Rev. Afer!. Un.in. Navarra IX: 18.

5, 1965

UNIVERSIDAD DE NAVARRA -- FACULTAD DE IllEDICINA

Df:P,\l\T:\;1,fF.NTO DE i\J. lNTEllNA

La proteinuria en la litiasis renal *

Estudio iumunoelcctroforético con relación a su origen

B. Fidalgo

RESUMEN

El trabajo comprende un estudio 1nediante inn1unoelectroforesis-agar (I.E.A.)

de la proteinuria en un grupo de litiásicos, comparado con un grupo de
sujetos normales y otro con ctiv~rsas enfermedades.
En un 70 '}6 de los enfermos con litiasis se encontró una alfa~ mucoproteínri
de génesis urinaria, siendo negativa en el resto. También apareció dicha
proteína en dos pacientes con osteoporosis, hipercalciuria e infección uri-
naria, y no se observó en ninguno del grupo de nonna\es.
El estudio comparativo del cuadro proteinúrico de los tres grupos evidenció
un aumento de las alfa., globullnas, con dis1ninución de la albúmina, en
el grupo de los litiásicos.
Se observó una alta incidencia de infección urinaria en ios enfermos con
litiasis renal, así como un paralelismo notable entre la infección urinaria
y existencia de alfa., niucoproteína.
Finaln1ente se discute el papel de la infección en la génesis de la alra~ 1nu-
coproteína y la intervención de ésta en el origen del cálculo.

