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Los componentes de la reacción se encuentran distribuidos Los reactivos contienen azida sódica que es tóxica. No ingerir y, en el caso
adecuadamente en tres reactivos para otorgar mayor estabilidad en la de contacto con los ojos, lavar inmediatamente con gran cantidad de
forma líquida original y mantenimiento de las condiciones óptimas de la agua y procurar auxilio médico. La azida puede formar compuestos
reacción. altamente explosivos con las cañerías de plomo y cobre. Por lo tanto,
utilizar grandes volúmenes de agua para descartar los reactivos.
El sistema ALT/GPT VET de Labtest utiliza mediciones en modo cinético y
puede ser fácilmente aplicado a analizadores automáticos y semi-
Material necesario y no provisto
automáticos capaces de medir absorbancias a 340 nm
1. Fotómetro con cubeta termostatizada capaz de medir con exactitud
absorbancias a 340 nm.
2. Pipetas para medir muestras y reactivos.
3. Cronómetro.
Se debe crear un Procedimiento Operativo Estándar (POE) que establezca 1. En un tubo rotulado Muestra o Calibrador, pipetear 0,800 mL de la
procedimientos adecuados para la recolección, preparación y mezcla Reactivo 1 + Reactivo 3.
almacenamiento de la muestra. Destacamos que los errores debidos a la
muestra pueden ser mucho mayores que los errores ocurridos durante el 2. Adicionar 0,100 mL de muestra o de calibrador de enzimas,
procedimiento analítico. homogeneizar y incubar en baño- María a 37 ± 0,2 ºC por 5 minutos.
Después de esta incubación, se puede esperar hasta 30 minutos para
Usar suero o plasma (EDTA, Heparina). La actividad enzimática
iniciar la medición cinética con la adición del Reactivo 2.
permanece estable durante 4 días entre 2 - 8 ºC y 2 semanas a 10 ºC
negativos.
Como ningún test conocido puede asegurar que las muestras de sangre
3. Ajustar el cero del fotómetro a 340 nm con agua destilada o
no transmitan infecciones, todas ellas deben ser consideradas como desionizada.
potencialmente infecciosas. Por lo tanto, al manipularlas, se deben seguir
las normas establecidas para la bioseguridad.
4. Adicionar0,200 mL del Reactivo 2, homogeneizar y transferir
inmediatamente a una cubeta termostatizada a 37 ± 0,2 ºC. Esperar 1
Para descartar los reactivos y el material biológico sugerimos aplicar las minuto.
normas locales, estatales o federales de protección ambiental.
5. Registrar la absorbancia inicial (A ) y disparar simultáneamente el
1
Procedimiento de la muestra
Procedimiento
Ver los ítems Cálculo, Calibración, Linealidad y Observaciones. 1. En un tubo rotulado Muestra o Calibrador, pipetear 1,0 mL del reactivo
de trabajo.
Determinación de la actividad enzimática utilizando el
piridoxal fosfato 2. Ajustar el cero del fotómetro a 340 nm con agua destilada o
Para obtener resultados rastreables al método de referencia IFCC, es desionizada.
necesario utilizar el procedimiento bi-reactivo, para que la enzima sea
totalmente activada por el piridoxal fosfato.
3. Adicionar 0,100 mL de muestra o calibrador de enzimas,
homogeneizar y transferir inmediatamente a una cubeta termostatizada a
37 ± 0,2 ºC. Esperar 1 minuto.
Como ocurre en toda medición de la actividad enzimática, la rigurosa Cuando las condiciones óptimas de reacción citadas anteriormente son
observancia del tiempo y de la temperatura de incubación es de gran tenidas en consideración, se puede optar por la utilización del factor
importancia para la calidad de los resultados obtenidos. 1746.
Utilizando la ecuación de regresión, el error sistemático total (bias) La imprecisión total obtenida en las muestras satisface la especificación
estimado es igual a 2,9% para un nivel de decisión igual a 89 U/L y 3,3% óptima para la imprecisión total basada en la variación biológica que es
para un nivel de decisión igual a 272 U/L. Estos errores son menores que
≤6,1%.
el error sistemático analítico de la especificación óptima basada en la
variación biológica que es ≤ ± 6,0%.
Estimativa del error total . El error total (error aleatorio + error
Ensayos realizados sin piridoxal fosfato sistemático) estimado para el valor de 89 U/L es igual a 7,2% y para el
valor de 272 U/L es igual a 7,8% en los ensayos realizados con piridoxal
fosfato. Para los ensayos realizados sin piridoxal fosfato el error total
Método Método estimado para el valor de 80 U/L es igual a 5,5% y para el valor de 282 U/L
Comparativo Labtest es igual a 5,7%. Los resultados indican que el método satisface la
Número de muestras 40 40 especificación óptima para el error total (≤16%) basada en los
Intervalo de concentraciones componentes de la Variación Biológica (VB).
8,2 - 256,2 10,8 - 243,3
(U/L)
Media de las estimativas Sensibilidad metodológica . Utilizándose como parámetro la
102,4 99,4
(U/L) absorbancia mínima detectable, la sensibilidad fotométrica es de
Método Labtest = 0,958 x 1,75 U/L, correspondiendo a una absorbancia igual a 0,001.
Ecuación de regresión
Método Comparativo - 1,284
Coeficiente de correlación 0,998
En grandes animales, la ALT es una enzima muscular y, en la clínica, no 11. Thrall MA, et al. Hematología y Bioquímica Clínica Veterinaria. Roca.
posee valor diagnóstico en estas especies. 2007.
Observaciones Presentación
1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores Producto Referencia Contenido
fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de REACTIVO 1 4 X 24 mL
resultados correctos. 1008-4/30 REACTIVO 2 4 X 6 mL
ALT/GPT REACTIVO 3 1 X 1,5 mL
2. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para Liquiform Vet REACTIVO 1 2 X 80 mL
cada aplicación. Así, para preparar reactivos y usar en las mediciones, 1008-2/100 REACTIVO 2 2 X 20 mL
debe tener resistividad ≥1 megaohm o conductividad ≤1 microsiemens y REACTIVO 3 1 X 2,2 mL
concentración de silicatos <0,1 mg/L (agua tipo II). Para el enjuague del
material de vidrio el agua puede ser del tipo III, con resistividad
≥0,1 megaohms o conductividad ≤10 microsiemens. En el enjuague Informaciones al consumidor
final, utilizar agua tipo II. Cuando la columna desionizadora está con su
capacidad saturada produce agua alcalina con liberación de varios iones, [Términos y Condiciones de Garantía]
silicatos y substancias con gran poder de oxidación o reducción que
deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto dentro de
resultados de modo imprevisible. Por ello es fundamental establecer un las especificaciones hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos,
programa de control de la calidad del agua. siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en
los rótulos y en estas instrucciones sean seguidos correctamente.
3. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas
de interferencia en los resultados y en la metodología se sugiere consultar
http:/www.fxol.org.