Autore Diseñad Temperatura

DOI Cebadores propuestos Importancia Insumos Equipos

s o para LAMP
Kit de
Procedimiento
para Extracción
Ultra Rápida
(PURE)
Las reacciones se
llevaron a cabo a bst DNA
61 °C, 62 °C, 63 Polimerasa
°C y 64 °C por
triplicado para Medio Ogawa
encontrar la
temperatura DNA Isoplant Kit
óptima para la
Obtener una
Secuencia RD1 de M. bovis BCG (GenBank accession no. amplificación Acetato de sodio
identificación
AP010918.1) LAMP.
precisa y
Etanol
rápida de M.
Juego de 6 cebadores Se recomienda
bovis BCG para
hacer un análisis TE 1x
distinguirla de Turbidímetro
F3 = 5’-GCTACGCTCGCGTTCG-3’ de curvas de
otras (Loopamp
melting haciendo Loopamp DNA
subespecies EXIA)
B3 = 5’-ATGCCGGAGGCCAACC-3’ real-time LAMP. Amplification
del complejo
Reagent Kit
Kouzaki Mtb, tanto Termociclador
10.1371/journal. M. bovis FIP = 5’- Las reacciones
Y, et al. para el (Roche
pone.0133759 BCG ATCCGGGCGGCTGGATGTGTGGTGGAGCGGATTTGACG- se realizaron a 63 Búfer de reacción
(2015) tratamiento de LightCycler
3’ °C durante 60 (20 mM de Tris-
pacientes LC480
min y luego se HCl, 10 mM de
como para System)
BIP = 5’- calentaron a 80 KCl, 8 mM de
recopilación
AGCATCTGTCTGGCATAGCTGCATCTGGCGGTTTGGGGAG °C durante 2 min MgSO4, 10 mM de
de información Centrífuga
-3’ para terminarlos. (NH4)2SO4, 0,1% de
epidemiológic
La tasa de Tween 20, 0,8 M
a significativa
LF = 5’-CGTCGACCAGAAGCACGA-3’ transición de de betaína y 1,4
sobre la
temperatura fue mM de cada dNTP)
seguridad de la
LB = 5’-CCGTCGGCCTGGTAATACT-3’ de 0,2 °C/s,
vacunación.
aumentando de Reactivo de
60-98 °C, y la detección de
temperatura de fluorescencia –
enfriamiento FDR (opcional)
para el análisis
de la curva de Agua destilada
fusión fue de 30
°C durante 1 min. Tth
pyrophosphatase

YO-PRO (marcador
fluorescente)

Zhang J, 10.1016/j.tvjl.2010.01.001 M. bovis Amplificación del gen mpt83 de M. bovis, cepa GLAMI: Encontrar un La amplificación TaKaRa MiniBEST No
et al. método se realizó a 63 °C (Kit de extracción especificado
(2011) Juego de 8 cebadores diagnóstico y durante 60 min, de ADN bacteriano en el artículo
de control seguido de genómico)
F = 5’-GCAGTTAGCGTCCGATGTTG-3’ rápido y fiable calentamiento
de a 80 °C durante 2 N-acetylcysteine–
R = 5’-GTGAACTCCGCCACATACCA-3’ tuberculosis min para sodium hydroxide
bovina para terminar la (descontaminación
F3 = 5’-TCTGTGCCCTTTGAATACTACAG-3’ detener la reacción. Los de la muestra)
zoonosis del productos LAMP
B3 = 5’-AAAGTAGCGGGAGTGGTAGG-3’ ganado hacia fueron bst DNA
los humanos analizados por Polimerasa
FIP = 5’- mediante la electroforesis en
GTACTCGCCGCCGTTGAGGGTCAGTACCCTGACCTCGG-3’ inhalación de gel de agarosa al Búfer de reacción
gotitas o la 1,5%. 10x Thermopol
BIP = 5’- ingestión de
ACCGTTTTCGCCCCCACCTTGGCGTCAGTCTTGAGTTG-3’ leche cruda. El límite de SYBR Green I
detección del
LoopF = 5’-TCGACCAGATTCACATCCGG-3’ ensayo LAMP se Tinción GoldView
comparó con el
LoopB = 5’-AACGCCGCATTCGACAAG-3’ de la PCR Plásmido pMD18-T
utilizando el
mismas plantillas Fastfilter Plasmid
a Midi kit
concentraciones
idénticas por Medio
triplicado. Las Middlebrook 7H9
transcripciones suplementado con
de ADN glicerol y
 correspondientes
para el gen
mpt83 de M.
bovis se
generaron para
usar como
polisorbato 80
patrones.

El producto
amplificado se
clonó en el
vector pMD18-T
Medio base
Lowenstein-Jensen
La mezcla de
reacción se
SwabGen DNA Kit
incubó a 63,5 °C
(hisopado)
durante
60 min antes de
Fenol/cloroformo
Amplificación del gen mbp70 de M. bovis, GenBank transferir a 85 °C
y etanol
accession: EU683971 Desarrollar un durante 2 min
(precipitación)
ensayo para terminar
Juego de 4 cebadores sencillo, la reacción. Los
Búfer de reacción
rápido, productos de
10x Thermopol
F3 = 5’-CCGCAGGCGATCTGGT-3’ sensible y amplificación del
Zhang especifico en ensayo LAMP No
10.1007/s00203-016- Reactivo de
H, et al. M. bovis B3 = 5’-CGCTGTTGAGGGTGTCCA-3’ muestras de fueron especificados
1232-6 detección
(2016) esputo de analizado en el artículo.
fluorescente
FIP = 5’-CGGGTCCTGCGACATTCCC- humanos mediante
(calceína)
AATACGCGGCAGCCAATC-3’ (sitios:(159–177) − (119– infectados por electroforesis en
136)) exposición gel de agarosa al
Agua destilada
ocupacional a 2% (p / v). El
BIP = 5’-GTGGCGGCCTCGAACAATCC- M. bovis. bromuro de
Bromuro de etidio
GAGCTGGCCCGACAGT-3’ (sitios:(184–203) − (228–243)) etidio para
visualizacion bajo
Wizard Genomic
luz ultravioleta o
DNA Purification
calceína
Kit
se utilizó para la
detección.
Plásmido pMD18-T