1NTRODUCCIÓN 1nente particular interés el estudio de

Entre los factores considerados con10
responsables de la formación de los
cálculos renales, ha suscitado reciente-
Resumen de la Tesis presentada para op-
tar al Grado de Doctor en la Facultad de Me-
dicina de la Universidad de Navarra ante el
tribunal constituido por los Profesores Dres.
Don José Escobar García, Don Juan Jimé-
nez Vargas, Don Carlos Olivares Baqué, Don
Eduardo Ortiz de Landázuri y Don Fernando
Reinoso Suárez.
Recibió la calificación de Sobresaliente cu1n
Laude.
las mucoproteínas urinarias, a partir del
hallazgo de éstas en la matriz de los cál-
culos renales 6 •
Las observaciones preliminares de Boy-
ce ~ pusieron de manifiesto la existencia
en la orina de los litiásicos de proteínas
:::on características peculiares que inclu-
Fue realizada con la ayuda recibida del
Consejo Superior de Investigaciones Científi-
cas. a través de la Comisaría de Protección Es-
coÍar. Un trabajo preli1ninar ha sido previa-
mente publicado 20.
 18ú H.
yen la capacidad de ligarse al Ca y dar
con él complejos insolubles que por pos-
terior crecimiento podrían originar la for-
mación del cálculo urinario. Estas ob-
servaciones han sido confirmadas poste-
riormente por otros autores 2. 9 , rn.
La orina contiene aproximadamente de
10 a 30 mgs de mucoides por litro, al-
gunos de los cuales, como la sustancia
de Donaggio 10 y la 111ucoproteína de Tcun
y !Jorsfall 1 7 han sido ya caracterizados.
Sin embargo, la dificultad que entraña el
estudio de las mismas por procedimien-
tos físico-químicos ha impedido un me-
condiciones patológicas.
En el momento actual, ·el desarro1lo ex-
perimentado por técnicas inmunológicas,
y su aplicación al estudio de los líquidos
biológicos ·f. 13 , permiten un n1ejor cono-
cimiento de estas sustancias mucoprotei-
cas dadas sus características antigéni-
cas. En este sentido, recientemente Broy-
ce y King 6· 7 han obtenido evidencia
inmunológica, mediante técnicas de doble
difusión de Ouchterlony de un compo-
nente mucoproteico específico en la ma-
triz de los cálculos renales, sugiriendo
que tal sustancia puede ser responsable
de la formación de dichos cálculos. Es-
tos trabajos han tenido confinnación en
las manos de Hermans y colab. 1+, An-
derson y colab. ' y Keutel y colab. " quie-
nes han podido encontrar proteínas de
génesis urinaria en dicha matriz.
Partiendo de tales observaciones nosotros
hemos realizado ahora un estudio inmu-
noelectroforético, con distintos inmuno-
sueros, de la orina de un grupo de pa-
cientes afectos de litiasis renal en com-
paración con un grupo de sujetos nor-
males y otro con distintas enfermedades.
El propósito del trabajo fue obtener nue-
vos datos acerca de la existencia en la ori-
na de estos enfermos de proteínas no re-
lacionadas con las proteínas séricas, de su
existencia o no en otros casos, y de los
caracteres inmunoelectroforéticos de las
mismas.
FIDALGO Vol. IX
MATERIAL Y MÉTODOS
Fueron estudiadas 82 orinas, procedentes de
45 sujetos, en 17 de los cuales se comprobó
la existencia de una litiasis en el tracto uri-
nario. La confirmación del diagnóstico se ob-
tuvo por métodos quirürgicos o c!í.nicos (uro-
grafía).
En 9 pacientes pudo analizarse por métodos
químicos !a composición del cálculo, demos-
trándose que 2 de ellos estaban formados fun-
damentalmente a expensas <le fosfato cálcico,
5 de oxalato cálcico, y de cantidado:s simila-
res de oxalato y fosfato cálcico en Jos 2 res-
tantes. En todos los d::más pacientes el cálculo
fue radiopaco.
El grupo de litiásicos comprende 7 hembras
y 10 varones, oscilando la edad de los pa-
cientes entre los 29 y los 78 ai'ios. 15 tenían
litiasis uretó:ral, que en 5 casos era bilateral.
En los otros 2 pacientes fue vesi:::al.
Otros 18 enfermos no litiásicos padecían di-
versas enfermedades, la 1nayoría de ellas con
una participación renal en mayor o menor
grado: 2 casos de artritis reumatoide, 2 de
osteoporosis con brotes de infección urlnaría,
y 1 caso de: Pielonefritis, Mie\01na, Tubercu-
losis renal, Carcinoma renal (Hipernefroma),
Amiloidosis, Leucemia mieloide crónica, Leu-
cemia mieloide crónica con sintomatología de
cólicos renales, Gota, Osteoporosis secundaria
a una enfermedad general e inmovilización,
Infarto renal, Coágulo ureteral, Cirrosis hepá-
tica de tipo portal, Colecistitis litiásica, Fiebre
reumática.
Deliberadamente incluiinos en este último gru-
po 3 litiásicos con cálculos por ácido úrico,
cuya patogenia consideramos distinta.
También se estudiaron las orinas de 10 sujetos
normales, que fueron utilizadas co1no orinas
control.
Preparación de antígenos
Recogida de nlUí'slras. De cada sujeto se
recogía la orina de 12 o 24 horas en cantidad
mínima de 500 ml ya que las experiencias
preliminares nos demostraron que cantidades
inferiores eran insuficientes para obtener el
mínimum de proteínas necesario para los estu-
dios realizados.
Las muestras fueron recogidas en recipientes
estériles e inmediatamente conservadas en ne-
vera a una temperatura que osciló entre O y
+ 4° C, durante otras 12 o 24 horas ..En al-
guna ocasión la permanencia en nevera se pro-
longaba hasta 3 días, a pesar de lo cual con-
servaron buena capacidad antigénica.
Extracción de sales. Las orinas fueron filtra-
das a través de un filtro estéril de membrana
Scpliembrc ] 1JG5 L-1 l'llOTEJNUHI_.\ EN J.A LITJASJS ltF.N ..\L
ultracella Seitz e inmcdiat<1.ment~ colocadas en
sacos de celofán tipo Visking de unos 40 c1n
de longitud por 1,5 de diám:::tro y dializadas
ír::nte a agua destila:Ja durante tr~s días a lem-
pcratura de + 4" C. El agua (:fa renovada to-
talmente cada 24 horas.
Co11centració11. Se realizaba en dos íascs:
una mediante evaporación rotatoria con vacío
en un rotavapor tipo Eral, mant::niendo la tem-
peratura del bafio constante a 37° C para evi-
tar la desnaturalización de las proteínas. La
orina se concentraba aproximadamente 200 ve-
ces para lograr una cuantía de proteínas ele-
vada.
La detenninación de proteínas se realizaba con
la técnica del Biurct sobre una pequei'ia can-
tidad -de la orina concentrada (0,02 ml). En la
2.ª fase de la concentración se m:::zclaba el
concentrado ·de la 1."' íase con una cantidad
doble de acetona, en frío, para lograr una pre-
cipitación definitiva.
Transcurrido este tiempo, se hacía una centri-
fugación refrigerada (a-5° C) a 6.000 revolu-
ciones minuto, durante 10 tninutos. Se decan-
taba el supcnr1dante y se dejaba evaporar el
resto posible de ac~tona durante 30 minuto:.;.
Sobre el precipitado se añadían 5 mg de EDTA
(Tritriplcx III Merck) y se redisolvía con buf-
fer de Veronal pH 8,6 de acuerdo con la si~
YxZ
guíen te fórmula: X=-------- siendo X= mi
30
de buffer a aih1dir: Y= 1nl de orina concen-
trada de la 1."' fase, y Z = gr %o de proteí-
nas halladas. En la orina conc:::ntracla en la
l.ª fase esto era llevado a cabo para cons:-
guir una concentración proteica alrededor ck
30 gr %0. Pudo comprobarse que los resul-
tados mejores se obtenían con conc:::ntracion,:;;s
de protdnas entre 40 y 70 gr. %10; estas con-
centraciones son fáciles de obtener en enfer-
medades renales en las que lógicamente la pro-
tcinuria es 1nayor, pero tienen el inconveniente
ele obtenerse una muestra no homogénea con
resultados más inconstantes.
El precipitado se redisolvía hasta mostrar un
aspecto ho1nogéneo y se realizaba una nueva
determinación proteica con el Biuret, para ase-
gurarnos de la conc~ntración final.
Antisueros.
Se utilizaron 5 tipos de antisueros.
IP. Antisuero antisuero humano nonna! ad-
quirido del Instituto Pasteur con el n.°
491.
IP. Ab-o. El antisuero anterior absorbido
con la orina concentrada. Para obtenerlo se
pusieron en contacto cantidades iguales del
antisuero anterior y la orina (concentrada)
187
durante una hora a 37° y 12 horas a 4° C.
Se comprobaba la eficacia de la absorción
por la ausencia de bandas en la parte co-
rrespondiente a las proteínas de la orina.
C-30. Antisu;:;ro de conejo anti proteínas
urinarias. Se inmunizaron los conejos con
una mezcla de orinas, procedente de distin-
tos enfermos con litiasis renal y otras ne-
fropatías diversas, conCentrada a 50 gr %o
de proteínas. La orina se concentró siguien-
do el mismo csque1na utilizado para los ori-
nas de los litíásicos descrito anteriormente.
La inmunización se realizaba de acuerdo a
la técnica de Boyd u mediante la admi-
nistración de 3 dosis intravenosas de 1/3-1
1nl de orina concentrada y 12 dosis intra-
1nusculares de 0,1- 1/3 ml de orina con-
centrada mezclada a partes iguales con co-
adyudante de Freund. La muestra de sue-
ro utilizada era obtenida por sangría car-
díaca a los 2 días de la última inoculación
y a los 50 días de comenzada la inmuniza-
ción.
C30, Ab-o. El antisuero anterior se absor-
bió con orina en la misma forma que para
el IP Ab-o Y. en todas las absorciones se
comprobaba la efectividad de la absorción.
C30, Ab-S. El antisuero C-30 fue absorbido
con suero humano normal en la misma for-
ma que el anterior.
In f 1111 noelect rof ore¡ is
Ml;tudu. La emigracíón electroíorélica ele ca-
da orina se realizaba sobre medio semisólido
a base de agar (colocadas en placas de vidrio
:l ! 75 x 25 1nm) en el que se practicaba una
ab::rtunt alargada central de 35 x 2 c1n y dos
aguj::ros laterales y simétricos equidista_ntes de
la abertura central, a 3 1nm de la misma, y
con u11 diá1netro de 1,5 mm. En uno de los
agujeros se colocaba el su::ro normal Y en el
o'tro la orina problema. Con ello pudimos es-
tudiar comparativamente suero y orina en ca-
da placa.
En los extremos opuestos de cada placa se
adaptaron 2 tiras de 3 mm de anchura y 70
de longitud de papel cromatográfico Wathman
n." 3 cuyos cxtr;:-;mos libres se introdujeron en
cada cubeta llena de buffer y tampón veronal
a pH = 8,6 y fu:::rza iónica 0,05 cuya compo-
sición total era la siguiente:
Dicti! barbittírico sódico 9 g
HCL N 6,5 ing
Acido de sódico 0,5 g
Agua destilada hasta 1 litro
En estas condiciones se aceptaba como ópti-
mo un tiempo de emigración de 3 1/2 h, con
188 H. FIDALGO Vol. IX

