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FACULTAD DE MEDICINA D.A.
GUIA PRACTICA DE LABORATORIO CLINICO
FACULTAD DE MEDICINA HUMANA DANIEL ALCIDES CARRION
PR
:8
Examen de orina completo

El anlisis de orina es importante ya que proporciona informacin para la deteccin, diagnstico diferencial y valoracin de alteraciones nefro -urolgicas asi como del funcionamiento del metabolismo. El anlisis de orina consta de: 1. observacin de la muestrapermite realizar un diagnstico presuntivo previo al anlisis qumico y microscopio 2. examen qumico
Se realiza con tiras reactivas las cuales permiten determinar la glucosa,bilirrubina,acetona,densidad,sangre,pH,protenas,etc y asi obtener informacion del metabolismo de carbohidratos, funcin heptica y renal, balance cidobase e infecciones del tracto urinario.
3. examen microscpico Permite observar clulas, cristales urinarios, moco y otras sustancias e identificar la presencia de microorganismos 2.- Esquematice la tcnica para procesar un examen completo de orina EXAMEN MICROSCPICO DEL SEDIMENTO URINARIO
El examen del sedimento urinario revela tres clases de sustancias 1. Estructuras organizadas(bacterias, cilindros, espermatozoides,corpusculos de pus, celulas epiteliales y sanguineas y parasitosanirnales. 2. Sedimento granuloso o cristalino no organizado(cristales y glbulos de grasa) 3. Materias extraas a causa de la contaminacin accidental En el estudio del sedimento urinario se emplea diversos equipos fundamentales
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y y y y y
Una centrifugadora simple. Un microscopio estandar Filtros de luz polarizante Medios de cultivo y equipo de cristal adecuados para la observacin de germenes Incubador y refrigerador
PROCEDIMIENTO I. Agitar la muestra. 2. Centrifugar a velocidad moderada duranteun cierto tiempo 3. Eliminar el liquido sobrenadante. 4. Pasar una gota del sedirnento a un porta y taparla con un cubre. EXAMEN QUMICO DEL SEDIMENTO URINARIO
Glucosa: Debe ser negativo .Si la glucemia supera el dintel renal,la glucosa aparece en la orina. Cuerpos cetonicos: Debe ser negativo.Se le denomina Cetonuaria si es positivo Hemoglobinuria: Se lleva acabo en el bazo ,medula osea y en el hgado.Si el nivel de hemoglobina en la sangre es alto,este aparecer en al orina Nitritos: Reactivo compuesto por combinacin de acidosulfanilico y alfa naftalina .Es positivo debido a la presencia del nitrato reductasa en la enterobacterias y presencia de nitratos en la orina. Bilirrubina:Su presencia revela la obstruccion de los conductos biliares Urobilina: normalmente positivo y aumenta en la anemia hemoltica debido a la produccin de bilirrubina. Sangre: Se puede observar la actividad de tipo peroxidasa de la hemoglobina Densidad: Informa el estado hdrico. Un aumento de este indica deshidratacin y su disminucin indica la r etencin de nitrgeno ureico
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SEDIMENTO URINARIO Citologico:Los leucocitos se consideran hasta 4 por campo a mayor aumento en cambio 5 o mas se considera patolgico y sugestivo de infeccin urinaria Piuria: Si presenta un cultivo negativo puede indicar infeccin de bacterias no usuales Hematuria: Presencia de hemates en la orina y puede ser macroscpica o microscpica. Cilindros:Son clulas epiteliales tubulares indicadores de lesiones de los tubulos y la nefronas renales.Se originan por el espesamiento de las protenas o su precipitacin en el tbulo distal. La presencia de cilindros indica casi siempre la presencia de una enfermedad renal. Existen diversos tipos de cilindros: granuloso, creos, epiteliales, eritrocitarios, etc. Cristales:La presencia de cristales de urato,fosfatos y oxalato puede ser detectada en pacientes normales y formadores de clculos.
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Practica: 10
PRACTICA N 3 SUSTANCIAS NITROGENADAS NO PROTEICAS, DOSAJE DE CREATININA Y DEPURACIN DE CREATININA ENDGENA Las protenas son macromolculas formadas por unidades bsicas llamadas aminocidos, los cuales poseen en su estructura un grupo amino que los caracteriza, y un esqueleto hidrocarbonado. Las protenas animales estn constitudas por veinte aminocidos diferentes, los cuales son necesarios para la sntesis de protenas corporales y otros compuestos nitrogenados. En nuestro organismo las protenas estn siendo continuamente degradadas y resintetizadas. El proceso de intercambio de aminocidos entre los difere ntes rganos y la permanente sntesis y degradacin es conocido como recambio proteico. Los procesos oxidativos y ciclos metabolicos especficos de los aminocidos dan origen a productos nitrogenados residuales que son principalmente eliminados a travs de la va renal. El nitrgeno es adems eliminado por prdidas fecales y otras vas (sudor, piel y anexos), estas prdidas de nitrgeno deben ser compensadas por el aporte proteico de la dieta. El mecanismo ms importante de eliminacin de nitrgeno es a travs de la orina, traducido en la excrecin de Urea (Nitrgeno Ureico), y otros compuestos nitrogenados tales como Amonio, cido rico, Creatinina y Aminocidos. La cuantificacin de las prdidas proteicas es un elemento importante durante la enfermedad pu esto que las prdidas por vas no habituales (drenajes, fstulas,etc.) pueden estar aumentadas, o bien la tolerancia a las protenas puede ser limitada, de esta forma la medicin de los requerimientos proteicos de
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cada paciente es importante para su adecuada nutricin CREATININA La creatinina es un compuesto orgnico generado a partir de la degradacin de la creatina (que es un nutriente til para los msculos). Es un producto de desecho del metabolismo normal de los msculos que usualmente es producida por el cuerpo en una tasa muy constante (dependiendo de la masa de los msculos), y normalmente filtrada por los riones y excretada en la orina. La medicin de la creatinina es la manera ms simple de monitorear la funcin de los riones. Principalmente es filtrada por el rin, aunque una cantidad pequea es activamente secretada. Hay una cierta reabsorcin tubular de la creatinina, pero esta es compensada por un grado ms o menos equivalente de la secrecin tubular. Si el filtrado del rin es deficiente, los niveles en la sangre se elevan. Este efecto es usado como indicador de la funcin renal. Sin embargo, en los casos de disfuncin renal severa, la tasa de separacin de la creatinina ser sobrestimada porque la secrecin activa de la creatinina explicar una fraccin ms grande de la creatinina total despejada. Una creatinina y un BUN( nitrgeno de urea en sangre) ms altos de lo normal tambin pueden ser indicativos de deshidratacin cuando el cociente de BUN a creatinina es anormal, con niveles de BUN elevndose ms alto que los niveles de creatinina. Los hombres tienden a tener niveles ms altos de creatinina porque tienen msculos esquelticos ms grandes que los de las mujeres.
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Uso en diagnstico Medir la creatinina del suero es una prueba simple y es el indicador ms comn de la funcin renal. Una subida en los niveles de creatinina de la sangre solamente es observada cuando hay un marcado dao en los nefrones. Por lo tanto esta prueba no es conve niente para detectar estados tempranos de enfermedad del rin. Una mejor valoracin de la funcin del rin es dada por la prueba de separacin de creatinina. La separacin de creatinina puede ser calculada con precisin usando la concentracin de la crea tinina del suero y alguna o todas las variables siguientes: sexo, edad, peso, y raza segn lo sugerido por la National Diabetes Association con una recoleccin de orina de menos de 24 horas. Algunos laboratorios calcularn el ClCr si est escrito en la forma de solicitud de la patologa; y, la edad, el sexo, y el peso necesarios son incluidas en la informacin del paciente.
1 mg/dL de creatinina son 88.4 mol/l.
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VALORES NORMALES DE CREATININA EN SANGRE MUJERES HOMBRES FISIOCULTURISTA 2.0 mg/dL MASCULINO 0.7 mg/dL MUJER ANCIANA Enf renal significativa 60 mol/l 150 mol/l 0.5 a 1.0 mg/dL 0.7 a 1.2 mg/dL 45 a 90 mol/l 60 a 110 mol/l
Ms importante que un nivel absoluto de creatinina es la tendencia de los niveles de la creatinina en un cierto plazo. Un nivel creciente de creatinina indica dao del rin, mientras que un nivel de creatinina que declina indica una mejora de la funcin del rin. UREA La urea es un compuesto qumico cristalino, incoloro, de frmula CO( H2)2. Se N encuentra abundantemente en la orina. Es el principal producto terminal del metabolismo protdico en el hombre y en los mamferos, y es excretada en grandes cantidades por la orina . En cantidades menores, est presente en la sangre, en el hgado, en la linfa y en los fluidos serosos, y tambin en los excrementos de los peces y muchos otros animales inferiores. La urea se forma principalmente en el hgado como un producto final del metabolismo. El nitrgeno de la urea, que constituye la mayor parte del nitrgeno de la orina, procede de la descomposicin de las clulas del cuerpo pero, sobre todo, de las protenas de los alimentos.
El cuerpo produce en promedio 25 a 30 gramos de urea al da algo ms en personas

