PROTOCOLO DE LABORATORIO CURSO MICROBIOLOGÍA

Código 151006

Presentado por: Edna Lorena Vargas Barreiro

Cc 1077877103

Tutor: Juan Pablo Barrero Nuñez

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
Neiva, noviembre 2022

1
Tabla de contenido

Introducción................................................................................................................
Actividad práctica 1. Medios de cultivo, características macroscópicas de
cultivos bacterianos y microbiota humana.................................................................
Actividad práctica 2. Caracterización microscópica de cultivos bacterianos:
Coloración de Gram.................................................................................................
Actividad práctica 3. Prueba de susceptibilidad a antimicrobianos: difusión en
disco.........................................................................................................................
Actividad práctica 4. Caracterización macroscópica y microscópica de hongos.
.................................................................................................................................
Actividad práctica 5. Parásitos de importancia en salud.........................................
Bibliografía...............................................................................................................

2
 Lista de tablas

Tabla 1 Clasificación de los microorganismos según algunas condiciones del

medio ambiente....................................................................................................7
Tabla 2 Métodos para el cultivo de microorganismos en medios sólidos..........10
Tabla 3 Características macroscópicas de colonias bacterianas en cultivos
sólidos.................................................................................................................12

3
 Lista de figuras

Figura 1 Clasificación de los medios de cultivo.........................................................

Figura 2 Árbol filogenético de la vida.......................................................................
Figura 3 Características microscópicas observables en la coloración de Gram.
.................................................................................................................................
Figura 4 Diferencias morfológicas y de tamaño entre hongos filamentosos,
levaduriformes y bacterias.......................................................................................

4
 Introducción

La Microbiología es la ciencia que estudia aquellos organismos vivos cuyo

tamaño se encuentra por debajo del poder resolutivo del ojo humano, desde
luego, ciencia precedida por la invención del microscopio, con sus principios
estructurales tal como ahora se le conocen, alrededor del año 1620. Un siglo
después, la experimentación en animales, el descubrimiento de los cultivos
bacterianos, la relación entre patógeno y patología, el perfeccionamiento de
técnicas microbiológicas, entre otros, abrió los canales para constituir el
cuerpo de conocimientos de esta ciencia.
Fue así como resultado de la observación y análisis, aquel otro reino diminuto y
antes inexistente por descubrir, trajo consigo nuevas ciencias como la
inmunología y la virología, afianzando la relación estrecha con la Medicina.
Hecho que no quedó allí puesto que estudios posteriores sobre microbiota del
suelo han resaltado la gran diversidad fisiológica de los microorganismos y su
ubicuidad, generando la necesidad de que otras ciencias biológicas entraran a
apoyar el estudio de microorganismos, tales como la genética y la bioquímica,
dando así paso a la biología celular y molecular.
Por las atribuciones de esta ciencia, el amplio campo de acción y el propósito
de la comprensión cabal por parte del estudiante, especialmente desde el
punto de vista práctico, de lo que se debiese hacer y cómo se debiese hacer, el
curso de Microbiología de la Escuela de Ciencias de la salud de la Universidad
Nacional Abierta y a Distancia UNAD, está diseñado para que los estudiantes,
a través de actividades prácticas, lleven a cabo procesos para comprender,
aplicar y desarrollar nuevo conocimiento en el estudio de la Microbiología.
El objetivo propuesto aquí se divide básicamente en cuatro partes, una que
involucra aplicar conceptos en la resolución de problemas por parte del
estudiante, mediante el análisis de la información; otra que desarrolla un
pensamiento crítico y de análisis a través de la discusión; una más, explicando

los conceptos de microbiología con el lenguaje técnico apropiado en los

ejercicios académicos y, otra que contiene los elementos generales para
desarrollar habilidades en el estudiante, las cuales les permitan la identificación
de posible causalidad, factores de riesgo y medidas preventivas en los eventos
infecciosos en salud.
Por último, es bueno resaltar que esta guía no tiene la pretensión de ser un
profundo estudio teórico, ni una guía exhaustiva para el desarrollo de prácticas,
sino que principalmente se centra en interpretar lo mejor posible a términos
prácticos algunos aspectos propios de la Microbiología, de modo que se facilite
su manejo por parte de los interesados.

5
Actividad práctica 1. Medios de cultivo, características macroscópicas de
cultivos bacterianos y microbiota humana

Introducción
Los medios de cultivo son una preparación compuesta de biomoléculas
conformadas por macronutrientes tales como carbono, oxígeno, hidrogeno,
nitrógeno, fósforo y azufre, y de micronutrientes como el magnesio, cobalto,
entre otros; cuyo fin es lograr el crecimiento, transporte o mantenimiento de
microorganismos. Su clasificación se puede observar en la figura 1.
Sin embargo, los medios de cultivo no son los únicos necesarios para generar
multiplicación y desarrollo de microorganismos, se hacen necesarias
condiciones físicas tales como el pH, temperatura, luz, presión, entre otras, su
conocimiento permite el diseño de métodos para control o destrucción de
poblaciones de estos organismos. Según sean estas condiciones, se
desarrollarán algunos microorganismos y otros no, por ello se han establecido
clasificaciones para cada condición (Tabla 1).

Tabla 1 Clasificación de los microorganismos según algunas condiciones

del medio ambiente

Clasificación de los
Condición Definición Significado
microorganismos

Crecen entre
Indica la Acidófilas
pH 0 y 5.0 pH
concentración de
H+ en una solución Crecen entre
pH Neutrófilas
e interfiere en el pH 5.0 y 8.0
funcionamiento de
Crecen entre
biomoléculas Alcalófilas
pH 8.5 a 11.5
Pueden crecer
a 0°C, pero su
Magnitud que mide
Psicrófilas temperatura
el calor de un
Temperatura optima es
objeto e influye en
15°C
la velocidad de las
reacciones Se desarrollan
Mesófilas
químicas en los 25-40°C
microorganismos
Se desarrollan
Termófilas
45-60°C
Concentración El oxígeno es un Aerobias Se desarrollan
de Oxígeno gas incoloro e en 20% de O2

6
 Clasificación de los
Condición Definición Significado
microorganismos

Se desarrollan
inodoro que Anaerobias en presencia o
interviene en facultativas ausencia de
procesos de O2
crecimiento
bacteriano Se desarrollan
Anaerobias
en <2% de O2
Se expresa como Viven en
actividad de agua medios
Disponibilidad (aw) que es una hipertónicos y
Osmófilos
de agua medida del agua se subdividen
disponible para el en halófilos y
microorganismo sacarófilos.
Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2017)

7
Figura 1 Clasificación de los medios de cultivo.

Fuente: Rojas (2011). Conceptos y práctica de Microbiología general. Manual.

Conjunto a la creación de medios de cultivo y al descubrimiento de las

condiciones de crecimiento de los microorganismos, se han creado métodos de
siembra para cultivar y separar las diversas poblaciones de microorganismos
provenientes de las muestras a estudiar. La acción de sembrar (o inocular)
implica poner una porción de la muestra (ej. Agua, alimentos, sangre, etc) en
un medio de cultivo e incubarlo en condiciones adecuadas. Según sea el medio
de cultivo, se pueden emplear instrumentos

tales como: asas bacteriológicas, hisopos, pipeta o asa de Drigalsky, teniendo

en cuenta que todos ellos deben estar estériles a la hora de hacer uso de ellos.

