en la oveja el
CONCLUSIONES
estro dura en promedio 12 y 24 horas respectivamente
10, 4
, sumado a la existencia de ondas de desarrollo
En el análisis de la citología vaginal de ovejas
folicular en el periodo inter-estro hace que las
Santa Inês en el subtrópico argentino, fue posible
modificaciones que ocurren en la citología vaginal
reconocer cuatro tipos celulares diferentes con 2
de estas especies no sean fácilmente comparables
subtipos de células superficiales. Las modificaciones
con las de la perra. De manera que es imprescindible
de los tipos celulares no reflejaron de manera precisa
considerar realizar trabajos futuros que analicen en
la fase del ciclo estral en el que se encontraban las
conjunto las modificaciones de los niveles hormonales
hembras.
así como el desarrollo de ondas foliculares a
través de ultrasonografía para poder interpretar las
Agradecimientos
modificaciones celulares que ocurren durante el ciclo
A Doña Mabel de Yáñez, propietaria del
estral de la oveja.
establecimiento Don Donato, por su valioso apoyo y
colaboración en el desarrollo de los trabajos de campo.
A Gesgan, por haber puesto a disposición los animales
y los insumos necesarios para el desarrollo de los
trabajos de campo. Al Ingeniero Agrónomo, Magíster
Juan Alfredo Fernández, por su valiosa colaboración
en las labores de campo y en el análisis estadístico
de los resultados. A los veterinarios Gabriela Abson
y José Casuso por su valiosa colaboración en el
desarrollo de los trabajos de campo.

REFERENCIAS

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Figura 2. Citología vaginal de ovejas Santa Inês.
A: Células parabasales (flechas).B: Célula parabasal
(flecha) e intermedia profunda (asterisco). C:
Célula Intermedia profunda (flecha) e intermedias
superficiales (asteriscos) D: Células intermedias
profundas (flecha) y abundantes neutrófilos (asterisco).
E y F: Células intermedias superficiales (flechas).
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208 Navarro L.M. et al.: S. uberis en mastitis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 208-214, 2022

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 208-214, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Evaluación del desempeño reproductivo en vacas y vaquillonas

cruza índica con protocolo convencional y J-Synch
Navarro, L.M.1; Yostar, E.J.2; Capellari, A.3
Alumnos de especialidad en reproducción animal (IRAC, Córdoba, Argentina).
1,2

3
Cátedra de Producción Bovina, Fac. Cs. Vet. UNNE (Corrientes, Argentina).
E-mail: maca_nk@hotmail.com

Resumen
Navarro, L.M.; Yostar, E.J.; Capellari, A.: Evaluación del desempeño reproductivo en vacas y
vaquillonas cruza índica con protocolo convencional y J-Synch. Rev. Vet. 33: 2, 208-214, 2022.
El objetivo de este estudio fue evaluar el desempeño reproductivo en vacas y vaquillonas cruza
índica con protocolo convencional y de proestro alargado, en un sistema de cría de Chaco. Se
utilizaron 264 vacas secas y 236 vaquillonas, con condición corporal 4 a 6 (escala 1-9). El día 0 se
aplicó dispositivo con 0,5 g de progesterona (DIB) y 2 mg de benzoato de estradiol. Los animales
se distribuyeron aleatoriamente en 2 grupos: a) convencional (día 8) se retiró DIB, administrándose
D-Cloprostenol (PG) (150 µg) y cipionato de estradiol (0,5 mg). La inseminación artificial (IA)
se realizó de 48 a 54 h del retiro, b) J-Synch: día 6 se retiró DIB, aplicándose PG (150 µg) y
gonadotrofina coriónica equina (eCG: 300 y 400 UI) en vaquillonas y vacas, respectivamente.
Se pintó la región sacrocoxígea para determinar manifestación de celo, inseminando a las 60 h y
72 h a las despintadas y en las que seguían pintadas a las 72 h además de IA se aplicó acetato de
buserelina (10µg). El diagnóstico por ultrasonografía se efectuó 40 días post-IA. Mediante prueba
Chi 2, 3 se comparó el efecto tratamiento (convencional vs J-Synch sin eCG) y categoría (vaquillona
y vaca) sobre el porcentaje de preñez y en J-Synch (sin vs con eCG), además de manifestación de
celo. No se encontró asociación de los tratamientos evaluados con el desempeño reproductivo, con
preñeces del 43% vs 54% en vacas y en vaquillonas del 59% vs 51% con convencional y J-Synch,
respectivamente. En J-Synch de 52 y 56%, en vacas (54 vs 62%) y vaquillonas (51 vs 50%)
sin y con eCG, respectivamente. La preñez general fue de 55% en animales que manifestaron
celo y 44% en aquellos que no lo hicieron. Como conclusión las vacas tuvieron una tendencia a
desempeñarse mejor con J-Synch, donde la utilización de eCG no tuvo influencias sobre la preñez.
Palabras clave: bovinos, inseminación artificial a tiempo fijo, proestro alargado, porcentaje de
preñez

Abstract
Navarro, L.M.; Yostar, E.J.; Capellari, A.: Reproductive performance evaluation in two indics
crosses females categories with conventional protocol and J-Synch. Rev. Vet. 33: 2, 208-214,
2022. The objective of this study was evaluate the reproductive performance of índics cross cows
and heifers with a conventional protocol and prolonged proestrus in a breeding system at Chaco.
Were used 264 cows without calf and 236 heifers with body condition 4 to 6 (scale 1-9). On day 0 a
device with 0.5 g of progesterone (DIB) and 2 mg of estradiol benzoate was applied. Animals were
randomly distributed into 2 groups: a) conventional: day 8: DIB was withdrawn, D-Cloprostenol
(PG) (150µg) and estradiol cypionate (0.5 mg) were administered. Artificial insemination (AI)
was performed 48 to 54 hours after withdrawal DIB. b) J-Synch: day 6 DIB was withdrawn,
PG (150 µg) and equine chorionic gonadotropin (eCG) (300 or 400 IU) were applied in heifers

Recibido:Diciembre 2021. Aceptado: Abril 2022.

Navarro L.M. et al.: S. uberis en mastitis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 208-214, 2022 209

and cows respectively. The sacro-coccygeal region was painted to determine estrus manifestation,
performing AI on the unpainted ones at 60 h and 72 hand in those that were still painted at 72 h
in addition to AI buserelin acetate (10 µg) was applied. Ultrasonography diagnosis was made 40
days post-AI. Using Chi 2 test were compared the effect of treatment (conventional vs. J-Synch
without eCG) and category (heifer and cow) on the rates of pregnancy and in J-Synch (without
vs. with eCG) in addition to estrus manifestation. No association was found between treatments
evaluated with reproductive performance with pregnancies of 43% vs 54% in cows and 59% vs
51% in heifers with conventional and J-Synch respectively. In J-Synch of 52 and 56% in cows
(54 vs 62%) and heifers (51 vs 50%) without and with eCG respectively. The general pregnancy
was 55% in animals that showed estrus and 44% in those that did not. In conclusion, the cows had
a tendency to perform better with J-Synch where the use of eCG had no influence on pregnancy.
Key words: cattle, fixed-time AI, prolonged proestrus, pregnancy rate.

INTRODUCCIÓN son fallas en la detección de celo, anestro post-

La cría bovina históricamente ha sido considerada
una de las actividades de menor rentabilidad financiera
y por tanto con poca incorporación de tecnología.
Dada la creciente demanda mundial por comodities
agrícolas tales como maíz, caña de azúcar y soja,
en Argentina la frontera agrícola se ha expandido
dejando las áreas marginales, para actividades de bajo
retorno económico 28 .
La baja eficiencia reproductiva de los vientres
(50%) en los sistemas de cría, está determinada por la
duración del anestro post-parto y la elevada edad al
primer entore 32 . La optimización de los parámetros
reproductivos contribuye a la mejoría del retorno
económico, sin lugar a dudas la tasa de preñez y
sobre todo su distribución, tienen un impacto muy
importante.
Lograr el primer objetivo de la cría, significa
que restando a los 365 días del año, 283 días del
período de gestación, las hembras deberían estar
nuevamente preñadas a los 82 días de paridas 2, 3 .
La inseminación artificial (IA) comenzó a ser
usada en la década del 50 en EEUU y actualmente
es una de las tecnologías más utilizadas en el mundo
para el avance genético de los rodeos de cría 22 .
Además permite aumentar la producción de kilos por
vaca/vaquillona inseminada y emplear toros de bajo
peso al nacer en el caso de hembras púberes.
El éxito de la aplicación de la técnica depende de
varios factores como: categoría del animal, condición
corporal, nutrición, calidad seminal, estrés y manejo
30
. Cuando se trata de vacas posparto para carne, el
grado de anestro será clave en el éxito del resultado,
estando la tasa de preñez directamente relacionada a
la CC y ciclicidad 17.
Las principales limitaciones para el empleo de
la IA en el ganado manejado en condiciones pastoriles
parto y pubertad tardía. Este problema es mayor en
ganado Bos índicus o sus cruzas debido al particular
comportamiento reproductivo y la dificultad de la
observación de celos 17.
Alternativamente, los tratamientos que
sincronizan tanto la emergencia de una nueva onda
folicular como la ovulación, ya emplean IA a tiempo
fijo (IATF) sin detección de celos y pueden resultar en
un rendimiento reproductivo satisfactorio porque todos
los animales son inseminados, demuestren o no celo 5.
Es un método utilizado para concentrar
anticipadamente los partos y aumentar los kilos
de terneros destetados por las distintas categorías,
independiente del mejoramiento en el genotipo de los
mismos 22.
Para ello se dispone de un conjunto de hormonas,
tales como estrógenos y progestágenos, gonadotrofina
coriónica equina (eCG), análogos de hormona
liberadora de gonadotrofinas (GnRH), prostaglandina
F2α (PGF) natural o análogos sintéticos, que utilizadas
en protocolos permiten controlar farmacológicamente
el ciclo estral 9.
Uno de los protocolos más utilizados consiste
en administrar 2 mg IM de benzoato de estradiol (BE)
en el momento de la inserción de un dispositivo intra-
vaginal con progesterona (P4) (DIB), con el objetivo
de sincronizar el desarrollo folicular 4.
En el día 7 u 8 se retira el dispositivo y se
administra prostaglandina (PGF) para inducir la
luteólisis, 24 horas más tarde se aplica 1 mg de BE para
sincronizar la ovulación que sucede entre las 66 y 70
horas después de retirado el dispositivo 16, la IATF se
lleva a cabo a las 52 o 56 horas posteriores al retiro del
DIB. Este protocolo se simplificó utilizando cipionato
de estradiol (CE) como inductor de ovulación el día
del retiro del DIB 15.
210 Navarro L.M. et al.: S. uberis en mastitis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 208-214, 2022
En los últimos años se han desarrollado
tratamientos con el propósito de modificar la duración
del proestro, los cuales se basan en alargar éste
intervalo de 48/54 horas (tratamiento convencional) o
50/66 horas (Co-Synch + DIB 7 días) a 72 horas. La
idea se fundamenta en que proestros más largos logran
mejor tamaño y desarrollo del folículo pre-ovulatorio,
altos niveles de estradiol, mejor preparación del
ambiente uterino y concentraciones superiores de
progesterona por producción del cuerpo lúteo en el
ciclo subsiguiente 19.
En Argentina se ha desarrollado un protocolo
basado en estradiol con una exposición reducida a
la progesterona y un pro-estro alargado, llamado
J-Synch 6, 21. Éste tiene la ventaja de que no se requiere
un tratamiento inicial de GnRH y, posteriormente, dos
inyecciones de PGF. El uso de un protocolo de 6 días
(J-Synch) ha dado como resultado una mayor preñez/
IA en vaquillonas que el protocolo convencional de 8
días basado en cipionato de estradiol 6, 19.
En los tratamientos de sincronización para
IATF, puede utilizarse gonadotrofina coriónica equina
(eCG), sobre todo en situaciones donde los vientres
se encuentren con baja CC 29, produciendo a nivel
ovárico mayor crecimiento del folículo dominante,
aumento de la tasa de ovulación y del área del cuerpo
lúteo, provocando a nivel sanguíneo aumento en los
niveles de progesterona 11.
El objetivo de este estudio fue evaluar el
desempeño reproductivo en dos categorías de
hembras (vaquillonas y vacas secas) cruza índica con
un protocolo convencional y uno de proestro alargado
(con y sin eCG), considerando además el efecto de la
expresión de celo, en un sistema de cría bovina de la
Provincia de Chaco.
MATERIAL Y MÉTODOS
Lugar de trabajo
El ensayo se llevó a cabo en un establecimiento
ubicado a unos 45 km al norte de la localidad Los
Frentones, departamento Almirante Brown, en el
oeste de la provincia de Chaco, distante a 320 km de
la capital provincial, cuyas coordenadas geográficas
son 26°08´34.1¨S 61°17´58.2¨W.
Animales
Se utilizaron 500 vientres constituidos por vacas
multíparas secas (n = 264) y vaquillonas cíclicas (n =
236) de 25 a 27 meses de edad provenientes de un
sistema de cría comercial, cruza índica (tipo braford
y brangus negro y colorado), con condición corporal
moderada (4 a 6 en la escala del 1-9) 25, que fueron
distribuidas al azar a cada tratamiento, manejadas
en un sistema silvo-pastoril de panicum máximum
cv. gatton panic en pastoreo continuo. Fueron
inmunizados con vacuna reproductiva (Bioabortogen
H®, Biogénesis Bagó), dos y una dosis en vaquillonas
y vacas respectivamente y recibieron además por vía
parenteral un suplemento vitamínico-mineral (Selfos
Plus®, Agro Insumos).
Tratamientos
En el día 0 se realizó la aplicación del
dispositivo intravaginal impregnado con progesterona
0,5 g (DIB, Cronipres®, Biogénesis Bagó) y 2 mg de
benzoato de estradiol (BE, Bieoestrogen®, Biogénesis
Bagó). Luego, los animales fueron distribuidos en dos
grupos de manera aleatoria para recibir el tratamiento
convencional o J-Synch. En el protocolo convencional
(Figura 1) (n=243) (vaca n=138 y vaquillonas n=105),
el día 8 se retiraron los DIB, se administró 150 µg
de D-Cloprostenol (PGF; Enzaprost®, Biogénesis
Bagó) y 0,5 mg de cipionato de estradiol (Croni-
cip®, Biogénesis Bagó). La inseminación artificial
(IA) se realizó entre las 48 a 54 horas del retiro de los
dispositivos.
Figura 1. Protocolo convencional: día 0 dispositivo
intravaginal (DIB 0,5 g) y 2 mg de benzoato de estradiol
(BE); día 8 retiro DIB, 150 µg de D-Cloprostenol
(PGF) y 0,5 mg de cipionato de estradiol (ECP). IATF
48 a 54 h.
En el protocolo J-Synch (n=257) el día 6 se
retiraron los DIB, se aplicó 150 µg de
PGF y en ese momento en este tratamiento se
conformaron dos grupos en cada categoría recibiendo
o no eCG de manera aleatoria, vaquillona (n=131) y
vaca (n=126) 300 y 400 UI de eCG-PMSG (Ecegon®,
Biogénesis Bagó) 26, respectivamente, resultando
el grupo con eCG (n=117) vaquillonas (n=62) y
vacas (n=55) (Figura 2) y sin eCG (n=140) fueron
vaquillonas (n=69) y vacas (n=71) (Figura 3).
En este tratamiento se aplicó pintura Celo-
test® (Biotay) en la región sacro-coxígea, para
determinar de manera subjetiva la manifestación de
celo. Se realizó control de pintura a las 60 y 72 horas,
en el primer control las hembras despintadas fueron
inseminadas, y las restantes recién a las 72 horas.
Aquellas hembras que aún presentaban pintura intacta
(no celo) recibieron 10 µg de acetato de buserelina
(GnRH, Buserelina®, Zoovet).
Navarro L.M. et al.: S. uberis en mastitis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 208-214, 2022 211

Figura 2. Protocolo J-Synch con eCG en vacas y vaquillas: Día 0 dispositivo intravaginal (DIB 0,5 g) y 2
mg de benzoato de estradiol (BE); Día 6 retiro DIB, 150 µg de D-cloprostenol (PGF), eCG 300 o 400 UI
(vaquillas o vacas), IATF 60 y 72 h, sin celo 10 µg de acetato de buserelina.

Figura 3. Protocolo J-Synch sin eCG en vacas y vaquillas: Día 0 dispositivo intravaginal (DIB 0,5 g) y 2 mg
de benzoato de estradiol (BE); Día 6 retiro DIB y 150 µg de D-Cloprostenol (PGF), IATF 60 y 72 h, sin celo
10 µg de acetato de buserelina.

Las dosis de semen utilizadas provenían de Diseño experimental, estadísticas

reproductores de probada fertilidad y de centros de
inseminación habilitados. Las mismas fueron evaluadas
previamente a su utilización, analizando la movilidad
y la cinética espermática. Adicionalmente, se evaluó
la morfología normal y la vitalidad espermática
mediante la tinción con eosina-nigrosina 1, usando un
microscopio E200 (Nikon, Japón).
Diagnóstico de gestación.
El diagnóstico de gestación se efectuó a los 40
días post-IA, mediante ultra-sonografía trans-rectal,
con equipo Aloka 500 (Aloka, Tokio, Japón) con un
transductor lineal de 7,5 MHz.
Tabla 1. Desempeño reproductivo según tratamiento y por categoría.
Se utilizó un diseño en bloques completos
aleatorizados. Se comparó el efecto del tratamiento
(Convencional vs J-Synch sin eCG) y categoría
(vaquillona y vaca) sobre el porcentaje de preñez.
En J-Synch se evaluó el efecto del tratamiento (sin
vs con eCG) sobre el porcentaje de preñez general,
según categoría y manifestación de celo. El análisis
estadístico de los datos se realizó con tabla de
contingencia y prueba de Chi2 con un alfa del 5%,
mediante software InfoStat 24.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados del efecto tratamiento con
protocolo convencional y J-Synch por categoría en el
desempeño reproductivo, se observan en la Tabla 1

Protocolo convencional J-Synch sin eCG general p-valor

50 (122/243) 52 (73/140) 51 (195/383) NS
Categoría
vaca 43 (60/138) 54 (38/71) 47 (98/209) NS
vaquillona 59 (62/105) 51 (35/69) 56 (97/174) NS

NS: no significativo
Los efectos protocolo y categoría, no
demostraron asociación con el desempeño
reproductivo, pero las vacas secas tendieron a mejorar
el porcentaje de preñez en un 11% con J-Synch,
mientras que las vaquillonas un 8% con convencional.
Otros autores encontraron diferencias
significativas (p<0,05) en vaquillonas tratadas con
el protocolo convencional y J-Synch al día 38 (65,8
vs 55,7%) y al día 103 (65,4 vs 53,2%) 8 y 61,1 y
55,5% 23. Resultados superiores fueron informados en
212 Navarro L.M. et al.: S. uberis en mastitis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 208-214, 2022

vaquillonas de 15 a 24 meses de edad de 59,7% en En la categoría vaca, con respecto a lo

J-Synch e inferiores de 53,1% en convencional 20.
En tratamiento de proestro prolongado con
7 días de progesterona, en vaquillonas Bos índicus
de 22 a 26 meses de edad con CC entre 2,5 a 3,5
(escala 1-5), alcanzaron 52% en J-Synch y 45% en
convencional 14.
En Uruguay sobre un total de 2.349 vaquillonas
Bos taurus que recibieron 300 UI de eCG en el
momento de la remoción del DIB, se encontró una
preñez significativamente mayor (p=0,01) a favor del
J-Synch (56,1%) en comparación con el convencional
(50,7%) 6.
obtenido en este ensayo, otros investigadores
lograron resultados similares en J-Synch de 53,3%,
pero superiores en convencional 51,9% 12. También
alcanzaron una mayor tasa de preñez (p<0,05) con
protocolo de pro-estro prolongado de 7 (52%), 6 días
(41%) y convencional (37,1 %) 13.
En la Tabla 2 se presentan los resultados del
protocolo J-Synch donde se evaluó el efecto de la
eCG (con y sin), en el porcentaje de preñez general y
por categoría.

Tabla 2. Desempeño reproductivo en protocolo J-Synch (con y sin eCG), por categoría.

Efectos s/eCG c/eCG general p-valor

Administración eCG 52 (73/140) 56 (65/117) 54 (138/257) NS

Categoría
vaca 54 (38/71) 62 (34/55) 57 (72/126) NS
vaquillona 51 (35/69) 50 (31/62) 50 (66/131) NS

NS: no significativo

El uso de eCG no se asoció con un mayor
porcentaje de preñez, sin embargo, en la categoría
vaca se evidenció una tendencia positiva con la
utilización de esta hormona que aumentó la preñez en
un 8%, en cambio en vaquillona estos valores fueron
muy similares.
Estos datos difieren de otros autores quienes
trabajaron con el protocolo J-Synch en 311 vaquillas
que recibieron o no 300 UI de eCG, a su vez se
subdividieron para recibir GnRH y fueron a IATF
el día 9 (60 o 72 horas después de la extracción del
DIB), la administración de eCG logró mejorar los
porcentajes de preñez (57,1%), en relación a las que
no recibieron dicha hormona (53,1%) 27. También se
ha registrado este efecto con tasas de preñez (59 vs
43,7%) (p<0,001), respecto al tratamiento sin eCG 23.
Estos resultados coinciden con otras líneas de
investigación (58,6 vs 67,1%; p>0,05) en tratamiento
sin y con eCG 31. Por otro lado se han reportado en
vacas y vaquillonas sincronizadas con J-Synch,
bonsmara cruza y puras, una preñez general del
62,4%, superior a lo encontrado en este ensayo.
Cuando compararon las diferentes categorías,
las vacas secas cruza y las vaquillonas tuvieron una
mayor (p<0,05) tasa de preñez que las vacas secas
puras (69; 57,3 y 50%, respectivamente). También
encontraron diferencias significativas al analizar el
efecto de la eCG en vaquillonas (c/eCG: 66 vs s/eCG:
46%) 7.
En la Tabla 3, se presentan los resultados de
preñez en protocolo J-Synch con y sin eCG según
manifestación de celo (despintadas) a las 60 y 72
horas y sin celo (pintadas), en cada categoría.

Efectos s/eCG c/eCG

general p-valor
Categoría vaca vaquillona vaca vaquillona
celo 60 h 55 (18/33) 42 (13/31) 61 (14/23) 39 (11/28) 49 (56/115) NS
celo 72 h 55 (16/29) 59 (20/34) 76 (16/21) 58 (18/31) 61 (70/115) NS
sin celo 44 (4/9) 50 (2/4) 36 (4/11) 67 (2/3) 44 (12/27) NS

NS: no significativo
Navarro L.M. et al.: S. uberis en mastitis bovina. Rev. Vet. 33: 2, 208-214, 2022
Al evaluar el efecto de la eCG en el desempeño
reproductivo en función de la manifestación de
celo, no se observaron diferencias significativas
entre tratamientos. Sin embargo, en general las que
presentaron celo a las 72 horas tuvieron una tendencia
a lograr mejores índices de preñez (12% superior). La
relación celo/preñez de los animales que presentaron
(60 y 72 horas) o no celo, fue del 55 y 44%.
Resultados superiores, pero no estadísticamente
significativos, fueron descritos en otros estudios con
tasas de preñez mayores en vaquillonas con celo
a las 60 y 72 horas (62,7 vs 69,2 y 63,6 vs 69%) y
no celo (25 vs 28,6%) en los grupos sin y con eCG,
respectivamente 31.
Sin embargo, la relación celo/preñez evaluada
en protocolos con cipionato de estradiol, han
demostrado diferencias significativas en grupos con y
sin manifestación de celo, a favor de las primeras 18, 20,
por otro se han reportado menores tasas de preñez en
animales que no se despintaron con respecto a los que
sí se despintaron (26,7 vs 61,8%) (p<0,05) 10.
CONCLUSIONES
En las condiciones en las que se realizó el
presente ensayo, los protocolos convencional y
de proestro alargado, no ejercieron asociación en
el desempeño reproductivo evaluado a través del
porcentaje de preñez.
Cuando se consideró el efecto categoría dentro
de cada protocolo, las vacas secas se desempeñaron
mejor en el protocolo J-Synch, manifestándose en las
vaquillonas resultados opuestos, ya que la tendencia
numérica porcentual superior en este caso se logró en
el tratamiento convencional.
Con la utilización de eCG, los resultados no
mostraron asociación con el porcentaje de preñez
general en los vientres cruza índica. Cuando los
efectos fueron evaluados por categoría, en las vacas
se mostró una tendencia positiva con su uso, logrando
incrementar la preñez.
El desempeño reproductivo en relación a la
manifestación de celo, no se afectó por la utilización
de eCG, pero las hembras que presentaron celo
más tarde al momento de la IA (72 horas), tuvieron
tendencia a alcanzar mayores preñeces.
213
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SiegMontesinos, J.A. et al.: Characterization of Diplostomum sp. Rev. Vet. 33: 2, 215-219, 2022 215

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 215-219, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Ultra-structural characterization of Diplostomum sp

metacercarian in Orestias luteus from Lake Titicaca, Peru

Montesinos, J.A.1; Serrano, E.1; Tantaleán, V.M.1; Yañez, J.2; Flores, R.3

Faculty of Vet. Med. and Zootechnics, Univ. Peruana Cayetano Heredia, Lima, Peru. 2Faculty of Vet. &
1

Livestock Sciences, Univ. Chile, Santiago, Chile. 3Emerging Diseases and Clim.Change, Univ. Peruana,
Lima, Peru. E-mail: jeansenmontesinos@gmail.com.