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que comen dieta rica en protenas, menos en personas con dieta pobre en protenas. Toda esta urea debe eliminarse por orina; de lo contrario se acumular en lquidos corporales. Su concentracin normal promedio en el plasma es de 0.26 mg/dl, pero se han observado en estados anormales raros valores de hasta 8 mg/dl; y pacientes con insuficiencia renal muchas veces tienen valores tan altos como 2 mg/dl. Los dos factores principales que establecen el ritmo de excrecin de urea son: 1) la concentracin de urea en el plasma, y 2) la intensidad de filtracin glomerular. Estos factores aumentan la concentracin de urea principalmente porque la carga de urea que penetra en tbulos proximales es igual al producto de la concentracin plasmtica de urea por la intensidad de filtracin glomerular. En general, la cantidad de urea que sigue por los tbulos y va a la orina es aproximadamente proporcional a la carga de urea que penetra en los tbulos proximales, en promedio 50 a 60%. Sin embargo, esto solo es cierto cuando la intensidad de filtracin glomerular no se aleja de lo normal. Cuando la intensidad de filtracin glomerular es muy baja, el filtrado persiste en los tbulos por largo tiempo, antes de acabar en la orina. Como todos los tbulos son por lo menos ligeramente permeables a la urea, cuanto ms tiempo persista el liquido tubular en los tbulos, mayor resorcin de urea hacia la sangre; la proporcin de urea filtrada que llega a la orina disminuye considerablemente. Por otra parte, cuando la filtracin glomerular es muy intensa, el liquido pasa a travs del sistema tubular tan rpidamente que se resorbe muy poca urea. Por lo tanto con intensidad de filtracin glomerular muy elevada, casi el 100% de urea sale hacia la orina. Una leccin muy importante, que debe aprenderse de estas relaciones, es que en pacientes con insuficiencia renal es importante conservar la intensidad de filtrado glomerular en valores altos. Cuando la intensidad de filtracin glomerular disminuye demasiado, la concentracin de urea en sangre aumenta hasta un nivel proporcionalmente mayor.
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DOSAJ DE C EA N NA
1 C o se eli ina la C eatinina del Organismo?
es derivada del metabolismo de la creatina del msc lo, por degradacin enzimtica, slo 2% de ella es convertida cada da a creatinina y e cretada por la orina. La creatinina se filtra libremente a travs del rin y no se reabsorbe, por lo que refleja la capacidad del rin para llevar a cabo el proceso de eliminacin. La e crecin de creatinina es proporcional a la masa muscular y es relativamente constante en cada individuo. El ejercicio y la ingesta alta de carne pueden aumentar la creatinina su e crecin urinaria.
2 Para que se utili a la Depuracin de Creatinina endgena? Como sabemos la creatinina se filtra libremente a travs de los riones y no se reabsorbe y es
LAB
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La c eatina es la c
inacin de 3 aminocidos glicina, arginina y metionina. La creatinina
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secretada en forma mnima por los riones por lo tanto su capacidad de eliminacin se utiliza para estimar la tasa de filtracin glomerular.La cantidad de filtracin realizada en los riones depende de la cantidad de sangre que pasa a travs de los glomrulos y a la capacidad de stos para actuar como filtros. Tambin es el patrn por medio del cual se evala la funcin renal .
3 Por qu se prefiere la Creatinina Srica como ndice de funcin renal?
4 - Esquematice los fundamentos del mtodo de determinacin de creatinina
REAC VOS PROV STOS
1) Standard. Solucin de creatinina de 20 mg/l 2) Acido Pcrico: Solucin de acido pcrico en 41.4 mmol/L 3)Buffer: Solucin al 0,4% de Polioxietilen laurel ter(PLE) DANS 15 mmol/L en Buffer de glicina/NaOH, pH final 12.4 4)Ph final 12,4 5) Stopper: cido cetico al 20% El cido actico o stopper, se encarga de destruir el picrato de creatinina EDIO ALCALINO
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Por que a travs de su dosificacin podemos evaluar la funcin renal, cuando est anormal, muestra aumento en los niveles de creatinina en la sangre, debido a que en casos de disfuncin renal, sta no pasa con la misma facilidad hacia el rin (a travs de la filtracin y secrecin), por tanto queda acumulado en el torrente sanguneo consecuentemente se produce su aumento. Ahora estos niveles no solamente aumenta en problemas como insuficiencia renal, sino tambin en problemas como distrofia muscular. Adems pueden variar de acuerdo con la talla y masa muscular de la persona.
La creatinina reacciona con el cido pcrico en un medio alcalino d ndo un a cromgeno de color rojo que puede ser medido a 510 nm. El color rojo es directamente proporcional a la concentracin de creatinina.
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CREATININA (EN EL SUERO)
ACIDO ICRICO
5. Qu pasos se sigue para la obtencin del Suero?
Picronato de creatinina
Sustancia cromgena
La sangre se extrae de una vena (puncin venosa), usualmente de la parte interior del codo. Luego se procede Se deja al ambiente para que coagule durante unos 10 a 15 minutos. Luego se lleva a la centrifuga durante 5 a 10 minutos a unas 3000 RPM. Luego se separa el suero (el sobrenadante que se presenta en el tubo )
6Qu indicaciones tiene la recoleccion de orina, para la depuracin de la Creatinina Endgena? Tener las consideraciones generales (asepsia por ejemplo), y considerando que la muestra de orina obtenida para hacer una DCE, cumple una caracterstica fundamental, la cual debe ser de 24 horas; se le debe indicar a la persona que ingiera 1.5 L de agua en ese da y, mediante ese valor referencial, obtener la diuresis diaria razonable. La muestra se depositar en un envase limpio y deber tener su propia tapa. Dicha muestra dura 24 horas o de lo contrario deber refrigerarse por un lapso de 4 horas.
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7. Qu sustancias pueden interferir en la reaccin de creatinina ? Debido que primero se debe tomar una prueba de sangre para obtener una buena muestra de suero se debe tener en cuenta que la sangre no debe contener:
La presencia de bilirrubina a un nivel mayor de 50 mg/l. Ninguna clase de aditivo como: antibiticos, colorantes La hemlisis de mayor rango suele intervenir. Las protenas (siempre intervienen).
8. Qu material se requiere para el procesamiento de la muestra? Tenemos: Para la toma de muestra de sangre se requiere de aguja, jeringa descartable, algodn, alcohol, centrifuga. Pipetas Tubos de ensayo Bao Mara Fotocolormetro.
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9.Cul es el tiempo de estabilidad del color de la reaccin final? El tiempo es de 6 horas.
10. A partir de los 60 aosCmo y porque disminuye la DCE?
El
j i i t t i l l FG i
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La DCE disminuye porque la creatinina es eliminada netamente por filtracin y, al no existir un nmero considerable de nefronas funcionantes, su valor tiende a decaer, y al decaer ste, hace bajar el valor de la DCE (ver frmula) Por el contrario su valor plasmtico aumenta y esto tambin baja el valor de DCE.
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No es confiable cuando hay nsuficiencia Renal (se metaboliza y es segregada por los tbulos de forma progresiva)
Cuando el filtrado glomerular desciende por debajo de 15 ml/min, el error de
estimacin
mediante el aclaramiento de creatinina es considerable. Cuando existe Insuficiencia Renal avanzada, la DCE es algo superior al filtrado
glomerular verdadero.
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11. Cundo no es confiable la DCE
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PROCEDI IENTO
1.-Antes de procesar la orina , debemos medir el volumen de esta . 2.Blanco Agua destilada Standard Muestra Reactivo de trabajo Dilucin 1/50 0.2ml 2ml 2ml Standard 0.2ml 0.2 ml 2 ml 0.2 ml 2 ml D sangre D orina -
0,1ml de orina + 4,9ml de H2O destilada = 5ml 1ml de orina + 4,9ml de H2O destilada = 50ml
y hacemos lo siguiente : Preparamos 3 tubos de ensayo con lo siguiente.
2.- Se mezclan las soluciones ligeramente.
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"
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3. Se lleva as en Bao Mara a 37 C durante 10 minutos
Luego procedemos a la lectura en los tubos blanco (B), desconocido en el fotocolormetro con filtro verde (500 nm ) Primera lectura.
D1= 10 D2 = 3
Ahora se agrega Stopper a los 2 tubos (B ,Do y Ds) la cantidad de 0,1 ml Mezclar nuevamente. Dejar los tubos por 5 minutos reposar a la temperatura ambiente Volver leer los tubos B y D
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CLCUL S
1.- Hallamos el factor
F = 20 = 20 = 2 mg/l S 10
1.- Creatinina en suero:
Creatinina en sangre (mg/l) = f x (D1 D2)
Cr en sangre = (10 -3 ) (2) = 14 mg/l
2.- Creatinina en orina:
Creatinina g/24 horas = D2 D1 x V S Siendo: V= Volumen de la diuresis expresado en litros/24 horas.
Creatinina en orina = 10-3 x 1,5 lt = 10,5 gr/d 10
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3. Depuracin de creatinina endgena (DCE)
DCE ml/min = Creatinina en orina g/24 horas x 6, 94 ml/min Creatinina en suero mg/l
Valores Normales Suero: 8 14 mg/l Orina: 0.9 1.5 g/24 horas DCE: 80 140 ml/min (promedio 125 ml/min) para adultos de hasta 60 aos.
En la practicaresult :
DCE = 1,05 x 6,94 = 52,05ml/min 14
4. tras frmulas
DCE = (140 Edad) x peso 72 x Cr sangre (mg )
* En mujeres debe multiplicarse por 0.9
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DCE = U x V x 1.73 PxA Donde: U = Concentracin de creatinina en orina. P = Concentracin de creatinina en sangre. V = Volumen de orina en 24 horas. A = Superficie corporal
TABLA DE REUBI
Creatinina mg/100 ml < 1.3 1.3 2.5 2.5 - 10 > 10
Filtrado glomerular (% del normal) > 50% 25 50% 10 25% < 10%
Interpretacin
Los valores normales de creatinina son: En Suero : 8-14 mg/L En Orina: 0.9-1.5 g/L
Por tanto el valor obtenido en nuestro resultado indica que el paciente presenta un problema renal .
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DOSAJE DE UREA
1.- Como se interpreta la elevacin srica de la urea?
Normalmente, los riones filtran la sangre y cuando disminuye el volumen o la presi n en el flujo sanguneo a travs del ri n, la filtraci n sangunea tambin se reduce drsticamente e incluso se puede detener en su totalidad. Los exmenes de laboratorio muestran acumulaci n de desechos nitrogenados, como la creatinina y la urea en el cuerpo (azotemia). Estos productos de desecho act an como t xicos cuando se acumulan en el organismo, daando los tejidos y reduciendo la capacidad de funcionamiento de los rganos. La azotemiaprerrenal es la forma ms comn de insuficiencia renal que se observa en pacientes hospitalizados y puede ser causada por cualquier condicin que produzca una reduccin del flujo sanguneo al rin, incluyendo prdida del volumen de sangre que puede ocurrir por deshidratacin, vmito prolongado o diarrea, sangrado y quemaduras u otras condiciones que permiten el escape de lquido de la circulacin.
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2.- Que relacin tiene el flujo urinario con la urea srica?
Como se menciono ,cuando disminuye la presin del flujo sanguneo, diminuye con ella la filtracin a travs del glomrulo , por lo consiguiente la produccin de orina es poca o nula y los productos de desecho permanecen en el torrente sanguneo, a pesar de que las estructuras internas del ri n estn intactas y sean funcionales..
3.- Que relacin tiene la dieta y el metabolismo proteico con la concentracin de urea en el suero?
El cuerpo produce en promedio 25 a 30 gramos de urea al da algo ms en personas que comen dieta rica en protenas, menos en personas con dieta pobre en protenas. Toda esta urea debe eliminarse por orina; de lo contrario se acumular en lquidos corporales. Su concentracin normal promedio en el plasma es de 0.26 mg/dl, pero se han observado en estados anormales raros valores de hasta 8 mg/dl; y pacientes con insuficiencia renal muchas veces tienen valores tan altos como 2 mg/dl.
4.- Esquematice los fundamentos del mtodo de la determinacin de la urea
REACTIVOS PROVISTOS
