Colágeno - biomaterial para necesarios para conferir características biológicas
distintas a los diversos tipos de tejidos conectivos en el
administración de fármacos
1. Introducción
En los años setenta y ochenta, la expansión de las
aplicaciones médicas de los biomateriales y la
investigación del tejido conectivo desafió a los científicos
y laboratorios de investigación comercial orientados al
mundo académico a centrar sus estudios en el
colágeno[1-6]. Al mismo tiempo, el colágeno medicinal
se hizo más fácil de obtener, la tecnología de
procesamiento mejoró y se comercializaron con éxito
nuevos productos de colágeno[7]. En los últimos años, la
creciente tecnología de ingeniería tisular ha dado un
nuevo impulso a la investigación en materiales de
colágeno como los andamios[8-12]. El uso de colágeno
en forma de tendones como material de sutura se
remonta milenios atrás y podría retener su terreno con
catgut, que todavía representa un material de sutura útil
en cirugía[13-15]. Debido al largo uso histórico de
materiales de colágeno generados a partir de diferentes
fuentes por una variedad de métodos y debido a la
complejidad estructural de la proteína, el término
colágeno se aplica generalmente genéricamente y puede
describir moléculas individuales, una fibrila nativa in situ
o in vitro, agregados o material a granel de naturaleza
no especificada. La forma particular del colágeno a
menudo tiene que ser inferida del contexto y en algunos
casos el lector queda a oscuras sobre el carácter exacto
para proteger la información patentada. El propósito de
esta revisión es resumir la información sobre la química
del colágeno, su procesamiento, las características de las
formas de dosificación, la aplicación de los productos de
colágeno en la medicina y discutir los avances recientes
con un enfoque especial en su uso para la
administración de fármacos.
2. Tipos de colágeno
El colágeno representa la proteína estructural principal
que representa aproximadamente el 30% de todas las
proteínas corporales vertebradas.
Más del 90% de la proteína extracelular en el tendón y el
hueso y más del 50% en la piel se compone de
colágeno[16]. El tejido conectivo deriva características
prominentes como la fuerza mecánica y la activación de
la cascada de coagulación de la sangre del ubicuo
colágeno escleroproteico y su disposición
arquitectónica[17,18] Aunque la mayoría de los
andamios en mamíferos está compuesta de colágeno, el
espectro colagenoso varía de tendones de Aquiles a la
córnea. Por lo tanto, diferentes tipos de colágeno son
cuerpo. Así, el colágeno comprende una familia de
moléculas genéticamente distintas que tienen una
configuración única de tres hélices de tres subunidades
polipéptidas conocidas como cadenas en común.
Actualmente se han aislado al menos 13 tipos que varían
en la longitud de la hélice y la naturaleza y el tamaño de
las porciones no helicoidales (Tabla 1)[19,20]. El
colágeno tipo I es predominante en animales de orden
superior, especialmente en la piel, tendones y huesos
donde se transmiten fuerzas extremas. Es un compuesto
de tres cadenas, dos de las cuales son idénticas,
denominadas a1 (I), y una cadena a2 (I) con diferente
composición de aminoácidos o que rara vez puede
representar un trimer construido de tres cadenas a1 (I).
El colágeno tipo II es esencialmente único en el cartílago
hialino y se cree que la subunidad a1 (II) es similar a la
subunidad a1 (I). El tipo III se encuentra en cantidades
limitadas (aproximadamente el 10%) en asociación con
el tipo I. Por lo tanto, el tipo III puede ser un
contaminante menor de colágeno tipo I preparado a
partir de la piel[16]. Además, los vasos sanguíneos
contienen predominantemente el tipo III. Los tipos de
colágeno I, II y III tienen grandes secciones de secuencias
homólogas, independientemente de la especie[21]. El
tipo IV es una forma altamente especializada que se
encuentra sólo como una red fibrilar suelta en la
membrana del sótano. Para los otros tipos de colágeno
intersticial que ocurren en pequeñas cantidades y están
asociados con estructuras biológicas específicas, el autor
se refiere a la literatura pertinente de la investigación
del tejido conectivo[19,22]. La mayoría de los polímeros
sintéticos representan mezclas de cadenas de longitud
variable compuestas por unidades repetitivas. Muestran
propiedades físicas y químicas que están, en gran
medida, determinadas por pasos de polimerización[23].
Por el contrario, el colágeno, como proteína, tiene una
secuencia, tamaño y estructura de aminoácidos
específicos, que definen sus cualidades básicas como un
biomaterial adecuado para productos médicos. Por lo
tanto, el conocimiento acerca de la química y estructura
nativa es necesario para entender las propiedades del
material de colágeno aislado y los efectos logrados por
las posibles modificaciones. Aquí la discusión se limitará
al colágeno tipo I, que es el más abundante y la mayoría
de los materiales de colágeno para aplicaciones
biomédicas se basan en este tipo de colágeno.
3. Colágeno tipo I
3.1. Bioquímica Para más detalles sobre la biosíntesis
ver Refs. [18,24,25].
3.1.1. Estructura secuencial hélices zurdas con 3,3 residuos por vuelta y un paso de
0,87 nm, tal como se identifica mediante el análisis de
Los primeros trabajos analíticos sobre la química del
rayos X (Fig. 1b)[19,27]. La estructura terciaria se refiere
colágeno fueron impulsados por intereses comerciales
a la unidad fundamental originalmente conocida como
en el pegamento, la gelatina y el cuero. La molécula de
tropocolágeno: tres cadenas de polipéptidos
colágeno básico contiene tres moléculas de polipéptido,
entrelazadas para formar una triple hélice derecha con
cada una de las cuales contiene más de 1000
un paso de aproximadamente 8,6 nm. La triplehelix en
aminoácidos. La composición de las cadenas de colágeno
forma de barra tiene un peso molecular promedio de
a1 (I) y a2 (I) de la piel de ternero se presentan en la
aproximadamente 300 kDa, una longitud de 300 nm con
Tabla 2[16]. Sólo hay diferencias menores entre el
un diámetro de 1,5 nm (Fig. 1c)[18]. Esta relación
colágeno de diferentes especies de vertebrados[21]. Los
extrema de las dimensiones da lugar a una alta
aminoácidos se ordenan en una secuencia única de
viscosidad en las soluciones y una gran movilidad en los
formación de triple hélice. La glicina tiene el grupo
campos eléctricos[28]. Además, hay regiones de 9-26
lateral más pequeño y su repetición en cada tercera
aminoácidos en el amino y carboxyl fin de cadena de
posición de la secuencia permite cerrar el paquete de las
terminal de la molécula que no son incorporados a la
cadenas en una hélice que deja poco espacio para los
estructura helicoidal. Estas regiones no helicoidales se
residuos en el núcleo. Alrededor del 35% de las
denominan telopeptidas. En el cuarto nivel de orden, las
posiciones no glicinas en la unidad repetidora Gly-X-Y
moléculas de triple helicoidal se escalonan longitudinal y
están ocupadas por la prolina, que se encuentra casi
bilateralmente en fibrillas con distinta periodicidad. Las
exclusivamente en la posición X, y la 4-hidroxiprolina,
moléculas de colágeno se agregan a través de la
predominantemente en la posición Y (Fig. 1a). La
fibrillogénesis en microfibrillas que consisten de cuatro a
hidroxiprolina se deriva de la prolina por hidroxiprolina
ocho moléculas de colágeno y luego en fibrillas. Estas
post-translacional mediada por prolylhydroxilasa[24].
