XXIII Reunión Científico – Técnica de la Asociación

Argentina de Veterinarios de Laboratorio de Diagnóstico

P-6 DIAGNÓSTICO DE TRITRICHOMONAS FOETUS MEDIANTE CULTIVO MICROBIOLÓGICO

VERSUS LA CONFIRMACIÓN TAXONÓMICA DE LOS AISLAMIENTOS POR PCR

F. De Marco1, C. Cacciato2,3, M.L. Doumecq2

(1) Becario CIN, Tandil, Buenos Aires. (2) Laboratorio de Microbiología Clínica y Experimental FCV-UNCPBA, Tandil, Buenos
Aires. (3) Personal de Apoyo CICPBA, Tandil, Buenos aires.

Introducción y Objetivo/s Materiales y métodos

La Trichomonosis genital bovina Se utilizaron 94 aislamientos de T. foetus
es una enfermedad venérea del pertenecientes a toros de diferentes
bovino cuyo agente etiológico es establecimientos agropecuarios de la
un protozoario piriforme flagelado provincia de Buenos Aires y La Pampa.
denominado Tritrichomonas foetus Se cultivaron en el medio agar Diamond
(T. foetus). El método de rutina modificado (TYM) en aerobiosis a 37°C
más utilizado para el diagnóstico durante 7 días con observaciones
de la Trichomonosis es el cultivo microscópicas cada 24 h.
microbiológico e identificación del Para la extracción de ADN, los aislamientos
agente causal. Sin embargo, de T. foetus se subcultivaron en medio caldo
debido al crecimiento en el medio TYM por 24-48 h a 37ºC. Posteriormente se
de cultivo de otros protozoarios no colocó cada aislamiento en baño de agua
patógenos, se ha puesto en duda la hirviendo durante 20 min, luego se agregó 5
especificidad de los medios de ul de Proteinasa K incubándose a 60º C
cultivos y se ha recomendado durante 30 min en baño de agua.
utilizar la técnica de PCR para el Se utilizaron los primers TFR1 y TFR2 común
diagnóstico de esta enfermedad. El a toda la familia Trichomonadidae y los
objetivo de este trabajo fue primers TFR3 y TFR4 específicos para T.
comparar los resultados de foetus.
aislamientos de Tritrichomonas Para la amplificación del ADN se utilizó un
foetus obtenidos por técnicas termociclador (Ivema T-18) con el siguiente
microbiológicas de rutina versus la programa: incubación inicial de 3 min a 94°C,
confirmación taxonómica de los seguidos de 30 ciclos de desnaturalización a
aislamientos mediante (PCR). 94°C 30s, annealing a 65°C 30s y extensión a
72°C 60s. La amplificación fue concluida con
Resultados una extensión final de 5 min a 72°C. Todas las
PCR se realizaron con 4 controles; control
positivo a T. foetus, control positivo a flia.
Los 94 aislamientos amplificaron el Trichomonidadae pero negativo a T. foetus,
gen para la familia control negativo con cepa Campylobacter
Trichomonidadae y 92 aislamientos fetus y control negativo del sistema con agua
(98%) amplificaron al género destilada.
pudiéndose confirmar
taxonómicamente que eran T.
foetus.

1
Visualización de los fragmentos de ADN en gel de
agarosa. (1) Amplicones para familia Trichomonidadae
(TRF 1-2), (2) amplicones para género T. foetus (TFR 3-4)
2

Conclusiones

Con este resultado se respalda a los medios de cultivo y a las técnicas microbiológicas
como de alto valor diagnóstico a la hora de identificar T. foetus en un rodeo bovino
infectado, utilizando las técnicas moleculares como la PCR, las cuales son más
costosas y sofisticadas, para muestras sospechosas o difíciles de diagnosticar.

- Felleisen, R. y col. (1998). J. Clin. Microbiol., 36 (2): 513-19

Bibliografía - Lucchesi, E. y col. (1988). AAVLD
- Soto, P. y col. (2014). AAVLD
- Soto, J. y col. (2018). AAVLD