Sigla: FSL 3301 Nombre Asignatura: FISIOLOGIA VEGETAL

Materiales de Apoyo
Material N°2: Documento word
1. Unidad 1, capítulo 3, sesión 6
2. Descripción: Laboratorio Potenciales

Laboratorio 1
POTENCIAL OSMÓTICO DE CÉLULAS EPIDÉRMICAS DE CEBOLLA

1. Fundamento
El agua se mueve desde suelo al aire a través de la planta en tres etapas: del suelo a la planta, dentro
de la planta y de la planta al aire. El agua SIEMPRE se desplaza debido a la diferencia del potencial
hídrico que es la energía libre del agua por unidad de volumen.
En el movimiento de agua del suelo a la planta y dentro de la planta (¡¡En distancias cortas!!), los
componentes del Ψ a considerar son: el potencial osmótico (Ψ π ) y potencial de presión (Ψ p). En las
células, el  Ψ p representa la presión que ejerce la pared sobre el citosol y recibe varios nombres, entre
ellos presión de turgencia. Todas las células vivas tienen presión de turgencia, siendo su valor siempre
superior a 0. Las unidades de los componentes del Ψ son de presión: pascal (Pa), bar (105 Pa),
atmósfera etc.

(1) Ψ = Ψ Π + Ψp
El Ψ π está relacionado con la presión osmótica. En soluciones diluidas, puede calcularse el Ψ π en
función de la concentración de
( 2) ΨΠ = −iCsRT solutos:Cuando un tejido se pone
en contacto con una solución de
menor Ψ, el agua sale del tejido al medio. Un efecto de esta salida es la pérdida gradual de Ψp, hasta
anularse por completo. Cuando desaparece la Ψp, el plasmalema se despega de la pared, fenómeno
conocido como plasmolisis. En el inicio de la plasmolisis (plasmólisis incipiente, donde Ψp = 0) el Ψ π
celular y el del medio se igualan:

Donde i = número de partículas en que se disocia un soluto (en sustancias no disocibales, como los
azúcares, i = 1)
Cs = concentración molal,
R = 8.3143 x 10-3 kg MPa mol-1 K-1 y
T = temperatura absoluta en Kelvins (273 + tª oC).

En este laboratorio se va a determinar el valor medio del Ψ de la epidermis de cebolla, teniendo en

cuenta el Ψ π de una solución de sacarosa capaz de producir la plasmolisis en un 50 % de las células
del tejido.
Se asume que teniendo un 50% de células plasmolizadas, el Ψp medio del tejido es igual a 0. Por tanto,
en estas condiciones el único componente de Ψ del tejido es Ψ π , pudiendo así calcular el Ψ del tejido,
según se muestra en el diagrama de Höefler.

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Ψp=

Ψπ

Diagrama de Höefler, donde se muestra cómo varía el Ψ de un tejido en función del volumen celular
relativo (1.0 es el volumen máximo limitado por la pared celular). La contribución de Ψ p se incrementa
cuando se alcanza prácticamente 0.8. Esto es, hasta dicho punto, Ψ π es el único componente de Ψ que ha
de considerarse. A partir de ahí, Ψ π varía mínimamente, aumentando paulatinamente Ψ p.

2. Material
Cebolla, gotario, 1 microscopio,1 probeta de 25 mL, pinzas,1 gradilla. 6 tubos de
ensayo, 6 portas y cubres,1 matraz Erlenmeyer,1 frasco lavador, 2 pipetas de 5 mL, 2 pipetas de 2
mL, bisturí u hoja de cortar, Sacarosa 1 molal (PM sacarosa: 342; Ψ sacarosa 1 molal: 1.13 g x mL-1)

3. Metodología
Calcule y pese la sacarosa necesaria para preparar una disolución 1 molal de sacarosa empleando como
disolvente 20g de H2O (PM sacarosa: 342 g·mol-1). Seguidamente, se prepare una serie de disoluciones
con concentraciones decrecientes de sacarosa en diferentes tubos de ensayo, realizando la mezcla de la
disolución concentrada sacarosa 1 m con H2O desionizada según las siguientes proporciones
volumétricas:

Componente Relación de volúmenes a emplear de cada componente (mL)

Sacarosa 1 m 1 3 2 1 1 1
H2O 1 1 1 2 3

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Prepare entre 4 y 6 mL de cada dilución, suficiente volumen para sumergir los fragmentos de epidermis
de cebolla que va a visualizar al microscopio. Dada la gran diferencia de densidad del H2O y la disolución
sacarosa 1 molal, es muy importante que se mezclen muy bien por agitación las disoluciones
preparadas antes de sumergir los fragmentos de epidermis.
Córtese varios trozos de una misma capa de epidermis de cebolla. Para conseguir una única capa de
células, ha de realizarse primero un corte y luego se ha de tirar con suavidad empleando unas pinzas,
procurando no doblar la tira de células obtenida. Inmediatamente ha de sumergirse en la disolución de
sacarosa correspondiente, evitando su desecación. Se recomienda que se vaya preparando sucesivas
tiras de epidermis a intervalos de 2-5 min, para evitar que se desequen. Tras 30 min de incubación, se
sacan las epidermis y se montan en un portaobjetos, en el que previamente se ha depositado 1 gota de
la disolución de sacarosa correspondiente. Es preciso evitar dobleces y arrugas del tejido; éstos
dificultan enormemente la observación al microscopio. Seguidamente se tapa el tejido con un cubre, y se
cuantifica al microscopio el número de células que aparecen plasmolizadas y sin plasmolizar en cada
muestra (obsérvese un mínimo de 100 células).
Finalmente, para observar la desplasmolisis, en las preparaciones con mayor porcentaje de células
plasmolizadas se añaden unas gotas de agua destilada, observándose como se vuelven turgentes al
cabo de un cierto tiempo.
4. Resultados: Interpretación de las observaciones y conclusiones
• Calcúlense los Ψ π de cada una de las diluciones, para lo cual es necesario saber que la
densidad de la disolución madre de sacarosa 1 molal es 1.13 g x mL-1.
• Represéntese gráficamente en papel milimetrado el porcentaje de células plasmolizadas
en cada tratamiento frente al Ψ π de la disolución, y obsérvese si existe una relación lineal.
Determínese, por interpolación en la gráfica, el Ψ π correspondiente al 50 % de células
plasmolizadas.
• ¿Permite el método empleado calcular exactamente el Ψ de las células a partir de los
valores del Ψ π de las soluciones de sacarosa?, ¿qué diferencia esencial puede presentar este
método frente a otros de medida de potencial hídrico?
• Si los resultados no coinciden con los esperados, ¿cuál podría ser la causa?