Universidad Andrés Bello

Facultad de Ciencias de la Vida

Ingeniería Ambiental

Aislamiento e Identificación Bacteriana desde Muestra Sólida

(Lodos)

1. Características Microbiológicas de los Lodos de PTAS

Los lodos de plantas de tratamiento de aguas servidas (PTAS) son los residuos obtenidos
por concentración de la fase sólida procedente del tratamiento de las aguas residuales
urbanas. Este lodo se compone principalmente de excretas humanas, en las que se
encuentra un porcentaje elevado de microorganismos (alrededor de la mitad del peso seco
total de la fracción sólida), algunos de los cuales son potencialmente patógenos, por
ejemplo, bacterias como Salmonella, Shigella, Campylobacter, Escherichia coli, etc.

Lo anterior supone un riesgo sanitario, debido a que dichos microorganismos pueden

transmitirse al suelo. Por ello, los lodos precisan de un tratamiento apropiado,
especialmente si se realizará uso posterior de los mismos (por ej. como mejorador de
suelos), almacenamiento o disposición final. En los procesos de estabilización y compostaje
de lodos se reduce en gran proporción la cantidad de microorganismos, incluyendo
bacterias patógenas, parásitos, protozoos y virus. De ahí la importancia de la identificación
de bacterias en lodos.

2. Identificación a través de pruebas bioquímicas

Como se estudió en prácticos anteriores, las pruebas bioquímicas tienen una importancia
relevante para el investigador en la identificación correcta de las bacterias (patógenos)
presentes en una muestra. En la tabla 1, se presenta un resumen de las pruebas bioquímicas
que se utilizarán en éste Práctico. En la tabla Nº2 se muestra un ejemplo de identificación
de bacterias por pruebas bioquímicas.

Profesores de Laboratorio: Gastón Higuera Guajardo – Consuelo Pichún San Martín

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Tabla 1. Cuadro resumen de pruebas bioquímicas

Prueba Características Ensayo Evaluación Interpretación visual

del reactivo o
medio
TSI (Hierro Agar preparado Siembra en picada  Profundidad: Profundidad y tendido:
Triple Azúcar) en tubo de (profundidad) y Fermentación Color:
ensayo superficie glucosa A: acidez, color amarillo
inclinado, (tendido) 0: alcalinidad, color rojo
sólido de color  Tendido: utilización
rojo, que lactosa y sacarosa Producción de gas y
contiene rojo ácido:
fenol como  Formación de ácido +: ruptura agar
indicador de pH y gas. -: sin ruptura del agar

 Producción de H2S Producción de H2S:

+: color negro
-: no hay color negro
MIO Agar preparado Siembra en picada  Movilidad Movilidad:
(Motilidad – en tubo de (profundidad) +: enturbiamiento del
Indol – ensayo no  Descarboxilación medio
Ornitina) inclinado de ornitina -: enturbiamiento sólo en
(plano), la picada del asa
semisólido de  Producción de Indol:
color púrpura, Indol: agregando + : Anillo rojo
que contiene reactivo de Kovacs -: Anillo permanece
púrpura de amarillo
bromocresol Ornitina:
como indicador +: color azul, alcalinidad
de pH -: color amarillo, acidez

MacConkey Agar sólido en Siembra de Diferenciación en la Fermentación lactosa

placa de color agotamiento por fermentación de la +: Colonias rosadas o
rosado-rojizo, estrías lactosa rojas
usa rojo neutro -: Colonias blancas o
como indicador incoloras
de pH
Ureasa Agar preparado Siembra en Diferenciación en la Ureasa
en tubo de superficie hidrólisis de la urea +: Color rosado del
ensayo (tendido) (enzima ureasa) medio
inclinado, -: Color amarillo del
sólido de color medio
amarillo, que
contiene rojo
fenol como
indicador de pH
Oxidasa Test de oxidasa Se toma una Diferenciación por la Oxidasa:
colonia y se presencia de enzima +: Color azul
esparce en una citocromo C oxidasa -: No hay cambio de
tira reactiva color
Hemólisis/Agar Agar sólido en Siembra de Diferenciación en Hemólisis:
Sangre placa de color agotamiento por lisis de eritrocitos Alfa: lisis parcial, color
rojo estrías (enzima hemolisina) verde alrededor de las
colonias

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Beta: lisis completa, halo

alrededor de las colonias
Gamma: ausencia de
lisis, medio no cambia de
color
Catalasa Reacción de una Diferenciación por Catalasa:
colonia con descomposición del +: producción de
peróxido de peróxido de burbujas
hidrógeno 3% hidrógeno por la -: ausencia de burbujas
enzima catalasa

Tabla 2. Ejemplo de identificación bacteriana a través de pruebas bioquímicas

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3. Actividad: Identificación bacteriana desde una Muestra Problema

A cada dupla se les proporcionará una “Muestra Problema” correspondiente a una placa
con cultivo de bacterias puro, provenientes de lodos de planta de tratamiento. Mediante
pruebas bioquímicas aprendidas en el Práctico Nº4 (Tabla 1), deberán identificar a qué
especie de bacteria corresponde su muestra problema. Esta actividad será evaluada
mediante un reporte (ANEXO 1) que tendrán que enviar por correo a los profesores
de laboratorio hasta el miércoles 25/09/19 a las 23:59. Pueden utilizar como material
complementario la Guía del Práctico Nº4, en donde se describen las pruebas bioquímicas.

Objetivos:

 Comprender la importancia de la identificación bacteriana

 Aplicar correctamente las pruebas bioquímicas aprendidas en prácticos anteriores
 Identificar la especie de bacteria correspondiente a la “Muestra Problema”

Parte 1. Tinción de Gram

 Realizar Tinción de Gram

 Identificar si la bacteria es Gram (+) o Gram (-)
 Examinar características microscópicas de las bacterias
 Registrar en reporte (Anexo 1)

Parte 2. Pruebas bioquímicas

 Examinar características macroscópicas de las colonias
 Realizar las pruebas bioquímicas apropiadas a su Muestra Problema, para Gram (+)
o Gram (-), según corresponda.
 Para las pruebas que requieren incubación, revisar los resultados al día siguiente
 Registrar en reporte (Anexo 1), y enviar a los profesores de laboratorio por correo
gastonhiguera@gmail.com – consuelo.pichun.s@gmail.com

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ANEXO 1. Reporte de Resultados Práctico Nº7, Microbiología Ambiental

Nombre Estudiantes:
Sección Nº:
Fecha:
Muestra Problema Nº:
Resultado tinción de Gram:
Características microscópicas (color, forma bacterias): _____________________________
________________________________________________________________________

Características macroscópicas (color, forma colonias): ____________________________

_______________________________________________________________________

Pruebas Bioquímicas: Marcar positivo (+) o negativo (-), e indicar color donde
corresponda.
TSI MIO Hemólisis
Tendido Profundidad Profundidad (marcar sólo una)
Color: Color: Movilidad: Alfa:
R = DeaminaciónRojo oscuro -
de Gas y Acido: Indol: Beta:
Lisina
+ -
H2S: Ornitina: Gamma:
+ + +

Pruebas Bioquímicas: Marcar positivo (+) o negativo (-)

Fermentación de Ureasa Oxidasa Catalasa
la lactosa

No realizado - - -

En base a los resultados de los ensayos se concluye que la Muestra Problema corresponde a

la especie: _______________________________________________________________

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