8
En un medio líquido, el método de cultivo es relativamente sencillo, consiste en
agregar parte de la muestra al recipiente en dónde se encuentra el medio; esa
muestra puede agregarse con una pipeta o un asa estéril. Mientras que, para
los medios de cultivo sólidos, se han generado diversos métodos (Tabla 2).
Tabla 2 Métodos para el cultivo de microorganismos en medios sólidos

Método Proceso
1. Esterilizar asa bacteriológica recta y dejar
enfriar.
2. Tomar la muestra con el asa estéril.
Siembra en picadura 3. Introducir el asa –con el inoculo- de forma
o punción vertical y en el centro del tubo con medio de
cultivo.
4. Saque el asa rápidamente y evite tocar las
paredes del tubo.
5. Esterilizar asa.
1. Esterilizar asa bacteriológica recta y dejar
enfriar.
2. Tomar la muestra con el asa estéril.
Siembra en estría 3. Introducir el asa –con el inoculo- de forma
vertical, en el borde inferior del tubo con medio
de cultivo inclinado.
4. Sacar, lentamente el asa, e inmediatamente
realizar estrías (líneas en zigzag) en la
superficie del medio, hasta su borde superior.
5. Esterilizar asa.
1. Esterilizar asa bacteriológica curva y dejar
enfriar.
2. Tomar la muestra con el asa estéril.
3. Suspender la muestra en un extremo de la caja
con medio de cultivo, realizando estrías –no
superpuestas- sobre una tercera parte de la
Siembra por caja.
agotamiento 4. Esterilizar asa bacteriológica curva y dejar
enfriar.
5. Realizar estrías en dirección perpendicular a
las estrías antes hechas, comenzando en la
última estría.
6. Repetir el paso 4 y 5.
7. Esterilizar asa.
Siembra en 1. Esterilizar asa bacteriológica curva y dejar
cuadricula enfriar.
2. Poner volumen de muestra en caja con medio
de cultivo, usando pipeta automática.
3. Distribuir la muestra con el asa, en forma de
línea recta por el centro del medio de cultivo.
4. Hacer estrías de lado a lado del medio de
cultivo y en sentido contrario a la línea recta

9
 Método Proceso
antes hecha.
5. Girar el medio de cultivo 90°grados y hacer
estrías de lado a lado del medio y en sentido
contrario a las estrías hechas antes.
6. Esterilizar asa.
1. Destapar el hisopo estéril.
2. Introducir el hisopo en la muestra.
3. Sacar el hisopo y escurrirlo en las paredes del
recipiente dónde está la muestra.
4. Hacer estrías estrechas de lado a lado de la
Siembra con hisopo caja con medio de cultivo, desde el borde
superior hasta el borde inferior.
5. Girar el medio de cultivo 90°grados y hacer
estrías estrechas de lado a lado del medio y en
sentido contrario a las estrías hechas antes.
6. Repetir el paso 5, tres veces más.
7. Arrojar el hisopo en Guardián de desechos.
Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2017)
Hecho esto, posterior a la siembra de microorganismos, se espera obtener su
crecimiento, el cual tendrá unas características macroscópicas y
microscópicas.

Las características macroscópicas de un microorganismo son todos aquellos

detalles observables a simple vista en los medios de cultivo sembrados; en
medios de cultivo líquidos se puede observar enturbiamiento u opacidad (ligera,
media o nula), precipitados o sedimentos (compacto, polvoriento, granuloso,
viscoso) o formación de película. En los medios sólidos se pueden observar
diversas características de la morfología de las colonias, entre ellas la
hemólisis, la producción de pigmentos y otras que se exponen en la tabla 3.

Tabla 3 Características macroscópicas de colonias bacterianas en

cultivos sólidos.

Características macroscópicas
Grande >1mm
Tamaño Mediano 1mm
Pequeño <1mm
Forma Puntiforme

Circular

Filamentosa

10
 Irregular

Rizoide

Lanceolada

Continuo

Ondulado

Lobulado
Borde

Espinoso, dentado o
lacerado

Filamentoso

Plana o aplastada

Convexa

Mamelonada
Elevación
Pulvinada

Umbilicada

Lisa
Superficie
Rugosa
Blanda
Consistencia Dura
Mucoide
Brillante
Aspecto
Opaco
Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2017). Modificado del libro de
Rojas (2011).
Ahora bien, el árbol filogenético de la vida consta de tres dominios: Bacteria,
Archaea y Eukarya, siendo un dominio el rango taxonómico más alto de los

11
organismos. Muchos miembros de los dos primeros dominios mencionados
viven una vida simbiótica dentro de nosotros.

Figura 2 Árbol filogenético de la vida.

Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2017). Modificado de Woese,

1996.

El cuerpo humano aloja comunidades microbianas complejas cuya población

supera a nuestras propias células en al menos un factor de 10. Con el fin de
caracterizar la ecología de las comunidades microbianas asociadas con el
hombre, los Institutos Nacionales de Salud lanzaron en 2007 el Proyecto
Microbioma Humano y en el 2012 se publicaron los siguientes resultados:
4.788 muestras analizadas de 33 hábitats, tanto femeninos como masculinos,

que representaban cinco áreas principales del cuerpo (cavidad oral y

orofaringe, piel, fosas nasales, tracto gastrointestinal y vagina) de 242 adultos
sanos. Las comunidades encontradas en cada uno de los hábitats del cuerpo
poseían una fuerte especialización en su sitio, tanto dentro de este como entre
individuos. Así mismo, se observó que, dentro de los hábitats, la variabilidad
interpersonal es alta, mientras que los individuos presentan una variabilidad
temporal mínima.
Los análisis de la diversidad taxonómica asociada con la microbiota humana -
colección de microorganismos que están presentes en una comunidad de un
hábitat corporal definido- se han convertido en tema de gran importancia, ya
que estudiar los taxones comúnmente compartidos, en comparación con los
menos prevalentes, permite establecer un elemento de base para comparar
personas sanas o enfermas.

12
La microbiología médica moderna se centró en microorganismos patógenos,
considerando a la microbiota normal como una población de microbios vasta y
desconocida. Sin embargo, esta visión ha ido cambiando, el estudio de esta ha
emergido como un importante factor en la fisiología y la enfermedad en
humanos.
Las relaciones entre los cerca de 100 trillones de simbiontes microbianos y el
cuerpo humano nos han facilitado la extracción de energía de los alimentos,
proporcionado factores de crecimiento, promovido la diferenciación y función de
la mucosa, estimulado el sistema inmune y proporcionado resistencia a la
colonización por patógenos. Si la microbiota afecta la fisiología humana, los
cambios de su composición pueden alterar la homeostasia del huésped y, por
tanto, incrementar el riesgo a enfermar. De hecho, en enfermedades como el
asma, la obesidad, la vaginosis bacteriana y la enfermedad inflamatoria
intestinal se han encontrado comunidades microbianas alteradas. Lo anterior,
también sugiere que se si se conoce la composición de la microbiota normal,

se pueden generar intervenciones para su restablecimiento y, por lo tanto, se

puede superar la situación de enfermedad.

Objetivos actividad práctica 1

 Clasificar los diferentes tipos de medios de cultivo que se utilizan en el
laboratorio de microbiología.
 Practicar los métodos de siembra de microorganismos en diferentes medios
de cultivo.
 Evidenciar la diversidad de microorganismos existentes en las diferentes
zonas del cuerpo humano en estado de salud.

Materiales para la práctica de laboratorio

 Protocolo de laboratorio
 Elementos de protección personal (bata, guantes, tapabocas, gorro,
zapatos cerrados).
 Marcador sharpie negro, toallas de papel absorbente, jabón de
manos, fósforos, papel de arroz, láminas y laminillas.
 Ver vídeo introductorio sobre cultivos microbiológicos en:
Dr Alejandro Macias. (2017, 14 de julio). Cultivos en Microbiología
Clínica. [video]. YouTube.
https://www.youtube.com/watch?v=30htD86TWzE
 Ver vídeo introductorio sobre microbiota humana:
Universidad de Sevilla. (2019, 09 de enero). Microbiota Humana:
somos ecosistemas andantes. [video]. YouTube.
https://www.youtube.com/watch?v=TVVfAEdpj7I

13
Material que le será proporcionado en el Laboratorio
 Cultivos bacterianos.
 Gradilla.
 Asas bacteriológicas.

 Medios de cultivo (agar MacConkey, agar nutritivo y agar nutritivo

inclinado, agar SIM).
 Balde de desechos.
 Dos Hisopos o escobillones estériles, para cada estudiante.
 Tubos con 1ml de solución salina isotónica, para cada estudiante.

Procedimiento-Ejercicio trazo de siembra

1. Una vez preparados los medios de cultivos y cuando se encuentren
listos para comenzar la siembra de las muestras, divida cada una de las
cajas de Petri que contienen los medios de cultivo a la mitad.
2. Marque sus medios de cultivo con:
a. Nombre de la cepa a sembrar (corresponde a las que le
entregaran en caldo nutritivo).
b. Identificación del grupo.
c. Fecha de la siembra.
3. En la primera mitad del medio de cultivo, siembre por método de
agotamiento.
4. En la segunda mitad del medio de cultivo, siembre por método de estría.
5. En el medio de cultivo inclinado, siembre por estría.
6. Siembre la cepa, en el agar SIM, mediante técnica de punción.
7. Coloque los medios de cultivo sembrados en el recipiente
correspondiente y llévelos a la incubadora asignada.

