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Transferencia de plásmidos por conjugación en bacterias

Gram-negativas: del nivel celular al comunitario
clomiVirolle†, Kelly Goldlust†, Sarah Djermoun†, Sarah Bigot y Christian Lesterlin *
Microbiología MolmiCulaire et Biochimie Structurale (MMSB), UniversidadmiLyon 1, CNRS, Inserm, UMR5086,
69007 Lyon, Francia; chloe.virolle@ibcp.fr (CV); kelly.goldlust@ibcp.fr (KG); sarah.djermoun@ibcp.fr (SD);
sarah.bigot@ibcp.fr (SB)
* Correspondencia: Christian.lesterlin@ibcp.fr †Estos
autores contribuyeron igualmente a este trabajo.

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Recibido: 16 de septiembre de 2020; Aceptado: 20 de octubre de 2020; Publicado: 22 de octubre de 2020 ---

Resumen:La conjugación bacteriana, también conocida como sexo bacteriano, es un importante mecanismo horizontal de
transferencia de genes a través del cual el ADN se transfiere de una bacteria donante a una receptora por contacto directo.
La conjugación se conserva universalmente entre las bacterias y se produce en una amplia gama de entornos (suelo,
superficies de plantas, agua, aguas residuales, biopelículas y comunidades bacterianas asociadas al huésped). Dentro de
estos hábitats, la conjugación impulsa la rápida evolución y adaptación de las cepas bacterianas al mediar en la propagación
de diversas propiedades metabólicas, incluido el estilo de vida simbiótico, la virulencia, la formación de biopelículas, la
resistencia a los metales pesados y, lo que es más importante, la resistencia a los antibióticos. Estas propiedades hacen que
la conjugación sea un proceso fundamentalmente importante y, por lo tanto, es el foco de un extenso estudio. Aquí,
revisamos los pasos clave de la transferencia de plásmidos por conjugación en bacterias Gram-negativas, siguiendo el ciclo
de vida del factor F durante su transferencia de la célula donante a la receptora. También discutimos nuestro conocimiento
actual sobre el alcance y el impacto de la conjugación dentro de un hábitat bacteriano relevante desde el punto de vista
ambiental y clínico, las biopelículas bacterianas.

Palabras clave:transferencia horizontal de genes; conjugación en bacterias Gram-negativas; conversión fenotípica;

diseminación de farmacorresistencia; biopelículas bacterianas; plásmidos móviles; plásmido F

1. Introducción

La conjugación fue descubierta por primera vez en 1946 por Edward Tatum y Joshua Lederberg, quienes
demostraron que las bacterias podían intercambiar información genética a través de la transferencia unidireccional de
ADN, mediada por el llamado factor F (fertilidad) [1]. Más tarde se descubrió que el factor F es un elemento genético
extracromosómico replicativo, para el que más tarde acuñaron el término plásmido, que puede transferirse a través
de las membranas celulares de las cepas parentales. Desde este descubrimiento seminal, la identificación de una
plétora de elementos conjugativos, incluidos plásmidos, transposones conjugativos y elementos integrativos
conjugativos (ICE), ha revelado que la conjugación es un mecanismo de transferencia de ADN universalmente
conservado entre bacterias Gram-negativas y Gram-positivas.2,3]. También se demostró que la conjugación es un
proceso ubicuo que ocurre en las comunidades bacterianas presentes en ambientes como el suelo, en las superficies
de las plantas y en el agua y las aguas residuales, así como en biopelículas y comunidades bacterianas asociadas con
plantas o animales huéspedes.4]. Dentro de estos nichos, la conjugación facilita la adaptación de cepas bacterianas al
mediar en la propagación de propiedades metabólicas ventajosas, como el estilo de vida simbiótico, la virulencia o la
resistencia a metales pesados y antimicrobianos. Por lo tanto, la conjugación es un importante impulsor de la rápida
evolución de los genomas bacterianos.5,6]. Esta importancia fundamental ha hecho de la conjugación el foco de un
extenso estudio durante las últimas décadas. Los enfoques experimentales han proporcionado una comprensión
detallada del mecanismo molecular de la transferencia de ADN conjugacional, mientras que la secuenciación
sistemática ha descubierto el alcance de la conjugación a escala ecológica.

genes2020,11, 1239; doi:10.3390/genes11111239 www.mdpi.com/journal/genes

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Los plásmidos conjugativos portan generalmente todos los genes necesarios para su mantenimiento durante la
transferencia vertical de la célula madre a la hija, así como los genes necesarios para la transferencia horizontal durante la
conjugación de la célula donante a la receptora. Estas funciones están codificadas por diferentes regiones o módulos que
componen lo que generalmente se conoce como la columna vertebral del plásmido. El aislamiento y el análisis de secuencias
de un número creciente de plásmidos conjugativos ha revelado una diversidad considerable en términos de propiedades
genéticas y organización. Esta diversidad también indica que diferentes plásmidos pueden usar diversas regulaciones,
reacciones moleculares y estrategias para lograr una transferencia y mantenimiento conjugacionales productivos.

En este artículo, revisamos los pasos clave de la conjugación siguiendo el ciclo de vida del plásmido
durante su transferencia de la célula donante a la receptora (Figura1). Nos enfocamos en el primer
plásmido F descubierto y ampliamente descrito, que usamos como paradigma para discutir otros
sistemas conjugativos en bacterias Gram-negativas. La primera sección describe los eventos que ocurren
dentro de la célula donante, es decir, la regulación de la expresión del plásmido.tragenes necesarios para
la conjugación, el procesamiento del plásmido por el relaxosoma antes de la transferencia, la
composición y función del pilus conjugativo en el proceso de formación de parejas de apareamiento, el
papel central de las proteínas de acoplamiento tipo IV (T4CP) y la transferencia por parte del tipo IV
sistema de secreción (T4SS). La segunda sección se centra en la dinámica del plásmido recién adquirido
dentro de la célula receptora, es decir, el establecimiento del plásmido, que incluye la protección contra
los sistemas del huésped dedicados a la eliminación de ADN extraño, la expresión temprana de genes
principales y la conversión del plásmido ssDNA en dsDNA; mantenimiento de plásmidos, que incluye la
replicación y segregación de plásmidos; y la eventual conversión fenotípica del transconjugante en una
nueva célula donante con nuevas propiedades metabólicas. En la tercera sección,

Figura 1.Diagrama esquemático del ciclo de vida del plásmido F durante la transferencia conjugacional de la célula
donante a la receptora. Este esqueleto del plásmido F está compuesto portraregiones que codifican todos los genes
implicados en la transferencia conjugacional (azul claro); el origen de la transferenciaoT(rojo); la región principal (verde),
que es la primera que se transfiere a la celda receptora; y la región de mantenimiento (azul oscuro) involucrada en la
replicación y partición del plásmido. (i) La iniciación de la conjugación requiere la expresión
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de Eltragenes Algunas de las proteínas Tra producidas forman el T4SS y el pilus conjugativo que reclutará a la
célula receptora y mediará en la estabilización de la pareja de apareamiento. (yo) Otras proteínas Tra constituyen
el relaxosoma (TraI, TraM y TraY), que, en combinación con el factor de integración del huésped (IHF), se unen al
oTy preparar el plásmido para la transferencia induciendo la reacción de corte por la relaxasa TraI. (iii) La
interacción entre el relaxosoma y la Proteína de Acoplamiento Tipo IV (T4CP) inicia la transferencia de la cadena T
por el T4SS. (IV,v) La transferencia de la cadena T unida a TraI en el receptor es concomitante con la conversión
del ssDNA en dsDNA por Rolling Circle Replication (RCR) en el donante. (a) Al ingresar al receptor, la hebra T de
ssDNA está recubierta por el SSB cromosómico del huésped, y el promotor Frpo monocatenario adopta una
estructura de bucle de tallo reconocida por la polimerasa de ARN del huésped para iniciar la síntesis de cebadores
de ARN. (b) TraI realiza la circularización de la cadena T completamente internalizada. (C) El dúplex ARN-ADN es
reconocido por la ADN polimerasa huésped para iniciar la reacción de síntesis de la cadena complementaria. (d)
Una vez que se completa la conversión del plásmido ssDNA en dsDNA, la expresión génica del plásmido da como
resultado la conversión fenotípica de la célula receptora en una célula transconjugante.

2. Dentro de la célula donante

2.1. Transferencia de expresión génica

2.1.1. Regulación detraLa expresion genica

La capacidad de la cepa donante para realizar la conjugación requiere la expresión de los genes de transferencia
agrupados en eltraregión del plásmido. Los genes de transferencia codifican todos los factores proteicos implicados
en la elaboración del pilus conjugativo y el T4SS necesarios para la formación de la pareja de apareamiento, así como
los componentes del relaxosoma necesarios para el procesamiento del plásmido antes de la transferencia (Figura1,
paso i). la expresión detraLos genes están regulados por varios factores, incluidas las proteínas del plásmido y del
huésped, la progresión del ciclo celular y las condiciones ambientales. Mayoríatralos genes se reúnen en un operón
bajo el control de la PYpromotor, mientrasTraJytranvíaLos genes están ubicados aguas arriba y controlados por
promotores independientes (Figura2) [7]. La expresión del gen de transferencia sigue una cascada de regulación
específica que comienza con la producción de la proteína TraJ (Figura2, Paso 1), que activa el PYpromotor y la
transcripción deltraoperón (Figura2, Paso 2). El primer gen en ser transcrito,bandeja, codifica la proteína reguladora
TraY que activa la PMETROpromotor, lo que da como resultado la producción de la proteína TraM accesoria del
relaxosoma (Figura2, Paso 3) [8]. Por lo tanto, esta cascada de regulación da como resultado la expresión de todos los
genes involucrados en la elaboración del pilus conjugativo, el T4SS y el relaxosoma, que está compuesto por TraY,
TraM y TraI. Se observa quetralos genes normalmente se reprimen, presumiblemente para evitar el costo de aptitud
que estaría asociado con su expresión constitutiva.9]. Es importante remarcar que la mayoría de los sistemas de
regulación actúan modulando los niveles celulares o la actividad del activador primario TraJ. En la mayoría de los
plásmidos tipo F (R100, R1, R6-5 y ColB2-K77), la expresión deTraJ, y por tanto la de otros genes de transferencia, es
reprimida a nivel postranscripcional por el sistema de inhibición de la fertilidad FinOP (Figura2) [10,11]. FinP es un ARN
antisentido que es complementario a las estructuras tallo-bucle deTraJARNm. La unión de FinP oculta el sitio de unión
del ribosoma y evita la traducción de TraJ [12,13]. FinO es un chaperón de ARN que protege a FinP de la degradación
por parte de la RNasa E y estabiliza la formación de FinP–TraJdúplex de ARNm [14–dieciséis]. Es más,traLa expresión
génica también está regulada por factores del huésped codificados en los cromosomas.17]. Una de esas regulaciones
implica el silenciamiento de PY, PAGMETRO, y Pjpromotores por la proteína estructurante de nucleoide similar a histona
codificada en cromosomas (H-NS) [18,19]. El número de copias de H-NS por célula varía durante el crecimiento.20], lo
que hace que el crecimiento de la tasa de transferencia del plásmido F sea dependiente de la fase, es decir, máximo en
la fase exponencial, reducido en la fase exponencial media y mayormente abolido en la fase estacionaria [21,22]. Sin
embargo, durante la fase exponencial, la actividad de represión de H-NS es contrarrestada por la unión cooperativa de
TraJ y la proteína huésped ArcA (control de respiración aeróbica del control redox anóxico) al PYpromotor [23]. En el
caso del plásmido de virulencia pSLT deSalmonella enterica, la actividad de represión de H-NS también depende de la
metilación de Dam (DNA adenine methylase) del ADN [24]. Otros ejemplos de regulación mediada por el factor
huésped detraexpresión génica incluyen la represión por la proteína de unión al ARN Hfq,
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que desestabiliza a ambosTraJytranvíatranscripciones [18], y por proteínas chaperonas GroEL que activan
directamente la proteólisis del plásmido R1 TraJ durante la respuesta de choque térmico celular [25].

Figura 2.Cascada de activación detrala expresion genica. la pjPrimeros impulsos del promotorTraJexpresión (1). La
proteína TraJ traducida se une a la PYpromotor para producir en particular TraY, que activa el PMETRO
promotor (2), otras proteínas Tra que constituyen el T4SS y la relaxasa TraI. Una vez producido (3), TraM
autorregula su propia expresión a través de la PMETROpromotor y, en combinación con TraY y TraI, forma el
relaxosoma unido aoT. La activación de esta cascada reguladora está modulada por el complejo FinP/FinO,
que reprime la traducción de TraJ a nivel postranscripcional. Las flechas rojas punteadas ilustran el proceso
de transcripción-traducción.

Para algunos otros sistemas de conjugación Gram-negativos,trala expresión génica está regulada por
mecanismos de detección de quórum (QS). Este es el caso del plásmido inductor de tumores conjugativo (pTi),
que permiteagrobacteriapara infectar y diseminarse dentro de las plantas hospedantes. A alta densidad
celular, agrobacteriaproduce moléculas de agrocinopina que activan diferentes operones, incluido elarco
operón que codifica TraR (no relacionado con la proteína F TraR), una proteína similar a LuxR. La unión de TraR
a la molécula QS 3-oxo-octanoilhomoserina lactona (OOHL) desencadena la transcripción de latrb ytra
operones, lo que resulta en la producción de las proteínas T4SS y relaxosoma. También se produce la lactonasa
QS BlcC, lo que da como resultado la degradación de las moléculas OOHL en la fase estacionaria o durante la
falta de carbono y nitrógeno asociada con la muerte de la planta huésped. Esta regulación proporciona
coordinación entre la competencia de conjugación de pTi y el estado del huésped o la densidad bacteriana
dentro de los tejidos de la planta durante la infección.26].Pseudomonas aeruginosautiliza QS como mecanismo
de defensa contra la conjugación entre especies a través de la producción de la molécula QS N-acil homoserina
lactona (AHL), que está involucrada en la regulación de mecanismos como la virulencia, la formación de
biopelículas y el metabolismo en elP. aeruginosapoblación [27]. AHL producido porP. aeruginosapuede unirse a
laE. colifactor transcripcional similar a LuxR SdiA, que luego reprimetraIla expresión génica y evita la
conjugación del plásmido de amplia gama de huéspedes RP4 que se integra en el cromosoma deE. coli
donantes
La regulación de la expresión de los genes de transferencia es la principal estrategia utilizada para modular la
eficiencia de transferencia de los plásmidos conjugativos. Los ejemplos anteriores ilustran quetrala expresión génica
está controlada por circuitos reguladores complejos, que involucran las actividades combinadas de plásmidos y
factores cromosómicos del huésped. Esta estricta regulación permite el control de la eficiencia de transferencia en
relación con el ciclo de vida del plásmido y la fisiología del huésped en respuesta a las condiciones ambientales y las
interacciones poblacionales.

2.1.2. Mutaciones de superpropagadores

A lo largo de los años, varios estudios han revelado modificaciones genéticas, las llamadas mutaciones de
superpropagación, que mejoraron drásticamente la eficiencia de conjugación de plásmidos conjugativos pertenecientes a
diversos grupos de incompatibilidad. La primera mutación del superpropagador se caracterizó en la F
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plásmido, que lleva un IS3secuencia de inserción en elfinogene. La inactivación de FinO desestabiliza el FinP-
TraJdúplex de ARNm, lo que resulta en la regulación positiva deTraJy la expresión constitutiva detragenes [28].
Esta mutación natural explica la mayor eficiencia de transferencia del plásmido F en comparación con los
plásmidos IncF relacionados R100, R6-5 y R1, en los que el sistema regulador FinOP todavía está activo.29]. Más
recientemente, se han aislado en entornos de laboratorio mutaciones superpropagadoras inducidas
genéticamente de varios plásmidos de resistencia. En el plásmido IncI pESBL, que está asociado con la
producción de β-lactamasa de espectro extendido enenterobacterias, la inactivación del locus Hft desencadenó
la sobreexpresión de pili conjugativos y una mejora de 20 veces de la eficiencia de transferencia [30,31]. En el
citrobacter freundiiPlásmido del grupo IncM pCTX-M3 que porta elblaCTX-M-3
gen, la eliminación de dos genes (orf35yorf36) resultó en la expresión mejorada detragenes y aumento de la
transferencia de plásmidos [32]. Otro ejemplo se informó en el plásmido pIP501 Gram-positivo de amplia gama de
huéspedes (Inc18), que está involucrado en la propagación de la resistencia a la vancomicina de enterococosa las
cepas resistentes a la meticilina deStaphylococcus aureus.En este caso, la supresión del tranEl gen que codifica la
pequeña proteína citosólica TraN (no relacionada con la proteína F TraN) dio como resultado la regulación positiva de
los factores de transferencia y la mejora de la eficiencia de la transferencia.33].
Inducir la sobreexpresión de los genes de transferencia de plásmidos podría no ser la única forma de
superpropagadorlas mutaciones aumentan la eficiencia de transferencia de los plásmidos conjugativos. Se demostró
que la inserción de la Tn1999transposón en eltirar(inhibición de la transferencia de RP4) del plásmido pOXA-48a tipo
IncL/M, responsable de la diseminación de genes específicos de β-lactamasa de espectro extendido enenterobacterias
, aumenta la eficiencia de transferencia entre 50 y 100 veces sin afectartranvíaniveles de expresión [34]. Queda por
dilucidar el mecanismo por el cual la inactivación de la proteína Tir mejora la eficiencia de transferencia. Estos
estudios muestran que las mutaciones de los superpropagadores pueden surgir por varios mecanismos en diferentes
plásmidos conjugativos y tienen el potencial de agravar la propagación de los plásmidos de resistencia a los
medicamentos entre los organismos bacterianos.

2.2. Pilus conjugativo, formación de pares de apareamiento y estabilización

2.2.1. Estructura y biosíntesis de F-Pilus

La conjugación bacteriana es un mecanismo de transferencia de genes horizontal dependiente del contacto que
involucra un pilus conjugativo asociado con un T4SS. Las imágenes de microscopía electrónica fueron fundamentales
para analizar la morfología de numerosos pili de conjugación codificados por plásmidos pertenecientes a diferentes
grupos de incompatibilidad.35–38]. Estos estudios revelaron que los pili se dividen en dos categorías morfológicas
principales: delgados, flexibles y gruesos, que influyen en la capacidad de soportar la conjugación en líquido o en una
superficie sólida. F codifica un pilus delgado y flexible, que tiene una estructura tubular ~8µm de diámetro y hasta ~20
µm de longitud y que está constituido por una disposición helicoidal de una única subunidad proteica, la pilina F o
TraA [39–44] (Cifra1, paso i). ÉlTraAEl gen codifica un péptido de pro-pilina de 121 aminoácidos que posteriormente se
procesa en un F Pilin de 70 aminoácidos.45,46]. El proceso de maduración involucra las proteínas TraQ y TraX.47]. La
proteína similar a la chaperona TraQ se une transitoriamente al precursor de pro-pilina TraA, lo que permite su
acumulación en la membrana interna mediante una vía dependiente de ATP.48] e impartirle la conformación correcta
para una escisión de péptido señal. El procesamiento de pro-pilina en pilina madura requiere tanto la escisión por la
peptidasa B líder del huésped (LepB) como la acetilación N-terminal por TraX.49,50]. Este proceso de maduración
asegura la disponibilidad de subunidades de pilina en la membrana interna antes del ensamblaje del pilus por TraE,
TraK, TraB, TraV, TraC, TraW, TraG, TraF, TraH, TraL y TrbC codificados por la región de transferencia.51–53]. Los
experimentos mutacionales han demostrado que este conjunto de proteínas puede separarse en diferentes
funciones. Brevemente, TraE, K, C, G y L son responsables del ensamblaje de la punta, mientras que TraB, V, W, F y H
son importantes para la extensión del pilus, y TrbI se requiere para la retracción del pilus.52,53]. La ruta de la
biosíntesis de F-pilus ha sido ampliamente revisada.52,54] y no se detalla aquí (Tabla1).
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Tabla 1.Descripción de las proteínas Tra. Las proteínas se presentan siguiendo el orden de las
correspondientes tragenes en eltraregión del plásmido F. Se muestra la función propuesta, la descripción
de su actividad biológica, la localización subcelular (IM: membrana interna; OM: membrana externa; C:
citoplasma; P: periplasma), y los homólogos en los plásmidos RP4, pTI o R388.