Standard : solucin de urea 0,60 g/l Ureasa :solucion estabilizada y tamponada de ureasa de alta potencia . Reactivo : reactivo desecado y conteniendo fenol , nitroferricianuro de sodio y etilen -bisditiocarbamato manganoso Reactivo 2 : reactivo concentrado de hipoclorito de sodio y p -toluensulfocloramida en hidroxido de sodio .
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5.- Que pasos se siguen para la obtencin del suero?
Pa a la ob en n de la mue ra no se requiere estar en ayunas
La sangre se extrae de una vena (puncin venosa), usualmente vena situadas en la flexura del codo. Luego se procede . El sitio de puncin se limpia con un antisptico y luego se coloca un torniquete (una banda elstica) o un brazalete utilizado para medir la presin sangunea alrededor de la parte superior del brazo con el fin de ejercer presin y restringir el flujo sanguneo a travs de la vena, lo cual hace que las venas bajo el torniquete se dilaten (se llenen de sangre). Se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre en un frasco hermtico o en una jeringa. Durante el procedimiento, se retira el torniquete para restablecer la circulacin y, una vez que se ha recogido la sangre, se retira la aguja y se cubre el sitio de puncin para detener cualquier sangrado.
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%(
'& %
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6.- Que sustancias pueden interferir en la reaccin?
Para las personas que sufren de enfermedades hepticas, el nivel BUN puede ser bajo, incluso si los riones estn funcionando normalmente. Antes de realizar el examen, el mdico debe conocer el tipo de medicamentos que est tomando el paciente, ya que algunas drogas afectan los niveles BUN. Las drogas que pueden aumentar la medicin del nivel BUN incluyen: alopurinol, aminoglicsidos, cefalosporinas, hidrato de cloral, cisplatina, furosemida, guanetidina, indometacina, metotrexato, metildopa, drogas nefro txicas (por ejemplo, aspirina en altas dosis, amfotericina B, bacitracina, carbamazepina, colisticina, gentamicina, meticilina, neomicina, penicilamina, polimixin B, probenecida, vancomicina), propranolol, rifampicina, espironolactona, tetraciclinas, diurticos tiazdicos y triamtereno. Las drogas que pueden disminuir los niveles de BUN incluyen cloranfenicol y estreptomicina.
UREA
1.- Preparar los tubos de ensayo con las siguientes muestras .
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Blanco Standard Muestra (suero) Reactivo ureasa 1 gota = 50 ul
Standard 0.2ml
Desconocido 0.2 ml 0.2 ml
1 gota = 50 ul
1 gota = 50 ul
Blanco 2.Reactivo 1 Reactivo 2 1ml 1ml
Standard 1ml 1ml
Desconocido 1ml 1ml
llevamos las muestras 5 minutos a bao mara y luego agregamos lo siguiente :
3. Dejamos 10 minutos a bao mara un tiempo de 37 C , observaremos que la reaccin tomara un color azul.
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4.- Pasado los 10 minutos agregar : 5.- Dejar reposar 5 min. y proceder en el fotocolorimetro a 505 nm ( antes llevar a cero el blanco ).
6.- Hallamos el factor:
FACTOR = 0,6 / Standard = 0,6 / 90 = 0,006 VN urea : 0,20 0,45 gr/l VN creat.: 0,8 -1,4 mg %
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Practica 11
GLUCOSA, CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA GLICEMIA ENZIMTICA
MTODO ENZIMTICO PARA LA DETERMINACIN DE GLUCOSA EN SANGRE Y OTROS BIOLGICOS SIGNIFICACIN CLNICA:
1.- CUAL ES LA PATOLOGA MS COMN RELACIONADA CON EL METABOLISMO DE LOS HID5RATOS DE CARBONO? Diabetes
2.- QU OB ETO TIENE EL DIAGNOSTICO PRECOZ Y EL CONTROL DE LOS PACIENTES DIABTICOS? Evitar el deterioro vascular, alteraciones del colesterol y/o triglicridos,exceso de peso, tensin arterial alta y las consecuencias de las neuropatas diabtica. 3.- QU PRODUCE EL EXCESO DE INSULINA EN SANGRE? INDIQUE 2 CAUSAS QUE PUEDAN PRODUCIR ESTE EXCESO DE INSULINA? Produce: Hipoglicemia Shock insulnico Causas: Insulinoma Exceso de insulina como medicacin
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FUNDAMENTO DEL MTODO:
4.-ESQUEMATICE LOS FUNDAMENTOS DEL MTODO DE DETERMINACIN DE LA GLUCOSA
Blanco Standard Desconocido Estndar 2 Ul Muesa 2 Ul Reactivo de trabajo 2 ml 2 ml 2 ml Incubar 5 minutos en bao Mara a 37 C o 24 minutos a 15 -25 C Leer en fotocolormetro con filtro verde(490 -530 nm) llevando el aparato a cero con el blanco
REACTIVOS PROVISTOS:
Estndar: solucin de glucosa 1 g/l
Enzimas: viales conteniendo glucosa oxidasa (god), peroxidasa (pod), 4 aminofenazona (4-af)
Buffer: buffer fosfatos ph 7.0 conteniendo hidroxibenzoato
CONCENTRACIONES FINALES:
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GOD 10 U/l POD 1 U/l 4-AF: 0.5 mm Fosfatos 100mm, ph 7.0 Hidroxibenzoato: 12mm
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MUESTRA:
5.- QU PASOS SE SIGUEN PARA LA OBTENCIN DEL SUERO? PUEDE UTILIZAR EL REACTIVO PARA DETERMINAR GLUCOSA EN LQUIDO CFALO RAQUDEO?
Toma:
Se debe seguir la misma tcnica que para la obtencin de sangre total, pero sin anticoagulante. El cogulo formado se separa de las paredes del tubo con un apl icador de madera. Se debe esperar el tiempo necesario para que se retraiga el cogulo y el suero se separa por centrifugacin a 2,500-3,000 rpm. El suero no debe mostrar indicios de hemlisis, ni debe estar lipmico y se debe conservar refrigerado o congelado, a menos que se d otra indicacin. Actualmente existe un equipo comercial de tubos al vaco con un gel especial, con este sistema se puede separar el suero directamente en los tubos centrifugando a 3,000 rpm por 5 minutos. El suero se conserva en lo s mismos tubos por varios das. Este procedimiento tiene la ventaja de que no se destapan los tubos en ningn momento, as el contenido se conserva estril y adems representa un riesgo mnimo.
Guardado:
El frasco con la muestra se debe protegindolo del calor con hielo o un refrigerante. Si es necesario congelarlo, hay que empaquetarlo bien con hielo seco. Si el suero muestra indicios de contaminacin debe desecharse de inmediato.
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6.- QU SUSTANCIAS PUEDEN INTERFERIR EN LA REACCIN?
Hemlisis Bilirrubina (hasta 200mg) 7.- QU PRECAUCIONES DEBE TENER CON UNA MUESTRA QUE NO SE VA A PROCESAR DE INMEDIATO?
Refrigerar para conserva la muestra
8.- QU MATERIAL SE REQUIERE PARA EL PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA?