Procedimiento-Ejercicio Microbiota humana

1. Si es necesario divida los medios de cultivo encontrados en las cajas de
Petri a la mitad, de tal manera que cada participante pueda usar una de las
mitades.
2. Marque sus medios de cultivo con:
a. Nombre de la zona anatómica a sembrar (Ej. Fosa nasal, conducto
auditivo externo, región axilar, región inguinal, región interdigital,
etc.).

b. Nombre del participante.

c. Fecha de la siembra.
3. Destape el hisopo estéril y sumérjalo en la solución salina.
4. Escurra el exceso de solución salina del hisopo y frote la zona anatómica
seleccionada, girando el hisopo.
5. Con el hisopo realice estrías superpuestas en un cuarto de cada uno de los
medios de cultivo disponibles.
6. Realice siembra de la muestra inoculada en el medio, usando el método de
agotamiento.

14
7. Lleve los medios de cultivo a la incubadora.

Cuestionario y resultados de la práctica

1. Complete la siguiente tabla:
Utilidad
1. ¿Para qué sirve el medio de
Nombre del Componentes del cultivo?
medio de cultivo agar 2. Mencione los grupos de
bacterias que ayuda a identificar
o crecen en el medio.
 Digerido
pancreático de
gelatina 17,0 g
 Digerido
pancreático de 1. Es un medio selectivo
caseína 1,5 g diferencial utilizado para el
 Digerido péptico aislamiento y diferenciación de
de tejido animal bacilos gram negativo
1,5 g fermentadores y no
 Lactosa 10,0 g fermentadores de lactosa. Se
Agar MacConkey
 Mezcla de sales utiliza con frecuencia para el
biliares 1,5 g aislamiento de coliformes.
 Cloruro de sodio 2.  Bacilos gram negativos, por
5,0 g ejemplo, Enterobacteriaceae
 Agar 13,5 g (como E. coli y muchos otros de
 Rojo neutro 30,0 estos bacilos)
mg Cristal violeta
1,0 mg
 Agua destilada
1.000 mL
Agar Nutritivo Fórmula 1. El Agar Nutritivo es uno de los
aproximada* por litro medios de cultivo más empleados
de agua purificada en bacteriología para el
 Digerido crecimiento de bacterias
pancreático de nutricionalmente poco exigentes
gelatina 5,0 g a partir de agua potable, agua
 Extracto de carne industrial, aguas residuales y
bovina 3,0 g alimentos. Dentro de las
 Agar 15,0 g aplicaciones en que se utiliza el
agar nutritivo está el cultivo y
conservación de cepas,
determinación de la sensibilidad y
resistencia a antibióticos y
también es usado como base de
medios de cultivos especiales..
2.Escherichia coli,
Staphylococcus epidermidis,
staphylococcus aureus,

15
 enterococcus faecalis.
FÓRMULA (en 1. Medio semisólido destinado a
gramos por litro) verificar la movilidad, producción
 TRIPTEÍNA 20.0 de indol y de sulfuro de hidrógeno
 PEPTONA 6.1 por los microorganismos. Es útil
 SULFATO DE para diferenciar miembros de la
Agar SIM
HIERRO Y familia Enterobacteriaceae
AMONIO 0.2 2. Escherichia coli, salmonella
 TIOSULFATO typhimurium, shigella flexneri,
DE SODIO 0.2 klebsiella pneumoniae, proteus
 AGAR.3.5 mirabilis.

2. ¿En qué condiciones de incubación se colocaron cada uno de los

medios de cultivo sembrados? Tenga en cuenta como mínimo
temperatura y tiempo.
Agar MacConkey y agar nutritivo:
- Humedad: 40%
- Ventilación 30%
- Temperatura: 37° C
- Tiempo: 6 días

3. Complete la siguiente tabla con los medios de cultivo empleados y el

esquema del tipo de siembra que realizó, describa cada una de ellas.

Esquema o fotografía
Medio de cultivo Tipo de Siembra de la siembra que
realizó
Agar MacConkey

Siembra en estría
ondulada continua de
muestra NSG.

Agar MacConkey

Siembra en estría
ondulada continua de
muestra de orina

16
 Agar nutritivo
Siembra en estría
ondulada continua de
superficie (teléfono
celular)

Agar nutritivo

Siembra en estría
ondulada continua de
muestra en piel

4. Consulte los nombres de 3 microorganismos que puedan cultivarse en al

menos 2 de los medios de cultivos tratados en la pregunta 1 e indique:
En qué condiciones de temperatura y tiempo se realiza la incubación.

Agar MacConkey
- Incubación: En aerobiosis, a 33-37 ºC durante 18-48 horas.
- Microorganismos: Escherichia coli, klebsiella pneumoniae, shigella
flexneri.

Agar Nutritivo
-Incubación 48 horas a 30-35 ºC y 48 horas a 20-25 ºC: SIN
CRECIMIENTO Verificación a 7 días tras incubación en las mismas
condiciones.
- Microorganismos: bacillus subtilis, ps. Aeruginosa, escherichia coli.

5. Describa las características macroscópicas de las colonias

resultantes de siembra en los medios de cultivo usados. Si desea
ampliar su observación puede buscar en los siguientes Atlas
microbiológicos la cepa sembrada en el agar correspondiente.

Atlas disponibles para ampliar visualización:

Atlas de Socalemi: http://www.socalemi.es/index.php/atlas-de-microbiologia (en
este atlas puede revisar los microorganismos por su clasificación)
Atlas de microbiología Online: https://www.microbiologyinpictures.com/atlas
%20de%20bacteriologia.html (en este atlas debe hacer click sobre las fotos del

17
encabezado de la página para ver todos los recursos, hacer la búsqueda y
ampliar la visualización)
En el medio de cultivo MacConkey no se registraron colonias.

Agar nutritivo cepa sembrada: Superficie (teléfono

Medio de cultivo
celular)
Características
Descripción de la cepa Dibujo o fotografía
macroscópicas
Tamaño Grande >1mm
Forma Filamentosa
Borde Ondulado
Elevación Aplastada
Superficie Rugosa
Consistencia Mucoide
Aspecto Brillante

Color Blanco/gris

Agar nutritivo cepa sembrada: Superficie (teléfono

Medio de cultivo
celular)
Características
Descripción de la cepa Dibujo o fotografía
macroscópicas
Tamaño Mediana
Forma Circular
Borde Ondulado
Elevación Mamelonada
Superficie Rugosa
Consistencia Mucoide

18
 Agar nutritivo cepa sembrada: Superficie (teléfono
Medio de cultivo
celular)
Características
Descripción de la cepa Dibujo o fotografía
macroscópicas
Aspecto opaca

Color Amarillo tenue

Medio de cultivo Agar nutritivo cepa sembrada: Piel

Características
Descripción de la cepa Dibujo o fotografía
macroscópicas
Tamaño Grande >1mm
Forma Filamentosa
Borde Ondulado
Elevación Plana
Superficie Rugosa
Consistencia Mucoide
Aspecto Brillante

Color Blanco/gris

19
Medio de cultivo Agar nutritivo cepa sembrada: Piel
Características
Descripción de la cepa Dibujo o fotografía
macroscópicas
Tamaño Pequeña <1mm
Forma circular
Borde Ondulado
Elevación Plana
Superficie Rugosa
Consistencia Blanda
Aspecto Opaco

Color Amarillo

Medio de cultivo Agar nutritivo cepa sembrada: Piel

Características
Descripción de la cepa Dibujo o fotografía
macroscópicas
Tamaño Grande >1mm
Forma Rizoide
Borde Lobulado
Elevación Plana
Superficie Rugosa
Consistencia Blanda
Aspecto Opaco

Color Gris

6. Complete ¿qué géneros de microorganismos pueden encontrarse en las

siguientes zonas anatómicas?