Abstract
Montesinos, J.A.; Serrano, E.; Tantaleán, V.M.; Yañez, J.; Flores, R.: Ultra-structural
characterization of Diplostomum sp metacercarian in Orestias luteus from Lake Titicaca,
Peru. Rev. Vet. 33: 2, 215-219, 2022. The objective of the present work was the ultra-structural
characterization of metacercariae of Diplostomum sp in Orestias luteus from Lake Titicaca,
Puno, Peru. 35 fish collected through non-probabilistic sampling were anesthetized with tricaine
monosulfonate (Tricaine-s®) and necropsied to determine the number of Diplostomum sp.
present per fish. The extracted parasites were fixed and preserved for study by scanning electron
microscope. The frequency of parasitosis was 48.6% (IC 95%: 32.0-65.1) with a mean parasitic
intensity of infection of 3.53 (low). The metacercaria of Diplostomum sp. are lingui form in shape
with papillae unevenly distributed on the surface of the body, have a posterior border with a slight
conical prominence, and an extreme anterior circle where the oral suction cup is located. There is
also an ellipsoidal acetabulum located in the anterior and ventral third of the posterior segment of
the body; behind that is the ovoid-shaped tri bocytic organ. The morpho anatomic characteristics
of the parasite under study coincide with Diplostomum mordax. The prevalence of Diplostomum
sp in Lake Titicaca is high compared to previous years. However, the average intensity is low;
suggesting that, for the moment, Diplostomum sp. is not a threat to the health of O. luteus.
Key words: Orestias luteus, Diplostomum sp, Lake Titicaca, parasites.

Resumen
Montesinos, J.A.; Serrano, E.; Tantaleán, V.M.; Yañez, J.; Flores, R.: Caracterizacion ultra-
estructural de metacercarias de Diplostomum sp en Orestias luteus del Lago Titicaca, Perú. Rev.
Vet. 33: 2, 215-219, 2022. El objetivo del presente trabajo fue la caracterización ultraestructural de
metacercarias de Diplostomum sp en Orestias luteus del lago Titicaca, Puno, Perú. Se recolectaron
35 peces mediante muestreo no probabilístico los cuales fueron anestesiados con tricaina mono
sulfonato (Tricaine-s®) y se les realizó necropsia para determinar el número de Diplostomum
sp presente por pez. Los parásitos extraídos se fijaron y conservaron para su estudio mediante
microscopía electrónica de barrido. La frecuencia de parasitosis fue de 48,6% (IC95%: 32,0-65,1)
con una intensidad de infección parasitaria media de 3,53 (baja). La metacercaria de Diplostomum
sp. son de forma linguiforme con papilas distribuidas de manera desigual en la superficie del
cuerpo, tienen un borde posterior con una ligera prominencia cónica y un círculo anterior extremo
donde se ubica la ventosa oral. También hay un acetábulo elipsoidal ubicado en el tercio anterior y
ventral del segmento posterior del cuerpo; detrás de eso está el órgano tribocítico de forma ovoide.

Recibido: Noviembre 2021. Aceptado: Febrero 2022.

216 SiegMontesinos, J.A. et al.: Characterization of Diplostomum sp. Rev. Vet. 33: 2, 215-219, 2022
Las características morfo-anatómicas del parásito en estudio coinciden con Diplostomum mordax.
La prevalencia de Diplostomum sp. en el lago Titicaca es alto en comparación con años anteriores.
Sin embargo, la intensidad media es baja; sugiriendo que, por el momento, Diplostomum sp. no es
una amenaza para la salud de O. luteus.
Palabras clave: Orestias luteus, Diplostomum sp, Lake Titicaca, parasites.
INTRODUCTION
Orestias luteus along with 23 other Orestias
sp. are endemic to Lake Titicaca and its tributaries,
it is commonly known as “carachi amarillo” and is
an important part of the economic activity of the
inhabitants surrounding Lake Titicaca, generating
direct and indirect jobs for the subsistence of rural
families 21 .
However, O. luteu biomass has decreased its
catch volume from 21,920 to 18,724 t 11 ; which is
related to over fishing and massive mortality 2 . The
latter due to pathological factors that could influence
the biological behavior of the species; seriously
impacting the economy and food security 17 .
Current research is based on conservation
and repopulation programs focused on food 22, 27,
production and reproduction 17 . The study of the
health of these fish is being neglected, so much so that
the only published works on O. luteus parasitosis are
decades old 8, 26 . Diplostomum sp are parasites whose
metacercaria stage were recorded in more than 150
species of fish 9, mainly parasitizing the cerebrospinal
fluid of the brain and eye cavities 4 .
Heckmann 8 (1992) reported that infections of
metacercariae of Diplostomum mordax in the cranial
cavity of O. agassi, O. olivaceus, O. luteus and
Basilichthy sbonariensis induced compression of
the neural tissue and migration of the metacercariae
to the brain, leading to hemorrhage, cell necrosis,
inflammation fibrosis and the rupture of nerve fibers.
Due to its low specificity Diplostomum sp.
affect both wild and cultivated fish species 10 , causing
negative impacts that are still unknown and neglected
in the local aquaculture of Lake Titicaca. Lymneid
snails and teleost fish are the intermediate hosts
for Diplostomum sp. and piscivorous birds are the
definitive hosts 18 .
Diplostomum sp.are prevalent, cosmopolitan
parasites in the birds 5, 10 . Severity of illness can be
affected by the number of metacercariae present in the
host 19, and severe illness leads to increased predation
by birds 30 . The effects caused by the metacercaria in
fish range from unnoticeable 16 to severe cases causing
blindness, deformation, weight loss 5 and even death
of the fish.
Parasitosis in fish causes economic and health
losses due to the deterioration of meat 23, ultimately
impacting the food industry and those who depend on
it for survival 29. Therefore, the aim of this study is the
ultra-structural characterization of meta-cercariae of
Diplostomum sp.in O. luteus of Lake Titicaca.
MATERIAL AND METHODS
Fish collection and sample preparation
Between February and May 2017, 35 O. luteus
were collected from Peninsula of Capachica, Lake
Titicaca - Puno, using chinchorros fishing gear 6 .
Fish were sacrificed by asphyxiation with Tricaine
monosulfonate (Tricaine-s®) and then packed in an
expanded polystyrene box with ice for shipment to
Lima.
Necropsy and measurements
The necropsy and metacercaria collection
of Diplostomum sp. was carried out in the Animal
Parasitology Laboratory of the Faculty of Veterinary
Medicine and Zootechnics of the Universidad
Peruana Cayetano Heredia. At necropsy, the location
of metacercariae in the fish was recorded and the
frequency distribution and average parasitic intensity
(total metacercariae / number of infected fish) of
Diplostomum was determined 13 .
Scanning electron microscopy
Scanning electron microscopy was performed in
the specialized laboratory of the Faculty of Biological
Sciences from the National University Greater than
San Marcos, Lima - Peru.
The extracted metacercariae
Were fixed in 4% glutaraldehyde and preserved
in 70% ethyl alcohol. The samples were then
dehydrated in 80%, 90% and 100% alcohol. The
samples were desiccated to a critical point (Electron
Microscopy Sciences, Model EMS 85), replacing
water with carbon dioxide.
The metallization with gold
Was done using spray-metallizer coating
equipment (Sputter Coater SPI, 11430E-AX), similar
SiegMontesinos, J.A. et al.: Characterization of Diplostomum sp. Rev. Vet. 33: 2, 215-219, 2022
to the method used by 12 . Image registration was
carried out using electronic microscope scanning with
built-in camera (Fei Inspect S50).
RESULTS
Of the 35 O. luteus analyzed, 17 (48.6%, IC
95%: 32.0-65.1) were infected by metacercariae
of Diplostomum sp. In general, the mean parasitic
intensity of infection was low 3.53 (1 to 5
metacercariae) in most fish; however, one fish had 23
parasites.
Metacercariae were found in the brain of the fish
freely floating in the cerebrospinal fluid associated
in the lobular in foldings, ventricular cavities and
external meninges. Fish had parasites in the frontal
lobes (58.8%), parietal lobes (11.8%), lateral lobes
(17.6%), frontal and parietal lobes (5.9%) and in all
three lobes (5.9%).
We did not observe a clear invasion of the
cerebral parenchyma or severe inflammation in any
fish. Also, the sampled fish did not show signs or
symptoms of the disease (apparently healthy) and
there was no evidence of metacercariae in other
anatomical parts of the fish, as the target organ of the
parasite is the brain.
Scanning electron microscopy analysis revealed
that the parasites have papillae distributed irregularly
on the surface of the body, both dorsal and ventral,
and in greater numbers on the anterior end. The body
is linguiform, 0.30 mm x 0.72 mm, slightly arched
towards the ventral aspect.
The posterior border has a small conical
prominence where the excretory pore is located, the
anterior is slightly circular and a little ventral to this
is the oral suction cup. The suction cup has a circular
shape and its edges have roughness directed from the
outside to the inside. On each side of the oral suction
cup, a small pseudo-suction cup can be seen. The
acetabulum has a transverse opening and the oval-
shaped tribocytic organ is located posterior to it.
DISCUSSION
The parasite observed in Orestias luteus from
Lake Titicaca is likely D. mordax described by
Tantaleán et al. 26, Heckmann 8 and Siegmund et al.
24
who described hemorrhage, cell necrosis and nerve
fiber rupture associated with the parasite.
D. mordax differs from D. von Nordman which
parasitizes the brain and mesentery 10 . D. mordax
also differs from D. spathaceum and Diplostomum
sp, which parasitize African Catfish and are normally
located in the eyes 1 .
217
The frequency of parasities found in the present
study was notably higher (48.6%) than the 15%
and 11% prevalence observed by Heckmann 8 and
Sierralta et al. 25 in Lake Titicaca. But, slightly close
than the prevalence of 60% and 7% to 100% reported
in other fish species by Siegmund et al. 24 and Viozzi
28
, respectively.
The high prevalence may be due to the decreased
water quality of Lake Titicaca 20 and the increase
in water temperature that occurs in the months of
January, February, March and April. From January
to April the average water temperature is 15.68°C 3
, which would encourage the growth of snails of the
genus Lymnaeidae 7 . Also, Lyholt & Buchmann 15 ,
showed that cercariae of D. sphatacecum have higher
infectivity at 15°C.
The mean intensity of Diplostomum sp is
similar to what Siegmund et al. 24 reported in Chilean
silverside (Basilichthys australis), but lower than
fish from tropical waters. Kembenya et al. 14 , who
identified Diplostomum sp in O. niloticus from three
areas bordering the county of Uasin Gishu-Kenya;
attributes the higher parasite intensities to a greater
population of piscivorous birds and to fish farms
with a higher density of fish compared to the natural
environment.
Machado et al. 16 agrees but also mentions that
the degree of barium infestation is higher in tropical
waters and mentions that native fish have a lower
degree of infestation compared to introduced fish.
This indicates that the lesions produced by these
parasites are not detrimental to the health of the fish
unless the intensity increases 19 .
The morpho anatomical details of the
Diplostomum sp identified in this study coincide
with that described by 10 with the exception of the
acetabulum which the author describes as circular.
Cavaleiro et al. 4 describe a tri lobed anterior end and
the scanning electron microscopy described finger-
like papillae, without apparent integument with a
rounded base that ends in a kind of cilium.
Tantaleán et al. 26 describe a Diplostomum sp
length between 0.860 to 0.890 mm and width from
0.470 to 0.490, which is slightly larger than that
described in the present work. The size difference
may have been caused by the procedures used for
the measurement, since in the aforementioned study
measurements were taken on flattened specimens for
sheet preparation.
Additionally, mention that it is the first time
that Diplostomum sp has been described at an ultra-
structural level in the Peninsula of Capachica of Lake
Titicaca, Puno. This supports the diagnosis of the
disease in the various areas where Orestia luteus lives.
218 SiegMontesinos, J.A. et al.: Characterization of Diplostomum sp. Rev. Vet. 33: 2, 215-219, 2022
In the present study, the frequency of
Diplostomum sp was 48.6% (IC 95%: 32.0 – 65.1)
which is considered high. However the average
parasitic intensity is low; suggesting that, at the
moment, Diplostomum sp are not threatening the
health of O. luteus. The location within the brain and
the morpho anatomy of the parasite observed in this
study coincide with D. mordax. Genotyping would be
an essential tool to reach more specific conclusions.
Acknowledgements
The authors thank to Fondecyt-Concytec for the
financial support provided to the program. Master’s
Degree in Aquaculture Health from the UPCH
(Management Agreement Nº 230-2015 FONDECYT);
that allowed the analysis and technical training of the
researchers for the execution of the study. Thanks,
are also due to Sebastián Zavala from the Faculty
of Veterinary Medicine of the University of Chile
for his support in translating the article into English
and Claudia Quispe from the Faculty of Veterinary
Medicine and Zootechnics of the Universidad
Peruana Cayetano Heredia for her great support in
sample processing.
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220 Mata F.: Bienestar animal. Rev. Vet. 33: 2, 220-222, 2022

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 220-222, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Linking epidemiology, biostatistics and animal welfare science

Mata, F.

Center for Research in Agri-Food Systems and Sustainability,

Instituto Politécnico de Viana do Castelo, Portugal.
E-mail: fernandomata@ipvc.pt

Abstract
Mata, F.: Linking epidemiology, biostatistics and animal welfare science. Rev. Vet. 33: 2, 220-222,
2022. Different epidemiological techniques and bio-statistical approaches are put into an animal
welfare scientific context, in a variety of species and settings, with reference to a variety of studies
provided as examples for reference. Epidemiology is especially important in animal welfare science
allowing the use of complex settings outside the laboratory environment using models that account
for random factors. It is also important in the introduction of standardised techniques allowing
evidence synthesis.

Key words: biostatistics, collaborative work, epidemiology, multidisciplinary, teamwork.

Resumen
Mata, F.: Vinculación epidemiológica, bioestadística y ciencia de bienestar animal. Rev. Vet. 33:
2, 220-222, 2022. Diferentes técnicas epidemiológicas y enfoques bioestadísticos se ubican en un
contexto científico de bienestar animal, en una diversidad de especies y entornos, con referencia
a una variedad de estudios proporcionados como ejemplos de referencia. La epidemiología es
especialmente importante en la ciencia del bienestar animal, ya que permite el uso de entornos
complejos fuera del contexto de laboratorio utilizando modelos que tienen en cuenta factores
aleatorios. También, es importante en la introducción de técnicas estandarizadas que permitan la
síntesis de evidencia.

Palabras clave: bioestadística, labor colaborativa, epidemiología, multidisciplinariedad.

Collaboration in animal welfare science
Epidemiology has been gaining visibility as a
tool in the identification of risk factor posed in animal
welfare science. It has been used with farm, wild,
captive and companion animals 6 . The advancement
of science has been favoured by collaborative research
between scientist of different fields of expertise 11 .
Epidemiology has evolved during the 20th
century from the study of infectious disease to a
broad science from the cellular and individual level to
population level 1 , including the social determinants
of heath, aggregated into the concept of one health.
The concept of one health defines health as the
same for humans and animals living under the same
environment.
Epidemiologists work in multidisciplinary
teams integrating health scientists, statisticians, and
policymakers 1 . Accordingly to the concept of one
health, this concept can be extended further to all the
life kingdoms, therefore health scientists may include
human medicine, but also veterinaries, ecologists,
sociologists, and many other fields.
It is under this umbrella that can be understood
how important it is the capacity to bring in knowledge
able to bridge the gaps between scientists with a
deep but narrow expertise. Multiskilled individuals
gain importance due to their capacity to integrate
different expertise, promoting mutual understanding

Recibido: Octubre 2021. Aceptado: Enero 2022.

Mata F.: Bienestar animal. Rev. Vet. 33: 2, 220-222, 2022 221

and contributing therefore, to bridge the gap between
fields of expertise 6 .
With these considerations in mind, animal
welfare scientists need also to collaborate, with
epidemiologists, and therefore biostatisticians.
Epidemiology and biostatistics have shown to be
important tools for animal welfare scientists to
perform professionally with extended capacity in
many situations.
The relationship between biostatistics,
epidemiology and animal welfare has evolved from
the end of the 20th century 12 . The advantages in the
use of epidemiological tools in animal welfare were
since referred by several authors. This has been the
case in risk assessment of environment, management,
or genetics, whether in the laboratory or the field in
animal settings such as aquaculture, farms, homes,
zoos, and equine.
The range of statistical methods used in
epidemiology is enormous, and techniques such as
general linear models, generalized linear models,
survival analysis, meta-analysis and mathematical
modelling are widely used.
Table 1 gives examples of the different
epidemiological study designs and biostatistical
approaches, putting them in an animal welfare
scientific context.

Table 1. Matrix showing the interrelation and placing different studies accordingly to the dimensions: type of
epidemiological study, area of animal welfare assessed, biostatistical method used (Italic) and type of animal
setting (bold).

Animal welfare
physical health affective states: ability to live
Epidemiology
and functioning distress, fear, pain natural lives
Mata and Mwakifuna
Williams et al. (2013) RM
Experiment _ (2012), GsLM
ANOVA, equine
(c log-log), farm.
Mata and Johnson (2022),
Mata et al. (2015) GsLM Mata et al. (2015)
cross-sectional GsLM
(neg. binomial) captive GsLM (log), equine
(logit), equine
Mata (2015), GEE
case-control _ _
companion

Mata and Bhuller (2022)

Mata (2014a), Survival
cohort cox regression
analysis, companion _
companion
Mata et al. (2012) GsLM Mata et al. (2022)
ecological (logit, neg. binomial), GsLM (cumulative
_
equine c-log-log link), equine
Mata (2014b), Maths
models _ _
modelling, equine

Note. RM ANOVA: repeated measures analysis of variance; GsLM: generalised linear models; GEE;
generalised estimating equations.

Acknowledgments

The author would like to acknowledge the Foundation for Science and Technology (FCT, Portugal)
for financially supporting CISAS, IP-VC through the project UIDP/05937/2020, including the contract of the
author.
222 Mata F.: Bienestar animal. Rev. Vet. 33: 2, 220-222, 2022

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Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 223-229, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Infección por Trypanosoma cruzi

en caninos de Acambuco (Salta, Argentina)
Simón, M.L.1; González, P.G.2; Mora, M.C.3; Barrio, A.B.2; Sánchez Negrette, O.4*
1
Facult. Cs. Exact., Quim. & Nat., Univ. Nac. Misiones, Posadas, Argentina. 2Facult. Cs. Salud, Univ. Nac.
Salta, Argentina. 3Institud. Patol. Exp. CONICET, Univ. Nac. Salta, Arg. 4Facult. Cs. Exact., Univ. Nac.
Salta, Argentina. 5Fac. Cs. Agr. & Vet., Univ. Catól. Salta, Argentina.
E-mail: osanchez@ucasal.edu.ar

Resumen
Simón, M.L.; González, P.G.; Mora, M.C.; Barrio, A.B.; Sánchez Negrette, O.: Infección
por Trypanosoma cruzi en caninos de Acambuco (Salta, Argentina). Rev. Vet. 33: 2, 223-229,
2022. La infección por Trypanosoma cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas, es una
zoonosis compleja. En el ciclo biológico de T. cruzi intervienen mamíferos como el hombre y
animales domésticos (ciclo doméstico y peridoméstico) o silvestres como roedores y carnívoros
(ciclo selvático). Desde el punto de vista epidemiológico el perro es el reservorio más importante.
El objetivo fue diagnosticar la infección por T. cruzi en caninos residentes del Valle de Acambuco,
Provincia de Salta, Argentina. El estudio se llevó a cabo en la localidad de Acambuco, Salta,
Argentina. Se analizaron 24 caninos domésticos por métodos serológicos: HAI y ELISA,
parasitológicos: hemocultivos y moleculares: PCR. Resultados: tres muestras caninas fueron
positivas por ambas pruebas serológicas y una de éstas por PCR. Ninguna de éstas resultaron
positivas por hemocultivo. En conclusión, los resultados demostraron que en la localidad
de Acambuco hay presencia de anticuerpos contra T. cruzi en los perros, indicando infección
parasitaria en un pasado reciente.

Palabras clave: Trypanosoma cruzi, perros, ELISA, HAI, PCR.

Abstract
Simón, M.L.; González, P.G.; Mora, M.C.; Barrio, A.B.; Sánchez Negrette, O.: Trypanosoma
cruzi infection in domestic canines from the town of Acambuco (Salta, Argentina). Rev. Vet. 33:
2, 223-229, 2022. The infection by Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas disease,
is a complex zoonosis. Mammals such as man and domestic animals (domestic and peri-domestic
cycle) or wild animals such as rodents and carnivores (wild cycle) intervene in the biological cycle
of T. cruzi. From an epidemiological point of view, the dog is the main reservoir. Objective: to
detect T. cruzi infection in dogs from Valle de Acambuco, province of Salta, Argentina. Materials
and methods. The study was carried out in the district of Acambuco, Salta, Argentina. A total of
24 domestic dogs were analyzed by serological, parasitological, and molecular methods including
HAI and ELISA, blood cultures and PCR, respectively. Results: three samples were positive by
both serological tests and one of these by PCR. None of these samples were positive by blood
culture. Conclusions: the results indicate the presence of antibodies against T. cruzi in dogs from
Acambuco suggesting the presence of this parasitic infection in the recent past.

Key words: Trypanosoma cruzi, dogs, ELISA, HAI, PCR

Recibido: Enero 2022. Aceptado: Mayo 2022..