una diferencia de potencial de 200 voltios inan-

tenien:lo constantes todas las características del
material utilizado.
Para el estudio de cada orina 16 portas se uti-
8
lizaban. En cada porta se ponía orina y suern
para su estudio comparatívo. El antisuero va-
riaba en cada uno de los portas de la forma
siguiente: el primer porta no llevaba antisuero
r se utilizaba como control de emigración;
8
8
J
las otras J 5 placas se distribuyeron en la pro-
porción de 3 para cada antisuero. Las placas

-~ 1:.-·
fueron marcadas en una esquina con el núme-
ro correspondiente cuidando de que éste coin-
cidiera con el polo positivo, con objeto de
facilitar la lectura e interpretación posterior. 1 · -

El medio se1nisóli<lo se preparaba de la siguien-

te forma: Solución al 4 ?·6 de agar noble es-
pecial de la casa Difco al bailo María con
L___ ___-=c=8=ERO=====;
agua destilada y desionizada a 100° C. La so-
lución se depositaba posteriormente en gran-
des recipientes de forma que se obtuvieron
1 8
capas de 5 mm. Una vez solidificado el agar 1 C __ 1_P_A0_s_o_R_8_º=ºc-c_o_N_oR_'N_A_ _ J Í

L
se partía en pequeiíos cubos que se lavaban
en agua destilada a 2° C conteniendo ácido de
sodio al 1/10.000. Los bloques se fundían pos-
teriormente al baño María a 100° C y la so-
SUERO____ __J
··---------
lución obtenida se mezclaba con partes igua-
les de buffer tampón (pH 8,6; fuerza iónica
0,05) calentado a 37° C. Finahnente se distri-
buían en tubos de 12 mi bien cerrados y se
conservaban a + 2" C. El aparato de inmu- 1 "lflSUERO CONEJO
8 ANTI PROT. ORINA
______ JQ:NL______ _
noclectroforcsis era de tipo Elphor.

