Triglicéridos

USO: este reactivo esta pensado para la determinación cuantitativa “in vitro” de
triglicéridos en el suero humano o plasma.

SIGNIFICADO CLINICO:

Los triglicéridos son lípidos que en parte se absorben de la dieta y también son
productos por el organismo a partir de carbohidratos. Su evolución es importante
para el diagnóstico y seguimiento de las hiperlpidemias ya sean de orígenes
genéticos o secundarios a otras enfermedades. Valores elevados aumentan el
riesgo de arteriosclerosis y de enfermedad coronaria.

PARAMETROS.

Longitud de onda primaria 500nm (500-550nm)

Tipo de ensayo punto final

Temperatura 37°

p. ej.vol de muestra 6uL

Volumen de reactivo 600uL

Incubación 5 minutos

Linealidad 10mmol/L (885mg/dL) con agua.

CÁLCULOS:

En general, el instrumento calcula los resultados de forma automática, como

sigue:

Absorbancia de desconocido

X valor de estándar = TRIGLICERIDOS

Absorbancia del estándar

La conferencia del consenso del NIH 6 clasifico la Hipertigliceridemia en dos

categorías:

HIPERTIGLICERIDEMIA DISTINTA:

Triglicéridos > 5.6mmol/L (> 500mg/dL )

HIPERTIGLICERIDEMIA LÍMITE:

Valor de triglicéridos 2.8 - 5.6 mmol/dL (250 – 500mg/dL).

VALORES ESPERADOS:

Niveles recomendados (deseables) de triglicéridos para adultos.

Varón: 0.45 – 1.81 mmol/L ( 40 - 160 mg/dL)

Mujer: 0.40 – 1.53 mmol/ L (35 – 135 mg/dL )

Preparación de medios de cultivo

TIPOS DE MEDIOS

Los medios de cultivo se dividen acorde a sus características en generales,

selectivos Diferenciales, permiten el crecimiento de cualquier tipo de bacteria.
MEDIOS GENERALES

• Agar Soya Tripticasa

• Agar marino 2216 o Zobell

• Agar Nutritivo**

* añadir 2.0 % NaCl

** añadir 2.5 % NaCl2-sep-05

MEDIOS SELECTIVOS

• Agar Tiosulfato, Citrato, Sales de bilis,

Vibrio Sacarosa (TCBS):

Pseudomonas • Agar Cetrimida: 2-sep-05

MEDIOS DIFERENCIALES

• Agar Eosina Azul de Metileno:

PREPARACIÓN DE MEDIOS

Siempre preparar los medios con agua destilada (salvo el Marino). Es necesario
ajustar siempre el pH así como todos los utensilios deben estar perfectamente
limpios.

Todos los medios deben esterilizarse de alguna forma. Los medios se preparan
en matraces cónicos con tapa. Se pesa la cantidad de medio requerida, se
disuelve o suspende en el agua.
Se ajusta el pH, se esteriliza a 121°C por 20 min, se espera a que enfrie (42°C o
hasta que se pueda sostener el recipiente sin quemarse la mano.

Servir 20 ml Aprox. en cada caja de Petri

ESTERILIZACIÓN

Autoclave, – Húmeda

No colocar recipientes completamente cerrados en la autoclave. El vapor debe

entrar en contacto con todo lo que se quiere esterilizar

Esterilización húmeda

• Temperatura: 121 -123°C (250-254°F)

• Presión: 15 psi

• Tiempo: 20 -30 min líquidos*

El tiempo depende de que tan llena este la cámara de la autoclave, muy llena más
tiempo.

Preparación del material del área de microbiología.

1.-Hacer los hisopos que se utilizan para tomar la muestra de exudados faríngeos
con pegamento se va pegando el algodón en el palillo de madera.

2.-Preparación de solución salina en los tubos de ensayo para tomar las muestras
microbiológicas con hisopo y poner a los parásitos en el portaobjetos en donde se
mirara al microscopio.

Esta solución mantiene viables a los organismos por que no rompen sus
membranas ni los llena de agua, por lo que los puedes ver en fresco, es decir,
como son normalmente.
Cuando miras al microscopio puedes ver los parásitos aun en su forma original y
así puedes diferenciarlos para saber de cual se trata, aunque también sirve para
hacer antibiogramas donde las bacterias son suspendidas y se inoculan en el
medio para saber que antibiótico se le va dar al paciente.

3.-Lavar perfectamente todo el material y esterilizar ya que en el área de

microbiología se utiliza material estéril puesto que todo, incluido el aire y las
personas estamos cubiertos de bacterias y esporas de bacterias, por lo tanto si
quieres cultivar un solo microorganismo.