Zona Microorganismos Morfología y afinidad

tintorial al Gram
Piel Staphylococcus spp. Coco-Gram positivo
Pseudomonas Bacilo- Gram negativo
Microbacterium Bacilo- Gram positivo
Boca Streptococcus Coco- Gram positivo

20
 Actinomyces Bacilos- Gram positivos
Veillonella Coco- Gram Negativo
Fussobacterium
Tracto Prevotella Bacilo- Gram negativo
respiratorio
Sphingomonas Bacilo- Gram negativo
superior
Pseudomonas Bacilo- Gram negativo
Staphylococcus Coco-Gram positivo
Tracto Ruminococcus Coco- Gram positivo
gastrointestinal
Eubacterium Bacilos- Gram positivos
Bacteroides Bacilo- Gram negativo
Faecalibacterium Bacilos- Gram positivos
Tracto genital Lactobacillus Bacilos/cocobacilos- Gram
positivos

Anaerococus Coco- Gram positivo

Prevotela Bacilo- Gram negativo

Candida albicans

7. Reporte en la siguiente tabla 3 microorganismos diferentes entre sí, que

pertenezcan a nuestra microbiota humana y que haya listado en la tabla
anterior. Explique en qué medio de cultivo los pondría a crecer y porqué.

Porque escoge este

Nombre del medio de cultivo
Medio de cultivo
Microorganismo

En este medio crecen

todo tipo de bacterias,
Agar nutritivo Pseudomonas
en este caso bacilo-
Gram negativo
Ya que en este medio
Agar MacConkey Veillonella crecen bacterias
Gram negativas
El medio es utilizado
para cultivar hongos
ya que tiene
Agar Sabouraud Candida Albicans
antibióticos que
impiden el desarrollo
de bacterias.

21
8. Registre las referencias citadas, usando norma APA vigente
 Díaz, M.
(2018). Bacterias [OVI]. https://es.educaplay.com/es/recursoseducativ
os/3400566/bacterias.htm
 Ryan, K. (2011). Microbiología médica. Access
medicina https://accessmedicina.mhmedical.com/book.aspx?
bookid=2169

22
 Actividad práctica 2. Caracterización microscópica de cultivos
bacterianos: Coloración de Gram

Introducción
Dentro de las técnicas de diagnóstico directo en enfermedades infecciosas se
emplea frecuentemente el examen microscópico, con el propósito de observar
las características de los microorganismos de la muestra a estudiar. Dicho
examen puede hacerse a través de la realización de una preparación en fresco
de la muestra o se puede realizar coloreando la misma. Dentro de las
coloraciones más empleadas en la Microbiología se encuentra la coloración de
Gram, la cual fue fruto de la curiosidad del médico Danés Hans Christian
Joachim Gram, en 1884, cuando este examinaba tejido pulmonar obtenido de
un paciente fallecido por neumonía, observando que las bacterias presentes en
la muestra tomaban diferentes coloraciones cuando se les colocaban distintos
colorantes.
Pero ¿para qué hacer coloración? Los microorganismos no solo son invisibles
para el ojo humano, sino que también son semitransparentes; esto hace que su
visualización a través del microscopio sea aún más difícil. Por lo anterior, la
coloración de Gram permite revelar tamaño, forma, agrupación y afinidad
tintorial (Figura 3), características que hacen posible la clasificación de
microorganismos.

Figura 3 Características microscópicas observables en la coloración de

Gram.

23
 Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2017)
Con la coloración de Gram se pueden establecer dos grandes grupos de
bacterias: Gram positivas y Gram negativas. Las bacterias Gram positivas se
observarán moradas, debido a que retienen el complejo cristal violeta-lugol,

a pesar de la exposición a la solución de alcohol-acetona; mientras que las

bacterias Gram negativas se observaran rojas, debido a que no retienen el
complejo cristal violeta-lugol y por lo tanto dejan el espacio al colorante de
contraste: la safranina. Esta diferencia en la afinidad tintorial está dada por la
pared celular bacteriana, compuesta de peptidoglicano o mureína, que para las
bacterias Gram positivas es más gruesa y forma más entrecruzamientos que
en las bacterias Gram negativas.
En conclusión, esta coloración es un gran aporte al estudio de las
enfermedades infecciosas; técnica sencilla, rápida y que aporta información
valiosa a la hora de apoyar un diagnóstico, ya que no sólo permite identificar el
microorganismo, sino que esta puede sugerir antimicrobianos efectivos para
tratar el mismo.

24
Objetivos Actividad práctica 2
 Conocer la coloración de Gram en las muestras a estudiar.
 Clasificar las bacterias por su afinidad tintorial, su morfología y agrupación.

Materiales de la práctica de laboratorio

 Protocolo de laboratorio
 Hojas blancas y colores
 Elementos de protección personal (bata, guantes, tapabocas, gorro,
zapatos cerrados).
 Marcador sharpie negro, toallas de papel absorbente, jabón de
manos, fósforos, papel de arroz, láminas y laminillas.
 Ver vídeo de coloración de Gram:
UdeAarroba. (2018, 27 de abril). Tinción de Gram. [video]. YouTube.
https://www.youtube.com/watch?v=znoqqYJwRTc

 Ver video de coloraciones diferenciales:

ProfeCinco. (2020, 04 de noviembre). Tinciones Diferenciales.
[video]. YouTube. https://www.youtube.com/watch?v=Q57DyYaPDt0

Material que le será proporcionado en el Laboratorio

 Cultivos bacterianos.
 Asas bacteriológicas.
 Balde de desechos

Procedimiento
Para realizar una preparación a partir de medio de cultivo sólido:
1. Tome una lámina y márquela con los datos de identificación del cultivo.
2. Coloque una pequeña gota de solución salina isotónica en el centro de la
lámina.
3. Tome el asa recta y esterilice el asa:
a. Encienda el mechero.
b. Tomando el asa por el mango, ubíquela verticalmente en la llama del
mechero, hasta que esta se encuentre al rojo vivo.
c. Retire el asa de la llama y déjela enfriar o enfríela enterrándola en el
medio de cultivo.
4. Toque la colonia seleccionada con el asa estéril.
5. Lleve el asa –con la colonia- hasta la gota de solución salina puesta en la
lámina y mezcle en círculos distribuyendo la muestra.
6. Deje secar la lámina.
7. Fije la muestra, pasando la lámina por la llama del mechero de 3 a 5 veces.
8. Realice la coloración de Gram:
a. Agregue a la muestra cristal violeta y déjelo durante 1 minuto.
b. Lave el colorante con agua de llave y escurra la lámina.
c. Agregue a la muestra lugol y déjelo durante 1 minuto.

25
 d. Lave el colorante con agua de llave y escurra la lámina.

e. Agregue a la muestra la solución de alcohol-acetona y déjelo

durante 30 segundos.
f. Lave la solución con agua de llave y escurra la lámina.
g. Agregue a la muestra safranina (o fuscina) y déjelo durante 15
segundos.
h. Lave la solución con agua de llave y escurra la lámina.

9. Deje secar la lámina completamente.

10. Enfoque la lámina usando el objetivo 100x.
11. Registre sus observaciones.

Para realizar una preparación a partir de medio de cultivo líquido:

1. Tome una lámina y márquela con los datos de identificación del cultivo.
2. Tome el asa curva y esterilice el asa:
a. Encienda el mechero.
b. Tomando el asa por el mango, ubíquela verticalmente en la llama del
mechero, hasta que esta se encuentre al rojo vivo.
c. Retire el asa de la llama y déjela enfriar o enfríela enterrándola en el
medio de cultivo.
3. Sumerja el asa estéril en el medio y saque una gota de medio de cultivo.
4. Coloque la gota del medio de cultivo en el centro de la lámina.
5. Repita los pasos 3 y 4 dos veces más.
6. Deje secar la lámina.
7. Fije la muestra, pasando la lámina por la llama del mechero de 3 a 5
veces.
8. Realice la coloración de Gram:
a. Agregue a la muestra cristal violeta y déjelo durante 1 minuto.
b. Lave el colorante con agua de llave y escurra la lámina.
c. Agregue a la muestra lugol y déjelo durante 1 minuto.
d. Lave el colorante con agua de llave y escurra la lámina.
e. Agregue a la muestra la solución de alcohol-acetona y déjelo durante
30 segundos.

f. Lave la solución con agua de llave y escurra la lámina.

g. Agregue a la muestra safranina (o fuscina) y déjelo durante 15
segundos.
h. Lave la solución con agua de llave y escurra la lámina.
9. Deje secar la lámina completamente.
10. Enfoque la lámina usando el objetivo 100X.