224
INTRODUCCIÓN
La infección por Trypanosoma cruzi, agente
etiológico de la enfermedad de Chagas, es una
zoonosis compleja, transmitida por varias especies
de triatominos hematófagos 20, 30. El vector endémico
del Cono Sur es Triatoma infestans, ampliamente
distribuido en Argentina, Chile, Uruguay, Paraguay,
Brasil, Bolivia, Perú y Ecuador. La especie es casi
exclusivamente doméstica y se la conoce como
vinchuca 19 .
En Argentina, según cifras oficiales, se estima
que existen -al menos- 1.600.000 personas infectadas
por T. cruzi, cifra que representa casi el 4% de la
población total del país 3 . En el ciclo biológico de
T. cruzi intervienen mamíferos como el hombre
y animales domésticos (ciclo doméstico y peri-
doméstico) o silvestres como roedores y carnívoros
(ciclo selvático).
Para el caso de las comunidades rurales del
noroeste argentino y gran parte del Gran Chaco donde
el principal o único vector doméstico es T. infestans,
los principales actores domésticos además de los
humanos son los perros, los gatos y las gallinas. Los
perros actúan como una de las principales fuentes
de sangre para los T. infestans y presentan elevados
niveles de prevalencia de infección en ausencia de
medidas de control vectorial 6, 15, 16, 18 .
Más aún, estudios en comunidades tratadas con
insecticidas residuales mostraron que los perros y gatos
siguieron siendo los principales reservorios domésticos
del parásito a largo plazo 5, 6 . Los perros se infectan
de la misma forma que los humanos, por heces de los
vectores contaminados con el parásito, el cual penetra
a través de las mucosas y conjuntivas del animal.
Igualmente, los perros ingieren los vectores, lo que
constituye otro mecanismo de transmisión por vía oral,
la cual ha demostrado ser muy efectiva en infección
experimental y adjudicada en casos clínicos 4, 29 .
Desde el punto de vista epidemiológico el perro
es el reservorio más importante, debido en gran parte, a
su relación estrecha con el hombre, ya que la mayoría
de las veces convive en el mismo domicilio 10 .
Las vinchucas pican a los perros y al hombre,
convirtiendo a los canes en una fuente de infección
constante para el humano ya que son 14 veces más
efectivos que los humanos para diseminar el protozoo
causante de la enfermedad hacia sus vectores,
promoviendo el mantenimiento del ciclo y la
replicación del parásito. Ello lleva al establecimiento
y diseminación de focos latentes de infección que
perjudican tanto a las personas como a los pacientes
animales 26 .
En el medio rural la prevalencia de perros
con T. cruzi está en el rango del 8 a 50% y a menudo
Simon, M.L. et al.: Infección de caninos. Rev. Vet. 33: 2, 223-229, 2022
excede las prevalencias encontradas en las respectivas
poblaciones humanas. Además, pueden desempeñar
un papel en el reinicio de la transmisión en áreas
previamente rociadas, sirviendo como indicadores de
transmisión re-emergente 8, 14, 24 .
Por todo lo expuesto, el objetivo del presente
trabajo fue diagnosticar la infección por T. cruzi en
caninos residentes del Valle de Acambuco, Provincia
de Salta.
MATERIAL Y MÉTODOS
Área de Estudio
El estudio se llevó a cabo en la localidad de
Acambuco, Salta, Argentina. Acambuco es un valle
que pertenece al municipio de Agüaray, departamento
General José de San Martín (Figura 1). El valle de
Acambuco, (22°10´2.53´´S; 63°54´38.22´´O) fue
declarado Reserva Provincial de Flora y Fauna (Ley
5360/39) y suma una superficie aproximada de 8.266
hectáreas. En la zona del Valle de Acambuco existen
dos comunidades rurales, Acambuco y El Chorrito 1 .
Selección de Individuos
Previa autorización y colaboración de los
propietarios para la realización de la extracción de
sangre, se analizaron 24 caninos domésticos, 22
correspondientes a vecinos del Paraje Acambuco y 2
de El Chorrito. Los caninos pertenecían a viviendas
con antecedentes de infestación domiciliaria y
fumigaciones posteriores.
Toma de muestra de sangre
Para la toma de muestras de sangre de los
canes, se realizaron visitas domiciliarias donde se
solicitó autorización a los propietarios y se les explicó
la importancia de conocer el estado de infección de su
mascota. Las extracciones las llevó a cabo un médico
veterinario local. Se realizó por punción de la vena
cefálica anti-braquial, extrayéndose entre 3 y 5 ml
de sangre; dejándose retraer el coágulo, se obtuvo el
suero de las mismas, conservándose a -20ºC hasta su
utilización en el procesamiento serológico; otros ml
de sangre se colocaron en tubos con EDTA, para el
diagnóstico con PCR.
Datos epidemiológicos
Durante el proceso de toma de muestras, se
realizó un breve interrogatorio al propietario de cada
animal, consignando en una ficha: número de muestra,
nombre y apellido del dueño, domicilio (nombre del
paraje correspondiente ya que al ser pocas casas no
están numeradas), nombre del animal, sexo, tamaño,
color del pelaje y/o signos particulares, edad, presencia
Simon, M.L. et al.: Infección de caninos. Rev. Vet. 33: 2, 223-229, 2022
de vinchucas, fecha del último rociado de la casa y
presencia de cabras y/o gallinas. El estudio implicó
dos instancias de muestreo en julio de 2016 y julio
de 2017 en ambos parajes del Valle de Acambuco. Se
llevó a cabo un muestreo aleatorio simple.
Figura 1. Área de estudio: A: departamento General José de San Martín, Provincia de Salta, Argentina; B:
mapa geo-político donde se destaca el Municipio de Aguaray; C: fotografía del Valle de Acambuco.
paciente con una suspensión de hematíes previamente
sensibilizados con antígenos citoplasmáticos. Si
en el suero del paciente existen anticuerpos anti T.
cruzi estos van a producir aglutinación específica. Se
analizaron los sueros extraídos de las muestras, según
el protocolo del kit comercial HAI CHAGATEST-
Wiener Lab (S.A.I.C., Rosario de Santa Fé, Argentina).
Ensayo inmuno-enzimático
Fue un ELISA para la detección de anticuerpos
contra Trypanosoma cruzi. La reacción de ELISA
se basa en la formación de inmuno-complejos
entre antígenos inmovilizados en un soporte y los
anticuerpos presentes en el suero. Se utilizaron
antígenos recombinantes del Kit Wiener Lab
ELISA, anticuerpo secundario anti-inmunoglobulina
canis conjugados con peroxidasa Sigma-Aldrich,
siguiendo el protocolo descripto previamente por
Binda y col., 2016 3 . La absorbancia se leyó en un
espectrofotómetro para placas de ELISA MR96A
Mindray, método parasitológico (hemocultivo).
Protocolo
Se utilizó el protocolo modificado por Mora
y colaboradores 22 . En un segundo muestreo, se
225
Pruebas serológicas
Para la detección de los anticuerpos anti T.
cruzi, se usaron las técnicas de hemaglutinación
indirecta (HAI) y enzimo-inmuno-análisis (ELISA).
La reacción de HAI se realiza enfrentando el suero del
obtuvieron 5 muestras de sangre, correspondientes
a los canes que en el primer muestreo arrojaron
resultados serológicos positivos o dudosos.
Método molecular (reacción en cadena de la
polimerasa).
Se realizó extracción de ADN de las 24 muestras
de sangre entera y de la fracción correspondiente al
buffy coat (BC), mezclados previamente en proporción
1:1 con buffer Guanidina-EDTA. Llamamos BC a la
interfase de glóbulos blancos, plaquetas y proteínas
que se suspende encima de la capa de glóbulos rojos
y por debajo del plasma. El ADN se extrajo por
duplicado mediante el método de fenol-cloroformo
y se dejó precipitando el ADN a -80°C con acetato
de sodio-etanol. A partir del ADN extraído de sangre
entera y del BC de las 24 muestras, se realizó PCR/
Chagas convencional.
Amplificación
Se llevó a cabo en un termociclador
Techne 3000 siguiendo los parámetros de ciclado
correspondientes al protocolo establecido por Mora
y col. (2005), amplificando segmentos de 330 pb de
k-ADN utilizando los primers #121 (5´-AAA TAA
226 Simon, M.L. et al.: Infección de caninos. Rev. Vet. 33: 2, 223-229, 2022

TGT ACG GG(T/G) GAG ATG CAT GA-3´) y #122
(5´-GGT TCG ATT GGG GTT GGT GTA ATA TA-
3´) 21 . La elección de estos primers se realizó en base
al elevado número de copias (n>104) de su secuencia
target y a la elevada sensibilidad para detectar la
infección en estudios de campo 2, 9, 11, 23 .
Reacciones
En todas las reacciones se usaron controles
blanco, positivos y negativos. Como control negativo
se usó sangre de canes (T. cruzi negativos testeados
por serología) y sangre infectada con Leishmania sp.
Los controles positivos correspondieron a sangre de
canes T. cruzi positivos, tanto por serología como
por PCR, obtenidos de un estudio anterior de nuestro
grupo de trabajo 3 y para el blanco se utilizó agua
estéril apta para PCR.
Consideraciones éticas
El protocolo fue aprobado por el comité de ética
de la Facultad de Ciencias Agrarias y Veterinarias de
UCASAL.
RESULTADOS
HAI: lectura de la placa de Hemaglutinación
Indirecta. Como se puede observar en la placa (Figura
2), resultaron positivas (con la formación de un manto
que cubrió más del 50% del pocillo, para diluciones
≥1/16), las muestras 9, 10 y 14. Y de interpretación
dudosa, la muestra 21.

Corridas electroforéticas
Las corridas electroforéticas de los productos
de PCR se realizaron en gel de agarosa al 2% con
buffer TBE (Tris Borato-EDTA) y se revelaron
con Bromuro de Etidio (5-10 μg/ml). Los geles se
fotografiaron en transiluminador UV, Maestrogen
MLB-16 Ultrabright y se determinó el tamaño de los
amplicones utilizando un marcador de peso molecular
de 100 pb (Biodynamics).

Análisis estadístico
Figura 2. Lectura de la policubeta de HAI con las 24
Se realizaron descripciones en cifras absolutas
muestras caninas.
y relativas, elaborándose tablas.
ELISA: puede observarse la Figura 3, resultando
positivas las muestras 9, 10 y 14.
Validez de prueba diagnóstica
Se realizó la validez de la Prueba HAI tomando
como prueba de referencia ELISA.

Figura 3. Gráfica del cut-off (línea negra) para la dilución 1:10000 del conjugado anti-DogIgG.
PCR: en la Figura 4, se observa una única muestra que amplificó la banda de 330 pb. Es la correspondiente
al BC de la muestra de sangre del can 14 que resultó T. cruzi positivo por serología (HAI y ELISA).
Simon, M.L. et al.: Infección de caninos. Rev. Vet. 33: 2, 223-229, 2022
Figura 4. Electroforesis en gel de agarosa de PCR de los BC de muestras T. cruzi du- dosas y positivas por
serología. M: Marcador de peso molecular de 100 pb. B: blanco. N: Control negativo. P: Control positivo.
Calle 1 a 10: muestras Calle 10: Muestra 14.
HEMOCULTIVOS: todos los hemocultivos resultaron
negativos.
ANÁLISIS ESTADÍSTICO: validación de una prueba
diagnóstica.
Tabla 1. Validación de la prueba de HAI.
seropositivo seronegativo
prueba
VP = 3 FP = 1
positiva
prueba
FN = 0 VN = 20
negativa
sensibilidad especificidad
100% 95%
VP: verdaderos positivos; FP: falsos positivos;
FN: falsos negativos; VN: verdaderos negativos.
Se concluye que la prueba de HAI sirve de
screening, pues al tener alta sensibilidad un resultado
negativo excluye la enfermedad
DISCUSIÓN
La transmisión de T. cruzi en países endémicos
depende de la confluencia de vectores, reservorios,
parásitos y huéspedes (tanto personas como animales)
en un solo hábitat. Gürtler 14 demostró, en 1993, que
cuando los perros infectados permanecen en áreas
donde duermen sus dueños, la tasa de infección en
insectos es significativamente mayor que cuando no
lo hacen 14 .
Años más tarde, el mismo investigador
encontró que los perros contribuyen casi 3 veces más
que los gatos a la transmisión doméstica de T. cruzi y
que ambos animales (perros y gatos), hospedadores
del parásito, contraen la infección unas 10 veces más
rápido que los niños con los que cohabitan 16 .
En el extenso trabajo de investigación de
Castañera et al. 7 , llevado a cabo en perros de Amamá
y localidades vecinas (Provincia Santiago del Estero)
se investigó si el perro podría ser un eficaz centinela
227
de la transmisión vectorial de T. cruzi en el contexto
de Ia fase de vigilancia. La seroprevalencia global de
T. cruzi en Ia población canina disminuyó del 65,0%
(54/83) en 1992, antes de un rociado con deltametrina,
al 38,5% (70/182) en 1994, y al 15.2% (36/237) en
1996 7 .
Entre marzo de 2005 y junio de 2006 fueron
recolectados, en dos barrios carenciados de la ciudad
de Buenos Aires, sueros sanguíneos de 424 caninos,
para luego ser 52 examinados por IFI y ELISA.
VPP = 75 % En ningún suero estudiado se detectaron
anticuerpos específicos anti T. cruzi, hecho que resulta
VPN = 100% coincidente con la falta de evidencias de infestación
y transmisión por triatominos en la zona (aun cuando
prevalencia
los barrios se eligieron en base a la presencia de
12,5% personas y caninos procedentes de áreas endémicas,
así como a las características de las viviendas, que por
su precariedad favorecían la proliferación de insectos,
además de albergar perros y aves de corral en su
interior, en estrecha co-habitación con el hombre) 25 .
En la localidad de La Para, en Córdoba, Graiff
et al. 13 , determinaron en 2009 una seroprevalencia
de 11,1%, con ELISA e IFI, en 10 de 90 perros
evaluados; en la provincia de Salta, Binda et al. 3
realizaron análisis serológicos a 209 perros siendo 22
de la localidad de Rivadavia Banda Sur, 39 canes de
San Carlos, 84 de Cafayate y 64 de la localidad de
Embarcación, encontrándose anticuerpos anti-T. cruzi
sólo en los canes de la localidad de San Carlos, 28,2%
(11/39).
En Luján de Cuyo, una ciudad de Mendoza,
de las 89 muestras tomadas a perros en 2016 y 2017,
12 resultaron positivas (13,5%) por HAI y ELISA
12
. En la provincia de Chaco se registra un caso de
una perra doméstica, diagnosticada por métodos
parasitológicos, serológicos y moleculares 27 .
En 2018, Ulon et al. 28 hallaron una
prevalencia del 54% (66 sueros positivos) al evaluar
serológicamente a 122 caninos de un barrio periférico
de la provincia de Corrientes.
En el presente trabajo, por primera vez, se
estableció la presencia de caninos seropositivos a T.
cruzi en la reserva de Acambuco. De los 24 perros
examinados, 3 resultaron positivos por ambas pruebas
228
serológicas, lo cual significa una seroprevalencia de
infección del 12,5% (3/24).
Todos los caninos fueron negativos por PCR a
partir del ADN extraído de sangre entera. Sin embargo,
uno de ellos, fue positivo por PCR de la muestra de
ADN obtenida a partir del buffy coat. Por otra parte,
ninguna de las muestras de los canes que resultaron
positivos por los métodos enunciados, permitió
visualizar la presencia del parásito, luego de someterlas
a cultivo. Estimamos que los perros están cursando
la fase crónica de la enfermedad, considerando que
se obtuvo serología positiva y PCR convencional
negativa. Podría mejorarse la sensibilidad de la PCR
obteniendo ADN del buffy coat.
A pesar de que no podemos concluir cuál es la
vía de transmisión de T. cruzi en los perros (vectorial,
oral o congénita), sí se pone de manifiesto el riesgo
que representan los perros positivos a infecciones
para T. cruzi, ya que actúan como reservorios en los
domicilios y peridomicilios.
Al igual que otros autores 17, consideramos que
la presencia de estos animales implica una fuente no
controlada de parásitos que podrían (re)introducir al
patógeno en este lugar, donde el ciclo doméstico se
supone controlado o interrumpido. Por lo tanto, los
programas de control de la transmisión de T. cruzi
deberían considerar la incorporación de estrategias
que incluyan los perros.
Es recomendable informar a los médicos
veterinarios que tomen en cuenta la enfermedad de
Chagas como un diagnóstico diferencial en perros,
especialmente en esta reserva protegida y continuar
con estudios sistemáticos, a nivel de comunidades,
para determinar si la infección se encuentra distribuida
en todo el departamento y cómo es su impacto en la
salud de las personas que habitan el Valle.
Para estos estudios a campo sugerimos
utilizar el método HAI como screening. Las distintas
prevalencias halladas en estudios a nivel nacional
sugieren que hay zonas que requieren una acción
sanitaria inmediata.
Al mismo tiempo, las estimaciones se basan
en situaciones epidemiológicas muy heterogéneas, lo
cual enfatiza la importancia de llevar a cabo estudios
en profundidad en áreas restringidas y poder así,
brindar información adicional que permita una mejor
comprensión del estado actual de la enfermedad de
Chagas en Argentina.
Agradecimientos
Agradecemos al Médico Veterinario Alejandro
Guzmán por la toma de muestras a los canes.
Nuestro agradecimiento también a la Fundación
Ayre, por la conce-sión a la Universidad Católica
de Salta, del lector de ELISA MR96A Mindray.
Además fue parcialmente financiado por el Consejo
de Investigaciones de la Universidad Nacional de
Simon, M.L. et al.: Infección de caninos. Rev. Vet. 33: 2, 223-229, 2022
Salta, y por la Facultad de Ciencias Agrarias y Ve-
terinarias, Cátedra de Inmunología de la Universidad
Católica de Salta. También a Olga Sánchez Negrette
http://orcid.org/0002-3178-2557.
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230 Gallard E.A. et al.: Alojamiento de pollos parrilleros. Rev. Vet. 33: 2,230-234, 2022

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 230-234, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Efecto de la densidad de alojamiento y la zona del galpón

sobre indicadores de bienestar en pollos parrilleros
Gallard, E.A.1; Menichelli, M.L.1,2; Di Masso, R.J.3; Revidatti, F.A.4

1
INTA EEA RN-11 Km 773 - 3560, Reconquista, Santa Fe. 2Cátedra de Fisiología. Carrera Veterinaria.
Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Católica de Santa Fe. 3Profesor Honorario. Facultad de
Ciencias Veterinarias, UNR. 4Cátedra
de Producción de Aves, Facultad de Ciencias Veterinarias, UNNE.
E-mail: gallard.eliana@inta.gob.ar

Resumen
Gallard, E.; Menichelli, M.; Di Masso, R.; Revidatti, F. Efecto de la densidad de alojamiento y la
zona del galpón sobre indicadores de bienestar en pollos parrilleros. Rev. Vet. 33: 2, 230-234, 2022.
El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la disminución de la densidad de alojamiento y
de la zona del galpón sobre lesiones en almohadilla plantar, tarso y suciedad de plumas ventrales
de pollos de engorde criados en invierno. El trabajo se realizó en una granja comercial en el noreste
de la provincia de Santa Fe, Argentina. Se alojaron 54.000 pollos de engorde en lotes mixtos, en
dos galpones oscurecidos, divididos en tres zonas: Paneles, Intermedia y Extractores. Se evaluaron
dos densidades de alojamiento: 14 y 12 pollos/m2, estándar y reducida, respectivamente. A los 41
días se valoró la presencia de lesiones y suciedad del plumaje ventral en 120 pollos por zona. Las
lesiones de almohadilla plantar registraron diferencias significativas en Extractores (p= 0,0006),
Intermedia (p= 0,0002) y Paneles (p< 0,0001), con mayoría de lesiones 1 y 2 en Intermedia y
Paneles con densidad estándar. Las lesiones de tarso no fueron significativas en Extractores (p=
0,1107), sí en Intermedia (p= 0,0235) y Paneles (p< 0,0001), ambas, con más lesiones tipo 2 en
la densidad estándar. En suciedad de plumas hubo diferencias significativas en Extractores (p=
0,014), Intermedia (p= 0,01) y Paneles (p< 0,0001), con mayor proporción de plumaje tipo 3 en
la densidad estándar. Las variables evaluadas dan cuenta del cambio favorable en la situación de
bienestar alcanzada mediante la reducción de la densidad de alojamiento en pollos de engorde.

Palabras clave: bienestar animal, condiciones ambientales, producción comercial.

Abstract
Gallard, E.; Menichelli, M.; Di Masso, R.; Revidatti, F. Effect of stocking density and shed
area on welfare indicators in broiler chickens. Rev. Vet. 33: 2, 230-234, 2022. The aim of this
work was to evaluate the effect of decreasing stocking density and shed area on footpad dermatitis,
hock burn, and ventral feathers cleanliness of broilers reared in winter. The work was carried
out on a commercial farm in the northeast of the Santa Fe province, Argentina. 54,000 broilers
were housed in sex-mixed batches, in two darkened sheds, divided into three zones: Panels,
Intermediate and Extractors. Two stocking densities were evaluated: 14 and 12 chickens/m2,
standard and reduced, respectively. At 41 days feet and hock lesions and cleanliness of ventral
feathers was assessed in 120 chickens per area. Significant differences were registered for footpad
lesions in Extractors (p = 0.0006), Intermediate (p = 0.0002) and Panels (p <0.0001) zones, with
predominance of lesions 1 and 2 in Intermediate and Panels zones with standard density. Non-
significant differences were observed for hock lesions in Extractors (p = 0.111) a response not
seen in Intermediate (p = 0.024) and Panels (p <0.0001) zones, with more type 2 lesions in both
zones under standard density. Feather cleanliness showed significant differences in Extractors (p =
0.014) Intermediate (p = 0.01) and Panels (p <0.0001), with a higher proportion of type 3 plumage

Recibido: Diciembre 2021. Aceptado: Marzo 2022.

Gallard E.A. et al.: Alojamiento de pollos parrilleros. Rev. Vet. 33: 2,230-234, 2022
dirt with standard density. Welfare indicators behaviour showed the favourable change achieved
by reducing stocking density in broilers production.
Key words: animal welfare, environmental conditions, commercial production
INTRODUCCIÓN
En la producción de pollos de engorde la
densidad de alojamiento expresa en número de aves
o kilogramos de aves por unidad de superficie la
capacidad de carga que puede admitir un galpón.
Esta variable se encuentra estrechamente relacionada
con el mantenimiento de las condiciones ambientales
adecuadas para alcanzar determinados objetivos
productivos y de bienestar 4 .
Con la finalidad de analizar en forma objetiva
los efectos de la asignación del espacio por ave sobre
la producción, es necesario evaluar las consecuencias
que acarrea el empleo de distintas densidades de
alojamiento a escala comercial. Las altas densidades
de alojamiento, por lo general, se traducen en un menor
desempeño individual, lo que se ve compensado por
una mayor cantidad de kilogramos obtenidos por
galpón.
Por el contrario, las densidades bajas dan
por resultado mejoras en la producción individual,
aunque con una disminución de la producción global
del galpón 2 . La reducción del espacio asignado por
pollo puede conducir, adicionalmente, a un aumento
marcado en las lesiones de almohadilla plantar, tarso
y suciedad del plumaje ventral, lo que conlleva una
reducción de la calidad de la canal 19 .
La alta tasa de crecimiento en pollos de engorde
está acompañada por una reducción de la actividad
locomotora que, asociada a modificaciones en la
calidad del aire y condiciones de la cama, ocasiona
alteraciones en piel y plumas 12, 13, 18 , que afectan la
salud y provocan sufrimiento en las aves 3, 21 .
En la directiva 43 del año 2007, el Consejo
de la Unión Europea determinó que la presencia y
gravedad de lesiones relacionadas con las dermatitis
de contacto, registradas en las inspecciones post-
mortem, deberían ser utilizadas como indicadores de
bienestar 5 .
El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto
de la disminución de la densidad de alojamiento y de
la zona del galpón sobre la incidencia de lesiones
en almohadilla plantar, tarso y suciedad de plumas
ventrales, como indicadores de bienestar animal en
pollos de engorde criados durante el invierno.
231
MATERIAL Y MÉTODOS
El trabajo se realizó en una granja comercial
en el noreste de la provincia de Santa Fe, Argentina.
Entre el 9 de agosto y el 21 de septiembre, 54.000
pollos Cobb500
se alojaron en lotes mixtos, en dos galpones
oscurecidos de ventilación forzada tipo túnel.
Los galpones se dividieron en tres zonas
de igual superficie denominadas Paneles (sector
del ingreso del aire), Extractores (salida del aire)
e Intermedia (la que se encuentra entre las dos
anteriores). Se compararon dos densidades de
alojamiento: estándar (14 pollos/m2) habitualmente
utilizada en la granja y reducida (12 pollos/m2), la
mínima admitida por la empresa.
A los 41 días de edad se tomó una muestra
aleatoria de 120 pollos por zona y se observó la
presencia de lesiones y la suciedad del plumaje ventral.
Para la evaluación de las lesiones en almohadilla
plantar se utilizó una escala 0 a 3, donde 0: significa
normal o sin evidencia de lesiones, 1: quemadura de
almohadilla a nivel de dermis, 2: costras en una o dos
patas y 3: lesiones abiertas en una o dos patas 14 .
En el caso de las lesiones en tarsos, las mismas
se puntuaron de 1 a 3, donde 1 significa sin evidencia
de lesiones, 2 con cambio de color o lesiones menores
y 3 lesiones graves 13 . Por su parte, la suciedad de
plumas se categorizó de 0 a 3, donde 0 significa
plumaje limpio en la zona ventral, 1 indica plumaje
ligeramente sucio, 2 indica plumaje notablemente
sucio y 3 plumaje completamente sucio y apelmazado
9
.
El efecto de la densidad de alojamiento dentro
de cada zona se analizó con una prueba ji-cuadrado
de homogeneidad, excepto para el caso de la suciedad
de plumas en las zonas Paneles e Intermedia y para
lesiones en tarso, en las tres zonas, en las que se utilizó
el test exacto de Fisher por incluir solo dos categorías.
RESULTADOS
Las figuras 1, 2 y 3 muestran esquemáticamente
el comportamiento de los tres indicadores de bienestar.
Las lesiones de almohadilla plantar registraron
diferencias significativas según densidad en las tres
zonas del galpón: Extractores (p= 0,0006), Intermedia
232 Gallard E.A. et al.: Alojamiento de pollos parrilleros. Rev. Vet. 33: 2,230-234, 2022

(p= 0,0002) y Paneles (p< 0,0001), con mayor
porcentaje de lesiones de tipo 1 y 2 en las zonas
Intermedia y Paneles bajo densidad estándar, mientras
que la zona Extractores se vio más afectada, con
mayor porcentaje de lesiones de tipo 1 con densidad
reducida.
Las lesiones de tarso arrojaron diferencias
significativas en la zona Intermedia (p= 0,024) y
Paneles (p<0,0001), en ambos casos con una mayor
limpio en las tres zonas.
proporción de lesiones tipo 2 en los pollos alojados
con densidad estándar, mientras que, en la zona
Extractores no se observó diferencia significativa (p=
0,111) entre las densidades de alojamiento.
La densidad de alojamiento afectó la suciedad
de plumas en las tres zonas Extractores (p= 0,014),
Intermedia (p= 0,010) y Paneles (p< 0,0001), con
mayor porcentaje de aves con plumaje tipo 3 en la
densidad estándar y ausencia de aves con plumaje

Figura 1. Lesiones de almohadilla plantar en pollos parrilleros criados en lotes mixtos según densidad de
alojamiento en cada zona del galpón.

