BIOSENSORES

La detección y medición de varios componentes son esenciales en medicina

los signos vitales se controlan continuamente antes, durante y después de un procedimiento
quirúrgico o una enfermedad grave

Por lo general, se realiza un seguimiento de la frecuencia cardíaca, el ECG, la presión

arterial, la frecuencia y la calidad respiratorias, la saturación de oxígeno de la sangre y la
temperatura corporal
biosensores común es un electrodo simple para medir y registrar biopotenciales en el
cuerpo de forma no invasiva para aplicaciones como ECG
descubrimiento del galvanómetro de cuerda en 1903, por Guillermo Einthoven, permitió la
obtención del electrocardiograma (ECG). El galvanómetro de cuerda está constituido por
un poderoso electroimán entre cuyos polos se encuentra suspendida una fina cuerda de
cuarzo, revestida con platino, plata u oro, con el fin de permitir la conducción de una
corriente eléctrica.
se rastrean otras moléculas para evaluar la salud de una persona.
pacientes diabéticos utilizan un biosensor de glucosa en el control rutinario de la glucosa en
sangre
Otras herramientas de biosensores que incluyen unidades de prueba de embarazo caseras,
monitores de colesterol y monitores de oxígeno.
Estos dispositivos analíticos que incorporan un sistema de bioreconocimiento se denominan
biosensores en general
Otras aplicaciones
En la industria de defensa, la detección de agentes de guerra biológica como las esporas de
ántrax es esencial. en el control de la contaminación ambiental y en el control de procesos
en las industrias alimentaria y farmacéutica (para la contaminación por E. coli o Salmonella
Un biosensor consta de un elemento sensor biológico, un transductor y un procesador de
datos que genera una señal
El elemento sensor podría ser células, microorganismos, iones, receptores celulares,
enzimas, anticuerpos, ácidos nucleicos, productos naturales, materiales de origen biológico
o materiales biomiméticos (por ejemplo, catalizadores sintéticos, ligandos combinatorios,
polímeros impresos).
Los transductores convierten la actividad química / bioquímica en una señal medible, como
señales eléctricas o de intensidad luminosa. Una relación previamente establecida entre la
salida del transductor y la concentración de analito (llamada curva de calibración) permite
la cuantificación del analito
Los datos obtenidos se procesan en un formato útil que se puede mostrar o manipular
Las herramientas de biosensores miniaturizadas también ofrecen una serie de beneficios
potenciales que incluyen tamaños de muestra reducidos, una reducción en el costo y la
posibilidad de dispositivos desechables de un solo uso.
Los avances en el desarrollo de dispositivos de laboratorio en chip reducen y
potencialmente simplifican las pruebas de laboratorio como
el análisis de ADN,
la detección de antígenos y la genotipificación de alto rendimiento.
Los ensayos biológicos de alto rendimiento basados en la tecnología de microarrays,
capaces de analizar simultáneamente miles de genes y productos génicos, han
revolucionado el descubrimiento de agentes terapéuticos
Hasta hace poco tiempo en los laboratorios de biología y genética molecular se podía medir
la actividad de cada gen por separado, pero actualmente con las modernas técnicas de
genómica puede medirse simultáneamente la actividad de decenas de miles de genes
usando una herramienta nueva conocida como microarray de oligonucleótidos de DNA
(Harrington et al. 2000)
Bioelectrodos
Entre los diversos dispositivos de detección desarrollados hasta ahora, el método
electroquímico es, en general, superior a los métodos ópticos debido a su rápida respuesta,
manejo simple y fácil y bajo costo
Los bioelectrodos funcionan como una interfaz entre las estructuras biológicas y los
sistemas electrónicos para medir los biopotenciales (discutidos en el Capítulo 3) generados
en el cuerpo debido al flujo de corriente iónica )pag 354)
. Los bioelectrodos llevan a cabo una función de transducción y convierten el flujo de
corriente iónica en el cuerpo en corriente electrónica en el biosensor.
los mecanismos básicos del proceso de transducción y el efecto sobre las características de
los bioelectrodos
9.2.1 Interfase electrodo-electrolito
donde M es el átomo de metal (por ejemplo, plata),
Mm + representa el catión del metal y m es la valencia del catión.
Si el metal tiene el mismo material que el catión en el electrolito, entonces este material se
oxida y entra al electrolito como un catión
Las reacciones son reversibles y también se producen reacciones de reducción (ganancia de
e−).
De manera similar, un anión en el electrolito se oxida en el electrodo para formar un átomo
neutro con la liberación de electrones dados al electrodo.
donde An− representa un anión (por ejemplo, Cl−), y n es la valencia del anión
Las reacciones de oxidación y reducción son dos reacciones en competencia que finalmente
alcanzan una condición de equilibrio en la que las corrientes debidas a la transferencia de
electrones hacia y desde el metal son iguales
Esta densidad de corriente de intercambio de equilibrio fluye a través de la interfaz en ambas
direcciones dando como resultado una corriente neta de cero.
La reacción dominante se puede inferir de si la corriente fluye del electrodo al electrolito
(oxidación) o si la corriente fluye del electrolito al electrodo (reducción).
La concentración local de Mm + en la interfaz cambia y el electrolito que rodea al metal
tiene un potencial diferente del resto de la solución
Las reacciones de oxidación o reducción en la interfase electrodo-electrolito conducen a
una doble capa eléctrica
similar a la que existe a lo largo de las membranas celulares biológicas eléctricamente
activas
La diferencia de potencial establecida por el electrodo y el electrolito que lo rodea se
denomina potencial de media celda.
El potencial de media celda depende del electrodo y la concentración de iones en la
solución y la temperatura
la medición del potencial eléctrico desarrollado por un electrodo en una solución de
electrolito se denomina potenciometría
La ecuación de Nernst relaciona el potencial con la concentración de algún ion en solución