Cuestionario y resultados
1. Describa el paso a paso de la realización de una tinción de Gram, por medio
de un esquema gráfico (o flujograma) que incluya dibujos y colores acorde
con dicho procedimiento. Este entregable debe ser realizado en una
herramienta web de su elección.

26
https://www.goconqr.com/es-ES/flowchart/38246796/tincion-de-gram

27
 2. Construya un cuadro comparativo en cualquier herramienta digital con las
coloraciones mencionadas en el video “Tinciones Diferenciales”, donde
incluya:

a.Nombre de la técnica
b.Fundamento de la técnica
c.Reactivos utilizados
d.Tipo de tinción (Simple, diferencial, morfológica o estructural).
e.Ejemplo de microorganismos y su clasificación de acuerdo con la
coloración usada.
Nombre Fundamento de la Reactivos Tipo de Ejemplo de
de la técnica Utilizados tinción microorganismos
técnica
Tinción Se fundamenta en Cristal violeta Diferencial Clostridium
Gram la diferencia de la Lugol perfringens -Gram
pared celular de Alcohol/acetona positivas
las bacterias, Safranina E. Coli- Gram
algunas tienen alta negativas
concentración de
peptidoglucanos o
lipopolisacáridos.

Tinción Se fundamenta en Fucsina Fenicada Diferencial Bacilos ácido-

Ziehl- la pared celular de Alcohol/Ácido resistentes como el
Neelsen bacterias con alto Azul de metileno mycobacterium.
(BAAR) contenido de
Ácidos Micólicos.

3. Explique ¿Por qué las bacterias Gram positivas no se decoloran cuando se

les agrega la solución de alcohol-acetona?

Las bacterias Gram positivas no se decoloran cuando se les agrega la

solución alcohol-acetona porque dichas bacterias poseen una pared con
alta concentración de peptidoglicanos en su estructura la cual retiene la
sustancia insoluble dando la coloración morada.

4. Según los resultados de la coloración de Gram realizada en el laboratorio,

diligencie la siguiente tabla.

28
 Características
Gram positivas Gram negativas
microscópicas
Morfología Cocos Cocos
Afinidad tintorial Color purpura Color rosa
Agrupación Estafilococos Diplococos

Dibujo o fotografía de las

bacterias y el color que
toman con la tinción de
Gram finalizada

5. Registre las referencias citadas, usando norma APA vigente

 Santiago Dionisio, M (2009). Manual de prácticas de laboratorio de

microbiología I y II: diversidad y estructura de los
microorganismos. http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2077/lib/unadsp/
detail.action?docID=10287166&p00=manual+pr
%C3%A1cticas+laboratorio+microbiolog%C3%ADa
 ProfeCinco. (2020, 04 de noviembre). Tinciones Diferenciales. [video].
YouTube. https://www.youtube.com/watch?v=Q57DyYaPDt0

29
 Actividad práctica 3. Prueba de susceptibilidad a antimicrobianos:
difusión en disco.

Introducción
Los antimicrobianos son compuestos que hemos empleado para combatir los
microorganismos causantes de infecciones. Entre estos se encuentran los
antiprotozoarios, los antivirales, los antimicóticos o antifúngicos y los
antibacterianos. Pero en este perpetuo combate, algunos microorganismos han
desarrollado adaptaciones que los hacen resistentes a la acción de estos
compuestos, mientras que otros permanecen siendo sensibles, esta
manifestación determinará el efecto terapéutico de un antimicrobiano.
Las pruebas de susceptibilidad a antivirales, antiprotozoarios y antihelmintos
son complejas, costosas y no suelen realizarse en el laboratorio clínico;
mientras que las pruebas de susceptibilidad a antibacterianos –denominadas
también antibiogramas- son las mejores estandarizadas y las más empleadas.
Por su parte, las pruebas que se hacen para antimicóticos aún están en
estandarización.
A pesar de lo expuesto, las pruebas de susceptibilidad a antimicrobianos tienen
por objetivo tratar de predecir el efecto terapéutico de un antimicrobiano y
aunque han sido realizadas tanto in vitro como in vivo, en los laboratorios
clínicos se lleva a cabo la primera modalidad, bajo recomendaciones emitidas
por entidades internacionales o nacionales. Sin embargo, estas pruebas in vitro
sólo contemplan el antimicrobiano y el microorganismo, mas no las variables en
el ser humano (ej. interacción con proteínas, variación de concentración con el
tiempo, distribución del antimicrobiano en los tejidos), que es en dónde se da la
enfermedad infecciosa.
La susceptibilidad a los antibacterianos esta categorizada en tres grupos:
sensible, intermedio, resistente. Una bacteria es sensible si esta es inhibida

por una concentración de un antimicrobiano que se asocia a una alta

probabilidad de éxito terapéutico. Por otro lado, una bacteria es resistente si es
inhibida por una concentración de un antimicrobiano que se asocia a una alta
probabilidad de fracaso terapéutico. Mientras que, en la categoría de
susceptibilidad intermedia, se encuentra la bacteria que es inhibida in vitro por
una concentración de un antimicrobiano que se asocia a un efecto terapéutico
incierto.
Existen diversos métodos para evaluar la susceptibilidad a antibacterianos,
pero dentro de los más usados se encuentra el método de Kirby-Bauer o
difusión en disco. Este consiste en que se siembra el microorganismo en
estudio, de manera masiva, en un agar estandarizado y posteriormente se
colocan discos de papel impregnados con una concentración dada de
antibacteriano, que corresponde a niveles que pueden obtenerse si el
30
antimicrobiano se administra sistémicamente. A medida que los antibacterianos
se difunden en el medio van matando el microorganismo en estudio-si este es
sensible-, y de esta manera se van generando unas zonas sin crecimiento
microbiano, cuyo diámetro se corresponde con la categoría de susceptibilidad
del microorganismo.

Objetivos Actividad práctica 3

 Conocer la prueba de susceptibilidad a antibacterianos por difusión para
microorganismos determinados.
 Interpretar la zona de inhibición para los microorganismos en estudio.

Materiales de la práctica de laboratorio

 Protocolo de laboratorio
 Elementos de protección personal (bata, guantes, tapabocas, gorro,
zapatos cerrados)

 Marcador sharpie negro, regla, toallas de papel absorbente, jabón de

manos, fósforos, papel de arroz, lupa, láminas y laminillas
 Ver vídeo Bacterias, Antibióticos y Resistencia en:
The National Library of Medicine. (2019, 06 de agosto). Antibióticos
versus Bacterias: Combatiendo la Resistencia. [video]. YouTube.
https://www.youtube.com/watch?v=ODgdIVu1xac

Material que le será proporcionado en el Laboratorio

 Caldos de cultivo con cepa 1 y Cepa 2.
 Dos Hisopos o escobillones estériles, para un grupo de estudiantes.
 Asas bacteriológicas.
 Pinzas metálicas
 Medios de cultivo (2 cajas de agar Mueller Hinton por grupo).
 Dos tubos con 1ml de solución salina isotónica, por grupo.
 Discos con antimicrobianos.
 Balde de desechos.
Procedimiento
1. Marque sus medios de cultivo con:
a. Nombre de la cepa
b. Nombre del grupo
c. Fecha de la siembra
2. Destape un hisopo estéril y sumérjalo en el caldo de cultivo de la cepa 1.
Escurra el hisopo en las paredes del tubo antes de sacarlo.
3. Lleve el hisopo con el inoculo a la caja de agar y siembre el medio de
cultivo de forma masiva usando el método de cuadricula.

31
 4. Esterilice la pinza metálica.
5. Coloque los cuatro discos seleccionados con la pinza estéril, de tal
manera que estos queden equidistantes entre sí.
6. Repita los pasos 2 a 5 para procesar la cepa 2.
7. Lleve los medios de cultivo a la incubadora.
8. Mida las zonas de inhibición (diámetro) en milímetros, usando una regla.

Cuestionario y resultados
1. Ingrese a Educaplay, y realice la sopa de letras sobre resistencia a los
antibióticos alojado en:
https://es.educaplay.com/recursos-educativos/4992454-
resistencia_a_antibioticos.html, tome captura de pantalla cuando lo haya
completado.

2. Investigue y registre ¿Cuáles se consideran las fuentes de error más

comunes al momento de la realización de un antibiograma en el laboratorio?

