Programa de Medicina

BIOQUÍMICA Y
BIOLOGÍA MOLECULAR

SESIÓN 02:
Cinética enzimática
FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS

ENZIMAS

Temario
Cinética Enzimática
Factores que influyen en reacción
Isoenzimas / Inhibición enzimática
Enzimas en la clínica Médica
 CINETICA ENZIMATICA

Cinética Química Características de las Reacción Químicas

Rama de fisicoquímica
“Es el número de átomos o moléculas que toman parte en
MOLECULARIDAD el mecanismo molecular”
Estudia en las velocidades de las reacciones químicas
“Número de átomos o moléculas determinadas
ORDEN DE REACCION experimentalmente y cuya concentración determina la
cinética de la reacción”
Cambios del estado inicial Estado final de Factores que
de reactantes los productos modifican
la velocidad de formación del producto, permanece
Reacción de orden cero
constante, no es afectada por la concentración del sustrato
Clasificación de las Reacciones Químicas v=k
según quiere decir

Moléculas Reaccionantes Orden de Reacción

La formación del
Orden cero producto, tiene una
Monomolecular rapidez lineal con
La adición de más sustrato respecto al tiempo.
Primer orden no aumenta la rapidez de la
Bimolecular reacción.
Segundo orden
Trimolecular
Tercer orden
 CINETICA ENZIMATICA

Características de la Reacción Química

“La velocidad de formación de los productos es
Reacción de Primer Orden
directamente proporcional a la concentración del
sustrato”
v = k [A]

La rapidez es directamente proporcional

a la concentración del sustrato.

La concentración de dos sustratos (como Principios generales de una reacción

Reacción de Segundo Orden
velocidad de formación del
producto
d
en una reacción de condensación) química, rigen para una reacción enzimática
e
p
e v = k [A1] [A2]
n
d
e del cuadrado de la concentración de un
único sustrato (reacción de dimerización)

v = k [A]2
 CINETICA ENZIMATICA

Definición Imagen generada por ordenador de un modelo de la estructura

tridimensional de la enzima purina nucleósido fosforilasa bacteriana.

Estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por

enzimas
La velocidad de una reacción enzimática
Proporcionan información Debe llevarse a cabo
Papel en el metabolismo en condiciones óptimas

Mecanismo catalítico de la enzima

pH
Control de la actividad en la célula
Temperatura
Determinación de la afinidad de unión de los
sustratos e inhibidores de una enzima y Cofactores
establecer su velocidad máxima

Utilización de las enzimas para procedimientos Concentraciones saturantes de sustrato

bioquímicos y clínicos
 CINETICA ENZIMATICA

Características
Velocidad de aparición del producto o
desaparición del sustrato, en función del
tiempo
La velocidad de velocidad máxima
reacción observada = (Vmáx) Producto c ció n
y/o la rea
Sustrato a de
éti c
ó cin
n
a cció
la re
e
c ed
avan
d e
rva
desaparición Cu
aparición

Puede medirse
TIEMPO
 CINETICA ENZIMATICA

Características Velocidad Inicial y

Concentración Inicial del
Sustrato
porque
va disminuyendo consumiendo el sustrato
n
ció
eac
er

Para evitar esto

dd
ida

se procede a medir
loc

La velocidad de reacción
Ve

antes de que se consuma el

10% del total del sustrato
se pueda considerar
V0 es directamente
Velocidad inicial de la [S]00 es pequeña
[S] = constante proporcional [S]
reacción (V00)

Igual a la pendiente de la curva

de avance a tiempo cero.
 CINETICA ENZIMATICA

Características

Velocidad es máxima

es de o rden cero
reacción
enzima se encuentra saturada
por el sustrato y la velocidad ya
reacción de no depende de [S]0
primer orden

A altas concentraciones de [S]0

FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCION
Temperatura pH Concentración enzimática Concentración de sustrato Inhibidores
Efecto de
Temperatura
Efecto se produce solo en un intervalo de
temperatura estrictamente limitado.
“La velocidad de las
reacciones enzimáticas,
aumenta al elevarse la
temperatura” A altas temperaturas = Enzimas alteran estructura
secundaria y terciaria

Desnaturalizan
aumentar tanto su energía cinética (movimiento molecular)
incrementa la cantidad de
moléculas capaces de reaccionar
frecuencia de las colisiones
 FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCION
Efecto de la
Temperatura
Coeficiente de Temperatura: Q10

V se duplica por cada 10° de A partir de 55-60 °C,

Valor máximo de la mayor parte de
elevación de la temperatura: Q10 = 2 enzimas se inactivan
temperatura, en la cual la
enzima no se desnaturaliza Enzimas bacterias
y la velocidad de reacción termofílicas, siguen
no disminuye. siendo activas a T°
Enzimas en homeotermos,
temperatura óptima está ≥ 85°
alrededor de 37° C Ribonucleasa
recupera su
conformación y
actividad por
enfriamiento.