fibrillas alcanzan de 10 a 500 nm de diámetro
Comprende aproximadamente el 10% en la composición
dependiendo del tipo de tejido y etapa de
de aminoácidos del colágeno y ofrece formas de
desarrollo[18]. Los niveles triples son escalonados por 67
cuantificar el colágeno o sus productos de degradación
nm con un espacio adicional de 40 nm entre moléculas
en presencia de otras proteínas[26]. El colágeno
sucesivas. Estas fibrillas de colágeno se organizan en
también contiene el aminoácido inusual hidroxilisina.
fibras, que por su parte pueden formar paquetes de
Similar a la formación de hidroxiprolina a partir de la
fibras aún más grandes.
prolina, la hidroxilisina se forma a partir de la lisina en el
retículo endoplásmico mediante hidroxilación 3.1.3. Enlaces cruzados naturales
enzimática por lisil hidroxilasa. La formación de residuos
El empaquetado sistemático de las tres capas confiere
de hidroxilisilicilisilo permite la fijación de componentes
fuerza y resistencia a las fibras de colágeno. La
azucarados, un requisito inalterable para que la
estabilidad mecánica y química adicional se deriva de las
molécula de colágeno forme una estructura triple-
reticulaciones intra- e intermoleculares. Inicialmente, la
helical[25]. Ambos iminoácidos (aproximadamente el
formación de enlaces cruzados es mediada por lisil
23% de los residuos) estabilizan la triple hélice. Debido a
oxidasa durante la formación de fibrila[29]. La actividad
su naturaleza alicíclica, endurecen el dolor y forman
enzimática se limita a las regiones no helicoidales de los
enlaces de hidrógeno limitando la rotación[25]. El
telopeptidos y lleva a la conversión de residuos
colágeno tipo I es una glicoproteína con un contenido de
selectivos de lisil e hidroxiilsil a los aldehídos allysina e
carbohidratos inferior al 1%. Los componentes
hidroxialsina correspondientes (Fig. 2). Mientras que las
azucarados son una sola unidad de galactosa o un
fibrillas se asocian, los aldehídos pueden reaccionar
disacárido de galactosa y glucosa unido
espontáneamente. Se forman enlaces cruzados
glucosídicamente a través de residuos de
intramoleculares entre dos cadenas a en la sección no
hidroxilisina[16].
helicoidal de la misma molécula por condensación del
3.1.2. Estructuras superiores aldol de dos aldehídos[29,30]. Los enlaces cruzados
interpoleculares se producen entre la región de los
Las características fisiológicas y biomateriales únicas del
telopeptidos de una molécula de colágeno y la región
colágeno en comparación con la mayoría de los
helicoidal de una molécula adyacente trimestralmente
polímeros sintéticos derivan de la complejidad
escalonada. Estos puentes entre dos moléculas de
estructural de la molécula de colágeno. En la Fig. 1 se
tropocolágeno diferentes resultan de la formación de
ilustran los distintos niveles de orden observados en el
aldimina (no, mono- o dihidroxilado
colágeno. Las cadenas a se combinan para formar
deshidrolysinonorleucina (D-HLNL)) entre los residuos de
aldehído y los grupos e-amino presentados por lisina e
hidroxilisina (Fig. 2)[30].
3.4. Crosslinking
La reticulación natural proporciona una alta resistencia a
la tracción y resistencia proteolítica al colágeno. Debido
a la disociación de enlaces cruzados en el curso de los
procesos de aislamiento descritos anteriormente, las
formas reconstituidas de colágeno como películas, fibras
o esponjas pueden carecer de suficiente fuerza y pueden
desintegrarse al manipularse o colapsar bajo la presión
del tejido circundante in vivo. Además, la velocidad de
biodegradación tiene que ser personalizada en función
de la aplicación específica. Por ejemplo, como
hemostato, el colágeno ha cumplido su misión una vez
que se ha formado el coágulo sanguíneo, mientras que
para el aumento de tejido un implante debe mantener
sus propiedades de andamiaje mientras que
gradualmente es reemplazado por el colágeno
huésped[94,95]. Por lo tanto, a menudo es necesario
conferir firmeza mecánica y resistencia a la colagenasa
mediante la introducción de reticulación exógena en la
estructura molecular.
