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GUÍA-FORMATO PARA LA PRESENTACIÓN DE PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN

LA PROPUESTA DE INVESTIGACION

La propuesta NO debe exceder las 17 páginas, en letra Arial 12 y a espacio y medio. De acuerdo con las
instrucciones que se presentan a continuación se deben diligenciar los siguientes componentes:

1.INFORMACION GENERAL DEL PROYECTO:

INFORMACION GENERAL DEL PROYECTO

Título: ANÁLISIS DE LA DEGRADACIÓN MICROBIANA DE FÁRMACOS

ANTIINFLAMATORIOS NO ESTEROIDALESS POR TÉCNICAS ELECTROQUÍMICAS Y
CROMATOGRAFICAS

Investigador Principal: Dr. Mario E. Ortega Núñez

Integrantes del proyecto:
Correo electrónico: mario.ortega@upr.edu
Teléfono: Celular:
Dirección de correspondencia:
Nombre del Grupo de Investigación: Total de Investigadores
(número)
Línea de Investigación:
Lugar de Ejecución del Proyecto: Barranquilla
Ciudad: Barranquilla Departamento: Atlántico
Duración del Proyecto (en meses): 10 meses
Tipo de Proyecto: Estudio de la biodegradación de fármacos no estoroidales en aguas residuales por
técnicas cromatográficas y electroquímicas
Investigación Básica: (x) Investigación Aplicada: (x) Desarrollo Tecnológico o Experimental: (x)

Descriptores / Palabras claves: Biodegradación, Drogas no esteroidales,

Electroquímica, Cromatografia líquida
Nombre de la Convocatoria a la cual se presenta el proyecto:

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Nombres completos, direcciones electrónicas, teléfono /fax e instituciones de hasta 5

investigadores expertos en el tema de su propuesta y que estén en capacidad de evaluar
proyectos en esta temática y que no pertenezcan a las entidades proponentes (esto no
significa que necesariamente sean los mismos que evalúen esta propuesta en particular):
1
2
3
4
5.

2 RESUMEN DEL PROYECTO:

Para el tratamiento de diversas patologías se utilizan variados tipos de medicamentos

con definidos objetivos terapéuticos. Nuestro organismo (generalmente el hígado)
metaboliza y transforma a dichos fármacos en metabolitos activos o hace que se libere
eficazmente el principio activo. Cuando se usan indiscriminadamente estas sustancias,
muchas veces no se metabolizan y son excretadas y expulsadas hacia las aguas
residuales, resultando en serios problemas ambientales. En este proyecto nos
proponemos realizar la caracterización electroquímica del proceso de degradación
microbiana de diversos fármacos no esteroidales. Para ello se utilizará la técnica de
voltametría cíclica durante todo el proceso a diferentes tiempos de degradación. Eso nos
permite monitorear qué le ocurre al compuesto durante dicho proceso, cambios en
concentración del fármaco, metabolitos se van generando, realizar curvas de calibración
que nos permita cuantificar el porcentaje de biodegradación, entre otros análisis. Con la
finalidad de validad la metodología propuesta, se compararán los resultados con los
obtenidos mediantes técnicas cromatográficas con detección por fluorescencia, y de no
ser posible usar detección UV. La determinación cuantitativa de las poblaciones de
bacterias se realizará mediante el método de conteo de placa estándar. Para el análisis
voltamétrico el electrodo de trabajo utilizado será de carbono vítreo, Pt como electrodo
auxiliar, y Ag/AgCl como electrodo de referencia. Las muestras (por duplicado) se
centrifugarán y se analizarán los sobrenadantes para monitorear los cambios en los
voltamogramas asociados con la formación de metabolitos a partir de la degradación de
los fármacos. Se espera que al comparar el fármaco antes y después de la degradación,
se observen cambios en las intensidades de los picos de corriente y desplazamientos de
los potenciales de trabajo. A grandes rasgos, esta metodología tiene ventaja sobre las
técnicas de análisis actuales, ya que nos provee información inmediata sobre la
degradación del fármaco sin necesidad de tediosas y costosas preconcentraciones de

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muestras y purificación, además de eliminar el problema del uso de detectores

espectrofotométricos.

3 DESCRIPCIÓN DEL PROYECTO:

La contaminación del medio ambiente por residuos de medicamentos es un fenómeno

constante que sucede desde hace décadas. Los fármacos son contaminantes
emergentes cuyos efectos sanitarios y ambientales en los vertidos aún no son lo
suficientemente conocidos. A lo largo de los últimos años se han identificado
numerosos residuos de medicinas y de sus metabolitos, tanto en aguas residuales
como en ríos y otras corrientes superficiales e, incluso, en aguas potables tratadas.