En pocas palabras es evitar la contaminación por bacterias que estén presenten

en el propio material, o que a el venga del aire, o de los propios manipuladores y
la temperatura adecuada es a 121 -123°C (250-254°F), con una presión: 15 psi y
un tiempo de entre 15 a 20 min dependiendo de que tanto material se allá
introducido a esterilizar.

4.- esterilizar el área de trabajo con alcohol etílico al 70% (etanol), esto es antes
de hacer los cultivos de microbiología así como mantener un mechero de bunsen
encendido cerca de donde se va a trabajar para que no se contamine el área.

5.- Al final de cada siembra también se debe de esterilizar las asas bacteriológicas
utilizadas con el fin de que no queden contaminadas y se guarden así y prevenir
que se contamine el lugar donde estas sean guardadas.

Cálculos para realizar un perfil hepático

(Bilirrubinas, TGO, TGP, ALP, DHL, proteínas albumina, globulina)

Bilirrubina Total
Uso: reactivo utilizado para la determinación cuantitativa “in vitro” de bilirrubina
total en muestras de suero humano.
SIGNIFICADO CLINICO

Bilirrubina total en suelo es elevada en cirrosis, hepatitis y en ictericia obstructiva y

hemolítica. La diferencia entre bilirrubina directa e indirecta es importante en la
determinación de causas que especifican un aumento en la bilirrubina total.

PARAMETROS:

Temperatura de incubación: 37°C

Longitud de onda: 550nm

Tipo de ensayo: punto final

Dirección: creciente

Proporción muestra/reactivo: 1:20

Volumen de la muestra: 50ml

Volumen del reactivo: 1.0ml

Tiempo de incubación: 10min

CALCULOS

Absorbancia de la muestra por valor de la calibrador (mg/DI) = bilirrubina total

absorbencia del calibrador.

EJEMPLO:

Absorbancia de la muestra= 0.350

Absorbancia del calor= 0.240

Valor del calibrador= 5.0mg/DI

 0.340

--------------- X 5 = 7.1mg/ dL

0.240

LIMITACIONES

Muestras con valores mayores de 20mg/Dl deben se diluidas 1:1 con solución
salina y ensayada nuevamente, el resultado final debe ser múltiple x dos.

VALORES ESPERADOS

0.2-1.0mg/dL

Bilirrubina Directa
Uso: reactivo utilizado para la determinación cuantitativa “in vitro” de bilirrubina
directa en muestra de suero humano.

SIGNIFICADO CLÍNICO

Los glóbulos rojos, al final de su vida circulante, son destruidos e el sistema

retículo endotelial, principalmente en el bazo el grupo hemo resultante, una vez
separado del hierro se convierte en bilirrubina.

Este proceso es responsable aproximadamente un 80% de los 3000mg de

bilirrubina que se forma al día. Una vez transformada es transportada al hígado
unida a la albumina y se conoce como bilirrubina indirecta o no conjugada.
En el hígado la bilirrubina se conjuga con acido glucuronico (mono y
diglucuronidos) para formar la bilirrubina conjugada o directa es excretada, vía éter
cobilinogeno por el intestino. La bilirrubina es la suma de las fracciones conjugada
y no conjugada.

PARAMETROS:

Temperatura de incubación: 37°C

Longitud de onda: 550nm

Tipo de ensayo: punto final

Activador 10uL

Proporción muestra/reactivo: 1:20

Volumen de la muestra: 50uL

Volumen del reactivo: 1000uL

Tiempo de incubación: 10min

CALCULOS

Abs. de la muestra ----- abs. del blanco de la muestra

------------------------------------------------------------------------X Valor del calibrador

(mg/dL)=bilirrubina directa.

Abs. del calibrador ----------------- abs. Del calibrador

EJEMPLO:

Absorbancia de la muestra o.350

Absorbancia del blanco 0.010

Absorbancia del calibrador 0.250

Absorbancia del blanco 0.010

Valor del calibrador 2mg/Dl

0.350-----------0.010

------------------------- X 4 = 57mg/dL x17.10=mmol/L

0.250----------0.010

VALORES ESPERADOS

Adultos y niños mayores de un mes 0.0-0.2mg/dL.

TGO (Transaminasa GO (AST))

USO: Este reactivo esta pensado por la determinación cuantitativa “in vitro “de la
AST (aspartato aminotransferasa en el ser humano.