Incremento de la velocidad de un proceso biológico

por cada 10 °C de aumento de la temperatura
FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCION

Efecto del pH
Mayoría de enzimas tiene pH
característico, en el cual su La actividad enzimática óptima se
actividad es máxima. observa a valores de pH entre: 5 y 9

pH Optimo

Por encima y por debajo de éste; la

actividad declina.

pH alto o bajo produce desnaturalización y modificaciones

Protonando o desprotonando los residuos de aminoácidos ácidos o básicos, su estructura

secundaria, terciaria y cuaternaria

En la conformación del sitio catalítico

en el enlace con el sustrato

en el sustrato
FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCION

Efecto del pH

Curva ACAMPANADA
Si pH, es > ó >
del óptimo.

La actividad
enzimática es
baja

Varía:
Colinesterasa, presenta una meseta después de alcanzar un pH óptimo.
La papaina exhibe una meseta entre pH 4 y 9
FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCION
Efecto de la Efecto de la
Concentración de la Concentración del
Enzima Sustrato
[S] es baja =
Actividad enzimática
Cuando el sustrato esta en es lineal: reacción de
exceso, la velocidad de la primer orden.
reacción es proporcional a la
concentración de la enzima. Curva Hiperbólica
[S] aumenta =
incrementos de V
son cada vez
menores.

No hay más
aumento de
actividad por más
se eleve el S

Curva tiende a la
horizontalidad =
Velocidad máxima:
reacción de orden
cero.
La velocidad de la reacción de la enzima, será función
lineal de la concentración de la enzima.
FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCION
Efecto de la Concentración del
Sustrato expresaron
En condiciones definidas de medio, pH, temperatura, etc., la Km tiene Michaelis - Menten
un valor fijo para cada enzima y sirve para caracterizarla. Curva de saturación de una enzima por
Conociendo la velocidad inicial de una reacción, ésta es directamente su sustrato
proporcional a la concentración de la enzima

Km = V max
2
concentración de sustrato con la cual la velocidad de
reacción alcanza un valor igual a la mitad de la máxima.
Representación gráfica = Hipérbola

Vmax corresponde al valor máximo al que tiende la curva experimental

KM = concentración de sustrato a la cual la velocidad de reacción es la

mitad de la Vmax
 FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCION
Efecto de la Concentración del
Sustrato
obtenida por transformación inversa de la Ec. de Hexoquinasa Km = 0,2 mM
MM y corresponde a una recta o pendiente. Glucocinasa Km = 10 mM

Ecuación de Lineweaver - Burk

 La representación de la inversa de la velocidad inicial: 1/V, en función de la inversa de

la concentración de sustrato: 1/(S), da una recta.
 La pendiente de esa recta es igual a Km / V max.
 La intersección con el eje vertical corresponde a 1/V max.
Kmm y Vmax
max
y permite determinar estos valores  La intersección con el eje horizontal tendrá un valor de - 1/ Km.
a partir de mediciones de actividad  La representación de dobles recíprocas, 1/V en función de 1/(S), permite determinar los
enzimática a diferentes concentraciones de valores de V max y Km a partir de mediciones de actividad enzimática a varias
sustrato concentraciones de sustrato
 ISOENZIMAS / ISOZIMAS

Definición Diferentes formas estructurales de una enzima que catalizan la

misma reacción.
diferentes Difieren
secuencias de aminoácidos
regulación de sirven
procesos parámetros cinéticos
metabólicos
propiedades reguladoras
codificados

Aunque catalizan la misma reacción difieren en sus valores de Km para el piruvato

Piruvato Lactato (en ausencia de O2)
Lactato deshidrogenasa
Dos cadenas H y M

El piruvato inhibe alostéricamente H4 pero no M4

 INHIBICION ENZIMATICA

Definiciones Los inhibidores isostéricos a su vez pueden clasificarse

en dos tipos:

Inhibidores Reversibles: establece un Inhibidores Irreversibles: modifican

equilibrio con la enzima libre, con el químicamente a la enzima.
complejo enzima-sustrato o con ambos. E + I → E’
E + I ↔ EI
ES + I ↔ ESI

INHIBICION: disminución de la actividad

enzimática por acción de un inhibidor

Inhibidor: Efector que disminuye la actividad

enzimática, a través de interacciones con el
centro activo u otros centros específicos
(alostéricos).
Clasificación

Isostéricos: ejercen su acción en el centro

activo.
Alostéricos: ejercen su acción sobre otra parte
causando un cambio conformacional con
repercusión negativa en la actividad enzimática
 INHIBICION ENZIMATICA

Definiciones Tipos
Proceso en el cual moléculas diferentes del Inhibición Competitiva
sustrato pueden unirse al enzima
reduciendo total o parcialmente su
actividad catalítica.

parecido estructuralmente al sustrato

Compite con sustrato

Muchos medicamentos , oxidantes y venenos actúan El inhibidor se fija al centro

sobre las enzimas inhibiendo su actividad catalítico o activo de la
enzima, impidiendo la
fijación del sustrato
 INHIBICION ENZIMATICA
Inhibición Competitiva

El inhibidor reduce la velocidad de reacción,

pero la velocidad máxima, sigue siendo la
misma

Se afecta el Km pero se mantiene la velocidad máxima

Inhibición puede revertirse al incrementar la concentración del Se emplea el inverso de Lineweaver para su
sustrato visualización, afectando el intercepto en X: 1/Km
 INHIBICION ENZIMATICA
Inh. Competitiva / Ejemplos

Unión covalente del FAD a un resto de His de la SD.

El enzima es fuertemente inhibido por malonato,

análogo estructural del succinato. Tratamiento de Hipertensión Arterial
 INHIBICION ENZIMATICA
Inh. Competitiva / Ejemplos
Intoxicación

Agentes antibacterianos:
Sulfamidas
Compiten con el PABA síntesis
de DNA de bacterias

Estatinas
HMG-CoA reductasa
Limitante sintesis de colesterol

 Inhibe síntesis de DNA

 Compite por la dihidrofolato reductasa

 INHIBICION ENZIMATICA
Inhibición No Competitiva

No se revierte la inhibición al
incrementar la concentración del
sustrato

Inhibidor no se parece a sustrato

El inhibidor forma complejo E-I-S y E-I

inhibidor se une en un sitio diferente al del

sustrato, no compite con éste, por tanto, ni
impide la fijación del sustrato a la enzima, pero
si impide la acción catalítica
 INHIBICION ENZIMATICA
Inhibición No Competitiva
Se emplea el ploteado de Lineweaver.
En el eje de la Y: 1/Vmax más alta ( Vmax más
baja)
Ritonavir

No se afecta el Km en la forma clásica pero si la V max

Nevarapina Etravirina
La inhibición puede ser reversible si el inhibidor se separa de la E por Efavirenz Rilpivirina
métodos físico químicos como la diálisis
 INHIBICION ENZIMATICA

Medicamento Enzima inhibida Enfermedad tratada

Amburicin® Topoisomerasa 2 Cáncer (Quimioterapia)

Antabuse® Aldehido deshidrogenasa Alcoholismo

Captopril® Enzima de la síntesis de angiotensina Hipertensión

Digoxin® ATPasa de la bomba K+ Na+ Problemas cardiacos

Lipitor® 3-hidroxo-3-metil-glutaril CoA Hipercolesterolemia

Viagra® Fosfodiesterasa 5 5 Disfunción eréctil

Hycamtin® Topoisomerasa 1 Cáncer(Quimioterapia)

 INHIBICION ENZIMATICA
Inhibición Irreversible
Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo químico de la unen a grupos SH ó Ser del centro catalítico, necesarios
enzima, modificándola covalentemente para la actividad y no se pueden separar.