Los primeros estudios se realizaron hace 38 años. Entre 1976 y 1977 se encontró
ácido clofíbrico (un herbicida), nicotina, cafeína e ibuprofeno en muestras de agua de
una planta de tratamiento de aguas residuales en la ciudad estadounidense de
Kansas. El asunto no tuvo demasiada repercusión hasta que a principios de los
noventa apareció ácido clofíbrico, hipolipemiantes y analgésicos en aguas
subterráneas y residuales en Alemania. Estos hallazgos dieron lugar a varios estudios
para medir los residuos farmacológicos en el agua, lo que fue posible gracias a la
aparición de nuevos equipos y técnicas analíticas más eficaces.

En la última década, investigadores europeos y americanos han descubierto

antibióticos, reductores de la presión arterial, hormonas, psicofármacos y analgésicos
en distintas corrientes de agua. Los ríos en algunos países de américa, así como en
Europa, transportan una amplia y enorme variedad de drogas y fármacos: cocaína,
éxtasis, antibióticos, antiinflamatorios, etc. En el año 2007 se dio a conocer que tenían
de media unos 300 nanogramos por litro de benzoilecgonina, el principal metabolito
(sustancia producida durante el metabolización) de la cocaína, y una cantidad similar
de ibuprofeno.

La toma de medicamentos es un acto cotidiano que forma parte de la vida de muchas

personas. Tan solo en los Estados Unidos más de diez millones de mujeres utilizan
anticonceptivos orales, por lo que es muy probable que estas sustancias acaben de
una u otra manera en el medio natural. De acuerdo con los últimos datos analizados
sobre consumo de antibióticos, España ocupa el segundo lugar de la Unión Europea,
solo le supera Francia, con 19,8 dosis diarias por cada 1.000 habitantes en adultos y
14,4 en pediatría. El envejecimiento de la población y la drogadicción son algunos de
los principales factores que contribuyen a que los fármacos estén cada vez más
presentes en los ecosistemas. Los hábitos de consumo, con bebidas que contienen
café, té, guaraná y otras sustancias estimulantes, también elevan la cantidad.

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Tras la administración de los medicamentos, el organismo no hace desaparecer

totalmente los compuestos que los constituyen. Aunque pueden sufrir procesos de
metabolización y transformación dentro del cuerpo, una parte de ellos es expulsada a
través de la orina o de la materia fecal. De este modo, pueden llegar a las aguas
residuales y, a través de éstas, a arroyos, ríos, lagos, pantanos y depuradoras.

En estudios recientes se calcula que, como promedio, en las aguas residuales se

hallan más de 20 fármacos distintos, que varían según el país y los hábitos de
consumo. En los lagos y ríos de Canadá y Estados Unidos se han encontrado grandes
cantidades de fluoxetina, más conocida por el nombre de Prozac, un antidepresivo.

En Suecia, a mediados de 2005, una investigación demostró que las aguas del río
Höje transportan diclofenac (un analgésico), carbamezapina (un antiepiléptico),
propanolol (un betabloqueante para la insuficiencia cardiaca) y antibacterianos como
el trimetoprim y el sulfametoxazol.

Un trabajo del Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) de España en

2005 investigó residuos farmacológicos a lo largo de 18 puntos del río Ebro. En todos
hallaron residuos de medicamentos, entre los que destacaban dos reguladores del
colesterol (ácido clofíbrico y el gemfibrozilo), analgésicos y antiinflamatorios
(naproxeno, diclofenac e ibuprofeno), un antiepiléptico (carbamezapina) y un beta-
bloqueante (atenolol).

En conclusión, entre los fármacos de uso humano que mayoritariamente se pueden

encontrar en el medio ambiente se encuentran los siguientes: aminofilina, atenolol,
beclometasona, clorfenamina, clotrimazol, cocaína, codeína, diclofenac, furosemida,
paracetamol, sulfametoxazol, tamoxifeno, teofilina y trimetoprim. Otros de los
principales focos que pueden afectar al ecosistema son los medicamentos de uso
veterinario para animales de compañía, como antibacterianos, antifúngicos y
antiparasitarios, y los aplicados tanto a ganadería extensiva como intensiva. En los
animales que pastorean, los residuos de fármacos acaban habitualmente en los suelos
y aguas superficiales. En el caso de los tratamientos de ganadería intensiva, pueden
incorporarse al medio ambiente, indirectamente, a través de la aplicación de los
purines y estiércol como fertilizante o, directamente, por la eliminación inadecuada de
los purines en ríos, ramblas y vías fluviales. En la acuicultura, se da el caso de que los
medicinas de los tratamientos se liberan directamente en las aguas superficiales o, de
forma indirecta, al desechar el agua de los tanques a vías fluviales.

