Ácidos nucleicos

ARNm

La emocionante intuición de los exosomas como mediadores en la comunicación célula-célula

impulsó los esfuerzos de dos grupos independientes que, entre 2007 y 2008, probaron la
transferencia horizontal de moléculas de ARN a través de exosomas. En estos experimentos,
se obtuvieron vesículas metástasis pulmonares, mientras que la integrina exosómica αvβ5 se
relacionó con metástasis hepáticas. Este estudio también demostró que los TDE son
suficientes para redirigir la metástasis de las células tumorales que normalmente carecen de
la capacidad de hacer metástasis a un órgano específico [29].

Varios estudios han demostrado que el tratamiento de las células cancerosas con compuestos
antitumorales induce alteraciones de la composición proteica basal de los TDE que revierte
sus acciones pro-tumorales. Taverna y col. informaron que después del tratamiento con
curcumina, un compuesto derivado de plantas bien conocido por sus efectos anticancerígenos,
las células de leucemia mieloide crónica liberaron exosomas (curcumina / CML-exos) con
diferencias significativas en su composición de proteínas en comparación con los exosomas
liberados por los no tratados células (CML-exos). En particular, se informó que la curcumina /
CML-exos se redujo significativamente en proteínas pro-angiogénicas y se enriqueció en
proteínas con actividad antiangiogénica y esto reflejó la pérdida de la capacidad del CML-
exosoma para promover el fenotipo angiogénico y alterar la organización de la barrera
endotelial [30].

La evidencia acumulada en los últimos años ha demostrado que los exosomas derivados de
las células madre mesenquimatosas (MSC) pueden mediar varias de las funciones
tradicionalmente asociadas con las proteínas secretoras canónicas, como los factores de
crecimiento del secretoma MSC [31-33].

En un reciente estudio proteómico se informó que los exosomas derivados de MSC contienen
un perfil robusto de efectores paracrinos angiogénicos, con un uso potencial para el tratamiento
de enfermedades relacionadas con el tejido isquémico. Entre ellos se identificaron el factor de
crecimiento derivado de plaquetas, el factor de crecimiento epidérmico, el factor de crecimiento
de fibroblastos y, en particular, las proteínas de la vía de señalización del factor nuclear kappaB
(NFkB) [34].


Fen y col. También informó que el choque térmico induce a las células madre Sca-1 + a liberar
exógenos enriquecidos en el factor de transcripción del choque térmico 1 (HSF1) que dirige
los cardiomiocitos isquémicos hacia un fenotipo pro-supervivencia por la represión epigenética
de miR-34a [35].

Como se mencionó anteriormente, otro aspecto interesante, correlacionado con la peculiar

proteína del exosoma de la proteína, es la posibilidad de usar exosomas como fuente de
biomarcadores para varias patologías. Varios datos publicados en los últimos años apoyan
firmemente el impacto clínico efectivo de los exosomas que, como agregados
multimoleculares, también ofrecen la oportunidad única de identificar la combinación de
diferentes biomarcadores.

Recientemente, mediante el uso de análisis de espectrometría de masas, se encontró un

proteoglicano de la superficie celular, glypican-1 (GPC1), enriquecido específicamente en
exógenos derivados de células cancerosas. Se detectaron exosomas circulantes positivos
para GPC1 en el suero de pacientes con cáncer de páncreas con especificidad y sensibilidad
absolutas, discriminando a sujetos sanos y pacientes con una enfermedad pancreática benigna
de pacientes con cáncer de páncreas [36].

En otro artículo interesante, se propuso el papel de la exosomal-survivina como marcador de

diagnóstico y / o pronóstico en pacientes con cáncer de mama temprano. Los autores
encontraron que los niveles de esta proteína (y de su variante de empalme) fueron
significativamente más altos en todas las muestras de suero de exosomas de mujeres
afectadas por cáncer de seno en comparación con los controles.

Además, la expresión variable de los niveles de Survivin-2B se correlacionó con las etapas del
cáncer [37]. Curiosamente, además del plasma / suero, otros biofluidos, como la orina, pueden
representar fuentes valiosas de biomarcadores exosómicos.