Figura 2. Lesiones de tarso en pollos parrilleros criados en lotes mixtos según densidad de alojamiento en
cada zona del galpón.

Figura 3. Suciedad de plumas ventrales en pollos parrilleros criados en lotes mixtos según densidad de
alojamiento en cada zona del galpón.
Gallard E.A. et al.: Alojamiento de pollos parrilleros. Rev. Vet. 33: 2,230-234, 2022
DISCUSIÓN
Asumiendo que el espacio asignado a los
pollos ejerce influencia sobre la integridad de la piel y
las condiciones del plumaje ventral, estos indicadores
son potencialmente útiles para evaluar su estado de
bienestar 2 . Existe evidencia de que altas densidades
de alojamiento producen lesiones en la piel de
almohadillas plantares y tarsos 1, 13, 17, 20 y alteran la
condición del plumaje 10 .
Los resultados coinciden con los reportados
por otros autores que hallan daños más severos en
almohadilla plantar y mayor dificultad para mantener
el plumaje limpio cuando la densidad de alojamiento
es mayor 20, lo que también se apoya en las
observaciones de Farhadi et al. 6 quienes demuestran
que, tanto las lesiones de almohadilla plantar como de
tarsos, generadas por una mala calidad de la cama, se
intensifican con el incremento de la densidad.
La presencia de lesiones en las patas provoca
dificultades en el movimiento de las aves y disminuye
la rentabilidad de los lotes como consecuencia de la
menor producción individual.
El objetivo de la producción avícola de
engorde a nivel mundial es maximizar la producción
de kilogramos de pollo por metro cuadrado de galpón,
en tanto se prevengan las pérdidas por sobrepoblación
para lograr un rendimiento económico aceptable 11 .
Gholami et al. 7 estudiaron el efecto de
distintas densidades de alojamiento (10, 15, 17 y 20
aves/m2) en cuatro regiones climáticas, con el objetivo
de establecer los efectos de ambos factores sobre la
performance productiva y el beneficio económico.
Los resultados de la producción física por
metro cuadrado son superiores cuando se alojan 17
pollos/m2, lo que sugiere que, cuando no se consideran
las variables relacionadas con el bienestar animal,
se alcanza mejor rentabilidad con el aumento de la
densidad. Aunque se acepta que el mayor contenido
de humedad de la cama es la causa más importante
de la podo-dermatitis, la relación entre la densidad de
alojamiento, época del año y lesiones es poco clara 16 .
Se ha reportado que la densidad de alojamiento
por sí misma tiene poco efecto sobre la pododermatitis
3
, lo que sugiere que en el invierno la humedad del
ambiente, asociada a una cama húmeda, contribuye a
una mayor incidencia de lesiones.
Moreki et al. 15 investigaron los efectos de
la densidad de alojamiento sobre la performance en
pollos de engorde con cinco densidades (10, 12, 14,
16 y 18 aves/m2) con mejores resultados para peso
corporal y ganancia de peso a 10 y 12 aves/m2, en
tanto que la conversión alimenticia no se ve afectada.
Además de las mermas en la ganancia de
peso, la presencia de lesiones de distinta gravedad
233
conduce al aumento de los decomisos de patas en las
plantas de faena, lo que disminuye la disponibilidad
de un producto con alta demanda en el mercado
internacional 8 .
CONCLUSIÓN
Las variables evaluadas dan cuenta del cambio
favorable en la situación de bienestar alcanzada
mediante la reducción de la densidad de alojamiento
en pollos de engorde, aunque esta mejora no puede
sostenerse sin la combinación de una densidad
adecuada y el mantenimiento del buen estado de la
cama y de las condiciones ambientales.
Los autores agradecen a la empresa Nagi S.A.,
a sus trabajadores y a la integración avícola de la de la
Unión Agrícola Avellaneda, por facilitarnos el trabajo
en sus instalaciones y por su buena predisposición
para la realización de nuestra tarea.
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Ferreira V. et al.: Ultrasonografía del equino. Rev. Vet. 33: 2, 235-240, 2022 235

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 235-240, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

FerUltrasonografía
musculo-esquelética
con doppler de poder asociado al modo B en el equino
Ferreira, V.1; Boffa, M.F.1; Monina, M.I.2
1
Cátedra de Medicina Equina, FCV-UNLP, calle 60 y 118 (1900), La Plata,
Buenos Aires, Argentina. 2Profesional independiente, La Plata, Argentina.
E-mail: vferreira@fcv.unlp.edu.ar

Resumen
Ferreira, V.; Boffa, M.F.; Monina, M.I.: Ultrasonografía musculo-esquelética con doppler de
poder asociado al modo B en el equino. Rev. Vet. 33: 2, 235-240, 2022. La ultrasonografía, en
medicina equina, es una técnica fundamental para el diagnóstico de las claudicaciones y en la
evaluación de la disminución del rendimiento deportivo. A pesar del gran desarrollo del Modo B
es escasa la utilización del Doppler Color y específicamente del Doppler de Poder o power angio
en la evaluación de las afecciones músculo-esqueléticas en el equino. El objetivo de este trabajo
fue analizar los alcances, ventajas y limitaciones del estudio ultrasonográfico con Doppler de
Poder asociado al Modo B en la evaluación de 122 afecciones músculo-esqueléticas en equinos
deportivos, de entre 2 y 15 años, de ambos sexos y distintas razas Se utilizó un ecógrafo portátil
Sonoscape E2 con sonda lineal de 7-11 Mhz y convexa de 2,5-5 Mhz. De la totalidad de las
lesiones músculo-esqueléticas evaluadas (n=122) se observó presencia de señal con el Doppler
de Poder en 46/122 siendo la más observada la de grado I (29/46), seguida del grado II (13/46)
y por último de grado III (4/46). Si bien este es un estudio preliminar y faltan más resultados
para poder aplicar análisis estadísticos, según la experiencia de los autores, el Doppler de Poder
complementando los estudios ultra-sonográficos en Modo B, ha demostrado ser una herramienta
de gran utilidad para el diagnóstico, seguimiento de la evolución de las lesiones, evaluación de la
respuesta terapéutica y con valor predictivo de posibles lesiones futuras.

Palabras clave: ecografía, power angio, caballo, músculo esquelético.

Abstract
Ferreira, V.; Boffa, M.F.; Monina, M.I.: Musculo-skeletal ultrasonography with power doppler
associated with B-mode in the equine. Rev. Vet. 33: 2, 235-240, 2022. Ultrasonography, in equine
medicine, is a fundamental technique for the diagnosis of lameness and in the evaluation of the
decrease in sporting performance. In spite of the great development of B Mode, there is little
use of Color Doppler and specifically of Power Doppler or Power Angio in the evaluation of
musculoskeletal conditions in the equine. The objective of this work was to analyze the scope,
advantages and limitations of the ultrasonographic study with Power Doppler associated to B
Mode in the evaluation of 122 musculoskeletal disorders in sport equines, between 2 and 15 years
old, of both sexes and different breeds. A Sonoscape E2 portable ultrasound scanner with a 7-11
Mhz linear probe and a 2.5-5 Mhz convex probe was used. Of all the musculoskeletal lesions
evaluated (n=122), the presence of Power Doppler signal was observed in 46/122 being grade I
(29/46), followed by grade II (13/46) and finally grade III (4/46). Although this is a preliminary
study and more results are needed to be able to apply statistical analysis, according to the authors’
experience, Power Doppler complementing B-mode ultra sonographic studies has proven to be
a very useful tool for diagnosis, follow-up of the evolution of lesions, evaluation of therapeutic
response and as a predictive value of possible future lesions.

Key words: ultrasound, power angio, horse, skeletal muscle.

Recibido: Marzo 2022. Aceptado: Junio 2022.

236
INTRODUCCIÓN
La ultrasonografía (US) fue utilizada por
primera vez en equinos para la evaluación del aparato
reproductivo en yeguas. Desde 1983, se comenzó a
utilizar en el diagnóstico y documentación de lesiones
tendinosas 1, 2 .
Actualmente es una herramienta muy utilizada;
es práctica, accesible, portátil, económica, inocua,
reproducible y sensible, que permite una evaluación
dinámica y en tiempo real de distintas estructuras
anatómicas.
El avance tecnológico aumenta permanentemente
la capacidad diagnóstica de la US, ampliando el campo
de sus aplicaciones. En medicina equina esta técnica es
fundamental para el diagnóstico de las claudicaciones
y en la evaluación de la disminución del rendimiento
deportivo 3 .
El profesor Denoix en 1989 publicó los
primeros trabajos de evaluación ultrasonográfica de
las articulaciones en equinos, siendo la del menudillo
y la femoro-tibio-patelar las primeras descriptas en sus
trabajos. Posteriormente se investigaron y reportaron
otras regiones, entre otras, carpo, hombro, tarso y pie.
La evaluación en Modo B (MB) proporciona
imágenes en escala de grises que permiten una
información precisa de las estructuras anatómicas,
destacándose infinitas utilidades en el estudio de tejidos
blandos, huesos y articulaciones. A pesar del gran
desarrollo de la US en MB, cabe mencionar la escasa
utilización del Doppler Color (DC) y específicamente
del Doppler de Poder (Power Angio, Doppler de
Potencia o DPI) en el estudio de las afecciones
musculo-esqueléticas-de los equinos.
El ultrasonido Doppler constituye un método
de diagnóstico de primera línea para la evaluación
vascular. Se basa en el efecto Doppler, en que la
frecuencia del ultrasonido cambia cuando el emisor
y/o el receptor se mueven. Los tipos de Doppler
son: Modo Doppler continuo (CW) y Modo Pulsado
(PW), este último en sus formas de Doppler espectral
(DE), Doppler Color (DC) y Doppler Poder (Power
Angio o DPI) 4 .
El Doppler de Poder representa la potencia
o intensidad del espectro del flujo, no la velocidad
como los otros modos. Cuanto mayor sea el número
de glóbulos rojos moviéndose, mayor va a ser la
información. Las ventajas que tiene con respecto a los
otros tipos de Doppler son: una sensibilidad entre 3 y 5
veces mayor que el Doppler Color, no presenta aliasing
(artefacto que produce una inadecuada representación
de la velocidad y dirección del flujo).
Ferreira V. et al.: Ultrasonografía del equino. Rev. Vet. 33: 2, 235-240, 2022
Además es independiente del ángulo de
incidencia 5, es más sensible al flujo lento, por lo que
se convierte en la técnica de imagen ecográfica de
elección para el estudio de los procesos de hiperemia
tisular, permitiendo una monitorización no invasiva
de la perfusión vascular capilar, demostrando una alta
sensibilidad para identificar los cambios vasculares
producidos en los tejidos inflamados así como en
la detección de neovascularización en procesos de
reparación tisular 4 .
Asimismo, permite valorar la respuesta
terapéutica, razón por la cual en medicina humana
se ha incrementado significativamente su empleo en
los últimos años 6 . La desventaja del PDI es que no
da información de velocidad ni permite determinar el
sentido del flujo.
Pocos reportes actualmente mencionan el
uso del Doppler DPI complementando al estudio
ultrasonográfico en MB en el diagnóstico, seguimiento
y pronóstico de las lesiones musculo-esqueléticas del
equino.
El objetivo de este trabajo fue analizar
los alcances, ventajas y limitaciones del estudio
ultrasonográfico con Doppler de Poder asociado al
Modo B en la evaluación de afecciones musculo-
esqueléticas del equino deportivo.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se realizó estudio ultrasonográfico con DPI en
122 afecciones musculo-esqueléticas diagnosticadas
previamente con ultrasonografía en MB, en equinos
deportivos, de entre 2 y 15 años, de ambos sexos y
distintas razas.
La evaluación ecográfica en MB y con DPI fue
realizada siempre por el mismo operador. Se utilizó
un ecógrafo portátil Sonoscape E2 con sonda lineal de
7-11 Mhz y convexa de 2,5-5 Mhz. Se realizó sujeción
química con xilacina (0,5 mg/kg vía endovenosa) para
evitar el movimiento del paciente durante el estudio.
La evaluación en MB de las distintas regiones
anatómicas se llevó a cabo utilizando las técnicas
ultrasonográficas descriptas por Denoix, previa
tricotomía del área a explorar y aplicación del gel de
acoplamiento. Para la evaluación con DPI se optimizó
la sensibilidad del equipo para la detección de flujos
bajos con la menor frecuencia de repetición de
impulsos (PRF) y el filtro de pared más bajo posible.
La ganancia de color se fijó justo por debajo del nivel
de ruido y el foco se colocó donde se requería la
mayor sensibilidad.
Las afecciones musculo esqueléticas evaluadas
fueron variadas involucrando estructuras; tendinosas
(n=46), ligamentosas (n=36), óseas (n=22) y
sinoviales (n=18). Todas las lesiones tendinosas del
Ferreira V. et al.: Ultrasonografía del equino. Rev. Vet. 33: 2, 235-240, 2022 237

estudio fueron del tendón del flexor digital superficial

(FDS), mientras que las ligamentosas fueron del
ligamento suspensor del nudo (LSN), las afecciones
óseas involucraron el hueso metacarpiano III (10/22),
sesamoideos (5/22), tibia (5/22), húmero (2/22) y las
afecciones sinoviales comprometieron la vaina digital
gran sesamoideana (5/18), art del nudo (6/18) y art
femorotibial medial (7/18).
Las tendinopatías y desmopatías fueron
clasificadas en etapas según el momento de la
evaluación en: aguda (1-30 días pos-lesión), reparación
temprana (30-120 días pos-lesión), reparación tardía Figura 1. Estudio ultra-sonográfico con DPI;
(120-180 días pos-lesión), crónica (más de 180 días desmopatía en etapa de reparación
pos-lesión) y crónica reagudizada. Las alteraciones temprana de la rama medial del LSN de un SPC de 3
óseas y sinoviales se clasificaron según su curso en: años. Nótese la presencia
agudas (1-30 días evolución) y crónicas (más de 30 de señal DPI grado II intra-ligamentosa debido a la
días de evolución). neo-vascularización.
Se evaluaron los cambios hipervasculares
mediante una escala semi-cuantitativa de graduación Se observó señal en 3/11 desmopatías que se
de la señal DPI, escala de Omeract, utilizada en encontraban en etapa aguda, en 3/11 lesiones que
medicina humana: Grado 0: ausencia de señal; Grado transitaban la etapa de reparación temprana, no se
1: señal solitaria; Grado 2: señal confluyente que observó presencia de señal en las desmopatías que
ocupa menos del 50% del área; Grado 3: señal que se encontraban en estadios de reparación tardía y en
ocupa más del 50% del área. etapa crónica, mientras que si observó en 5/11 lesiones
crónicas reagudizadas.
RESULTADOS Con respecto a las tendinopatías del FDS
se visualizó señal DPI en 8/46, siendo únicamente
De la totalidad de las lesiones musculo- visualizado el grado I (8/8) (Figura 2). De las
esqueléticas evaluadas (n=122) se observó presencia afecciones que generaron señal DPI; 1/8 estaba
de señal DPI en 46/122 siendo de grado I (29/46), transitando la etapa aguda, 5/8 estaban en la etapa de
seguidas del grado II (13/46) y por último de grado reparación temprana, 1/8 en la etapa de reparación
III (4/46). Las afecciones musculo-esqueléticas en las tardía, 1/8 en etapa crónica reagudizada y ninguna
que no se obtuvo señal DPI fueron 76/122. transitaba la etapa crónica.
Las lesiones óseas fueron, en proporción, en
las que se visualizó con mayor frecuencia presencia
de señal DPI, siendo en 16/22 equivalente a un 73%.
En las alteraciones sinoviales se obtuvo señal en 9/18
representando un 50%, mientras que en las ligamentosas
se visualizó en 11/36 siendo un 30% y por último en las
tendinosas en 8/46 representando un 17%.
A nivel óseo fue muy frecuente la presencia
de señal DPI en afecciones agudas (10/16) como
periostitis y exostosis de los metacarpianos, fisuras/
fracturas por estrés de tibia, siendo en éstas últimas
donde se obtuvo el grado máximo de señal (grado III).
A nivel sinovial la señal DPI estuvo presente Figura 2. a, b): estudio en Modo B; tendinopatía, en
en inflamaciones sinoviales agudas (6/9) siendo etapa de reparación temprana, del tendón del FDS de
menos frecuente en las crónicas (3/9), el grado I fue un equino SPC de 5 años, c y d): estudio con DPI del
el más visualizado (6/9), seguido del grado II (2/9) y mismo tendón, nótese la presencia de señal DPI grado
por último el grado III (1/9). I intratendinosa.
De las desmopatías del LSN que generaron
señal DPI (11/36) principalmente se observó a nivel
de lesiones que comprometían a las ramas del LSN
(7/11) (Figura 1), seguidas por las lesiones del cuerpo
(2/11) y del origen (2/11) en la misma proporción.
238 Ferreira V. et al.: Ultrasonografía del equino. Rev. Vet. 33: 2, 235-240, 2022

DISCUSIÓN sanguíneo de baja velocidad a nivel microvascular,

Cabe destacar en nuestro estudio la presencia
de señal DPI en un gran número de lesiones músculo-
esqueléticas. En las afecciones óseas fue donde se
obtuvo una mayor presencia de señal DPI y de mayor
grado. En periostitis de los metacarpianos, fisuras por
estrés y fracturas permitió identificar el aumento de la
vascularización del periostio a nivel del área de lesión
y determinar si dicha alteración cortical se encontraba
o no reactiva (Figura 3), similar a lo reportado en
medicina humana 7, 8, 9, 10 .
La presencia de señal a nivel de las afecciones
sinoviales también fue frecuente, reflejando la gran
sensibilidad del DPI para la detección del flujo
lo que permitió evaluar la hiperemia sinovial y en
consecuencia distinguir entre una fase inflamatoria
sinovial activa de una crónica, al igual que lo descrito
en medicina humana 11, 12 .
En el ligamento y tendón sano no fue posible
identificar señal DPI, pero se detectó flujo sanguíneo
de baja velocidad presente en los procesos de
reparación, debido a la neo-vascularización en el
sitio de lesión, en concordancia con lo reportado por
otros autores 13, 14, 15 . La irrigación sanguínea de los
tendones es provista por una fina red neurovascular
ubicada dentro de la matriz inter-fascicular por donde
los pequeños vasos discurren paralelos al eje largo del
tendón, sin penetrar en los haces de colágeno 16 .

Figura 3: a) Estudio en Modo B; irregularidad marcada del periostio de la extremidad próximo-lateral de la

tibia de un SPC de 2 años sugerente de fisura por estrés. b) Estu- dio con DPI sobre la misma tibia, nótese la
intensa señal DPI (grado III) observada a ni-vel de la superficie perióstica, lo que indica una gran reactividad
de dicha superficie de-bido al proceso inflamatorio. c) Estudio con DPI del mismo paciente a los 25 días de
re-poso y tratamiento, obsérvese la disminución marcada de la señal DPI (grado I) lo que indica disminución
de la reactividad cortical.
La red vascular fisiológica del tendón suele mediante US en MB y DPI) y el hallazgo posterior del
ser demasiado pequeña para ser detectada mediante daño articular evidenciado mediante la radiología 24 .
el estudio Doppler en condiciones normales, pero los La presencia de señal DPI tendría también un rol en
vasos de neo-vascularización que se desarrollan con la la predicción de recaídas en pacientes con remisión
inflamación o ruptura fibrilar, pueden hacerse visible clínica de la enfermedad 25 .
e ir disminuyendo posteriormente su intensidad de Si bien queda mucho por investigar sobre
señal con el progreso de la reparación tendinosa 17, 18, su aplicación en medicina equina, hay datos ultra-
permitiendo tener un signo ecográfico objetivo para el sonográficos que pueden alertar y guiar en la predicción
seguimiento de las lesiones tendinosas y ligamentosas. de posibles futuras lesiones, por ejemplo, la presencia
La ultrasonografía con Doppler DPI ha de actividad cortical visualizada mediante el DPI en
demostrado ser útil para la detección de la micro- el hueso aparentemente sano y sin signos radiológicos
vasculatura en los tendones de Aquiles y de la rótula en evidentes, es un dato predictivo importante a tener en
el hombre 19, 20. Los primeros informes que describen cuenta en las fracturas por estrés o entesopatías 7, 8, 9,
la aplicación de la ultra-sonografía Doppler para la 10
.
evaluación de las ramas del ligamento suspensorio
equino y la tendinopatía del SDF muestran resultados CONCLUSIÓN
prometedores 21, 22 .
El valor de la US para predecir la progresión del La US en MB se ha convertido en los
daño anatómico ha sido establecido en varios estudios últimos años en una herramienta de gran utilidad en
de medicina humana 15, 23 . Uno de los principales la evaluación de las afecciones músculo-esqueléticas
objetivos en la evaluación musculo-esquelética es en el equino, si bien este es un estudio preliminar
predecir el futuro daño estructural de los tejidos y faltan más resultados para poder aplicar análisis
afectados. Se demostró, en medicina humana, una estadísticos, según la experiencia de los autores, el
asociación entre la presencia de sinovitis (visualizada DPI complementando los estudios ultrasonográficos
Ferreira V. et al.: Ultrasonografía del equino. Rev. Vet. 33: 2, 235-240, 2022
en MB, ha demostrado ser una herramienta de
gran utilidad para el diagnóstico, seguimiento de la
evolución de las lesiones, evaluación de la respuesta
terapéutica y como valor predictivo de posibles
lesiones futuras en medicina equina.
Agradecimientos
Los autores agradecen a la Dra. Landoni, al Dr.
Muriel y al Dr. Lindner por su apoyo y colaboración en
la realización de este trabajo. En cuanto a la declaración
de conflicto de intereses, los autores declaran que no
existe conflicto de intereses, incluyendo entre estos
últimos las relaciones financieras, personales o de
otro tipo con otras personas u organizaciones que
pudieran influir de manera inapropiada en el trabajo.
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Cortéz, L. et al.: Suplementación de glutamina en lechones. Rev. Vet. 33: 2, 241-245, 2022 241

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 241-245, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Suplementación de glutamina sobre el desempeño productivo

y variables bioquímicas en lechones destetados
Cortéz, L.1; More, M.2; Aragón, E.1; Mena, R.1; Quisirumbay, G.J.1,3
1
Facultad Medicina Vet. & Zoot., Univ. Central Ecuador. 2Escuela Prof. de Ing. Agrop., Fac. Cs. Agrarias,
Univ. Nac. San Antonio, Cusco, Perú. 3Centro Exp.
Uyumbicho, Fac. Med. Vet. & Zoot. Univ. Central Ecuador.
E-mail: jrquisirumbay@uce.edu.ec

Resumen
Cortéz, L.; More, M.; Aragón, E.; Mena, R.; Quisirumbay, G.J.: Suplementación de glutamina
sobre el desempeño productivo y variables bioquímicas en lechones destetados. Rev. Vet. 33: 2,
241-245, 2022. Uno de los mayores desafíos en la producción porcina es el destete, que implica
una marca reducción en el consumo de alimento y desgaste metabólico. Atrofia en vellosidades
intestinales y menor digestión y absorción de nutrientes se reportan como consecuencia del destete.
Investigaciones han demostrado que la suplementación de glutamina favorece la morfo-función
intestinal y el desempeño productivo en lechones. El objetivo de este trabajo de investigación fue
evaluar el efecto de la suplementación de glutamina en lechones destetados mediante la medición
del rendimiento productivo y pruebas bioquímicas en sangre. La investigación se realizó en el
Centro Experimental Uyumbicho (CEU) perteneciente a la Facultad de Medicina Veterinaria y
Zootecnia de la Universidad Central del Ecuador. Se utilizó un total de 8 lechones (Landrace x
Yorkshire x Pietrain x Duroc). Los lechones se distribuyeron de manera aleatoria en cada uno de
los 4 tratamientos: T1 = testigo 1 (sin suplemento lácteo), T2 = testigo 2 (suplemento lácteo), T3
= suplemento lácteo + glutamina (0,5%), T4 = suplemento lácteo + glutamina (1%). Los lechones
que recibieron glutamina al 0,5% presentaron la mayor ganancia diaria de peso (0,404 kg día-1)
y la mejor conversión alimenticia (1,16) entre los 28 a 35 días edad (semana 1). Una tendencia
similar se vio en la semana 5 (57-63 días de edad), 0,877 g día-1 y 1,78 respectivamente. No hubo
diferencia en las variables bioquímicas evaluadas entre los 4 grupos. El uso de un sustituto lácteo
y la suplementación de glutamina tendrían el potencial de reducir los efectos adversos posteriores
al destete en lechones.

Palabras clave: lechones, destete, glutamina, suplemento.

Abstract
Cortéz, L.; More, M.; Aragón, E.; Mena, R.; Quisirumbay, G.J.: Evaluation of glutamine
supplementation on productive performance and biochemical variables in weaning piglets.
Rev. Vet. 33: 2, 241-245, 2022. One of the biggest challenges in pig production is the weaning,
which implies a marked reduction in feed intake and metabolic wear. Intestinal villus atrophy and
decreased digestion and absorption of nutrients are reported as a consequence of weaning. Research
has shown that glutamine supplementation favors intestinal morpho-function and productive
performance in piglets. The objective of this research was to evaluate the effect of glutamine
supplementation in weaned piglets by measuring productive performance and biochemical blood
markers. The research was carried out at the Uyumbicho Experimental Center (CEU) belonging
to the Faculty of Veterinary Medicine and Zootechnics of the Central University of Ecuador. A
total of 8 piglets (Landrace x Yorkshire x Pietrain x Duroc) were used. The piglets were randomly
distributed in each of the 4 treatments: T1 = control 1 (without dairy supplement), T2 = control 2
(dairy supplement), T3 = dairy supplement + glutamine (0.5%), T4 = dairy supplement + glutamine

Recibido: Marzo 2022. Aceptado: Julio 2022.

242 Cortéz, L. et al.: Suplementación de glutamina en lechones. Rev. Vet. 33: 2, 241-245, 2022

(1%). Piglets receiving 0.5% glutamine had the highest daily weight gain (0.404 kg day-1) and the
best feed conversion (1.16) between 28 and 35 days of age (week 1). A similar trend was seen at
week 5 (57-63 days of age), 0.877 g day-1 and 1.78, respectively. There was no difference in the
biochemical variables evaluated between the 4 groups. The use of a milk replacer and glutamine
supplementation would have the potential to reduce post-weaning adverse effects in piglets.

Keywords: piglets, weaning, glutamine, supplement.

INTRODUCCIÓN Una multitud de factores contribuyen al estrés

El destete es un período muy estresante en la
vida de un lechón. En la naturaleza ocurre como un
proceso gradual entre las 10 y 12 semanas de edad,
que es cuando el tracto gastrointestinal (TGI) madura,
mientras que en las granjas porcinas comerciales el
destete ocurre repentinamente entre las tres y cuatro
semanas de edad 16 .
La estructura intestinal es, por lo tanto, crucial
para la salud y el rendimiento futuros de todos los
animales jóvenes. El bajo consumo de alimento
inmediatamente después del destete es responsable de
alteraciones morfológicas intestinales como la atrofia
de las vellosidades 14 , con la consiguiente menor
absorción de nutrientes y menor energía disponible.
Desafortunadamente, este fenómeno ocurre
durante un período en el que el crecimiento es crucial,
especialmente porque el peso corporal posterior al
destete está altamente correlacionado con el peso
corporal final 3 .
Entre todos los factores estresantes involucrados
en el destete temprano, la separación materna es uno
de los más grandes, sin embargo, también existen
factores estresantes psico-sociales que incluyen el
transporte, la mezcla, las peleas y el establecimiento
de una nueva jerarquía social, o factores estresantes
inmunológicos como la vacunación.
Además, un cambio repentino en la
composición del alimento de base láctea a base
sólida (ingredientes vegetales) asociado a un sistema
digestivo inmaduro puede causar una reducción en la
digestión y adsorción de nutrientes: esto puede deberse
a una mala secreción de ácido clorhídrico que no es
capaz de producir cantidades suficientes de enzimas
digestivas apropiadas para hacer frente a los nuevos
componentes de la dieta 3 . El tracto gastrointestinal
juega un papel crucial en la digestión y absorción de
nutrientes, proporcionando funciones de barrera, así
como el metabolismo de aminoácidos 15 .
Su salud es de vital importancia para el
crecimiento y desarrollo de la especie porcina. Con
la aplicación generalizada del destete temprano, los
lechones están expuestos inmediatamente a muchos
factores estresantes ambientales y psicosociales que
impactan en la estructura y función intestinal 13, 17 .
posterior al destete, incluidos los nutricionales,
psicológicos (mezcla de diferentes camadas y retiro
de la cerda), ambientales (cambio de jaulas de parto
a corrales de destete) y otros 6, 17 . El estrés del destete
suele ir acompañado de una reducción de la ingesta
de alimento, una disminución de la utilización de
nutrientes, un bajo rendimiento del crecimiento y una
mayor susceptibilidad a las enfermedades 6 . Varios
artículos demuestran que el estrés del destete también
afecta negativamente el desarrollo y la función
intestinal. Estos cambios provocan una digestión y
absorción anormales, un rendimiento deficiente del
crecimiento y un aumento de las tasas de diarrea 6 .
Se necesitan varias medidas para mantener el
desarrollo intestinal y el crecimiento del cerdo después
del estrés del destete. Una gran cantidad de evidencia
indica que, en lechones destetados, la glutamina, un
aminoácido funcional, puede mejorar el rendimiento
del crecimiento y la morfología intestinal, reducir
el daño oxidativo, estimular la proliferación de
enterocitos, modular la supervivencia y muerte celular
y mejorar la permeabilidad paracelular intestinal 4 .
MATERIAL Y MÉTODOS
El presente trabajo de investigación se realizó en el
módulo porcino del Centro Experimental Uyumbicho
(CEU) perteneciente a la Facultad de Medicina
Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Central del
Ecuador. Se utilizó un diseño completamente al azar,
cada tratamiento tuvo 2 repeticiones y cada repetición
incluyó 1 lechón. Utilizándose un total de 8 lechones,
la línea genética utilizada fue Landrace x Yorkshire x
Pietrain x Duroc.
Los lechones fueron destetados a los 28 días
de edad y se distribuyeron de manera aleatoria en
cada uno de los 4 tratamientos: T1 = testigo 1 (sin
suplemento lácteo), T2 = testigo 2 (suplemento lácteo),
T3 = suplemento lácteo + glutamina (0,5%), T4 =
suplemento lácteo + glutamina (1%). El suplemento
lácteo con o sin glutamina fue administrado por un
periodo de 15 días (desde los 28 hasta los 42 días de
edad). Los lechones fueron alimentados con 2 fases de
un alimento comercial cuya composición se muestra
en la Tabla 1.
Cortéz, L. et al.: Suplementación de glutamina en lechones. Rev. Vet. 33: 2, 241-245, 2022 243

Tabla 1. Contenido nutricional de la dieta comercial alimenticia) se midió de manera semanal desde los 28
utilizada. hasta los 70 días de edad.
Las pruebas bioquímicas en sangre, creatina
Fase 2 Fase 3 cinasa (CK), urea, lactato deshidrogenasa (LDH),
Edad (días) 28 - 49 50 – 70 creatinina, proteínas totales, albúminas y globulinas, se
midieron a los 42 días. El análisis estadístico se realizó
proteína cruda (min.) (%) 21 18 mediante proc GLM en el sistema SAS versión 9.0.
grasa (min.) (%) 5 4
fibra cruda (máx.) (%) 5 5 RESULTADOS
cenizas (máx.) (%) 7 7
En la Tabla 2 se aprecia que el grupo que recibió
humedad (máx.) (%) 12 12
únicamente suplemento (sin Gln) presentó una mayor
ganancia diaria de peso en las semanas 2, 3, 4 y en el
periodo total de 28 a 70 días de edad. El grupo que
La Fase 1 (1-27 días de edad) del programa de
recibió glutamina al 0,5% presentó mayores ganancias
alimentación la recibieron todos los lechones antes
de peso en las semanas 1 y 5 de evaluación. El testigo
del destete. El rendimiento productivo (ganancia
1 mostró una mayor GDP únicamente en la semana 6.
diaria de peso, consumo de alimento y conversión

Tabla 2. Ganancia diaria de peso semanal y total.

Glutamina Glutamina
Semanas Días Testigo 1 Testigo 2 p-valor
0.5% 1%
1 28-35 0,379 0,381 0,404 0,359 0,98
2 36-42 0,483 0,658 0,597 0,496 0,38
3 43-49 0,805 0,809 0,708 0,668 0,23
4 50-56 0,610 0,811 0,714 0,656 0,90
5 57-63 0,714 0,779 0,877 0,646 0,65
6 64-70 1,201 1,039 1,071 0,994 0,56
TOTAL 28-70 0,683 0,746 0,740 0,637 0,45

En la Tabla 3 se puede apreciar que el grupo que recibió suplemento presentó la mayor ingesta de alimento
en las semanas 1, 2, 4, 5 y total. El tratamiento que recibió Gln al 0,5% presentó el mayor consumo de alimento
en las semanas 3 y 6.

Tabla 3. Consumo diario promedio de alimento semanal y total.

Glutamina Glutamina
Semanas Días Testigo 1 Testigo 2 p-valor
0,5% 1%
1 28-35 443,86 465,14 464,22 446,00 0,99
2 36-42 572,07 748,43 696,50 654,36 0,87
3 43-49 938,30 1.077,00 1.078,57 920,58 0,36
4 50-56 1.036,72 1.320,57 1.155,86 1.066,29 0,70
5 57-63 1.353,08 1.669,72 1.473,71 1.185,00 0,66
6 64-70 1.761,21 1.806,00 1.895,57 1.639,15 0,08
TOTAL 28-70 1.020,06 1.184,57 1.130,04 987,80 0,12

Respecto a la conversión alimenticia en la Tabla 4 se aprecia que el grupo testigo 1 presentó los valores
más bajos en las semanas 3, 6 y total. El grupo Gln 0,5% mostró los valores más bajos en las semanas 1 y 5. El
grupo testigo 2 presentó la CA más baja en la segunda semana con un valor de 1,13.
244 Cortéz, L. et al.: Suplementación de glutamina en lechones. Rev. Vet. 33: 2, 241-245, 2022

Tabla 4. Conversión alimenticia semanal y total.

Glutamina Glutamina
Semanas Días Testigo 1 Testigo 2 P-valor
0,5% 1%
1 28-35 1,17 1,28 1,16 1,27 0,86
2 36-42 1,25 1,13 1,15 1,30 0,95
3 43-49 1,17 1,33 1,53 1,39 0,33
4 50-56 1,69 1,65 1,72 1,82 0,98
5 57-63 1,93 2,11 1,78 1,89 0,96
6 64-70 1,47 1,77 1,77 1,68 0,57
TOTAL 28-70 1,49 1,59 1,53 1,55 0,90

En la Tabla 5 se presenta el resultado de las variables bioquímicas, el grupo que recibió Gln al 0,5%
presentó los valores más altos en las variables creatinquinasa, creatinina, proteínas totales, albúmina y
globulinas, sin embargo, no hubo diferencias significativas en los grupos evaluados.

Tabla 5. Variables bioquímicas evaluadas en lechones a los 42 días de edad.

Glutamina Glutamina
Variable Testigo 1 Testigo 2
0,5% 1% p-valor
CK (UL) 1409 1534 1916 1599 0,7456
urea (mMol/L) 4,2 3 3,35 3,95 0,0989
LDH-P (UL) 838 816,7 816 815,5 0,6419
creatinina (uMol/L) 127,75 125,55 149,55 136,2 0,3043
proteínas totales (g/dl) 43 44,85 45,75 44,8 0,7485
albúmina (g/dl) 13,7 12,6 16,2 15,1 0,504
globulina (g/dl) 30,8 30,65 31 29,9 0,9725

DISCUSIÓN glutamina afecta de manera negativa el desempeño

Los lechones destetados además de experimentar
un bajo consumo de alimento, experimentan cambios
fisiológicos en la estructura y función (actividades
enzimáticas y absorción o secreción) del intestino.
Estos cambios fisiológicos afectan la capacidad de
absorción del intestino delgado, lo que probablemente
puede influir en la eficiencia alimenticia 10, 11 .
En este trabajo de investigación se encontró
que los lechones que no recibieron ningún tipo de
suplementación (testigo 1) y aquellos que recibieron
glutamina al 1% presentaron los valores más bajos en
cuanto a la ganancia diaria promedio de peso. Este
último efecto puede estar relacionado a un efecto
antagónico en la absorción del resto de aminoácidos
de la dieta 8 .
Para la variable consumo diario promedio de
alimento se encontró una tendencia similar en los
grupos testigo 1 (1020,06 g día-1) y Gln 1% (987,80 g
día-1), ya que fueron los grupos con el menor consumo
de alimento en varias semanas de evaluación, así
como en el análisis global, lo cual además explicaría
la menor ganancia diaria de peso encontrada en estos
grupos.
En estudios realizados en pollos de engorda se
reporta que la suplementación de niveles altos de
productivo, debido a que causan una reducción
del consumo de alimento, como se observa en los
resultados encontrados cuando se utilizó un nivel de
4%. Adicionalmente, los niveles altos de Gln generan
un desbalance con los demás aminoácidos de la dieta,
afectando su absorción intestinal a pesar de evidenciar
un aumento en el tamaño de las vellosidades
intestinales 1 .
Se informó que el destete induce cambios
estructurales y funcionales tanto agudos como
duraderos en el intestino delgado, incluido el
acortamiento de las vellosidades (atrofia de las
vellosidades) y un aumento en la profundidad de las
criptas (elongación de las criptas) después del destete
2
.
Existen varios marcadores intestinales asociados
con el destete que pueden permitir que se realicen
investigaciones para reducir los cambios fisiológicos
asociados con el destete 7 . Después del destete, los
cerdos también experimentan una reducción de las
actividades de las enzimas digestivas del borde en
cepillo 10 .
Se reportaron reducciones en la actividad de
lactasa y amino-peptidasa del día 2 al día 15 después
del destete, mientras que la maltasa se redujo durante
el día 2 después del destete, luego aumentó del día
Cortéz, L. et al.: Suplementación de glutamina en lechones. Rev. Vet. 33: 2, 241-245, 2022
8 al día 15 post-destete 5 . Además, las secreciones
pancreáticas tuvieron una disminución transitoria
hasta el día 15 después del destete, antes de que la
actividad de la tripsina y la amilasa comenzaran a
aumentar.
Respecto a los parámetros bioquímicos se
puede apreciar que no hubo diferencia significativa
entre los 4 grupos, sin embargo, el grupo testigo 1
(sin suplementación) presentó el valor más elevado
de urea 4,2 mMol L-1 (p=0,09) y LDH-P 838 U L-1
(p=0,6419), asociados a un posible aumento del
catabolismo proteico y daño tisular 9 .
El grupo que recibió la Gln al 0,5% presentó los
valores más elevados en las variables CK (1916 U L-1),
creatinina (149,55 uMol L-1), proteínas totales (45,75
g dl-1), albúmina (16,2 g dl-1) y globulina (31 g dl-1).
Sin embargo, todas las variables antes mencionadas
se encuentran dentro de los rangos considerados
como normales 12 .
La suplementación de Gln al 0,5% presenta
resultados interesantes sobre el desempeño productivo
de los lechones y podría considerarse como una
opción firme en futuros trabajos de investigación. Con
los resultados obtenidos de este trabajo es importante
considerar incrementar el número de repeticiones por
tratamiento para aumentar la posibilidad de detectar
diferencias significativas en caso de existirlas.
Adicionalmente, se podría acortar el tiempo
de administración del suplemento y el periodo de
evaluación.
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246 Martín P.L. et al.: Hepatozoonosis en caninos. Rev. Vet. 33: 2, 246-252, 2022

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 246-252, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Hepatozoonosis en caninos domésticos del Gran Buenos Aires

Martin, P.L.1; Pintos, M.E.1; Aquino, S.2; Vidal, D.A.1; Arauz, M.S.1

1
Servicio Central de Laboratorio del Hospital Escuela, Facultad de Ciencias
Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata (UNLP), Argentina.
2
Centro de Zoonosis de la Municipalidad de Quilmes, Buenos
Aires, Argentina. E-mail: mpaulalorena@gmail.com

Resumen
Martin, P.L.; Pintos, M.E.; Aquino, S.; Vidal, D.A.; Arauz, M.S.: Hepatozoonosis en caninos
domésticos del Gran Buenos Aires. Rev. Vet. 33: 2, 246-252, 2022. La hepatozoonosis canina
(HC) es una enfermedad transmitida por la ingestión de garrapatas infectadas con Hepatozoon
canis que puede causar signos clínicos graves dependiendo de la inmunidad del hospedador. El
objetivo de este trabajo fue detectar la presencia de H. canis en muestras de caninos sin signología
provenientes del Gran Buenos Aires a través de la observación microscópica en extendidos de
sangre periférica y capa flogística. Posteriormente, se determinó la casuística de la HC en los dif-
erentes barrios, la asociación entre las variables raza, sexo, edad y la presencia de garrapatas con
el diagnóstico hematológico positivo de HC y la asociación entre las alteraciones del hemograma
y la presencia de HC. De las 207 muestras 10 (4,83%) fueron positivas mediante la observación
en frotis de sangre periférica y 15 (7,24%) en frotis de sangre periférica y extendidos de la capa
flogística. Con respecto a las variables evaluadas, la HC fue más frecuente en adultos, hembras, de
raza mestiza y con presencia de garrapatas, no obstante las diferencias no fueron significativas. El
mayor porcentaje de muestras positivas se observó en aquellos pacientes provenientes de los barri-
os de Solano y Quilmes. En relación a las alteraciones hematológicas en el grupo de muestras pos-
itivas a HC se observó anemia (20%), leucocitosis (40%), linfocitosis (26,6%) y eosinofilia (80%)
en un mayor porcentaje con respecto al grupo de muestras negativas, no obstante las diferencias
entre ambos grupos no fueron significativas (p>0,05). Este estudio corrobora la endemicidad de la
HC en el Gran Buenos Aires y demuestra que la prevalencia varía con la procedencia de las mues-
tras y del momento en que se realiza el estudio. Asimismo, refleja la utilidad de la concentración
leucocitaria para aumentar las probabilidades de observación positiva de gamontes cuando no se
disponga de métodos moleculares.

Palabras claves: hepatozoonosis, caninos, Argentina.

Abstract
Martin, P.L.; Pintos, M.E.; Aquino, S.; Vidal, D.A.; Arauz, M.S.: Hepatozoonosis in domestic
canines of Greater Buenos Aires. Rev. Vet. 33: 2, 246-252, 2022. Canine hepatozoonosis (CH) is
a disease transmitted by ingestion of ticks infected with Hepatozoon canis that can cause severe
clinical signs depending on host immunity. The objective of this work was to detect the presence
of H. canis in blood samples from clinically healthy dogs from Greater Buenos Aires through
microscopic observation in smears of peripheral blood and buff y coat. Secondly, the prevalence
of CH in the different neighbor hoods, the association between the variables breed, sex, age and
the presence of ticks with the positive hematological diagnosis of CH and the association be-
tween hematological alterations and the presence of CH were determined. Of the 207 samples, 10
(4.83%) were positive by observation in peripheral blood smears and 15 (7.24%) in pH logistic

Recibido: Abril 2022. Aceptado: Junio 2022.

Martín P.L. et al.: Hepatozoonosis en caninos. Rev. Vet. 33: 2, 246-252, 2022 247

layer smears. With respect to the variables evaluated, CH was more frequent in adults, females,
mixed-breed and with the presence of ticks; however, the differences were not significant. The
highest percent age of positive samples was observed in those patients from the neighbor hoods
of Solano and Quilmes. With respect to the hematological alterations, anemia (20%), leukocytosis
(40%), lymphocytosis (26.6%) and eosinophilia (80%) were higher in the group of positive sam-
ples to CH, however, the differences were not significant (p>0.05). There four study corroborate
the endemic of CH in Greater Buenos Aires and show that the prevalence varies with the area from
which the samples were obtained and the moment in which the study was conducted. In addition,
it reflects the use fullness of the leukocyte concentration to increase the probabilities of positive
observation of gamontes when molecular methods are not available.

Key words: hepatozoonosis, canines, Argentina.

INTRODUCCIÓN prevalencia del 2.3% a partir de muestras remitidas al

Las enfermedades transmitidas por vectores en
caninos representan un desafío para el veterinario
debido a la presentación clínica inespecífica, la pres-
encia de infecciones subclínicas y la coinfección de
agentes infecciosos 19 . Entre ellas, la hepatozoonosis
canina (HC) constituye una enfermedad infecciosa de
distribución mundial con importancia en la salud an-
imal debido a que puede ocasionar cuadros clínicos
graves especialmente en cachorros o en pacientes in-
muno-suprimidos 3, 13 .
La infección con Hepatozoon canis se trans-
mite principalmente por la ingestión de la garrapata
Rhipicephalus sanguineus sensu lato que contienen
oocistos maduros. Una vez infectados, los caninos
pueden padecer una enfermedad de distinta grave-
dad dependiendo de la carga parasitaria, presencia de
coinfecciones y estado inmune del paciente 3 .
El diagnóstico de HC se realiza generalmente
mediante la detección por microscopía óptica de ga-
montes en extendidos sanguíneos de sangre periférica
o de la capa flogística o menos frecuentemente por
técnicas moleculares como la reacción en cadena de
la polimerasa (PCR) 4, 14 .
En Argentina, la presencia de H. canis se co-
municó por primera vez en 1999 en la zona oeste
del Gran Buenos Aires 9, 21 . Mientras que la carac-
terización molecular de las especies de Hepatozoon
circulantes se realizó en el año 2007 8 . Posterior a
su primera descripción, los hallazgos de casos de HC
se han notificado en otras zonas de la provincia de
Buenos Aires como San Fernando 18, San Andrés de
Giles 17, Lomas de Zamora 8, zona oeste 10 y La Plata
23
. Asimismo, la HC ha sido descrita en las provincias
de Chubut 5, Mendoza 12, San Luis 2, La Pampa 1 y
Santa Fe 20 .
Por el contrario, existen escasos estudios sobre
la prevalencia de la HC. Uno de ellos, realizado en
la zona sur de Gran Buenos Aires, reportó un valor de
laboratorio por distintas causas mediante observación
microscópica de extendidos de sangre periférica 24 .
Otro estudio, realizado en Ciudad Autónoma
de Buenos Aires (CABA), Bahía Blanca, Castelli,
Salsipuedes, Merlo y San Miguel reveló un 2,5 % de
positivos mediante una técnica de PCR 7 .
El objetivo de este trabajo fue detectar la
presencia de H. canis en muestras de caninos sin si-
gnología provenientes del Gran Buenos Aires a través
de la observación microscópica en extendidos de san-
gre periférica y capa flogística. Además, determinar si
existe asociación entre la infección y variables epide-
miológicas y hallazgos hematológicos.
MATERIAL Y MÉTODOS
Muestras
En el trabajo se utilizaron muestras de caninos
que asisten al centro de Zoonosis de la Municipalidad
de Quilmes, Buenos Aires, Argentina con motivo
de esterilización quirúrgica en el periodo compren-
dido entre septiembre 2018 y noviembre 2019. Este
centro recibe pacientes provenientes del conjunto
compuesto por las 24 jurisdicciones de la provincia
de Buenos Aires conocidas como Partidos del Gran
Buenos Aires (GBA). Se incluyeron sólo pacientes
caninos mayores de 5 meses sin distinción de sexo ni
raza y se registraron las variables correspondientes a
sexo, edad, raza, antecedentes de garrapatas y zona
de residencia. En el caso de la edad, se dividieron las
muestras en dos grupos: joven (≤1 año) y adulto (>1
año), mientras que en relación a la raza se clasificaron
en puros y mestizos. Se utilizaron muestras de sangre
con anticoagulante ácido etilen diamino tetracetico
(EDTA) extraídas de la vena cefálica antebraquial,
safena o yugular dependiendo de la talla del animal.
Las mismas fueron mantenidas a 4°C y procesadas
dentro de las 24 horas de extraídas.
248 Martín P.L. et al.: Hepatozoonosis en caninos. Rev. Vet. 33: 2, 246-252, 2022
Pruebas hematológicas
Los parámetros hematológicos fueron evalua-
dos mediante la realización de un hemograma utili-
zando un contador celular Sysmex K-21. El frotis san-
guíneo fue realizado para la obtención de la fórmula
leucocitaria relativa (FLR), fórmula leucocitaria ab-
soluta (FLA) y morfología de las células sanguíneas.
Las anormalidades hematológicas fueron clasificadas
de la siguiente manera: anemia (hematocrito <37),
leucocitosis (>17.000 leucocitos μl-1), neutrofilia
(>11.500 neutrσfilos μl-1), linfocitosis (>4.800 linfoc-
itos μl-1), eosinofilia (>1.250/μl), desvío a la izquierda
(>300 neutrófilos en banda μl-1) y trombocitopenia
(<200.000 μl-1) 26 .
Detección del agente
Para la búsqueda de gamontes de Hepatozoon
spp., se realizaron extendidos sanguíneos de cada
una de las muestras con anticoagulante EDTA para
la observación microscópica. Los mismos fueron
teñidos con el colorante May Grünwald-Giemsa
(Merk®). Adicionalmente, con el fin de aumentar las
probabilidades de detección de estructuras parasitarias,
se realizó un extendido de la capa flogística obtenida a
través del capilar de micro-hematocrito. La presencia
y el nivel de parasitemia fue determinada observando
100 campos microscópicos por extendido de sangre
periférica y capa flogística a 1.000X. La parasitemia
absoluta fue calculada multiplicando el porcentaje
de los neutrófilos parasitados por el número total de
neutrófilos μl-1 8 . Los niveles de parasitemia fueron
expresados en gamontes por μl y se clasificaron de
acuerdo al protocolo previamente publicado 8 en: alto
(>800 gamontes μl-1), moderado (100-800 gamontes
μl-1) y bajo (<100 gamontes μl-1).
Análisis estadístico
Se realizó un análisis descriptivo mediante el
cálculo de las proporciones y promedio de los datos
epidemiológicos y resultados hematológicos. La prue-
ba de CHI-Cuadrado fue utilizada para determinar
diferencias significativas (p<0,05) entre los grupos
de pacientes con respecto a los datos epidemiológicos
y alteraciones hematológicas (anemia, leucocitosis,
neutrofilia, linfocitosis, eosinofilia, desvío a la izqui-
erda y trombocitopenia). El valor de Odds ratio (OR)
e Intervalo de Confianza 95% (IC 95%), fueron uti-
lizados para estimar la asociación entre las variables
dependientes (presencia de Hepatozoon sp / ausencia
de Hepatozoon sp y las variables independientes rele-
vadas en los datos epidemiológicos (raza, sexo, edad,
ectoparásitos, procedencia).
RESULTADOS
Se incluyeron en el estudio un total de 207
muestras de caninos sin sintomatología clínica. De las
207 muestras 10 (4,83%) fueron positivas mediante la
observación en frotis sanguíneo de sangre periférica
como único método de detección y 15 (7,24%) utili-
zando ambos métodos de detección (frotis de sangre
periférica y extendidos de la capa flogística).
La observación de extendidos de capa flogísti-
ca permitió detectar la presencia de gamontes de
Hepatozoonspp, en 5 muestras adicionales. Las dif-
erencias entre ambos métodos de observación fueron
estadísticamente significativas (p<0,05).
En la Figura 1 se muestra el extendido de san-
gre periférica y capa flogística de una de las muestras
positivas. Entre las 15 muestras positivas, la parasite-
mia fue alta en el 13% (>800 gamontes μl-1), mod-
erada en el 67% (entre 100 y 800 gamontes μl-1) y
baja en el 20% (<100 gamontes μl-1). Los resultados
de acuerdo a cada variable incluida en la encuesta se
muestran en la Tabla 1.
Con respecto a las variables evaluadas, la
HC fue más frecuente en adultos (13/134), hembras
(13/147), de raza mestiza (13/152) y con presencia
de garrapatas (3/36) no obstante, las diferencias no
fueron estadísticamente significativas (p>0,05) para
ninguna de las variables analizadas. La distribución
de acuerdo a la procedencia de las muestras se resume
en la tabla 2.
Al analizar las muestras positivas por partido
se observó que el mayor número de muestras positi-
vas fue en Solano (5/15) y Quilmes (5/15) con menor
porcentaje en Ezpeleta (2/15), Berazategui (2/15) y
Bernal (1/15). Dado que de algunas zonas no se re-
cibieron muestras, o el n era muy bajo, no se realizó
análisis estadístico con esta variable.
En relación a las alteraciones hematológicas en
el grupo de muestras positivas a HC se observó ane-
mia (20%), leucocitosis (40%), linfocitosis (26,6%) y
eosinofilia (80%) en un mayor porcentaje con respec-
to al grupo de muestras negativas no obstante, las dif-
erencias entre ambos grupos no fueron significativas
(p>0,05) (Tabla 3). Respecto al número de plaquetas
en ambos grupos las muestras que presentaron trom-
bocitopenia fueron similares no registrándose difer-
encias significativas (Tabla 3).
Martín P.L. et al.: Hepatozoonosis en caninos. Rev. Vet. 33: 2, 246-252, 2022 249

Figura 1. Extendido de sangre periférica (A) y capa flogística (B) de una de las muestras positivas.

