Control Biológico AGR
Control biológico de fungus gnats (mosco fungoso negro) mediante bacillus
thuringiensis (Prot Cry)
Luis Guillermo Feria Barrera1
En Mexico, el mosco fungoso negro
Bradysia spp. Del género Diptera:
Sciaridae es considerado una de las
plagas de mayor presencia en viveros
e invernaderos que se ubican al centro
y sur del país. En los meses de
primavera a otoño, las condiciones de
humedad y temperatura son
adecuadas para que la población
aumente rápidamente. Las grandes
poblaciones de mosco fungoso
pueden ser un problema en la
producción de plántula ya que son
portadores de oosporas de diversos
hogos fitopatógenos. Las larvas se
alimentan de materia orgánica en
descomposición, hongos y raíces
sanas de las plánulas. La raíz herida
es vulnerable a cualquier ataque
bacteriano o fúngico. En 1990
Gardiner et al. Demostraron que son
portadoras de hifas y oosporas de
fitopatógenos como Pythium spp.
Las plántulas atacadas por las larvas
del mosco fungoso negro presentan
síntomas que son fácilmente
confundidos por un ataque fúngico o
bacteriano. Las plantas preentan
pérdida de vigor, marchitez súbita,
pudrición de la raíz, follage
amarilliento, escaso crecimiento y
caída de hojas.
El control del mosco fungoso se hace
por medio de insecticidas químicos
como: flufenoxuron, diflubenzuron,
deltametrina y azadiractina,
reguladores de crecimiento y amplificaciones por PCR utilizando
bioplagicidas (Frey, 1948).
Instituto Tecnológico Superior de Ciudad Hidalgo
En AGR implementamos sistemas de
biocontrol con Bacillus thuringiensis
var. Israeliensisi, kurstaki y berliner
con ATTC: 35646, 33679 y 10792
respectivamente para crear Prot Cry,
un insecticida-larvicida biológico.
Estas tres cepas presentan la
capacidad de generar δ-endotoxinas:
Cry, Chi y Cyt.
Se realizó un análisis completo del
genoma de Bacillus thuringiensis
ATTC 10729 y se identificaron un total
de 6269 proteínas con 5427594 bps y
cuatro plásmidos nuevos (poh2, poh3,
poh4, poh5) con un total de 134, 131,
96, 21 proteínas con 113294; 92.949;
86488; Se identificaron 11332 bps. Se
identificaron seis genes selectivos
(lipoproteína-lipo, metiltransferasa-
MT, proteína homologa S-layer del
dominio de la proteína BC, proteína
motora flagelar-motB y regulador
transcripcional-XRE, (proteína
cristalina-cry2) una δ-endotoxina
ampliamente utilizada en el control
biológico de larvas y nemátodos
(Chelliah, 2019).
Se ha registrado que Bacillus
thuringiensis var israeliensisi. ATTC
35646 tiene una producción elevada
de proteínas insecticidas
denominadas toxinas Cry (cristal), Cyt
(citolíticas) y Chi (quitinasa), ya los
efectos sinérgicos entre ellas. Para
esta línea se realizó un análisis de
ADN aislado y sometido a
cebadores específicos para los genes
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cry4Aa, cry4Ba, cry11Aa, cry11Ba, Análisis de actividad larvicida de

cyt1Aa, cyt1Ab, cyt2Aa y chi para las cepas seleccionadas
evaluar la capacidad de la cepa por
El análisis se realizó con dos especies
producir estas proteínas, el 4.2% de
larvarias Fungus gnats y Anopheles
las células evaluadas generan
gambiae. Se utilizaron 50 larvas in
proteínas Cry y el 54.3% generan
vitro por triplicado: F05 (5mL/L), F10
proteínas Chi. Las quitinasas (Chi) son
(10mL/L), F15 (15mL/L), F20 (20mL/L)
las encargadas de degradar la quitina
y FCTL (Grupo control); A05 (5mL/L),
de la pared celular de los insectos del
A10 (10mL/L), A15 (15mL/L), A20 (20
género coleóptero y díptero, así como
mL/L) y ACTL (Grupo control).
de provocar la lisis celular en hongos
del suelo (Paris, 2011). Las cepas se crecieron en caldo
nutritivo adicionado con 4 g/L de
Para Bacillus thuringienis var kurstaki
fructosa y 2 g/L de almidones para
se realizaron ensayos para evaluar la
inducir la esporulación, se normalizó la
mortalidad en los diferentes estadios
concentración celular a 2.27X107UFC.
de la mosca blanca en frutos rojos de
piel blanda. las cepas de Bacillus
thuringiensis var. kurstak, causaron
una alta mortalidad (75 a 100%) en el
primer estadio. Mortalidad pupal
medido y como se dificulta la ingesta
de las moscas adultas se consideró
como fracaso para el caso de los
adultos. El primer estadio de D. suzukii
fue el más susceptible de los tres Tinción Gram de bacillus thuringiensis ATTC 33679
estadios larvarios a B. thuringiensis
var. kurstaki HD-1. De acuerdo con los
análisis, existen dos tipos de
proteínas: Cry (cry4A, Cry4B y
Cry11A) y Cyt (Cyt1A y Cyt2B)
presentes en esta cepa. La correlación
positiva encontrada entre la
coexistencia de proteínas Cyt1-Cyt2 y
una alta actividad larvicida, además de
la alta conservación encontrada entre
las secuencias determinadas hasta el Tratamiento en dos especies larvarias Fg (Fungus
momento, apuntan a un importante gnats) y Ag (Anopheles gambiae) en diferentes dosis,
5ml/l, 10mL/l, 15ml/l 20ml/l y un grupo control con
papel biológico de las proteínas Cyt en agua.
la toxicidad global de los cristales Cry
(Guerchicoff, 2001). Al cabo de 36 horas se evaluó los
resultados:
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Evaluación de la actividad larvicida de Prot Cry