Propuesto
Proteína Descripción Localización homólogo Referencia
Función
oTunión, TraI
Tranvía Relaxosoma estímulo, C [17,52,55,56]

Interacción con TraD

Factor de transcripcion
TraJ Regulación C [17,55,57]
(antisilenciador/activador de PY)

Relaxosoma oTencuadernación, transcripción

Bandeja C [17,52,55,57]
Regulación factor (activador de PMETRO)

VirB2 (pTi)
TraA Pilín Subunidad principal del pilus ESTOY [52,55,56]
TrbC (RP4)
VirB3 (pTi)
TraL Montaje de pilos Montaje de pilos OM [52,53,55,57,58]
TrbD (RP4)
TraE Montaje de pilos Montaje de pilos DIABLILLO VirB5 (pTi) [52,53,55]

Envolvente celular
TRAK Montaje de pilos DIABLILLO VirB9 (pTi) [52,53,55,56]
canal

Envolvente celular VirB10 (pTi)

TRAB Extensión de pilo ESTOY [52,53,55,56,58]
canal TrbI (RP4)
Trampa Extensión de pilo Estabilización de pilus extendida ESTOY [55,57]

Montaje de pilos Montaje de la punta del pilus

VirB6/VirB8
TraG [52,53,55,57,59]
Estabilización vía C-terminal (pTi)
ESTOY
pareja de apareamiento

estabilización Interacción con TraN,

Exclusión Interacción con TraS
TraV Extensión de pilo lipoproteína OM/P VirB7 (pTi) [52,53,55,56]

Regulador de la transcripción
TraR Regulación C [58,60]
al unirse a la ARN polimerasa

VirB4 (pTi)
TraC Montaje de pilos NTPasa ESTOY [52,53,55,56]
TrbE (RP4)
TRAW Extensión de pilo síntesis de pilus PAG [52,53,56,57,61]

TraU transferencia de ADN transferencia de ADN PAG [52,55,56]

pareja de apareamiento Estabilización de OmpA y

Tran estabilización encuadernación lps OM [52,55,56]

Exclusión
Interacción con TraG
sistema

Enlaces disulfuro para T4SS

tráfico Extensión de pilo PAG [52,53,55,56]
asamblea

Pilín
TraQ como un chaperón ESTOY [55–57]
maduración

Interacción con TraF y

TraH Extensión de pilo PAG [52,55]
TraU
Montaje de pilos Montaje de la punta del pilus
VirB6/VirB8
TraG [52,55,57,59]
Estabilización vía C-terminal (pTi)
ESTOY
pareja de apareamiento

estabilización Interacción con TraN,

Exclusión Interacción con TraS
Exclusión de entrada
TraS Interacción con TraG [55,56]
(Ex)
ESTOY

Desagregación de la pareja de apareamiento

Superficie después de la transferencia de ADN, interfiere

TRAT OM [55,56,62,63]
exclusión (Sfx) con TraN-OmpA

interacción
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Tabla 1.continuación.

Propuesto
Proteína Descripción Localización homólogo Referencia
Función

Acoplamiento proteína/ADN VirD4 (pTi)

TRAD T4CP ATPasa dependiente ESTOY
TraG (RP4)
[55–57,64]
Interacción con TraM
TrwB (R388)

Relaxasa, transesterasa y VirD2 (pTi)

TraI Relaxosoma C [55,57,sesenta y cinco,66]
helicasa
TrwC (R388)
Pilín
TraX acetilasa N-terminal ESTOY TrbP (RP4) [55–57](1)(3)(8)
maduración

2.2.2. Función biológica del pilus

El papel del F-pilus en la conjugación se ha debatido activamente. Primero se propuso que el F-pilus se extendiera para
ponerse en contacto con la célula receptora y luego se retractara para unir las células donante y receptora y formar el par de
apareamiento.41,67,68]. Esta idea fue apoyada de manera convincente por la visualización directa de la dinámica de F-pilus en
células vivas, utilizando un bacteriófago R17 marcado con fluorescencia que se une específicamente a lo largo de los lados del
pilus.69]. Este trabajo demostró que las células donantes producen pelos flexibles que se someten continuamente a ciclos de
extensión y retracción, explorando así el entorno, independientemente de la ausencia o presencia de células receptoras. Sin
embargo, cuando se establece contacto con un receptor, la retracción del pilus une las células, lo que resulta en la formación
de una pareja de apareamiento.69]. En cultivo líquido, los pili median la formación de agregados de apareamiento más
grandes que contienen células donantes y receptoras en estrecho contacto de pared a pared.70,71].

Permitir la formación de un contacto de pared a pared entre las parejas de apareamiento podría no ser el único papel
del F-pilus, que también se propuso para servir como un canal a través del cual se transfiere el ADN monocatenario durante la
conjugación entre células donantes y receptoras distantes. [72]. Sin lugar a dudas, el orificio axial del pilus tiene un diámetro
(30 Å) que es lo suficientemente grande como para acomodar la molécula de ADN.41,44]. Sin embargo, solo unos pocos
informes brindan evidencia de transferencia de ADN conjugacional entre parejas de apareamiento que están separadas
espacialmente entre sí. Se demostró que la transferencia de ADN podría ocurrir entre un donante y un receptor que están
separados por una membrana de 6 micras con poros de 0,01 a 0,1 micras de diámetro.73]. Además, las imágenes de
microscopía proporcionaron alguna evidencia de que el ADN puede ser adquirido por células receptoras que no están en
contacto directo con una célula donante.74]. Sin embargo, la capacidad de F-pilus para transportar ADN todavía se cuestiona y
espera la visualización clara de la transferencia de ADN entre células donantes y receptoras distantes que solo están
conectadas por un pilus.

2.2.3. Factores involucrados en la especificidad de las interacciones donante-receptor

La capacidad del pilus para establecer contacto entre las células del donante y el receptor puede considerarse el primer
paso limitante de la velocidad en el proceso de conjugación y un determinante clave de la especificidad del rango de
huéspedes del plásmido. En la década de 1970, numerosos estudios intentaron identificar el receptor receptor específico
requerido para la transferencia del plásmido F.70,75–80]. Los resultados revelaron que las mutaciones localizadas en el cuarto
bucle externo de la porina mayoritaria OmpA o aquellas que alteran la composición del núcleo interno del lipopolisacárido
(LPS) afectan la transferencia del plásmido F y otros plásmidos similares a IncF, como R386, R538- 1drd y R1-19, pero no el
plásmido tipo IncFII R100-1 [77,80–82]. análisis de variosompAy los mutantes LPS revelaron que no afectan la unión de los pili
pero dan como resultado una estabilización defectuosa de la pareja de apareamiento.83]. Investigaciones posteriores
excluyeron que TraA sea el componente donante responsable del reconocimiento específico de los receptores receptores [84]
y descubrió la función de estabilización de la pareja de apareamiento de la proteína de la membrana externa TraN, cuyos tres
bucles externos se ha informado que interactúan con OmpA y LPS [85–87]. Estos hallazgos indican queompAy las mutaciones
de LPS no alteran la eficiencia de conjugación del plásmido R100 de tipo IncFII estrechamente relacionado, en el que la
secuencia de aminoácidos de la región central de TraN es muy diferente de la de TraN codificada por F.59,77,80].
Estabilización adicional de la pareja de apareamiento
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involucra la proteína multifuncional de la membrana interna TraG, de la cual la parte N-terminal también juega un papel en la
formación de pelos y la exclusión de la superficie.59,88–90].
Los factores del receptor OmpA o LPS no pueden considerarse estrictamente esenciales para la conjugación F, ya que su
mutación solo reduce la eficiencia de transferencia en 2 a 3 log. Además, los defectos de estabilización de la pareja de
apareamiento pueden anularse realizando el apareamiento en medios sólidos, lo que sugiere que se necesitan interacciones
con OmpA o LPS para estabilizar la formación de la pareja de apareamiento solo en el apareamiento líquido.77,81,83].
Entonces uno podría preguntarse, ¿es el plásmido F una excepción a la necesidad de factores receptores en algunas
condiciones? Un estudio reciente en Klebsiella pneumoniaeidentificó el homólogo OmpK36 de la membrana externa delE. coli
membrana externa OmpC como un receptor que media la conjugación del plásmido IncFII pKpQIL [91]. Como se observa en el
caso del plásmido F, TraNpKpQILdetermina la especificidad del receptor OmpK36, mientras complementa untranpKpQILmutante
con TraNR100abolió esta dependencia, demostrando que los receptores receptores podrían ser altamente específicos para el
plásmido transferido. Además del tipo IncF, también se demostró que el proceso de conjugación de los plásmidos de tipo IncI
es sensible a las mutaciones de LPS y, curiosamente, algunas mutaciones de LPS que afectan la transferencia del plásmido
IncI no afectan la entrada del plásmido F, mientras que otras afectan ambos tipos de plásmido [76,92]. Recientemente, la
adhesina PilV codificada por el plásmido R64 de tipo IncI1 se identificó como el factor donante que se une al LPS en la célula
receptora.93]. Se cree que esta adhesina se localiza en la punta del delgado pilus tipo IV que se requiere solo en condiciones
de apareamiento líquido, lo que hace que la interacción entre PilV y LPS sea importante solo en estas condiciones, como se
observa para las interacciones TraN y OmpA o LPS en el caso de el plásmido F. Por el contrario, no se pudieron identificar tales
receptores receptores para los plásmidos RP4 y R388 de amplia gama de huéspedes. De hecho, elompAy los mutantes
receptores de LPS, que disminuyen drásticamente la eficiencia de la conjugación de F, no afectan la eficiencia de la
conjugación de RP4 [94]. Detección de mutantes a gran escala utilizando elE. coliColección Keio o al azarE. coliLa biblioteca de
mutantes de inserción no logró identificar los mutantes receptores que afectan la transferencia de los plásmidos RP4 [95] o
R388 [96].

Sorprendentemente, algunos plásmidos similares a IncP de amplio rango de huéspedes también pueden transferirse en
arqueas.97] y eucariotas como la levadura [98] y células de mamíferos [99]. Aunque la eficiencia de la conjugación varía entre
los tipos de células receptoras, estos hallazgos sugieren fuertemente que la transferencia de plásmidos no requiere ningún
factor específico o mecanismo activo en el lado del receptor. Alternativamente, un modelo de conjugación de "disparar y
bombear" prevé que el aparato de secreción de tipo IV podría actuar como una jeringa capaz de inyectar ADN en cualquier
tipo de membrana, utilizando el pilus como una aguja.100]. La perforación de la bicapa de la pared celular del receptor podría
lograrse por la fuerza o por la actividad enzimática dedicada expuesta en la punta del pilus. La falta de un requerimiento de
receptores específicos en la superficie de la célula diana no es una excepción al T4SS conjugativo. De hecho, aunque los
componentes estructurales de la maquinaria del sistema de secreción tipo VI han sido ampliamente documentados, ningún
estudio ha caracterizado aún los factores genéticos que pueden actuar como receptores diana en la superficie de la célula
presa.

2.3. Procesamiento de plásmidos por el relaxosoma

El inicio de la conjugación requiere el ensamblaje y la actividad de un complejo proteico, el relaxosoma,

que permite el procesamiento del plásmido antes de la transferencia del ADN (Figura1, paso ii). El
procesamiento del plásmido implica un corte (muesca) de ADN específico del sitio y de la hebra en elnicsitio
ubicado en el origen de la transferencia (oT) y la extrusión del ADN de cadena sencilla que se transferirá
(cadena T) [101–103]. En el sistema F, estas dos reacciones son realizadas por la proteína relaxasa TraI
multifuncional, que tiene un dominio transesterasa que cataliza la reacción nic y un dominio helicasa de ADN
que desenrolla el ADN plasmídico.64,104–109]. De manera crucial, el reclutamiento y la actividad de TraI se
rigen por proteínas auxiliares, incluido el factor de integración del huésped (IHF) y las proteínas TraY y TraM
codificadas por plásmidos, que tienen funciones distintas en la formación y actividad del relaxosoma en oriT.
110–112]. La unión de IHF y TraY a sus respectivos sitios de unión afinesihfA/ihfBysbyAubicado en oriT modula
la arquitectura del ADN, estimulando así la carga de TraI [113–117]. La proteína TraM regula su propia
expresión uniéndose a lasbmAysbmBsitios, ubicados en el promotor PM, y estimula la reacción de relajación
del ADN a través de la interacción directa con TraI después de unirse al
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sbmcsitio ubicado en eloTregión [118–122]. La reacción de corte de TraI implica un residuo de Tyr catalíticamente
activo [sesenta y cinco,123] y da como resultado la relajación del plásmido dsDNA, donde el 5′El extremo de fosfato (P)
de la hebra mellada (o hebra T) permanece unido covalentemente a TraI (Figura1, paso iii) [106,108,124–127]. Después
de la reacción de corte, el plásmido conjugativo de ssDNA circular se convierte en dsDNA mediante la replicación de
círculo rodante (RCR) en el donante, mientras que el ADN de cadena T linealizado se une a TraI en el 5′final se
transfiere a la célula receptora a través del poro conjugativo (Figura1, paso iv).

2.4. Inicio de la replicación del círculo rodante en la célula donante

El mecanismo de replicación de círculo rodante (RCR) se emplea para la replicación vegetativa de algunos
plásmidos bacterianos y ha sido muy bien revisado.128–130]. RCR es clave para el proceso de transferencia de muchos
plásmidos conjugativos Gram-negativos y Gram-positivos, pero también para el ciclo de infección de otros elementos
genéticos móviles, como virus de ADN/ARN y bacteriófagos.123,131]. Las reacciones RCR involucradas en la replicación
vegetativa o en la transferencia de plásmidos son muy similares. El inicio y la terminación de las reacciones RCR,
realizadas por la proteína Rep durante la replicación del plásmido vegetativo, se logran mediante la proteína relaxasa
durante la conjugación. De hecho, Rep y las relaxasas cumplen funciones estrechamente relacionadas, principalmente
permitiendo el inicio de RCR al cortar el ADN de doble cadena en eldsositio (origen de doble cadena) o eloTsitio,
respectivamente [132]. La reacción de corte genera un 5′-P final que permanece unido covalentemente a Rep o TraI y
un 3′Extremo OH utilizado como cebador para la ADN polimerasa III huésped. Mientras que la ADN polimerasa III
realiza la elongación de la cadena principal, la doble hélice original se desenrolla y la RCR termina con una segunda
reacción de corte que libera la cadena de ADN recién sintetizada (Figura1, paso v). En el caso de la RCR vegetativa, el
desenrollado del ADN lo realiza una helicasa de ADN huésped reclutada por la proteína Rep, mientras que la propia
Rep asegura la terminación y la segunda reacción de corte. Un aspecto importante de la RCR asociada a la conjugación
es que la replicación de las dos cadenas de ssDNA ocurre en diferentes células, es decir, la cadena principal se replica
en el donante, mientras que la cadena T (cadena rezagada) se transfiere y replica en la célula receptora ( Cifra1).
Debido a que la relaxasa que inicia la reacción de corte se transfiere junto con la hebra T [sesenta y cinco,133,134], se
requiere una segunda proteína relaxasa en el donante para realizar el desenrollado del ADN, así como la segunda
reacción de corte [3,sesenta y cinco,123]. Consistentemente, los ensayos bioquímicos muestran que dos moléculas de
relaxasa se unen aoT: uno asociado con el 5′extremo que está en una conformación de transesterasa abierta y uno
asociado con los 3′extremo que está en una conformación de helicasa cerrada [135].

2.5. T4CP conecta el relaxosoma al T4SS

Después de ser procesado por el complejo de relaxosoma, el complejo de nucleoproteína, compuesto por la
cadena T y el TraI unido covalentemente, necesita ser reclutado al poro conjugativo para la transferencia (Figura1,
paso iii). Esta conexión está mediada por la interacción entre el relaxosoma y la Proteína de Acoplamiento Tipo IV
(T4CP) ubicada en la membrana celular.3,100]. Todos los sistemas conjugativos tienen sus propios T4CP, como TraD,
TraG y TrwB para los plásmidos F, RP4 y R388, respectivamente. Los T4CP no son necesarios para la producción de
pilus o el procesamiento de ADN, pero son clave para la especificidad del sustrato.136]. Nuestra comprensión de las
interacciones moleculares requeridas para el reconocimiento y la translocación de sustratos específicos aún es
incompleta. Se ha proporcionado una gran cantidad de información comparando la estructura de T4SS tipo F [137] a
varios T4SS involucrados en el transporte de proteínas o nucleoproteínas [138–141]. Parece probable que los sistemas
de conjugación se deriven de la maquinaria ancestral de translocación de proteínas que evolucionó para translocar el
ADN de forma coincidente. Desde este punto de vista, el T4CP serviría como el sustrato receptor que interactúa con
uno o varios componentes del relaxosoma para reclutar la hebra T para el T4SS. En el caso del plásmido F y algunos
otros sistemas de plásmidos, está bien establecido que TraD interactúa con la proteína relaxosoma TraM.142–146]. La
interacción entre T4CP y la relaxasa se ha demostrado para RP4 [147], R1 [1] y plásmidos R388 [148]. Tal interacción se
ha especulado en el sistema F pero sigue siendo difícil de alcanzar [107,149].

Los T4CP son ATPasas dependientes de ADN ancladas a la membrana celular a través de su dominio N-
terminal y se ha demostrado que interactúan con los componentes T4SS en R27.150] y plásmido R388
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sistemas [148]. Las T4CP muestran similitudes con las translocasas de ADN en anillo ancladas a la membrana, como
SpoIIIE y FtsK, que están involucradas en la translocación del ADN cromosómico durante la esporulación y la división
celular, respectivamente.100,151,152]. T4CP se une de forma no específica al ADN, con una mayor afinidad por el
ssDNA [147,153,154], sobre el cual forma oligómeros con actividad ATPasa potenciada [155,156].
En conjunto, estos hallazgos condujeron a un modelo en el que las T4CP ancladas a la membrana interactúan
directamente con el relaxosoma y forman estructuras hexaméricas en la cadena T, que se translocan activamente a
través del poro de conjugación durante la transferencia. Sin embargo, no está claro si se requiere una señal para
activar la función de acoplamiento del T4CP en una célula donante en la que el T4SS y el relaxosoma ya están
ensamblados y son funcionales.3]. Se ha sugerido que la estabilidad del complejo oligomérico TraD depende de una
proteína codificada por F aún no identificada, que podría ser un regulador clave de la activación de la transferencia de
plásmidos.155]. También se ha sugerido que la formación de la pareja de apareamiento podría transducir una señal
para activar el T4CP y desencadenar la transferencia de la hebra T procesada.3]. En particular, se demostró que la
relaxasa debe desplegarse para trasladarse a las células receptoras.134]. EnA. tumefaciens,como en muchos otros
sistemas Gram-negativos y Gram-positivos, se propone que el despliegue de las proteínas translocadas sea realizado
por la ATPasa similar a VirB11, que está ausente en el sistema del plásmido F.52,140,157]. Sin embargo, uno puede
suponer razonablemente que el despliegue de TraI también requiere actividad de ATPasa que involucra una de las
ATPasas de F T4SS.

3. Dentro de la celda del destinatario

3.1. Circularización de plásmidos por TraI

La relaxasa se transfiere al receptor, donde se repliega y puede realizar varias actividades

necesarias para completar el proceso de conjugación (Figura1, paso a) [sesenta y cinco,133,158]. Se cree
que la actividad helicasa de la relaxasa internalizada realiza 5′a 3′seguimiento de la hebra en T. La
tracción de la relaxasa del receptor junto con el empuje de la T4CP del donante presumiblemente facilita
el transporte de la cadena T a través del poro de conjugación.3]. Una vez que ambos extremos deloTse
unen en el receptor, la relaxasa realiza la reacción de unión, lo que resulta en la recircularización del
plásmido ssDNA (Figura1, paso b) [sesenta y cinco,133,158,159]. Un modelo alternativo propone que el
mellado del recién sintetizadooTocurre en la célula donante antes de la transferencia [160]. No hay
evidencia del requerimiento de factores adicionales de huésped o plásmido en la circularización de la
hebra T internalizada. Una vez completada la reacción de recircularización, la célula receptora posee una
copia circular monocatenaria del plásmido conjugativo.

3.2. Evitar los sistemas de defensa del huésped contra el ADN extraño

El plásmido conjugativo ssDNA recién adquirido podría considerarse como un ADN extraño, contra el cual la bacteria
huésped ha desarrollado mecanismos de defensa, como la modificación de restricción, exonucleasas y el sistema de
recombinación o inmunidad adaptativa, como el sistema CRISPR-Cas.161]. A pesar de estos mecanismos de defensa, la
transferencia horizontal de genes juega un papel importante en la evolución genómica (5-6 % de los genomas bacterianos y
hasta el 20 % en algunos organismos).6,162,163], lo que implica que los plásmidos transferibles han desarrollado mecanismos
adaptativos para contrarrestar estas defensas del huésped.
El sistema de modificación de restricción (RM) es un mecanismo de defensa ubicuo que se encuentra en el 90%
de los genomas bacterianos secuenciados y otros procariotas y se basa en enzimas de restricción y metilación.164].
Los mecanismos de modificación de la restricción se describen como un "sistema de inmunidad primitivo" contra el
ADN exógeno.165]. Estos sistemas se basan en enzimas de restricción que se dirigen específicamente a secuencias de
dsDNA no metiladas ubicadas en los elementos genéticos móviles recién adquiridos, mientras que el ADN del huésped
está protegido por grupos metilo agregados a residuos específicos de adenina o citosina.165]. No está claro si el
sistema RM puede apuntar al plásmido ssDNA antes de la síntesis de la cadena complementaria. Sin embargo, los
plásmidos han desarrollado varias estrategias para contrarrestar la degradación enzimática del ADN al entrar en la
nueva célula huésped. Los plásmidos IncN, IncI e IncF codifican las proteínas ArdA y ArdB (alivio de la restricción del
ADN) que inhiben directamente la REasa (endonucleasa de restricción) al
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imitar las secuencias de ADN, compitiendo así por los objetivos de las enzimas.166–168]. Los plásmidos IncW codifican la
proteína ArdC que protege la cadena T transferida mediante el bloqueo transitorio de los sitios de restricción.169]. Más
recientemente, se demostró que unocultarEl operón (evasión de defensa del huésped) de los plásmidos IncI codifica dos
genes implicados en anti-RM (vcrx089yvcrx090) [170]. Además de la producción de proteínas inhibitorias, algunos plásmidos
han perdido por completo estos sitios de restricción, como es el caso del plásmido RP4.171].
Los sistemas inmunológicos CRISPR-Cas (repeticiones palindrómicas cortas agrupadas regularmente
interespaciadas y la proteína asociada a CRISPR) representan otro mecanismo de defensa contra el ADN extraño. Los
sistemas CRISPR-Cas, que se encuentran en ~45% de los genomas bacterianos y hasta en el 84% de los de Archaea [
172,173], han sido descritos como protectores contra la infección por bacteriófagos y, más recientemente, contra la
adquisición de plásmidos [174]. Luego se descubrió que algunos fagos codifican una proteína Acr anti-CRISPR que
inhibe la actividad del sistema CRISPR-Cas [175,176]. Es importante destacar que anti-CRISPR Acr lugareshan sido
identificados en elementos conjugativos y plásmidos deListeria,enterococo,Estreptococo, yEstafilococo[177]. Estas
lugarescodifican los inhibidores CRISPR-Cas AcrIIA16–19, que previenen la mella en el ADN exógeno mediada por la
enzima Cas9en vivo. Mahendra et al. también han demostrado que la conjugación de un plásmido dirigido a Cas9 deE.
faecalisfue posible en presencia de estos inhibidores CRISPR-Cas. La codificación de proteínas similares a Acr es, por lo
tanto, una estrategia eficiente mediante la cual los plásmidos conjugativos facilitan su diseminación al evitar la
degradación por parte del sistema inmunitario CRISPR-Cas del huésped. Otra estrategia es que los plásmidos
conjugativos codifiquen un sistema Bet/Exo capaz de reparar roturas de doble cadena causadas por CRISPR-Cas
durante la conjugación, como se informó recientemente para el plásmido IncC pVCR94 [170]. La expresión de estos
genes dentro de las bacterias receptoras después de la adquisición de lacholeraeEl plásmido pCVR94 permite la
supervivencia contra los mecanismos de defensa del ADN exógeno sin la participación de las proteínas anti-CRISPR-
Cas.

3.3. Papel de los genes de la región líder y conversión del plásmido ssDNA en dsDNA

3.3.1. Expresión temprana de los genes de la región líder

La región principal de los plásmidos conjugativos es la primera que se transfiere a la célula receptora durante la
conjugación (Figura1, paso a) [57]. La región principal del plásmido F está bien conservada, con un tamaño de 13 kb y
una ubicación que está directamente adyacente a laoTy codifica para al menos ocho proteínas [178], incluido un
homólogo de la proteína cromosómica de unión monocatenaria SSB (SSBC), PsiB y otras proteínas de función
desconocida. Es importante destacar que el plásmidossb(ssbPAG)ypsiBLos genes se expresan temprano tras la entrada
del plásmido en la bacteria receptora, pero no en las células del donante.179]. De manera similar, los estudios de RT-
PCR mostraron que la expresión de lapsiByArdagenes del plásmido IncI1 comienza 5 minutos después del inicio de la
transferencia [180]. Estas observaciones sugirieron que los genes de la región líder podrían expresarse rápidamente a
partir del plásmido recién adquirido en forma monocatenaria, antes de su conversión en dsDNA. Más tarde se
demostró que la región principal contiene un bp específico de 328Frpo(para la ARN polimerasa del plásmido F), que,
cuando es monocatenario, puede formar una estructura de bucle de tallo que presenta cajas de doble cadena -10 y
-35 que son reconocidas por la ARN polimerasa del huésped, que inicia la síntesis de cebadores de ARN en Vitro [181].
Por lo tanto, se propuso queFrpopuede servir como un promotor monocatenario que permite la expresión temprana
de los genes de la región principal (Figura1, paso a).
FrpoTambién se propuso dirigir la conversión de cadena sencilla a cadena doble del plásmido F. Los ensayos in
vitro mostraron que los cebadores de ARN sintetizados por la ARN polimerasa deFrpopersisten como un dúplex de
ARN-ADN que es reconocido por la ADN polimerasa III del huésped para iniciar la síntesis de la cadena
complementaria.181].Frpo-secuencias de tipo, también denominadasssipara la secuencia de iniciación monocatenaria,
se encuentran en varios plásmidos conjugativos, incluidos R6K, R100, ColE1, ColE2, Col1B y RSF1010 [182–185], y son
funcionalmente comparables ainicio de sesión únicosecuencias (origen monocatenario) involucradas en el mecanismo
de replicación del círculo rodante [123,129,186]. Estos hallazgos son consistentes con la observación previa de que la
síntesis de la cadena complementaria del plásmido ssDNA F dentro de la bacteria receptora involucra un mecanismo
cooperativo entre la ARN polimerasa del huésped y la ADN polimerasa III.187].
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En conjunto, estos hallazgos condujeron a un modelo en el queFrpopuede ayudar a iniciar la expresión

génica temprana y la reacción de síntesis de ADN que convierte el plásmido ssDNA en dsDNA inmediatamente
después de la entrada de la cadena T en la célula receptora (Figura1, paso a–c). Ya seaFrporealiza estas
funciones durante la conjugación in vivo queda por demostrar.

3.3.2. PsiB inhibe la respuesta SOS

En la célula receptora, la presencia de cantidades anormales de ssDNA, generalmente asociadas con daño
en el ADN, da como resultado la inducción de la respuesta SOS.188,189]. Más precisamente, la carga de la
proteína de recombinación RecA en ssDNA da como resultado la formación del filamento presináptico, que
estimula la escisión autocatalítica de LexA, el represor del regulón SOS. La respuesta SOS desencadena la
inducción del inhibidor de división SulA, lo que da como resultado la filamentación celular y potencialmente la
muerte de la célula transconjugante. SOS también induce la producción de nucleasas y otros factores de
procesamiento del ADN que podrían provocar la degradación o mutación del ssDNA transferido o su
procesamiento como un intermediario de recombinación.190]. Para contrarrestar estos efectos, varios
plásmidos conjugativos, incluido F, codifican la proteína PsiB (inhibición de plásmido SOS), que inhibe la
inducción de SOS.191]. el agotamiento depsiBtiene efectos leves sobre la eficiencia de la conjugación, pero
aumenta la respuesta SOS del huésped hasta seis veces.179]. PsiB interactúa directamente con RecA, lo que
inhibe varias actividades, como la unión al ADN, la escisión de LexA y la reacción de intercambio de cadenas.192
,193]. La inhibición de la respuesta SOS por PsiB es aún más potente en presencia de SSBCProteína que recubre
el ssDNA. PsiB está bien conservado entre los plásmidos conjugativos y se considera importante para los
primeros pasos del establecimiento del plásmido en el receptor, en consonancia con su producción temprana
en las células transconjugantes.57,191].

3.3.3. Funciones de las proteínas SSB del huésped y del plásmido en el establecimiento del plásmido

Al ingresar a la célula receptora, el plásmido ssDNA transferido está recubierto por el SSB del huésped.C
proteína. SSBCes una proteína esencial universalmente conservada que se une de forma no específica al ssDNA.
Está involucrado en varios mecanismos, incluida la replicación, reparación y recombinación del ADN; inducción
SOS; y otros procesos metabólicos del ADN [194,195]. Al unirse, SSB protege el ssDNA contra la degradación
enzimática y aumenta la procesividad de las ADN polimerasas II y III.196] durante la reacción de replicación
que convierte la hebra de ssDNA en la hélice de dsDNA. El rápido reclutamiento del host SSBC
La proteína al ssDNA transferido se ha visualizado recientemente mediante microscopía de fluorescencia.197]. Este
trabajo reveló que SSBClas proteínas se reclutan rápidamente en el ssDNA que penetra en la célula receptora,
presumiblemente protegiéndola y facilitando su procesamiento (Figura1, paso a). Curiosamente, el plásmido F, como
en muchos otros plásmidos conjugativos, codifica su propio SSBPAGproteína, que es homóloga a laE. coliSSBC[198].
Entonces, uno podría preguntarse, ¿cuál es el beneficio obtenido por los plásmidos conjugativos que codifican su
propio SSB?PAG, y cuál es la función específica de SSBPAGen comparación con el SSB cromosómicoC?
SSBPAGse une a ssDNA de forma no específica, y SSBPAGde diferentes grupos de incompatibilidad (IncF, IncI, IncY,
Inc9, IncT e IncB/O) pueden complementar parcialmente las mutaciones condicionales delE. coli ssbC
gen [197,199–201]. Aunque la expresión del SSB codificado por el plásmido FPAGproteína entranspermite el
crecimiento de lassbCmutante por deleción, los mutantes complementados exhiben cierta filamentación y
reducción de la tasa de crecimiento [202]. Además, se observa una afinidad reducida por el ssDNA para el
plásmido F SSBPAGen comparación con elE. coliSSBC,y el plásmido F SSBPAGno puede estimular la reacción de
síntesis de ADN por la ADN polimerasa III in vitro [203]. La alineación de secuencias reveló que SSBPAGproteínas
que complementan laE. coli ssbCel mutante comparte una alta homología solo con la parte N-terminal deE. coli
SSBC[203]. El SSBCLa región N-terminal contiene los dominios para la unión de ssDNA y las interacciones
monómero-monómero para mantener cooperativamente la unión de la estructura tetramérica de SSBCal
ssDNA. Esta conservación estructural explicaría la capacidad de SSBPAGpara unir ssDNA. Sin embargo, los
dominios C-terminales de SSBPAGson mucho más homólogos entre sí que con SSBC[203]. Sin embargo, como
este dominio interactúa con proteínas asociadas que constituyen el SSBCinteractoma, una posibilidad sería que
el interactoma de SSBPAGy la reacción en la que está involucrado podría ser diferente de la de SSBC.
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No todo SSBPAGSe ha demostrado que las proteínas se complementanE. coli ssbCmutantes [199]. El último
estudio encontró que la incapacidad de SSBPAGde IncP-like RK2 para complementar elE. coli ssb1La mutación
podría atribuirse assbPAGrepresión génica por el RK2korgenes y que un plásmido desreprimido de hecho
complementó el crecimiento termosensible deE. coli ssb1mutaciones [204]. Por lo tanto, es razonable
considerar la posibilidad de que abundante SSBPAGtambién podría complementar lassbCmutante
Hasta la fecha, la función del plásmido F SSBPAGen el contexto de la conjugación aún no está claro. El SSB
PAGLa proteína podría contribuir a la protección del ssDNA transferido mediante la inhibición de la degradación
enzimática o el reclutamiento de proteínas inhibidoras del huésped. Sin embargo, su tiempo de expresión
apoya la idea de que SSBPAGpodría participar en la síntesis de la cadena complementaria del ADN transferido o
podría simplemente aumentar el conjunto de proteína de unión de cadena única disponible, que se requiere
para el primer ciclo de replicación vegetativa del plásmido.

3.4. Mantenimiento de plásmidos: replicación y segregación

El mantenimiento del plásmido conjugativo de dsDNA recién adquirido en el linaje celular receptor depende de
dos mecanismos activos principales: la replicación del plásmido y la segregación de las copias del plásmido en células
hijas durante generaciones.
Los mecanismos de replicación del ADN plasmídico en bacterias se han estudiado ampliamente y son el foco de
revisiones bien referenciadas.123,128,205–208]. Aquí, enfatizamos el papel de la replicación en la especificidad del
rango de huéspedes de conjugación. El plásmido F se transfiere eficientemente aE. coliy enterobacterias relativamente
cercanas, mientras que no se puede recuperar ningún transconjugante después del apareamiento con bacterias más
distantes, comoVibriónoPseudomonas. Ya en 1982, la restricción del rango de huéspedes se atribuía a la incapacidad
del plásmido para replicarse en la bacteria receptora más que a la ineficiencia de la transferencia del plásmido.per se[
188]. Esto se demostró mostrando que los plásmidos movilizables que contienen un origen de transferencia del
plásmido F que actúa en cis y un origen de replicación que es activo en el receptor analizado pueden luego ser
transferidos por la maquinaria de conjugación F enPseudomonas[188],cholerae[209], y levadura [98]. Se empleó el
mismo enfoque para demostrar que pCTX-M3, un plásmido similar a IncI, podía usar su maquinaria de conjugación
para transferir un plásmido movilizable a receptores huéspedes en los que pCTX-M3 no se replica.32]. El fracaso para
replicar el plásmido F enP. aeruginosaproviene en parte de una incapacidad de la proteína de replicación del plásmido
RepE en el replicón RepFIA en complejo con el huésped DnaA-oríSpara formar una interacción estable con la helicasa
anfitriona DnaB [210]. Por el contrario, los plásmidos de amplio rango de huéspedes, como RK2, regulan su
mantenimiento mediante la modulación de estrategias alternativas de replicación según el huésped.211]. Estos
hallazgos indican que la gama de huéspedes de la maquinaria de conjugación y los orígenes de replicación que
pertenecen al mismo plásmido difieren y pueden desacoplarse mecánicamente. La especificidad de los plásmidos de
rango estrecho de huéspedes parece estar limitada por la especificidad de su replicón más que por su rango de
transferencia.
El mantenimiento del plásmido dsDNA recién adquirido también requiere la segregación de copias del
plásmido en las células hijas durante la división celular transconjugante. Para hacerlo, los plásmidos con bajo
número de copias codifican sistemas de partición activa, cuyo mecanismo, funciones biológicas y conservación
han sido ampliamente revisados.212–216]. En el contexto de la conjugación, vale la pena mencionar otra
estrategia de mantenimiento que implica la integración del ADN conjugativo recién adquirido en el
cromosoma. La integración cromosómica asegura la herencia estable de los elementos conjugativos por
transferencia vertical de genes durante generaciones. El primer ejemplo caracterizado fue nuevamente el
plásmido F, que utiliza secuencias de inserción (IS) y recombinación homóloga dependiente de RecA para
integrarse en elE. coligenoma [217]. El plásmido integrado aún puede iniciar la transferencia conjugativa del
cromosoma completo de la cepa “Hfr” resultante (alta frecuencia de recombinación). Este proceso de
transferencia es progresivo y orientado, y el orden en que se transfieren los genes cromosómicos depende de
la posición en la que se integró el plásmido F. Alternativamente, el plásmido F integrado se puede extirpar del
cromosoma y recuperar su forma autónoma original.218]. La integración cromosómica es ampliamente
utilizada por el ADN móvil, como ICE (elementos conjugativos integradores), transposones y fagos,
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en bacterias Gram-negativas y Gram-positivas; todos estos sistemas tienen sus particularidades, especialmente
en cuanto a los sistemas de recombinación utilizados para su integración/escisión [219,220].

3.5. Conversión fenotípica del transconjugante

La expresión de genes portados por el elemento genético recién adquirido da como resultado la conversión fenotípica
de la célula receptora en un transconjugante que exhibe propiedades metabólicas adicionales (Figura1, paso d). La expresión
de los genes del plásmido involucrados en la transferencia de ADN convierte el transconjugante en un nuevo donante que
puede transferir más el plásmido a la población, lo que explica la tasa exponencial de diseminación del plásmido conjugativo
(vertraexpresión génica, Sección2.1). No todos los genes codificados en eltraLa región del esqueleto del plásmido está
directamente involucrada en el proceso de transferencia de ADN. De hecho, los plásmidos conjugativos a menudo llevan
sistemas de genes de inmunidad (o exclusión) que están muy extendidos en organismos Gram-negativos y Gram-positivos.90,
221–228]. Estos sistemas de inmunidad limitan la capacidad de las células portadoras de plásmidos para servir como
receptoras del mismo plásmido.42,54,62,229]. Se cree que la prevención del autoapareamiento por exclusión de la superficie
evita el costo metabólico y la posible muerte celular asociada con la transferencia repetida de plásmidos, pero también es
importante para la estabilidad y evolución de los plásmidos.62,229].

El sistema de inmunidad del plásmido F se basa en dos factores: las proteínas TraT y TraS, ninguna de las cuales es
necesaria para la síntesis de F-pilus o la transferencia de ADN.56,230–232]. Estos dos factores de exclusión funcionan a
diferentes niveles. TraT es una abundante proteína de la membrana externa que se cree que abarca la superficie celular.230,
231]. La producción de TraT inhibe la formación de agregados de apareamiento estables, presumiblemente al interferir con la
interacción entre el pilus y los receptores de superficie del receptor. De acuerdo con esta idea, se informó que TraT interactúa
con OmpA, lo que sugiere además que podría competir con TraN, que es clave para la estabilización de la pareja de
apareamiento [85,86,233]. TraS es una proteína de la membrana interna, cuya producción solo redujo ligeramente la
agregación de las poblaciones de apareamiento, pero redujo las frecuencias de transferencia de ADN entre 100 y 200 veces.
Por lo tanto, se propone que TraS actúa evitando la transferencia de ADN cuando ya se han formado agregados de
apareamiento estables.230,231,234]. En plásmidos tipo F, se propone que TraS interactúe con TraG para lograr el proceso de
exclusión de entrada.89,90]. Por estas razones, TraS se conoce como proteína de exclusión de entrada (Eex) y TraT como
proteína de exclusión de superficie (Sfx). Como otrotragenes, trasytratarla expresión está controlada por TraJ, lo que implica
que las células transconjugantes adquieren concomitantemente capacidad de transferencia de plásmidos e inmunidad a la
autotransferencia durante la conversión fenotípica.
Además de los genes ubicados en el esqueleto del plásmido, los plásmidos conjugativos pueden portar genes
adicionales que no están directamente involucrados en la conjugación pero sí en una variedad de funciones
biológicas, como virulencia, formación de biopelículas, estilo de vida simbiótico, tráfico de membranas, resistencia a
metales pesados y , lo más importante, la resistencia a los antibióticos. La adquisición de estas funciones metabólicas
facilita potencialmente la adaptación y supervivencia bacteriana en ambientes cambiantes y hace que la conjugación
sea un importante impulsor de la evolución de los genomas bacterianos. El mantenimiento exitoso de los elementos
conjugativos en las poblaciones bacterianas muestra que esta ventaja selectiva compensa la carga metabólica
asociada con el metabolismo de la información genética recién adquirida (secuestro de los mecanismos de
replicación, transcripción y traducción del huésped).235]. El ejemplo más destacado es la adquisición de plásmidos
conjugativos de resistencia a fármacos, que permiten la proliferación bacteriana en comunidades microbianas que
contienen organismos productores de antibióticos o en entornos clínicos y contaminados con antibióticos. De hecho,
el análisis de cepas patógenas comensales, ambientales y clínicas resistentes a los antibióticos reveló una multitud de
plásmidos conjugativos que portan uno o más genes de resistencia a la mayoría, si no a todas, las clases de
antibióticos que se utilizan actualmente en los tratamientos clínicos. Se considera que la conjugación es el mecanismo
de transferencia de resistencia intra e interespecies más extendido, y representa el 80 % de la resistencia adquirida.
236].