Tabla 1. Asociación entre las variables sexo, raza, edad y presencia de garrapatas con la variable presencia de
gamontes de Hepatozoon sp en extendidos de capa flogística.

muestras positivas valor de p OR (IC-95%)

Variable
Nº Nº positivos (%)
hembra 147 13 (8,80) 0,27 2,81 (0,61-12,87)
macho 60 2 (3,30)
joven* 70 2 (2,85) 0,08 0,28 (0,06-1,28)
adulto** 137 13 (9,48)
mestizos 152 13 (8,55) 0,27 2,57 (0,56-11,7)
puros 55 2 (3,63)
presencia de garrapatas 36 3 (8,33) 0,92 1,2 (0,32-4,51)
ausencia de garrapatas 171 12 (7,01)

* joven: ≤ 1 año. **adulto >1 año.

Tabla 2. Distribución de las muestras positivas y negativas de acuerdo a la procedencia de los caninos.

muestras positivas (15) muestras negativas (192)

Procedencia
Nº positivos (%) Nº negativos (%)
Berazategui 2 (13,3) 0
Bernal 1 (6,7) 39 (20,3)
Ezpeleta 2 (13,3) 22 (11,5)
Quilmes 5(33,3) 96 (50)
Solano 5 (33,3) 32 (16,7)
Don Bosco 0 3 (1,6)
250 Martín P.L. et al.: Hepatozoonosis en caninos. Rev. Vet. 33: 2, 246-252, 2022
Tabla 3. Asociación entre la presencia de gamontes de Hepatozoon sp
en extendidos sanguíneos de capa flogística y los hallazgos hematológicos.
muestras positivas
Parámetros (15)
Presencia de alteración hematológica (%)
anemia
3 (20)
(37-55%)
leucocitosis
6 (40)
(6.000 – 17.000 μl)
neutrofilia
2 (13,3)
(3.000 – 11.500 μl)
linfocitosis
4 (26,6)
(1.000 – 4.800 μl)
eosinofilia
12 (80)
(100 – 1.250 μl)
desvío a la izquierda
1 (6,6)
(0 – 300 μl)
trombocitopenia
8 (53,3)
(200.000 – 500.000 μl)
DISCUSIÓN
Las enfermedades transmitidas por vectores en
caninos han ganado importancia en los últimos años
y particularmente la HC ha sido considerada una de
las afecciones endémicas en expansión 24 . En nues-
tro estudio la prevalencia hallada a partir de caninos
clínicamente sanos y mediante la observación de fro-
tis sanguíneos fue mayor al valor 2,3% hallado por
otros autores 24 en la zona sur del gran Buenos Aires
a partir muestras clínicas derivadas al laboratorio por
motivos de consulta o diagnósticos presuntivos no es-
pecificados.
Asimismo, fue mayor que el valor hallado en
muestras clínicas de caninos clínicamente sanos pro-
venientes de Bahía Blanca mediante una técnica de
PCR7. Estas diferencias en la prevalencia probable-
mente se deban, entre otros factores, al área de la cual
se extrajeron las muestras, al momento en el que se
realizó el estudio y al número de animales muestrea-
dos 22 .
En relación al diagnóstico de la HC, nuestro es-
tudio en coincidencia con lo hallado por otro autor
16
quien demostró que el método de observación de
extendidos de capa flogística es más eficiente para la
visualización de los gamontes que cuando la misma
se realiza en extendidos de sangre periférica.
Generalmente, altos niveles de parasitemia se
asocian a manifestaciones sistémicas más graves in-
cluyendo letargo, fiebre, anorexia, pérdida de peso
y mucosas pálidas. No obstante, existen reportes de
caninos con enfermedad clínica y parasitemias bajas
muestras negativas valor de
(192) p
21 (10,9) 0,52
47 (24,4) 0,30
39 (20,3) 0,75
28 (14,5) 0,38
101 (52,6) 0,07
29 (15,1) 0,60
109 (56,7) 0,99
a moderadas del 0,5 al 2% debido a que no sólo la
parasitemia es determinante de la gravedad en la pre-
sentación de la enfermedad 15 .
En nuestro estudio, los niveles de parasitemia
observados en las muestras positivas fueron princi-
palmente moderados a bajos a diferencia de lo hal-
lado por otro autor 24 , posiblemente debido a que en
nuestro trabajo ninguno de los animales presentó al
momento de la extracción signos clínicos asociados
con la enfermedad. Los factores de riesgo para la HC
han sido mencionados en estudios previos, no obstan-
te, los resultados difieren en la asociación de determi-
nadas variables con la enfermedad 4, 22, 24 .
En cuanto al sexo, aunque en nuestro trabajo
se observó asociación (OR>1) entre la HC y el sexo
hembra la misma no fue significativa, coincidiendo
con los resultados de otros autores 22 y con reportes
previos en la literatura científica de que la enfermedad
no presenta predilección por ningún sexo 4 .
Por el contrario, otro estudio demostró que la
variable sexo macho constituía un factor de riesgo
significativo para la enfermedad 24 . Con respecto a la
raza, el mayor porcentaje de muestras positivas corre-
spondió al grupo proveniente de caninos mestizos al
igual que lo hallado por otros autores 24 .
En otro trabajo 22, se observó una asociación en-
tre la raza Ovejero Alemán y la HC, no obstante, esta
fue no significativa. En nuestro trabajo, la edad no
estuvo significativamente asociada con la HC coinci-
diendo con lo publicado previamente 22, mientras que
en otro trabajo 24 se observó una mayor prevalencia
y asociación significativa en cachorros. En relación
Martín P.L. et al.: Hepatozoonosis en caninos. Rev. Vet. 33: 2, 246-252, 2022
a la presencia o no de garrapatas, aunque se observó
un mayor porcentaje de positivos, la misma no fue
significativa.
Escasos trabajos han evaluado la prevalencia de
HC de acuerdo a la zona de donde provienen los ani-
males debido a que, en general, los estudios publica-
dos describen casos clínicos 11, 12, 20 o caracterizaciones
moleculares en lugares determinados 7, 24 . En nuestro
estudio la mayor prevalencia se observó en los parti-
dos de Solano y Quilmes. Estas áreas, generalmente
se caracterizan por presentar un alto porcentaje de la
población que vive en condiciones de hacinamiento,
en asentamientos precarios o villas miseria, lo cual
podría explicar que pocos propietarios pueden acced-
er al servicio sanitario para sus mascotas.
Dentro de las alteraciones hematológicas de-
scriptas, la anemia fue el hallazgo más frecuente en
caninos con signos clínicos de HC y generalmente se
la asocia con anemia por enfermedad crónica o pres-
encia de coinfecciones con Babesias pp 6, 22, 24 .
Por el contrario, en nuestros hallazgos el por-
centaje de pacientes anémicos fue menor que el re-
portado por otro autor 24 posiblemente debido a que
este estudio se llevó a cabo a partir de muestras de
pacientes sin signología clínica. En coincidencia con
nuestros resultados, en un estudio 25 , observaron dis-
minución del hematocrito sólo en el 14% de los an-
imales asintomáticos positivos a H. canis mediante
una técnica de PCR.
Por su parte, la leucocitosis con neutrofilia y
desvío a la izquierda es un hallazgo hematológico fre-
cuente en caninos con HC lo que podría deberse al
proceso inflamatorio que desencadena el estadio de
merogonia en los tejidos 22, 24 . En el grupo de muestras
positivas el 40% presentó leucocitosis siendo mayor
que en el grupo de muestras negativas y coincidiendo
con los hallazgos de otros autores 22, 25 .
Por otra parte, el bajo porcentaje de caninos
que presentaron desvió a la izquierda difiere de lo hal-
lado por otros autores 24 quienes reportaron un valor
mayor al nuestro. Esto último, puede deberse a que
en su estudio utilizaron muestras clínicas de animales
derivadas al laboratorio por diferentes cuadros pa-
tológicos.
Finalmente, la presencia de eosinofilia y trom-
bocitopenia son alteraciones habituales en caninos
positivos a H. canis. En nuestro trabajo el 80% de
las muestras positivas presentaron eosinofilia, valor
levemente mayor que el encontrado por otros inves-
tigadores, aunque las diferencias no fueron estadísti-
camente significativas con respecto al grupo de mues-
tras negativas 25 .
Este estudio corrobora la endemicidad de la HC
en el Gran Buenos Aires y demuestra que la preva-
lencia varía con la procedencia de las muestras y del
251
momento en que se realiza el estudio. Asimismo, re-
fleja la utilidad de la concentración leucocitaria, es
decir la realización de extendidos de la capa flogísti-
ca, además del frotis del hemograma, para aumentar
las probabilidades de observación positiva de gamon-
tes dentro de los neutrófilos cuando se sospeche de la
enfermedad o existan datos epidemiológicos y no se
disponga de métodos moleculares.
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Peralta J. et al.: Ingredientes en toros. Rev. Vet. 33: 2, 253-257, 2022 253

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 253-257, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Sustitución de ingredientes proteicos y su efecto

sobre parámetros productivos en toros de Paraguay
Peralta, J.1,2; Aquino, L.F.1; Alvarez, R.1,2; Valiente, O.L.1

Univ. Nac. Asunción, Fac. Cs. Veterinarias, Depto. San Lorenzo, Paraguay.
1

2
Univ. Nac. Canindeyú, Fac. Cs. Agropecuarias y Ambientales, San Cayetano, Depto. Canindeyú,
Curuguaty, Paraguay. E-mail: roshanita@gmail.com

Resumen
Peralta, J.; Aquino, L.F.; Alvarez, R.; Valiente, O.L.: Sustitución de ingredientes proteicos y su
efecto sobre parámetros productivos en toros de Paraguay. Rev. Vet. 33: 2, 253-257, 2022. Con
el objetivo de determinar el efecto de la sustitución de ingredientes proteicos sobre parámetros
productivos en toros confinados (ganancia diaria de peso, consumo y conversión alimenticia),
fueron seleccionados animales de la especie bovina, agrupados en 2 lotes de forma aleatoria y
homogénea, compuestos por toros tipo nelore de entre 1 a 3 años de edad: Tratamiento 1 (T1)
51 toros con alimento a base de burlanda de maíz y Tratamiento 2 (T2) 51 toros con alimento a
base de expeller de soja. El pesaje inicial se realizó a la entrada de los animales. Posterior a eso
se procedió a dos pesajes, uno a los 45 días y otro a los 90 días. Al final del período se realizó la
comparación de los pesos de cada grupo. Los resultados obtenidos en base a la ganancia diaria de
peso fueron sometidos al método estadístico T-Student, observándose diferencias significativas
(p<0,05) a favor del T2 en relación al T1. La ganancia diaria de peso fue en el T1 de 1,47 kg/día y
en el T2 1,52 kg/día, siendo el consumo diario en el T1 de 16,8 kg y en el T2 17,4 kg. En cuanto a
la conversión alimenticia en el T1 fue de 6,75 kg y en el T2 fue de 6,82 kg.

Palabras clave: parámetros productivos, ganancia de peso, conversión alimenticia, consumo

diario.

Abstract
Peralta, J.; Aquino, L.F.; Alvarez, R.; Valiente, O.L.: Substitution of protein ingredients and
their effect on productive parameters in bulls of Paraguay. Rev. Vet. 33: 2, 253-257, 2022. In order
to determine the effect of substituting protein ingredients on production parameters (daily weight
gain, feed intake and feed conversion) in confined bulls, bovine animals were selected, grouped
into 2 lots in a random and homogeneous manner, composed of nelore-type bulls between 1 and 3
years of age: Treatment 1 (T1) 51 bulls with feed based on corn mockery and Treatment 2 (T2) 51
bulls with feed based on soybean expeller. The initial weighing was carried out at the entrance of
the animals, after which two weighings were carried out, one at 45 days and the other at 90 days.
At the end of the period, the weights of each group were compared. The results obtained based
on the daily weight gain were subjected to the T-Student statistical method, observing significant
differences (p<0.05), in favor of T2 in relation to T1. Daily weight gain was 1.47 kg/day at T1,
1.52 kg/day at T2, with daily consumption at T1 being 16.8 kg and 17.4 kg at T2, in terms of feed
conversion at T1 it was 6.75 kg and at T2 it was 6.82 kg.

Key words: productive parameters, weight gain, feed conversion, daily consumption.

Recibido: Febrero 2022. Aceptado: Mayo 2022.

254
INTRODUCCIÓN
El confinamiento de ganado de carne consiste
básicamente en el encierro de los animales y en la
provisión del alimento necesario, a fin de lograr
la conversión cárnica, útil para la faena en los
frigoríficos. Los ejemplares durante la recría (destete)
deben alcanzar un promedio de 280 a 300 kg de peso,
para que puedan entrar en los corrales de engorde.
Allí, tras un periodo de 90 a 120 días y un peso
ideal 400 kg o más, los bovinos ya están listos para
su comercialización 9 . Esta técnica es una excelente
alternativa, principalmente para los productores que
se encuentran en zonas agrícolas, donde se da la
posibilidad de transformar en carne los subproductos
del agro, atendiendo a que se pueden utilizar residuos
de soja 8 .
Es importante que todos los sistemas de
alimentación tengan en cuenta los hábitos o conducta
alimenticia del ganado vacuno en épocas de calor y la
disponibilidad de lugar seco para pasar la noche.
El ganado vacuno consume diariamente materia
seca en cantidades que equivalen entre 1,4 y 2,7% de
su peso vivo. Este porcentaje depende de la proporción
entre concentrado y otros nutrientes menos digeribles
en la ración, de la edad, peso, sexo, tipo y origen de
los animales destinados al confinamiento 10 .
El confinamiento permite un mejor control de
las tareas con el ganado, debido a que se realiza la
producción en pequeñas áreas y, además, no representa
un costo muy elevado 1 .
MATERIAL Y MÉTODOS
El presente trabajo experimental se llevó a
cabo en un establecimiento ganadero ubicado en la
ciudad de Curuguaty, Departamento de Canindeyú
(Paraguay). Se utilizaron 102 toros, que fueron
seleccionados teniendo en cuenta el peso al destete y la
condición corporal de los mismos para la distribución
y asignación al subgrupo del corral correspondiente.
Estos animales son criollos del establecimiento
del tipo Nelore; entre 1 a 3 años de edad y con un
promedio de peso al destete de 220-240 kg. Previo
al ingreso al lote de confinamiento los animales
recibieron una dosis de vacuna anticarbunculosa,
vacuna antirrábica, vacunas clostridiales y también
recibieron reconstituyente, vitamina ADE y una dosis
de antiparasitario Ivermectina+Closantel.
Los animales fueron identificados por caravanas
y por marca a fuego con el número de lote de
confinamiento al cual corresponden. Fueron divididos
en dos grupos de toros de 51 animales cada uno, el
Tratamiento 1 recibió como suplemento proteico la
burlanda de maíz, y el Tratamiento 2 expeller de soja;
Peralta J. et al.: Ingredientes en toros. Rev. Vet. 33: 2, 253-257, 2022
ambos grupos mantuvieron la misma dieta (ensilaje de
maíz, maíz molido, núcleo). Excepto el complemento
proteico; estos animales permanecieron dentro del
confinamiento por 90 días.
La distribución del alimento se realizó cuatro
veces al día; la lectura de batea se realizó a la primera
hora de la mañana todos los días, dependiendo de
la nota se aumentó o disminuyó o simplemente se
mantuvo la dieta. Los pesajes se realizaron a los 45
y 90 días. Los cálculos se realizaron mediante la
siguiente fórmula:
Ganancia diaria de peso:
Peso final (kg) – Peso inicial (kg)
Días entre pesajes
Consumo diario:
Cantidad (kg) de balanceado consumido
(balanceado+voluminoso)
cantidad de animales por lote
Conversión alimenticia:
Consumo de alimento en materia original
aumento de peso logrado por animal
Los resultados de GDP fueron sometidos al
análisis estadístico del T-Student, para comparar los
resultados y establecer la significancia estadística
con un nivel de significancia del 95%, para lo cual
se utilizó el paquete estadístico Infostad 7 versión
estudiantil.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En la Tabla 1 se observa el promedio de
la ganancia diaria de peso (GDP) expresado en
kilogramos por día (kg día-1) de toros los cuales
estuvieron en confinamiento, divididos en 2
tratamientos (T1: suplementados con burlanda de
maíz y T2: suplementados con expeller de soja),
obteniéndose una menor GDP en los animales
pertenecientes al T1, siendo las diferencias entre los
tratamientos estadísticamente significativas (p<0,05)
mediante el T-Student.
Tabla 1. Promedio de la ganancia diaria de peso
(GDP) expresado en kilogramos por día (kg/día)
para los toros confinados con diferentes ingredientes
proteicos.
Tratamiento GDP (kg/día)
T 1: burlanda de maíz 1,47 ± 0,07 kg/día
T 2: expeller de soja 1,52 ± 0,05 kg/día
Peralta J. et al.: Ingredientes en toros. Rev. Vet. 33: 2, 253-257, 2022
La mayor ganancia de peso fue obtenida por
el T2, en relación al T1; dichas diferencias pueden
deberse a que el expeller de soja es un alimento con
un importante contenido proteico, por lo general entre
un 40 y 47% sobre sustancia seca, en comparación al
alimento de burlanda de maíz suministrado al T1, en
consecuencia la ganancia de peso es mayor 5 .
Realizando un ensayo 4 comparando dos dietas
en base a grano de maíz y expeller de soja como
aporte proteico; en ambos tratamientos se registraron
similares ganancias diarias de peso equivalentes
a 0,950 kg día-1; no siendo coincidentes con los
resultados emanados en la presente investigación.
Por otra parte 2 se menciona que la alimentación
con burlanda de maíz en bovinos producen una
ganancia diaria de peso que oscila entre 1,5 a 1,8 kg
día-1; lo cual coincide con los resultados obtenidos en
la presente investigación.
Otro menciona que el promedio de ganancia
diaria de peso por animal en corrales de engorde es
de 1 a 1,5 kg/día; encontrándose los promedios de
Figura 1. Peso promedio (kg) en cada uno de los pesajes en toros confinados en un establecimiento
ganadero en Curuguaty, departamento Canindeyú.
El mejor desempeño exhibido en cuanto a
ganancia diaria de peso obtenido por los animales
alimentados a base de expeller de soja en relación a la
burlanda de maíz siendo para ambos tratamientos el
mismo régimen y horario de suministro.
Ello podría deberse a la calidad y cantidad de
nutrientes del expeller de soja y su mezcla (silaje de
maíz 50%, maíz molido 42%, expeller de soja 6% y
núcleo 2%) en relación a la burlanda (silaje de maíz
50%, maíz molido 36%, burlanda 12% y núcleo 2%).
El hecho de que en el tratamiento 1 hubo menor
ganancia diaria de peso se puede atribuir a que no
255
ganancia diaria de peso obtenido en los tratamientos
de la presente investigación dentro de dichos rangos 8 .
Los pesos promedios por tratamiento obtenidos
en los 3 pesajes fueron los siguientes: para el
tratamiento 1: pesaje inicial = 350 kg, pesaje a los 45
días = 416 kg, pesaje a los 90 días = 483 kg.
Para el tratamiento 2: pesaje inicial = 351 kg,
pesaje a los 45 días = 421 kg, pesaje a los 86 días =
487 kg; los mismos pueden observarse en la Figura
1, apreciándose a su vez que ambos tratamientos
tuvieron un peso inicial similar y a partir del segundo
pesaje hay una mayor ganancia de peso en el T2, lo
cual se mantuvo hasta el pesaje final, acotándose que
el T2 fue retirado a los 86 días del confinamiento ya
que alcanzaron el peso ideal.
Las diferencias encontradas en los dos
tratamientos fueron estadísticamente significativas
(p<0,05) a favor del T 2.
fueron suficientemente aprovechados los nutrientes
que brinda la burlanda de maíz.
En la Figura 2 se pude observar el promedio del
peso de entrada o peso inicial de los animales el cual
fue con el tratamiento 1 (burlanda de maíz) 350 kg y
tratamiento 2 (expeller de soja) 351 kg y el peso final
fue de 483 kg con el tratamiento 1 y 487 kg con el
tratamiento 2, de lo cual se estima que la ganancia de
peso durante la suplementación fue de 133 kg con el
tratamiento 1 y 136 kg con el tratamiento 2.
256
Figura 2. Peso inicial, peso final y ganancia de peso de los grupos.
Los favorables resultados obtenidos en el estudio
se pudieron deber a la buena calidad y balance de los
componentes de la ración suministrada, que proveyó
la energía y proteínas necesarias para alcanzar buena
ganancia de peso.
En cuanto a la conversión alimenticia en los dos
grupos de estudio, los resultados de esta variable en el
Grupo 1 fueron de 6,75 kg y en el Grupo 2 fue de 6,82
kg de alimentos consumidos.
Un trabajo realizado en la ciudad de Alborada
3
, departamento de Presidente Hayes, sobre la
ganancia media diaria de peso de bovinos confinados;
obtuvieron una conversión alimenticia de 7,1 y 6,3 kg
de alimentos consumidos en materia original.
Otra investigación 6 sobre la revolución en el
mercado de alimentación y producción ganadera
el tratamiento que fue con burlanda obtuvo una
conversión de 5,4 kg y el de expeller de soja 4,8 kg;
coinciden en cuanto a que con el expeller de soja se
obtiene una mejor conversión alimenticia.
Así como también el consumo diario del
tratamiento 1 fue de 16,8 kg y del tratamiento 2 fue
de 17,4 kg; esto depende mucho de los ingredientes y
porcentaje de la dieta suministrada por cada productor,
por ende, estos resultados están dentro del parámetro
normal del sistema intensivo del Paraguay.
CONCLUSIÓN
La inclusión de ingredientes proteicos en el
régimen alimentario de toros confinados permite
mayores ganancias de peso así como una mejor
conversión alimenticia, obteniendo de esa manera
buena calidad de carne, favoreciendo así al animal y
al productor.
Peralta J. et al.: Ingredientes en toros. Rev. Vet. 33: 2, 253-257, 2022
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258 Caramello, C.S. et al.: Test de micronúcleos. Rev. Vet. 33 : 2, 258-265, 2022

Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 258-265, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Evaluación de la mutagenicidad del herbicida glifosato

en Prochilodus lineatus a través del test de micronúcleos
Caramello, C.S.; Jorge, L.C.