Reactivos de grupos SH: agente alquilantes (yodoacetato), compuestos

Son por lo general
altamente tóxicos
Producen cambios
permanentes en la
enzima, con deterioro
definitivo de su
capacidad catalítica
insaturados (N etilmaleimida), formadores de mercáptidos (p-
hidroximercuribenzoato), oxidantes (promueven la oxidación de dos
tioles a un disulfuro)
Organofosfóricos: diisopropilfluorofosfato (actúan sobre enzimas
serínicas Ser-activa), insecticidas (parathion), Inhibidores de la
acetilcolinisterasa, neurogases
Ligandos de metales. Ión cianuro (se fija con gran afinidad a la 6ta.
posición del hierro hemínico, impidiendo toda modificación posterior, de
esta manera actúa sobre el sistema citocromo oxidasa)
Metales pesados: Plomo, arsénico

Generalmente la inhibición no competitiva es irreversible

A diferencia de la inhibición reversible, el efecto de los

inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuación del
inhibidor.
 INHIBICION ENZIMATICA
Inhibición Irreversible

 Penicilina inhibe la síntesis de la pared bacteriana

 Aspirina inhibe la síntesis de PG

 Gases nerviosos: diisopropil fluorofosfato (DIFP),

inhiben neurotransmisores

 Hg2+, Pb2+ , CN-, As

 Fármacos antitumorales que actúan como análogos de la citidina:

Inhibidores irreversibles del metabolismo del DNA (citarabina, Azacitidina,Gemcitabidina
 INHIBICION ENZIMATICA
Inhibidores Suicidas
Moléculas, que se parecen al sustrato se unen al
centro catalítico de manera específica (en forma Modo de acción de los inhibidores suicidas
irreversible) igual que lo hace el sustrato o los
inhibidores competitivos

Xantina Alopurinol

Una vez unidos, la enzima transforma

la molécula en una especie química
muy reactiva que modifica
covalentemente a la enzima
inactivándola. No pueden dar
productos
 INHIBICION ENZIMATICA
Inhibidores Suicidas
Ejemplos: Beta lactamasa bacteriana

S La utilización masiva de antibióticos b- Preparados de penicilinas o penicilinas semisintéticas se formulan

R CO NH CH3 lactámicos (penicilinas, sus derivados añadiendo un inhibidor suicida de la b-lactamasa, el ácido
N CH3 semisintéticos y cefalosporinas) ha clavulánico.
O conducido a la aparición de resistencias
COO- O O
a los mismos CH2OH O CH2OH
C C
Penicilina (activa) N CH CH2 O
C
H HN H
O Ser
Los microorganismos resistentes a COO -
β-lactamasa COO -

estos antibióticos lo son por

β-lactamasa Ác. clavulánico Esta molécula
producir una enzima, la b-
lactamasa, que inactiva a los reacciona con la
antibióticos b-lactámicos serina activa de la
S b-lactamasa,
R CO NH CH3 produciendo su
O C HN CH3 inactivación
O-
COO-

Ác.peniciloico (inactivo)
 INHIBICION ENZIMATICA
Inhibidores Suicidas
Ejemplos: Sistema de Monoaminooxidasa cerebral (MAO) La MAO es una flavoproteína: tiene un grupo prostético
flavínico (FAD) fundamental para la catálisis. Los inhibidores
HO suicidas de la MAO inactivan al cofactor FAD.
Los estados depresivos, en general,
HO CHOH CH2 NH2
están relacionados con un descenso en O

la concentración de neurotransmisores H3C N

NH
adrenérgicos (dopamina, noradrenalina,
Noradrenalina E S H2C N N O CH3
etc.) en determinadas regiones del R HC C CH N+
cerebro CH3
Flavina
Monoaminoxidasa pargilina
Inhibición suicida de la
Una de las enzimas encargadas de la MAO mediante Pargilina
HO degradación de estos neurotransmisores es
H3C
la monoamino oxidasa
N+ CH CH
HO CHOH CHO H3C CH O
H3C N
NH
Dihidroxifenilglicol
E S H2C N NH O
La inhibición de la monoamino oxidasa se emplea como R
terapéutica de los estados depresivos. Se han desarrollado Flavina modificada
muchos inhibidores suicidas de la MAO
 APLICACIONES CLINICAS DE ENZIMAS
Prueba Tipo de Indicador Localización Elevación Localización Subcelular

Necrosis hepatocelular *Hep viral grave, necrosis hepáti x fx, choque

*ALT circulatorio. CITOSOL
*Hígado
*Enf. Hepática alcohólica sugiere deficit de B6

*♥ *LEVE MITOCONDRIA
*AST *Músculo-esq. *MODERADO Y
Necrosis tisular o hepatocelular *Riñón *Cerebro *GRAVE CITOSOL
*Hígado