4. Conjugación en hábitats naturales: el ejemplo de biopelículas bacterianas

Se sabe que la transferencia de genes por conjugación contribuye a la dinámica genética de las poblaciones bacterianas
que viven en una variedad de entornos, incluidos el suelo, las superficies de las plantas y el agua y las aguas residuales.
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así como en comunidades bacterianas asociadas con huéspedes vegetales o animales [4]. En general, se considera que las
bacterias son organismos unicelulares planctónicos; sin embargo, en entornos naturales y clínicos, a menudo viven en
estructuras complejas llamadas biopelículas. Las biopelículas protegen a las bacterias de los peligros externos, pero también
se han propuesto para ofrecer un nicho que facilite la diseminación de los determinantes de la resistencia a los
medicamentos por conjugación. A continuación, revisamos nuestra comprensión actual de la interacción entre las biopelículas
y la conjugación bacteriana.

4.1. El biofilm como nicho que promueve la conjugación bacteriana

En entornos naturales, las bacterias viven predominantemente en comunidades espacialmente estructuradas

denominadas biopelículas, en las que una matriz extracelular autoproducida mantiene unidas a las células.237]. Las
células planctónicas que inician la formación de biopelículas pueden adherirse a una superficie viva o inerte
(biopelículas adheridas a la superficie) o pueden estar presentes en la interfaz aire-líquido como una comunidad
flotante (película). Las biopelículas bacterianas se encuentran en prácticamente todos los ecosistemas de la Tierra,
desde los sistemas acuáticos (lodos, rocas y aguas residuales) hasta los entornos terrestres (rizosfera) y los
organismos humanos (piel, tracto intestinal, urogenital y respiratorio). Además, las biopelículas se asocian con
infecciones graves y persistentes debido a su capacidad para colonizar dispositivos e implantes médicos. De hecho, las
estructuras de biopelículas ofrecen protección frente a entornos hostiles y, lo que es más preocupante, frente a
tratamientos con antibióticos. La arquitectura del biofilm depende de la especie bacteriana, la superficie colonizada y
las condiciones ambientales, pero este estilo de vida se caracteriza por la producción de sustancias poliméricas
extracelulares (EPS) compuestas principalmente por polisacáridos, proteínas, lípidos y ADN extracelular. La
producción de matriz de EPS es dinámica y continua y media la formación de la arquitectura de biopelícula en la que
quedan atrapados los agregados de microorganismos.
Muchos estudios sobre la conjugación bacteriana han demostrado que la transferencia de plásmidos puede ocurrir
tanto en biopelículas naturales como artificiales, desde el medio ambiente acuático.238], fitosfera [239], huéspedes animales y
humanos [240,241], o biopelículas asociadas al reactor [242,243]. Estos documentos estudiaron la transferencia de plásmidos
a nivel de población y se basaron principalmente en ensayos limitados basados en cultivos que probablemente subestiman el
grado de conjugación en biopelículas naturales. Otros trabajos han estudiado plásmidos conjugativos que expresan
marcadores fluorescentes, lo que permite la visualización directa in situ de donantes, receptores y transconjugantes a nivel de
una sola célula dentro de varios tipos de biopelículas formadas en la superficie líquido-aire.244], en una superficie de agar
semisólido [245–247], en un filtro [248], en cámaras de flujo [246,249,250], o en un reactor [251].
El entorno de la biopelícula proporciona una alta densidad celular y una estrecha proximidad de célula a célula que
puede facilitar la HGT a través de la conjugación bacteriana. De acuerdo con la opinión de que la biopelícula es un nicho de
conjugación de punto caliente, varios estudios han demostrado que la frecuencia de transferencia de plásmidos es mayor en
la biopelícula que en el modo de crecimiento planctónico.252–255]. Aunque la biopelícula parece ser un ambiente favorable
para la HGT por conjugación, muchos estudios a nivel de una sola célula han informado una propagación limitada del
plásmido dentro de una biopelícula establecida preformada más allá de la zona de contacto entre los donantes y los
receptores.256]. Estas observaciones están directamente relacionadas con la compleja estructura espacial de la biopelícula,
que podría tener un impacto crítico en la propagación horizontal del plásmido dentro de una biopelícula.

4.2. Impacto de la estructura del biofilm en la conjugación

La biopelícula es una estructura compleja y, a veces, está compuesta por especies bacterianas mixtas. La matriz
da forma a la organización espacial al agrupar células en microcolonias en una arquitectura caracterizada por arreglos
celulares no uniformes, canales abiertos, poros, cavidades y diferentes capas de células vivas.257,258]. Tal
organización determina la formación de grupos/agregados celulares y, por lo tanto, podría influir en la eficiencia de la
transferencia conjugativa.244]. Esta posibilidad se puede abordar utilizando microscopía para analizar la distribución
de células que están activas en conjugación dentro de biopelículas. Hasta la fecha, la mayoría de los estudios han
investigado la propagación de la etiqueta GFPPseudomonas putidaplásmido TOL. Análisis deP. putidaLas biopelículas
receptoras establecidas en cámaras de flujo revelaron que los transconjugantes aparecían en la superficie superior de
la biopelícula pero no en las capas más profundas, lo que reflejaba una invasión limitada del plásmido transferido.246,
250]. En una placa de agar, los transconjugantes solo aparecieron en el contacto
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zona entre los donantes de plásmido TOL y las colonias receptoras [245,246,259]. También se observó una transferencia
limitada a las capas externas de la biopelícula para los plásmidos IncF, IncI e IncW enE. coli[247]. Se ha propuesto que la
transferencia solo puede ser eficiente durante un período corto entre células metabólicamente activas que crecen en la
interfaz donante-receptor.246,260]. Consistentemente, se demostró que la invasión de plásmidos se detiene en células que
no se dividen.259].
Dentro de las estructuras de biopelículas, los gradientes químicos de oxígeno, nutrientes, temperatura y pH
crean microambientes que influyen en la actividad metabólica de las células bacterianas.261]. Esto da como resultado
una heterogeneidad fisiológica entre las células que rodean el borde de la biopelícula y las que están incrustadas en el
interior. Además, las variaciones en la frecuencia de mutaciones espontáneas dentro de partes de la biopelícula dan
como resultado la aparición de subpoblaciones variantes con heterogeneidad genética.262]. Se desconoce si estos
factores afectan el patrón espacial de conjugación dentro de las biopelículas y cómo lo hacen.

4.3. Impacto de los plásmidos conjugativos en la formación de biopelículas

Varios estudios han investigado la implicación de la presencia de plásmidos conjugativos de diversos grupos de
incompatibilidad para la capacidad de formación de biopelículas.263–267]. Para iniciar la formación de biopelículas, las
células planctónicas producen apéndices celulares como flagelos y factores de adhesión como tipo IV pili y tipo 1 y
curli fimbriae.268,269]. Los genes que codifican este tipo de factores accesorios que promueven la unión a superficies
bióticas o abióticas se encuentran a menudo en plásmidos conjugativos, lo que resulta en una mayor formación de
biopelículas en el huésped.253]. Los ejemplos incluyen fimbrias tipo 3 del plásmido IncX1 pOLA52 [270], pili de tipo IV
no conjugativo del plásmido IncI1 pSERB1 [271], o estructura tipo pilus y adhesinas superficiales delenterococo
faecalisplásmidos pBEE99 y pCF10, respectivamente [272–274]. En 2001, Ghigo hizo la inesperada observación de que
el propio pilus conjugativo de un plásmido F desreprimido puede promover la biopelícula deE. colicélulas que
inicialmente son incapaces de formar tal estructura y revelaron que la pilina TraA es el principal factor de adhesión
que induce la formación de biopelículas.263]. Análisis de la estructura microscópica del plásmido IncF R1 desreprimido
drd19 y F-que llevanE. colibiopelícula mostró la formación rápida de una biopelícula tipo hongo 3D densa y madura
similar a laP. aeruginosaarquitectura de biopelícula [275]. La formación de esta peculiar arquitectura y la maduración
del biofilm generada por plásmidos desreprimidos anulan la necesidad de apéndices de superficie celular como
flagelos, fimbrias tipo 1, Ag43 o curli, que son esenciales paraE. colibiopelícula [275]. Por el contrario, la maduración
de la estructura del biofilm tipo hongo 3D depende de la producción de curli, inducida enE. colipor el plásmido F
natural, que no expresa constitutivamente F-pili [276]. La presencia del plásmido R1drd19 también aumentaE. coli
formación de biopelículas al disminuir la motilidad y aumentar el nivel del inductor de detección de quórum AI-2 [277,
278], y el plásmido IncP-9 TOL enP. putidaaumenta la producción de ADN extracelular conocido por desempeñar un
papel en la estructura de la biopelícula [279] y por lo tanto la capacidad de formación de biopelículas [280]. Sin
embargo, el mecanismo genético por el cual los plásmidos conjugativos aumentan la formación de biopelículas no ha
sido dilucidado, pero la presencia de plásmidos conjugativos naturales o reprimidos afecta la expresión génica
cromosómica global del huésped.276,278].

Si bien el papel de los pili conjugativos se ha estudiado principalmente enE. colibiopelículas, se puede especular
que su impacto difiere según el huésped. De hecho, Røder et al. observó que los pili conjugativos del plásmido IncP-1
pKJK5 redujeron la unión a la superficie deP. putidaal aumentar la adhesión célula a célula, lo que resulta en una
reducción de la formación de biopelículas.281]. Será necesaria una mayor investigación para descifrar las complejas
interconexiones entre el plásmido conjugativo y la formación de biopelículas.

4.4. Influencia del tratamiento con antibióticos en la conjugación dentro de biopelículas

Se han propuesto interacciones entre la conjugación y las biopelículas para promover tanto la construcción de
comunidades como la transferencia de genes. Esta interacción sinérgica plantea serias dudas sobre la contribución de HGT a
la evolución y adaptación de patógenos formadores de biopelículas. Debido al aumento de las infecciones resistentes a los
antibióticos, las investigaciones recientes han tenido como objetivo proporcionar una nueva comprensión de las respuestas
de las biopelículas a los tratamientos antimicrobianos.
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Las concentraciones inhibitorias submínimas (sub-MIC) de aminoglucósidos mejoran la biomasa del biofilm delP.
aeruginosacepa PAO1 y aislados clínicos deE. colia través del regulador de respuesta Arr, una fosfodiesterasa predicha
que altera los niveles de monofosfato de diguanosina cíclico (c-di-GMP) [282]. Linares et al. demostró además que,
además de los aminoglucósidos, las sub-MIC de tetraciclina y norfloxacina también aumentan la formación deP.
aeruginosabiopelícula Sin embargo, no se identificaron factores causales claros [283]. Curiosamente, una combinación
de tetraciclina y cefradina tiene un efecto sinérgico en la formación de biopelículas de un cultivo mixto deE. coliyP.
aeruginosa[284]. La tetraciclina también promueve la formación de biopelículas del patógeno.Acinetobacter
baumannii, y el análisis de la secuencia del genoma completo reveló un aumento en la tasa de mutaciones como SNP,
así como inserciones y deleciones, bajo exposición a fármacos subinhibitorios [285]. Además de la acumulación de
variación genotípica, el tratamiento de biopelículas con un bajo nivel de antibióticos produce cambios en el perfil de
expresión génica, algunos de los cuales pueden estar relacionados con una mayor formación de biopelículas.283,285,
286].
Recientemente, Díaz-Pascual et al. investigadoVibrio choleraebiopelícula a escala comunitaria utilizando
un sistema de imágenes de una sola célula, que revela cambios en la dinámica y la arquitectura de la
biopelícula en respuesta al tratamiento con antibióticos.287]. Después de la exposición a la tetraciclina,
observaron modificaciones en la arquitectura del biofilm y la morfología celular, incluido un aumento de 2,5
veces en el volumen celular y una disminución del 29 % en la densidad celular. Esta disminución de la densidad
celular reflejó una alteración considerable de la disposición multicelular y la ruptura de la matriz dentro de la
biopelícula. Además, los biofilms se volvieron susceptibles a la colonización de su interior por nuevas células, y
la población de colonizadores aumentó hasta invadir el biofilm residente. Claramente, una dosis subletal de
antibióticos influye en el estilo de vida del biofilm, induciendo cambios significativos en toda la población. La
matriz de biopelícula forma un escudo para evitar la penetración y difusión de antimicrobianos y el aumento de
la formación de biopelícula en respuesta a los antibióticos, ilustrado por una mejora de la matriz de biopelícula,

Paralelamente, algunos antibióticos también han sido reconocidos como moléculas de señalización que
aumentan la transferencia conjugativa.288–296]. Curiosamente, cuando la conjugación ocurre en un entorno libre de
antibióticos con una cepa donante que se trata previamente con subconcentraciones de antibióticos, la frecuencia de
conjugación aumenta significativamente.297,298]. Los mecanismos por los cuales los antibióticos afectan la
transferencia de plásmidos siguen sin estar claros. En la literatura, se propone que el tratamiento antibiótico sub-MIC
mejora la frecuencia de conjugación a través de la regulación positiva detraexpresión génica en donantes [291,297–
299]. Sin embargo, en muchos estudios, el aumento en la frecuencia de conjugación se evaluó utilizando un
antibiótico cuyo gen de resistencia es portado por el propio plásmido conjugativo probado [288,290,291,293,294,299,
300]. Este enfoque dificulta la distinción entre el sesgo de selección inducido por el antibiótico en la población de
apareamiento y el efecto real sobre las frecuencias de conjugación. En cambio, dos estudios respaldan que los
antibióticos actúan principalmente a través de la selección diferencial del donante, el receptor y el transconjugante
una vez que se ha producido la transferencia de genes, en lugar de estimular la conjugación.per se[197,301].
Mediante el uso de microscopía de células vivas, pudieron visualizar la dinámica de conjugación en tiempo real.
Nolivos et al. mostró que la frecuencia de transferencia de un plásmido F que albergaba el gen de resistencia a la
tetraciclina no aumentaba por la presencia de tetraciclina. Lopatkin et al. también demostró que los antibióticos de
seis clases principales no tenían efecto sobre la eficiencia de conjugación de plásmidos de cinco grupos de
incompatibilidad diferentes. Estos informes sugirieron que la contribución directa de los antibióticos a la transferencia
de genes se ha sobreestimado y propusieron que los antibióticos pueden actuar solo como impulsores de selección
posteriores a la transferencia, favoreciendo el crecimiento de transconjugantes sobre los receptores. Aunque una
serie de estudios han adelantado el posible efecto estimulante de los antibióticos sobre la conjugación, es necesario
explorar más a fondo su impacto real.
Sin duda, los antibióticos juegan un papel que no debe pasarse por alto en la aparición de nuevas cepas patógenas
multirresistentes. Es preocupante que los tratamientos con antibióticos amplifiquen la formación de biopelículas, lo que
aumenta la dificultad para curar infecciones asociadas a biopelículas. Los antibióticos no solo inducen la formación de
biopelículas, sino que también mejoran la transferencia de genes dentro de la comunidad. Además, los cambios profundos
inducidos por los antibióticos permiten la invasión de la biopelícula por microorganismos externos.287]. Como
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los biofilms son entornos adecuados para la transferencia conjugativa, podemos imaginar fácilmente que los
antibióticos podrían potenciar la invasión de un donante potencial que alberga genes de resistencia y que su
diseminación dentro del biofilm podría actuar como un factor sinérgico en lugar de antagonista. La tecnología de
microfluidos representa un método prometedor para investigar, en tiempo real y sin alterar la estructura del biofilm,
la dinámica de la conjugación dentro de las comunidades. Estudios recientes han utilizado dispositivos microfluídicos
combinados con microscopía confocal para monitorear la transferencia del plásmido RP4 en tiempo real en entornos
mixtos.P. putida yE. colibiopelículas y en lodos activados [302]. Pudieron demostrar que la estructura y la composición
de la biopelícula podían modular las rutas de transferencia de genes. De hecho, enE. colibiopelículas, la propagación
explosiva de transconjugantes ilustró el papel importante de la transferencia de plásmidos, mientras que en la
comunidad de lodos, la transferencia vertical de genes fue más predominante. Usando estas técnicas avanzadas,
ahora es más necesario comprender cómo los antibióticos pueden influir en la diseminación de genes dentro de estas
estructuras complejas.

5. Conclusiones

Nuestro conocimiento actual de la secuencia de reacciones requerida para la conjugación de plásmidos está bien documentado, especialmente para plásmidos modelo como el

factor F, pero también para otros plásmidos como RP4, R388 o pTi. La combinación de enfoques genéticos y bioquímicos ha permitido describir la función de las proteínas Tra clave en estas

reacciones. Sin embargo, incluso para estos sistemas, las funciones mecánicas de la mayoría de las proteínas Tra siguen siendo esquivas. Se han descrito principalmente en términos de su

esencialidad para la formación o estabilización de parejas de apareamiento, la transferencia de ADN y la inmunidad, y se carece de una mayor comprensión de su actividad a escala

molecular. Además, como se enfatiza en esta revisión, quedan varias preguntas fundamentales importantes, como la capacidad del pilus para transportar ADN durante la transferencia a

distancia, la existencia y la naturaleza de una señal potencial que se desencadena por la formación de parejas de apareamiento que activaría la conjugación, o el papel de los genes

principales en los primeros pasos del establecimiento del plásmido, por ejemplo. Debido a su íntima conexión con la diseminación de la resistencia a los medicamentos, la conjugación ha

resurgido como el foco de un esfuerzo de investigación global. Los enfoques experimentales modernos deberían ayudar a obtener nuevos conocimientos sobre el mecanismo de

conjugación a escala molecular y celular, así como sobre el alcance de la conjugación en las comunidades bacterianas naturales y su impacto en la diseminación de los rasgos metabólicos

bacterianos. Debido a su íntima conexión con la diseminación de la resistencia a los medicamentos, la conjugación ha resurgido como el foco de un esfuerzo de investigación global. Los

enfoques experimentales modernos deberían ayudar a obtener nuevos conocimientos sobre el mecanismo de conjugación a escala molecular y celular, así como sobre el alcance de la

conjugación en las comunidades bacterianas naturales y su impacto en la diseminación de los rasgos metabólicos bacterianos. Debido a su íntima conexión con la diseminación de la

resistencia a los medicamentos, la conjugación ha resurgido como el foco de un esfuerzo de investigación global. Los enfoques experimentales modernos deberían ayudar a obtener nuevos

conocimientos sobre el mecanismo de conjugación a escala molecular y celular, así como sobre el alcance de la conjugación en las comunidades bacterianas naturales y su impacto en la

diseminación de los rasgos metabólicos bacterianos.

Contribuciones de autor:Conceptualización, SB y CL; redacción—preparación del borrador original, CV, KG, SD y SB;
redacción—revisión y edición, SB y CL; preparación de figuras, SB y CL; preparación de mesas, CV, KG; supervisión, SB
y CL; adquisición de fondos, CL Todos los autores han leído y están de acuerdo con la versión publicada del
manuscrito.

Fondos:Esta investigación fue financiada por la Agencia Nacional de Investigación de Francia, número de subvención ANR-18-
CE35-0008 a CL y KG y ANR-19-ARMB-0006-01 a CL, SB y SD, y la Universidad de Lyon mediante financiación a CVCL. también
agradece a la Fundación para la Educación y la Investigación de Schlumberger (FSER 2019) y la Fundación para la Innovación
en Infecciología FINOVI (AO-2014) por su apoyo financiero.

Expresiones de gratitud:Los autores agradecen a Yoshiharu Yamaichi, Nelly Dubarry y Erwan Gueguen por sus útiles debates. Annick
Dedieu por la corrección de pruebas del manuscrito. También agradecemos a todos los grupos de investigación que contribuyen a
mejorar nuestra comprensión de la conjugación del ADN bacteriano y nos disculpamos por la lista de citas potencialmente incompleta.

Conflictos de interés:Los autores declaran no tener conflicto de intereses.