Tubo de ensayo Micropipeta Fotocolormetro Bao Maria Gradilla Reloj
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PROCEDIMIENTO:
En 3 tubos de ensayo marcados B(blanco), S(Standard) y D(desconocido) colocar:
Estndar Muesa 2 Ul Reactivo de trabajo 2 ml 2 ml 2 ml Incubar 5 minutos en bao Mara a 37 C o 24 minutos a 15 C -25 Leer en fotocolormetro con filtro verde(490-530 nm) llevando el aparato a cero con el blanco
S 2 Ul
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9.- CUL ES EL TIEMPO DE ESTABILIDAD DEL COLOR DE LA REACCIN FINAL? 1 hr CLCULOS: Glucosa (g/l) = f x d F = 1.00 g/l / s
VALORES DE REFERENCIA: Suero: 0.70 1.10 g/l Liquido cfalo raqudeo: 0.40 0.74 g/l
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CURV DE TOLER GLUCOSA
CI A LA
Esta prueba se realiza cuando existen dudas referentes al diagnostico de la diabetes, para diferenciar una diabetes sacarina y la glucosuria renal o para determinar una tendencia hacia la diabetes mellitus en los hijos de padres diabticos, o bien se efecta en personas que desean asegurase de no padecer la enfer medad en forma latente o potencial.
La prueba de tolerancia a la glucosa consiste en someter al paciente en estudio a un rgimen hidrocarbonato 2 o 3 das antes de la prueba. Adems, no debe ingerir alimentos desde el da anterior:
1.- Se le extrae sangre en ayunas y se le hace vaciar la vejiga (Muestra basal: B) 2.- Se le administra glucosa pura, en la cantidad de 100 g en 500 ml de agua con jugo de limn, bien fra (algunos prefieren 50 gr. de glucosa). En nios se le da 1.75 gramos por ilo de peso. 3.- Se obtienen muestras de sangre y de orina a los 30 minutos (Muestra N 11), 60 minutos (Muestra N 2), 90 minutos (Muestra N 3), y 120 minutos (Muestra N 4). 4.- Se efecta las determinaciones de la glucosa sangunea en todas las muestras y se investiga y dosa en caso positivo la glucosuria.
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Practica 12
DETERMINACION DE TRANSAMINASAS (TGO Y TGP)
Mtodo Colorimetro (Reitman y Frankel) parla Determinaron de la actividad Transaminasa Glutmico Oxalactica (TGO) y Transaminasa Glutmico Pirvica (TGP)
Las transaminasas son enzimas. En el organismo las enzimas permiten, por ejemplo, transformar sustancias. Dentro del grupo de las transaminasas las ms importantes, ya que nos pueden indicar a travs de un anlisis de sangre que algo pasa en el organismo, son: GOT: Transaminasa glutamicooxalactica. Est presente en casi todos los rganos, dentro de las clulas, y que cuando se encuentra en sangre en niveles muy elevados significa que ha habido destruccin celular. GPT : Transaminasa glutamicopirvica. Se localiza principalmente en el hgado y su misin es la fabricacin de glucosa.
Los niveles normales de GOT en sangre son: 5-40 U/ml. Los niveles normales de GPT son: 5-30 U/ml. Cuando realizamos un anlisis de sangre la proporcin que nos encont amos de GOT en r relacin con GPT es: GOT / GPT: 1/3. Se utilizan en la clnica para la confirmacin diagnstica del infarto agudo de miocardio (junto con la determinacin de otras sustancias) y para el estudio de enfermedades hepticas o musculares.
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as patologas ms habituales en las que se produce un aumento de las transaminasas son : y Enfermedades del hgado: Destacan las hepatitis, el excesivo consumo de alcohol, cirrosis y todas aquellas enfermedades en las que se depositan sustancias en el hgado de forma excesiva, como la grasa (esteatosis heptica o hgado graso). y Enfermedades del pncreas: Cuando se inflama el pncreas, ya sea por el alcohol o por infecciones vricas, se produce tambin un aumento de las transaminasas. y Enfermedades del corazn: Es muy frecuente la elevacin de las transaminasas en el infarto agudo de miocardio y en la insuficiencia cardaca aguda. y Alteraciones musculares: Sobre todo, cuando hay destruccin de nuestros msculos por quemaduras, ejercicio excesivo etc. Podramos enumerar ms causas de elevacin de transaminasas pero las anteriores son las ms frecuentes y sera excesivo aadir una lista de 20 enfermedades ms y encima poco frecuentes que producen un aumento de estas enzimas
SIGNIFICACION CLINICA 1.- Cmo se encuentra las transaminasas en un infarto de miocardio? Las transaminasas son enzimas que catalizan la transferencia reversible de un grupo amino entre un aminocido y un cetocido. sta funcin es esencial para la produccin de los aminocidos necesarios para la sntesis de protenas en el hgado. La GOT se encuentra principalmente en el corazn, hgado, msculo esqueltico y rin mientras que la GPT se localiza principalmente en el hgado y el rin. El mayor nivel de GPT est en el hgado y los niveles de esta enzima son, por lo tanto, indicadores ms especficos de dao heptico. La GPT es exclusivamente citoplasmtica mientras que se han encontrad o formas mitocondriales y citoplasmticas de la GOT en todas las clulas. Por lo tanto ante un Infarto de miocardio la GTO estar mucho mas elevada que la GTP por estar en mayor cantidad en el corazn . Sus valores estarn elevados hasta 500 UI aprox.
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2.- Cmo encuentra Ud. las transaminasas en las Hepatitis virales? Como tanto la GTP y la GTO se encuentran el hgado en una hepatitis va a ver lesin del hepatocito lo que va a producir la salida de estas y por consiguiente el aumento en la sangre. Con una proporcin mayor de la GTP . Las enzimas llegan a elevarse por encima de 1000 UI.
FUNDAMENTO DEL METODO
3. Esquematice los fundamentos del mtodo de determinacin ela GOT? La GOT cataliza la siguiente reaccin: L aspartato + alfacetoglutarato GOT glutamato + oxalacetato
4.:- . Esquematice los fundamentos del mtodo de determinacin ela TGP? LaGTP cataliza la siguiente reaccin: L - alanina + alfacetoglutarato GTP glutamato + piruvato
El piruvato formado reacciona con la 2.4 Dinitrofenilhidrazona producindose, en medio alcalino un compuesto coloreado que se mide a 505 nm.
REACTIVOS PROVISTOS
y
TGO 200
Sustrato GOT: solucion conteniendo 100 m mol/ l de 1- aspartato y 2 mmol/l de alfa cetoglutarato en buffer fosfatos 100 mmol/l , pH 7.4.
y
TGP 200
Sustrato GTP: Solucion conteniendo 200 mmol/l de dialanina y 2 mmol/l de alfa cetogluatrto en buffer fosfatos 100 mmol/l, pH 7.4.
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Ademas ambos equipos proveen: y Reactivo 2.4 DNFH: solucin conteniendo 1 mmol/l de 2.4 dinitrofenilhidrazina en acidoclorhidrico 1 mmol/l. y y Hidrxido de Na par enzimas: solucin de hidrxido de Sodio 1 mol/l Estndar: solucin de piruvato de sodio 2 mmol/l. para efectuar la curva de calibracin.
MUESTRA 5.- Qu pasos sigue par la obtencin del suero?
La sangre se extrae de una vena (puncin venosa), usualmente de la parte interior del codo. Luego se procede a extraerla. Se deja al ambiente para que coagule durante unos 10 a 15 minutos. Luego se lleva a la centrifuga durante 5 a 10 minutos a unas 3000 RPM. Luego se separa el suero (el sobrenadante que se presenta en el tubo )
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6.- Que sustancias pueden interferir en la reaccin? Se debe tener en cuenta que la sangre no debe contener: La presencia de bilirrubina a un nivel mayor de 50 mg/l. Ninguna clase de aditivo como: antibiticos, colorantes La hemlisis de mayor rango suele intervenir. Las protenas (siempre intervienen).
7.- Qu material se requiere par el procesamiento de la muestra?
j Para la toma de muestra de sangre se requiere de aguja, jeringa descartable, algodn,