 Preparación incorrecta del medio de cultivo

 Uso de medios con fecha de expiración vencida o uso de medio
incorrectamente almacenado.
 Preparación incorrecta y almacenamiento incorrecto del agar.
 Almacenamiento incorrecto de los medios de cultivo
 Inadecuada estandarización de la concentración del inóculo.
 Contenido en el aplicador antes de inocular el medio sólido.
 Demora excesiva en la estandarización del cultivo o demora en la
inoculación del medio sólido.
 Incubación a temperatura diferente de 35 "C o incubación en atmósfera
de C02.
 Lectura prematura de los resultados antes de un periódo de incubación
de 16-18 horas.

32
  Lectura incorrecta en la medición de los bordes de la zona de inhibición
por incorrecta iluminación.
 Lecturas hechas sin reglilla de medición.
 Pruebas hechas con cultivos mixtos.
 Realización de antibiogramas con microorganismos de crecimiento lento
o anaeróbico.
 Omisión de los controles de calidad con las cepas control y omisión de
anotar los resultados de estas cepas control.
 Error en la transcripción de los resultados de las pruebas individuales.

3. Registre los resultados obtenidos en la práctica del laboratorio.

Cepa 1
Diámetro de
la zona de
Antibiótico Interpretación
inhibición
usado
(mm)

No se
Gentamicin presentaron
a CN10 colonias
bacterianas.

No se
Amoxicilina presentaron
AML10 colonias
bacterianas.

Se presentaron
colonias
bacterianas sin
Cefotaxime zonas de
CTX5 inhibición, por
lo tanto, las
bacterias son
resistentes,
Se presentaron
colonias
bacterianas sin
Meropenem zonas de
MEM10 inhibición, por
lo tanto, las
bacterias son
resistentes,

33
4. Con base a las siguientes fotografías seleccione un microorganismo Gram
Positivo y un microorganismo Gram Negativo, seleccione los mismo 4
antibióticos que va a colocar en los dos antibiogramas de los dos
microorganismos seleccionados, Observe los resultados de las fotografías
que son acorde a los microorganismos que ha seleccionado y a los 4
antibióticos a los que fueron expuestos (que son los mismos que se usan
para los microorganismos (bacterias seleccionadas) Gram positiva y Gram
negativa), tenga en cuenta la numeración realizada en los antibiogramas y
registre el resultado obtenido y su interpretación en el siguiente cuadro

Resultado e Interpretación
Interpretación (Describa
Resultado (Sensible o
Fotografía porque es sensible o
Resistente a cada
resistente según lo que
antibiótico)
puede observar)
Se determina que es
sensible debido a que tiene
una concentración mínima
inhibitoria (CMI) inferior al
1.Intermedio
pico máximo de absorción
2.Sensible
de una droga (PMAD), una
3.Resistente
cepa resistente es aquella
4.Resistente
que tiene una CMI superior
al PMAD y una cepa
intermedia tendría una CMI
Similar al PMAD.

1.Intermedio Se determina que es

2.Sensible sensible debido a que tiene
3.Sensible una CMI inferior al PMAD,
4.Sensible una cepa intermedia tendría
una CMI Similar al PMAD.

Fuente fotografías: F. Benakashani et al., (2016). Biosynthesis of silver

nanoparticles using Capparis spinosa L. leaf extract and their antibacterial
activity, Karbala International. Journal of Modern Science
http://dx.doi.org/10.1016/j.kijoms.2016.08.004

5. Usted tiene que seleccionar 4 antibióticos para hacer la prueba de

susceptibilidad a antimicrobianos de una cepa de S. aureus (Indique sus
nombres). En la siguiente tabla mencione los aspectos que tendría en
cuenta para hacer esta selección, explíquelos brevemente y con sus
palabras.

34
 Antibiótico Aspectos Explicación
Es un antibiótico Generalmente este antibiotico ataca
1. Penicilina betalactámico las paredes de las células
bacterianas
Es una Se formula para tratamiento con un
cefalosporina de espectro antimicrobiano basado en
2. Cefazolina
primera bacterias Gram positivas como S.
generación aureus.
Es un antibiótico Puede considerarse una alternativa
del grupo de los para el tto de infecciones graves
3. Clindamicina
lincosánidos. causadas por cepas sensibles de
cocos Gram positivos aerobios.
Es un antibiótico Ya que es un antibiótico que inhibe
del grupo la síntesis de la pared bacteriana,
4. Vancomicina glicopéptidos. por lo cual la cepa de S. aureus al
ser Gram positiva podría ser
sensible al antibiótico.

6. Registre las referencias citadas, usando norma APA vigente

https://revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/download/1891/1917/
https://www.msdmanuals.com/es/professional/enfermedades-infecciosas/
bacterias-y-f%C3%A1rmacos-antibacterianos/vancomicina
https://www.aeped.es/comite-medicamentos/pediamecum/clindamicina
https://www.aeped.es/comite-medicamentos/pediamecum/cefazolina
https://www.mayoclinic.org/es-es/diseases-conditions/penicillin-allergy/
symptoms-causes/syc-20376222#:~:text=Las%20penicilinas%20pertenecen
%20a%20una,paredes%20de%20las%20c%C3%A9lulas%20bacterianas.

35
 Actividad práctica 4. Caracterización macroscópica y microscópica de
hongos.

Introducción
Los hongos son organismos conformados por células eucariotas y agrupados
dentro del dominio Eukarya, siendo diferentes de los protozoos, los animales y
las plantas. De estos se han identificado aproximadamente 200.000 especies, y
sólo 100 generan infección en el humano. Las infecciones causadas por estos
hongos se denominan micosis, es la micología médica quien se encarga de
estudiarlas y a los hongos raíz de la cadena causal.
Estos organismos no hacen fotosíntesis, son heterótrofos, saprofitos y pueden
llegar a ser parásitos. Adicionalmente, habitan diferentes entornos tales como
las mucosas de mamíferos, tierra, superficies abióticas, entre otros. Poseen
una pared celular constituida de polisacáridos, que en su mayoría son quitina,
mananos y α glucanos.
De acuerdo a sus características morfológicas, los hongos pueden ser
macroscópicos (ej. Champiñones) o microscópicos. Los hongos microscópicos
pueden presentar dos estructuras fúngicas básicas: las Hifas (filamentos) que
son filas de células que crecen apicalmente y cuyo conjunto se denomina
micelio; y las levaduras (blastoconidias) que son estructuras ovaladas o
esféricas unicelulares.

Figura 4 Diferencias morfológicas y de tamaño entre hongos

filamentosos, levaduriformes y bacterias

Fuente: *Mold (Filamentos), Yeast (levadura). Tomado de Wolfe (2014).

De acuerdo a lo anterior, desde una perspectiva clínica, los hongos se pueden
agrupar en filamentosos y levaduriformes. Sin embargo, hay unas especies de
hongos que pueden ser filamentosos en la naturaleza o en el laboratorio (a
menos de 30 °C) y, en cambio, presentarse como levaduriformes en los tejidos

36
(a 37 °C). Estos son llamados hongos dimórficos y algunos de ellos son:
Candida albicans, Sporothrix schenkii, Histoplasma capsulatum y
Paracoccidioides brasiliensis.
Los cultivos de hongos pueden presentar dentro de sus características
macroscópicas, una apariencia cremosa –propia de los hongos
levaduriformes-; o apariencias: correosa, aterciopelada, algodonosa,
polvorienta y granulosa –propias de hongos filamentosos-.

Objetivo Actividad práctica 4

Identificar características macroscópicas y microscópicas de los hongos.

Materiales de la práctica de laboratorio

 Protocolo de laboratorio

 Elementos de protección personal (bata, guantes, tapabocas, gorro,

zapatos cerrados).
 Marcador sharpie negro, toallas de papel absorbente, jabón de
manos, fósforos, papel de arroz, lupa, láminas y laminillas.
 Fruta o verdura o pan con moho en su superficie (uno por cada
estudiante).
 Dos jeringas de insulina.
 Explorar el Atlas Socalemi, sección de micología en:
Sociedad Castellano-Leonesa de Microbiología. (s.f.). Atlas de
microbiología. http://www.socalemi.es/index.php/atlas-de-
microbiologia
 Ver vídeo Levaduras y Hongos en:
Cigemexico. (2011, 13 de diciembre). Levaduras y Hongos. [video].
YouTube. https://www.youtube.com/watch?v=rT5cFN0fOYY

Material que le será proporcionado en el Laboratorio

 Colorante azul de lactofenol.
 Microscopios.
 Balde de desechos.