El uso potencial de exosomas urinarios se informó en general para el diagnóstico y el manejo

clínico de los cánceres urogenitales, como el de vejiga y el de próstata.


Un estudio comparativo de perfiles de proteínas mediante proteómica basada en

espectrometría de masas destacó la expresión de ITGA3 e ITGB1 (proteínas involucradas en
procesos de migración / invasión) en exosomas liberados por líneas celulares de cáncer de
próstata (LNCaP y PC3T). Posteriormente, estas proteínas se encontraron más abundantes
en los exosomas urinarios de pacientes metastásicos en comparación con la hiperplasia
prostática benigna o el cáncer de próstata (PCa), lo que sugiere el uso potencial de exosomas
urinarios para la identificación de pacientes con PCa metastásica de manera no invasiva [38].

Además de su papel en la biología tumoral, existe una creciente evidencia de que los
exosomas pueden desempeñar un papel en la regulación del metabolismo específico del tejido
y / o de todo el cuerpo a través de la entrega de diferentes moléculas de carga exosomal a los
tejidos adyacentes y remotos. Aunque todavía hay datos limitados sobre la aplicabilidad clínica
de los biomarcadores exosómicos para la predicción de la progresión de los síndromes
metabólicos [39], algunos estudios prometedores han respaldado la hipótesis de que las
proteínas de los exosomas circulantes o urinarios pueden estar potencialmente asociadas a la
obesidad y complicaciones metabólicas en pacientes con enfermedad cardiovascular fest [40]
y complicaciones renales de diabetes [41–43].

La nefropatía diabética (DN) es una complicación importante de la diabetes mellitus y la causa

más frecuente de enfermedad renal en etapa terminal. Los marcadores actuales para el
diagnóstico de DN (es decir, creatinina y excreción de albúmina urinaria) tienen limitaciones
comprobadas y se necesita el descubrimiento de nuevos marcadores candidatos para una
mejor estadificación de la enfermedad, predicción de resultados y monitoreo de la respuesta a
la intervención clínica. Estudios proteómicos recientes de exosomas urinarios han
proporcionado indicaciones prometedoras para el uso potencial de estas nanovesículas como
fuente de biomarcadores de DN [41, 42]. Por ejemplo, una comparación cuantitativa sin
etiqueta de exosomas urinarios de DN versus grupo de control permitió resaltar un panel de
tres proteínas (AMBP, MLL3 y VDAC1) que cambian en DN y que podrían usarse para
desarrollar nuevos enfoques de diagnóstico para monitorear el inicio de la enfermedad y
progresión [42]. Curiosamente, en otro estudio se subrayó que los exosomas urinarios reflejan
mejor los cambios de proteínas ocurridos en el riñón de pacientes diabéticos. Los autores
informaron que, de acuerdo con las alteraciones encontradas en el tejido renal de pacientes
diabéticos, la gelatinasa y la ceruloplasmina se encontraron respectivamente con actividad
disminuida y niveles elevados en los exosomas urinarios de pacientes con DN. En contraste,
los niveles de estas dos proteínas en la orina completa fueron muy variables y no se
correlacionaron con los niveles en el tejido renal diabético [43].


Los estudios actuales sobre exosomas proporcionan indicaciones prometedoras sobre su uso
efectivo en entornos clínicos y merecen un mayor avance para desarrollar herramientas de
diagnóstico y pronóstico no invasivas nuevas y válidas en múltiples enfermedades.

Ácidos nucleicos ARNm

La emocionante intuición de los exosomas como mediadores en la comunicación célula-célula

impulsó los esfuerzos de dos grupos independientes que, entre 2007 y 2008, probaron la
transferencia horizontal de moléculas de ARN a través de exosomas.

En estos experimentos, se obtuvieron vesículas de los mastocitos y las células de

glioblastoma, se demostró que transportan y entregan ARN mensajeros funcionales (ARNm)
[44, 45]. El análisis, realizado por el grupo de Lotvall, identificó aproximadamente 1300
transcripciones de ARNm diferentes en exosomas de mastocitos; Además, se demostró que
los ARNm de poli adenilato aislados eran estables y funcionales en las células receptoras, lo
que confirma los exosomas como mediadores de la transferencia horizontal de información
genética. La evidencia formal de que los ARNm en los exosomas son biológicamente
funcionales provino de estudios posteriores, demostrando que un ARNm, que codifica un gen
indicador de luciferasa, podría transferirse a través de exosomas que conducen, en la célula
receptora, a la actividad de la luciferasa. Curiosamente, la actividad enzimática observada en
las células objetivo dependía de la cantidad de exosomas utilizados para tratarlas [44, 46].

