Extracto de Carne

Es utilizado para trabajos generales en bacteriologa y como base nutritiva en los medios de cultivo para el crecimiento de diversos microorganismos. El extracto de carne est preparado a partir de carne de vacuno fresca. Se encuentra en diversas formulaciones como base nutritiva. Polvo de color beige, soluble en agua. Especificaciones pH sol. 2%..................................................................... 6,5 -7 Prdida por desec. a 105C......................................... ...... 6 % Residuo de calcinacin (en SO 4)....................................... 16 % Nitrgeno total............................................................. 10 % Conservar en lugar fresco y seco

Triptona
Es el producto resultante de una digestin pancretica de casena. Se usa como fuente de nitrgeno en algunos medios de cultivo destinados a la determinacin de hongos y ciertas bacterias. Especificaciones pH sol. 2%.................................................................. 6,5 -7,5 Prdida por desec. a 105C............................................. 10 % Residuo de calcinacin (en SO 4)....................................... 15 % Nitrgeno total............................................................... 5 %

Eosina Azul de Metileno (EMB), Agar

Se emplea como medio diferencial para el aislamiento y diferenciacin de bacterias entricas Gramnegativas.
Historia Los primeros en desarrollar este medio fueron Holt -Harris y Teague, que a partir de la mezcla de azul de metileno y eosina consiguieron un efecto diferenciador muy claro entre las bacterias capaces de fermentar la lactosa y las que no lo eran. La inclusin de la sacarosa fue propiciada para aquellos microorganismos que fermentan con dificultad la lactosa, y fcilmente la sacarosa. Fundamento Por la combinacin de estos dos colorantes y los dos hidratos de carbono se pueden distinguir algunos gneros. Las bacterias lactosa-negativas y sacarosa negativas (Salmonella y Shigella) dan colonias

incoloras, mientras que las lactosa y/o sacarosa-positivas dan colonias prpura-violeta negruzco con/sin un centro oscuro y quedan rodeadas de una zona incolora. Por el efecto de estos mismos colorantes tambin queda inhibido el crecimiento de la microflora acompaante, sobre todo la Grampositiva. Tambin es posible la identificacin de Candida albicans.
Frmula (por litro) Composicin (g/l): Eosina Amarillenta............................................... 0,4 Lactosa............................................................... 5,0 di-Potasio Hidrgeno Fosfato................................ 2,0 Agar................................................................. 13,5 pH: 7,20,2

Azul de Metileno...............................................0,065 Peptona Bacteriolgica.......................................10,0 Sacarosa........................................ ......................5,0

Preparacin Suspender 36 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. No sobrecalentar. Distribuir y esterilizar a 121C durante 15 minutos. Modo de empleo Sembrar en la superficie del medio. Incubar entre 35 y 37C de 18 a 24 horas. Bibliografa Examination of Dairy Products. 10th ed. APHA. (1953)

Control de Calidad
Control fsico-qumico

Aspecto: polvo fino Solubilidad: opalescente con precipitado Color: prpura rosado pH: 7,20,2 Control microbiolgico Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 352C y observados a las 24-48 horas. Microorganismos Desarrollo Color de la colonia Enterobacter aerogenes Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Salmonella typhimurium Staphylococcus aureus
13

ATCC 13048 Satisfactorio Rosa ATCC 25922 Satisfactorio Prpura-violeta con brillo verde metlico ATCC 10145 Bueno Incolora ATCC 14028 Satisfactorio Incolora ATCC 25923 Pobre-Nulo Incolora

MacConkey, Agar (Ph. Eur.)

Medio de cultivo utilizado en la investigacin de organismos coliformes. Sinnimo Medio H. Historia Este medio se basa en la frmula original de MacConkey a base de sales biliares, rojo neutro y lactosa para el aislamiento de bacilos entricos Gram-negativos. El medio ha sufrido mltiples variaciones en el transcurso del tiempo, ya sea por la adicin de otros ingredientes o por la modificacin de las proporciones entre ellos. Actualmente corresponde a las recomendaciones de la USP y la Ph. Eur. Fundamento Por la presencia de las sales biliares y el cristal violeta se inhibe el crecimiento de las bacterias Grampositivas. Por la presencia de la lactosa, las bacterias capaces de fermentarla acidifican el medio, cambiando el color del rojo neutro y formando colonias rojas o rosadas, pudiendo presentar un halo turbio correspondiente al precipitado biliar. Las bacterias lactosa-negativas dan colonias incoloras. Frmula (por litro) Composicin (g/l): Lactosa....................................... 10,0 g Sales Biliares............................... 1,5 g Rojo Neutro................................. 0,03 g Violeta Cristal.............................. 0,001 g pH final: 7,10,2

Peptona (carne y casena)...................3,0 g Peptona de Gelatina........................17,0 g Sodio Cloruro....................................5,0 g Agar....................................... ........13,5 g

Preparacin Suspender 50 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121 C durante 15 minutos. Dejar enfriar hasta 45 C y distribuir en placas de Petri estrile s con 20 ml en cada una. Dejar solidificar las placas parcialmente destapadas. Modo de empleo Sembrar la muestra por estra en la superficie de la placa preenriquecida en MacConkey, Caldo. Incubar a 35 -37 C de 18 a 72 horas. La Farmacopea indica este medio para el control de E.coli. Sembrar sobre MacConkey Agar muestra preenriquecida en TSB (413820) y posteriormente enriquecida en MacConkey Caldo (413780). Incubacin de las placas inoculadas a 30 -35C durante 18-72 horas. El crecimiento de colonias sobre el medio indica presuncin de E.coli. Confirmar con tests identificativos.