alcohol, centrifuga.
j Pipetas j Tubos de ensayo j Bao Mara j Fotocolormetro.
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B Sustrato de (GTO y GPT Colocar en bao mara a 37 C por 5 minutos Suero Agua destilada 100l 0.5 ml
D 0.5 ml
100 l
Mezclar por agitacin suave e incubar exactamente 30 minutos y agregar Reactivo 2,4 - DNFH Mezclar. Dejar 10 minutos a 37C . Luego agregar NaOH 4 mmol/l Mezclar por inversin y retirar del bao. Reposar a T ambiente. 5 ml 5ml 0.5 ml 0.5 ml
PROCEDIMIENTO
En tubos de ensayo marcados B(blanco) y D(desconocido) colocar: Despus de 2 minutos leer en Fotocolormetro con filtro verde (500-550nm), llevando el aparato a cero D.O. con agua destilada.
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8.- Cul es el tiempo de estabilidad del color de la reaccin final? La reaccion final mantiene su color 30 minutos.
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CALCULOS Los clculos se realizan utilizando la curva de calibracin (Tablas en papel milimetrado). EQUIVALENCIA DE UNIDADES Los resultados pueden ser expresados en U Karmen/ml o bien en U/l para lo que debe tenerse en cuenta las siguientes equivalencias: U/I= U. Karmen/ml x 0.482 U. karmen= U/l x 2.07
VALORES DE REFERENCIA
y y
Se cree valores normales de transaminasas (TGO y TGP) hasta 12 U/I. Los valores de transaminasas que se encuentran entre 12 y 18 U/I deben considerarse sospechosos.
RESULTADOS: (Comparando con la curva de calibracin) Lectura: (TGP)