Procedimiento
1. Deje a la intemperie una fruta, pan o verdura por al menos 5 días o busque
en su hogar una fruta, verdura o pan que tenga apariencia de estar
contaminada con hongos, llévela al laboratorio acorde a lo indicado por su
docente – tutor; recuerde tener precaución al tomarla y manipularla usando
guantes y tapabocas con anterioridad.

37
2. Durante el desarrollo de la sesión del laboratorio, tómele fotos, obsérvela de
cerca, describa lo que observa. recuerde durante la observación no

tocarla directamente, no respirar u oler la fruta, verdura o pan seleccionado,

no estornude, no sople o quite el nada de allí.

Paso 1: Paso 2: Paso 3:

Detecte cambio en Utilice todos los Deseche lo
apariencia elementos de contaminado
Colores blanco, café bioseguridad Continue con el
o negro Observe y describa cuestionario

Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2020)

3. Marque sus láminas con cada uno de los cultivos fúngicos (fruta, verdura,
pan).
4. Coloque una gota de azul de lactofenol en el centro de la lámina.
5. Destape las jeringas de insulina y con una de ellas raspe la zona en donde
se encuentra el moho.
6. Ponga el material raspado en la gota de azul de lactofenol y con la punta de
la otra jeringa de insulina, corte y extienda la muestra.
7. Retire las jeringas y esterilícelas. NO las tape.
8. Coloque la laminilla encima de la muestra inoculada.
9. Observe la preparación en el microscopio, usando el objetivo de 40X.
10. Registre los resultados.
11. Deseche las láminas y las jeringas en el guardián disponible en el
laboratorio.

38
 Cuestionario y resultados
1. Investigue y describa los medios de cultivo más utilizados para el
crecimiento de hongos de interés clínico.

Los medios de cultivos para microbiología son usados en laboratorios

como material alimenticio donde crecen los microorganismos. Estos
medios de cultivo son artificiales y deben reunir una serie de
características que los hacen óptimos para que se dé el crecimiento de
microorganismo como bacterias, mohos o levaduras.

Entre las características o condiciones importantes con las que debe

contar un medio de cultivo están:

Temperatura: los microorganismos crecen de forma óptima en

temperaturas variadas que depende del tipo de cultivo. Los cultivos
deben proveer estas temperaturas ideales.

pH: el pH mide la acidez o alcalinidad. Muchos de los cultivos crecen

mejor con un pH neutro, aunque hay otros que requieren medios más
ácidos.

Medios estériles: todos los medios de cultivos deben ser

completamente estériles para evitar que se pueda alterar, cubrir o
incluso impedir el crecimiento microbiano normal.

Luz ambiental: los medios de cultivo deben estar ubicados donde no

estén expuesto a luz solar. La luz siempre debe ser controlada.

Humedad: las condiciones de humedad deben ser las adecuadas tanto

para el medio como para el ambiente donde se encuentra. Para muchos
microorganismos se requiere un mínimo nivel de humedad.

2. De acuerdo con el cultivo micótico de la fruta verdura o pan complete el

siguiente cuadro.
Investigue que
tipos de
Describa las hongos
Fotografía de la Fruta,
Características pueden haber
Verdura o Pan Describa las
microscópicas atacado la
contaminado / Fotografía Características
del hongo fruta, verdura o
de la observación en macroscópicas
observado al pan y concluya
microscopio
microscopio cual visualizó
en el
laboratorio

39
Fruta: Naranja Descomposición con Hongo Existen varios
olor desagradable filamentoso que tipos de hongos
con un aspecto seco presenta en su que puede
y mohoso con micelio afectar a estos
puntos negros verde vegetativo una alimentos
y blanco, que al morfología Aspergillus
pasar el tiempo septada y en su
Fusarium,
reduce su tamaño. micelio aéreo
Penicillium
una
Rhizopu Mucor
reproducción
Para la naranja
asexual por
fue afectado el
segmentación
hongo
de sus hifas
penicillium
Pan Se observa que se Al tomar la Estos son los
pone un color con muestra de tipos de hongos
lana verdoso, las hongo que afectan al
hifas se introducen filamentosos pan Penicillium
en el sustrato sobre para observarlo o Neurospora
la que se desarrolla al microscopio, crassa
el moho (pan) y son se fragmenta el
para el pan el
las encargadas de micelio tipo
tipo de hongo
nutrirlo y su hebra que crece
que lo afecto
extremidad se hace en la superficie
fue esporas y
globulosa para del pan, sobre
lavaduras.
adaptarse a la todo en el
reproducción. Así es estudio de los
entonces, como dermatofitos y
estos se reproducen se obtiene un
rápidamente micro cultivó. Y
“invadiendo” el pan, de este modo se
reduciendo su añade colorante
tamaño (lactofenol) se
observa también
hifas intacto
facilitando su
correcta
identificación

40
 3. Los hongos filamentosos pueden causar infecciones en humanos.
Mencione algunos ejemplos de hongos de este tipo y ¿Qué condiciones
debe tener un ser humano para ser infectado por estos hongos?

 Aspergillus fumigatus
 itraconazol,
 posaconazol
 voriconazol)
 anidulafungina,
 caspofungina
 micafungina
 anfotericina
 Fusarium
 Scedosporium

¿Qué condiciones debe tener un ser humano para ser infectado por estos
hongos?
 Enfermedades hematológicas y receptores de trasplante
hematopoyético.

 Pacientes en riesgo, por someterse a tratamientos inmunosupresores o

terapias invasivas y, por otra, a la mejora de los métodos diagnósticos
microbiológicos y de las pruebas de imagen, especialmente la
tomografía axial computarizada de
alta resolución (TACAR).
 Leucemia aguda
 Paciente en tratamiento con corticoesteroides.
 Pacientes sometidos a TPH alogénico.
 En pacientes con hemopatías malignas

4. De las siguientes fotografías al microscopio, defina por sus

características que hongo cree ver:

A. B. C.

41
 Fuente: Fotografías tomadas de Pinterest e
imágenes de google de acceso libre.
A. Ameba
B. Basidiomicetos
C. Quitridiomicetos.
5. Registre las referencias citadas, usando
norma APA vigente

(S/f). Mdmcientifica.com. Recuperado el 18 de noviembre de 2022, de

https://mdmcientifica.com/medios-cultivo-microbiologia-mas-usados/

Hongos en alimentos. (s/f). Prevensystem.com. Recuperado el 18 de noviembre de 2022,

De https://www.prevensystem.com/internacional/427/noticia-hongos-en-los

alimentos.html

Ruiz-Camps, I., & Jarque, I. (2014). Enfermedad fúngica invasora por hongos filamentosos

en pacientes hematológicos. Revista iberoamericana de micologia, 31(4), 249–254.

https://doi.org/10.1016/j.riam.2014.06.002

Tipos de flagelo según su localización en bacterias. (s/f). Laguia2000.com. Recuperado el

18 de noviembre de 2022, de https://biologia.laguia2000.com/microbiologia/el-

flagelo-en-bacterias

Ver vídeo Levaduras y Hongos en: Cigemexico. (2011, 13 de diciembre). Levaduras y