Otra vía de acceso es la eliminación inadecuada de los medicamentos expirados o de

restos en las cajas y envases. A menudo, se tiran a la basura o al inodoro, por lo que

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pueden acceder al aire, al suelo y a las aguas superficiales y subterráneas.

Durante el proceso de fabricación de los medicamentos pueden liberarse residuos que

suelen ir a parar a las aguas superficiales. Esto también ocurre en ciertos procesos
industriales o en productos para la industria alimentaria, entre otros, donde se generan
sustancias que, si bien no se utilizan como medicamentos, poseen actividad biológica.
Estas sustancias pueden actuar junto con residuos de fármacos y potenciar la acción
de los mismos. El resultado de todo es que el volumen y el número de fármacos que
accede al medio ambiente es cada vez mayor, con consecuencias muy variadas y, en
la mayoría de los casos, negativas para la naturaleza, la salud humana y animal.

Una vez liberados al entorno, los residuos farmacéuticos pueden diseminarse por el
aire, el agua, el suelo y los sedimentos. En el caso del agua, las plantas depuradoras
no logran acabar totalmente con estos productos, por lo que pueden acceder a la
fauna y al agua potable para consumo humano y de los animales.

Las plantas potabilizadoras realizan una serie de acciones destinadas a hacer que el
agua sea segura para su consumo. Estos tratamientos no son lo suficientemente
eficaces para extraer los residuos farmacológicos en su totalidad, por lo que, al final,
aunque en cantidades muy pequeñas, terminan en los grifos. Las concentraciones
encontradas por ahora son generalmente bajas, del orden de un miligramo por litro en
aguas superficiales, por lo que no se consideran perjudiciales para la salud.

Por todo lo anteriormente descrito, es importante realizar estudios profundos sobre el

análisis de diferentes fármacos no esteroidales en diferentes matrices ambientales,
buscando técnicas y metodologías mas rápidas y eficientes. Se estiman los fármacos
no esteroidales porque la mayoría de los medicamentos antes mencionados están en
esa categoría y casi todos ellos fluorescen, lo cual es importante en el caso de la
detección de cantidades trazas por las técnicas cromatográficas que posean ese tipo
de detector. Además, este proyecto aportaría una solución para la biodegradación de
estos fármacos en el ambiente y la manera de hacer seguimiento a dicho proceso.
Asimismo, sería un proyecto pionero en el área ambiental que permitiría caracterizar
este tipo de sustancias y a la vez aportar métodos de eliminación de los mismos in
situ.

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3.1 Los objetivos (máximo 500 palabras):

Objetivo General:

Corroborar mediante técnicas electroquímicas y cromatográficas la degradación de

sustancias farmacéuticas para contribuir con los procesos de saneamientos de
sistemas ambientales y el mejoramiento de la salud pública

Objetivos Específicos:

• Comprobar actividad electroquímica de los compuestos activos de diferentes

medicamentos no esteroidales mediante voltametria ciclica
• Someter a procesos de biodegradación bacteriana con diversos microorganismos
a los diferentes compuestos para la obtención del inóculo puro a ser utilizado
para cada sustancia.
• Examinar mediante voltametría cíclica el proceso de degradación de las
sustancias, ya sea por cambios en las intensidades de las corrientes o el
desplazamiento de los potenciales de oxidación o reducción
• Comprobar por HPLC los patrones de degradación de las diferentes sustancias
• Establecer las rutas de degradación de los fármacos basados en los tipos de
microorganismos presentes en cada inóculo para así determinar los posibles
compuestos intermediarios del proceso de degradación
• Probar la metodología en muestras obtenidas de diversos sistemas ambientales
• Comparar las técnicas utilizadas para establecer cuál resulta mas versátil y
robusta en el análisis del proceso de degradación

3.2 Metodología Propuesta (máximo 3000 palabras):

Preparación inicial del inóculo:

Se utilizarán muestras de tierras y agua colectadas en zonas principales de desagüe,
cercanas a compañías farmacéuticas o rellenos sanitarios como fuente de diversos
microorganismos. Se emplearán medios minerales, usando cada fármaco como única
fuente de carbono en cada caso para así asegurar que los microorganismos presentes
son capaces de metabolizarlos. Se prepararán varios “frozen stocks” y serán
almacenados a temperaturas menores de –40˚C hasta su utilización

Preparación del medio mineral básico:

Para la preparación del medio mineral se utilizará la siguiente receta: 4.0 g/L de
NaH2PO4, 4.0 g K2HPO4, 2.0 g de (NH4)2SO4, agua desionizada, trazas minerales
como CaCl2, MgSO4 y FeSO4 y el compuesto farmacéutico como única fuente de
carbono.

