Método Numero Más Probable

La presencia de microorganismos patógenos en el agua de bebida puede generar

problemas de salud en los animales, por lo que el monitoreo constante de la calidad
microbiológica es importante.
Uno de los procedimientos que se llevan a cabo para determinar la presencia de
patógenos en agua, es el método del Número Más Probable (NMP), con el cual se puede
hacer una estimación de la cantidad de bacterias coliformes totales y fecales por
mililitro de agua. Entre las bacterias coliformes se encuentran Escherichia coli y
Salmonella spp; bacterias patógenas que provocan afecciones gastrointestinales y
pueden llevar a la muerte ocasionando pérdidas económicas en la producción.

Agua contaminada de uso pecuario

Las bacterias patógenas en el agua pueden provocar afecciones gastrointestinales e
incluso la muerte
La técnica del NMP consiste en la inoculación de una muestra de agua diluida en tubos
que contienen medio de cultivo líquido selectivo, y lo que se busca es saber si presenta
algún tipo de contaminación bacteriana. Es importante que la muestra sea enviada en una
bolsa de cierre hermético o frasco estériles para evitar cualquier contaminación externa.

La técnica se basa en la determinación de presencia o ausencia en réplicas de diluciones

consecutivas de atributos particulares de microorganismos presentes en muestras de suelos u
otros ambientes. Por lo tanto, un requisito importante de este método es la necesidad de poder
reconocer un atributo particular de la población en el medio de crecimiento a utilizarse. El
estimado de densidad poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en
diluciones seriadas y el uso de una tabla probabilística. El atributo particular a usarse en esta
técnica es la capacidad de microorganismos a formar colonias en medios sólidos de crecimiento.
La metodología es la siguiente:

1) Muestras: colecte asépticamente las muestras frescas de suelo (10 gr) de varios lugares, u
obtenga muestras de agua (10 ml) de lagos, ríos o charcos.

2) Extracción de microorganismos viables: para muestras de suelo, las células podrán ser
removidas y homogenizadas añadiendo 1 gr de la muestra a un tubo de ensayo que contenga 9 ml
de solución salina. Agite moderadamente por 5 minutos en un vortex.

3) Diluciones en serie: el extracto de suelo puede ser diluido seriamente transfiriendo 1ml a un
tubo con 9 ml de 0.85% NaCl. Repetir en serie el procedimiento hasta alcanzar una dilución 10-7.
Para muestras líquidas, mezcle bien la muestra y proceda a preparar las diluciones seriadas según
el procedimiento anterior.

4) Placas Petri: utilizando un marcador, dividir la caja Petri en cinco zonas de igual tamaño. Use
una caja por cada muestra. Rotule cada zona con el factor de dilución a ser inoculado.

5) Inoculación: transfiera 5µl de la dilución apropiada al área correspondiente. Repita esta

operación cinco veces por cada dilución.

6) Permita que el inoculo seque sobre el medio de crecimiento. Selle la placa con una trilladle
de parafina, invierta la placa e inocule a 25ºC por 7 días.

7) Evaluación del crecimiento: para cada dilución es ascendencia evalué el crecimiento o No

crecimiento sobre cada replica inoculada. Reporte los resultados como se indica a continuación: