Transparencias Tema 10

Tema 10 – Reacciones Enzimáticas
TEMA 10.
REACCIONES ENZIMÁTICAS
1 OCW © Rubén López Fonseca – Departamento de Ingeniería Química – Universidad del País Vasco/EHU
FUNDAMENTOS DE LAS
Enzimas: proteínas de elevado peso molecular (104-106 g mol-1)

sintetizados por los organismos vivos
Son capaces de catalizar reacciones bioquímicas/biológicas

Elevadas velocidades de reacción 10-10.000 moléculas enz-1 s-1)
Elevada selectividades ∼ 100% (controlan la formación de
productos no deseados)
Catalizadores efectivos a concentraciones bajas (10-5-10-10 mol l-1)
Son sintetizadas in vitro o extraídas de su fuente biológica
FUNDAMENTOS DE LAS
Se nombran en términos de la reacción que catalizan. Se añade el
sufijo –asa al nombre del sustrato sobre el que la enzima actúa
(ureasa) o al nombre del tipo de reacción que cataliza (hidrolasa))
Oxireductasas catalizan reacciones redox
Transferasas transfieren grupos funcionales
Hidrolasas catalizan reacciones de hidrólisis
Liasas rompen enlaces C-O, C-C y C-N
Isomerasas reagrupan grupos funcionales
Ligasas juntan dos moléculas
FUNDAMENTOS DE LAS
Funcionan en condiciones suaves de temperatura (25-70 ºC) y pH (4-9)
En condiciones severas pueden desnaturalizarse (alteración o

modificación de los centros activos)
Difícil y cara separación del producto ⇒ heterogeneización del proceso
Tipos de especificidades enzimáticas
De acción ⇒ cada enzima sólo puede llevar a cabo un tipo de

transformación química
De sustrato
Absolutamente específicos ⇒ Sólo reaccionan con un único substrato
Específicos funcionales ⇒ Actúan sobre moléculas similares que tienen el
mismo grupo funcional
Específicos de enlace ⇒ Transforman un tipo específico de enlaces
Específicos estereoquímicos ⇒ Distinguen entre isómeros ópticos (D ó L)
MECANISMO DE LAS
En una reacción catalizada por un enzima:
1. La sustancia sobre la que actúa el enzima se llama sustrato
2. El sustrato se une a una región concreta del enzima, llamada

centro activo
3. Se forman los productos y el enzima ya puede comenzar un nuevo
ciclo de reacción
Enzima + Sustrato
Enzima-Sustrato
Producto + Enzima
TIPOS DE REACCIONES ENZIMÁTICAS
I. ENZIMA SOLUBLE – SUSTRATO SOLUBLE

CATÁLISIS ENZIMÁTICA HOMOGÉNEA
II. ENZIMA INSOLUBLE – SUSTRATO SOLUBLE

CATÁLISIS ENZIMÁTICA HETEROGÉNEA
(unión de grupos enzimáticos a superficies sólidas)
Orden cero
Cinética de independiente de la concentración de sustrato
Orden uno
Reacciones
directamente proporcional a la concentración de sustrato
Biológicas Combinación de ambas
ecuación de Michaelis-Menten
CINÉTICA ENZIMÁTICA HOMOGÉNEA
CINÉTICA DE MICHAELIS MENTEN
Las reacciones enzimáticas pueden considerarse como no elementales
S 
enzima Z
→ P
S: sustrato

Z + S ← → ZS

k1
Z: enzima
k -1
P: producto
ZS →
k2
Z+P

k1
Z + S ← → ZS
 dC ZS
k -1
= 0 = k 1C Z CS - k -1C ZS - k 2C ZS
dt
ZS →
k2
Z+P
Concentración total de enzima activa C Za = C Z + C ZS
k 1CS C Za
C ZS =
k 1CS + k -1 + k 2
k -1 + k 2
k 1k 2 CS C Za k C C KM =
r = k 2 C ZS = = 2 S Za k1
k 1CS + k -1 + k 2 K M + CS CONSTANTE DE
MICHAELIS-MENTEN
k 2 C ZaC S
Si CS << K m r= Orden 1
KM
Si CS >> K m r = k 2 CZa Orden 0
k 2 CS C Za CS → ∞
r= rmáx = k 2 C Za
K m + CS r = rmáx
rmáx CS
r= ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN
K M + CS
DETERMINACIÓN DE LA CONSTANTE DE MICHAELIS-MENTEN

rmáx
velocidad de reacción
Orden 0 rmáx CS
KM = - CS =
r
rmáx CS
= - CS =
rmáx/2 rmáx 2
= CS (para r = rmáx 2)
Orden 1
Km tiempo
rmáx Es la máxima velocidad que puede alcanzar esta reacción