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Nordeste,

Sargento Cabral 2139, Corrientes (3400), Argentina.
E-mail: ccaramello@vet.unne.edu.ar

Resumen
Caramello, C.S.; Jorge, L.C.: Evaluación de la mutagenicidad del herbicida glifosato en
Prochilodus lineatus a través del test de micronúcleos. Rev. Vet. 33: 2, 258-265, 2022. El uso de
plaguicidas puede afectar el ecosistema acuático. A través del suelo, estos contaminantes se drenan
a los ríos, lagunas, etc. En la Argentina, agroquímicos a base de glifosato como el Roundup, se
utilizan ampliamente en actividades agrícolas. Considerando esto, el objetivo de este trabajo fue
evaluar los efectos genotóxicos de Roundup Full II® en células sanguíneas de ejemplares juve-
niles de Prochilodus lineatus. Los peces se expusieron a las concentraciones de 0,025 µg/L, 0,05
μg/L y 0,1 μg/L de glifosato (Roundup Full II) durante 7 días. Después de este período, para la
preparación de los frotis se extrajo de los peces sangre por punción de la vena caudal. El análisis
de los frotis reveló la ocurrencia de células con micronúcleos, células binucleadas, lobulaciones
nucleares (Lobed nuclei; blebbed nuclei), muescas nucleares (notched nuclei), vacuolas nucleares,
microcitos, brotes y núcleos con puente. El estudio estadístico mostró diferencias significativas
entre los grupos de control y los tratados. De esta manera, los resultados sugieren la existencia de
un daño en el material genético causado por la exposición de los peces al pesticida.

Palabras claves: Glifosato, Micronúcleos, Alteraciones Morfológicas Nucleares, Prochilodus

lineatus.

Abstract
Caramello, C.S.; Jorge, L.C.: Evaluation of mutagenicity of herbicide glyphosate in the
Prochilodus lineatus using the micronucleus test. Rev. Vet. 33: 2, 258-265, 2022. The use of pes-
ticides can affect the aquatic ecosystem. Through the soil, these pollutants are drained into rivers,
lagoons, etc. In Argentina, glyphosate-based agrochemicals such as Roundup are widely used in
agricultural activities. Considering this, the objective of this work was to evaluate the genotoxic
damage of Roundup Full II® in blood cells of juvenile specimens of Prochilodus lineatus were
evaluated. The fish are exposed to concentrations of 0.025 µg/L, 0.05 µg/L and 0.1 µg/L of gly-
phosate (Roundup Full II) for 7 days. After this period, for the preparation of the smears, blood
was extracted from the fish by puncture of the caudal vein. Smear analysis will reveal micronu-
cleus, binucleate cells, lobed nuclei, blebbed nuclei, notched nuclei, nuclear vacuoles, microcytes,
buds and cells with nuclear bridge. The statistical analysis showed significant differences between
the control and treated groups. In this way, the results suggest the existence of a genetic damage
caused by the exposure of the fish to the pesticide.

Key words: gliphosate, micronúcleus, nuclear morphology alterations, Prochilodus lineatus.

Recibido: Diciembre 2021. Aceptado: Abril 2022.

Caramello, C.S. et al.: Test de micronúcleos. Rev. Vet. 33 : 2, 258-265, 2022
INTRODUCCIÓN
Argentina es un país que presenta una enorme
heterogeneidad geográfica, su extenso territorio y la
variedad climática existente permiten producir diver-
sidad de productos agrícolas. En este contexto, existe
un conflicto constante entre dos aspectos, aumentar
el volumen de la producción y preservar la salud de
los consumidores del posible impacto colateral que
esto conlleve. El empleo desregulado de plaguicidas
en Argentina afectó, de diversas maneras, a diferentes
aspectos de la sociedad.
El incremento en la utilización de los agroquími-
cos durante los últimos diez años produjo una crisis
incuestionable en el país. Específicamente, hay una
correlación entre el uso de plaguicidas tóxicos y un
aumento de enfermedades peligrosas en comunidades
rurales y su efecto en las acciones del gobierno 8.
Los peces se utilizan ampliamente para evalu-
ar la salud de los ecosistemas acuáticos porque los
contaminantes se acumulan en la cadena alimentaria
y son responsables de los efectos adversos y la muerte
en los sistemas acuáticos 16.
Por otro lado, los peces desempeñan diferentes
roles en la red trófica, como la bioacumulación de
contaminantes ambientales y la biotransformación de
xenobióticos a través del metabolismo oxidativo de-
pendiente del citocromo p450; también responden a
mutágenos en bajas concentraciones 20.
Se ha comprobado que la reparación del ADN es
más lenta en los peces que en los mamíferos 15, 42. Por
lo tanto, pueden usarse como organismos centinelas
para estudios de biomonitoreo, y las posibles lesiones
podrían ser detectadas mediante la utilización de bio-
marcadores 24.
Las prácticas agrícolas que utilizan el glifosato
afectan a los organismos “no blanco”, modificando
la estructura y la funcionalidad de los ecosistemas de
agua dulce 12, 40. Por otro lado, el glifosato Atanor(®)
acelera el deterioro de la calidad del agua,
especialmente cuando se consideran los sistemas
de agua de pequeño volumen 41.
Por lo expuesto anteriormente, el objetivo del
presente trabajo fue analizar la genotoxicidad del
herbicida glifosato (Roundup Full II®), en células
sanguíneas de ejemplares juveniles de Prochilodus
lineatus a través de la determinación de la frecuencia
de micronúcleos (MN) y alteraciones morfológicas
nucleares.
MATERIALES y MÉTODOS
Los procedimientos adoptados en la realización
del presente trabajo fueron examinados y avalados
por el Comité de Ética y Bioseguridad de la Facultad
de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional
259
del Nordeste (UNNE). Protocolo 0033.
Animales
Los ensayos se realizaron con ejemplares juve-
niles de P. lineatus (Orden Characiformes, Familia
Prochilodontidae), provenientes del Centro de
Piscicultura del Instituto de Ictiología del Nordeste
(INICNE) de la Facultad de Ciencias Veterinarias,
UNNE. Antes de las pruebas de toxicidad, los espe-
címenes fueron aclimatados a las condiciones de lab-
oratorio por un lapso de 15 días, permaneciendo en
tanques de 300 litros de agua de perforación a 20ºC,
pH 7,0 y un fotoperíodo ajustado de 12 horas de oscu-
ridad y 12 horas de luz. Durante esta etapa los espe-
címenes fueron alimentados cada 48 horas. Además,
se efectuaron controles periódicos de su estado sani-
tario.
Producto químico
Se empleó para el estudio de genotoxicidad gli-
fosato en formulación comercial (Roundup® Full II).
Diseño Experimental
Los peces se dividieron en dos grupos: control
(C = mantenidos en agua de pozo artesiano) y tratados
con glifosato (T1 = 0,1 μg/L; T2 = 0,05 μg/L y T3 =
0,025 μg/L). Se efectuaron tres réplicas por grupo (3
individuos por pecera). Las peceras poseían 10 litros
de capacidad para el bienestar de los peces y el mejor
equilibrio de los acuarios (se empleó el cálculo de un
litro de agua por cada centímetro de pez). Los ani-
males permanecieron en los acuarios durante un lapso
de 7 días, sin recambio de agua.
Eutanasia
Culminada la etapa de exposición al agroquími-
co, los ejemplares fueron sacrificados con sobredosis
de clorhidrato de lidocaína. Para el ensayo de mi-
cronúcleos (MN) y alteraciones morfológicas nucle-
ares (AMN) las muestras de sangre se obtuvieron en
los peces por punción de la vena caudal, utilizando
una jeringa heparinizada.
Estudio de micronúcleos
Posterior a la extracción de sangre, se colocó una
gota sobre un portaobjeto para la realización de los
frotis, éstos se fijaron en etanol durante 10 min y se
dejaron secar al aire a temperatura ambiente; luego
se tiñeron con Giemsa al 5% en tampón Sörenson
(pH 6,9) durante 20 minutos. En cada individuo, se
examinó un total de 2000 eritrocitos con membrana
citoplasmática intacta. Las microfotografías fueron
tomadas con microscopio Olympus BX41 provista de
cámara digital Motic 9.0. En las muestras analizadas
se determinó la cantidad de micronúcleos (MN) y de
alteraciones morfológicas nucleares (AMN).
260
Figura 1. Fotomicrografía de frotis sanguíneos de P.
lineatus, a: eritrocitos normales; b y c: micronúcleos
de diferentes tamaños; d: microcito; e: notched (mues-
cas nucleares); f: brote nuclear; g: lobed (núcleos lob-
ulados); h: núcleo en forma de ocho; i: blebbed (evag-
inaciones); j: vacuola nuclear, k: núcleo con puente
plasmático; l: binucleado.
Para el análisis de micronúcleos (MN) se empleó
el ensayo de micronúcleos 23,35. En el análisis, además
de la frecuencia de micronúcleos, también fueron
consideradas las alteraciones morfológicas nucleares:
notched (núcleos con muescas), blebbed (evagina-
ciones nucleares), lobed (núcleos lobulados), dumb-
Caramello, C.S. et al.: Test de micronúcleos. Rev. Vet. 33 : 2, 258-265, 2022
bell-shaped (núcleos bilobulados), segmental nuclei
(núcleos segmentados), y vacuolated nuclei (núcleos
con vacuolas) 5.
Tabla 1: Comparación de Tukey de micronúcleos
y alteraciones morfológicas nucleares. Alfa=0,05,
DMS=0,96131, Error: 0,3145, gl: 28.
Dosis Medias n E.E.
Sin 0,58 9 0,19 A
0,025 µg/L 1,94 7 0,21 B
0,05 µg/L 2,16 8 0,20 B
0,1 µg/L 2,48 8 0,20 B
Medias con una letra común no son significativa-
mente diferentes (p > 0,05)
Análisis Estadístico
Los resultados del Test de MN y AMN fueron
evaluados por el Análisis de la Varianza (Paramétrica),
seguido de la Prueba Estadística de Tukey para com-
paraciones múltiples entre los grupos, con 5% de sig-
nificancia.
RESULTADOS
Se analizaron muestras provenientes de 32 ani-
males, elaborándose dos frotis por cada uno. Se ex-
aminaron un total de 64.000 células, contándose 2.000
eritrocitos por individuo. De las 64.000 células obser-
vadas, 18.000 pertenecieron al tratamiento control y
46.000 a los grupos tratados. Se consideró la forma y
estructura de los hematíes, a fin de determinar la fre-
cuencia de micronúcleos y alteraciones morfológicas
nucleares. Las anormalidades nucleares eritrociticas
detectadas en sangre periférica de P. lineatus fueron:
micronúcleos, células binucleadas, lobulaciones nu-
cleares (Lobed nuclei; blebbed nuclei), muescas nucle-
ares (notched nuclei), vacuolas nucleares, microcitos,
brotes y núcleos con puente plasmático (Figura 1).
Los datos sometidos al análisis de la varianza y
comparados por el test de Tukey, mostraron que existe
diferencia significativa entre el grupo control y trata-
do (Tabla 1). La comparación de los resultados nos
permite visualizar el aumento de MN y AMN en los
hematíes de los individuos que estuvieron en contacto
con el herbicida en contraste con los del grupo control
(Figura 2).
El análisis evidencia que la respuesta al agro-
químico, expresada en el número de anomalías nu-
cleares en los individuos tratados es dosis dependi-
ente. De esta manera, se aprecia como el incremento
de la concentración del glifosato se relaciona con un
aumento en la frecuencia de MN y AMN en los peces
expuestos.
Caramello, C.S. et al.: Test de micronúcleos. Rev. Vet. 33 : 2, 258-265, 2022
DISCUSIÓN
El test de micronúcleos es una de las pruebas a
corto plazo de mayor aplicación en toxicología genéti-
ca, y se ha convertido en una de las más importantes
implementadas por las entidades reguladoras de dif-
erentes países para evaluar la mutagenicidad y la sen-
sibilidad a xenobióticos 14, 30. Esta técnica está valida-
da internacionalmente como bioensayo para evaluar
genotoxicidad de sustancias, exposiciones agudas y
crónicas, y es una de las más usadas para identificar
agentes cancerígenos 6. Se considera que la prueba de
MN es una forma efectiva de monitorear la presencia
de xenobióticos en ambientes acuáticos 31.
Figura 2. Box plot mostrando el número de MN y
AMN en los grupos controles y tratados luego del
periodo de exposición al agroquímico (Roundup®
Full II) durante siete días, exhibiendo diferencias
significativas entre ambos grupos (p <0,05). Se puede
observar que los grupos tratados presentan un mayor
número de alteraciones, existiendo en estos una may-
or variabilidad de la distribución de los datos, siendo
el grupo conformado por 0,1 µg/L el de mayor dis-
persión.
Dada la sensibilidad de los peces a los agentes
xenobióticos, en el presente trabajo los ejemplares de
P. lineatus expuestos a las dosis de 0,1 μg/L, 0,05 μg/L
y 0,025 μg/L de glifosato (Roundup® Full II) durante
siete días, mostraron en sus eritrocitos un aumento
significativo en la frecuencia de micronúcleos y de
alteraciones morfológicas nucleares. Similares re-
sultados fueron observados en diferentes especies de
peces expuestos al herbicida Roundup® en ensayos
agudos como en crónicos, en los cuales se emplearon
distintas concentraciones del agroquímico.
Asimismo, se evidenció, en ejemplares de Tilapia
rendalli sometidos a diferentes dosis (50 mg/L, 100
mg/L y 200 mg/L) del herbicida Roundup® durante
un periodo agudo, un aumento en la frecuencia de mi-
cronúcleos y anormalidades nucleares 21.
261
Del mismo modo, se observó en individuos de
Carassius auratus expuestos a varias concentraciones
(5 ppm, 10 ppm y 15 ppm) de Roundup® en un ensayo
agudo, un aumento en la frecuencia de MN y AMN en
los tratados. Según los autores estos resultados son
dependientes de la dosis empleada y de la duración
del tratamiento 10.
Con las dosis de 58 mg/L y 116 mg/L de
Roundup® durante un periodo de uno a tres días,
Anguilla anguilla exhibió diversas anomalías nucle-
ares, determinando el potencial efecto genotóxico del
compuesto en estudio 22.
Experiencias realizadas en Colossoma macropo-
rum con Roundup® empleándose dosis de 10 mg/L y 15
mg/L durante 96 hs, determinaron que este compuesto
podría inducir daño en el ADN en los especímenes
expuestos, posiblemente por generar estrés oxidativo,
que de persistir ese estímulo de manera crónica deri-
varía en alteraciones genotóxicas 3.
Así también, en individuos de Poecilia reticulata
expuestos a Roundup® durante 24 horas y a las dosis
de 1,41 μl/L; 2,83 μl/L; 4,24 μl/L y 5,65 μl/L, se ob-
servó un aumento en la frecuencia de MN y AMN,
indicando que la cantidad de alteraciones estaba rela-
cionada con las dosis utilizada 36.
Por otro lado, se identificó en especímenes
de Astyanax sp, que estuvieron en contacto duran-
te 72 horas a 65 μg/L de Roundup®, una diferencia
estadísticamente significativa en la frecuencia de
MN entre los individuos tratados con respecto a los
controles 11.
Ejemplares de Piaractus mesopotamicus
mostraron similares resultados a nivel sanguíneo
luego de ser expuestos durante 96 horas a concen-
traciones subletales de Roundup® (2,75 mg/L). El
análisis de los frotis reveló un incremento significa-
tivo de micronúcleos y alteraciones nucleares en los
individuos tratados comparados con los controles 26.
Ensayos realizados con Roundup® en ejemplares
de Astyanax altiparanae a concentraciones de 1,58
mg/L y 5mg/L durante un periodo de cinco días,
mostraron un aumento en la incidencia de MN y AMN
en los individuos tratados con la dosis de 5 mg/L, los
autores atribuyen esta respuesta a la posibilidad de
que el Roundup® provoque el desencadenamiento
de estrés oxidativo celular, lo cual de persistir en el
tiempo, derivaría en notables lesiones citotóxicas y
genotóxicas 38.
Experiencias realizadas con varios plaguicidas
incluido el Roundup®, determinaron en la especie
Astyanax sp. el mayor potencial genotóxico de este
herbicida frente a los demás agroquímicos en estu-
dio. Los agroquímicos utilizados fueron Roundup®
(glifosato) y Hexaron® (Diuron y Hexazinona). Se re-
alizaron varios tratamientos (Roundup® 0,006 ml/L y
262
0,003 ml/L; Hexaron® 30 mg/L y 15 mg/L, y mezcla:
Roundup® 0,003 ml/L y Hexaron ® 30 mg/L) apli-
cando diferentes concentraciones de ambos compues-
tos. A través del Test de MN y AMN se observó una
acción genotóxica significativa en aquellos individu-
os sometidos al herbicida Roundup® y en los tratados
con la mezcla de ambos compuestos. Los autores
postulan que esto podría ocurrir como consecuencia
de un aumento de peróxidos lipídicos, los cuales al-
teran la integridad de las membranas celulares induc-
iendo daño en el ADN por otros tipos de radicales de
oxígeno 34.
Del mismo modo, en tratamientos crónicos
efectuados en varias especies de peces (Rhamdia
quelen, Astyanax bimaculatus, Ciprinus carpio) con
Roundup® (1,58 mg/L y 3,16 mg/L), Folicur® (0,4
mg/L y 0,8 mg/L) y una mezcla de ambos plaguicidas
(3,6 mg/L y 0,8 mg/L), se evidenció un aumento de
MN y AMN en eritrocitos de los individuos expuestos
al herbicida Roundup® y a la mezcla Roundup® -
Folicur®; este trabajo refleja un notable sinergismo
entre los compuestos cuando estos se adicionan al
mismo tiempo en el agua. Los resultados obtenidos
a las dosis de exposición testeadas podrían deberse
al potencial genotóxico del Roundup®, y la posible
acción del mismo sobre los órganos hematopoyéticos
de los teleósteos (riñón anterior y posterior). Se
presume que el herbicida podría afectar la formación
de eritrocitos, lo cual tendría relación directa con la
manifestación de anormalidades nucleares 18.
Asimismo, la prueba de micronúcleo en espe-
címenes de P. lineatus y Astyanax altiparanae ex-
puestos a Roundup® durante 96 horas, no reveló daño
mutagénico. La falta de diferencia significativa en los
valores relativos de anormalidades nucleares en indi-
viduos tratados y controles se podría deber a las con-
centraciones y los tiempos testeados del agroquímico
incapaces de producir alteraciones en el ADN. No ob-
stante, los autores no descartan el potencial tóxico del
producto 7,13.
De igual manera, investigaciones realizadas con
Roundup® en Corydoras paleatus durante tres, seis
y nueve días a una concentración baja de Roundup®
(0,00667 ml/L), en los análisis hematológicos no
presentaron diferencia entre el grupo control y
tratado, se atribuyen estos resultados a las condiciones
experimentales y a la duración del ensayo 19.
Por otro lado, pruebas de laboratorio realizadas
con peces, en donde se utilizó el glifosato en su for-
ma pura, mostraron iguales resultados a los hallados
en el presente trabajo (Roundup® Full II). Además,
tenemos que el análisis de los extendidos de sangre de
especímenes de Ancistrus brevifilis expuestos por 96
horas a las dosis de 0,1 ppm, 3 ppm y 5 ppm de glifo-
sato; revelaron que los animales sometidos a la dosis
Caramello, C.S. et al.: Test de micronúcleos. Rev. Vet. 33 : 2, 258-265, 2022
de 5 ppm presentaban una mayor frecuencia de MN y
AMN, lo cual sería un indicativo de genotoxicidad en
células sanguíneas 25. También, se estudió durante 96
horas la acción de distintas concentraciones de glifos-
ato (8,1 mg/L; 16,3 mg/L; 24,4 mg/L) en especímenes
de Chana punctatus; transcurrido el periodo de ex-
posición se determinó daño genotóxico en los indi-
viduos tratados 29, igualmente se evidenció en Danio
rerio expuesto por 360 horas a 65 μg/L de glifosato
un aumento significativo en la frecuencia de MN, se
sugirió que los peces tras absorber el compuesto des-
encadenarían como respuesta biológica la formación
de MN 28.
Incluso, en líneas celulares diploides y triploides
de peces se efectuaron estudios con glifosato en su
forma pura. Las concentraciones usadas en los cul-
tivos fueron de 80 mg/L, 240 mg/L, 400 mg/L, 560
mg/L, 720 mg/L, 880 mg/L, 1040 mg/L, los cuales
se incubaron a 25ºC por 24 horas. La línea diploide
mostró un mayor índice de MN y AMN, sin embar-
go, en ambas líneas, diploides y triploides se obser-
varon también daños a nivel de la cromatina como
condensación, retículo endoplasmático dañado y cu-
erpos apoptóticos. Los resultados indicarían que el
pesticida en el rango de las concentraciones emplea-
das presentaría un potencial riesgo, ya que inhibe la
proliferación celular y provoca lesiones citotóxicas y
genotóxicas en líneas celulares de peces 32.
Otra formulación comercial a base de glifosato
como ser el herbicida Panzer (glifosato 48%), fue em-
pleado para determinar su posible potencial genotóx-
ico en especímenes de Cnesterodon decemnaculatus.
Estos peces estuvieron en contacto con el agroquími-
co por un breve lapso de tiempo (96 horas) y a dif-
erentes concentraciones 3,9 mg/L; 7,8 mg/L y 11,8
mg/L. El análisis de los eritrocitos en los individu-
os tratados reveló un incremento en la tasa de MN y
AMN, lo cual es un indicativo de que este herbicida
presenta efectos genotóxicos 39.
Cabe mencionar, que los micronúcleos apa-
recen en las células hijas, como resultado de daños
inducidos en las células parentales. Los fragmentos
cromosómicos que resultan de quiebras, pueden no
ser incorporados en el núcleo principal de las células
hijas después de la mitosis. Una membrana nuclear se
formará alrededor del fragmento, el cual será visible
como un pequeño (micro) núcleo separado del núcleo
principal de la célula. Los MN pueden, también, for-
marse a partir de un cromosoma entero cuando ocurre
daño en el aparato mitótico de la célula, o en el propio
cromosoma. En esta situación, el MN va a contener el
centrómero del cromosoma, el cual puede ser detecta-
do utilizándose sondas específicas 33.
En cuanto a las anormalidades morfológicas nu-
cleares, se proponen que estas anomalías son rezagos
Caramello, C.S. et al.: Test de micronúcleos. Rev. Vet. 33 : 2, 258-265, 2022
anafásicos o fragmentaciones de puentes anafásicos
que durante la telofase adquieren una envoltura nucle-
ar independiente al núcleo principal 27. Sin embargo,
otros estudios plantean un modelo donde la formación
de las AMN ocurriría durante la interfase de la mitosis.
Estos autores realizaron estudios, empleando células
COLO 320 DM de carcinoma colorectal en humanos,
en el cual se amplificaron los dobles diminutos que no
se integran al núcleo o a ningún cromosoma durante
la mitosis, los cuales posteriormente son captados por
la proteína nuclear en la fase S, todo esto acontecería
durante la reconstitución de la envoltura del núcleo
37
. De esta forma, se observó que cuando la lámina
B (capa interna nuclear) se reconstruye da lugar a la
aparición de brotes o prolongaciones nucleares, las
cuales poseen un material genético que se replica y
puede ser expulsado hacia el citoplasma con la forma
de MN. Las AMN estarían compuestas por fragmen-
tos cromosómicos acéntricos, muchos de ellos inter-
sticiales, los cuales son difíciles de hallar en MN 17.
Por lo expuesto anteriormente, se podría inferir
que las modificaciones en la morfologia del núcleo
se deberían a problemas que afectan la membrana nu-
clear interna, y los defectos en la misma podrían traer
aparejado complicaciones o problemas en la mitosis
o meiosis 1.
Estudios realizados mostraron que las alter-
aciones morfológicas nucleares son originadas por
contacto con compuestos genotóxicos, dichas anom-
alías se detectaron inclusive en situaciones donde los
micronúcleos no fueron inducidos 2. Diversos autores
asocian la presencia de núcleos blebbed con efectos
clastogénicos 4 y la aparición de células binucleadas
sería un indicador de citotoxicidad 9. Por lo tanto, las
anormalidades morfológicas nucleares son hallazgos
cuya importancia sería análoga a la de los micronú-
cleos, y tiene gran relevancia como herramienta en el
monitoreo ambiental.
CONCLUSIÓN
Los datos obtenidos en este trabajo nos permiten
determinar la capacidad del glifosato de inducir a le-
siones del material genético observables en eritrocitos
periféricos, demostrando su potencial genotóxico y
citotóxico. La frecuencia de aparición de las lesiones
evaluadas está intrínsecamente ligada a la concen-
tración de glifosato empleada. De tal manera, que al
aumentar la concentración del herbicida, el número
de anormalidades también se eleva, determinando de
esta manera la capacidad contaminante del glifosato y
su potencial efecto deletéreo sobre el medio ambiente.
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Revista Veterinaria (UNNE) Rev. Vet. 33: 2, 266-272, 2022

ISSN (paper): 1668-4834 www.vet.unne.edu.ar
ISSN (on line): 1669-6840 Cabral 2139, Corrientes 3400, Argentina

Evaluación preliminar del poder antigénico in vivo de una nueva

formulación para la inmunoprofilaxis de la babesiosis bovina
Del Río Álvarez, F.R.1,2; Peichoto, M.E.2,3; Palma, S.4; Maletto, B.4; Lozina, L.1,2,5
1
Dpto. Clín. Facult. Cs. Vet., Univ. Nac. Nord. (UNNE), Cabral 2139, Corrientes, Argentina.
2
Consejo Nacion. Investig. Científ. Técn. (CONICET), Argentina. 3Instit. Nac. Med. Trop.
(INMeT), Misiones, Argentina. 4Dpto. Farm. Facul. Cs. Quim. Univ. Nac. Córdoba. 5Lit.
Biológicos, Puerto Tirol, Chaco, Argentina.