SIGNIFICADOCLINICO:

Es ampliamente distribuida en amplias concentraciones en el corazón, hígado,

músculos esqueléticos, riñón y en eritrocitos. El daño en la hepatitis viral, necrosis
hepática, cirrosis, etc. puede tener como resultado el aumento de niveles.
PARAMETROS:

TEMPERATURA 37°

LONGITUD DE ONDA PRIMARIA 340nm (334 – 365 nm )

Volumen de muestra 60uL

Volumen de reactivo 600Ul

Retraso 30 segundos

CALCULO

TGO – 600uL de reactivo + 60uL de muestra - lectura 340nm

600uL absorbancia x 1746 acculine

EJEMPLO:

Absorbancia / minuto = 0.08

Factor= 1746

Ast. = 0.08 x 1746 = 140uL

ALP (Fosfatasa Alcalina)

USO: este reactivo esta pensado por la determinación cuantitativa “in vitro” en
suero humano.

PARAMETROS:

Longitud de onda Hg 405nm

Cubeta 1cm de espesor

Temperatura 25°C, 30°C, 37°C

Medición frente al aire

PIPETEAR EN LA CUBETA: Macro Semi Micro

Micro

Muestra ----------------------------- 0.05 ml 0.02ml 0.01ml

Reactivo (25°C, 30°C, 37°C ) 3.00ml 1.00ml 0.50ml

Mezclar leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar el tiempo

simultáneamente cada 30 segundos por 4 minutos. Leer de nuevo al cabo de 1,
2,3 y 4 minutos.

CALCULO

ALP – 600uL de reactivo + 10uL de muestra – 405nm

600uL absorbancia x 3300.

VALORES NORMALES EN SUERO

25°c 30°c 37°c

Hombre / mujer: 60 -170u/l 73 – 207u/l 98-279u/l

 DHL (Deshidrogenasa Láctica)
RAZONES POR LAS QUE SE REALIZA EL EXAMEN

La deshidrogenasa láctica (DHL) se mide con mayor frecuencia para verificar daño
tisular. La enzima de deshidrogenasa láctica se encuentra en muchos tejidos del
cuerpo, especialmente el corazón, el hígado, el riñón, el músculo esquelético, el
cerebro, las células sanguíneas y los pulmones.

CALCULO

600uL de reactivo + 10 uL de muestra –340nm

Al minuto se toma la primera lectura y la segunda lectura es al medio minuto y así

sucesivamente hasta llegar a los cuatro minutos luego se restan las absorbancias
y se toma la lectura más alta y se multiplica por el estándar que es de 9690.

TGP (glutamico-piruvico transaminasa).

RAZONES POR LAS QUE SE REALIZA EL EXAMEN

En transaminasa glutámico pirúvico (TGP): se localiza básicamente en las células

del hígado, este análisis sirve específicamente para detectar hepatopatías.

CALCULO

600uL de reactivo + 60 uL de muestra –340nm

Al minuto se toma la primera lectura y la segunda lectura es al medio minuto y así
sucesivamente hasta llegar a los cuatro minutos luego se restan las absorbancias
y se toma la lectura más alta y se multiplica por el estándar que es de 1768.

PROTEINAS TOTALES
FUNDAMENTO DEL METODO

La reacción entre la proteínas y el complejo Red Pirogalolmolibdato, produce un

compuesto de color rojo cuya absorbancia se mide a 598nm.

PROCEDIMIENTO

BLANCO STANDARD MUESTRA

Estándar ------------- 20uL --------------

Muestra ------------- ------------------ 12uL

Reactivo 1.0ml 1.0ml 600uL

Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C o 10 minutos a temperatura ambiente. Leer

frente al bco. a 598nm

Coloración estable a temperatura ambiente, 30 minutos.

CALCULO

D. Opt . muestra

X conc.standard = CONCENTRACIÓN DE MUESTRA

D. Opt . stándard

conc. standard: 200mg/L

LINEALIDAD
La linealidad de la reacción en presencia de una mezcla de albumina/globulina es
de hasta 400mg/L.

VALORES NORMALES

Son de 6.4 a 8.3 g/ dL

ALBUMINA
Uso: este reactivo es utilizado para la determinación cuantitativa “in vitro” de
albumina en muestras de suero humano.

SIGNIFICADO CLINICO.

Los niveles de albumina en suero son usados como ayuda en el diagnostico de

enfermedades del hígado y de los riñones. Los niveles de albumina tienen
influencia importante como transportador de muchas sustancias tales como calcio,
bilirrubina y ácidos grasos, así como efectos de drogas y hormonas.

PARAMETROS:

Temperatura de incubación 37°

Longitud de onda 630nm

Dirección creciente

Volumen de muestra 10uL

Volumen del reactivo 1.0uL

Incubación < 90segundos

Estándar 4gr/dL
VALORES ESPERADOS:

3.5 – 5.0 g/dL

Globulina

RAZONES POR LAS QUE SE REALIZA EL EXAMEN

Las proteínas están compuestas de aminoácidos y son componentes importantes

de todas las células y los tejidos. Existen muchas clases de proteínas en el
cuerpo, con muchas funciones diferentes.