KM Es la concentración de sustrato para la cual la reacción alcanza la

mitad de la velocidad máxima (velocidad semimáxima)
Es característica para cada enzima y cuanto menor sea su valor,
mayor afinidad tendrá la enzima por el sustrato, ya que
alcanzará antes la velocidad semimáxima
1 KM 1 Representación de
= +
r rmáx CS rmáx Lineweaver-Burk
rmáx CS CS KM CS Representación de
r= = +
K M + CS r rmáx rmáx Hanes
r rmáx r Representación de
= -
CS KM KM Eadie-Hofstee

pdte.=KM/rmáx
1/r
-1/KM
1/rmáx
1/CS
1 KM 1 Representación de
= +
r rmáx CS rmáx Lineweaver-Burk

rmáx
CS/r pdte.=1/rmáx
-KM
KM/rmáx
CS
CS KM CS Representación de
= +
r rmáx rmáx Hanes

rmáx
pdte.=-KM
1/r
rmáx/KM
CS
r rmáx r Representación de
= -
CS KM KM Eadie-Hofstee
Constantes de Michaelis-Mentes para algunos sistemas enzima-sustrato
Enzima Fuente Sustrato KM, mmol l-1

Saccharomyces
Deshidrogenasa Etanol 13,0
cerevisiae
B-Amilasa Patata Amilosa 0,07
B-Galactosidasa Escherichia coli Lactosa 3,85
Aspergillus niger D-Glucosa 33,0

Glucoxidasa
Penicillium
D-Glucosa 9,6
notatum
Saccharomyces
Sacarosa 9,1
cerevisiae
Invertasa
Neuspora crassa Sacarosa 6,1
Bacillus
Penicilinasa Bencilpenicilina 0,049
licheniformis
Dependencia de la velocidad de reacción con la temperatura
 Ea  Ea 1
k(T) = A 0 exp  -  lnk = - + lnA 0
 RT  R T
Temperatura óptima Relación de Arrhenius

Actividad enzimática
Desnaturalización ln k
de la enzima
Desnaturalización de
la enzima a temperaturas altas
Temperatura
1/T, K-1
EJEMPLO (I)
Para producir una crema de protección solar se utiliza una reacción
enzimática llevada a cabo en un reactor discontinuo, en el que se
mide la concentración de sustrato como función del tiempo en un
ensayo en el que CS0 = 40 mmol l-1. Determinar la ecuación cinética.
S 
enzima Z
→ P
t, h CS, mmol l-1

0 40
1 32,7
2 25,9
4 13,6
6 4,8
8 0,98
10 0,15
EJEMPLO (I)
Supongamos que n = 0 Supongamos que n = 1
dCS dCS
- = kCS
- = kCS0 = k
dt dt
CS = CS0 - kt ln( CS0 CS ) = kt
45 6
5
35
ln(CS0/CS)
CS, mmol l-1
4
25
3
15 2
1
5
2 4 6 8 10 2 4 6 8 10
tiempo, h tiempo, h
No orden 0 No orden 1
EJEMPLO (I)
Supongamos cinética de Michaelis-Menten
rmáx CS CS KM CS
r= = +
K M + CS r rmáx rmáx
CS, mmol l-1 (-rS), mmol l-1 h-1

40 7,49
32,7 7,13
25,9 6,66
13,6 5,19
4,8 2,80
0,98 0,74
0,15 0,12
EJEMPLO (I)
6
SOLUCIÓN
5
pdte. = 1/(rmáx) =
CS/(-rS), h
= 0,103 h-1 l mmol–1 4
rmáx = 9,67 mmol h-1 l-1 3

o.o. = 1,222 h = KM/(rmáx) 2
KM = 11,82 mmol l-1
1
9 rmáx = 9,67 mmol h-1 l-1 0 10 20 30 40