ΔΦhc, 0 es el potencial de media celda en condiciones estándar (25 ° C y 1 atm) y

α representa la actividad (es decir, concentraciones termodinámicas ideales de estados
oxidado y reducido).
En soluciones diluidas, la actividad es casi igual a la concentración
en soluciones concentradas la actividad es menor que la concentración debido a los efectos
intermoleculares.
A menudo, el estado reducido es un metal, αM es una constante igual a 1
Estos parámetros están relacionados por el coeficiente de actividad, γ,

La ecuación (9.2) relaciona la concentración del electrolito con el potencial eléctrico

Se podría calcular la concentración desconocida del electrolito conociendo el potencia
potenciales de media celda no se pueden medir porque la conexión entre el electrolito y un
terminal del dispositivo de medición de potencial no se puede completar
Es necesario un segundo electrodo llamado electrodo de referencia
se utiliza como electrodo de referencia , el potencial de media celda del electrodo de
hidrógeno normal (NHE).
NHE que consiste en un alambre de platino sumergido en una solución de ácido clorhídrico
(1,18 M correspondiente a la actividad unitaria de H +) y actúa como el electrodo sobre el
cual se burbujea gas hidrógeno (1 atm de presión a 25 ° C). La reacción se representa como

Cuando se incorpora el potencial del electrodo de referencia, el potencial neto de la celda es

Por ejemplo, el potencial de media celda de la plata / cloruro de plata a 25 ° C es + 0,222 V

frente a NHE.
Ejemplo 9.1.
Un electrodo de plata-cloruro de plata saturado contiene KCl 0,01M. Calcule el potencial de
media celda desarrollado a 25 ° C, asumiendo una disociación completa de KCl.
Solución: Solo hay una variable que contribuye a la ecuación de Nernst, la concentración
(actividad) del ion cloruro, ya que Ag y AgCl están en estado puro y, por lo tanto, tienen
actividades de 1. De (9.2),

9.2.2. Polarización
Si hay un flujo de corriente a través de la interfaz, entonces se altera el potencial de media
celda observado.
La diferencia se debe a lo que se llama polarización del electrodo
La diferencia entre el potencial de media celda observado con y sin el flujo de corriente se
conoce como sobrepotencial. El sobrepotencial es contribuido por tres mecanismos

1. Sobrepotencial óhmico, : el voltaje cae a lo largo del camino de la corriente, la corriente

cambia la resistencia de un electrolito y, por lo tanto, una caída de voltaje no sigue la ley de
Ohm;
2. Sobrepotencial de concentración: la corriente cambia la distribución de iones en la
interfaz electrodo-electrolito;
3. Sobrepotencial de activación: la corriente cambia la tasa de oxidación y reducción. Dado
que las barreras energéticas para la oxidación y la reducción son diferentes, la energía de
activación neta depende de la dirección de la corriente y esta diferencia aparece como
voltaje.

Figura 9.4. Polarización de electrodos

Los electrodos perfectamente polarizables son aquellos en los que ninguna carga real cruza
la interfaz electrodo-electrolito cuando se aplica una corriente. El electrodo se comporta
como un condensador y la corriente a través de la interfaz es una corriente de
desplazamiento

9.2.3. Electrodos de monitoreo de potencial

Un bioelectrodo comúnmente utilizado en aplicaciones biomédicas es el electrodo Ag / AgCl
(Figura 9.5), que consiste en un alambre de plata recubierto con cloruro de plata y sumergido
en una solución que contiene iones cloruro, típicamente una solución de KCl. El AgCl es
ligeramente soluble en agua y permanece muy estable en un líquido que tiene una gran
cantidad de Cl− como el fluido biológico. Las dos reacciones químicas de Ag / AgCl son:

Ec. 9.3.
donde ΔΦ0 es el potencial.
Ag / AgCl se fabrica en una forma reutilizable, ( con mayor frecuencia como electrodo
desechable)
Otro es Calomel cloruro de mercurio y KCl
Los bioelectrodos que se pueden unir a la superficie de la piel se pueden agrupar en dos
categorías.
a)La primera categoría incluye los bioelectrodos empaquetados con el electrolito contenido
en la cavidad o receptáculo del electrodo.
b) El segundo tipo de bioelectrodo es un electrodo de estado seco compuesto por una placa
de electrodo con una superficie superior que tiene los medios para conectar eléctricamente
el placa de electrodo a un cable conductor y una superficie inferior de contacto con el
cuerpo hecha de un material conductor para mejorar una conexión eléctrica con la piel
9.3. Elementos biosensores
Los bioelectrodos responden directamente a la actividad cambiante de los iones de los
electrodos o al cambio de la actividad iónica en una solución mediante la formación de
complejos (no son muy selectivos)
para incorporar la selectividad es la introducción de varios elementos basados en los
requisitos
Los elementos sensores en aplicaciones biomédicas se pueden agrupar ampliamente en las
siguientes categorías
9.3.1 Biosensores basados en enzimas
Las enzimas se utilizan como elementos de reconocimiento bioquímico ( catalizan
selectivamente una reacción de un sustrato para producir un producto). El analito podría ser
un sustrato o un producto de la reacción enzimática.
Enzima + Sustancia producto
La especificidad de las enzimas con respecto al reconocimiento de sustratos permite a los
sensores que incorporan enzimas con una gama limitada de sustratos para lograr una
selectividad mucho mayor para una especie objetivo
Ejemplos incluyen biosensores de glucosa en sangre, dispositivos de control de colesterol y
biosensores de urea
Por ejemplo, GOX cataliza selectivamente las siguientes dos reacciones:
GOX-FAD representa el estado oxidado y GOX-FADH2 representa el estado reducido del
sitio activo de flavina dentro de la enzima glucosa oxidasa
Las enzimas oxidasa (figura 9.6) actúan oxidando sus sustratos
Estas enzimas vuelven a su estado oxidado activo transfiriendo los electrones al oxígeno
(llamado cosustrato), lo que resulta en la producción de peróxido de hidrógeno (H2O2).
Este mecanismo se utiliza fácilmente en un dispositivo biosensor amperométrico
Debido a que tanto el O2 como el H2O2 son electroquímicamente activos, el progreso de la
reacción bioquímica puede rastrearse reduciendo el O2 u oxidando el H2O2

Las reacciones electroenzimáticas siguen las interacciones receptor-ligando (discutidas en el

Capítulo 7) y la cinética de la reacción está representada por

Ec. 9.4
donde I es la respuesta amperométrica en estado estacionario del electrodo enzimático a
concentraciones de sustrato específicas S, kM es la constante electroquímica de Michaelis-
Menten
9.3.2 Biosensores basados en anticuerpos
Los biosensores basados en anticuerpos también se denominan inmunosensores y dependen
de las interacciones anticuerpo-antígeno
Antigeno
Cualquier sustancia que haga que el cuerpo produzca una respuesta inmunitaria contra ella.
Los antígenos incluyen toxinas, sustancias químicas, bacterias, virus u otras sustancias de
fuera del cuerpo. Los tejidos y las células corporales, incluso las células cancerosas,
también contienen antígenos que pueden producir una respuesta inmunitaria. Estos
antígenos también se pueden usar como marcadores en pruebas de laboratorio para
identificar esos tejidos o células.
La reacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) es una de las reacciones moleculares angulares
en la respuesta inmunitaria del organismo. El concepto se refiere a la unión específica de
un anticuerpo con un antígeno para inhibir o demorar su toxicidad. El acoplamiento
estructural entre las macromoléculas se realiza gracias a varias fuerzas débiles que
disminuyen con la distancia, como los puentes de hidrógeno, las fuerzas de Van Der Waals,
las interacciones electrostáticas y las hidrofóbicas
Caracteristicas
Especifidad
Rapido
Espontaneo
Reversible
Los anticuerpos son proteínas, llamadas inmunoglobulinas, producidas por el sistema
inmunológico de animales de orden superior en respuesta a la entrada de materiales
extraños (virus, bacterias y dispositivos médicos implantados) en el cuerpo
, los anticuerpos (normalmente) no catalizan transformaciones químicas,
Se unen fuertemente al material extraño (el antígeno) que provocó la respuesta y lo marcan
para el ataque de otros elementos del sistema inmunológico.
Los anticuerpos también son muy específicos para reconocer y unirse a la sustancia extraña
únicamente y no a materiales nativos del organismo.
 (a) Estructura de anticuerpo en forma de Y
(b) Esto cambiará algunos parámetros fisicoquímicos (generalmente una masa o un
parámetro óptico) del entorno en la superficie del transductor del sensor test embarazo
(c) Uno de estos inmunosensores se desarrolla para detectar la proteína de la
gonadotropina coriónica humana (hCG) (en particular, su subunidad beta libre,
hCGβ) en la orina

9.3.3 Biosensores basados en ácidos nucleicos

Los biosensores de ácidos nucleicos utilizan la naturaleza complementaria de los ácidos
nucleicos para la capacidad de reconocimiento selectivo
• detección de secuencias de ADN o ARN generalmente asociadas con ciertas
bacterias, virus o condiciones médicas determinadas
• Pueden usarse para diagnosticar susceptibilidad genética, enfermedades y pruebas
de paternidad.

Los biosensores de ácido nucleico generalmente inmovilizan hebras simples (llamadas

sondas) de una doble hélice de ADN (o ARN) en una superficie como especie de
reconocimiento
Si las hebras de la muestra de prueba son complementarias de las hebras utilizadas como
agente de unión (figura 9.8), el ácido nucleico se unirá debido a la capacidad de
emparejamiento de bases. Este proceso se llama hibridación
Se utilizan diferentes estrategias para transducir este evento de hibridación en una señal
medible,. -Técnicas libres como la resonancia de plasmón superficial o la microbalanza de
cristal de cuarzo

9.3.4 Biosensores basados en células

A lo largo de su ciclo de vida dentro de tejidos y órganos específicos, varios tipos de
células responden a una variedad de señales químicas y físicas por diferentes medios (es
decir, produciendo proteínas específicas o radicales libres específicos).
Algunos de estos eventos se pueden volver a crear utilizando una técnica de cultivo celular
in vitro
las respuestas específicas de las células se pueden utilizar para obtener información de
seguridad química y farmacéutica
Conociendo el resultado deseado, se selecciona un tipo de célula específico y se cultiva en
un sustrato
Los sensores que contienen células vivas (células de mamíferos, bacterias y levaduras)
pueden usarse para monitorear cambios fisiológicos o metabólicos inducidos por la
exposición a perturbaciones ambientales tales como tóxicos, patógenos u otros agentes que
están en desarrollo
Se utilizan para la caracterización funcional y el descubrimiento de fármacos de alto
rendimiento o la detección de patógenos, tóxicos y odorantes y diagnósticos clínicos
los biosensores basados en células no son específicos para ciertos compuestos, pero son
capaces de responder a una amplia gama de compuestos biológicamente activos y ofrecen
el potencial de recopilar mayor contenido de información que los sensores biomoleculares.
Para ser utilizado como biosensor, la señal celular generada en el transductor debe
determinarse de manera no invasiva. Las células eléctricamente excitables (neuronas)
Muchos biosensores basados en microorganismos se utilizan para evaluar toxinas, ya que
son menos costosos de construir en comparación con otros tipos de células
. Los biosensores que detectan compuestos orgánicos biodegradables medidos como
demanda biológica de oxígeno (DBO) son los biosensores basados en microorganismos más
ampliamente reportados que utilizan este mecanismo.
Las limitaciones generales de los biosensores basados en células son los largos tiempos de
ensayo, incluida la respuesta inicial y el retorno a la línea de base.
9.4. Elementos transductores
Un elemento biosensor está estrechamente integrado dentro de un transductor fisicoquímico
o microsistema transductor.
La naturaleza de la interacción del elemento biológico con el analito de interés influye en la
elección de la tecnología de transducción.
Por ejemplo, las señales del movimiento iónico se pueden transducir utilizando bioelectrodo
Un sistema de biosensores exitoso requerirá el desarrollo de métodos efectivos de muestreo,
junto con un modelo biológico del proceso
9.4.1 Biosensores electroquímicos
la tecnología de bioelectrodos es incorporar un elemento sensor que también podría
desempeñar un papel en la transferencia de electrones.
Los transductores electroquímicos son los métodos de transducción más establecidos
Aunque algunos electrodos se acercan al comportamiento ideal no polarizable a bajas
corrientes, no hay ningún electrodo que se comporte en una condición ideal no polarizable
Para resolver el problema se utiliza un contraelectrodo (fig) as funciones del contraelectrodo
se dividen entre el electrodo de referencia y el de trabajo.
Se utiliza un potenciostato para aplicar un potencial constante al electrodo de trabajo con
respecto a un contraelectrodo (un electrodo de referencia). Un potenciostato es un circuito
electrónico simple que se puede construir usando una batería, dos amplificadores
operacionales y varias resistencias
ΔG0 = zFE0
9.4.1.1 Transductores amperométricos
Los biosensores voltamétricos se basan en medir una corriente con un cambio de voltaje
La subtécnica en voltamperometría son los biosensores amperométricos donde la corriente a
un potencial fijo da un valor estable con el tiempo
En la categoría amperométrica, un elemento biosensor se acopla típicamente a un electrodo
amperométrico y, cuando el elemento biosensor reacciona con el sustrato, se produce una
corriente que se correlaciona con la concentración de analito
La corriente que fluye es directamente proporcional a la concentración de analito.
Los transductores amperométricos son más versátiles que los dispositivos potenciométricos.
La detección amperométrica se basa en medir la oxidación o reducción de un compuesto
electroactivo en el electrodo de trabajo (sensor
La velocidad de la reacción del analito se controla mediante la variación de la corriente.
La sensibilidad es mayor para un sensor amperométrico (LOD de aproximadamente 10−8 M
en comparación con 10−6 M para un dispositivo potenciométrico)
Normalmente, se utiliza Ag / AgCl o un electrodo de calomelanos saturado (SCE) como
electrodo de referencia, de modo que se produce una oxidación / reducción reversible a un
potencial fijo en el electrodo de referencia
9.4.1.2 Electrodo de oxígeno de Clark
El sensor de oxígeno disuelto de Clark es el biosensor amperométrico más conocido de este
tipo.
el sensor de oxígeno de Clark (llamado así en honor a Leland C. Clark, Jr.) es el más utilizado
aplicado en análisis clínicos, monitoreo de fermentación y desarrollo de biosensores
El electrodo de Clark consiste en un electrodo de trabajo (cátodo) mantenido a un potencial
externo negativo en relación con un electrodo de referencia (ánodo) y el electrolito [Figura
9.9 (b)]
El cátodo está hecho de metales nobles, como Pt o Au, por lo que la superficie del electrodo
no participa en las reacciones químicas. La corriente se produce por la reducción química de
oxígeno en la superficie del cátodo, expresada por:

el compartimento del electrodo está aislado de la cámara de reacción mediante una fina
membrana polimérica (teflón, polipropileno), que permite que la difusión del oxígeno llegue
al cátodo. Como resultado, el oxígeno disuelto (OD) en la muestra debe difundirse a través
de la membrana y el electrolito entre la membrana y el cátodo.
la velocidad de reacción está limitada únicamente por la velocidad de difusión del oxígeno
desde la muestra a la superficie del cátodo.
En consecuencia, la corriente límite es linealmente proporcional a la presión (o actividad)
parcial de oxígeno en contacto con la superficie externa de la membrana

9.4.1.3 Electrodo de enzima amperométrica

Las estrategias comunes en las que se construye un electrodo de enzima amperométrica para
monitorear un sustrato son las siguientes:

1. Los biosensores enzimáticos de primera generación [Figura 9.6 (b)] fueron las
extensiones del electrodo de oxígeno donde una enzima que consume oxígeno se
inmoviliza a un electrodo de platino y la reducción de oxígeno en el electrodo
produce una corriente que es inversamente proporcional al analito concentración
Un problema con esta disposición es la pérdida de selectividad, respuesta lenta
dificultades de miniaturización y baja precisión y reproducibilidad.

2. La segunda generación se centra en reducir el potencial de trabajo por medio de un

mediador de electrones artificiales [Figura 9.6 (b)].
El aceptor de electrones es reemplazado por el mediador, que transporta los
electrones involucrados en el proceso redox desde la enzima hacia el electrodo o
viceversa

3. La tercera generación se basa en la transferencia directa de electrones entre el sitio

activo de una enzima redox y el transductor electroquímico [Figura 9.6 (c)].
 GOX glucosa oxidasa

9.4.2 Transductores ópticos

Los transductores ópticos forman un grupo que muestra directamente características,
haciéndolos ventajosos sobre otros sistemas tales como transductores electroquímicos,
sensibles a la masa, térmicos, acústicos u otros. Generalmente, estos métodos utilizan un
sustrato que se convierte en un color diferente o genera un color debido a una reacción con
el analito.
El color desarrollado se evalúa mediante una serie de técnicas como la espectroscopia de
absorción (desde el UV hasta el infrarrojo profundo en el espectro EM), espectroscopia de
fluorescencia (y fosforescencia) convencional, bioluminiscencia, quimioluminiscencia,
espectroscopia de reflexión interna (tecnología de ondas evanescentes) y láser métodos de
dispersión de luz.
9.4.2.1 Técnicas basadas en la absorción
Las técnicas basadas en la absorción involucran las tiras reactivas colorimétricas y los
ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA) que se utilizan habitualmente en las
interacciones antígeno-anticuerpo
Las cintas colorimétricas son soportes de celulosa desechables de un solo uso, impregnadas
con elementos sensores y reactivos

Un ejemplo es un biosensor de glucosa para el control de la diabetes.