111anipulaciones de la placa control

Fijación. El primer porl<1 se introducía en una
1

L __ e
cubeta conteniendo una solución de acético al
2 '\, en agua destilada dLfrante unos 10-15 mi-
nutos.
Tinción. Se realizaba durante un 1ninulo en
una mezcla de alcohol metílico y ácido acé-
tico en la proporción de 19/1 y Negro an1ido
hasta saturación. A continuación se procedía
al lavado del porta en bafios sucesivos de me-
tanol acético en la proporción de 19/1 durante
unos 15 minutos y posteriormente se dejaba
secar a temperatura ambiente.
Difusión. Terminado el tiempo de emigración
(previo examen del porta control) se procedía
al llenado de la abertura central con el anti·
suero correspondiente de forn1a que las placas
2.\ 3.:i. y 4."· contenían IP; la 5.:i., 6.ª y 7.ª, Fig. t.-Esquema de los patrones de inmuno-
IP Ab-o; la 8.'", 9.:i. y 10.ª·, C-30; la 11.", 12.ª
y 13.", C-30 Ab-0; y la 14.", 15.' y 16." C-30, clectroforesis estudiados en cada orina.
Ab-S (fig. 1).
Los portas fueron guardados en recipientes ce-
rrados en ambiente húmedo y a temperatura mera en suero fisiológico en el que permane-
a1nbiente durante 48 horas. cieron durante 24 horas. Después se secaban
sobre papel cromatográfico Wathman n. 0 3,
Lavado. Se realizaba en dos fases: la pri- en la estufa a 37° C, durante otras 24 horas.
SeptiemfJre _1965 L,.\ I'ROTE!NLIHIA EN ],,\ LITl:ISJS HENAL
En la segunda fase se pasaban por agua des-
tilada durante 10 minutos.
Tinción, lal'ado y .1·ecado. Co1no para el por-
ta control.
Tinr)ones especiales
Tinción para centlopfa.l'lnina. Aprovechamos
la especificidad de tinción de la ceruloplasmi-
na para hacer una interpretación más correcta.
El vértice de la curva de alfa-2-ceruloplasmina
viene a coincidir con el eje central alrededor
del cual se sitúan todas las alfas 2 globulinas.
La identificación por métodos colorin1étricos
de la misma nos sirvió para diferenciar con
más objetividad la región de las alfa 1 por un
lado, y de las beta 1 por el opuesto.
El principio de caracterización está basado en
la propiedad de la parafenilendiamina de dar
como producto de oxidación una base quinó-
nica insoluble en agua que se colorea fácil-
inente en marrón tenue.
Utilizamos la técnica de Uriel 19 tal como !a
describe en el libro de Grabar y Burtin 12.
Tinció11 de 1nucopofisacóridvs. Con el sobran-
te de las orinas en las que se obtuvo un re-
sultado positivo se repetía un nuevo estudio
inmunoelectrofórético, con el inmunosuero C-30,
Ab-S, hasta llegar a la fase de tinción ordi-
naria.
En lugar de ésta, se hacía una tinción con el
ácido peryódico y el reactivo de Nadi siguien-
do !a técnica de Uriel 19.
Lectura e interpretación
La dificultad que en principio supone la in-
terpretación de las líneas de precipitados en
placas de tan pequeño tamaño fue superada
mediante la proyección de los portas sobre
folios de papel grande, en los que fueron di-
bujadas todas las bandas. Con ello se amplió
la figura de cada banda más de 20 veces, es-
tudiándose comparativa1nente la orina y el sue-
ro en cada placa, en virtud de sus propiedades
simétricas.
[Jn método directo y un método indirecto fue-
ron utilizados para conocer el número y clase
de componentes antigénicos detectados por ca-
da antisuero empleado.
El método directo utilizado fue el de la siin-
ple precipitación en la inmunoelectroforesis.
Para ello las I.E.A. de cada antisuero eran
estudiadas, e identificadas sus bandas. Las ban-
das que aparecían por este método eran con-
sideradas como producidas por componentes
antigénicos en mayor concentración en la ori-
na problema.
El método indirecto utilizado era el estudio
189
de la composición antigénica de la orina por
su capacidad en absorber los correspondientes
antígenos de cada antisuero utilizado. Para ello
era efectuada la inmunoelectroforesis de suero
humano desarrollado por cada antisuero ab-
sorbido y sin absorber con la orina problema.
Las bandas que desaparecían por la absorción
(se estudiaba por triplicado) eran consideradas
como componentes proteicos de la orina pro-
blema. L0~· componentes proteicos detectados
por est~ método indirecto y no detectados por
precipitación eran considerados como proteí-
nas, que, _por su escasa concentración, no eran
capaces de ocasionar líneas ·de precipitación.
Para asegurarnos de que la absorción era co-
rrecta utilizábamos como control la parte co-
rrespondiente a la orina de los portas con an-
tisuero absorbido con orina. La no existencia
de bandas d::: precipitación en esta zona era
considerado como índice de una absorción co-
rrecta.
Finalmente, para el estudio de las proteínas
urinarias no relacionadas con las proteínas sé-
ricas utilizábamos un antisuero absorbido con
suero C-30, Ab-S. En las placas con este an-
tisuero bastaba determinar las bandas apare-
cidas en la parte correspondiente a la orina.
Si en estas placas no existían bandas en la
parte correspondiente al suero, se consideraban
las obtenidas en la orina como expresión de
una naturaleza distinta a las del suero. Por el
contrario, si también aparecían bandas de pre-
cipitado en la parte correspondiente al suero,
la absorción era considerada como incorrecta.
De esta forma el recuento total de proteínas
urinarias era el resultado de la suma de las
obtenidas por precipitación, más las deducidas
por absorción. De todas ellas eran consideradas
solamente de génesis urinaria las obtenidas en
la parte de la orina con el antisuero absor-
bido con suero humano.
RESULTADOS
A. Distribución y peculiaridades de las
proteinas encontradas
Los resultados encontrados, en este sen-
tido, fueron distintos en los 3 grupos es-
tudiados.
l.l·i· Grupo (orina de sujetos nor111ales).
En este grupo, por tratarse de individuos
normales con escasa proporción de pro-
teínas en la orina, fue difícil obtener una
concentración proteica elevada. Por lo tan-
to fue necesario concentrar cantidades
 ll. FIDALGO Vol. !X

maycres de orina. Se obtuvo una concen-
tración media de 33 g por litro.
Los trazados de precipitación en orina
mostraron menor número de bandas que
los otros grupos. El estudio por absor-
ción se n1ostró a~imisrno po;:o elocuente,
y en los casos p::-si Livos 1nostró preferen-
cia por la región de las inmunoglobuli-
nas. Los resultados expresados en ~jJ en
relación de la fr=cuencia de aparición de
bandas en las regiones inmunoelectrofo-
rélicas son expuestos en las tablas I y 11.
El estudio por precipitación con I. P. sólo
íue positivo en cuatro orinas de las 10
estudiadas niostrando en tres de ellas
albúmina y una alfa" (ceru!oolasmina o
haptoglobina). En nienor ·proporción
apareció la siderofilina y beta, A glo-
bulina: sólo en 1 caso se evidenció gam-
ma globulina y e:1 otro alfa1 A globu-
lina.
El estudio por absorción con orina de
este inn1unosuero fue positivo en 8 casos.
En general, confirmó las proteínas halla-
das por precipitación completándolas en
algún caso con el hallazgo de proteínas
como la beta, y gamma globulina.
Con el antisuero de conejo preparado
frente a orinas de sujetos litiásicos, apa-
recieron bandas de precipitación en casi
todos los casos, aunque en escaso núme-
ro. Pudo evidenciarse la presencia de al-
búmina en tres casos que habían sido ne-
gativos con el antisuero anterior, hapto-
globina, siderofilina, una beta~ globulina
y gamma globulina, fueron otros nuevos
hallazgos.
La absorción de este antisuero con orina
sólo fue positiva para la beta, A globu-
lina nuevo en un caso y se confirmó
su existencia en otros 3.
La absorción del antisuero C-30, absor-
bido con suero fue negativa en todos los
casos.
En conjunto el 1;uadro inmunoelectrofo~

TABLA 1.-Percento de frecuencia de aparición de bandas en las regiones clectroforélicas, en

relación con ta técnica y el antisuero etnpleado

--
PROTEINAS
--
Alb _alfa_, alfa~
-~- bc_t~ gamma
o
"'"'
Normal 40 JO JO 20 20 10
:o Precipitación Litiasis 29 23 82 64 17 o
J3 J5 50 44 44 6
"''"
o.
z-
E. Diversas