(-rS), mmol l-1 h-1
7 CS, mmol l-1
5 rmáx/2
3 CS KM CS
= +
KM = 11,82 mmol l-1 r rmáx rmáx
1
rmáx CS
0 10 20 30 40 r=
CS, mmol l-1 K M + CS
DESACTIVACIÓN (INHIBICIÓN) ENZIMÁTICA
Ciertas moléculas pueden inhibir la acción catalítica de un enzima, se
denominan inhibidores
Existen dos tipos de inhibición
Irreversible Cuando el veneno metabólico se une

covalentemente a la enzima alterando su
estructura e inutilizándola de forma permanente
Reversible Es una inhibición temporal. Una vez retirado el

inhibidor la enzima recupera su actividad. El inhibidor
se une por enlaces no covalentes y puede ocupar el
centro activo por semejanza estructural con el
sustrato original (inhibidor competitivo) o bien alterar
la conformación espacial del enzima, impidiendo su
unión al sustrato (inhibidor no competitivo)
CINÉTICA DE DESACTIVACIÓN (INHIBICIÓN) ENZIMÁTICA
Estructura de la enzima
No depende de
Naturaleza de la reacción
Velocidad de
desactivación
pH y temperatura del medio
Fuerza iónica
Sí depende de
Presencia de agentes desnaturalizantes
(metales, disolventes)
Modelo de desactivación Z activa → Z inactiva primer orden
dC Za C Za = C Za0 exp(-k dt)

rd = - = k dC Za
dt
rmáx = k 2 C Za = k 2 C Za0 exp(-k dt) = rmáx 0 exp(-k dt)
EJEMPLO (II)
En determinadas condiciones, la enzima del ejemplo anterior se
desactiva, siendo su vida media de 4,9 horas. Determinar el tiempo
necesario para lograr una conversión del 85% y comparar este
resultado con el correspondiente en ausencia de desactivación.

C Za = C Za0 exp(-k dt)
k d = ln2 T1/2 = 0,141 h-1
t =T1/2 → C Za = C Za0 2
dCS rmáx CS
-rS = - = rmáx 0 exp(-k dt)CS
dt K m + CS dCS
- =
dt K m + CS
rmáx = rmáx 0 exp(-k d t)
1   K CS0 CS0 - CS 
t = - ln 1 - k d  m
ln + 
kd   rmáx CS rmáx 0 
  0  
EJEMPLO (II)
CS = CS0 (1- X S )
CS = 40 mmol l-1 (1 - 0,85) =
X S = 0,85
= 6 mmol l-1
-1 l-1
1   K CS0 CS0 - CS   rmáx = 9,67 mmol h
t = - ln 1 - k d  m
ln + 
kd   rmáx CS rmáx 0  
  0  KM = 11,82 mmol l-1
45
Sin desactivación
35
CS, mmol l-1
25
t = 12,7 horas
15
6 mmol l-1
5 5,6 horas
2 4 6 8 10
tiempo, h
CINÉTICA EN CULTIVOS
DE CÉLULAS BIOLÓGICAS
COEFICIENTES o FACTORES DE PRODUCCIÓN
En las reacciones Sustrato → Productos

biológicas Células + Sustrato → Más Células + Productos
La estequiometría del crecimiento celular es muy compleja y varía en

función de: sistema microorganismos/nutrientes, pH, temperatura, ...
Sustrato → YC/S + YP/S
masa de nuevas células formada

YC/S =
masa de sustrato consumida para producir células nuevas
masa de producto formado

YP/S =
masa de sustrato consumida para formar producto
YC/S Coeficientes o Factores

Análogos al concepto de selectividad
YP/S de producción
COEFICIENTES o FACTORES DE PRODUCCIÓN
EVALUACIÓN DE LOS COEFICIENTES DE PRODUCCIÓN
Sustrato → YC/S + YP/S
C YC/S =- dC P YP/C = dP P YP/S =- dP

dS dC dS
S C S
masa de producto formado
YP/C =
masa de nuevas células formada
CINÉTICA DEL CRECIMIENTO CELULAR
CRECIMIENTO ESTACIONARIO
MUERTE
CRECIMIENTO
ln(concentración de células)
DECELERADO
CRECIMIENTO EXPONENCIAL
Evolución de la
concentración de
células vivas
CRECIMIENTO
ACELERADO (reactor discontinuo)
INICIACIÓN
tiempo
El metabolismo de las células La ecuación del crecimiento de las
depende de la acción conjunta de células similar a la de procesos
una multitud de enzimas enzimáticos
Fase I: Iniciación o Latencia Fase II: Crecimiento Exponencial
Adaptación de las células al medio División de las células con rapidez

Síntesis de enzimas máxima
Comienza la reproducción Aprovechamiento óptimo de los
nutrientes
Velocidad de crecimiento nulo
Velocidad de crecimiento es proporcional
a la concentración de las células
Fase III: Estacionaria o de Fase IV: Fase de Muerte

estancamiento
Formación de subproductos tóxicos

Limitación del crecimiento celular Agotamiento de nutrientes
por escasez de nutrientes
Acumulación de inhibidores Disminución en la concentración de
células vivas
Velocidad de crecimiento nulo
CINÉTICA DEL CRECIMIENTO CELULAR (Fase II)
Células + Sustrato → Más Células + Productos

dCbiomasa Cbiomasa = Cbiomasa0 exp(kt)

rbiomasa = = kCbiomasa
dt
k: constante de velocidad de CS
k = k máx
crecimiento K s + CS
kmáx: constante de velocidad de crecimiento en exceso de nutrientes

CS: concentración de sustrato (limitante)
KS: constante de Monod
CS rmáx CS ECUACIÓN DE
rbiomasa = k máx Cbiomasa =
K s + CS K s + CS MONOD
DETERMINACIÓN DE LA CONSTANTE DE MONOD
K S = CS (r = rmáx 2)
En muchas ocasiones KS ↓↓ (KS<<CS) k = k máx
dCbiomasa
rbiomasa = - =
dt
= k máx Cbiomasa
Cbiomasa = Cbiomasa0 exp(k máx t)
Constantes de Monod para algunos microorganismos
Microorganismo Sustrato limitante KS, mg l-1
Saccharomyces Glucosa 25
Glucosa 4,0
Escherichia
Fosfato 1,6
Aspergillus Glucosa 5,0
Glicerol 4,5
Cundida
Oxígeno 0,042-0,045
Dióxido de carbono 0,4

Klebsiella
Potásio 0,39
Cryptococcus Tiamina 1,4⋅10-7
CINÉTICA DE LA MUERTE DE CÉLULAS (Fase IV)
Importancia de la determinación Procesos de esterilización

de la cinética de muerte de células Procesos biotecnológicos en medios letales
Procesos de muerte natural

Procesos de muerte debido a un sustancia tóxica
CC: concentración de células (biomasa)

dC C kd: constante de velocidad de muerte
rd = - = (k d + k t C t )C C natural
dt
kt: constante de velocidad de muerte
cinética de primer orden provocada
Ct: concentración de sustancia tóxica
dC C
En muchas ocasiones kd << ktCt rd = - = k t Ct CC
dt
C C = C C0 exp(-k t C t t)
CINÉTICA DE LA MUERTE DE CÉLULAS (Fase IV)
ln(CC/CC0)
(
ln C C C C0 ) = -k C t
t t
Temperatura
tiempo
Energía de activación 250-290 kJ mol-1
Elevada dependencia de kt con la temperatura
CINÉTICA DE REACCIONES
ENZIMÁTICAS HETEROGÉNEAS
PREPARACIÓN DE CATALIZADORES HETEROGÉNEOS ENZIMÁTICOS
(BIOCATALIZADORES INMOVILIZADOS)
Consiste en atrapar las células o enzimas dentro de un sólido poroso
(gel, cerámica, vidrio, resina)
Enzima/célula
inmovilizada Enzima/célula
Poro
Partícula de Matriz sólida

gel del soporte
CÉLULAS/ENZIMAS CÉLULAS/ENZIMAS SOPORTADAS

ATRAPADAS EN UN GEL POROSO SOBRE UN SÓLIDO POROSO
CARÁCTERÍSTICAS DE LOS CATALIZADORES
HETEROGÉNEOS ENZIMÁTICOS
Su actividad está relacionada con la cantidad de células o enzimas

por unidad de volumen de catalizador
Importancia de los procesos de transferencia de materia en el

exterior e interior de las partículas
Permite operar en continuo
Mejora de la estabilidad de las enzimas
Facilita la separación de los productos
Similitud de su estudio con respecto a los catalizadores sólidos

heterogéneos
ETAPAS EN EL MECANISMO
Son etapas en serie (consecutivas)