Resumen
Del Río Álvarez, F.R.; Peichoto, M.E.; Palma, S.; Maletto, B.; Lozina, L.: Evaluación preliminar
del poder antigénico in vivo de una nueva formulación para la inmunoprofilaxis de la babesiosis
bovina. Rev. Vet. 33: 2, 266-272, 2022. La babesiosis bovina es una enfermedad hemoparasitaria
causada por protozoarios del género Babesia, siendo los de mayor importancia Babesia bovis y B.
bigemina, ambos transmitidos por la garrapata común del bovino, Rhipicephalus microplus. Junto
con la anaplasmosis, forman el complejo tristeza bovina, uno de los principales factores limitantes
para el desarrollo productivo en zonas tropicales y subtropicales del mundo. Actualmente,
para la profilaxis de la babesiosis bovina en Argentina solo se dispone de vacunas vivas en las
presentaciones, fresca y ultra congelada. En el presente trabajo, se evaluó la inmunogenicidad
de eritrocitos parasitados con Babesia sp y deshidratados, incorporados a un nuevo adyuvante,
formulado para uso en humanos, como una nueva alternativa inmuno profiláctica. Con tal fin,
eritrocitos parasitados obtenidos a partir de cultivos in vitro, fueron deshidratados por técnicas
de secado por aspersión y ensamblados con un adyuvante. Se utilizaron 12 terneros negativos a
hemoparásitos que fueron distribuidos en 4 grupos de 3 animales cada uno. Grupo Control: sin
inocular; Grupo Tratado 1: inoculado con adyuvante; Grupo Tratado 2: adyuvante + eritrocitos
parasitados con B. bovis y Grupo Tratado 3: adyuvante + eritrocitos parasitados con B. bigemina.
Se realizaron dos inoculaciones subcutáneas, los días 0 y 15. Durante 60 días, se realizó el control
de temperatura rectal, hematocrito y parasitemia, así como el muestreo para serología a los 30 y
60 días post-inoculación. Los animales se mantuvieron negativos durante todo el ensayo, excepto
al día 60, donde el 33% del Grupo Tratado 3 presentó titulación de anticuerpos contra el agente
inoculado, B. bigemina. Si bien el porcentaje de respuesta es bajo, el hecho de no contar a nivel
mundial con una vacuna muerta eficaz para la profilaxis de esta enfermedad, nos alienta a continuar
ajustando la dosis inoculante.

Palabras clave: babesiosis, inmunoprofilaxis, eritrocitos, adyuvante, secado por aspersión.

Abstract
Del Río Álvarez, F.R.; Peichoto, M.E.; Palma, S.; Maletto, B.; Lozina, L.: Preliminary
evaluation of the in vivo antigenic power of a new formulation for the bovine babesiosis
immunoprophylaxis. Rev. Vet. 33: 2, 266-272, 2022. Bovine babesiosis is a hemoparasitic
disease caused by protozoa of the genus Babesia, the most important are Babesia bovis and B.
bigemina, both transmitted by the common bovine tick, Rhipicephalus microplus. In combination
with anaplasmosis, they form the Bovine Tristeza Complex, one of the main limiting factors for
productive development in tropical and subtropical areas of the world. Currently, for the prophylaxis
of bovine babesiosis in Argentina, only live vaccines are available in fresh and deep-frozen
presentations. In the present work, we evaluated the immunogenicity of erythrocytes parasitized

Recibido: Abril 2022. Aceptado: Julio 2022.

Del Río Álvarez F.R. et al.: Inmunoprofilaxis de babesiosis bovina. Rev. Vet. 33 : 2, 266-272, 2022 267

with Babesia sp, dehydrated and incorporated into a new adjuvant, formulated for use in humans,
as a new immuno prophylactic alternative. With this aim, parasitized erythrocytes obtained from
in vitro cultures were dehydrated by spray-drying techniques and assembled with an adjuvant.
Twelve calves negative for blood parasites were used, which were divided into 4 groups of 3
animals each one. Control group: without inoculation; Treated Group 1: inoculated with adjuvant;
Treated Group 2: adjuvant + erythrocytes parasitized with B. bovis and Treated Group 3: adjuvant
+ erythrocytes parasitized with B. bigemina. Two subcutaneous inoculations were performed, on
0 and 15 days. During 60 days, rectal temperature, hematocrit and parasitaemia control were
performed, in turn, samples for serology were taken on 30- and 60-days post inoculation. The
animals remained negative throughout the trial, except on day 60, where 33% of Treated Group 3
presented specific antibody titers against the inoculated agent, B. bigemina. Although the response
rate is low, the fact that there is no effective killed vaccine for the prophylaxis of this disease
encourages us to continue adjusting the inoculant dose.

Key words: babesiosis, immunoprophylaxis, erythrocytes, adjuvant, spray-drying.

INTRODUCCIÓN adversas sobre pacientes bajo cierto grado de estrés,

La babesiosis bovina es una enfermedad
anemizante, causada por protozoarios del género
Babesia, orden Piroplasmida, phylum Apicomplexa.
De las especies que afectan al ganado bovino, B. bovis
y B. bigemina son las de mayor importancia a nivel
mundial por perjudicar severamente la rentabilidad de
las empresas rurales.
Esta hemoparasitosis es transmitida por la
garrapata común del bovino, Rhipicephalus microplus,
ampliamente distribuida en las zonas tropicales y
subtropicales del mundo 3 . Debido a su patogenicidad
y extensión, las enfermedades hemotrópicas y sus
vectores, se consideran uno de los principales factores
limitantes para el desarrollo genético y zootécnico de
los sistemas de producción bovina 1 .
El método inmuno-profiláctico aplicando
un inmunógeno a base de microorganismos vivos
atenuados, representa una herramienta importante
utilizada en nuestro país. La vacunación con estos
inmunógenos se encuentra indicada en animales de
entre 4 a 10 meses de edad, ya que su aplicación en
bovinos adultos o inmuno suprimidos podría producir
la enfermedad en los animales inoculados, y en casos
graves, la muerte de los mismos 14 .
Si bien, resultados no publicados del
equipo de trabajo demuestran la ausencia de
efectos no deseados de la vacuna ultracongelada,
según organismos internacionales, las vacunas a
partir de microorganismos vivos no se consideran
completamente seguras 21 .
Como características generales, pese a
ser efectivas, presentan numerosas potenciales
desventajas, entre ellas las severas reacciones
riesgo de reversión de su estado de atenuación o
de transmisión de otros patógenos, un sistema de
producción laborioso y la vida media corta cuando se
comercializa refrigerada 5, 6, 16, 24 .
Como ventajas, las vacunas muertas tienen
mayor margen de seguridad, los animales inmuno
suprimidos no enferman, no existe riesgo de
diseminación, libres de patógenos residuales y poseen
condiciones menos exigentes de conservación.
Sus desventajas principales consisten en
riesgo de alterar el inmunógeno protector, baja
inmunogenicidad, lenta respuesta inmune, protección
incompleta y de corta duración, por lo cual se hace
necesario incorporar al protocolo varias dosis y/o
adyuvantes 20 .
En la actualidad, se encuentran disponibles dos
presentaciones de la vacuna viva para la profilaxis
del complejo tristeza bovina, fresca y ultracongelada,
ambas presentan ciertos inconvenientes. Así, en
el primer caso el tiempo, por sus características
extemporáneas es el factor limitante; y en el segundo
caso, si bien la durabilidad de la vacuna es de dos
años desde su elaboración, el requerimiento de
termos de nitrógeno líquido dificulta su traslado y
manipulación 2 .
Es por esto que la obtención de una tercera
presentación deshidratada, que combine estabilidad
en el tiempo y practicidad en su manipulación, y que,
además sea segura en categorías adultas, redundaría
en cuantiosos beneficios.
Por lo expuesto, el presente estudio propone
una nueva presentación de la vacuna para la inmuno-
profilaxis de la babesiosis bovina, basada en eritrocitos
parasitados con B. bovis y B. bigemina, deshidratados
268 Del Río Álvarez F.R. et al.: Inmunoprofilaxis de babesiosis bovina. Rev. Vet. 33 : 2, 266-272, 2022
por aspersión y formulados con un adyuvante,
evaluando la actividad inmunogénica y respuesta
clínica, así como los posibles efectos adversos.
MATERIAL Y MÉTODOS
Cultivo y mantenimiento de cepas
Eritrocitos parasitados fueron obtenidos
a partir de cultivos in vitro en fase estacionaria,
mantenidos en condiciones de micro aerofilia de 48
h 23 . Los cultivos se iniciaron a partir de crioviales,
conteniendo las cepas vacunales de B. bovis, R1A y
B. bigemina S1A, proporcionados por el Laboratorio
Litoral Biológicos S.R.L. (Puerto Tirol, Chaco),
preservados con PVP disuelta en solución Vega y
Martínez (VYM) 29 en una atmósfera de CO2 5%, O2 5%
y balance de N2 90%. Los cultivos in vitro contienen
un 10% de paquete globular (PG) y medio completo
(MC) formulado con 60% de Medio 199 y 40% de
suero normal bovino. El cambio de medio se realizó
cada 24 h, desechando el sobrenadante (SN) que
contiene residuos del metabolismo de los eritrocitos y
protozoarios, y reemplazándolo con MC nuevo. Cada
48 h, se realizaron subcultivos para evitar el exceso
de hemoparásitos. Una vez logradas parasitemias
superiores a 10% y 7% para B. bovis y B. bigemina,
respectivamente, los eritrocitos fueron centrifugados
a 2.500 rpm durante 10 min a 4°C, desechando el SN
y colectando el PG para su deshidratación.
Deshidratación por spray-drying
El PG mantenido a 4°C fue fraccionado en
alícuotas y secado por aspersión en un Mini Spray
Dryer Buchi B-290 (BÜCHI Labortechnik AG)
de la Facultad de Ciencias Químicas (UNC), bajo
condiciones controladas, a saber: temperatura de
ingreso: 45°C, aspiración: 75%, bomba: 5%, nozzle
cleaner: 2, rotámetro: 50 mmHg. Finalizada la
deshidratación, el material se mantuvo a 4°C hasta
su uso.
Ensamblado de adyuvante
La puesta a punto del proceso de ensamblado
entre el adyuvante y el antígeno, se realizó en la cátedra
de Farmacología y Toxicología, FCV-UNNE. Las
muestras fueron preparadas mediante la incorporación
de los componentes en tubos herméticamente
cerrados, para lo cual se inició pesando el PG
deshidratado parasitado con B. bovis y B. bigemina
separadamente, en una cantidad equivalente a 1 x 10
8
eritrocitos parasitados. El adyuvante, palmitato de
ascorbilo (ASC16), también fue pesado e incorporado
al 2%, junto con el diluyente, dextrosa al 5%. Las
suspensiones, así constituidas, fueron homogeneizadas
en vórtex y luego calentadas a 80°C en un baño maría,
hasta alcanzar la temperatura micelar crítica (TMC)
y nuevamente homogeneizadas 25 . Finalmente, se las
dejó en reposo hasta tomar temperatura ambiente,
momento en el cual se produce el ensamblado del
adyuvante incorporando el antígeno, formando así
un gel. El mismo procedimiento fue aplicado a tubos
sin eritrocitos parasitados, los cuales constituyeron el
grupo control, conteniendo sólo adyuvante.
Inoculación
Se utilizaron n=12 terneros mestizos de
Bradford, de entre 8 y 10 meses de edad, con serología
negativa para anaplasmosis y babesiosis, provenientes
de un establecimiento libre de garrapatas, “Estancia
San Lorenzo”, localidad de Felipe Yofre, ubicado
en Mercedes, Corrientes, Argentina. Los animales
fueron distribuidos aleatoriamente en grupos de la
siguiente manera: Grupo Control (GC): n=3 terneros
sin inocular. Grupo Tratado 1 (GT1): n=3 terneros
inoculados con ASC16. Grupo Tratado 2 (GT2):
n=3 terneros inoculados con PG parasitados con B.
bovis + ASC16. Grupo Tratado 3 (GT3): n=3 terneros
inoculados con PG parasitados con B. bigemina
+ ASC16. Las inoculaciones se realizaron vía
subcutánea (SC), con un intervalo de 15 días.
Control clínico
A partir de su estado de salud, se realizaron
controles en busca de reacciones locales en el
sitio de inoculación, medición de temperatura
rectal (diariamente hasta el día 21, luego cada 7
días), determinación de hematocrito y parasitemia
semanalmente. la segunda inoculación, los terneros
fueron inspeccionados diariamente para evaluar.
Control de respuesta inmunogénica
Se tomaron muestras de sangre a los 30 y 60 días
post-inoculación para titulación de anticuerpos por
ELISA indirecto. Estas muestras fueron procesadas
por la Estación Experimental de INTA – Rafaela.
Análisis estadístico
El análisis de los datos se realizó utilizando
el programa Infostat/profesional versión 2006. Los
cálculos de la estadística descriptiva determinaron
media y desvío estándar de los datos evaluados, así
como también, el análisis de la varianza (ANOVA)
y la comparación de las medias por el test de Tukey
utilizando un p<0,05.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En el presente trabajo se logró la reactivación
de cepas vacunales de B. bovis y B. bigemina en
cultivos in vitro, así como su deshidratación por
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aspersión. Existen antecedentes de secado por esta
técnica donde los eritrocitos no solo mantienen su
viabilidad, sino que también logran ser funcionales en
un nuevo hospedador 4 .
En un reporte anterior del equipo de trabajo, se
discute el efecto de temperatura, adición de adyuvantes
de secado y diferentes métodos de deshidratación que
podrían explicar estos resultados 9 . Estos trabajos,
son alentadores para continuar perfeccionando la
técnica propuesta, en la búsqueda de un protocolo
que permita la utilización de los merozoitos en forma
deshidratada.
Por otro lado, en el presente trabajo se logró
la formulación del inmunógeno, a partir de la
incorporación del PG deshidratado al adyuvante,
evidenciándose la formación de un gel homogéneo,
de consistencia semisólida, firme y de una coloración
marrón clara. La característica de viscosidad de la
formulación permitió una adecuada aplicación por
vía SC.
El adyuvante usado en el presente estudio,
desarrollado por investigadores de la Facultad de
Ciencias Químicas de la Universidad Nacional de
Córdoba (FCQ-UNC), fue formulado para uso en
humanos. El mismo, proporciona una liberación
sostenida en el tiempo del antígeno in vivo e induce
respuesta inflamatoria local per se, ofreciendo varias
ventajas como bio-material: a) sus componentes
son biodegradables; b) conserva sus propiedades
antioxidantes; c) dispone de una estructura apropiada
para transportar moléculas hidrofóbicas e hidrofílicas;
d) es bien tolerado; e) es fácil de producir a gran escala
39,6
39,4
39,2
39
Tº rectal (ºC)
38,8
38,6
38,4
38,2
38
37,8
0 1 2 3 4 5
Figura 1. Media aritmética de la variable temperatura corporal, en los diferentes tiempos de muestreo, para
cada grupo.
269
y de bajo costo.
Esta estrategia adyuvante ha sido evaluada
con buenos resultados en ratones de experimentación
utilizando un antígeno proteico 25 , y hasta el
presente estudio, no se habían realizado pruebas
en otros animales. El ASC16 en la actualidad es
utilizado sólo o en combinación con alfa-tocoferoles
como estabilizantes para aceites en formulaciones
farmacéuticas orales y productos alimenticios.
También es utilizado como antioxidante en
formulaciones con compuestos sensibles al oxígeno
para administración oral y tópica 28 .
A partir del seguimiento diario de los terneros,
se observó ausencia de reacciones tisulares locales
en todos los grupos, sin presencia de inflamación,
enrojecimiento, aumento de temperatura local o
abscesos. Esto se contrasta con lo descripto por otros
autores, quienes obtuvieron respuestas inflamatorias
locales al usar el mismo adyuvante en ratones 25 así
como al utilizar adyuvantes a base de aceite como el
Adyuvante Completo de Freund (FCA) en bovinos 26 .
Durante el seguimiento de los grupos
experimentales, todos los animales se mantuvieron
en el rango considerado fisiológico para la especie,
comprendido entre 38 a 39,5°C 27 (Figura 1),
no encontrándose diferencia estadísticamente
significativa entre los grupos analizados. Estos
resultados coinciden con los expuestos por autores
que obtuvieron medias de 38,9ºC ± 0,3 en bovinos
vacunados con una vacuna muerta a base de exo-
antígenos de B. bovis más saponina como adyuvante 13 .
Temperatura rectal
6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 28 35 42 49 56 60
Tiempo (días)
GC GT1 GT2 GT3
270 Del Río Álvarez F.R. et al.: Inmunoprofilaxis de babesiosis bovina. Rev. Vet. 33 : 2, 266-272, 2022

Figura 2. Media y desvío estándar para la variable % Hto, en los diferentes tiempos de muestreo, para cada
grupo.
Los resultados obtenidos por la técnica de microhematocrito evidenciaron la ausencia de anemia,
manteniéndose durante todo el ensayo en el rango considerado fisiológico, comprendido entre 24% y 46% 27
(Figura 2).

El Test de Tukey realizado para esta variable
comparando los días 0 y 60 post segunda inoculación,
aplicando un p<0,05, evidenció que los Grupos
Tratados 1 y 2 presentaron diferencias estadísticamente
significativas en sus medias, arrojando valores de
34,73 ± 0,27 y de 31,50 ± 0,27 en cada caso, en
contraste con las medias del Grupo Control y Grupo
Tratado 4 quienes presentaron valores de 32,57 ± 0,27
y 32,97 ± 0,27, respectivamente.
Esto no tiene una importancia clínica, debido
a que el rango fisiológico de este parámetro es
muy amplio y la variación registrada se mantuvo
comprendida dentro del mismo.
En los frotis sanguíneos (extendido fino y
gota gruesa) teñidos con Giemsa y observados al
microscopio óptico no se pudo evidenciar la presencia
de los hemoparásitos en estudio. Esto podría deberse a
que el hemoparásito no sería viable para su replicación
en el hospedador en su condición de re-hidratado.
Numerosos autores reportaron que, al utilizarse
vacunas muertas o SN con exo-antígenos, las mismas
no producen reacciones en el organismo, como fiebre,
disminución del hematocrito o parasitemia, resultados
que coinciden con los obtenidos en este trabajo 10, 13, 17,
18, 22
. no se realizó el desafío de los animales inoculados, lo
La actividad inmunogénica, evaluada por
técnicas de ELISA, evidenció a los 30 días post
inoculación, la ausencia de titulación de anticuerpos
frente a Babesia sp para todos los grupos. Sin embargo,
al día 60, el 33% de los animales del GT3, presentó
anticuerpos frente a B. bigemina, parásito contra el
que fue inmunizado, manteniéndose los demás grupos
negativos.
Si bien existe un porcentaje de positividad, estos
resultados no coinciden completamente con reportes
previos, donde al utilizar vacunas con exo-antígenos
más Quil A saponina como adyuvante, obtuvieron una
respuesta inmunitaria de tipo humoral a partir del día
21, detectada por ensayos de inmuno-fluorescencia
indirecta (IFI) en todos los bovinos vacunados 10, 13,
17, 18, 22
y obteniendo una respuesta protectora frente al
desafío realizado entre los 30 y 60 días post segunda
dosis vacunal, con una cepa patógena 13, 17, 18, 22.
El enzimo-inmuno análisis (ELISA) es la
prueba de diagnóstico de elección para Babesia
sp, debido a la objetividad en la interpretación de
los resultados y a la capacidad de procesar grandes
cantidades de muestra por día 11, 15, 21 . Sin embargo, el
uso de títulos de anticuerpos como indicador directo
de protección puede no ser apropiado 10 .
La respuesta de anticuerpos evaluada por la IFI
y por la actividad de inhibición del crecimiento in vitro
mostró que la sero-conversión se correlaciona con la
actividad de neutralización in vitro, pero no con la
inmunidad protectora in vivo 14 . En el presente estudio,
cual podría haber arrojado mayor información sobre
la respuesta al inmunógeno propuesto.
Ensayos evaluando diferentes coadyuvantes
evidenciaron que con los antígenos de B. bovis y B.
divergens, el FCA no es tan efectivo como la saponina
26
. De manera similar, el uso de un adyuvante a base de
Del Río Álvarez F.R. et al.: Inmunoprofilaxis de babesiosis bovina. Rev. Vet. 33 : 2, 266-272, 2022
vitamina E no es efectivo con respecto a la inducción
de inmunidad protectora por B. canis en caninos 12 .
Aunque ha habido pocos informes sobre el
uso de otros adyuvantes, se demostró que el uso de
Quil A saponina brinda una buena protección para tres
especies diferentes de Babesia en bovinos. Usando
ADN recombinante fusionada a proteínas de B. bovis
se encontró que la Quil A saponina inducía niveles
más fuertes de protección que el FCA o la saponina
de grado comercial 26 .
Si bien aún no se cuenta con una presentación
inmuno-profiláctica a base de microorganismos
muertos para la babesiosis bovina, para la babesiosis
canina existe una vacuna deshidratada, a base de SN
de B. canis y B. rossi, que utiliza saponina como
coadyuvante, Eurican® PIRO, la cual provee una
inmunidad de 6 meses de duración 12 .
En el presente trabajo, sólo uno de seis
terneros inoculados con hemoparásitos deshidratados
demostró titulación de anticuerpos bajo la técnica de
ELISA. Hasta el momento, a nivel mundial, no se ha
logrado la puesta a punto de una vacuna muerta eficaz
para la profilaxis de la babesiosis bovina.
Se ha preparado una vacuna muerta contra B.
divergens a partir de la sangre de terneros infectados
30
, pero se dispone de poca información sobre el
nivel y la duración de la inmunidad que confiere.
Existen antecedentes de otras vacunas experimentales
conteniendo antígenos de Babesia sp y Anaplasma
sp producidas in vitro 19 , pero no está claro cuál es
el grado y la duración de la protección contra cepas
heterólogas de desafío.
A pesar de la caracterización de distintas
proteínas del parásito y del genoma de B. bovis 7 ,
así como de los considerables esfuerzos realizados
a nivel internacional para lograr la identificación de
antígenos candidatos a formar parte de la vacuna, las
posibilidades de conseguir vacunas recombinantes
contra Babesia spp siguen siendo escasas y hasta
ahora no se ha comercializado ninguna vacuna de
subunidades eficaz 8 .
En el presente estudio, de los seis individuos
inmunizados (GT2 y GT3) solo un animal presentó
anticuerpos específicos contra el hemoparásito
inoculado. Si bien el porcentaje es bajo, no es del todo
desalentador ya que, si un animal pudo reaccionar a la
vacuna presentando títulos de anticuerpos específicos,
se demuestra la presencia del poder antigénico de la
misma.
Debemos tener en cuenta que esta alternativa
inmuno-profiláctica es totalmente nueva, pero
promisoria, y que por el momento se encuentra en las
primeras fases de su investigación y experimentación
en bovinos. Ensayos posteriores se realizarán para
ajustarla dosis y someterlos a desafío con cepa
patógena.
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