Se utilizan las reacciones utilizadas en la producción de señales electroquímicas.
peróxido producido en la reacción se acopla a un cromógeno (por ejemplo, o-toluidina o 3,3
', 5,5'-tetrametilbencidina) en lugar de a un electrodo, que se convierte en un cromoforo en
presencia de peroxidasa de rábano picante.
La señal es para dar positivo o negativo
Es posible cuantificar

Un ejemplo de biosensor basado en absorción es el oxímetro de pulso, que es el dispositivo

más común utilizado en cuidados intensivos para medir la saturación de oxígeno en sangre.

A diferencia de otros sensores de oxígeno, este oxímetro de pulso es una técnica no

invasiva y permite un monitoreo continuo.
Se basa en la diferencia en las características de absorción de luz infrarroja de la
hemoglobina oxigenada (HbO2) y desoxigenada (Hb)
Por lo general, los diodos emisores de luz (LED) son capaces de emitir dos luces (Figura
9.11) de diferentes longitudes de onda: luz infrarroja (longitud de onda de 800 a 1000 nm)
y luz roja (longitud de onda de 650 nm), colocadas en un dedo
La hemoglobina oxigenada absorbe más luz infrarroja
Calculando la absorción en las dos longitudes de onda, se calcula el porcentaje de
hemoglobina oxigenada
Sin embargo, además de la absorción de la hemoglobina, la intensidad de la luz detectada
por el fotodetector también depende de la opacidad de la piel, el reflejo de los huesos y la
dispersión de los tejidos
las lecturas del oxímetro se ven afectadas por condiciones anormales del flujo sanguíneo,
como hipotermia, shock y movimiento vigoroso.
Un oxímetro de pulso no puede discriminar entre la unión de O2 y CO, ya que los cambios
en la hemoglobina son similares.
9.4.2.2 Técnicas basadas en fluorescentes
La fluorescencia
Las etiquetas fluorescentes (descritas en el Capítulo 8) hacen que una biomolécula (o un
sistema biológico) sea fluorescente para que sea susceptible de espectroscopia de
fluorescencia

El proyecto del genoma humano se basa en el marcaje fluorescente de ácidos nucleicos, lo

que permite una secuenciación más rápida que otros métodos
Las etiquetas se unen a las especies de interés mediante unión covalente a través de un
grupo reactivo que forma un enlace químico con otros grupos como amino, hidroxi,
sulfhidrilo o carboxi.
Una sub-técnica dentro de la fluorescencia se basa en la transferencia de energía por
resonancia de fluorescencia (FRET),
proceso en el que la energía de un fluoróforo (el donante de energía, D) en un estado
excitado se transfiere a otro cromóforo (el aceptor de energía, A).
Los biosensores FRET se utilizan para estudiar eventos moleculares desde células
individuales hasta organismos completos

La quimioluminiscencia se produce por la oxidación de ciertas sustancias, generalmente

con oxígeno o peróxido de hidrógeno, para producir luz visible
La bioluminiscencia es producida por ciertas sustancias biológicas, como las luciferinas
producidas por la luciérnaga
Un biosensor que implica luminiscencia utiliza la luciferina Photinus-luciferin 4-
monooxigenasa (hidrolización de ATP) para detectar la presencia de bacterias en alimentos
o muestras clínicas

Las bacterias se lisan específicamente y el ATP liberado (casi proporcional al número de

bacterias presentes) reacciona con la D-luciferina y el oxígeno en una reacción que produce
luz amarilla con un alto rendimiento cuántico.
Los fluorocromos luminiscentes pueden excitarse con luz (incluida la luz láser),
electroquímicamente, mediante energía bioquímica, presión o sonido. La luminiscencia se
mide en gaseoso, líquido, sólidos, tejidos y células, iluminando directamente el objeto o
utilizando guías ópticas de guía de ondas que incluyen fibras ópticas. La luciferasa de
luciérnaga es una enzima muy cara, que solo se puede obtener de las colas de las
luciérnagas salvajes