y y
Tubo blanco : 240 Tubo D : 200 200
= 233 UI/l
Lectura(TGO):
y y
Tubo B: 290 Tubo D: 426 136 = 94 UI/l
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PRACTICA: 13
PERFIL LIPIDICO
C LESTER L ENZIMTIC
MTODO ENZIMTICO PARA LA DETERMINACIN DE COLESTEROL EN SUERO O PLASMA SIGNIFICACIN CLNICA

1.- QUE SIGNIFICADO CLNICO LE DA UD. A LA DETERMINACIN DEL COLESTEROL TOTAL EN FORMA AISLADA? Su concentracin vara de manera ms o menas predecible en un gran numerode condiciones clnicas. Se ha avisto que el colesterol es uno de los factores contribuyentes a la formacin de ateromas, dado que las complicaciones arteriosclerticas prevalecen en individuos hipercolesterolemicos.
FUND MENT
2.- ESQUEMATICE LOS FUNDAMENTOS DEL MTODO?
lipasa
Esteres de colesterolcolesterol
CHO
+ acidos grasos.
Colesterol + O2
POD
colest. en 3 ona + H2O2
H2O2 + 4AF + fenol
4(p.Benzoquinosa monoimino) fenozona + 4H2O
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RE CTIVOS Standard

Enzimas:4 AF, Buffer, concentraciones finales. CHE >= 100 u/l Goods:50 mmol/l. CHOD >= 100 u/l Colato de sodio:0,2 m mol/l 4 AF=0,2 m mol/l.
MUESTRA
Pasos para la obtencin de la muestra:
Se debe obtener suero de la manera usual o plasma heparinizado.
Sustancias que pueden interferir en la reaccin:
Los anticoagulantes comunes Los sueros con hemlisis visible o intensa producen valores falsamente aumentados por lo que no deben ser usados. Que precauciones debe tener con una muestra que no se va a procesar de inmediato
El colesterol en suero es estable no menos de una semana en refrigeracin y dos meses en congelar sin agregado de conservadores.
MATERIAL PARA EL PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA

Fotocolorimetros Tubos de Fotocolorimetro Pipetas, micropipetas Un bao de agua a 37 C Probeta Un reloj Frasco de vidrio (color caramelo)
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PROCESAMIENTO
Se usan 3 tubos Blanco (B), Standard (S) y Desconocida (D)
B Standard Muestra R. de trabajo 2 ml.
S 20 ul.
20 ul. 2 ml. 2 ml.
Incubar 5 minutos en bao Maria Leer en fotocolorimetro con filtro verde Tiempo de estabilidad del color de la reaccin final
2 horas. Clculos
Colesterol (g/l) = f x D F = 0.016 g/l D = 200

Tubo B Calibra el Fotocolormetro Tubo S para reconocer el reactivo y da el valor del factor. Tubo D es el que dara el resultado D = 200 F = 0.016
D X F = 200 x 0.016 = 3.2 g/l
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VALORES DE REFERENCIA:
Hombres: 1,72 2,48 g/l. Mujeres: 1,75 2,40 g/l.
HDL Colesterol
Reactivo precipitante para la separacin de HDL en suero.
SIGNIFICACIN CLNICA
La determinacin del HDL, colesterol tiene gran importancia clnica, debido a que su relacin estara dada por el hecho de que las HDL transportan el colesterol de los tejidos perifricos para ser metabolizados en el hgado, evitando la proliferacin y crecimiento de lesiones ateromatosa, pues los grupos con baja incidencia de enfermedades cardiacas coronarias (ECC) tiene HDL colesterol mas elevado.
FUNDAMENTO
Esquematizar los fundamentos del mtodo
Las HDL se separan precipitando selectivamente las LDL y VLDL mediante el agregado de sulfato de dextran en presencia de iones de Mg++. En el sobrenadante separado por centrifugacin quedan las HDL y se realiza la determinacin.
REACTIVOS PROVISTOS
Reactivo Dextran Reactivo magnesio
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MUESTRA
Sustancias que pueden inferir en la reaccin:
Anticoagulantes distintos de la heparina bilirrubina mayor de 50 mg/l.