McConkey diferencia lactosa(+) de lactosa(-).

Agua de Peptona
Se emplea como diluyente en muestras alimentarias, aguas y materiales diversos. Para la realizacin de la prueba del Indol en aquellos microorganismos capaces de producirlo. Fundamento La triptona tiene una elevada concentracin de Triptfano, el cual es degradado a Indol por un cierto nmero de microorganismos entre ellos E.coli. La deteccin de este producto se hace aadiendo el reactivo de KOVACS despus de la incubacin. Este medio es adecuado para determinar los organismos Indol -positivos y puede utilizarse en lugar de los Caldos Triptfano. En usos generales se puede emplear para el cultivo de una gran va riedad de microorganismos, siempre y cuando no presenten exigencias particulares. Frmula (por litro) Composicin (g/l): Triptona....................................... 10 g Sodio Cloruro ............................. 5 g pH final: 7,20,2 Preparacin Suspender 15 g en 1 l de agua destilada; agitar hasta disolucin total. Distribuir y esterilizar a 121 C durante 15 minutos. Modo de empleo Sembrar tubo de Agua de Peptona con un cultivo puro a estudiar e incubar a 352 C (en el estudio de Escherichia coli la temperatura ser de 44 C) durante 24 -48 horas. Aadir 0,5 ml de Reactivo de Kovacs al tubo para el estudio del Indol. Los microorganismos Indol positivos generan, en menos de 1 minuto, un anillo rosa intenso -rojo. Los microorganismos Indol negativos no producen cambio de color. Como alternativa al Reactivo de Kovacs, se puede utilizar tiras preparadas (Biofix Indol). Reactivos auxiliares Reactivo de Kovacs DC (cd.:252908) Tiras del Indol CULTIMED (cd. 416445.0922)

SIM, Medio
Se emplea para la identificacin y diferenciacin de Enterobactericeas en funcin de la produccin de

Hidrgeno sulfuro, Indol y la Movilidad.

Historia La experiencia adquirida en la diferenciacin de Salmonella y Shigella de organismos Coliformes basada en la produccin de hidrgeno sulfuro y la movilidad o no de estas bacterias dio lugar a la preparacin de este medio. Actualmente corresponde a las recomendaciones en la APHA. Fundamento La mezcla de peptonas constituye el elemento nutritivo del medio. La movilidad se manifiesta mediante una turbidez que se forma alrededor de la lnea de siembra . El Sodio Tiosulfato y el Amonio Hierro(III) Sulfato permiten poner de manifiesto la formacin de Hidrgeno de Sulfuro por el precipitado negro que se forma . La produccin del Indol es fcilmente detectable al aadir unas gotas de reactivo de Kovacs al cultivo. Frmula (por litro)

Composicin (g/l): Amonio Hierro(III) Sulfato............. 0,2 g Peptona de Carne........................ 6,1 g Peptona de Casena..................... 20,0 g Sodio Tiosulfato........................... 0,2 g Agar........................................... 3,5 g pH final: 7,30,2 Preparacin Suspender 30 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullicin y hervir d urante 1 minuto. Distribuir en tubos y esterilizar a 121 C durante 15 minutos. Dejar solidificar en posicin vertical. Modo de empleo Sembrar a partir de un cultivo puro por picadura. Incubar a 352 C de 18 a 24 horas. Si el microorganismo es mvil se observa turbidez en todo el medio, mientras que si es inmvil slo hay crecimiento en la lnea de siembra. La presencia de Indol da lugar a una coloracin rojo -prpura al aadir el reactivo de Kovacs. Reactivos auxiliares Reactivo de Kovacs DC (cd.: 252908)

TSI Agar
Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico. Fundamento En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hi erro y 3+ amonio, es la fuente de iones Fe , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro. Frmula (en gramos por litro) Instrucciones Extracto de carne 3.0 Pluripeptona 20.0 Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua Cloruro de sodio 5.0 destilada. Mezclar bien y calentar con Lactosa 10.0 agitacin frecuente, hervir 1 o 2 minutos Sacarosa 10.0 hasta disolucin total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a Glucosa 1.0 121C por 15 minutos. Enfriar en pico de Sulfato de hierro y amonio 0.2 flauta profundo. Tiosulfato de sodio 0.2 Rojo de fenol Agar 0.025 13.0 pH final: 7.3 0.2

Siembra A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio. Incubacin A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis. Resultados 1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa. 2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.

 4 "  " # 4  "    " # !   "    "     "$ !  "  % P @7 @ I8 6 D 8 86 H 8D 8 "$ #G  ! " # 4 !  " %  &   # "!   "     !      !F  !   "   4  "  4  # "  % @78 5    G  F ! "F  " 4  &  "E
es 20

DD 6

12

0 1

 ('" & "    "$     %   "     "$ # "  "" # "! "!              
e e c j s e e c c j e e ee j e c ec v c s c s es e ee c ce c s e s c e ce c es s

Si

3- c c 4ese c 5- e e ec

onsCit toA

))

ee c c ee e ce e s c c c e e ec n os po lit o

se

nst u ion s

6 6 786A @9 8 76 5( B !   "     "  ! #   !  4  " 3

c c ul ye

e e

es

50 10 10 02 0 08 15 0

    

E

F s F s S

6902 und nto e e ec v e s c es c e e e e ye c c e e ec sc e es s eces s e es ce s s es e s ss e e e es es c c e c c es e ee ce s c ye e es e c i l olo ul n dio l lino e e c v es e e c e se e s c s sc ces e c c e e ec s s es e c c e e e e c c cc e c e e sc es c

es

es

e e e