:o Norn1al 10 JO 50 JO 40 20

-
:E
z Absorción Litiasis
E. Diversas

Nonnal
11
38

40
58
22

o
64
6t

60
47
50

20
64
50

20
J5
28

20
Precipitación Litiasis 23 6 76 29 o 17
o E. Diversas 2J o 44 22 16 1t
"':ou.¡ Nonnal o o 10 o 50 o
"'º
O".' Absorcíón con Litiasis 11 17 29 23 35 29
zu orina E. Diversas 16 o 39 28 22 22
:o
:E Normal o o o o o o
~ Absorción con Litiasis o o 70 o o o
suero E. Diversas o o 11 o o o
Normal 711 20 70 60 so 611
Totales Litiasis 35 76 82 70 76 58
E. Diversas 67 22 94 89 78 55
Sevtienibre 1965 LA J'lt:rrr:.i\Ull!A EN LA LITJ..\SIS HENAL
rético <le la orina normal, se mostró bas-
tante uniforme en todos los sentidos. El
% de bandas en la región de alfa, glo-
bulinas, fue mucho menor en relación
con todas las demás proteínas. No se en-
contró en la orina ninguna proteína dife-
rente de las del suero.
No fue posible tina mayor concentra-
ción <le 40 g %o de proteínas en este gru-
po de orinas, debido a la pobreza de pro-
teínas Por lo tanto no pudo de:;cartar-
se que la falta de riqueza en el número
de bandas fuera debida a la escasa con-
centración proteica.
En cc.:ijunto pudo evidenciarse: albúmina,
alfa, glicoproteína, alfa, haptoglobulina,
alfa, ceruloplasmina, siderofilina, beta, A
y gamma globulina.
TABLA II.-Tanto por ciento de fr~cu2ncia para cada proteína específi~a con rdación a
su grupo
Alb. Alfa 1
A B e H
NORMAL 90 20 o o 50
Litiasis 35 76 2 o 82
E. Div. 67 22 o () 70
2.º Grupo (orina de sujetos litiásicos).
füludiado en conjunto el grupo de los
litiisicos,· tanto los trazados por precipi-
lación como por absorción, se mostraron
más expresivos.
El l. P. se mostró más eficaz en cuanto
a número de proteínas; sin embargo, el
C-30 fue capaz de deteclar proteínas que
nb pudíeron revelarse por el antisuero
anterior (tablas I y II).
El 1. P. se mostró positivo en casi todos
los casos y sobre todo para el grupo
de las alfa, y beta, globulinas. Sólo pudo
demostrarse la existencia de albúmina en
5 casos: en otros 4 apareció una alfa1 A.
y en uno de ellos una alfa1 B.
Las proleínas del grupo alfa, fueron las
más abundantes, no sólo en el % de ca-
so3, sino también en el número de ban-
191
das. En 2 casos aparecieron 3 alfa~ y en
otros dos, aparecieron tres. En estos
casos con diversidad de bandas, predo-
minaron la haptoglobulina y la cerulo-
plasmina; en menor proporción la alfa~
macroglobulina. Para la beta, sólo hubo
duplicidad de bandas en 3 casal, identi-
ficándose con10 siderofilina y beta1 A;
en los casos con una sola banda el rre-
dominio fue para la siderofilina.
Las beta~ globulinas aparecieron en 3 ca-
sos, en uno de los cuale3 se identificaron
2 de ellas beta, A y beta, M. Siempre la
beta~ A fue predomínante.
Cuando el T. P. antisuero fue absorbido
con orina tampoco pudo demostrarse la
existencia de albúmina, más que en dos
case..>. En cambio, gamma globu!ina estuvo
Alfa~ Beta 1 Bda 2 gam:r.a
e M L u s A B A M
20 o o o 60 o o 80 o 60
37 18 o 70 70 25 o 74 2 58
22 13 o 11 89 \) () 69 9 55
presente en 6 casos. alfa1 A en los mismos
casos anteriores, y apareció alfa1 B en
otro caso.
En el grupo de las alfa, los resuliados
fueron similares a los obtenidos por pre-
cipitación. También las bela1 mostraron
un comportamiento similar, predominan-
do en este grupo, la beta1 A.
De las beta~ sólo fue positiva una ban-
da, pero lo hizo en 9 casos previa-
mente negativos, y se confirmó en otros
<los. Predominó la betaj A, aunque tan1-
bién fue visible la beta, M.
Con el antisuero C-30 la albúmina apa-
reció en tres de los casos anteriores y
en otro más. Fueron de aparición esca-
sa la alfa, A, la beta, A y la gamma glo-
bulina, en ca!'Ilbio continuó el predomi·
nio de las alfa., y beta, globulinas. Con
192 H. FIDALGO Vol. IX

las primeras, prácticamente se confirma- El estudio procentual de la frecuencia de

ron los hallazgos obtenidos para el I. P.
en todos los casos ; de las segundas sólo
la siderofilina fue positiva, con valor de
confirmación en 5 casos.
La absorción de este antisuero con orina,
tuvo gran valor complementario al mos-
trar ahora un predominio por la región
de las inmunoglobulinas. No fue positi-
vo en ningún caso la albúmina, apareció
alfa1 A en tres casos negativos con todos
1os antisueros anteriores; se confirmó la
existencia de alfa~ en otros 5 casos, en
4 la de beta, y en 5 la de beta, y gamma
globulina.
Diez de las 17 orinas mostraron con el
C-30, Ab-S un trazado de precipitación
correspondiente a una alfa2 globulina
distinta de las del suero (fig. 2). En
otras dos orinas, también apareció; pero
por existir al mismo tiempo en el suero,
no tenemos la seguridad de que fueran es-
pecíficamente urinarias.
aparición de bandas en las regiones elec-
troforéticas de este grupo se expone en
las tablas I y II.
En este grupo la disminución fue mar-
cada para el grupo de la albúmina, mien-
tras que las globulinas eran casi todas
relativan1ente uniformes.
La acusada diferencia en la riqueza y
complejidad de la inmunoelectroforesis de
este grupo en relación con el grupo de
orinas normales puede explicarse, apar-
te del distinto grado de concentración
proteica, por la posible presencia de sue-
ro en estas orinas, que con frecuencia
presentaban microhematurias.
En conjunto las proteínas detectadas se
identificaron corno: albúmina. alfa1 gli-
coproteína, alfa, B, alfa, haptoglobulina,
alfa, ceruloplasmina, alfa, macroglobuli-
na, alfa 2 uromucoide, siderofilina, beta1 A,
beta, A, beta, M y gamma globulina.

18

1 Anti U.P(Abs. with N.S.)

Fig. 2.-Patrón immunoelectroforético de las proteínas urinarias en los pacientes con li-
tiasis renal
a fue realizada con antisuero humano normal (Anti NS); b, con antisuero frente a pro-
teínas urinarias (Anti UP), y e con antiproteínas urinarias absorbidas con suero humano
normal (Anti UP Abs with NS). UL, proteínas urinarias del sujeto litiásicn
St:ptiembre 1965 LA PROTEINUHIA EN LA LITIASIS RENAL
3.~r Grupo (orinas de enfer111os con di-
versas enfer111edades). Los resultados ob-
tenidos en este grupo, de acuerdo con la
pluralidad causal, fue bastante diferente
para cada orina.
Los trazados de precipitación fueron
abundantes en unos casos y nulos en
otros a pesar de mantener una concen-
tración proteica media de 56 g/l. Tam-
bién en este grupo se mostró más eficaz
el I. P. que el C-30, aunque los resulta-
dos fueron en alguno de los casos com-
plementarios (tablas I y Il).
Con el antisuero I. P. precipitó la albú-
mina en siete casos, en todos los cuales
aparecieron también distintas globulinas.
Del resto de las globulinas sólo apareció
una banda en cada región electroforéti-
ca ; de e1las sólo un caso con alfa1 A,
10 con una alfa, (ceruloplasmina en la
mayoría de los casos) y en similar pro-
porción apareció la siderofilina y una
B2 A. Sólo en tres casos apareció gam-
ma globulina.
La absorción con orina confirmó en la
mayoría de los casos las proteínas ante-
riores, añadiendo 3 casos más en los que
existía albúmina y otros tres con alfa1
globulina. La haptoglobulina precipitó en
tres casos y la siderofilina en otros 3. Una
beta2 macroglobulina apareció en dos ca-
sos y la beta2 A en otros dos más. Tam-
bién apareció gamma globulina en 3 ca-
sos en los que no existía por precipitación.
La precipitación con el C-30 amplió la
positividad de la albúmina en 2 casos,
y apareció una alfa, distinta de las del
suero en otros dos. La siderofilina y la
beta, A, fueron difícilmente observables;
la primera apareció en otras dos ocasio-
nes; igualmente sucedió con Ja gamma
globulina.
El antisuero anterior absorbido con ori-
na sólo mostró valores nuevos para un
caso de alfa, lipoproteína y 2 de beta, A.
Los tres casos en que fue positiva la
gamma globulina habían sido negativos
con los antisueros anteriores.
]9.1
F'inalmente, la absorción del antisuero
C-30, con suero humano normal, fue ne-
gativa para casi todos los casos, a ex-
cepción de dos que mostraron una ban-
da de precipitación en orina, con mo-
vilidad electroforética de alfa, y con ca-
racteres lintoriales positivos para las rnu-
coproteínas.
El resto de las orinas no mostró ninguna
proteína diferente de las del suero.
El estudio global de las proteínas obte-
nidas en la orina, fue más similar al gru-
po de los sujetos normales, con mayor
predominio por la zona de las alfa, y
beta globulinas (tabla 1).
En conjunto, las proteínas identificadas
fueron: albútnina, alfa 1 globulinas, a1fa3
haptoglobulina, alfa, ceruloplasmina, al-
fa, macroglobulina, alfa, lipoproteína, al-
fa2 urornucoide, siderofilina, beta~ A, be-
ta, M y gamma globulina.
B. Proteínas específiccunente urh1arias
Como ha quedado expuesto anteriormen-
te, para el estudio de esta fracción espe-
cial utilizamos un método de precipitación
directa. El antisuero utilizado fue un sue~
ro de conejo antiproteínas urinarias, ab-
sorbido con suero humano normal.
De esta forma pudo observarse una línea
de precipitado en l 4 de las 45 orinas
examinadas.
La absorción de este antisuero antiprow
teínas urinarias con suero humano no
hacía desaparecer esta línea de precipita-
ción, pero sí el resto de las bandas. Por
otro lado no aparecía con el antisuero
anti/suero humano.
El grupo de orinas normales no mostró
en ningún caso la existencia de esta ban-
da de precipitación mientras que fue po-
sitivo en el 70 % de las orinas proceden-
tes de litiásicos y en el 1 J % de las ori-
nas de enfermos no litiásicos (tabla III).
El precipitado obtenido para cada orina
mostró características inmunoelectroforé-
ticas idénticas en todos los casos obte-
 B. Flll>\l.t.O Vol. IX

TABLA lll.-Fri:'cuencia del componente alfa., mucoproteína en los tres tipos

de orina estudiados.