1. Los reactivos pasan desde la fase fluida hasta la superficie
externa del sólido, por difusión

2. Los reactivos pasan desde la superficie de la partícula hasta el
interior de los poros, por difusión
3. Etapas de reacción bioquímicas
4. Los productos salen por difusión desde el interior de los poros
hasta la superficie exterior de la partícula
5. Los productos se difunden desde la superficie externa de la
partícula hasta la fase fluida
Nótese que las etapas de este tipo de reacciones son muy similares que las etapas de las
reacciones heterogéneas con un catalizador soportado inorgánico, analizadas en el Tema 7.
Además de las peculiaridades intrínsecas de los catalizadores biológicos descritas anteriormente,
las reacciones enzimáticas heterogéneas son reacciones fluido-sólido (enzimas soportadas) en las
que el fluido (reactivos) generalmente es un líquido.
Superficie de la película estancada
Superficie exterior de la partícula
Superficie interna de la partícula

Difusión Difusión
externa
1 interna
2
Reacción
Flujo principal Capa límite Partícula
3
Difusión Difusión
5 externa
4 interna
Centro activo
ETAPAS 1 / 2 / 4 / 5 etapas físicas (transferencia de materia)

difusión externa e interna de reactivos y productos
ETAPA 3 etapas (bio)químicas
GAS CATALIZADOR
2
1 3
6 PORO
5
CAPA LÍMITE
DE LA REACCIÓN DE DIFUSIÓN
ENZIMÁTICA HETEROGÉNEA
PRODUCTOS
Concentración
REACTIVOS
posición
De acuerdo con las etapas que conforman el mecanismo de una
reacción enzimática heterogénea, la ecuación cinética de la reacción
será la ecuación cinética de la etapa más lenta (etapa controlante),
de forma análoga a las reacciones catalíticas heterogéneas
A la hora de deducir la ecuación cinética se asume que:

Las etapas físicas (de difusión) son FASE PORO DEL
FLUIDA CATALIZADOR
suficientemente rápidas, es decir,
mucho más rápidas que cualquier
etapa química REACTIVOS
Concentración
Esto permite considerar que la
concentración de reactivos (y
productos) en las proximidades de un
centro catalítico son aproximadamente
PRODUCTOS
iguales a las concentraciones de CAPA LÍMITE
DE DIFUSIÓN
reactivos (y productos) en el seno de
la fase fluida
posición
Por tanto, si las etapas físicas son mucho más rápidas que las etapas
químicas se puede suponer que:
Creactivo (fase fluída) ≅ Creactivo (en la capa límite)
≅ Creactivo (en el interior de los poros)

Cproducto (en el interior de los poros) ≅
Cproducto (en la capa límite) ≅ Cproducto (fase fluída)
Nótese que únicamente las concentraciones de las especies químicas en la fase fluida
pueden ser medidas experimentalmente, a diferencia de las concentraciones en la capa
límite o en el interior del poro
A continuación se analizará el estudio y modelado de las etapas de

difusión tanto externa como interna (Fenómenos de Transporte), para
poder establecer el modo de realización de los experimentos de tal
forma que se pueda considerar que la ecuación cinética de una
reacción enzimática heterogénea es la ecuación cinética de una etapa
(bio)química ó biológica –análogamente a lo descrito en el Tema 7
GRADIENTES DE CONCENTRACIÓN
DIFUSIÓN EXTERNA
la difusión interna y la transferencia de energía son rápidas

Suposiciones no existen gradientes de concentración en el interior de los
poros y que la partícula es isoterma
N'S = k LSP (CS - CSS )
N’S, mol s-1 Flujo de S desde el exterior hasta la superficie de la partícula

kL, cm s-1 Coeficiente de transferencia de materia por convección
CS, mol cm-3 Concentración de sustrato en la fase líquida
CS , mol cm-3 Concentración de sustrato en la superficie externa
S
DIFUSIÓN EXTERNA
Balance de materia (estado estacionario) en el exterior de la partícula

 La cantidad de S que llega   La cantidad de S que 

  =  
 a la superficie de la partícula   desaparece por reacción 
k L S P (C S - C SS ) = ( rP )S VP
kL, cm s-1 Coeficiente de transferencia de materia por convección

