UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS Y BIOTECNOLOGÍA

CARRERA DE BIOTECNOLOGÍA
Nombre: Carolina Palacios
Módulo: Principios de la Biotecnología
Tema: BIOTECNOLOGÍA VERDE.
Diagrama de la metodología para la transformación genética mediante
Agrobacterium tumefaciens en híbrido de papaya.

Retiro de hojas y realización

Ápices Pre-tratamiento de pequeñas heridas en la
parte superior.

Infección

Dos tubos de ensayo con

Cepas de A. tumefaciens. A
medio de cultivo LB Inoculación
suplementado con antibióticos. 28ºC durante 24h.

200 microlitros de la En erlenmeyer de 100 ml con

suspensión bacteriana. Inoculación 20 ml de medio de cultivo de
inducción.

En zaranda por 24h a 28ºC

Colocar y 200 rpm.
hasta una DO600= 1.

Tinción y evaluación

Dos cepas de A. tumefaciens

Comparación en combinación con diferentes
tiempos de co-cultivo.

Explantes Incubación A 37ºC y oscuridad.

Evaluación La influencia de la temperatura.

Ápices de plantas in vitro, con una En medio de cultivo de multiplicación

y tres semanas de subcultivo. Transformación de híbridos de papaya.

Del número de subcultivos para

Determinación eliminar las quimeras.
 Los explantes, subcultivos: En medio de cultivo de multiplicación
Colocar de híbrido de papaya con antibiótico.
segundo, tercero y cuarto.

Evaluación Porcentaje de supervivencia.

Plantas seleccionadas Colocar En tubos de centrífuga Eppendorf.

Tinción

Evaluación Integración estable del gen gus.

Todos los experimentos. Repetición Tres veces.

BIBLIOGRAFÍA
Gallardo-Colina, Jorge, et al. "Transformación genética mediante Agrobacterium
tumefaciens en híbrido de papaya a partir de ápices de plantas in vitro".
Biotecnología Vegetal 4.1 (2004).