Precauciones que se debe tener con una muestra que no se va a procesar de inmediato :
Se recomienda refrigerar la muestra hasta la realizacin del ensayo.
Algunos autores mencionan estabilidad de 3 das a 4C que se prolongan al congelar.
PROCEDIMIENTO
3 tubos de ensayo B, S, D.
B standard Sobrenadante R. de trabajo 2 ml.
S 20 ul.
100 ul. 2 ml. 2 ml.
Incubar 5 minutos en Bao Maria a 37C Retirar del bao y enfriar Leer en fotocolorimetro con filtro verde.
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Tubo B Calibra el Fotocolormetro Tubo S para reconocer el reactivo y da el valor del factor. Tubo D es el que dara el resultado
Clculos
hdl (G/L) = F X d F = 0,457 g/l.
Tiempo de estabilidad del color de la reaccin final:
Valores Normales:
0,30 0,45 g/l.
2 horas.
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LDL Colesterol Reactivo precipitante para la separacin de las HDL en sueros.
SIGNIFICACIN CLNICA
QUE SIGNIFICADO CLNICO LE DA UD. A LA DETERMINACIN DE LDL COLESTEROL?
Se ha confirmado que el exceso de DLD con respecto a un valor critico (1,9 g/l) debe ser considerado como factor de riesgo para el desarrollo de enfermedad cardiaco coronaria.
ESQUEMATICE LOS FUNDAMENTOS DEL MTODO?
Las DLD se separan del suero precipitndolas selectivamente mediante el agregado de polmeros de alto peso molecular.
REACTIVOS PROVISTOS
Reactivo precipitante: Solucin 10g/l de sulfato de polivinilo.
Sustancias que pueden interferir en la reaccin
Los sueros hipertriglicerridemicos producen sobrenadantes turbios, la bilirrubina interfiere en niveles mayores de 50 mg/l.
Precauciones con la muestra que no se va a procesar de inmediato
Se conserva en el refrigerador ( 2 10C) durante no mas de 24 horas contadas a partir del momento de la extraccin.
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PROCEDIMIENTO
3 tubos de ensayo marcados B, S, D.
B Standard Sobrenadante R. de trabajo 2 ml.
S 20 ul.
100 ul. 2 ml. 2 ml.
Incubar 5 minutos en Bao Maria Retirar el bao y enfriar Leer el fotocolorimetro con filtro verde.
Tiempo de estabilidad del color de la reaccin final
2 horas.
Clculos
LDL (g/L) = colesterol total (f-D) F = 0,624 g/l. S
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TRIGLICRIDO SIGNIFICACIN CLNICA

QUE SIGNIFICADO CLNICO LE DA UD, A LA DETERMINACIN DE LOS TGS?
Tienen gran importancia clnica, se debe controlar sus valores, para evitar patologas que afecten al organismo.
ESQUEMATICE LOS FUNDAMENTOS DEL MTODO?
Tg Glicerol + ATP Glicerol 1 F + O2 2H2O2 + 4AF + diclorofenol PGO
lipasa glicerol + ac. Graso. glicerol 1 fosfato ADP H2O2 Dihidroxiacetona. complejo.
REACTIVOS PROVISTOS
Buffer Enzimas Standard
MUESTRA
Sustancias interferentes:
Bilirrubinemia mayor a 50 mg/l.
Precauciones de la muestra que no se procesa de inmediato
Refrigerar.
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PROCEDIMIENTO
B Standard Muestra R. de trabajo 2 ml.
S 20 ul.
100 ul. 2 ml. 2 ml.
Incubar 5 minutos en Bao Maria Retirar del bao y enfriar. Leer con fotocolorimetro.
Clculos
Lectura corregida D B Tg g/l = lectura corregida x factor F = 2 g/l.
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BIBLIOGRAFIA
http://www.botanica.cnba.uba.ar/Pakete/6to/membr-casos/Fisiol-Nefron/Analisis-Orina.htm http://www.sap.org.ar/staticfiles/archivos/2002/arch02_2/179.pdf http://analisisdeorina.blogspot.com/ http://www.sepeap.org/archivos/libros/NEFRO/ORINA/INTRODUCCION.pdf http://www.slideshare.net/junioralcalde2/examen-completo-de-orina68357?src=related_normal&rel=258686 http://www.slideshare.net/elgrupo13/paciente-con-problema-urinario
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GUIA PRACTICA DE LABORATORIO CLINICO

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Examen de orina completo

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1 mg/dL de creatinina son 88.4 mol/l.

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El cuerpo produce en promedio 25 a 30 gramos de urea al da algo ms en personas

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1 C o se eli ina la C eatinina del Organismo?

inacin de 3 aminocidos glicina, arginina y metionina. La creatinina

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3 Por qu se prefiere la Creatinina Srica como ndice de funcin renal?

4 - Esquematice los fundamentos del mtodo de determinacin de creatinina

REAC VOS PROV STOS

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CREATININA (EN EL SUERO)

5. Qu pasos se sigue para la obtencin del Suero?

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9.Cul es el tiempo de estabilidad del color de la reaccin final? El tiempo es de 6 horas.

10. A partir de los 60 aosCmo y porque disminuye la DCE?

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11. Cundo no es confiable la DCE

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y hacemos lo siguiente : Preparamos 3 tubos de ensayo con lo siguiente.

2.- Se mezclan las soluciones ligeramente.

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3. Se lleva as en Bao Mara a 37 C durante 10 minutos

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1.- Creatinina en suero:

Creatinina en sangre (mg/l) = f x (D1 D2)

Cr en sangre = (10 -3 ) (2) = 14 mg/l

2.- Creatinina en orina:

Creatinina g/24 horas = D2 D1 x V S Siendo: V= Volumen de la diuresis expresado en litros/24 horas.

Creatinina en orina = 10-3 x 1,5 lt = 10,5 gr/d 10

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3. Depuracin de creatinina endgena (DCE)

DCE = 1,05 x 6,94 = 52,05ml/min 14

DCE = (140 Edad) x peso 72 x Cr sangre (mg )

* En mujeres debe multiplicarse por 0.9

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Creatinina mg/100 ml < 1.3 1.3 2.5 2.5 - 10 > 10

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1.- Como se interpreta la elevacin srica de la urea?

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2.- Que relacin tiene el flujo urinario con la urea srica?

4.- Esquematice los fundamentos del mtodo de la determinacin de la urea

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5.- Que pasos se siguen para la obtencin del suero?

Pa a la ob en n de la mue ra no se requiere estar en ayunas

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6.- Que sustancias pueden interferir en la reaccin?

1.- Preparar los tubos de ensayo con las siguientes muestras .

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Blanco Standard Muestra (suero) Reactivo ureasa 1 gota = 50 ul

Desconocido 0.2 ml 0.2 ml

Blanco 2.Reactivo 1 Reactivo 2 1ml 1ml

Standard 1ml 1ml

Anticoagulantes distintos de la heparina bilirrubina mayor de 50 mg/l.

Se recomienda refrigerar la muestra hasta la realizacin del ensayo.

Algunos autores mencionan estabilidad de 3 das a 4C que se prolongan al congelar.