Hongos. [video]. YouTube. https://www.youtube.com/watch?v=rT5cFN0fOYY

42
 Actividad práctica 5. Parásitos de importancia en salud.

Introducción
La parasitología es la división de la biología que tiene por objeto de estudio el
parasitismo generado por protozoarios, helmintos y artrópodos; siendo el
parasitismo la relación simbiótica en la cual un organismo (parásito) vive a
expensas de otro (denominado huésped) y le ocasiona daño.
Los protozoarios son organismos eucariotas, unicelulares, que no poseen
pared celular, heterótrofos -en su mayoría-, algunos móviles según el aparato
de locomoción que posean, con reproducción asexual y sexual. Los helmintos
son organismos eucariotas, pluricelulares que conforman gusanos que se
pueden clasificar en tres filum: platelmintos, nematodos y acantocéfalos; sin
embargo, los parásitos de importancia médica se encuentran en los dos
primeros filum mencionados.
Los platelmintos son gusanos planos de simetría bilateral, que pueden ser de
vida libre o endoparásitos, no poseen sistema circulatorio, pero si un sistema
digestivo. Estos gusanos se clasifican en tres clases, siendo las clases
Trematoda (duelas) y Cestoda (tenias) en donde se localizan parásitos de
humanos y animales. Los nematodos son gusanos cilíndricos, no segmentados
que mudan periódicamente su cutícula y se reproducen sexualmente,
depositando aproximadamente 200.000 huevos por día. Poseen sistema
digestivo completo (boca-ano) y su boca presenta estructuras particulares
adaptadas a su estilo de alimentación. Dentro de este grupo se encuentran el
oxiuro (Enterobius vermicularis), el trichuro (Trichuris trichiura), las uncinarias
(Ancylostoma spp. y Necator spp.), nematodo (Ascaris lumbricoides) y la
triquina (Trichinella spiralis).
Por otra parte, los artrópodos son animales invertebrados cuya característica
principal es la presencia de apéndices articulados. Así mismo, poseen simetría
bilateral, ojos compuestos, un exoesqueleto conformado por quitina

y segmentación variable en donde se pueden encontrar los apéndices

articulados; por ejemplo, en insectos se pueden identificar tres segmentos:
cabeza, tórax y abdomen. En su mayoría son ovíparos, pero en algunos grupos
puede darse la ovoviviparidad y la viviparidad. Estos animales se dividen en
cuatro grupos: Quelicerados (arañas, ácaros), Crustáceos, Hexápodos
(insectos: moscas, mosquitos, pulgas, piojos), Miriápodos (ciempiés y milpiés).
Su importancia radica en que estos pueden causar patologías directas
(parasitosis, reacciones alérgicas) o patologías indirectas, debido a que pueden
actuar como vectores o huéspedes intermediarios de microorganismos
patógenos.

43
Finalmente, para que los protozoarios, helmintos y artrópodos lleguen a ser
parásitos tienen que existir ciertas condiciones tanto del parasito como del
huésped, entre ellas se encuentra la cantidad de parásitos inoculados, factores
de virulencia, fase del parásito y la susceptibilidad del huésped.

Objetivo Actividad práctica 5

Observar parásitos causantes de enfermedades de importancia en salud
pública.

Materiales de la práctica de laboratorio mediado

 Protocolo de laboratorio
 Elementos de protección personal (bata, guantes, tapabocas, gorro,
zapatos cerrados).
 Toallas de papel absorbente, jabón de manos, papel de arroz
 Explorar el Atlas Socalemi, sección de parasitología en:
Sociedad Castellano-Leonesa de Microbiología. (s.f.). Atlas de
microbiología. http://www.socalemi.es/index.php/atlas-de-
microbiologia

 Ver vídeo Parásitos en:

WatchMojo Español. (2018, 25 de octubre). ¡Top 10
ATERRADORES PARÁSITOS Alrededor del Mundo!. [video].
YouTube. https://www.youtube.com/watch?v=RTI1DB42BZ4

Material que le será proporcionado en el Laboratorio

 Microscopio.
 Estereomicroscopio.
 Láminas demostrativas.
 Balde de desechos.

Procedimiento
1. El tutor que lo acompaña en el laboratorio enfocará las láminas
demostrativas disponibles en los microscopios.
2. Después de que las láminas han sido enfocadas, no mueva la platina del
microscopio.
3. Para enfocar los objetos a observar, use el tornillo micrométrico del
microscopio.
4. Escriba sus resultados.

Cuestionario y resultados

44
1. ¿Qué son las geohelmintiasis? Mencione 5 medidas preventivas para estas
parasitosis.
Es una palabra compuesta por otras dos: Geo, de origen griego, que significa
tierra o suelo. Helminto, también derivada del griego, que significa gusano.
Se refiere a la infección causada por ingestión de alimentos o bebidas
contaminadas con huevos de gusanos procedentes del suelo, o por
penetración de larvas o gusanos de estos parásitos a través de la piel cuando
el suelo está contaminado con materia fecal.
Las geohelmintiasis de mayor importancia en salud pública son producidas por
cuatro parásitos cuyas formas adultas se alojan en el intestino y sus huevos se
eliminan por las heces; los nombres en latín, son:
 Áscaris lumbricoides (lombrices intestinales)
 Trichuris trichiura (Gusano)
 Ancylostoma duodenale (Gusano)
 Necator americanus (Gusano).

Recomendaciones medidas preventivas para estas parasitosis.

 Tener buenos higienes personales.
 Lavarse las manos constantes.
 Utilizar calzados.
 Lavar los alimentos antes de consumirlos.
 Mantener limpio y aseado el sitio de vivienda

2. Con la información suministrada en la sesión del laboratorio, seleccione tres

organismos (Parásitos) y complete la siguiente tabla:

Nombre Dibujo del Tipo de Característic Patología

del organismo o parasito as con la que
organism fotografía (protozoari observadas se relaciona
o o, para su
helminto, tipificación
artrópodo)
Algas protozoario Traslucidos Toxoplasmos
unicelulare Ciliados is
s paludismo
(Navicula)

45
 Flagelado protozoario Flagelados enfermedad
s del sueño y
(Euglema) la
enfermedad
de Chagas

3. Observe las siguientes fotografías y complete la tabla:

A. B.

C.

Fuente: Fotografías tomadas de Pinterest,

Wikipedia e imágenes de google de acceso libre.

46
 Tipo de
parasito
(protozoa
Nombre Características
rio, Patología con
del Nombre del observadas
helminto la que se
organis organismo para su
(huevo- relaciona
mo tipificación
adulto),
artrópodo
)
A. protozoari Quiste maduro Considerada
Entamoe o. mide entre 15 y no patógeno y
ba coli 25 um y residen en el
huésped presenta 8 intestino
humano. núcleos. Forma grueso del
esférico En el huésped
citoplasma del humano.
se observan
espículas
irregulares
llamadas
cromátides..
B. protozoari Tiene dos vector es el
Leishma o. formas phletobotomino
nia spp. amastigote: , una
ovoide, con subfamilia de
núcleo mosquitos, El
lateralizado, se protozoario se
encuentra transmite al
intracelularmente huésped a
en las células través de la
fagocíticas del picadura.
vector. Causa La
Promastigote: leishmaniasis
alargada, con cutánea afecta
núcleo y flagelo la piel y las
centralizados, se membranas
incuentra tracto mucosas.
intestinal del leishmaniasis
vector visceral fiebre
prolongada,
hepatomegalia
esplenomegali
a, anemia y
disminución de
la fuerza
muscular

47
 Tipo de
parasito
(protozoa
Nombre Características
rio, Patología con
del Nombre del observadas
helminto la que se
organis organismo para su
(huevo- relaciona
mo tipificación
adulto),
artrópodo
)
C. protozoari Flagelado. Adquiere de
richomo o. Anaerobio forma
nas exclusiva por
vaginalis las relaciones
sexuales.
(Infección de
transmisión
sexual). Por
fómites como
toallas y
retretes, al
igual que el
agua y el
barro.

4. De acuerdo con lo observado en el vídeo y lo que ha consultado: ¡Top 10

ATERRADORES PARÁSITOS Alrededor del Mundo!, ¿qué características
hacen que los parásitos sean exitosos infectando poblaciones? Explique,
brevemente, su repuesta.

RTA: Hay parásitos que pueden alterar el comportamiento o la morfología

de los individuos. Dicho cambio produce alteraciones en las interacciones
con otros organismos, lo que a su vez provoca alteraciones en el
funcionamiento de los ecosistemas. Los parásitos se hacen efectivos
infectando a los humanos debido a los cambios de temperatura
ambientales, además que en el planeta el 50% de los organismos vivos son
parásitos, encontrándose tanto en animales vertebrados como en
invertebrados, de igual manera al consumir agua no potable o al comer
verduras mal lavadas o al ingerir vestigios de heces fecales bien sea por
acudir a un rio o al consumir agua o alimentos contaminados por heces
fecales

5. Registre las referencias citadas, usando norma APA vigente

(S/f-b). Gov.co. Recuperado el 18 de noviembre de 2022, de
48
 http://www.saludtolima.gov.co/entornos-saludables-sabes-que-es-

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51