Posteriormente, varios grupos identificaron ARNm en exosomas liberados de diferentes tipos

de células, enfocándose en una mejor comprensión del mecanismo subyacente a los cambios
fenotípicos inducidos por estos ARN. Hoy en día, los exosomas son ampliamente aceptados
como mediadores de la comunicación celular, participan en el mantenimiento de la
homeostasis de los tejidos y contribuyen a modular el microambiente celular; sin embargo, la
mayoría de las publicaciones científicas han descrito su papel en la iniciación y / o promoción
de condiciones patológicas. Se ha descubierto que los ARNm de exosomas, liberados por las
células cancerosas, promueven el crecimiento tumoral y / o la progresión tumoral, además de
transformar drásticamente una célula normal, como lo demostró recientemente Gutkin et al.
Sus experimentos, de hecho, indicaron que el ARNm de hTERT, transportado por exosomas
tumorales en fibroblastos normales, puede procesarse y traducirse, cambiando así las
propiedades de los fibroblastos, como la tasa de proliferación, la senescencia y la resistencia
a la apoptosis [47].


Los análisis más profundos del contenido de exosomas, en términos de ácidos nucleicos,
revelaron que la mayoría de las células normales y cancerosas cargan en exosomas diferentes
especies de ARN con una distribución de tamaño entre 25 y 700 nucleótidos (nt). Se
encontraron ARN de pequeño tamaño (<700 nt) en plasma humano [48], saliva y exosomas
de leche materna [49, 50]; además, se descubrió que las vesículas liberadas por las células
madre mesenquimales humanas [51] y las células epiteliales traqueo bronquiales humanas
[52] contenían especies de ARN más pequeñas (<500 nt de longitud). Teniendo en cuenta las
propiedades pleiotrópicas atribuidas en los últimos años a los ARN pequeños, se han centrado
grandes esfuerzos en la identificación de estos pequeños ARN exosomales para (1) atribuirles
funciones biológicas en la comunicación célula-célula y (2) usarlas como novedosas
biomarcadores.

ARN no codificante

El proyecto del genoma humano cambió drásticamente el paradigma que la mayoría de la

información genética codifica para las proteínas. Evidencias recientes indican que solo el 2%
del ADN nuclear se transcribe en el ARN mensajero, mientras que la mayoría del genoma de
los mamíferos, así como de otros organismos complejos, se transcribe en ARN no codificantes,
la mayoría de los cuales se empalman y / o procesan alternativamente en productos más
pequeños. Hasta la fecha, se ha identificado un amplio repertorio de funciones biológicas para
los ARN no codificantes con un papel predominante en la regulación génica, según lo previsto
por Jacob y Monod hace 45 años [53].

Micro ARN

Los micro ARN (miRNA) son una clase de ARN no codificantes, largos de 17 a 24
nucleótidos, bien conservados durante la evolución; Estos miARN producidos en el núcleo,
una vez procesados completamente en el citoplasma, adquieren una conformación madura
que les permite regular la expresión génica. Los miRNAs maduros median el silenciamiento
génico postranscripcional dirigiéndose a los mRNAs, a través de una unión de
"complementariedad de Watson", induciendo así la escisión de dsRNA y la represión
traduccional [54]. Se han encontrado miRNAs expresados en todos los tejidos y se han
reportado sus niveles aberrantes en numerosas enfermedades.


Primero Valadi et al. identificó la presencia de una gran cantidad de ARN pequeños en los
exosomas, lo que sugiere y demuestra que los exosomas contienen miRNA [45].

Mientras tanto, la primera evidencia de que el miARN exosómico desempeña un papel

funcional en las células objetivo, provino de los experimentos de Montecalvo et al. eso
demostró adecuadamente cómo los miARN, una vez transportados por exosomas, reprimen
sus objetivos específicos de ARNm en células dendríticas [55].

Además, una publicación reciente demostró que los exosomas, junto con miRNAs y pre-
miRNAs, pueden transportar toda la maquinaria molecular necesaria para inducir un
silenciamiento mediado por miRNA para "garantizar" su actividad una vez que llegaron al
destino [56].

Varios estudios destacaron que el contenido de miARN de los exosomas no reflejaba el

repertorio de miARN de las células de origen y que algunos miARN, independientemente de
la cantidad celular, se exportan o retienen selectivamente dentro de las células [57-59]. Estos
datos sugieren la capacidad de las células para cargar específicamente especies de ARN en
la luz de los exosomas.

Hasta la fecha, los mecanismos que controlan la carga específica de miARN en los exosomas
aún se desconocen en gran medida, incluso si se han descrito diferentes vías y moléculas que
regulan la clasificación de miAR-NA en diferentes tipos de células y tejidos. El análisis in silico
de motivos sobre representados y los experimentos de mutagénesis dirigida permitieron la
identificación de un motivo EXO específico (GGAG) que controla la carga de algunos miARN
en los exosomas. De hecho, este motivo conservado puede reconocerse por la
ribonucleoproteína nuclear heterogénea ubicua A2B1 (hnRNPA2B1) que une los miRNA que
controlan su carga en los exosomas [60]. Sin embargo, el motivo EXO caracteriza solo un
subconjunto de miRNAs y se supone que se requieren otras proteínas y / o mecanismos, lo
que sugiere especificidad celular o tisular. Por ejemplo, se ha demostrado recientemente que
la proteína de unión al ARN SYNCRIP es un componente crucial de la maquinaria de
clasificación de miARN exosomal en los hepatocitos [61].


En general, ahora se acepta en gran medida que la secreción de miARN por los exosomas no
es solo un mecanismo por el cual las células eliminan rápidamente los miARN en exceso para
mantener la homeostasis del ARNm [62] sino también una estrategia para la transferencia
horizontal de ARN. Los ARN pequeños, una vez empaquetados y rodeados por una bicapa
lipídica, están físicamente protegidos de la degradación enzimática y luego son libres de viajar
en el espacio extracelular, incluidos los fluidos biológicos [48].

Una vez que se alcanzan las células objetivo que, en teoría, podrían estar en todas partes del
cuerpo, el miRNA del exosoma puede afectar el fenotipo celular, lo que da como resultado una
función celular alterada y, posteriormente, promueve afecciones patológicas. Los datos
obtenidos del registro miRNA [63] indicaron la existencia de más de 2000.

miRNA humano que puede influir en la regulación génica de vías biológicas esenciales como
el desarrollo celular [64], la proliferación [65], la apoptosis [66], la señalización celular y la
progresión de la enfermedad [67, 68]. En el cáncer, se ha encontrado una variedad de procesos
afectados por miARN exosómico [3, 69] p. los exosomas liberados por las células tumorales
promueven la angiogénesis mediante el transporte de miR9 en las células endoteliales [70,
71], la transferencia mediada por exosomas de miR-105 secretada por cáncer destruye
eficientemente las uniones estrechas y la integridad de las barreras naturales, favoreciendo
así la metástasis. También se ha encontrado el oncomiR, miR-21, secretado en exosomas
plasmáticos de pacientes afectados por diferentes tipos de cáncer, y su presencia se ha
correlacionado positivamente con la progresión y agresividad del tumor [30]. Se ha encontrado
que los exosomas de miARN también participan en varias patologías, incluidas las
enfermedades cardiovasculares.

El MiR-21-3p contenido en los exosomas de fibroblastos condujo a la inducción de hipertrofia

de cardiomiocitos [72], mientras que los exosomas endoteliales inducen en los cardiomiocitos
un aumento de los niveles de miR-146a que conducen a una alteración de la actividad
metabólica y la función contráctil [73]. Además, la desregulación de la expresión de miARN
intracelular se ha relacionado con muchas afecciones cardiovasculares clínicamente
relevantes [74, 75].