Referencias

1. Lederberg, J.; Tatum, EL Recombinación de genes en Escherichia coli.Naturaleza1946,158, 558. [Referencia cruzada] [PubMed]
2. Grohmann, E.; Muth, G.; Espinosa, M. Transferencia de plásmidos conjugativos en bacterias grampositivas.Microbiol. mol. Biol. Rvdo.
2003,67, 277–301. [Referencia cruzada] [PubMed]
3. Cruz, FDL; escarcha, LS; Meyer, RJ; Zechner, EL Metabolismo del ADN conjugativo en bacterias Gram-negativas. FEMS
Microbiol. Rvdo.2010,34, 18–40. [Referencia cruzada] [PubMed]
4. Davison, J. Intercambio genético entre bacterias en el medio ambiente.plásmido1999,42, 73–91. [Referencia cruzada]
genes2020,11, 1239 19 de 32

5. Lawrence, JG Transferencia de genes, especiación y evolución de los genomas bacterianos.actual Opinión Microbiol.1999, 2, 519–523.
[Referencia cruzada]
6. Ochman, H.; Lorenzo, JG; Groisman, EA Transferencia lateral de genes y la naturaleza de la innovación bacteriana. Naturaleza2000,
405, 299–304. [Referencia cruzada]
7. Ippen-Ihler, K.; Achtman, M.; Willetts, N. Mapa de deleción del factor sexual F de Escherichia coli K-12: el orden de once cistrones de
transferencia.J. Bacteriol.1972,110, 857–863. [Referencia cruzada]
8. Penfold, SS; Simón, J.; Frost, LS Regulación de la expresión del gen traM del factor sexual F de Escherichia coli
.mol. Microbiol.1996,20, 549–558. [Referencia cruzada] [PubMed]
9. Koraimann, G.; Wagner, MA Comportamiento social y toma de decisiones en la conjugación bacteriana.Parte delantera. Célula. Infectar.
Microbiol.2014,4. [Referencia cruzada]
10. Timmis, KN; Andrésmis, yo.; Achtman, M. Represión de la fertilidad de plásmidos conjugativos similares a F: mapeo físico de los
cistrones R6–5 finO y finP e identificación de la proteína finO.proc. nacional Academia ciencia EE.UU1978,75, 5836–5840. [
Referencia cruzada]
11. Willetts, N. El control transcripcional de la fertilidad en plásmidos tipo F.J. Mol. Biol.1977,112, 141–148. [Referencia
cruzada]
12. Escarcha, L.; Lee, S.; Yanchar, N.; Las mutaciones de Paranchych, W. finP y fisO en el ARN antisentido de FinP sugieren un modelo
para la acción de FinOP en la represión de la conjugación bacteriana por el plásmido Flac JCFL0.mol. Gen. Genet. 1989,218, 152–
160. [Referencia cruzada] [PubMed]
13. Koraimann, G.; Teferlé, K.; Markolín, G.; Woger, W.; Högenauer, G. El sistema represor FinOP del plásmido R1: análisis del
control del ARN antisentido de la expresión de traJ y la transferencia de ADN conjugativo.mol. Microbiol. 1996,21, 811–
821. [Referencia cruzada] [PubMed]
14. van Biesen, T.; Frost, LS Los niveles diferenciales de inhibición de la fertilidad entre los plásmidos tipo F están relacionados con la
concentración celular de ARNm de finO.mol. Microbiol.1992,6, 771–780. [Referencia cruzada] [PubMed]
15. van Biesen, T.; Frost, LS La proteína FinO de los plásmidos IncF se une al ARN antisentido FinP y su objetivo, el ARNm traJ, y
promueve la formación de dúplex.mol. Microbiol.1994,14, 427–436. [Referencia cruzada]
16. Jerónimo, LJ; van Biesen, T.; Frost, LS Degradación del ARN antisentido de FinP de plásmidos similares a F: la proteína de
unión a ARN, FinO, protege a FinP de la ribonucleasa E.J. Mol. Biol.1999,285, 1457–1473. [Referencia cruzada] [PubMed]

17. Wong, JJW; Lu, J.; Glover, JNM Función del relaxosoma y regulación de la conjugación en plásmidos tipo F: una perspectiva
de biología estructural.mol. Microbiol.2012,85, 602–617. [Referencia cruzada]
18. Voluntad, WR; Frost, LS Caracterización de los roles opuestos de H-NS y TraJ en la regulación transcripcional del F-Plasmid
tra Operon.J. Bacteriol.2006,188, 507–514. [Referencia cruzada]
19. Voluntad, WR; Lu, J.; Frost, LS El papel de H-NS en el silenciamiento de la expresión del gen de transferencia F durante la entrada en la fase
estacionaria.mol. Microbiol.2004,54, 769–782. [Referencia cruzada]
20. Ali Azam, T.; Iwata, A.; Nishimura, A.; Ueda, S.; Ishihama, A. Variación dependiente de la fase de crecimiento en la composición
proteica del nucleoide de Escherichia coli.J. Bacteriol.1999,181, 6361–6370. [Referencia cruzada]
21. Escarcha, LS; Manchak, J. F-fenocopias: Caracterización de la expresión de la región de transferencia F en fase estacionaria.
Microbiología1998,144 parte 9, 2579–2587. [Referencia cruzada]
22. Headd, B.; Bradford, SA La ventana de conjugación en unEscherichia coliCepa K-12 con un plásmido IncFII. aplicación
Reinar. Microbiol.2020,86. [Referencia cruzada] [PubMed]
23. Lu, J.; Peng, Y.; Wan, S.; escarcha, LS; Ravio, T.; Glover, JNM Función cooperativa de TraJ y ArcA en la regulación del
operón tra del plásmido F.J. Bacteriol.2019,201. [Referencia cruzada] [PubMed]
24. Camacho, EM; Serna, A.; Madrid, C.; Marqumis, s.; Helechoandez, R.; de la Cruz, F.; Juarez, A.; Casadestus, J. Regulación de
la transcripción de finP por metilación de adenina de ADN en el plásmido de virulencia deSalmonella enterica.
J. Bacteriol.2005,187, 5691–5699. [Referencia cruzada] [PubMed]
25. Zahrl, D.; Wagner, A.; Tscherner, M.; Koraimann, G. GroEL juega un papel central en la regulación negativa inducida por
estrés de la conjugación bacteriana al promover la degradación proteolítica de la proteína activadora TraJ.J. Bacteriol.
2007,189, 5885–5894. [Referencia cruzada]
26. Dessaux, Y.; Faure, D. Detección de quórum y extinción de quórum en Agrobacterium: ¿un "sistema Go/No Go"? genes
2018,9, 210. [Referencia cruzada]
27. Lu, Y.; Zeng, J.; Wu, B.; Wang, L.; Cai, R.; Zhang, N.; Li, Y.; Huang, X.; Huang, B.; Chen, C.; et al. Quorum sensing N-acil
homoserina Lactonas-SdiA suprimeEscherichia coli-Pseudomonas aeruginosaconjugación a través de la inhibición de la
expresión traI.Parte delantera. Célula. Infectar. Microbiol.2017,7. [Referencia cruzada]
genes2020,11, 1239 20 de 32

28. Cheah, KC; Skurray, R. El plásmido F lleva una inserción IS3 dentro de finO.J. Gen. Microbiol.1986,132, 3269–3275. [
Referencia cruzada]
29. Yoshioka, Y.; Ohtsubo, H.; Ohtsubo, E. Gen represor finO en los plásmidos R100 y F: la transferencia constitutiva del plásmido F es
causada por la inserción de IS3 en F finO.J. Bacteriol.1987,169, 619–623. [Referencia cruzada]
30. Poidevin, M.; Sato, M.; Altinoglu, I.; Delaplace, M.; Sato, C.; Yamaichi, Y. Mutación en plásmido ESBL de Escherichia coli
O104:H4 conduce a la autoaglutinación y mejora la diseminación del plásmido.Parte delantera. Microbiol.2018, 9, 130. [
Referencia cruzada]
31. Yamaichi, Y.; Chao, MC; Sasabe, J.; Clark, L.; Davis, BM; Yamamoto, N.; Mori, H.; Kurokawa, K.; Waldor, MK Análisis
genético de alta resolución de los requisitos para la transmisión horizontal del plásmido ESBL deEscherichia coli
O104:H4.Ácidos Nucleicos Res.2015,43, 348–360. [Referencia cruzada]
32. Dmowski, M.; Golebiewski, M.; Kern-Zdanowicz, I. Características del sistema de transferencia conjugativa del plásmido
IncM pCTX-M3 e identificación de sus reguladores putativos.J. Bacteriol.2018,200. [Referencia cruzada]
33. Kohler, V.; Goessweiner-Mohr, N.; Aufschnaiter, A.; Fercher, C.; Probst, I.; Pavkov-Keller, T.; Hambre, K.; Wolinski, H.;
Buttner, S.; Grohmann, E.; et al. TraN: un nuevo represor de un sistema de secreción de Enterococcus conjugative tipo
IV.Ácidos Nucleicos Res.2018,46, 9201–9219. [Referencia cruzada] [PubMed]
34. Potrón, A.; Poirel, L.; Nordmann, P. Propiedades de transferencia desreprimidas que conducen a la propagación eficiente del
plásmido que codifica la carbapenemasa OXA-48.Antimicrobiano Agentes Quimiotera.2014,58, 467–471. [Referencia cruzada] [
PubMed]
35. Bradley, DE Los plásmidos desreprimidos del grupo de incompatibilidad I1 determinan dos formas morfológicas diferentes de
pilus.plásmido1983,9, 331–334. [Referencia cruzada]
36. Bradley, DE Especificación de los pili conjugativos y sistemas de apareamiento superficial de plásmidos de Pseudomonas.J. Gen.
Microbiol.1983,129, 2545–2556. [Referencia cruzada]
37. Bradley, DE Características y función de pili conjugativos gruesos y delgados determinados por plásmidos desreprimidos por
transferencia de grupos de incompatibilidad I1, I2, I5, B, K y Z.J. Gen. Microbiol.1984,130, 1489–1502. [Referencia cruzada]
38. Bradley, DE; Taylor, DE; Cohen, DR Especificación de sistemas de apareamiento superficial entre plásmidos de resistencia a
fármacos conjugativos en Escherichia coli K-12.J. Bacteriol.1980,143, 1466–1470. [Referencia cruzada]
39. Costa, TRD; Ilangovan, A.; Ukleja, M.; Redzej, A.; Santini, JM; Smith, TK; Egelman, EH; Waksman, G. Estructura del
sexo bacteriano F Pilus revela un ensamblaje de un complejo estequiométrico de proteína-fosfolípido.
Célula2016,166, 1436–1444.e10. [Referencia cruzada]

40. Fecha, T.; Inuzuka, M.; Tomoeda, M. Purificación y caracterización de pili F deEscherichia coli.Bioquímica 1977,dieciséis,
5579–5585. [Referencia cruzada]
41. Folkhard, W.; Leonardo, KR; Malsey, S.; Marvin, DA; Dubochet, J.; Engel, A.; Achtman, M.; Helmuth, R. Difracción de rayos X y
estudios de microscopio electrónico sobre la estructura de los pili F bacterianos.J. Mol. Biol.1979,130, 145–160. [
Referencia cruzada]
42. Ippen-Ihler, KA; Minkley, EG El sistema de conjugación de F, el factor de fertilidad deEscherichia coli.año Rev. Genet.1986,
20, 593–624. [Referencia cruzada] [PubMed]
43. Silverman, PM; Clarke, MB Nuevos conocimientos sobre la estructura, la dinámica y la función de F-pilus.Integrar Biol.2010, 2, 25–
31. [Referencia cruzada] [PubMed]
44. Wang, YA; Yu, X.; Silverman, PM; Harris, RL; Egelman, EH La estructura de F-pili.J. Mol. Biol.2009,385, 22–29. [
Referencia cruzada]
45. Escarcha, LS; Paranchych, W.; Willetts, NS Secuencia de ADN de la región F traALE que incluye el gen de la pilina F.J.
Bacteriol.1984,160, 395–401. [Referencia cruzada]
46. Minkley, EG; Polen, S.; Briton, CC; Ippen-Ihler, K. Identificación del gen estructural para F-pilina.J. Mol. Biol.1976,
108, 111–121. [Referencia cruzada]
47. Maneewannakul, K.; Maneewannakul, S.; Ippen-Ihler, K. Síntesis de pilina F.J. Bacteriol.1993,175, 1384–1391. [Referencia
cruzada]
48. Harris, RL; Sholl, KA; Conrado, MN; Tocador, ME; Silverman, PM Interacción entre el plásmido F TraA (F-pilina) y las
proteínas TraQ.mol. Microbiol.1999,34, 780–791. [Referencia cruzada]
49. Majdalani, N.; Ippen-Ihler, K. La inserción en la membrana de la subunidad F-pilina es independiente de Sec pero requiere la
peptidasa B líder y la fuerza motriz del protón.J. Bacteriol.1996,178, 3742–3747. [Referencia cruzada]
50. Moore, D.; Hamilton, CM; Maneewannakul, K.; Mintz, Y.; escarcha, LS; Ippen-Ihler, K. ElEscherichia coli Se requiere el gen
traX del plásmido K-12 F para la acetilación de la pilina F.J. Bacteriol.1993,175, 1375–1383. [Referencia cruzada]
genes2020,11, 1239 21 de 32

51. Firth, N.; Berg, T.; Skurray, RA Evolución de plásmidos conjugativos de bacterias grampositivas.mol.
Microbiol.1999,31, 1598–1600. [PubMed]
52. Lawley, TD; Klimke, WA; Gubbins, MJ; Frost, la conjugación del factor LS F es un verdadero sistema de secreción de tipo IV. FEMS
Microbiol. Letón.2003,224, 1–15. [Referencia cruzada]
53. Manchak, J.; Antonio, KG; Frost, LS El análisis mutacional de F-pilina revela dominios para ensamblaje de pilus, infección
por fagos y transferencia de ADN.mol. Microbiol.2002,43, 195–205. [Referencia cruzada] [PubMed]
54. Firth, N.; Ippen-Ihler, K.; Skurray, RATransferencia de genes: estructura de conjugación y función del factor F y mecanismo
de conjugación; Sociedad Estadounidense de Microbiología: Washington, DC, EE. UU., 1999.
55. Koraimann, G. Propagación y persistencia de genes de virulencia y resistencia a antibióticos: un paseo en el módulo de conjugación
de plásmidos F.EcoSal Plus2018,8. [Referencia cruzada] [PubMed]
56. Arutyunov, D.; Frost, LS F conjugación: De vuelta al principio.plásmido2013,70, 18–32. [Referencia cruzada]
57. Escarcha, LS; Ippen-Ihler, K.; Skurray, RA Análisis de la secuencia y productos génicos de la región de transferencia del factor sexual
F.Microbiol. Rvdo.1994,58, 162–210. [Referencia cruzada]
58. Antonio, KG; Kathir, P.; Moore, D.; Ippen-Ihler, K.; Frost, LS Análisis de la secuencia traLEKBP y la proteína
TraP de tres plásmidos tipo F: F, R100-1 y ColB2.J. Bacteriol.1996,178, 3194–3200. [Referencia cruzada]
59. Antonio, KG; Klimke, WA; Manchak, J.; Frost, LS Comparación de proteínas involucradas en la síntesis de Pilus y la estabilización de
pares de apareamiento de los plásmidos F y R100-1 relacionados: conocimientos sobre el mecanismo de conjugación.
J. Bacteriol.1999,181, 5149–5159. [Referencia cruzada]
60. Gopalkrishnan, S.; Ross, W.; Chen, AY; Gourse, RL TraR regula directamente el inicio de la transcripción al imitar los efectos
combinados de los reguladores globales DksA y ppGpp.proc. nacional Academia ciencia EE.UU2017, 114, E5539–E5548. [
Referencia cruzada]
61. Shala-Lawrence, A.; Bragagnolo, N.; Nowroozi-Dayeni, R.; Kheyson, S.; Audette, GF La interacción de TraW y TrbC es
necesaria para facilitar la conjugación en plásmidos tipo F.Bioquímica Biografía. Res. común2018, 503, 2386–2392. [
Referencia cruzada]
62. Garcillan-Barcia, MP; de la Cruz, F. ¿Por qué la exclusión de entrada es una característica esencial de los plásmidos conjugativos? plásmido
2008,60, 1–18. [Referencia cruzada] [PubMed]
63. Achtman, M. Apareamiento de agregados enEscherichia coliconjugación.J. Bacteriol.1975,123, 505–515. [Referencia cruzada] [
PubMed]
64. Lanka, E.; Wilkins, BM Reacciones de procesamiento de ADN en conjugación bacteriana.año Rev. Bioquímica.1995,31. [Referencia
cruzada]
65. Dosal, l.; Shao, S.; Schildbach, JF El seguimiento de las reacciones de procesamiento de la relaxasa TraI del plásmido F proporciona información sobre la

transferencia del plásmido F.Ácidos Nucleicos Res.2011,39, 2658–2670. [Referencia cruzada] [PubMed]

66. Matson, SO; Samson, JK; Byrd, DRN F Transferencia de ADN conjugativo de plásmido La actividad de la helicasa TraI es esencial para la
transferencia de cadenas de ADN.J. Biol. química2001,276, 2372–2379. [Referencia cruzada]
67. Curtiss, R. Conjugación bacteriana.año Rev. Microbiol.1969,23, 69–136. [Referencia cruzada]
68. Marvin, DA; Hohn, B. Virus bacterianos filamentosos.Bacteriol. Rvdo.1969,33, 172–209. [Referencia cruzada]
69. Clarke, M.; Madera, L.; Harris, RL; Silverman, PM Dinámica de pili F mediante imágenes de células vivas.proc. nacional Academia ciencia EE.UU
2008,105, 17978–17981. [Referencia cruzada]
70. Achtman, M.; Morelli, G.; Schwuchow, S. Interacciones célula-célula en la conjugaciónEscherichia coli: Papel de F pili y destino de los
agregados de apareamiento.J. Bacteriol.1978,135, 1053–1061. [Referencia cruzada]
71. Dürrenberger, MB; Villiger, W.; Bächi, T. Uniones conjugacionales: morfología de contactos específicos en la conjugación
Escherichia colibacteriasJ. Estructura. Biol.1991,107, 146–156. [Referencia cruzada]
72. Brinton, CC La estructura, función, síntesis y control genético de pili bacterianos y un modelo molecular para el transporte de ADN
y ARN en bacterias gram negativas.Trans. Academia de Nueva York. ciencia1965,27, 1003–1054. [Referencia cruzada] [PubMed]

73. Harrington, LC; Rogerson, AC El pilus F deEscherichia coliparece apoyar la transferencia de ADN estable en ausencia de
contacto de pared a pared entre las células.J. Bacteriol.1990,172, 7263–7264. [Referencia cruzada] [PubMed]
74. Babić, A.; Lindner, AB; Vulic, M.; Stewart, EJ; Radman, M. Visualización directa de la transferencia horizontal de genes. Ciencia2008,
319, 1533–1536. [Referencia cruzada] [PubMed]
75. Davies, JK; Reeves, P. Tolerancia a la colicina y ubicación del mapa de mutantes deficientes en conjugación.J. Bacteriol.1975, 123, 372–373. [
Referencia cruzada]
76. Falkinham, JO; Curtiss, R. Aislamiento y caracterización de mutantes deficientes en conjugación deEscherichia coli K-12.J.
Bacteriol.1976,126, 1194–1206. [Referencia cruzada] [PubMed]
genes2020,11, 1239 22 de 32

77. Havekes, LM; Hoekstra, WP Caracterización de unEscherichia coliK-12 F-Con-mutante.J. Bacteriol.1976, 126, 593–
600. [Referencia cruzada]
78. Manning, Pensilvania; Pupurs, A.; Reeves, P. Membrana exterior deEscherichia coliK-12: Aislamiento de mutantes con proteína 3A
alterada mediante el uso de mutantes de rango de huéspedes del bacteriófago K3.J. Bacteriol.1976,127, 1080–1084. [Referencia
cruzada] [PubMed]
79. Monner, DA; Jonson, S.; Boman, HG Mutantes resistentes a la ampicilina de Escherichia coli K-12 con alteraciones de
lipopolisacáridos que afectan la capacidad de apareamiento y la susceptibilidad a los bacteriófagos específicos del sexo.J.
Bacteriol.1971,107, 420–432. [Referencia cruzada]
80. Skurray, RA; Hancock, RE; Reeves, P. Con–mutants: Clase de mutantes enEscherichia coliK-12 que carece de una proteína principal
de la pared celular y es defectuosa en la conjugación y adsorción de un bacteriófago.J. Bacteriol.1974,119, 726–735. [Referencia
cruzada]
81. Manoil, C.; Rosenbusch, JP Mutantes deficientes en conjugación deEscherichia colidistinguir clases de funciones de la proteína OmpA de la
membrana externa.mol. Gen. Genet.mil novecientos ochenta y dos,187, 148–156. [Referencia cruzada]
82. Morona, R.; Klose, M.; Henning, U.Escherichia coliProteína de membrana externa K-12 (OmpA) como receptor de bacteriófagos:
análisis de genes mutantes que expresan proteínas alteradas.J. Bacteriol.1984,159, 570–578. [Referencia cruzada] [PubMed]

83. Achtman, M.; Schwuchow, S.; Helmut, R.; Morelli, G.; Manning, PA Interacciones célula-célula en la conjugación Escherichia
coli: Con− mutantes y estabilización de agregados de apareamiento.mol. Gen. Genet. MGG1978,164, 171–183. [
Referencia cruzada]
84. Antonio, KG; Sherburne, C.; Sherburne, R.; Frost, LS El papel del pilus en el reconocimiento de células receptoras durante la
conjugación bacteriana mediada por plásmidos tipo F.mol. Microbiol.1994,13, 939–953. [Referencia cruzada] [PubMed]