Condición del Pres::ncia de alfa~ Tanto por

sujeto _N_ú_m_e_n_1 _ _ _ _ _
mucoproteína ciento

Litiásicos 17 12 70
Enfermedades
divers:ts 18 2 11
Nor;nales JO o o

nidos y nunca se observó más de una noelectroforéticas bastante similares, aun-

línea de precipitado. Su movilidad ele:-
trof orética fue considerada como la de
una alfa~.
Po:;;teriormente se procedió a la tinción
de esta banda, con colorantes específi:..'o'1
para rnucopolisacáridos, confirmándose el
carácter mucoproteico de la misma.
Las orinas que fueron positivas para esta
proteína mostraron características inmu-
que no perteneci-eran al mismo grupo;
fue notorio el aumento de proteínas de
las regiones alfa~ y beta 1 a la vez que se
obs·.::rvó una disminución muy notable en
la presencia de albúmina.
En las 2 orinas de enfermos no litiásicos,
en que fue positivo el hallazgo de una
proteína de naturaleza distinta a las del
suero, se encontró una intensa ost~opo-

TABLA IV. -- Características de los pacientes con litiasis en relación con la a, tnucoprot:'!ína
y la infección (U = uretral, V = vesical, u = unilateral, b = bilaleral)

Localirnc'.<'in Urea Prcsenci~l de protcín:t Infección urinaria

N.' Edad Sexo u V "' s:m~~re

más de {60 ';!,J urinaria {m<ís de 100.000/cc.) Cornpo•ddón del cálculo

b
" +
78 V + Estafilococo

6.l V Colibacilo
45 V + Oxalato

65 V + Protcu~ Oxalato+ f'osfat'.J

69 H Estafilococo y
Colibacilo
6 52 V + Oxalato
64 V Proleu> Oxalato
66 V + + Oxalato+ Fosfato
t,2 V + +
JO -~9 H Colibacilo y
F~trcptococo

11 2'! V + Oxalato

12 75 H + Fosfato
l.l 68 H +
14 .12 V + Colibacilo Oxalato
15 65 H +
H +
16
" Colibacilo y
Estreptococo
Fodatu

1J 67 H + + Colibacilo y
Proteu-;
Septiembre 1965 L.\ PROTF.INURIA F.N LA LITJ,\SIS RENAL 195

rosis generalizada acompañada de hiper- orinas con proteína urinaria pos1t1va y la

calciuria, y de infección urinaria. An1bos
pacientes fueron del sexo femenino.
En el grupo de los enfermos litiásicos,
hubo un claro predominio del sexo mas-
culino entre los casos positivos (75 %)
y del sexo femenino entre los negativos
(80 %). No se encontró una clara rela-
ción con la edad del paciente, aunque
existió algún predon1inio por edades
en general más avanzadas.
Fue noto-io asimismo un mayor tiempo
de evclución de la enfermedad en el gru-
po de los positivos, por lo que la Úi'po-
grafía bilateral y los signos de insufi-
ciencia renal predo1ninaron más en este
grupo.
En general se obtuvieron más positivi-
dades fuera del período de agudización
del dolor. En algunos enfermos en los
que un primer análisis, coincidiendo con
el dolor cólico, fue negativo, llegó a ser
positivo cuando el enfermo estaba libre
de mole~tias.
No se observó relación notable entre las
co1nposición del cálculo en aquellos ca-
sos en que ésta pudo ser determinada (ta-
bla l V).
C. Presench1 de infección urinaria
En lo que se refiere a la incidencia de
infección urinaria, solamente se estudió
esta posibilidad en la mayor parte de los
sujetos litiásicos y en los otros 2 enfer-
mos cuya orina evidenció caracteres in-
munoelectroforéticos similares a los an-
teriores, por cuyo motivo los resultados
no fueron aceptados corno valores abso-
lutos.
De las 15 orinas estudiadas en este sen-
tido, 11 mostraron un número de gérme-
nes patógenos superior a 100.000 por mi,
por cuyo motivo se consideran Gomo ex-
presiva>; de infección urinaria. Todas las
demás fueron consideradas corno nega~
tivas.
Lo:; gérmene3 identificados en ellas fue-
ron estafilococos, colibacilos, proteus y
estreptococos; unas veces apareció un

TABLA V.-Peculiaridadcs de los enfermos que mostraron una bacte-

riuria superior a 100.000 gérmenes/e.e.

Condición del Microorganismos Presencia de Alfa 2

N.º sujeto hallados muco proteína
--------------

Litiasis Estafilococo +
2 Colibacilo +
3 Proteos +
4 Estafilococo y +
Colibacilo
5 Proteus -1-
G Colibacilo y +
Estreptococo
7 Colibacilo +
8 Colibacilo y
Estreptococo
9 Colibacilo y
Proteus
10 Osteoporosis Estafilococo +
con calciuria
11 Estreptococo y +
Colibacilo