Varias evidencias demostraron que es posible utilizar microARN como biomarcadores para el
diagnóstico y la monitorización terapéutica de enfermedades como el cáncer, trastornos
neurodegenerativos, enfermedades cardíacas e infecciones; Además, estos miARN están
protegidos dentro de las vesículas y pueden obtenerse fácilmente a partir de fluidos biológicos.
Como se describió, se han encontrado exómosis en casi todos los líquidos corporales,
incluyendo orina, plasma, leche materna, líquido de lavado broncoalveolar (BAL), saliva,


líquido seminal, líquido amniótico, ascitis, líquido sinovial, leche materna y líquido
cefalorraquídeo. (CSF) [48, 76].

Los exosomas detectan una fuente constante de miRNA para la detección de biomarcadores
de enfermedades y pueden convertirse en la huella digital de la patología. Están
quirúrgicamente nuevas tecnologías para purificar exógenos de fluidos biológicos con el fin de
desarrollar estrategias más precisas y menos invasivas para el diagnóstico y el pronóstico.
Hoy, una vez, los exosomas, la cantidad y la calidad de los miRNA pueden estimarse
fácilmente mediante varios métodos, como Microarray, Hibridación, Secuenciación profunda,
qRT-PCR y análisis de microperlas. Shao H et al., Descritos, describen la definición de una
plataforma microfluídica sensible y completa análisis de análisis de ARN de exosoma
inmunomagnético (iMER) que, integrando la selección inmunomagnética, la recolección de
ARN y la PCR en tiempo real en un solo formato de chip de microfluidos el enriquecimiento de
exosomas específicos de cáncer de la sangre y el análisis posterior en chip de sus contenidos
de ARN. Los autores, obteniendo automáticamente el enriquecimiento de exosomas y
aislamiento de ARN, demostrando que los perfiles de ARNm exosómicos también pueden ser
predictores de la respuesta al tratamiento en pacientes con glioblastoma [77].


ARN largos no codificantes

Incluso si son menos abundantes que los ARN pequeños, se han encontrado ARN largos no
codificantes (ARNnc) en exosomas liberados por diferentes tipos de células.

Hasta la fecha, varios lncRNA se han asociado a carcinogénesis y progresión del cáncer. Sin
embargo, varios informes también han demostrado un papel crucial para

lncRNAs en el desarrollo y la enfermedad, incluido el desarrollo cardíaco y los trastornos

cardíacos [78].

Los LncRNA son ARN que no codifican proteínas, más largos que> 200 nucleótidos. Ubicados
en diferentes regiones genómicas, pueden clasificarse como ARN intergénico no codificante
largo (ARNinc), ARNnt antisentido, ARN intrónico y ARN circulares. Son transcritas por la ARN
polimerasa II y existen como transcripciones de un solo exón o multi-exón y, a menudo, se
someten a 5 'capping y splicing [79].

Los LncRNA ahora se reconocen como elementos reguladores importantes y ejercen este
papel mediante diferentes mecanismos moleculares; participan activamente a nivel
epigenético, transcripcional y postranscripcional e interactúan con proteínas, ARN y ADN. Los
LncRNA pueden funcionar como andamios para reunir diferentes subunidades de complejos
de proteínas y mantenerlos cerca [80-82] mientras que el ARN intergénico como lincRNA-p21
puede controlar la traducción de proteínas [83], regular el empalme alternativo como para
MALAT1 [84] o estabilizar ARNm. Muy interesante es el papel de lncRNA en la reprogramación
genética; HOTAIR [85], Braveheart [86] y FENDRR [87] son solo unos pocos ejemplos de
lncRNAs capaces de reclutar modificadores epigenéticos en loci específicos del ADN que
regulan la actividad génica. Además, si un solo miRNA puede silenciar diferentes ARNm de la
misma manera, a través de regiones complementarias, un solo lncRNA puede "esponjar"
diferentes miRNA del citoplasma celular induciendo su degradación, p. CARL, CHFR, HULC,
linc-MD1, H19 [88].

Por lo tanto, teniendo en cuenta los múltiples roles que podría desempeñar un solo lncRNA
dentro de las células, es posible apreciar que cada lncRNA, transportado por exosomas, podría
modificar por completo el fenotipo de las células receptoras.