85. Klimke, Washington; Frost, LS Análisis genético del papel del gen de transferencia, traN, de los plásmidos F y R100-1 en la estabilización de
parejas de apareamiento durante la conjugación.J. Bacteriol.1998,180, 4036–4043. [Referencia cruzada]
86. Klimke, WA; Rypien, CD; Klinger, B.; Kennedy, RA; Rodríguez-Maillard, JM; Frost, LS La proteína de estabilización de parejas
de apareamiento, TraN, del plásmido F es una proteína de membrana externa con dos regiones que son importantes
para su función en la conjugación.Microbiología2005,151, 3527–3540. [Referencia cruzada] [PubMed]
87. Maneewannakul, S.; Kathir, P.; Ippen-Ihler, K. Caracterización del gen traN de agregación de apareamiento del plásmido F y de un
nuevo locus trbE de la región de transferencia F.J. Mol. Biol.1992,225, 299–311. [Referencia cruzada]
88. Willetts, N.; Achtman, M. Análisis genético de transferencia por elEscherichia colifactor sexual F, usando complementación
transduccional P1.J. Bacteriol.1972,110, 843–851. [Referencia cruzada]
89. Audette, GF; Manchak, J.; Beatty, P.; Klimke, WA; Frost, LS La exclusión de entrada en plásmidos tipo F requiere TraG intacta
en el donante que reconozca su TraS afín en el receptor.Microbiología (Read. Ingl.)2007,153, 442–451. [Referencia
cruzada]
90. Marrero, J.; Waldor, MK Los determinantes de exclusión de entrada dentro de Eex y TraG son citoplasmáticos.J. Bacteriol. 2007,189,
6469–6473. [Referencia cruzada]
91. Baja, WW; Wong, J.; Peña, A.; Seddon, C.; Costa, T.; Beis, K.; Frankel, G. OmpK36 y TraN facilitan la transferencia conyugal
del plásmido pKpQIL de resistencia a carbapenem de Klebsiella pneumoniae.Microbiología2020. [Referencia cruzada]

92. Havekes, L.; Tommassen, J.; Hoekstra, W.; Lugtenberg, B. Aislamiento y caracterización deEscherichia coli Mutantes K-12 F-
defectuosos en la conjugación con un donante de tipo I.J. Bacteriol.1977,129, 1–8. [Referencia cruzada] [PubMed]

93. Ishiwa, A.; Komano, T. PilV Las adhesinas del plásmido R64 Thin Pili se unen específicamente a los lipopolisacáridos de las células
receptoras.J. Mol. Biol.2004,343, 615–625. [Referencia cruzada] [PubMed]
94. Escarcha, LS; Simon, J. Estudios sobre los pili del plásmido promiscuo RP4. EnMecanismos moleculares de la
virulencia bacteriana; Kado, CI, Crosa, JH, Eds.; Desarrollos en Patología Vegetal; Springer: Dordrecht, Países
Bajos, 1994; Volumen 3, págs. 47–65. ISBN 978-94-010-4322-9.
95. Moriguchi, K.; Zoolkefli, FIRMA; Abe, M.; Kiyokawa, K.; Yamamoto, S.; Suzuki, K. Dirigirse a los genes de resistencia a los antibióticos es un
mejor enfoque para bloquear la adquisición de resistencia a los antibióticos que bloquear la transferencia conyugal por parte de las
células receptoras: una detección de todo el genoma enEscherichia coli.Parte delantera. Microbiol.2020,10. [Referencia cruzada] [PubMed]

96. P.mirez-Mendoza, D.; de la Cruz, F.Escherichia coligenes que afectan la capacidad del receptor en la conjugación de plásmidos: ¿hay alguno?
Genoma BMC.2009,10, 71. [Referencia cruzada]
genes2020,11, 1239 23 de 32

97. Dodsworth, JA; Pequeño.; Wei, S.; Hedlund, BP; Leigh, JA; de Figueiredo, P. Transferencia conjugal entre dominios de ADN
de bacterias a Archaea.aplicación Reinar. Microbiol.2010,76, 5644–5647. [Referencia cruzada]
98. Heinemann, JA; Sprague, GF Los plásmidos conjugativos bacterianos movilizan la transferencia de ADN entre bacterias y levaduras.Naturaleza
1989,340, 205–209. [Referencia cruzada]
99. Waters, VL Conjugación entre células bacterianas y de mamífero.Nat. Gineta.2001,29, 375–376. [Referencia cruzada]
100. Llosa, M.; Gomis-Rüth, FX; Coll, M.; de la Cruz Fd, F. Conjugación bacteriana: un mecanismo de dos pasos para el
transporte de ADN.mol. Microbiol.2002,45, 1–8. [Referencia cruzada]
101. Clewell, DB; Helinski, DE Existencia del factor colicinogénico-factor sexual ColI-b-P9 como un complejo de relajación de proteína de
ADN circular superenrollado.Bioquímica Biografía. Res. común1970,41, 150–156. [Referencia cruzada]
102. Cohen, A.; Fisher, WD; Curtiss, R.; Adler, HI ADN aislado deEscherichia coliminicélulas acopladas con células F+.proc. nacional
Academia ciencia EE.UU1968,61, 61–68. [Referencia cruzada]
103. Willetts, N.; Skurray, R. El sistema de conjugación de plásmidos tipo F.año Rev. Genet.1980,14, 41–76. [Referencia
cruzada] [PubMed]
104. Dosal, l.; Schildbach, la unión del ADN monocatenario JF por los dominios helicasa y relaxasa F TraI está regulada de
forma coordinada.J. Bacteriol.2010,192, 3620–3628. [Referencia cruzada] [PubMed]
105. Everett, R.; Willetts, N. Caracterización de un sistema In Vivo para cortar en el origen de la transferencia de ADN conyugal
del factor sexual F.J. Mol. Biol.1980,136, 129–150. [Referencia cruzada]
106. Matson, SO; Morton, BSEscherichia coliLa ADN helicasa I cataliza una reacción de corte específica de sitio y cadena en el
plásmido F oriT.J. Biol. química1991,266, 16232–16237.
107. Matson, SO; Ragonese, H. La proteína TraI del plásmido F contiene tres dominios funcionales necesarios para la transferencia de
hebras de ADN conjugativo.J. Bacteriol.2005,187, 697–706. [Referencia cruzada]
108. Reygers, U.; Wessel, R.; Muller, H.; Hoffmann-Berling, H. Actividad endonucleasa deEscherichia coliADN helicasa I dirigida
contra el origen de transferencia del factor F.EMBÓ J.1991,10, 2689–2694. [Referencia cruzada]
109. Traxler, BA; Minkley, EG Evidencia de que la ADN helicasa I y el corte específico del sitio oriT son funciones de la proteína
F TraI.J. Mol. Biol.1988,204, 205–209. [Referencia cruzada]
110. Howard, MT; Nelson, WC; Matson, SW Montaje paso a paso de un relaxosoma en el origen de transferencia del plásmido
F.J. Biol. química1995,270, 28381–28386.
111. Nelson, WC; Morton, BS; Lahue, EE; Matson, SW Caracterización de laEscherichia coliProducto del gen traY del factor F y
sus sitios de unión.J. Bacteriol.1993,175, 2221–2228. [Referencia cruzada]
112. Schildbach, JF; Robinson, CR; Sauer, RT Caracterización biofísica de la proteína TraY deEscherichia coli factor F.J.
Biol. química1998,273, 1329–1333. [Referencia cruzada]
113. Luo, Y.; Gao, Q.; Deonier, RC Análisis mutacional y físico de la proteína traY del plásmido F que se une a oriT. mol.
Microbiol.1994,11, 459–469. [Referencia cruzada] [PubMed]
114. Nelson, WC; Howard, MT; Sherman, JA; Matson, SW El producto del gen traY y el factor huésped de integración
estimulanEscherichia coliCorte catalizado por ADN helicasa I en el plásmido F oriT.J. Biol. química1995,270,
28374–28380. [PubMed]
115. Arroz, Pensilvania; Yang, S.; Mizuuchi, K.; Nash, HA Estructura cristalina de un complejo IHF-ADN: un giro en U del ADN inducido por
proteínas.Célula1996,87, 1295–1306. [Referencia cruzada]
116. Tsai, MM; Fu, YH; Deonier, RC Curvas intrínsecas y unión del factor huésped de integración en el plásmido F oriT.J. Bacteriol.1990,
172, 4603–4609. [Referencia cruzada]
117. Williams, SL; Schildbach, JF TraY y sitios de unión de oriT del factor huésped de integración y transferencia conjugada F: se toleran
las variaciones de secuencia, pero no el espaciado alterado.J. Bacteriol.2007,189, 3813–3823. [Referencia cruzada]
118. Di Laurenzio, L.; escarcha, LS; Paranchych, W. La proteína TraM del plásmido conjugativo F se une al origen de
transferencia de los plásmidos F y ColE1.mol. Microbiol.1992,6, 2951–2959. [Referencia cruzada]
119. Fu, YH; Tsai, MM; Luo, YN; Deonier, RC Análisis de deleción del locus oriT del plásmido F.J. Bacteriol.1991, 173, 1012–1020.
[Referencia cruzada]
120. Kupelwieser, G.; Schwab, M.; Högenauer, G.; Koraimann, G.; Zechner, EL La proteína de transferencia TraM estimula la escisión
catalizada por TraI del origen de transferencia del plásmido R1 In Vivo.J. Mol. Biol.1998,275, 81–94. [Referencia cruzada]
121. Mihajlovic, S.; Lang, S.; Sut, MV; Strohmaier, H.; Gruber, CJ; Koraimann, G.; Cabezon, E.; Moncalian, G.; de la Cruz, F.;
Zechner, EL El procesamiento del ADN conjugativo del plásmido r1 se regula en la interfaz de la proteína de
acoplamiento.J. Bacteriol.2009,191, 6877–6887. [Referencia cruzada] [PubMed]
genes2020,11, 1239 24 de 32

122. Ragonese, H.; Haisch, D.; Villarreal, E.; Choi, J.-H.; Matson, SW La proteína TraM codificada por el plásmido F estimula la
escisión mediada por relaxosoma en oriT a través de una interacción con TraI.mol. Microbiol.2007,63, 1173–1184. [
Referencia cruzada]
123. Wawrzyniak, P.; Płucienniczak, G.; Bartosik, D. Las diferentes caras de la replicación en círculo rodante y sus proteínas iniciadoras
multifuncionales.Parte delantera. Microbiol.2017,8, 2353. [Referencia cruzada] [PubMed]
124. Byrd, DR; Matson, SW Nicking por transesterificación: La reacción catalizada por una relaxasa.mol. Microbiol. 1997,25,
1011–1022. [Referencia cruzada] [PubMed]
125. Guiney, DG; Helinski, DR Complejos de relajación de ADN y proteína poasmid. tercero Asociación de proteína con
los 5′terminal de la hebra de ADN rota en el complejo relajado del plásmido ColE1.J. Biol. química1975, 250,
8796–8803.
126. Matson, SO; Nelson, WC; Morton, BS Caracterización del producto de reacción de la reacción de corte oriT catalizada por
la ADN helicasa I de Escherichia coli.J. Bacteriol.1993,175, 2599–2606. [Referencia cruzada] [PubMed]
127. Pansegrau, W.; Ziegelin, G.; Lanka, E. Asociación covalente del producto del gen traI del plásmido RP4 con el 5′-nucleótido
terminal en el sitio de la muesca de relajación.J. Biol. química1990,265, 10637–10644. [PubMed]
128. Khan, SA Rolling-Circle replicación de plásmidos bacterianos.Microbiol. mol. Biol. Rvdo.1997,61, 442–455. [Referencia
cruzada] [PubMed]
129. Khan, SA Replicación de círculo rodante de plásmidos: aspectos destacados de dos décadas de investigación.plásmido2005,53, 126–136. [Referencia

cruzada]

130. Ruiz Maso,JA; machoN, C.; Bordanaba-Ruiseco, L.; Espinosa, M.; Coll, M.; Del Solar, G. Plasmid rolling-circle
replication.Microbiol. espectro2015,3. [Referencia cruzada]
131. Aguas, VL; Guiney, DG Procesos en la conjugación de enlace de región de muesca, transferencia de T-DNA y replicación de círculo
rodante.mol. Microbiol.1993,9, 1123–1130. [Referencia cruzada]
132. Lorenzo-Diaz, F.; Helechoandez-Lopez, C.; garcillan-Barcia, MP; Espinosa, M. Juntándolos: replicación y conjugación en
círculo rodante del plásmido pMV158 bajo una perspectiva evolutiva.plásmido2014,74, 15–31. [Referencia cruzada]

133. Draper, O.; Cmisar, CE; machon, C.; de la Cruz, F.; Llosa, M. Actividades de recombinasa e integrasa específicas del sitio de una
relaxasa conjugativa en células receptoras.proc. nacional Academia ciencia EE.UU2005,102, 16385–16390. [Referencia cruzada] [
PubMed]
134. Trokter, M.; Waksman, G. La translocación a través del sistema de secreción conjugativo de tipo IV requiere el despliegue de su
sustrato proteico.J. Bacteriol.2018,200. [Referencia cruzada] [PubMed]
135. Ilangovan, A.; Kay, CWM; Roier, S.; El Mkami, H.; Salvadori, E.; Zechner, EL; Zanetti, G.; Waksman, G. La estructura Cryo-EM
de una relaxasa revela la base molecular del desenrollamiento del ADN durante la conjugación bacteriana.
Célula2017,169, 708–721.e12. [Referencia cruzada] [PubMed]
136. Cabezaon, E.; Sastre, JI; de la Cruz, F. Evidencia genética de un papel de acoplamiento para la familia de proteínas TraG en la
conjugación bacteriana.mol. Gen. Genet.1997,254, 400–406. [Referencia cruzada] [PubMed]
137. Cascales, E.; Christie, PJ Definición de una vía de secreción bacteriana tipo IV para un sustrato de ADN.Ciencia 2004,304,
1170–1173. [Referencia cruzada] [PubMed]
138. Christie, PJ Secreción tipo IV: Agrobacterium VirB/D4 y sistemas de conjugación relacionados.bioquimica Biografía. acta
2004,1694, 219–234. [Referencia cruzada]
139. Christie, PJ Los sistemas de secreción tipo IV en mosaico.EcoSal Plus2016,7. [Referencia cruzada] [PubMed]
140. Christie, PJ; Whitaker, N.; gonzalezalez-Rivera, C. BBA revisó el mecanismo y la estructura revisados de los sistemas de secreción
bacteriana tipo IV.bioquimica Biografía. acta2014,1843, 1578. [Referencia cruzada]
141. Beranek, A.; Zettl, M.; Lorenzoni, K.; Schauer, A.; Manhart, M.; Koraimann, G. Treinta y ocho aminoácidos C-terminales de la
proteína de acoplamiento TraD del plásmido de resistencia conjugativa tipo F R1 son necesarios y suficientes para conferir la
unión a la proteína selectora de sustrato TraM.J. Bacteriol.2004,186, 6999–7006. [Referencia cruzada]
142. Discomi-Kochem, C.; Dreiseikelmann, B. La proteína de unión al ADN citoplasmático TraM se une a la proteína de
membrana interna TraD in vitro.J. Bacteriol.1997,179, 6133–6137. [Referencia cruzada]
143. Lu, J.; Frost, LS Las mutaciones en la región C-terminal de TraM proporcionan evidencia de las interacciones In Vivo TraM-TraD
durante la conjugación del plásmido F.J. Bacteriol.2005,187, 4767–4773. [Referencia cruzada]
144. Lu, J.; Zhao, W.; Frost, LS El análisis mutacional de TraM correlaciona la oligomerización y la unión del ADN con la autorregulación
y la transferencia conjugativa del ADN.J. Biol. química2004,279, 55324–55333. [Referencia cruzada]
genes2020,11, 1239 25 de 32

145. Lu, J.; Wong, JJW; Edwards, RA; Manchak, J.; escarcha, LS; Glover, JNM Base estructural del reconocimiento TraD-TraM
específico durante la conjugación bacteriana mediada por plásmido F.mol. Microbiol.2008,70, 89–99. [Referencia
cruzada] [PubMed]
146. Schröder, G.; Krause, S.; Zechner, EL; Traxler, B.; Yeo, H.-J.; Lurz, R.; Waksman, G.; Lanka, E. Proteínas similares a TraG de los
sistemas de transferencia de ADN y delHelicobacter pylorisistema de secreción tipo IV: ¿puerta de membrana interna para
sustratos exportados?J. Bacteriol.2002,184, 2767–2779. [Referencia cruzada] [PubMed]
147. Llosa, M.; Zunzunegui, S.; de la Cruz, F. Las proteínas de acoplamiento conjugativo interactúan con proteínas similares a VirB10
afines y heterólogas mientras exhiben especificidad por relaxosomas afines.proc. nacional Academia ciencia EE.UU2003, 100,
10465–10470. [Referencia cruzada]
148. Mango, RJF; Palacios, G.; Nguyen, T.; Mally, M.; Gachelet, EG; Zechner, EL; Traxler, B. La mutagénesis general del plásmido
F TraI revela su papel en la regulación conjugativa.J. Bacteriol.2006,188, 6346–6353. [Referencia cruzada]
149. Gilmour, MW; Gunton, JE; Lawley, TD; Taylor, DE Interacción entre la proteína de acoplamiento R27 del plásmido IncHI1 y el
sistema de secreción de tipo IV: TraG se asocia con la proteína de formación de pares de apareamiento en espiral TrhB.mol.
Microbiol.2003,49, 105–116. [Referencia cruzada]
150. Egelman, EH Biología estructural. Bombeo de ADN.Naturaleza2001,409, 573–575. [Referencia cruzada]
151. Gomis-Rüth, FX; Moncalian, G.; PAGmirez-Luque, R.; gonzalezalez, A.; Cabezon, E.; de la Cruz, F.; Coll, M. La proteína de
conjugación bacteriana TrwB se parece a las helicasas de anillo y la F1-ATPasa.Naturaleza2001,409, 637–641. [Referencia
cruzada] [PubMed]
152. Moncalian, G.; Cabezon, E.; Alkorta, I.; Valle, M.; Moro, F.; Valpuesta, JM; Goñi, FM; de La Cruz, F. Caracterización de las
actividades de unión a ATP y ADN de TrwB, la proteína de acoplamiento esencial en la conjugación del plásmido R388.J.
Biol. química1999,274, 36117–36124. [Referencia cruzada]
153. Schröder, G.; Lanka, E. Proteínas similares a TraG de los sistemas de secreción de tipo IV: Disección funcional de las múltiples
actividades de TraG (RP4) y TrwB (R388).J. Bacteriol.2003,185, 4371–4381. [Referencia cruzada] [PubMed]
154. Mango, RJF; Gachelet, EG; Nguyen, T.; Toussaint, L.; Chivián, D.; Traxler, B. Oligomerización in vivo de la proteína de
acoplamiento conjugativo F TraD.J. Bacteriol.2007,189, 6626–6634. [Referencia cruzada] [PubMed]
155. Tato, I.; Zunzunegui, S.; de la Cruz, F.; Cabezon, E. TrwB, la proteína de acoplamiento involucrada en el transporte de ADN durante la
conjugación bacteriana, es una ATPasa dependiente de ADN.proc. nacional Academia ciencia EE.UU2005,102, 8156–8161. [Referencia
cruzada] [PubMed]
156. Christie, PJ; Atmakuri, K.; Krishnamoorthy, V.; Jakubowski, S.; Cascales, E. Biogénesis, arquitectura y función de los
sistemas de secreción bacteriana tipo IV.año Rev. Microbiol.2005,59, 451–485. [Referencia cruzada] [PubMed]
157. Garcillan-Barcia, MP; Jurado, P.; gonzalezalez-pmirez, B.; Moncalian, G.; Helechoandez, LA; de la Cruz, F. La transferencia
conjugativa se puede inhibir bloqueando la actividad de la relaxasa dentro de las células receptoras con intracuerpos.
mol. Microbiol.2007,63, 404–416. [Referencia cruzada] [PubMed]
158. Chandler, M.; de la Cruz, F.; Dyda, F.; Hickman, AB; Moncalián, G.; Ton-Hoang, B. Romper y unir ADN monocatenario: la
superfamilia de endonucleasas HUH.Nat. Rev. Microbiol.2013,11, 525–538. [Referencia cruzada]
159. Becker, CE; Meyer, R. Origen y destino de los 3′extremos de ADN monocatenario generados por transferencia conjugada del
plásmido R1162.J. Bacteriol.2012,194, 5368–5376. [Referencia cruzada]
160. Forsberg, KJ; Malik, HS Genómica microbiana: El universo en expansión de los sistemas de defensa bacterianos.actual Biol.2018,28,
R361–R364. [Referencia cruzada]
161. Casjens, S. Profagos y genómica bacteriana: ¿Qué hemos aprendido hasta ahora?mol. Microbiol.2003,49, 277–300. [
Referencia cruzada]
162. Narra, HP; Ochman, H. ¿De qué sirve el sexo para las bacterias?actual Biol.2006,dieciséis, R705–R710. [Referencia cruzada]
163. Johnston, CD; Algodón, SL; Rittling, SR; Starr, JR; Borisy, GG; Dewhirst, FE; Lemon, KP Evasión sistemática de la barrera de
restricción-modificación en bacterias.proc. nacional Academia ciencia EE.UU2019,116, 11454–11459. [Referencia cruzada
] [PubMed]
164. Bickle, TA Restricción restrictiva.mol. Microbiol.2004,51, 3–5. [Referencia cruzada] [PubMed]
165. Chen, K.; Reuter, M.; Sanghvi, B.; Roberts, Georgia; Cooper, LP; Labranza, M.; Blakely, GW; Dryden, las proteínas DTF ArdA
de diferentes elementos genéticos móviles pueden unirse a la ADN metiltransferasa EcoKI Tipo I de E.
coli K12.bioquimica Biografía. acta2014,1844, 505–511. [Referencia cruzada] [PubMed]
166. McMahon, SA; Roberts, Georgia; Johnson, KA; Cooper, LP; Liu, H.; Blanco, JH; Carter, LG; Sanghvi, B.; Oke, M.; Walkinshaw,
MD; et al. Mimetismo extenso del ADN por la proteína anti-restricción ArdA y su papel en la propagación de la
resistencia a los antibióticos.Ácidos Nucleicos Res.2009,37, 4887–4897. [Referencia cruzada]
genes2020,11, 1239 26 de 32