Se utiliza una sola fibra para transmitir la radiación de excitación a la muestra y recoger la
emisión de fluorescencia del antígeno
los biosensores ópticos tienen inconvenientes en las mezclas de muestras que son turbias.
Algunos biosensores ópticos requieren el uso de amplificación del objetivo de manera que
la señal se mejore a un nivel mensurable
9.4.3 Transductores acústicos

Los cristales piezoeléctricos (discutidos en el capítulo 8) utilizados en la ecografía también

se utilizan como transductores

9.4.4 Otros transductores

.a) La calorimetría es un esquema de detección general y es un método conveniente para
detectar cualquier reacción química, bioquímica o física
Algunas reacciones mediadas por enzimas producen calor durante la conversión del
sustrato en un producto. El calor liberado cambia la temperatura de la solución, que se
puede controlar mediante termistores. También se pueden formar termistores
miniaturizados.

b) Los microcantilevers también pueden excitarse en resonancia por varios medios, incluido
el movimiento térmico ambiental. La frecuencia de resonancia de un microcantilever varía
sensiblemente con la adsorción molecular

9.5 Tecnología de fabricación

9.5.1 Parámetros de rendimiento
La tecnología de fabricación debe permitir un biosensor
• tamaño apropiado
• bajo costo
• con un tiempo de respuesta rápido
• autocalibrado (acción mínima por parte del usuario),
• modo no invasivo de detección de indicadores.
La selectividad es principalmente la capacidad de discriminar entre diferentes sustratos o
analitos
La selectividad del biosensor se expresa como la relación entre la salida de señal con el
analito solo y la de las sustancias interferentes.
La sensibilidad es la medida de cuánto cambia la señal para un cambio dado en la
concentración de analito
Se mide por la pendiente del gráfico de respuesta de la señal de salida del biosensor frente a
la concentración de analito

El límite de detección se define como la concentración de analito más baja y más alta que
puede detectar el biosensor considerando la relación señal / ruido
Para un electrodo de Clark, un límite de detección inferior es de hasta 0,5 mg / L a 25 ° C.
El tiempo de respuesta es el tiempo necesario para alcanzar un valor de estado estable. El
tiempo de respuesta depende de la naturaleza del elemento receptor. Los receptores
biológicos son más lentos que los receptores químicos simples.

Para un electrodo de Clark, el 90% de la respuesta en estado estable se obtiene dentro de los
20 segundos posteriores a la adición del analito en la celda

La estabilidad del biosensor está diseñada por la vida útil, que se define como el tiempo de
almacenamiento o operativo necesario para que la sensibilidad, dentro del rango de
concentración lineal, disminuya en un factor de 10% o 50%.

Hay tres aspectos de la vida útil:

(1) la vida activa del biosensor en uso,
(2) la vida útil del biosensor en almacenamiento y
(3) la vida útil del biocomponente en almacenamiento antes de ser inmovilizado

9.5.2 Estrategias de inmovilización

La inmovilización se define como la unión de un elemento biosensor a una superficie que
resulta en una reducción o pérdida de movilidad
En algunos casos, la inmovilización conduce a una pérdida parcial o total de la bioactividad

9.5.2.1 Atrapamiento físico

Esta técnica implica la simple adsorción del biocomponente sobre la superficie del
electrodo.
Las proteínas se adsorben en las superficies mediante fuerzas intermoleculares,
principalmente enlaces iónicos e interacciones hidrófobas y polares [Figura 9.14 (a)].
La adsorción se clasifica como:
* adsorción física (fisisorción) suele ser débil y se produce mediante la formación de enlaces
de van der Waals o enlaces de hidrógeno entre el sustrato y la enzima.
* La quimisorción es mucho más fuerte e implica la formación de enlaces covalentes.

Figura 9.14 Inmovilización física de elementos biosensores en la superficie: (a) adsorción

física, (b) encapsulación y (c) atrapamiento en una matriz.
Teoria DLVO