Se demostró que las células madre del cáncer de hígado liberan y entregan exosomas que
contienen H19 a las células endoteliales, promoviendo así la neo-angiogénesis [89]. Se han
encontrado otros lncRNA en exosomas de HCC [90], células de cáncer de colon [91], células
de glioblastoma [92] y a menudo se han reconocido como promotores de la progresión tumoral
una vez que se administran en las células diana.

El reciente estudio realizado por Ahadi et al., Demostró que se puede encontrar una
abundancia comparable de lncRNAs tanto en exosomas sanos como de cáncer de próstata,
mientras que se han descubierto diferencias significativas en sus secuencias [93]. De hecho,
encontraron un aumento de lncRNAs que transportan regiones de semillas de miRNA en
exosomas de cáncer de próstata, lo que indica que el empaquetado de lncRNA, como ocurre
para los miRNAs, es un proceso fisiológico que se ve significativamente afectado por la
condición celular.

La investigación de los mecanismos moleculares que impulsan el empaquetado de lncRNA

podría arrojar luz sobre su papel dentro o fuera de las células, pero, hasta la fecha, se conoce
poca información sobre este proceso.

Los datos recopilados recientemente indicaron lncRNA exosomales como nuevos marcadores
pronósticos en el tumor como lo sugirieron recientemente Zhang et al. [94] que demostró la
asociación de los lncRNA exosomales HOTAIR, MALAT1 y MEG3 con el cáncer cervical.
Además, los exosomas urinarios de pacientes con cáncer de vejiga se han encontrado
enriquecidos en lncRNA HOTAIR [95].

Sin embargo, incluso si varios grupos publicaron matrices de lncRNA exosomales, se requieren
análisis más estrictos para probar formalmente que las secuencias largas intactas, y no una
parte de ellas, están empaquetadas y transportadas por exosomas.


ADN genómico y mitocondrial

El ADN circulante (ADNc) es una población heterogénea de moléculas cuyo origen depende
de procesos que aún no se comprenden por completo. La estabilidad del ADNc sugiere que
está protegido y encapsulado en estructuras específicas. De hecho, recientemente se ha
demostrado que el ADNc se libera predominantemente en el espacio extracelular por
exocitosis mediada por vesículas extracelulares, incluidos los exosomas.

El descubrimiento de ADNc en la sangre fue descrito por primera vez en 1948 por Mandel y
Matais [96] que purificaron el ácido nucleico del plasma humano. Durante varios años, los
estudios sobre el ADN circulante se centraron en enfermedades autoinmunes donde es posible
encontrar una gran cantidad de ADNc. Algunos años más tarde, en 1977, se encontraron
niveles elevados de ADNc en el plasma de pacientes con cáncer, correlacionando con la
progresión tumoral [97].

La asociación entre el nivel y la composición del ADNc y la morbilidad abre la posibilidad de

considerar el ADNc como una rica fuente de biomarcadores. El ADNc de alteración cualitativa
y cuantitativa refleja las características de la enfermedad, proporcionando así información
sobre el desarrollo de la enfermedad, la progresión y la respuesta al tratamiento. Por estas
razones, el ADNc está emergiendo como una herramienta no invasiva para la estratificación
de pacientes y el monitoreo de enfermedades.

El ADN genómico monocatenario o bicatenario y el ADN mitocondrial se han detectado

recientemente en vesículas extracelulares de diferentes tipos de células [98-102]. Ahora está
bien establecido que los ácidos nucleicos se empaquetan selectivamente en vesículas
extracelulares [3, 102, 103], por lo tanto, la presencia de ADN indica una función especializada
en la comunicación de célula a célula. De hecho, datos recientes sugieren que el ADN asociado
a EV (EV-DNA) ejerce su función biológica en condiciones fisiológicas y patológicas, lo que
influye en la inmunomodulación, el cáncer y las enfermedades cardiovasculares.

Las evidencias acumuladas demostraron que el ADNc está contenido en microvesículas

liberadas por las células epiteliales acinares de próstata (prostasomas) [101, 104, 105].
Ronquist y sus colegas proporcionaron la primera descripción en 2009; purificaron los
prostasomas del fluido seminal y de las células PC-3 y encontraron ADN cromosómico
humano, fragmentos con una longitud de más de 12 kb y menos, protegidos del ataque
enzimático porque encapsulados en vesículas [104]. El mismo grupo evaluó el papel específico
del ADN prostasomal pocos años después. En 2011, los autores proporcionaron evidencias de
la transferencia de ADN a los espermatozoides de los prostasomas teñidos con ADN, lo que


demuestra que la transferencia de fragmentos de ADN cromosómico es concebible de los

prososomas humanos a los espermatozoides humanos [101].

