Universidad de Concepción

Facultad de Ciencias Biológicas

Departamento de Microbiología

Laboratorio N°2
Técnicas para el aislamiento de bacterias

Alumna: Nicol Ferrada Cid

Docente: Miguel Martínez
Ayudante: Héctor Benavides
Sección: 3

Concepción, 03 de octubre del 2019

 Universidad de Concepción
Facultad de Ciencias Biológicas
Departamento de Microbiología

Introducción

En la naturaleza los microorganismos se encuentran en comunidades más o menos

complejas. Por esto, son diversos los procedimientos existentes para el estudio de los
microorganismos. Una técnica esencial en Microbiología es la técnica de aislamiento que
permite la obtención de cultivos puros, a partir de los cuales se pueden realizar estudios
sobre las propiedades de los microorganismos. Un cultivo puro es aquel que tiene una
sola clase de microorganismos.
Por aislamiento bacteriano se entiende la separación en cultivos puros, las diferentes
bacterias que se encuentran en productos polimicrobianos. En general, la flora
bacteriana de productos o ambientes naturales (agua, alimentos, suelo) y de materiales
patológicos es heterogénea y por lo tanto, el aislamiento constituye una etapa
fundamental para la gran mayoría de los estudios bacteriológicos.

Objetivos

1. Aprender la técnica de asilamiento por diseminación en superficie.

2. Aprender la técnica de aislamiento en medios selectivos.
3. Incubar y analizar la diversidad de las colonias.

Materiales

Para la preparación del medio ocuparemos placa de Petri con distintos medios (agar
McConckey, agar Chapman y agar Tripticasa), mechero, pipeta Pasteur, porta objetos, tubos de
ensayo con caldos bacterianos, asas y microscopio; y para las tinciones ocuparemos los
colorantes violeta de genciana, lugol, safranina y para decolorar alcohol etílico al 95% y agua
para los lavados.

Metodología

La siembra por diseminación consiste en depositar con una asada o con tórula de muestra en la
superficie del medio de cultivo, cerca del borde de la placa, y desde ese punto recorrer el agar
siguiendo un trazado zigzagueante lo más numeroso posible utilizando la mayor superficie del
agar, con el propósito de disminuir el contenido de bacterias en el instrumento de siembra y de
esta manera, obtener colonias aisladas y para posterior dejarlas incubando por 5 días.

Para el aislamiento en medios selectivos hay que elegir un lugar en el laboratorio para obtener
una muestra de los microorganismos que allí residen. Posteriormente con una tórula estéril a
obtener una muestra del sector escogido. Luego hay que sembrar por técnica de diseminación
en la superficie de una placa con agar McConkey. También se incubaron por 5 días.
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Después de los 5 días en los que se incubaron, para la observación al microscopio se aplicó a
todas las muestras la tinción de Gram. Coloreo con Violeta de Genciana, se lavó sutilmente con
agua, luego se cubrió la preparación con la solución de Lugol para posterior volver a lavar con un
chorro delgado de agua. Se decolora con alcohol etílico al 95% durante 30. Y por último se
aplica Safranina (etapa diferencial). Se lavó, se dejó secar y se observó por inmersión.

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Resultados

Las bacterias utilizadas se sacaron de un tubo de ensayo ya preparado que tenía

aspecto anaranjado y se sembraron en tres tipos de Agar (McConckey, Chapman y
Tripticasa) y con la tinción Gram se apreció lo siguiente:
 Muestra de agar Tripticasa: Al observarlas a simple vista se observó la existencia de 2
colonias bacterianas diferentes. Una de color amarillo y la otra de color blanco.
Al preparar un FROTIS con ambas colonias y al apreciarlas por inmersión se distinguió
que la colonia amarilla teñida con Gram tenía un aspecto color violeta y de forma
cilíndrica y con ningún tipo de agrupación.
En la colonia blanca observada con el lente de inmersión se pueden ver bacterias de
color rosado agrupadas, con formas cilíndricas y en mayor cantidad que las anteriores.
 Muestra de agar McConckey: son colonias circulares con borde regular de color rosada-
rojiza, a través del microscopio se puede observar que la pigmentación que toma es
rosado oscurecido lo que evidencia que son Gram negativa y además las bacterias tienen
forma de bacilos.
 Muestra de Chapman: macroscópicamente no se observó claramente, tal vez por alguna
mala técnica de laboratorio, no obstante en una esquina si se notaba una pequeña
superficie con colonia, al observarlas por inmersión las bacterias tienen forma de cocos y
son de color azul o morado oscuro, lo que nos dice que son Gram positivas.

Discusión y Conclusión

Pudimos llevar a cabo poder aislar un tipo de cultivo bacteriano a través de dos formas. Uno por
la siembra por diseminación y el otro a través de un medio de cultivo selectivo. Todas estas
diseminaciones se hicieron con distintos tipos de agar que nos ayudaron a seleccionar y
diferencias las distintas colonias de bacterias.

Al llevar a la práctica, el agar Tripticasa que es un medio de cultivo sólido y nutritivo. Compuesto
por tripteina, peptona de soja, cloruro de sodio y agar agar y que favorece el desarrollo y
aislamiento de una gran variedad de microorganismos anaeróbicos y anaeróbicos facultativos y
estrictos. Este tipo de agar no es selectivo porque tiene las características de garantizar el
crecimiento de todos los microorganismos Gram positivo y Gram negativo y es por eso que
pudimos ver dos tipos de colonias.
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Departamento de Microbiología

Con respecto al agar McConckey se puede decir que es selectivo y diferencial debido a su
composición inhibe el crecimiento de las bacterias Gram positivas y en este caso lo
corroboramos porque en este medio distinguimos una colonia que al observarla se distinguían
bacilos Gram negativas. Este agar al poseer lactosa les da la cualidad dependiendo del color de
la colonia pueden ser bacterias fermentadoras de lactosa (lacto-positivas) o por el contrario
lacto-negativas. En este caso las colonias eran rojas; es decir, lacto-positivas.

En el agar Chapman permite el crecimiento de bacterias Gram positivas e inhibe el crecimiento

de las Gram negativas. Se observó que es un medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado
para el aislamiento y diferenciación de estafilococos y que al ser una fermentación de manitol
(azúcar), le da ese color amarillo

Así podemos concluir que los resultados prácticos concuerdan con los conceptos teóricos vistos
en clases, si es posible obtener cultivos puros que se forman a través de una unidad formadora
de colonia (UFC) para su posterior estudio.