(fenómenos de transporte)
(rP)S, mol cm-3 s-1 Velocidad de reacción evaluado para la concentración
en la superficie del catalizador
La resolución del balance de materia permite determinar la

concentración en la superficie del catalizador
DIFUSIÓN EXTERNA
Si kL ↑ ⇒ menor resistencia a la difusión L-S
2
 k L dp  2/3
  = 4,0 + 1,21Pe Pe: número de Peclet
 De 
ρF, g cm-3 Densidad del fluido µF, g cm-1 s-1 Viscosidad cinemática
dp, cm Diámetro de partícula vL, cm s-1 Velocidad del fluido
De, cm2 g-1 Difusividad del sustrato ρC, g cm-3 Densidad del catalizador
en la mezcla
VL dp
Pe =
 gd ( ρ C - ρF ) 
2 2/3
De  k L dp  3
p
gd2p ( ρ C - ρF )   = 16 + 4,84  
VL =  De   18µFDe 
18µF Correlación de Brian y Hales (corregida)
DIFUSIÓN EXTERNA
El cálculo teórico de los gradientes es laborioso
Estimación de numerosas propiedades de transporte

Errores asociados en la estimación
Velocidad de reacción Velocidad de reacción
limitada por limitada por la
difusión externa reacción biológica
Velocidad de reacción (-rA)

CSS
Es necesaria una comprobación CS
= (en la superficie
(en el fluido)
experimental de la ausencia de del cat.)
controles de difusión externa
Se realizan una serie de ensayos
variando la velocidad de agitación Sin control de
de la mezcla sól.-líq. (relacionada la difusión externa
con la VL) manteniendo
constantes el resto de las
Velocidad de agitación
44
variables de operación
OCW © Rubén López Fonseca – Departamento de Ingeniería Química – Universidad del País Vasco/EHU
DIFUSIÓN INTERNA
Balance de materia (estado estacionario) en un elemento de volumen

del interior de la partícula
 La cantidad de S   La cantidad de S   La cantidad de S 

     
 que entra por la  -  que sale por la =  que desparece 
 superfice exterior   superfice interior   por reacción 
     
 (r+∆r)   (r)   dentro de ∆r 
1 d  2 dCS 
2  r De  = rP (CS ,T)
r dr  dr 
1 d  2 dCS  rmáx CS
2  r De  =
r dr  dr  K M + CS
DIFUSIÓN INTERNA
La velocidad de reacción puntual es un parámetro de difícil cálculo

Se utiliza la velocidad media en la partícula de catalizador
FACTOR DE EFICACIA (η)
η=
velocidad de reacción real media en la particula
=
rP ( )
velocidad de reacción en condiciones de superficie ( rP )S
1 V
∫
RP
rP (CS ,T) dV
η= V
0 
η=
3 ∫0
rP (CS ,T) r 2 dr
rP (CSS ,T) R P3 rP (CSS ,T)
Partícula esférica
η = 1 No control difusional (gradientes internos despreciables)
η → 0 Fuerte descenso de la concentración con la posición
Control difusional (interno) importante
DIFUSIÓN INTERNA
ORDEN 0 ORDEN 1
1 d  2 dCS  1 d  2 dCS 
2  r De  =k 2  r De  = k'CS
r dr  dr  r dr  dr 
Φ S = módulo de Thiele Φ S = módulo de Thiele
Rp k Rp k
= =
3 2CSDe 3 De
3
 1  3Φ2 -2    1  1 1 
1
η = 1-  +sen  arctg  S
  η=  - 
2 3  2 3Φ2 -1    ΦS  tanh(3 Φ ) (3 Φ )
S 
   S   S
Cuanto mayor sea el tamaño de partícula

El factor de eficacia
Cuanto más rápida sea la reacción
será más bajo
Cuanto menor sea la difusividad efectiva
DIFUSIÓN INTERNA
Φ S < 1/3 ⇒ η → 1
1
Ausencia de control difusional interno
La concentración del reactivo en la
Factor de eficacia, η
superficie del catalizador y el interior de los

poros es la misma
0,1
Φ S > 5 ⇒ η ∝ 1/Φ S
Fuerte control difusional interno
orden 1 Existe de un gradiente de concentración
entre el exterior y el interior de la partícula
0,01
0,1 1 10
Módulo de Thiele, Φs
DIFUSIÓN INTERNA
El estudio teórico indica que disminuyendo el tamaño de partícula
aumenta el valor de eficacia