En 2012, Waldenstrom y sus colegas informaron que también los cardiomiocitos transfieren
información genética (ADN y ARN) a los fibroblastos a través de la liberación de microvesículas
/ exosomas [106].

Recientemente, Fischer et al. observó ADN de alto peso molecular en asociación con EV
purificado de células del estroma mesenquimatoso de médula ósea humana (BM-hMSC).
También demostraron que el ADN EV se transfirió a las células receptoras y se propagó al
genoma del huésped, proporcionando las primeras evidencias de la transferencia horizontal
de ADN en las células eucariotas [107].


Los fragmentos circulantes de ADN contienen alteraciones genéticas que reflejan las de los
tejidos tumorales, incluidas mutaciones puntuales, reordenamientos y amplificaciones [108].
Varios estudios destacan la presencia de ADNc en vesículas extracelulares derivadas de
tumores [98, 109, 110], lo que abre la posibilidad de considerar el ADN EV como marcador de
la progresión de la enfermedad.
En 2011, Balaj y su colega analizaron los contenidos de ácido nucleico del glioblastoma y el
meduloblastoma (que tenían amplificación genómica y altos niveles de expresión del oncogén
c-Myc), vesículas extracelulares, proporcionando una de las primeras pruebas de la presencia
de ADN genómico amplificado (ADNg). ADNc y retrotransposón en vesículas tumorales. En
particular, los autores encontraron niveles elevados de secuencias de c-Myc en microvesículas
de líneas celulares de meduloblastoma en comparación con los encontrados en fibroblastos y
células tumorales con números de copias de c-Myc diploides. Estos datos, junto con la
presencia de secuencias específicas de retrotransposones, apoyan firmemente el concepto de
que el material genético contenido en las vesículas extracelulares representa biomarcadores
útiles [98].
En 2013 Cai et al. proporcionó evidencias del significado fisiopatológico de la transferencia de
ADN genómico EV. Los autores primero mostraron cantidades sustanciales de ADN de doble
cadena, principalmente alrededor de 17 kb, en EV derivados del plasma humano y
sobrenadantes de células vasculares del músculo liso, además demostraron que el ADN EV
se transporta a las células objetivo, alterando sus funciones celulares. Además, una incubación
clara de la transmisión de material oncogénico a través de vesículas extracelulares fue
proporcionada por la incubación de exosomas, derivados de células de leucemia mieloide
crónica que portan el gen híbrido BCR / ABL, con neutrófilos; Los autores demostraron que
esta incubación condujo a la transferencia del oncogén a las células normales [111]. Un año
después, los mismos autores demostraron que la inyección de EV de leucemia mieloide
crónica en ratones NOD / SCID causó la transcripción de novo de ARNm de BCR / ABL y la
síntesis de proteínas, proporcionando evidencias in vivo de la importancia funcional del
material genético transferido por EV. [112]

El grupo de Lyden, al utilizar dos enfoques específicos diferentes para detectar el ADN EV en
modelos de cáncer amplio, descubrió que la mayoría del ADN del exosoma es bicatenario,
además, descubrieron que la cantidad de ADN EV es mayor en los exosomas tumorales en
comparación con los normales La secuenciación del genoma completo permite una
caracterización detallada que revela que el ADN del exosoma representa el genoma completo,
incluidas las alteraciones genéticas específicas del tumor [110].


El grupo de Rak descubrió que las células epiteliales intestinales de rata transformadas con H-
ras liberan más vesículas que las contrapartes normales; las vesículas pueden internalizar las
vesículas y contener ADN genómico bicatenario, que representa el genoma completo e incluye
secuencias H-ras [109]. Estudios adicionales sobre la presencia de ADN genómico bicatenario
en células cancerosas provienen de Kahlert et al. que encontró ADN genómico, que abarca
todos los cromosomas, en exosomas de células de cáncer de páncreas y de suero de
pacientes con adenocarcinoma ductal pancreático. Además, observaron la presencia de ADN
con KRAS mutado y p53, confirmando la aplicabilidad del EV-ADN como herramienta de
diagnóstico [113].

