http://bibliotecavirtual.dgb.umich.mx:8083/xmlui/bitstream/handle/DGB_UMICH/3750/IIQB-D-2010-0001.pdf?

sequence=1&isAllowed=y (pag 266)

9.4.1. ARSENICO
El arsénico es un metaloide presente en numerosos ecosistemas perturbados y naturales. Puede existir en múltiples estados de
oxidación, siendo los más comunes el arsenito [As(III)] y el arseniato [As(V)]. Aunque algunos microorganismos pueden
utilizar As(V) para la respiración anaeróbica [92] u oxidar As(III) como única fuente de energía, el arsénico es generalmente
tóxico para la mayoría de los microbios [93]. El arseniato (AsO43-) es un análogo tóxico del fosfato (PO43-), y la mayoría de
los organismos absorben el arseniato a través de transportadores de fosfato [94]. La toxicidad de As(V) se debe al
desacoplamiento de la fosforilación de ATP, que impactaría directamente en el flujo de energía, así como a la inhibición de la
síntesis de ácidos nucleicos y fosfolípidos [95]. En las bacterias, la vía para la captación de metaloides trivalentes como el
As(III) es a través del transportador de polioles GlpF (en cargados de trasladar glicerol y conduce los polialcoholes lineales
(alditoles) de forma estereo– y enantio–selectiva) , que pertenece a la familia de los acuagliceroporinas [96]. La toxicidad
del As(III) se debe predominantemente a su capacidad para unir covalentemente grupos sulfhidrilo de proteínas [93]. Los
oxianiones de arseniato y arsenito (AsO2-) se detoxifican mediante una interacción de reacciones redox, transporte, secuestro
y modificación covalente [94] (fig. 9.4A).

Fig. 9.4. Mecanismos de resistencia a oxianiones

tóxicos en pseudomonas. A: Sistemas ArsABC y ArsBC de resistencia al arsénico. B: Complejo de arsenito oxidasa AsoAB.
C: Transportador ChrA de resistencia al cromato. D, ChrR cromato reductasa. Las funciones de los sistemas de resistencia se
describen en el texto.
Las bacterias se adaptan a la toxicidad del arsénico principalmente mediante el desarrollo de mecanismos de resistencia
conferidos por operones de resistencia al arsénico (ars) cromosómicos o codificados por plásmidos [96]. Una vez que la forma
trivalente del metaloide se acumula en la célula, se produce resistencia por su eliminación del citosol [96]. Los grupos de ars
están ampliamente distribuidos entre las pseudomonas, como se muestra en la figura 9.5.
El mecanismo de resistencia al arsénico conferido por los genes ars se ha caracterizado mejor a partir del plásmido R733 de E.
coli [97]. El operón ars consta de genes arsRDABC. El gen arsA codifica la subunidad de la enzima ATPasa de un complejo
proteico compuesto por un dímero ArsA unido a ArsB, un polipéptido de la membrana interna.
(Figura 9.4A). El As(III) es el sustrato de la bomba de eflujo ArsAB, que es una ATPasa translocadora de As(III) [97]. ArsB
solo es suficiente para la resistencia de As(III) y el eflujo de As(III) dependiente de la fuerza motriz del protón; las bacterias
que carecen de ArsA aún son resistentes al arsénico [96] (Fig. 9.4A). arsC1 pertenece a la familia COG1393 [87] y codifica
una enzima que reduce As(V) a As(III), que posteriormente se extruye de la célula; La actividad de la arseniato reductasa es
necesaria para una resistencia óptima al As(V) [93] (fig. 9.4A). In vitro, la actividad de la reductasa requiere glutatión
reducido (GSH) y cualquiera de las tres glutaredoxinas de E. coli, Grx1, Grx2 o Grx3 [96]. El gen arsD se expresa
constitutivamente y codifica una proteína reguladora que controla la expresión máxima del operón ars [93]. Finalmente, arsR
codifica un represor que controla la expresión del operón ars y puede ser inducido por As(III), Sb(III) o incluso bismuto. Se
han identificado secuencias homólogas de ars en el ADN cromosómico de P. aeruginosa [98]. El análisis filogenético mostró
que P. aeruginosa y P. putida poseen homólogos cromosómicos arsC [99]; en el caso de P. aeruginosa, su genoma contiene
genes separados para las ArsC reductasas acopladas a glutaredoxina y tiorredoxina [96]. El cromosoma de P. fluorescens
MSP3 posee un operón de arsénico menos complejo (arsRBC) que le confiere resistencia al arseniato y al arsenito [100]. El
análisis del genoma de P. putida KT2440 reveló dos sistemas muy similares, arsRBCH, para la resistencia al arsénico [6]. El
gen distinto arsH se encuentra aguas abajo de arsC y se transcribe en la misma dirección. Se informó que el producto del gen
arsH de Yersinia enterocolitica confiere resistencia tanto al arsenito como al arseniato y se le asignó un posible papel como
regulador de la transcripción [101].