Los ejemplos de proteínas son: las enzimas, algunas hormonas, la hemoglobina,

la lipoproteína de baja densidad (colesterol "malo") y otras.

La albúmina y la globulina son las dos clases principales de proteínas en la

sangre.

La albúmina es la proteína de mayor concentración en el suero. Trasporta muchas

moléculas pequeñas, pero también es importante para impedir que el líquido se
escape de los vasos sanguíneos hacia los tejidos.

Los niveles altos de albúmina indican deshidratación y los niveles bajos pueden
significar una malnutrición o una deficiencia hepática o renal.

Los niveles de globulina son menos importantes aunque se debe determinar la

cantidad de globulina que se tiene.

CALCULO

Al tener el resultado de las proteínas totales se le resta el resultado de la albumina

y de aquí sale el resultado de la globulina.
 Uroanálisis
El Uroanálisis sirve para determinar infecciones urinarias y consiste en:

Recolectar la orina se observa el color y la turbidez, en seguida se le introduce la

tira reactiva donde se determina el pH, densidad, nitritos proteínas, glucosa
cuerpos cetónicos, sangre, se centrifuga por 5 minutos y se observa en el
microscopio el sedimento.

Coprológico
El estudio en el laboratorio de muestras fecales permite obtener datos con los
cuales determinar:

• Situación del funcionalismo digestivo.

• Infecciones intestinales causadas por bacterias, virus y hongos.

• Infecciones por parásitos intestinales o de órganos anejos.

De estas posibilidades, el denominado Análisis Coprológico Parasitario se centra

en la tercera; es decir, su objetivo es la detección, en un paciente concreto, de la
existencia de parasitismo intestinal o de glándulas anejas, pudiéndose revelar
también parasitismos localizados en órganos y sistemas muy alejados del
intestino, siempre que los parásitos productores de los mismos empleen la vía
fecal del hospedador para eliminar los elementos que le sirven para su
diseminación por la naturaleza.
El Análisis Coprológico Parasitario se basa en la identificación microscópica, en
muestras fecales del sospechoso, de los elementos parasitarios presentes en
ellas. Teniendo esto en cuenta, se puede decir que, con raras excepciones, un
resultado analítico positivo siempre es indicación de existencia de parasitismo en
el paciente.

Pero, por el contrario, un resultado analítico negativo no descarta la posibilidad de

parasitismo, ya que el propio método analítico conlleva la obtención, por causas
diversas, de falsos resultados negativos.

PROCEDIMIENTO

1.-Visualmente se evalúa el color, consistencia, presencia de alimentos, presencia

de moco, olor.

2.-El segundo paso es que mediante pruebas químicas se evalué el pH, sangre
oculta y azucares reductores.

3.- por ultimo microscópicamente se evalúa la presencia de paracitos.

Toma de muestra sanguínea.

1.- Colocar una ligadura en el brazo.

2.- Escoger la vena tocando la piel antes de la desinfección.

3.- Limpiar la piel con alcohol (70 %) sobre el sitio de la venipuntura en un área de
unos 5 cm., frotando rigurosamente.

3.- Se introduce la aguja en la vena con el bisel hacia arriba.

4.- Se toma la muestra y se deposita en los tubos recolectores de sangre.

5.- Se afloja el torniquete y se retira la jeringa.

6.- Por ultimo se vuelve a limpiar el área con alcohol y algodón y se coloca un
parche.

Frotis sanguíneo.
En un porta objetos se coloca una gota de sangre y con otro porta objetos se
extiende la sangre posteriormente se deja secar para hacer la fijación con alcohol
del 70% y poder hacer la tinción.

Tinción.
Con hemocolorantes uno rojo y uno azul se hace la tinción que nos permite
distinguir a los glóbulos rojo, blancos y plaquetas, esto se hace de la siguiente
manera introducir el porta objetos ya fijado en el hemocolorante rojo durante 15
segundos, se deja escurrir y posteriormente se introduce en el hemocolorante azul
de 20 a 25 segundos se saca y se deja secar para que estos puedan ser
observados en el microscopio.

Grupos sanguíneo y RH.

Se coloca una gota de sangre en tres orificios de una placa de porcelana y a al
primer orificio con la gota de sangre se le adiciona antisuero A y al segundo
antisuero B y al tercero el reactivo RH, se agita la placa durante algunos minutos
en un agitador y luego se observa en que orificio se hace la sangre como con
arenitas y en cual no aquí se determina el tipo de sangre de las personas.