Velocidad de reacción Velocidad de reacción
limitada por la limitada por
reacción biológica difusión interna
La velocidad media en el
interior de la partícula es igual CS CS
Velocidad de reacción (-rA)

(en la superficie = (en el interior
a la velocidad de reacción en
del cat.) de los poros)
la superficie
Se realizan una serie de
experimentos variando el tamaño
de partícula manteniendo el resto
Sin control de
de las variables de operación la difusión interna
constantes η=1
Tamaño de partícula (Rp)

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Tema 10 – Reacciones Enzimáticas

Enzimas: proteínas de elevado peso molecular (104-106 g mol-1)

Son capaces de catalizar reacciones bioquímicas/biológicas

Catalizadores efectivos a concentraciones bajas (10-5-10-10 mol l-1)

Son sintetizadas in vitro o extraídas de su fuente biológica

Oxireductasas catalizan reacciones redox

Transferasas transfieren grupos funcionales

Hidrolasas catalizan reacciones de hidrólisis

Liasas rompen enlaces C-O, C-C y C-N

Isomerasas reagrupan grupos funcionales

Ligasas juntan dos moléculas

En condiciones severas pueden desnaturalizarse (alteración o

Difícil y cara separación del producto ⇒ heterogeneización del proceso

Tipos de especificidades enzimáticas

De acción ⇒ cada enzima sólo puede llevar a cabo un tipo de

2. El sustrato se une a una región concreta del enzima, llamada

I. ENZIMA SOLUBLE – SUSTRATO SOLUBLE

II. ENZIMA INSOLUBLE – SUSTRATO SOLUBLE

Las reacciones enzimáticas pueden considerarse como no elementales

Concentración total de enzima activa C Za = C Z + C ZS

Si CS >> K m r = k 2 CZa Orden 0

DETERMINACIÓN DE LA CONSTANTE DE MICHAELIS-MENTEN

DETERMINACIÓN DE LA CONSTANTE DE MICHAELIS-MENTEN

rmáx Es la máxima velocidad que puede alcanzar esta reacción

KM Es la concentración de sustrato para la cual la reacción alcanza la

DETERMINACIÓN DE LA CONSTANTE DE MICHAELIS-MENTEN

DETERMINACIÓN DE LA CONSTANTE DE MICHAELIS-MENTEN

DETERMINACIÓN DE LA CONSTANTE DE MICHAELIS-MENTEN

Enzima Fuente Sustrato KM, mmol l-1

B-Galactosidasa Escherichia coli Lactosa 3,85

Aspergillus niger D-Glucosa 33,0

Temperatura óptima Relación de Arrhenius

ensayo en el que CS0 = 40 mmol l-1. Determinar la ecuación cinética.

t, h CS, mmol l-1

Supongamos que n = 0 Supongamos que n = 1

Supongamos cinética de Michaelis-Menten

CS, mmol l-1 (-rS), mmol l-1 h-1

rmáx = 9,67 mmol h-1 l-1 3

9 rmáx = 9,67 mmol h-1 l-1 0 10 20 30 40

7 CS, mmol l-1

Irreversible Cuando el veneno metabólico se une

Reversible Es una inhibición temporal. Una vez retirado el

Modelo de desactivación Z activa → Z inactiva primer orden

dC Za C Za = C Za0 exp(-k dt)

rmáx = k 2 C Za = k 2 C Za0 exp(-k dt) = rmáx 0 exp(-k dt)

resultado con el correspondiente en ausencia de desactivación.

En las reacciones Sustrato → Productos

La estequiometría del crecimiento celular es muy compleja y varía en

masa de nuevas células formada

masa de producto formado

YC/S Coeficientes o Factores

C YC/S =- dC P YP/C = dP P YP/S =- dP

una multitud de enzimas enzimáticos

Fase I: Iniciación o Latencia Fase II: Crecimiento Exponencial

Adaptación de las células al medio División de las células con rapidez

Fase III: Estacionaria o de Fase IV: Fase de Muerte

Formación de subproductos tóxicos

Células + Sustrato → Más Células + Productos

dCbiomasa Cbiomasa = Cbiomasa0 exp(kt)

kmáx: constante de velocidad de crecimiento en exceso de nutrientes

En muchas ocasiones KS ↓↓ (KS<<CS) k = k máx

Cbiomasa = Cbiomasa0 exp(k máx t)

Microorganismo Sustrato limitante KS, mg l-1

Dióxido de carbono 0,4