Más recientemente, Lázaro-Ibáñez et al. demostró que el ADN genómico de doble cadena está
presente en diferentes subpoblaciones de EV (cuerpos apoptóticos, microvesículas y
exosomas) de líneas celulares de cáncer de próstata maligno y de plasma de pacientes con
PCa y donantes sanos.

Los autores encontraron parte de los genes TP53 y PTEN, involucrados en el inicio del cáncer,
la progresión y la resistencia al tratamiento en las subpoblaciones de EV. El análisis de
mutaciones genómicas, mediante el uso de ADN asociado a EV, podría representar una fuente
de biomarcadores de diagnóstico [100].

La posibilidad de utilizar EV-DNA como fuente de biomarcadores para el diagnóstico y

pronóstico del cáncer está respaldada por un estudio muy reciente de Jin y sus colegas que
proporcionaron evidencias de la estabilidad del suero EV y EV DNA en diferentes condiciones.
En particular, purificaron los EV del suero almacenado a 4 ° C, temperatura ambiente y
después de repetidos ciclos de congelación y descongelación y aislaron el EV-ADN,
observando que el contenido y la función del ADN en los EV era estable [114].

Ahora se sabe que las mitocondrias contienen ADN extranuclear (ADNmt) heredado
materialmente y con una alta tasa de mutación. Las mutaciones en el ADNmt a menudo son
causas de muchas enfermedades mitocondriales. Además, se encuentra que las mutaciones
de ADNmt están asociadas con enfermedades neurodegenerativas, diabetes, cáncer y
envejecimiento. La presencia de ADNmt en vesículas extracelulares es un informe más
reciente; Es concebible especular que se puede administrar ADNmt alterado entre las células,
lo que favorece la difusión de varias patologías.


Guescini y sus colegas proporcionaron la primera evidencia de que la línea celular de

glioblastoma humano y las células de astrocitos primarios empaquetan ADNmt en exosomas.
En particular, los autores mostraron que el ADN mitocondrial estaba confinado dentro de los
exosomas al tratarlos con DNasa I antes de la purificación del ADN; Además, cuantificaron el
ADNmt midiendo, mediante PCR en tiempo real, la expresión del gen codificado mitocondrial
específico, la subunidad 1 de NADH deshidrogenasa (MT-ND1). Los autores concluyeron que,
aunque una porción marcada de ADNmt liberado en el medio acondicionado es libre, el ADNmt
resistente a DNasa, envuelto en exosomas, es aproximadamente el 10% del total [99].

En 2010, el mismo grupo informó que también las microvesículas derivadas de mioblastos
cultivados contenían ADNmt, midiendo una región del asa D mitocondrial. Los autores
finalmente especularon que el ADNmt, transportado entre las células, podría tener relevancia
fisiológica para restaurar el ADNm apropiado o, por el contrario, favorecer la propagación de
fenotipos patológicos, como las enfermedades del músculo esquelético [115].

Zhang y sus colaboradores investigaron si la estimulación de los mastocitos conduce a la

secreción de componentes mitocondriales que podrían provocar efectos inflamatorios.
Descubrieron que, en respuesta al desencadenante alérgico y neuropéptido, los mastocitos
humanos secretan ADNmt y que aproximadamente el 25% de este ADN está contenido en
exosomas. Estos hallazgos resaltan un papel potencial del ADNmt asociado a EV también en
los trastornos inflamatorios [116]


Observaciones finales

Los resultados acumulados en los últimos años han demostrado que los exosomas contienen
ARN, microARN, ARN largo no codificante, ADN, lípidos, metabolitos y proteínas, que
funcionan como sistema de suministro intercelular, incluso a larga distancia. Teniendo en
cuenta estas propiedades y el desarrollo de tecnologías cada vez más innovadoras para su
aislamiento, caracterización y manipulación, los exosomas se consideran hoy en día
biomarcadores en varias condiciones, así como vehículos para la entrega de cargas
terapéuticas.

Conflicto de intereses Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.