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Curva de crecimiento bacteriano:

Al iniciar el proceso de crecimiento bacteriano se preestablecen los tiempos de
muestreos. En cada tiempo preestablecido se mide la densidad óptica del cultivo a 600
nm en un spectronic 20. Esto se hará con la finalidad de trazar una curva de
crecimiento bacteriano y así establecer la cinética de crecimiento de los
microorganismos para cada fármaco. Esto nos permitirá estblecer de manera mas
clara los tiempos a muestrear para realizar los respectivos análisis electroquímicos y
cromatográficos, así como el conteo de unidades formadoras de colonias en cada
caso.

Obtención de los metabolitos de degradación:

Para realizar los análisis electroquímicos y cromatográficos, es necesario centrifugar
por 15 min a 10000 rpm, 100 mL del cultivo. El “pellet” es descartado y el líquido
sobrenadante se utiliza para realizar los análisis.

Análisis por voltametría cíclica:

Para ello se utiliza un potenciostato con un arreglo de tres electrodos. El electrodo de
trabajo a utilizar es un de carbono (aunque esto podría cambiar dependiendo de la
actividad electroquímica del fármaco), un electrodo de referencia que podría ser
Ag/AgCl o de calomel y un electrodo auxiliar de platino. Las velocidades de barrido así
como sensibilidad del equipo se evaluaran para cada caso.

Análisis por cromatografia líquida HPLC:

Los fármacos serán preconcentrados a partir de los sobrenadantes pasando los
mismos por columnas tipo octadecil silica (fase reversa) y luego desorbidas las
sustancias con un solvente apropiado. Luego, serán diluidos e inyectados en el
cromatógrafo usando una mezcla adecuada de solventes. Para la detección podrían
utilizarse detectores UV o de fluorescencia.

Tratamiento de las muestras obtenidas del ambiente:

Se colectaran de 1 a 2 litros de muestras de aguas obtenidas del ambiente. Estas son
pasadas por las columnas de octadecil con la finalidad de preconcentrar las sustancias
presentes. Luego de ser desorbidas se procederá a diluirlas en el medio (solvente)
apropiados para realizar los análisis por voltametria cíclica y por HPLC.
La identificación de las sustancias originales así como de los intermediarios de
degradación, se realizarán por comparación con los patrones.

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3.3 Cronograma de Actividades:

Actividad Tiempo (meses)*
Preparación inicial del inóculos 0.5
Obtención de las curvas de crecimiento 0.5
Análisis por voltametría cíclica 1.0
Análisis por HPLC 1.0
Tratamiento de muestras ambientales y 1.5
análisis de las mismas
*tiempos estimados que dependerán de la cantidad de fármacos a analizar

3.4 Bibliografía:

Carr, Deborah L., Audra N. Morse, John C. Zak, and Todd A. Anderson. "Biological
Degradation of Common Pharmaceuticals and Personal Care Products in Soils with
High Water Content." Water Air Soil Pollut 217.1- 4 (2010): 127-34.

Liu, Xin, Akio Tani, Kazuhide Kimbara, and Fusako Kawai. "Metabolic Pathway of
Xenoestrogenic Short Ethoxy Chain-nonylphenol to Nonylphenol by Aerobic Bacteria,
Ensifer Sp. Strain AS08 and Pseudomonas Sp. Strain AS90." Applied Microbiology &
Biotechnology 72.3 (2006): 552-59

Mabbott, Gary A. "An Introduction to Cyclic Voltammetry" Journal Of Chemical

Education (1983): 697-701.

Arkadiusz Pomykalski and Hanna Hopka£a. “Applications of derivative UV

spectrophotometry for the determinations of fenbufen and ketoprofen in pharmaceutical
preparations” Acta Poloniae Pharmaceutica–Drug Research (2005): Vol. 62 No. 3 pp.
171–176.