(SUERO,ORINA, BILIS Y LINFA) *Embarazo se eleva al doble MEMBRANAS SINUSOIDAL

*Fosfatasa Alcalina *Hígado *Hueso *Infancia, Pubertad y Vejez es +Alta que la Adultez Y CANALICULAR ASÍ
Actividad Osteoblástica, daño *Intestino *Placenta *Colestasis y enf. Hepáticas Infiltrativas COMO EL CITOSOL
hepático o hallazgos *Riñón
inespecíficos. *Leucocitos

Gran sensibilidad para *Riñón *Enf hepatobiliar,pancerática, alcoholismo

*ɣ-glutamil- enfermedad del tracto BILIAR *Vesículas Seminales
transeptidasa *Páncreas
*Hígado ,Bazo, ♥, Cerebro
5´-Nucleotidasa *Intestino, cerebro, ♥, vasos
sanguíneos, páncreas end. e
Enfermedad hepatobiliar Hígado
Crónico,IAM,Insuf Renal, EPOC. ÁRBOL HEPATOCELULAR
DESDE HEPATOCITOS,
ACINOS Y DUCTOS
PANCREÁTICOS
Enf hepatobiliar, alcoholismo crónico, util en MEMB PLASMÁTICA
embarazo en infancia *Fisiso* y TNM CANALICULAR Y SINUSAL,
LISOSOMAS Y CITOSOL
APLICACIONES CLINICAS DE ENZIMAS
Uso terapéutico de las enzimas
Enzima Aplicación terapéutica

1.Asparaginasa Leucemia linfoblástica aguda

2.Estreptoquinasa
3.Uroquinasa
4.Estreptodornasa
lisis de coágulos intravasculares
=
DNAsa; aplicada localmente

5.Pancreatina (tripsina y lipasa) Insuficiencia pancreática;

6. Papaína Antiinflamatorio
7. Alfa-1-antitripsina Deficiencia de AAT; enfisema
Enzimas en otros líquidos corporales
Enzima Significado clínico

Adenosin deaminasa Elevado en la efusión de la tuberculosis pleural, pero no

en fluido pleural efusión tumores malignos.

Aumento indica presencia tumor maligno.

LDH en CSF, fluido
No especifica de tejido
pleural, fluido ascítico
 APLICACIONES CLINICAS DE ENZIMAS

*ɣ-glutamil-transeptidasa
*Fosfatasa Alcalina *5´-Nucleotidasa
(GGT 0 a 30 U/L) *Aminopeptidasa de Leucina
(FA 45-115 U/L) (0 a 11 U/L)
(LAP)

*Isoenzima que catalizan la *Enzima Microsómica que *CATALIZA la hidrólisi de *Corta aa de N-terminal de los
HIDRÓLISIS de Ésteres de CATALIZA la tranf. De gpos nucleótidos mediante la peptidos
fosfatos amilo (glutatión) liberación de P+

*Ph alcalino óptimo *Procede del epitelio Biliar y *Muchos tejidos *Es Ubicua
hepatocitos

*FDA elevadas/ *No se encuentre en Hueso *Sensibilidad similar a la FA *Útil en casos de embarazo y
Hiperbilirrubinemia para dx de obst. enfermedad hepatobiliar

*Mejor dx para Obstrucción *>2.5 U/L indicios de abuso de Dx fisiológicos en *elevaciones extremas =Obst.
Biliar Alhocolismo embarazadas y hepatopatías Biliar
en niños
APLICACIONES CLINICAS DE ENZIMAS
Marcador Aparición Pico Duración  
CK-MB 3-6 hr 18-24 hr 36-72 hr  
Troponinas 4-10 hr 18-24 hr 8-14 días  
LDH 6-12 hr 24-48 hr 6-8 días  
AST 24-36 hr 4-5 d 10-12 días  
Mioglobina 1-4 hr 6-7 hr 24 hr  
APLICACIONES CLINICAS DE ENZIMAS
 APLICACIONES CLINICAS DE LAS ENZIMAS

Bibliografía Empleada
Blanco A. “Química Biológica”9° edición. El Ateneo, Argentina-2014
Herrera E. “Bioquímica Básica”1° edición. Elsevier, España-2014
Baynes J. “Bioquímica Médica”4° edición. Elsevier, España-2014

Lectura Obligatoria
Rodwell V. “Bioquímica Ilustrada Harper”31° edición. Lange, México-2019
Baynes J. “Bioquímica Médica”4° edición. Elsevier, España-2014