167. Wilkins, BM Promiscuidad de plásmidos: Enfrentando el desafío del control de inmigración de ADN.Reinar. Microbiol. 2002,4, 495–
500. [Referencia cruzada]
168. Belogúrov, AA; Delver, EP; Agafonova, OV; Belogurova, NG; Lee, LY; Kado, CI La proteína antirestricción Ard (Tipo C)
codificada por el plásmido IncW pSa tiene una gran similitud con el dominio de "transporte de proteínas" de TraC1
primasa del plásmido promiscuo RP4.J. Mol. Biol.2000,296, 969–977. [Referencia cruzada]
169. Roy, D.; Huguet, KT; Grenier, F.; Burrus, plásmidos conjugativos V. IncC y elementos SXT/R391 reparan roturas de doble
cadena causadas por CRISPR-Cas durante la conjugación.Ácidos Nucleicos Res.2020, 8815–8827. [Referencia cruzada]

170. Wilkins, BM; Chiley, PM; Tomás, AT; Pocklington, MJ Distribución de secuencias de reconocimiento de enzimas de restricción en el
plásmido RP4 de amplio rango de huéspedes: Implicaciones moleculares y evolutivas.J. Mol. Biol.1996, 258, 447–456. [Referencia
cruzada]
171. Grissa, I.; Vergnaud, G.; Pourcel, C. La base de datos CRISPRdb y herramientas para mostrar CRISPR y generar diccionarios de
espaciadores y repeticiones.BMC Bioinforme.2007,8, 172. [Referencia cruzada]
172. Makarova, KS; Lobo, YI; Alkhnbashi, OS; Costa, F.; Sha, SA; Saunders, SJ; Barrangou, R.; Brouns, SJJ; Charpentier, E.;
Mango, DH; et al. Una clasificación evolutiva actualizada de los sistemas CRISPR-Cas.Nat. Rev. Microbiol.2015,13,
722–736. [Referencia cruzada]
173. Garneau, JE; Dupuis, M.-MI.;Villion, M.; Romero, DA; Barrangou, R.; Boyaval, P.; Fremaux, C.; Horvath, P.; Magadan, AH;
Moineau, S. El sistema inmunitario bacteriano CRISPR/Cas escinde el ADN de bacteriófagos y plásmidos.Naturaleza2010,
468, 67–71. [Referencia cruzada] [PubMed]
174. Bondy-Denomy, J.; Pawluk, A.; Maxwell, KL; Davidson, AR Genes de bacteriófagos que inactivan el sistema inmunitario
bacteriano CRISPR/Cas.Naturaleza2013,493, 429–432. [Referencia cruzada] [PubMed]
175. Bondy-Denomy, J.; García, B.; Strum, S.; Du, M.; Rollins, MF; Hidalgo-Reyes, Y.; Wiedenheft, B.; Maxwell, KL; Davidson, AR
Múltiples mecanismos para la inhibición de CRISPR-Cas por proteínas anti-CRISPR.Naturaleza2015,526, 136–139. [
Referencia cruzada] [PubMed]
176. Mahendra, C.; Christie, KA; Osuna, BA; Pinilla-Redondo, R.; Kleinstiver, BP; Bondy-Denomy, J. Las proteínas anti-CRISPR de
amplio espectro facilitan la transferencia horizontal de genes.Nat. Microbiol.2020,5, 620–629. [Referencia cruzada] [
PubMed]
177. Cram, D.; Rayo, A.; O'Gorman, L.; Skurray, R. Análisis transcripcional de la región líder en la transferencia de ADN del plásmido F.
plásmido1984,11, 221–233. [Referencia cruzada]
178. Jones, AL; Barth, PT; Wilkins, BM Inducción cigótica de los genes del plásmido ssb y psiB después de la transferencia conjugativa
del plásmido Incl1 Collb-P9.mol. Microbiol.1992,6, 605–613. [Referencia cruzada] [PubMed]
179. Althorpe, Nueva Jersey; Chiley, PM; Tomás, AT; Brammar, WJ; Wilkins, BM Activación transcripcional transitoria del gen anti-
restricción del plásmido Incl1 (ardA) y el gen de inhibición SOS (psiB) temprano en la conjugación de bacterias receptoras.mol.
Microbiol.1999,31, 133–142. [Referencia cruzada]
180. Masai, H.; Arai, K. Frpo: Un nuevo promotor de ADN monocatenario para la transcripción y para la síntesis de cebadores de ARN
de la replicación del ADN.Célula1997,89, 897–907. [Referencia cruzada]
181. Honda, Y.; Sakai, H.; Komano, T. Dos señales de iniciación de ADN monocatenario ubicadas en la región oriV del plásmido
RSF1010.Gene1988,68, 221–228. [Referencia cruzada]
182. Masai, H.; Arai, K. Mecanismos de síntesis de cebador de ARN y replicación de ADN dependiente de D-loop/R-loop en Escherichia
coli.bioquímica1996,78, 1109–1117. [Referencia cruzada]
183. Nomura, N.; Bajo, LR; Ray, DS Clonación selectiva de secuencias de iniciación de ADN Co1E1 utilizando el vector de clonación M13 delta E101.
Genemil novecientos ochenta y dos,18, 239–246. [Referencia cruzada]
184. Nomura, N.; Masai, H.; Inuzuka, M.; Miyazaki, C.; Ohtsubo, E.; Itoh, T.; Sasamoto, S.; Matsui, M.; Ishizaki, R.; Arai, K.
Identificación de once secuencias de iniciación monocatenarias (ssi) para cebar la replicación del ADN en el
Plásmidos F, R6K, R100 y ColE2.Gene1991,108, 15–22. [Referencia cruzada] [PubMed]
185. D.iaz, A.; Carece, SA; Lopez, P. Funciones múltiples de la ADN polimerasa I en el establecimiento y replicación del
plásmido promiscuo pLS1.mol. Microbiol.1994,14, 773–783. [Referencia cruzada] [PubMed]
186. Wilkins, BM; Hollom, SE Síntesis conjugacional de ADN F lac+ y Col I en presencia de rifampicina y enEscherichia coli
Mutantes K12 defectuosos en la síntesis de ADN.mol. Gen. Genet.1974,134, 143–156. [Referencia cruzada]
187. Baharoglu, Z.; Mazel, D. SOS, la formidable estrategia de las bacterias frente a las agresiones.FEMS Microbiol. Rvdo. 2014,38, 1126–
1145. [Referencia cruzada]
genes2020,11, 1239 27 de 32

188. Baharoglu, Z.; Bikard, D.; Mazel, D. La transferencia de ADN conjugativo induce la respuesta SOS bacteriana y promueve el
desarrollo de resistencia a los antibióticos a través de la activación de Integron.PLoS Genet.2010,6, e1001165. [Referencia
cruzada]
189. Maslowska, KH; Makiela-Dzbenska, K.; Fijalkowska, IJ El sistema SOS: Una respuesta compleja y estrechamente regulada
al daño del ADN.Reinar. mol. Mutageno.2019,60, 368–384. [Referencia cruzada]
190. Golub, E.; Bailón, A.; Devoret, R. Un gen que codifica un inhibidor de SOS está presente en diferentes plásmidos conjugativos.J.
Bacteriol.1988,170, 4392–4394. [Referencia cruzada]
191. Bailone, A.; Backman, A.; Sommer, S.; CmiyomiRier, J.; Bagdasarian, MM; Bagdasarian, M.; Devoret, R. El polipéptido PsiB
previene la activación de la proteína RecA enEscherichia coli.mol. Gen. Genet.1988,214, 389–395. [Referencia cruzada]

192. Petrova, V.; Chitteni-Pattu, S.; Dres, JC; Inman, RB; Cox, MM Un inhibidor de SOS que se une a la proteína RecA libre: la
proteína PsiB.mol. Célula2009,36, 121–130. [Referencia cruzada]
193. Meyer, RR; Laine, PS La proteína de unión al ADN monocatenario deEscherichia coli.Microbiol. Rvdo.1990,54, 342–380. [
Referencia cruzada] [PubMed]
194. Shereda, RD; Kozlov, AG; Lohman, TM; Cox, MM; Keck, JL SSB como organizador/movilizador de complejos de
mantenimiento del genoma.crítico Rev. Bioquímica. mol. Biol.2008,43, 289–318. [Referencia cruzada]
195. Sigal, N.; Delius, H.; Kornberg, T.; Geffer, ML; Alberts, B. Una proteína desenrolladora de ADN aislada de Escherichia coli:
Su interacción con el ADN y con las ADN polimerasas.proc. nacional Academia ciencia EE.UU1972,69, 3537–3541. [
Referencia cruzada] [PubMed]
196. Nolivos, S.; Cayrón, J.; Dedieu, A.; Página, A.; Delolme, F.; Lesterlin, C. Papel de la bomba de salida de múltiples fármacos AcrAB-TolC en la adquisición de

resistencia a los fármacos mediante transferencia de plásmidos.Ciencia2019,364, 778–782. [Referencia cruzada]

197. Golub, EI; Los plásmidos conjugativos bajos en KB de bacterias entéricas de muchos grupos de incompatibilidad diferentes tienen
genes similares para proteínas de unión a ADN monocatenarias.J. Bacteriol.1985,162, 235–241. [Referencia cruzada] [PubMed]

198. Kolodkin, AL; Capaz, MA; Golub, EI; Bajo, factor sexual KB F deEscherichia coliK-12 codifica para una proteína de unión a
ADN monocatenario.proc. nacional Academia ciencia EE.UU1983,80, 4422–4426. [Referencia cruzada]
199. Golub, EI; Bajo, KB Desrepresión de genes de proteínas de unión a ADN monocatenario en plásmidos desreprimidos para
conjugación y complementación de unE. colissb-mutación por estos genes.mol. Gen. Genet.1986,204, 410–416. [
Referencia cruzada]
200. Howland, CJ; Rees, CE; Barth, PT; Wilkins, BM El gen ssb del plásmido ColIb-P9.J. Bacteriol.1989,171, 2466–2473. [
Referencia cruzada]
201. Portero, RD; Black, S. La proteína de unión al ADN monocatenario codificada por elEscherichia coliEl factor F puede
complementar una deleción del gen cromosómico ssb.J. Bacteriol.1991,173, 2720–2723. [Referencia cruzada]
202. Ruvolo, PP; Keating, KM; Williams, KR; Chase, JW Proteínas de unión a ADN de cadena sencilla (SSB) de plásmidos
transmisibles procarióticos.Proteínas1991,9, 120–134. [Referencia cruzada]
203. Jovanovic, OS; Ayres, EK; Figurski, DH El operón iniciador de la replicación del plásmido promiscuo RK2 codifica un gen
que complementa unEscherichia colimutante defectuoso en la proteína de unión al ADN monocatenario.J. Bacteriol.
1992,174, 4842–4846. [Referencia cruzada] [PubMed]
204. del Solar, G.; Giraldo, R.; Ruiz-Echevarria, MJ; Espinosa, M.; Diaz-Orejas, R. Replicación y control de plásmidos bacterianos
circulares.Microbiol. mol. Biol. Rvdo.1998,62, 434–464. [Referencia cruzada]
205. Pinto, UM; Pappas, KM; Winans, SC El ABC de la replicación y segregación de plásmidos.Nat. Rev. Microbiol. 2012,10, 755–
765. [Referencia cruzada] [PubMed]
206. Rakowski, SA; Filutowicz, M. Control de replicación del plásmido R6K.plásmido2013,69, 231–242. [Referencia cruzada] [
PubMed]
207. Nordström, K. Plasmid R1: replicación y su control.plásmido2006,55, 1–26. [Referencia cruzada]
208. Guiney, DG Anfitrión gama de funciones de conjugación y replicación de laEscherichia coliplásmido sexual Flac.J. Mol. Biol.mil novecientos
ochenta y dos,162, 699–703. [Referencia cruzada]
209. Zhong, Z.; Helinski, D.; Toukdarian, A. Plasmid host-range: Restricciones a la replicación de F en Pseudomonas. plásmido
2005,54, 48–56. [Referencia cruzada]
210. Adamczyk, M.; Jagura-Burdzy, G. Propagación y supervivencia de plásmidos IncP-1 promiscuos.Acta Biochim. polaco 2003,50, 425–
453. [Referencia cruzada]
211. Baxter, JC; Funnell, BE Mecanismos de partición de plásmidos.Microbiol. espectro2014,2. [Referencia cruzada]
212. Ebersbach, G.; Gerdes, K. Mecanismos de segregación de plásmidos.año Rev. Genet.2005,39, 453–479. [Referencia cruzada]
genes2020,11, 1239 28 de 32

213. Gerdes, K.; Howard, M.; Szardenings, F. Empujando y tirando de la segregación del ADN procariótico.Célula2010, 141, 927–942. [
Referencia cruzada] [PubMed]
214. Møller-Jensen, J.; Jensen, RB; Gerdes, K. Segregación de plásmidos y cromosomas en procariotas.Tendencias Microbiol.
2000,8, 313–320. [Referencia cruzada]
215. Schumacher, MA Maquinaria de partición de plásmidos bacterianos: un enfoque minimalista para la supervivencia.actual Opinión Estructura.
Biol.2012,22, 72–79. [Referencia cruzada]
216. Deonier, RC; Davidson, N. La organización de la secuencia del plásmido F integrado en dos cepas Hfr de Escherichia coli.J.
Mol. Biol.1976,107, 207–222. [Referencia cruzada]
217. Deonier, RC; Mirels, L. Escisión de secuencias de plásmido F por recombinación en elementos de secuencia de inserción repetidos
directamente 2: participación de recA.proc. nacional Academia ciencia EE.UU1977,74, 3965–3969. [Referencia cruzada] [PubMed]

218. Johnson, CM; Grossman, AD Integrative and Conjugative Elements (ICE): qué hacen y cómo funcionan.año Rev.
Genet.2015,49, 577–601. [Referencia cruzada]
219. Shao, Q.; Hawkins, A.; Zeng, L. Dinámica del ADN del fago en células con diferentes destinos.Biografía. j2015,108, 2048–2060. [
Referencia cruzada] [PubMed]
220. Gago-Cordoba, C.; Val-Calvo, J.; Miguel-Arribas, A.; Serrano, E.; Singh, PK; Abia, D.; Wu, LJ; Meijer, WJJ Revisión de la exclusión de
superficie: función relacionada con la expresión diferencial del sistema de exclusión de superficie de Bacillus subtilisplásmido
pLS20.Parte delantera. Microbiol.2019,10, 1502. [Referencia cruzada] [PubMed]
221. Galli, DM; Chen, J. Actividad de exclusión de entrada en el plásmido conjugativo pVT745.plásmido2006,55, 158–163. [Referencia
cruzada]
222. Gunton, JE; Ussher, JER; Roker, MM; Wetsch, Nuevo Mexico; Alonso, G.; Taylor, DE La exclusión de entrada en el plásmido
IncHI1 R27 está mediada por EexA y EexB.plásmido2008,59, 86–101. [Referencia cruzada]
223. Haase, J.; Kalkum, M.; Lanka, E. TrbK, una pequeña lipoproteína de membrana citoplasmática, funciona en la exclusión de
entrada del plásmido RP4 IncP α.J. Bacteriol.1996,178, 6720–6729. [Referencia cruzada] [PubMed]
224. Humbert, M.; Huguet, KT; Coulombe, F.; Burrus, V. Exclusión de entrada de plásmidos conjugativos de IncA, IncC y grupos de
incompatibilidad no tipificados relacionados.J. Bacteriol.2019,201. [Referencia cruzada]
225. Kraushaar, B.; Appel, B.; Lanka, E.; Strauch, E. Exclusión de entrada y oriT de un sistema conjugativo codificado por el
plásmido críptico p29930 deYersinia enterocolítica.plásmido2010,64, 79–84. [Referencia cruzada] [PubMed]
226. Pohlman, RF; Genetti, HD; Winans, SC La exclusión de entrada del plásmido IncN pKM101 está mediada por una única
proteína hidrófila que contiene un motivo de unión a lípidos.plásmido1994,31, 158–165. [Referencia cruzada]
227. Possoz, C.; Gagnat, J.; Sezonov, G.; GumiRineau, M.; Pernodet, J.-L. La inmunidad conyugal de las cepas de Streptomyces
que portan el elemento integrador pSAM2 se debe al gen pif (factor de inmunidad pSAM2).mol. Microbiol. 2003,47,
1385–1393. [Referencia cruzada] [PubMed]
228. Tomás, CM; Nielsen, KM Mecanismos y barreras para la transferencia horizontal de genes entre bacterias.Nat. Rev.
Microbiol.2005,3, 711–721. [Referencia cruzada] [PubMed]
229. Achtman, M.; Kennedy, N.; Skurray, R. Interacciones célula-célula en la conjugaciónEscherichia coli: Papel de la proteína traT en la exclusión
de la superficie.proc. nacional Academia ciencia EE.UU1977,74, 5104–5108. [Referencia cruzada]
230. Manning, Pensilvania; Beutin, L.; Achtman, M. Membrana exterior deEscherichia coli: Propiedades de la proteína traT del factor
sexual F que interviene en la exclusión superficial.J. Bacteriol.1980,142, 285–294. [Referencia cruzada]
231. Minkley, EG; Ippen-Ihler, K. Identificación de una proteína de membrana asociada con la expresión de la región de exclusión de la
superficie del operón de transferencia F.J. Bacteriol.1977,129, 1613–1622. [Referencia cruzada]
232. Riede, I.; Eschbach, ML Evidencia de que TraT interactúa con OmpA deEscherichia coli.FEBS Lett.1986,205, 241–245. [
Referencia cruzada]
233. Jalajakumari, MB; Guidolín, A.; Buhk, HJ; Manning, Pensilvania; jamón, LM; Hodgson, AL; Cheah, KC; Skurray, genes de
exclusión de superficie RA traS y traT del factor sexual F deEscherichia coliK-12. Determinación de la secuencia de
nucleótidos y de las actividades promotor y terminador.J. Mol. Biol.1987,198, 1–11. [Referencia cruzada]
234. San Millán, A.; MacLean, RC Fitness costos de plásmidos: un límite para la transmisión de plásmidos.Microbiol. espectro 2017,5. [
Referencia cruzada]
235. Barlow, M. Lo que la resistencia antimicrobiana nos ha enseñado sobre la transferencia horizontal de genes.Métodos Mol. Biol. 2009,532,
397–411. [Referencia cruzada] [PubMed]
236. Hall-Stoodley, L.; Costerton, JW; Stoodley, P. Biopelículas bacterianas: del entorno natural a las enfermedades infecciosas.
Nat. Rev. Microbiol.2004,2, 95–108. [Referencia cruzada] [PubMed]
genes2020,11, 1239 29 de 32