Sin embargo, los genes arsH de P. putida, denominados ArsH1 y ArsH2, mostraron una similitud significativa con las NADH
oxidorreductasas de plantas y con la azoreductasa de Bacillus subtilis [6]. ArsH está ampliamente distribuido en bacterias y
escasamente en hongos, plantas y arqueas [96], pero su papel en la resistencia al arsénico aún no está claro.
La oxidación bacteriana de As(III) a As(V) menos tóxico puede considerarse como un mecanismo de resistencia. El arsenito
oxidasa (Aso) de Alcaligenes faecalis es el ejemplo mejor comprendido de esta actividad desintoxicante [94]. La enzima está
formada por una subunidad que contiene molibdopterina y una subunidad Fe-S Rieske codificadas por los genes asoA y asoB,
respectivamente [102] (fig. 9.4B). Los genes aso forman parte de la llamada “isla génica de arsénico” que codifica proteínas
relacionadas con la resistencia al arsénico y la homeostasis; estos incluyen proteínas de unión a oxianiones periplásmicos
putativos, probablemente asociados con transportadores de membrana ABC, así como una bomba de eflujo de arsenito
(ArsAB) ATPasa. Se identificó un ortólogo de la subunidad AsoA Mo-pterina de la arsenito oxidasa en el genoma de
Pseudomonas sp. TS44 (Fig. 9.5), lo que sugiere que algunas pseudomonas también poseen la capacidad de oxidar arsenito
[102]. La toxicidad de As(III) a través de un mecanismo que implica la peroxidación de ácidos grasos insaturados se encontró
en P. putida [103, 104]. Se propuso que este proceso conduce a la generación de hidroperóxidos orgánicos y radicales de
oxígeno, que inducen componentes de la respuesta al estrés oxidativo como la superóxido dismutasa (SOD) y la catalasa [93].
La actividad de la catalasa aumentó en respuesta a la presencia y oxidación de As(III) [104]. Estos estudios también mostraron
que los niveles de glutatión reductasa (Gor) aumentaron con la exposición de P. putida a As(III). Una función de Gor en E.
coli es reciclar el glutatión oxidado de nuevo a glutatión reducido, que es el reductor de la reductasa As(V) que convierte el
As(V) en As(III). Este último luego es eliminado activamente de la celda por la bomba de eflujo ArsB [93]. Los mutantes de
PAO1 de P. aeruginosa afectados en los genes arsB, crc (la proteína de control del represor catabólico) y gor son más sensibles
a As(III) que la cepa de tipo salvaje [93]. El mutante "crc" fue más sensible al H2O2 en presencia de As(III); se asumió que la
sensibilidad a As(III) se debía a una regulación anormal de los genes bajo el control de "Crc". Los mutantes dobles sodA/sodB
también exhibieron una mayor sensibilidad al As(III), lo que sugiere que la respuesta al estrés oxidativo está involucrada en la
resistencia al As(III) [93].

Figura 9.5. Representación esquemática del contexto genómico local de los genes ars y aso ubicados en los genomas de las
pseudomonas. Todos los genes ars y aso que se muestran están ubicados en los cromosomas. Las columnas indican la cepa de
Pseudomonas y el locus microbiano para cada gen. También se incluye información preliminar sobre los genes aso. Las
flechas encuadradas indican los genes y la dirección de la transcripción. Los números debajo de los genes indican la familia
COG a la que pertenece cada gen. [87]