2
196 B. FIDALGO
TABLA VI.-N. 0 y frecuencia de aparición de Alfa,, uromucoide en las orinas, cla-
sificadas de acuerdo a la existencia o no de Infección en ese momento.
N." de casos
Bacteuría 11
No bacteuria 4 25
No estudiados JO
germen aislado y otras la asociación de
2 de ellos.
De estas 11 orinas, 9 pertenecían a en-
fermos litiásicos, en 7 de los cuales apa-
reció en la orina una alfa~ mucoproteíng_ ;
las otras 2 orinas pertenecían a las 2
pacientes con osteporosis e infección uri-
naria y en las que también pudo demos-
trarse la mucoproteína referida (tabla V).
No se comprobó ninguna relación entre
el tipo de germen identificado, la exis-
tencia o no de litiasis, y la presencia o
no de mucoproteína.
De esta forma la mucoproteína apareció
en 9 de las 11 orinas con infección; mien-
tras que sólo apareció en una orina de
las 4 no infectadas y en 4 de las 30 no
estudiadas (tabla VI).
DISCUSIÓN
La técnica immunológica descrita en el
presente trabajo, permite obtener resul-
tados más amplios no sólo en el núme-
ro total de proteínas detectables en la
orina, sino también en la naturaleza de
las mismas, lo cual presta, a nuestro mo-
do de ver, un indudable interés al estu-
dio del funcionamiento de la nefrona en
lo que se refiere al filtrado y reabsorción
de las proteínas en las diversas vicisitu-
des en que éstas pueden afectarse.
Los resultados obtenidos con nuestra téc-
nica ponen de relieve la existencia de 3
hechos fundamentales.
l. En la distribución de las proteínas
obtenidas, el descenso notable de la
Vol. IX
N.º d::: caos con alfa~
uromucoide º''º
·---·
9 82
4 13
albúmina en el grupo de los Iitiási-
cos.
2. En el 70 % de las orinas de los li-
tiásicos se encontró una mucoproteí-
na con movilidad electroforética de
una alfa, globulina de génesis extra-
sérica, ya que no desaparecía frente
al antisuero absorbido con el propio
suero humano. No pudo demostrarse
en ninguna orina de sujetos norma-
les y sólo apareció en dos enfermos
del tercer grupo en los que coincidía
una osteoporosis con hipercalciuria e
infección urinaria, mientras que en
otro paciente con hipercalciuria, os-
teoporosis, pero sin infección urina-
ria, no pudo evidenciarse.
3. Precisamente en relación con la in-
fección urinaria apareció una consi-
derable incidencia de la misma en
aqueilas orinas en que estaba pre-
sente tal mucoproteína.
Nuestra interpretación de estos hechos se
basa no sólo en este limitado estudio,
sino que lo ponemos en relación con ob-
servaciones y resultados obtenidos por
otros autores.
El aparente descenso en la eliminación de
albúmina en la orina del grupo de litiá-
sicos es un hecho no descrito en la lite-
ratura por nosotros revisada. Teórica-
mente puede concebirse en condiciones
patológicas un transtorno de permeabi-
lidad selectiva para esta proteína; sin
embargo, el hecho de que precisamente
la albúmina sea la de diámetro más pe-
queño nos induce a valorar la otra posi-
 Sf'ptfrmhrP 1965 L.\ f'llOTEINUH! ..\ EN L.·\ LITl.\SJS RENAi
bi1idad de que más que una disminución
real de la albúmina, traduzca un aumen-
to de la eliminación de las globulinas,
fundamentalmente a expensas del gru-
po alfa, que por su mayor facilidad de
precipitación harían aparecer a la albú-
mina disminuida. -Ninguna de las dos po-
sibilidades pudo ser excluida con certeza.
El hallazgo fundamental lo constituyó la
presencia de alfa~ rnucoproteína con ca-
racterísticas específicas para los enfermos
con litia:-is. Cierta1nente que fue positiva
en otros dos pacientes sin evidencia de
litiasis renal, pero 1as condiciones presen-
tes en estos dos pacientes, osteoporosis
hipercalciuria y bacteriuria, sitúan a es-
tos sujetos en condiciones óptimas pre-
disponentes para una futura litiasis. Por
este hecho, consideramos qu·e más que
negar, afirman la especificidad de tal mu-
coproteína. Nuestra conclusión de que tal
proteína es de génesis extrasérica reside
en el hecho de que esta proteína en nin-
gún caso pudo ser absorbida con el an-
tisu;::ro humano. Sobre el lugar exacto de
producción no tenernos ningún dato con-
creto, pero trabajos de otros autores
apuntan la posibilidad de su formación
o transformación en la propia nefrona.
Así Baker y Sinson 3 , en nefrolitiasis cx-
perin1ental, han puesto de manifiesto la
producción de mucopolisacáridos en el
túbulo distal del riñón ; el estudio his-
toquímico de estos mucopolisacáridos en
la orina ha mostrado un carácter clara-
1nente mesodénnico 11 , lo cual excluye
cualquier tipo de producción de los mis-
mos a nivel epitelial (vías urinarias).
SuMMARY
Urinary Mucoprotcin in Patients with Renal Lithiasis
This is a report o[ the rcsults oblaincd with
the urine o[ patients with renal lithiasis, s!u{li;;:d
by an immunoelectrophoretic mcthod.
ln 12 of thc 17 paticnts with renal lithiasis
197
Por otra parte, en los ya citados traba-
jos de Boyce y cols 1i, fue descartado me-
diante análisis im1nunológico cualquier
ctro origen a nivel de pelvis renal, uré-
te, vejiga o uretra. Todos estos hechos
parecen indicar, en efecto, que esta pro-
teína se origina en el propio parénquima
rena1. Investigaciones posteriores pueden
confirmar o descartar esta hipótesis.
La incidencia de la infección urinaria en
la litiasis renal constituye una observa-
ción clásica y es uno de los hechos aquí
destacados. En los casos estudiados por
Boyce 7 fue demostrativamente negado el
papel de las bacterias en la producción
ele esta mucoproteína de una manera di-
recta; pero es posible que la infección
pueda ser un ,estadio previo a la litiasis
Y en este senLido merece citarse la gran
incidencia de lesiones pielonefríticas, en
pacientes que posteriormente presentaron
una litiasis renal 1 ~. De esta for1na se pue-
de imaginar que la infección urinaria,
aparte de actuar por otros caminos, irri-
te o lesione el túbulu renal favoreciendo
la producción de una n1ucoproteína, que
al ligarse al Ca, origina un núcleo de pre-
cipitación que por posterior crecimiento
llega a formar un cálculo.
Es seguro que otras condiciones heredi-
tarias, metabólicas, endocrinas y otros
factores físico-químicos, intervienen en la
fcrmación del cálculo, pero en cualquier
caso, paree~ ::vidente la necesidad de una
mayor atención sobre el papel que la pro-
pia nefrona pueda tener en la patogenia
d.e la litiasis.
a band appearcd in !he a., position which is
clifferent f'rom that pres::-:nt" in serum.
The role or the urinarv infection ancl the
origin of thís mucoprot::-:in are considercd in
the discussion.
198 L\ l'HOTE!NU!UA EN L\ LITL-\SIS HE!\'A.L
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