en larvas de Fungus gnats durante 36h
12
10
Número de larvas

8
6
4
2
0
Muertes FCtl Muertes (5ml) Muertes (10ml) Muertes (15ml) Muertes (20ml)
Series1 0 4 4 7 10
Series2 0 4 5 8 10
Series3 0 3 6 7 9
Tratamiento en diferentes dosis

Series1 Series2 Series3

Evaluación de la actividad larvicida de ProtCry en larvas de Fungus gnats durante 36 horas. Se observa que
la eficiencia es dependiente de la consentración, teniendo un major desempeño a 20ml por litro.

Evaluación de la actividad larvicida de Prot Cry

en larvas de Anopheles gambiae durante 36h
12
10
Número de larvas

8
6
4
2
0
Muertes FCtl Muertes (5ml) Muertes (10ml) Muertes (15ml) Muertes (20ml)
Series1 0 4 4 7 10
Series2 0 4 5 8 10
Series3 0 3 6 7 9
Tratamiento en diferentes dosis

Series1 Series2 Series3

Evaluacion de actividad larvicida de Prot Cry en larvas de Anopheles gambiae durante 36 horas. Se observa que
la eficiencia es dependiente de la concentración. Al cabo de 42 horas las larvas alcanzaron a su etapa adulta.
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Las larvas evaluadas comenzaron a
presentar síntomas al cabo de 8 horas,
presentan poca movilidad y poca
reacción a los estímulos externos. Las
larvas de Anopheles gambiae
alcanzaron su etapa adulta después
de 48 horas en los grupos control.
Existe una creciente evidencia que
demuestra que las proteínas Cyt y Cry
de Bacillus thuringiensis var
israeliensis interactúan con las
proteínas Chi y Cry de Bacillus
thuringiensis var kurstaki y berliner, en
combinación sinérgica específica en el
intestino de los insectos para ejercer
su efecto biológico letal y debido a que
los genes que codifican para la
expresión de las proteínas Cry, Chi y
Cyt están ampliamente distribuidas
entre las variedades de subespecies
thuringiensis,
Prot Cry es una alternativa viable para
el control de especies larvarias,
Combina la producción de proteínas
Cry y Chi de las subespecies
israeliensis y berliner con la
producción de proteína Cyt de la
subespecie berlines ATTC 10792 para
Instituto Tecnológico Superior de Ciudad Hidalgo
tener una máxima eficiencia en los
diferentes estadios de las especies
larvarias, desde mosca del martillo,
mosca blanca hasta especies
complejas como el gusano soldado.
Bibliografía
Chelliah R, Wei S, Park BJ, et al. Whole
genome sequence of Bacillus thuringiensis
ATCC 10792 and improved discrimination
of Bacillus thuringiensis from Bacillus
cereus group based on novel
biomarkers. Microb Pathog. 2019;129:284-
297. doi:10.1016/j.micpath.2019.02.014
Paris M, Tetreau G, Laurent F, Lelu M,
Despres L, David JP. Persistence of Bacillus
thuringiensis israelensis (Bti) in the
environment induces resistance to
multiple Bti toxins in mosquitoes. Pest
Manag Sci. 2011;67(1):122-128.
doi:10.1002/ps.2046
Guerchicoff, A., Delécluse, A., & Rubinstein,
C. P. (2001). The Bacillus thuringiensis cyt
genes for hemolytic endotoxins constitute a
gene family. Applied and environmental
microbiology, 67(3), 1090–1096.
https://doi.org/10.1128/AEM.67.3.1090-
1096.2001