CURSO DE FITOPATOLOGÍA 2023 I

ACTIVIDAD PRÁCTICA 1: USOS DEL MICROSCOPIO DE LUZ Y

CONTEO DE ESTRUCTURAS MICROSCOPICAS

Profesora: Gloria Patricia Castillo Urquiza, IA, MSc, PhD, Fitopatología

INTRODUCCIÓN

El microscopio es un instrumento especialmente diseñado para el estudio de estructuras y objetos

pequeños (microscópicos) que no pueden ser examinados a simple vista. El microscopio es una
herramienta fundamental en los estudios que involucran microorganismos los cuales son invisibles al
ojo humano. Este equipo es de uso común y constante en el laboratorio de Fitopatología, por lo tanto
conocer su funcionamiento permite realizar un uso óptimo del mismo, tener los cuidados necesarios y
realizar observaciones de calidad. La mayoría de los fitopatógenos pertenecen al grupo de los hongos,
por esa razón en conjunto con el buen manejo del microscopio está la identificación de las estructuras
características que nos ayudarán en un diagnóstico previo.

En algunos procedimientos se hace necesario cuantificar el número de células presentes en

determinada preparación, por ejemplo, la concentración de conidias de un hongo presentes en una
suspensión o en un raspado, para este fin está el uso de cámaras de conteo o cámara de Neubauer.

OBJETIVOS
 Mostrar los componentes básicos del microscopio de luz y enseñar su uso apropiado y
cuidados
 Familiarizar al estudiante con los componentes del hemacitómetro (Cámara de conteo
Neubauer).

CARACTERÍSTICAS Y FUNCIONAMIENTO DEL MICROSCOPIO

Entre los instrumentos ópticos conocidos con el nombre de microscopio se incluyen los llamados
microscopios simples o lupas, compuestos por una sola lente, o un solo sistema de lentes
convergentes; y los microscopios compuestos, cuya parte óptica consta de dos lentes, o dos sistemas
de lentes convergentes: ocular y objetivo. El microscopio simple da una imagen aumentada, derecha
y virtual. El microscopio compuesto da una imagen aumentada, invertida y virtual.

El microscopio compuesto es un instrumento óptico que se emplea para aumentar o ampliar las
imágenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. Con una serie de aditamentos permiten
medir y contar los objetos que ayuda a observar. Antes de hacer uso del microscopio compuesto se
debe reconocer sus componentes y sus funciones. El microscopio es un instrumento delicadamente

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ajustado, que se debe manejar con mucho cuidado.

Actividad 1. Los componentes de un microscopio compuesto son de dos tipos: mecánicos y ópticos.
Llenar el siguiente cuadro con las funciones de cada pieza del microscopio y posteriormente
identificarlas en la figura 1.

Parte mecánica del microscopio de luz

Pieza Función
Pie Proporciona equilibrio y estabilidad al microscopio.
Tubo Conecta los oculares con los objetivos
Revólver Contiene el sistema de lentes objetivos, permite al girar cambiar los
objetivos.
Brazo Conecta todas las partes del microscopio.
Platina Soporte para las muestras a estudiar.
Carro Desplaza las muestras con movimiento ortogonal de derecha a izquierda, y
de adelante hacia atrás.
Tornillo macrométrico Movimiento de la platina con desplazamientos amplios para un enfoque
inicial.
Tornillo Micrométrico Movimiento de la platina con desplazamientos muy cortos, para un enfoque
preciso.

Sistema óptico del microscopio de luz

Pieza Función
Oculares Amplia la imagen que proviene de los objetivos.
Objetivos Colectan la luz y proyectan una imagen nítida, real e invertida.
Objetivo de inmersión Observación de muestras muy pequeñas.

Sistema de iluminación del microscopio de luz

Pieza Función
Lámpara Iluminar la muestra
Condensador Concentra los rayos de luz sobre la muestra
Diafragma Regula la cantidad de luz que entra al condensador.

Colocar el número respectivo de acuerdo con la parte mostrada en la figura 1.

Número Parte
1 Oculares
2 Revólver con objetivos
3 Platina
Desplazamiento de la platica
Macrométrico
Micrométrico
Abertura del condensador
Condensador
Ajuste altura de condensador
Ajuste del condensador

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 11 Toma corriente
12 Encendido
13-15 Regulación de luz
Figura 1. Partes de un microscopio óptico

USO Y CUIDADO CON EL MICROSCOPIO

Actividad 2. Nombre al menos 8 cuidados que se debe tener al utilizar de forma adecuada y con cuidado el microscopio.

CONTEO DE CONIDIAS O PROPÁGULOS DE HONGOS EN LA CÁMARA DE NEUBAUER O

HEMACITÓMETRO

La cámara de Neubaer o hemacitómetro permite determinar el número de partículas por unidad de volumen de un líquido.
El recuento se hace visualmente con un microscopio.

Figura 2. Cámara de Neubauer de doble cuadrícula

Esta cámara es una base en vidrio especial del tamaño de un portaobjetos y se encuentra dividida en tres porciones, las dos
laterales sobresalen 0,1 mm respecto a la central (=profundidad de la cámara), lo cual indica que entre la base y el
cubreobjeto una vez colocado existe una distancia de 0,1 mm. La porción central, se encuentra subdividida en dos partes
sobre las que están grabadas cuadrículas de recuento idénticas (=fondo cámara).

La profundidad de la cámara es de 1 mm

La cuadrícula de recuento muestra:

9 cuadros grandes, cada uno de 1 mm2, los
cuadros de las esquinas están divididos en 16
cuadrados medianos, los que contienen 25
cuadrados pequeños cada uno de 0.0025 mm2.

El volumen de cada cuadrado grande es:

(área) x (profundidad) = volumen
1 mm2 x 1 mm = 0,1 mm3 o 0,1 µl

METODOLOGÍAS DE CONTEO DE PROPÁGULOS

Metodología 2 (cuadro central). Se cuenta el número de esporas presentes en 5 cuadrados medianos del cuadro principal
central (resaltado en rojo).

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Actividad 3. Utilizando las suspensiones de esporas preparadas realice los respectivos conteos de número de conidias por
ml y con estos datos de concentración realizar cálculos para la preparación de inóculos.