Dorota Domaradzka, Urszula Guzik and Danuta Wojcieszynska. “Biodegradation and

biotransformation of polycyclic non-steroidal anti-inflammatory drugs” Rev Environ Sci
Biotechnol. (2015) DOI 10.1007/s11157-015-9364-8

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4 Resultados/Productos esperados y potenciales beneficiarios:

Tabla 4.1 Generación de nuevo conocimiento

Resultado/Producto esperado Indicador Beneficiario
Nuevas tecnologias basadas en Articulos en Programa de pre y post
el uso de métodos publicaciones grado en Química de la
electroquímicos para análisis de periódicas Universidad
fármacos no esteroidales
Aplicación de nuevas Publicaciones y Universidad y centros
tecnologías de análisis en Patentes ambientalistas
Suramérica aportado por
Colombia

Tabla 4.2 Fortalecimiento de la comunidad científica

Resultado/Producto esperado Indicador Beneficiario
Formación de profesionales en Tesis y publicaciones Universidad e Institutos de
pre y post grado especializados investigación
en análisis de fármacos por
diversas técnicas
Especialistas en análisis de Tesis, pasantias y Agua potable y
xenobióticos publicaciones saneamiento en Colombia
Profesores en al área ambiental Tesis, publicaciones, Universidades
pasantias
Establecer convenios Convenciones y foros Universidades, centros de
internacionales para el investigación
tratamiento de sistemas
ambientales impactados por
fármacos

Tabla 4.3 Apropiación social del conocimiento

Resultado/Producto esperado Indicador Beneficiario
Campañas de saneamiento de Presentación de Agua potable y
sistemas impactados ponencias saneamiento en Colombia
Aportar datos que sirvan de Presentación de Fundaciones y
indicadores de contaminación a ponencias, libros asociaciones
niveles tóxicos o letales de ambientalistas en
múltiples organismos en el Colombia
ambiente
Campañas de concientización a Ponencias, cartillas, Ministerio de Salud
médicos y proveedores de libros divulgativos
servicios médicos sobre la

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necesidad de administrar
medicamentos
Visita a las escuelas para la Presentación y Escuelas del sistema
promoción de la importancia de ponencias amenas público
conservar los espacios naturales

5 PRESUPUESTO

Tabla 5.1 Presupuesto global de la propuesta por fuentes de financiación (en miles
de $).
VALOR TOTAL
RUBROS VALOR UNITARIO
PERSONAL
HPLC: 87544.80 122562.72
EQUIPOS
Potenciostato: 35017.92
SOFTWARE
MATERIALES 30000 30000
SALIDAS DE CAMPO
MATERIAL BIBLIOGRÁFICO 500
PUBLICACIONES Y PATENTES
SERVICIOS TÉCNICOS
VIAJES
CONSTRUCCIONES
MANTENIMIENTO
ADMINISTRACION
TOTAL 152562.72

Tabla 5.2 Descripción de los gastos de personal (en miles de $).

INVESTIGADOR / FUNCIÓN
FORMACIÓN DEDICACIÓN
EXPERTO/ DENTRO DEL
ACADÉMICA Horas/semana
AUXILIAR PROYECTO VALOR

TOTAL
* Agregar una columna para cada fuente de financiación adicional distinta de la entidad
que presenta el proyecto.

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Tabla 5.3 Descripción de los equipos que se planea adquirir (en miles de $).
EQUIPO JUSTIFICACIÓN VALOR

TOTAL

Tabla 5.4 Descripción y cuantificación de los equipos de uso propio (en miles de $)
EQUIPO VALOR

TOTAL

Tabla 5.5 Descripción del software que se planea adquirir (en miles de $).
SOFTWARE JUSTIFICACIÓN VALOR

TOTAL

Tabla 5.6 Descripción y justificación de los viajes (en miles de $)

Lugar /No. De Total
Justificación** Pasajes ($) Estadía ($) Total
viajes días

1. TOTAL
** Se debe justificar cada viaje en términos de su necesidad para el éxito del proyecto

Tabla 5.7 Valoración salidas de campo (en miles de $)

Item Costo unitario # Total

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TOTAL

Tabla 5.8 Materiales y suministros (en miles de $)

Materiales* Justificación Valor

TOTAL
Pueden agruparse por categorías, ej: vidriería, reactivos, papelería, etc., suscripciones a
revistas, libros, etc.

Tabla 5.9 Bibliografía (en miles de $)

Ítem Justificación Valor

TOTAL

Tabla 5.10 Servicios Técnicos (en miles de $)

Tipo de servicio Justificación Valor

TOTAL

Nota: Formato utilizado por Colciencias.

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