237 Bale, MJ; Freír, JC; Day, MJ Transferencia de plásmido entre cepas dePseudomonas aeruginosaen filtros de membrana adheridos a
piedras de río.J. Gen. Microbiol.1987,133, 3099–3107. [Referencia cruzada]
238. Lilley, Alaska; Bailey, MJ Impacto de la adquisición y transporte del plásmido pQBR103 en la aptitud de la fitosfera de
Pseudomonas fluorescensSBW25: Carga y beneficio.aplicación Reinar. Microbiol.1997,63, 1584–1587. [Referencia cruzada]
239. Munck, C.; Shet, RU; Freedberg, DE; Wang, HH Grabación de ADN móvil en la microbiota intestinal usando un Escherichia coli
Plataforma de adquisición de espaciadores CRISPR-Cas.Nat. común2020,11, 95. [Referencia cruzada]
240. Ronda, C.; Chen, SP; Cabral, V.; Yaung, SJ; Wang, HH Ingeniería metagenómica del microbioma intestinal de mamíferos in
situ.Nat. Métodos2019,dieciséis, 167–170. [Referencia cruzada]
241. Ehlers, LJ; Bouwer, EJ Transferencia de plásmido RP4 entre especies de pseudomonas en un reactor de biopelícula.ciencia del agua
Tecnología1999,39, 163–171. [Referencia cruzada]
242. Yang, D.; Wang, J.; Qiu, Z.; Jin, M.; Shen, Z.; Chen, Z.; Wang, X.; Zhang, B.; Li, J.-W. Transferencia horizontal de genes de resistencia a
antibióticos en un biorreactor de membrana.J. Biotecnología.2013,167, 441–447. [Referencia cruzada]
243. Hausner, M.; Wuertz, S. Altas tasas de conjugación en biopelículas bacterianas determinadas por análisis cuantitativo in situ.
aplicación Reinar. Microbiol.1999,sesenta y cinco, 3710–3713. [Referencia cruzada] [PubMed]
244. Christensen, BB; Sternberg, C.; Molin, S. Conjugación de plásmido bacteriano en superficies semisólidas monitoreadas con la
proteína verde fluorescente (GFP) deaequorea victoriacomo marcador.Gene1996,173, 59–65. [Referencia cruzada]
245. Haagensen, JAJ; Hansen, SK; Johansen, T.; Molin, S. Detección in situ de transferencia horizontal de elementos genéticos
móviles.FEMS Microbiol. Ecol.2002,42, 261–268. [Referencia cruzada] [PubMed]
246. Reisner, A.; Wolinski, H.; Zechner, EL El control in situ de la transferencia de plásmidos IncF en superficies de agar semisólidas revela una
invasión limitada de plásmidos en las colonias receptoras.plásmido2012,67, 155–161. [Referencia cruzada]
247. Lilley, Alaska; Bailey, MJ La dinámica de transferencia dePseudomonassp. plásmido pQBR11 en biopelículas.FEMS
Microbiol. Ecol.2002,42, 243–250. [Referencia cruzada] [PubMed]
248. Aspray, TJ; Hansen, SK; Burns, RG Una biopelícula microbiana a base de suelo expuesta a 2,4-D: desarrollo de la
comunidad bacteriana y establecimiento del plásmido conjugativo pJP4.FEMS Microbiol. Ecol.2005,54, 317–327. [
Referencia cruzada]
249. Christensen, BB; Sternberg, C.; Anderson, JB; Eberl, L.; Moller, S.; Givskov, M.; Molin, S. Establecimiento de nuevos rasgos genéticos
en una comunidad de biofilm microbiano.aplicación Reinar. Microbiol.1998,64, 2247–2255. [Referencia cruzada]
250. Nancharaiah, YV; Wattiau, P.; Würtz, S.; Báñese, S.; Mohan, SV; Wilderer, Pensilvania; Hausner, M. Doble etiquetado de
Pseudomonas putidacon proteínas fluorescentes para el seguimiento in situ de la transferencia conyugal del plásmido TOL.
aplicación Reinar. Microbiol.2003,69, 4846–4852. [Referencia cruzada]
251. Abe, K.; Nomura, N.; Suzuki, S. Biopelículas: puntos calientes de transferencia horizontal de genes (HGT) en ambientes acuáticos,
con un enfoque en un nuevo mecanismo HGT.FEMS Microbiol. Ecol.2020,96. [Referencia cruzada]
252. Madsen, JS; Burmølle, M.; Hansen, LH; Sørensen, SJ La interconexión entre la formación de biopelículas y la transferencia
horizontal de genes.FEMS Inmunol. Medicina. Microbiol.2012,sesenta y cinco, 183–195. [Referencia cruzada]
253. Molín, S.; Tolker-Nielsen, T. La transferencia de genes se produce con mayor eficiencia en las biopelículas e induce una mayor estabilización
de la estructura de la biopelícula.actual Opinión Biotecnología.2003,14, 255–261. [Referencia cruzada]
254. Nesse, LL; Simm, R. Biofilm: un punto de acceso para los genotipos bacterianos emergentes.Adv. aplicación Microbiol.2018,103, 223–246. [
Referencia cruzada] [PubMed]
255. Stalder, T.; Arriba, E. Transferencia de plásmidos en biopelículas: una perspectiva sobre limitaciones y oportunidades.NPJ Biopelículas
Microbiomas2016,2. [Referencia cruzada] [PubMed]
256. Fuchs, FM; Holanda, G.; Möller, R.; Laue, M. Fractura por congelación dirigida deBacillus subtilisbiopelículas para microscopía
electrónica de barrido convencional.J. Microbiol. Métodos2018,152, 165–172. [Referencia cruzada] [PubMed]
257. Serra, DO; Richter, AM; Klauck, G.; Mika, F.; Hengge, R. Microanatomía en resolución celular y orden espacial de
diferenciación fisiológica en una biopelícula bacteriana.mBio2013,4, e00103–00113. [Referencia cruzada]
258. Seoane, J.; Yankelevich, T.; Dechesne, A.; Merkey, B.; Sternberg, C.; Smets, BF Un enfoque individual para explicar la
invasión de plásmidos en poblaciones bacterianas.FEMS Microbiol. Ecol.2011,75, 17–27. [Referencia cruzada]
259. Luz, TR; Christensen, BB; Krogfelt, KA; Molin, S. Transferencia de plásmidos en el intestino animal y otras poblaciones bacterianas
dinámicas: el papel de la estructura comunitaria y el medio ambiente.Microbiología1999,145 parte 9, 2615–2622. [Referencia
cruzada]
260. Serra, DO; Hengge, R. Las respuestas al estrés se vuelven tridimensionales: el orden espacial de la diferenciación fisiológica en
biopelículas de macrocolonias bacterianas.Reinar. Microbiol.2014,dieciséis, 1455–1471. [Referencia cruzada]
261. Stewart, PD; Franklin, MJ Heterogeneidad fisiológica en biopelículas.Nat. Rev. Microbiol.2008,6, 199–210. [Referencia
cruzada]
genes2020,11, 1239 30 de 32

262. Ghigo, JM Los plásmidos conjugativos naturales inducen el desarrollo de biopelículas bacterianas.Naturaleza2001,412, 442–445. [Referencia
cruzada]
263. Lim, JY; La, HJ; Sheng, H.; Forney, LJ; Hovde, CJ Influencia del plásmido pO157 enEscherichia coliO157:H7 Formación de
biopelícula Sakai.aplicación Reinar. Microbiol.2010,76, 963–966. [Referencia cruzada] [PubMed]
264. Liu, Z.; Que, F.; Liao, L.; Zhou, M.; Tu yo.; Zhao, Q.; Li, Y.; Niu, H.; Wu, S.; Huang, R. Estudio sobre la promoción de la
formación de biopelículas bacterianas por un plásmido conjugativo de Salmonella y el mecanismo subyacente.Más uno
2014,9, e109808. [Referencia cruzada] [PubMed]
265. Reisner, A.; Höller, BM; Molín, S.; Zechner, EL Efectos sinérgicos en mezclasEscherichia colibiopelículas: la transferencia de
plásmidos conjugativos impulsa la expansión de biopelículas.J. Bacteriol.2006,188, 3582–3588. [Referencia cruzada] [
PubMed]
266. Shi, H.; Zhou, X.; Zou, W.; Wang, Y.; Ley, C.; Xiang, R.; Zhou, L.; Liu, B.; Zhang, A.; Wang, H. Co-Ocurrencia de formación de
biopelículas y resistencia a quinolonas enSalmonella entericaserotipo typhimurium que lleva un plásmido oqxAB
positivo de tipo IncHI2.Microbio. Pato.2018,123, 68–73. [Referencia cruzada]
267. Beloín, C.; Roux, A.; Ghigo, JMEscherichia colibiopelículas.actual Cima. Microbiol. inmunol.2008,322, 249–289. [Referencia
cruzada]
268. Craig, L.; Bosque, KT; Maier, B. Tipo IV pili: Dinámica, biofísica y consecuencias funcionales.Nat. Rev. Microbiol.
2019,17, 429–440. [Referencia cruzada]
269. Burmølle, M.; Bahl, MI; Jensen, LB; Sorensen, SJ; Hansen, las fimbrias LH tipo 3, codificadas por el plásmido conjugativo
pOLA52, mejoran la formación de biopelículas y las frecuencias de transferencia en cepas de Enterobacteriaceae.
Microbiología2008,154, 187–195. [Referencia cruzada]
270. Dudley, EG; Abe, C.; Ghigo, J.-M.; Latour-Lambert, P.; Hormazabal, JC; Nataro, JP Un plásmido IncI1 contribuye a la
adherencia del enteroagregativo atípicoEscherichia colicepa C1096 a células cultivadas y superficies abióticas.
Infectar. inmune2006,74, 2102–2114. [Referencia cruzada]
271. Bhatty, M.; Cruz, MR; franco, KL; Gómez, JAL; Andrade, F.; Garsin, DA; Dunny, gerente general; Kaplan, HB; Christie, PJenterococo
faecalisLas proteínas de superficie codificadas por pCF10 PrgA, PrgB (sustancia de agregación) y PrgC contribuyen a la
transferencia de plásmidos, la formación de biopelículas y la virulencia.mol. Microbiol.2015,95, 660–677. [Referencia cruzada]

272. Coburn, PS; Baghdayan, AS; Craig, N.; Burroughs, A.; Tendolkar, P.; Miller, K.; Nájar, FZ; Huevas, BA; Shankar, N.
Un nuevo plásmido conjugativo deenterococo faecalisE99 mejora la resistencia a la radiación ultravioleta.
plásmido2010,64, 18–25. [Referencia cruzada]
273. Tendolkar, PM; Baghdayan, AS; Shankar, N. Las proteínas de superficie putativas codificadas dentro de un nuevo locus transferible
confieren un fenotipo de alto biofilm aenterococo faecalis.J. Bacteriol.2006,188, 2063–2072. [Referencia cruzada] [PubMed]

274. Reisner, A.; Haagensen, JAJ; Schembri, MA; Zechner, EL; Molin, S. Desarrollo y maduración de biopelículas de
Escherichia coli K-12.mol. Microbiol.2003,48, 933–946. [Referencia cruzada] [PubMed]
275. Mayo, T.; Okabe, S.Escherichia coliAl albergar un plásmido F conjugativo IncF natural, desarrolla biopelículas maduras
complejas al estimular la síntesis de ácido colánico y Curli.J. Bacteriol.2008,190, 7479–7490. [Referencia cruzada] [
PubMed]
276. Barrios, AFG; Zuo, R.; Ren, D.; Wood, TK Hha, YbaJ y OmpA regulanEscherichia coliLa formación de biopelículas K12 y los
plásmidos de conjugación anulan la motilidad.Biotecnología. Bioing.2006,93, 188–200. [Referencia cruzada]
277. Yang, X.; Ma, Q.; Wood, TK El plásmido conjugativo R1 aumentaEscherichia coliformación de biopelículas a través de una
respuesta de estrés envolvente.aplicación Reinar. Microbiol.2008,74, 2690–2699. [Referencia cruzada]
278. Okshevski, M.; Meyer, RL El papel del ADN extracelular en el establecimiento, mantenimiento y perpetuación de biopelículas
bacterianas.crítico Rev. Microbiol.2015,41, 341–352. [Referencia cruzada]
279. D'Alvise, PW; Sjøholm, Oregón; Yankelevich, T.; Jin, Y.; Würtz, S.; Smets, el transporte del plásmido BF TOL mejora la formación de
biopelículas y aumenta el contenido de ADN extracelular enPseudomonas putidaKT2440.FEMS Microbiol. Letón.2010,312, 84–92.
[Referencia cruzada]
280. Roder, HL; Hansen, LH; Sorensen, SJ; Burmølle, M. El impacto del plásmido conjugativo IncP-1 pKJK5 en la formación de
biopelículas de múltiples especies depende del huésped del plásmido.FEMS Microbiol. Letón.2013,344, 186–192. [Referencia
cruzada]
281. Hoffman, LR; D'Argenio, DA; MacCoss, MJ; Zhang, Z.; Jones, RA; Miller, SI Los antibióticos aminoglucósidos inducen la formación de
biopelículas bacterianas.Naturaleza2005,436, 1171–1175. [Referencia cruzada]
genes2020,11, 1239 31 de 32

282. Linares, JF; Gustafsson, I.; Baquero, F.; Martinez, JL Los antibióticos como agentes de señalización intermicrobianos en lugar de armas.proc.
nacional Academia ciencia EE.UU2006,103, 19484–19489. [Referencia cruzada]
283. Salcedo, DE; Lee, JH; Ja, UH; Kim, SP Los efectos de los antibióticos en la formación de biopelículas y la transferencia de genes de resistencia
a los antibióticos.Desalinizar Tratamiento de agua.2015,54, 3582–3588. [Referencia cruzada]
284. Penesyán, A.; Nagy, SS; Kjelleberg, S.; Gillings, MR; Paulsen, IT Microevolución rápida de células de biopelícula en respuesta a
antibióticos.NPJ Biopelículas Microbiomas2019,5, 34. [Referencia cruzada]
285. Bagge, N.; Schuster, M.; Hentzer, M.; Ciofú, O.; Givskov, M.; Greenberg, EP; Hoiby, N.Pseudomonas aeruginosa las biopelículas
expuestas a imipenem exhiben cambios en la expresión génica global y en la producción de β-lactamasa y alginato.
Antimicrobiano Agentes Quimiotera.2004,48, 1175–1187. [Referencia cruzada] [PubMed]
286. D.iaz-Pascual, F.; Hartmann, R.; Lempp, M.; Vidakovic, L.; Canción, B.; Jeckel, H.; Thormann, KM; Yildiz, FH; Dunkel, J.; Enlace, H.; et
al. Desglose deVibrio choleraeLa arquitectura del biofilm inducida por los antibióticos interrumpe la función de barrera de la
comunidad.Nat. Microbiol.2019,4, 2136–2145. [Referencia cruzada]
287. Al-Masaudi, SB; Día, MJ; Russell, AD Efecto de algunos antibióticos y biocidas sobre la transferencia de plásmidos en estafilococo
aureus.Aplicación J. Bacteriol.1991,71, 239–243. [Referencia cruzada]
288. Barr, V.; Barr, K.; Millar, MR; Lacey, RW Los antibióticos β-lactámicos aumentan la frecuencia de transferencia de plásmidos en
estafilococo aureus.J. Antimicrobiano. Quimioterapia.1986,17, 409–413. [Referencia cruzada] [PubMed]
289. Feld, L.; Schjorring, S.; Martillo, K.; Luz, TR; Danielsen, M.; Krogfelt, K.; Wilcks, A. La presión selectiva afecta la
transferencia y el establecimiento de unLactobacillus plantarumplásmido de resistencia en el medio gastrointestinal.J.
Antimicrobiano. Quimioterapia.2008,61, 845–852. [Referencia cruzada] [PubMed]
290. Liu, G.; Bogaj, K.; Bortolaia, V.; Olsen, JE; Thomsen, LE El aumento de la transferencia conjugativa inducida por antibióticos es
común a diversos plásmidos BLEE naturales enEscherichia coli.Parte delantera. Microbiol.2019,10, 2119. [Referencia cruzada]

291. Lu, Y.; Zeng, J.; Wang, L.; Lan, K.; Shunmei, E.; Wang, L.; Xiao, Q.; Luo, Q.; Huang, X.; Huang, B.; et al. Los antibióticos promueven
Escherichia coli-Pseudomonas aeruginosaconjugación mediante la inhibición de la detección de quórum. Antimicrobiano
Agentes Quimiotera.2017,61. [Referencia cruzada] [PubMed]
292. Ma, H.; Bryers, JD Determinación no invasiva de la transferencia conjugativa de plásmidos que portan genes de resistencia a
antibióticos en bacterias unidas a biopelículas: Efectos de la carga de sustrato y la selección de antibióticos. aplicación Microbiol.
Biotecnología.2013,97, 317–328. [Referencia cruzada] [PubMed]
293. Ohlsen, K.; Ternes, T.; Werner, G.; Wallner, U.; Löffler, D.; Ziebuhr, W.; Witte, W.; Hacker, J. Impacto de los antibióticos en la
transferencia de genes de resistencia conjugacional enestafilococo aureusen aguas residuales.Reinar. Microbiol. 2003,5, 711–
716. [Referencia cruzada]
294. Xia, Z.-J.; Wang, J.; Hu, W.; Liu, H.; Gao, X.-Z.; Wu, Z.-H.; Zhang, P.-Y.; Li, Y.-Z. Mejorar la eficacia de la conjugación de
Sorangium celulosummediante la adición de antibióticos de selección dual.J. Ind. Microbiol. Biotecnología. 2008,35,
1157–1163. [Referencia cruzada] [PubMed]
295. Zhang, P.-Y.; Xu, P.-P.; Xia, Z.-J.; Wang, J.; Xiong, J.; Li, Y.-Z. El tratamiento combinado con los antibióticos
kanamicina y estreptomicina promueve la conjugación deEscherichia coli.FEMS Microbiol. Letón.2013,348, 149–
156. [Referencia cruzada]
296. Møller, TSB; Liu, G.; Boysen, A.; Thomsen, LE; Luthje, FL; Mortensen, S.; Møller-Jensen, J.; Olsen, JE El tratamiento con cefotaxima
afecta la expresión de proteínas asociadas a la conjugación y la frecuencia de transferencia de conjugación de un plásmido IncI1
enEscherichia coli.Parte delantera. Microbiol.2017,8, 2365. [Referencia cruzada]
297. Shun-Mei, E.; Zeng, J.-M.; Yuan, H.; Lu, Y.; Cai, R.-X.; Chen, C. Las concentraciones subinhibitorias de fluoroquinolonas
aumentan la frecuencia de conjugación.Microbio. Pato.2018,114, 57–62. [Referencia cruzada] [PubMed]
298. Cantas, L.; Midtlyng, PJ; Sørum, H. Impacto de los tratamientos con antibióticos en la expresión de los genes tra del plásmido R y
en la actividad inmune innata del huésped durante la portación de pRAS1Aeromonas hydrophilainfección en el pez cebra (danio
rerio).BMC Microbiol.2012,12, 37. [Referencia cruzada] [PubMed]
299. Kim, S.; Yun, Z.; Ja, U.-H.; Lee, S.; Parque, H.; Kwon, EE; Cho, Y.; Choung, S.; Oh, J.; Medriano, CA; et al. Transferencia de
plásmidos de resistencia a antibióticos en cultivos de lodos puros y activados en presencia de concentraciones de
microcontaminantes ambientalmente representativas.ciencia Entorno Total.2014,468–469, 813–820. [Referencia cruzada
] [PubMed]
300. Lopatkin, AJ; Huang, S.; Smith, PR; Srimani, JK; Sysoeva, TA; Bewick, S.; Karig, DK; Usted, L. Los antibióticos como
impulsores selectivos de la dinámica de conjugación.Nat. Microbiol.2016,1, 16044. [Referencia cruzada]
301. Li, B.; Qiu, Y.; Zhang, J.; Huang, X.; Shi, H.; Yin, H. Estudio en tiempo real de la rápida propagación del plásmido de resistencia a los
antibióticos en biopelículas utilizando microfluidos.Reinar. ciencia Tecnología2018,52, 11132–11141. [Referencia cruzada]
genes2020,11, 1239 32 de 32

302. Qiu, Y.; Zhang, J.; Li, B.; Wen, X.; Liang, P.; Huang, X. Un nuevo sistema de microfluidos permite la visualización y el análisis de la transferencia
de genes de resistencia a los antibióticos a bacterias de lodo activado en biopelículas.ciencia Entorno Total.2018, 642, 582–590. [Referencia
cruzada]

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