Javier Matamala, jamatamala2018@udec.

cl, Ingeniería Genética en Plantas

La sobreexpresión de BnKCS1-1, BnKCS1-2 y BnCER1-2 promueve la

producción de cera cuticular y aumenta la tolerancia a la sequía en Brassica
napus.
La cera de la superficie de a planta forma una capa hidrofóbica que cubre los
organelos aéreos de la planta, estas se componen de ácidos grasos de cadena
muy larga (VLCFAs) y sus derivados, incluidos aldehídos, alcanos, alcoholes
secundarios, cetonas, alcoholes primarios y ésteres de cera. Las ceras vegetales
sirven como una barrera protectora contra la perdida de agua, la luz ultravioleta,
los patógenos y los insectos. En estudios recientes se han hecho modificaciones
de las ceras para mejorar la tolerancia a la sequia de las plantas. A demás, existen
otras funciones de la cera como materia prima. Sin embargo, existen pocas
especies que se utilizan para la producción de la cera por lo tanto la
transformación genética seria una buena alternativa para la producción de cera
vegetal para la industria.
Brassica napus conocida comúnmente como canola o raps es un cultivo de gran
importancia ya que de sus semillas se extraen aceites y productos industriales
como biocombustibles, lubricantes, fluidos hidráulicos y plásticos. Para la canola la
sequía es perjudicial ya que afecta su rendimiento y una alternativa a combatir
este estrés es la modificación de la cera en la hoja por lo cual también se podría
utilizar como un cultivo industrial para producir cera.
En la planta modelo Arabidopsis thaliana se han realizado grandes avances en el
aislamiento y la identificación de los genes implicados en la biosíntesis de la cera
cuticular. La familia de genes KCS codifica la 3-cetoacil CoA sintasa, que controla
la cantidad y la identidad de los VLCFA producidos en tipos de células y tejidos
específicos. Gracias a estudios previos se sabe que Una serie de genes
ECERIFERUM (CER) como CER1, CER2, CER3 y CER4 participan en los pasos
finales de la biosíntesis del monómero de cera en Arabidopsis.
En el presente estudio, se aislaron genes de Brassica napus ortólogos a KCS1 y
CER1, denominados BnKCS1-1, BnKCS1-2 y BnCER1-2. Se investigaron los
efectos de estos genes en los componentes y la estructura de la cera cuticular
expresándolos en exceso en Brassica napus y caracterizando los efectos de las
modificaciones de la cera cuticular en el crecimiento y desarrollo de las plantas y
en las respuestas de las plantas al déficit de agua del suelo.
Para este estudio se utilizaron dos cultivares de B. napus con diferentes rasgos de
cera, Zhongshuang11 (ZS11) y NoWAX. ZS11 se usó para la clonación de genes
y la transformación genética de B. napus
BnKCS1-1, BnKCS1-2 y BnCER1-2 afectan los perfiles químicos de la cera
cuticular en plantas transgénicas. En este estudio, el aumento en la acumulación
total de cera foliar por área de superficie en un 30-46% y 32-76% en BnKCS1-1 y
BnKCS1-2 respectivamente de las líneas transgénicas de B. napus pueden

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atribuirse principalmente a aldehídos, alcanos y alcoholes secundarios. Se sugiere

que BnKCS1-1 y BnKCS1-2 pueden estar involucrados en la producción de
VLCFAs más largos para ceras cuticulares. En comparación con las plantas no
transformadas, las líneas transgénicas mostraron distribuciones de cadenas de
carbono más largas de aldehídos como alcanos y alcoholes primarios y
distribución de cadenas más cortas de alcoholes secundarios. El aumento de la
densidad del cristal de cera en la superficie de las hojas transgénicas de Brassica
napus en relación con las plantas no transformadas respalda la idea de que
BnKCS1-1 y BnKCS1-2 influye en la producción de cera. En este estudio la
sobreexpresión de BnCER1-2 condujo a un aumento significativo de la cera total,
lo que indica que este gen desempeña un papel en la biosíntesis de alcanos VLC
de cera de Brassica napus.
Los niveles de producción de cera en las hojas transgénicas de B. napus son más
altos en 1 a 3 kg por hectárea que las hojas de B. napus no transgénicas lo que es
muy bajo para la producción industrial de cera, pero esta investigación revela
posibles genes para la producción biotecnológica de cera a partir de cultivos.
Las transcripciones de BnKCS1-1 y BnKCS1-2 y BnCER1-2 aumentaron
significativamente en plantas sometidas a estrés por sequía, lo que sugiere que
estos tres genes están fuertemente involucrados en la respuesta de las plantas al
déficit hídrico.
Los resultados demostraron que ABA (acido abscísico) indujo la expresión de
BnKCS1-1 y BnKCS1-2 pero no ejerció ningún efecto en la expresión de BnCER1-
2 lo que indica que BnKCS1-1 y BnKCS1-2 podrían actuar de forma independiente
de ABA para participar en la respuesta al estrés por sequía.
La permeabilidad de la cutícula al agua juega un papel importante en la
adaptación de la planta a la sequía lo que hace que las hojas no pierdan agua. En
este estudio, se mostraron tazas reducidas de perdida de agua y mayor tolerancia
a la sequía gracias a la sobreexpresión de los genes BnKCS1-1, BnKCS1-2 y
BnCER1-2. Estos cambios pueden estar relacionados con los cambios en los
perfiles de composición de la cera, la distribución de la longitud de la cadena o los
arreglos de empaquetamiento de las moléculas de ceras individuales.
La sobreexpresión de BnKCS1-1 y BnKCS1-2 condujo a un aumento del 39% al
88% en los alcanos y de 86% al 152% en los alcoholes secundarios lo que resultó
en un aumento del 30% al 76% en la cera total. En las líneas transgénicas
BnCER1-2 la cantidad de alcanos aumentó entre un 23% y un 34%, lo que resultó
en un aumento del 10% de la cera total. Esto quiere decir que los alcanos son
importantes en la reducción de la permeabilidad de la cutícula, es por ello que
juegan un rol fundamental en la respuesta al déficit hídrico.

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Conclusiones
BnKCS1-1, BnKCS1-2 y BnCER1-2 están involucrados en la producción de cera
cuticular de B. napus. Su sobreexpresión puede modificar las cantidades,
composiciones y estructuras de la cera cuticular y, por lo tanto, aumentar la
tolerancia al estrés por sequía en B. napus transgénico.

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