3.4.1. Bronceado de cromo
La formación de enlaces iónicos es el principio básico del
bronceado. Los metales trivalentes como el cromo se
utilizan como agentes reticulantes en productos médicos
absorbibles, por ejemplo en suturas quirúrgicas de
catgut[1,74]. El cromo forma complejos oligoméricos
básicos estables con residuos ácidos en la molécula de
colágeno a un pH de 3-4. El aluminio y otros cationes
polivalentes también forman enlaces iónicos con el
colágeno, pero confieren una estabilidad inferior[96]. La
movilidad intramolecular del colágeno ha sido
significativamente reducida por los iones de aluminio,
como lo demuestra la espectroscopia de corriente
estimulada térmicamente[97].
3.4.2. Formaldehído
Los enlaces cruzados covalentes en el colágeno se
pueden crear de varias maneras[98]. Los reactivos más
utilizados son los aldehídos con formaldehído y
glutaraldehído siendo los ejemplos más obvios. El
formaldehído reacciona con los grupos e-amino de
residuos de lisina e hidroxilisina a una imina intermedia
que forma un enlace cruzado con la tirosina o con un
grupo de esparagina o glutamina en medio[1,98]. El
grado de reticulación puede inferirse a partir del número
de grupos e-amino no modificados[59,99]. El
tratamiento con formaldehído prolonga la absorción in
vivo del material a base de colágeno mientras que
disminuye la resistencia a la tracción[100]. Una ventaja
importante del formaldehído es la posibilidad de
reticulación del material de colágeno seco con reactivo
en la fase de vapor en lugar de su tratamiento en
líquidos, en particular en ambientes acuosos[99,100]. La
información sobre el contenido residual puede
deducirse de la Farmacopea Británica[101] que limita el
formaldehído extraíble con agua en esponjas de gelatina
absorbible a 0,2% p/p. Debido a la fragilidad de los
productos reticulados con formaldehído, la toxicidad
potencial y las reacciones adversas derivadas de los
residuos y la fijación reversible, el formaldehído ya no es
preferible, aunque aprobado, para los productos
sanitarios.
3.4.3. Glutaraldehído
El aldehído más comúnmente utilizado es el
glutaraldehído bifuncional (GTA), que se revisó
recientemente como agente reticulante[102]. El
tratamiento con GTA es un proceso comercialmente
viable, su eficiencia ha sido optimizada, es barato y se
completa en un período relativamente corto y
proporciona una durabilidad a largo plazo más sostenida
que el reticulado con formaldehído[56,98]. Los eventos
de reacción complejos dependen del pH, solvente,
concentración y pureza de GTA[4,103-106]. La
reticulación cruzada es óptima a pH neutro y requiere la
formación de grupos e-amino libres no rotonados para
formar iminas[107]. La GTA no sólo reacciona con los
grupos amino, sino también con los grupos carboxílicos,
amidas y otros grupos de proteínas[103]. La
polimerización adicional por condensación de aldol
resulta en enlaces cruzados intermoleculares covalentes
que conectan moléculas de colágeno distantes[4,103].
En consecuencia, la reticulación puede resultar menos
eficaz con el aumento de las concentraciones de GTA.
Las cadenas de aldehído polimérico pueden crecer en la
superficie de las fibras de colágeno, lo que conduce
predominantemente a la reticulación intermolecular y
previene la penetración adicional del reactivo en las
estructuras de fibra y fibrila[74]. El grado de reticulación
puede medirse a través del análisis de grupos de
aminoácidos libres, temperatura de contracción,
resistencia a la digestión enzimática y temperatura de
fusión del colágeno[106,108,109]. Se pueden utilizar
variaciones en el procedimiento de reticulación GTA
para optimizar los biomateriales de colágeno. Se pueden
agregar compuestos diaminosos como la lisina para
intensificar el entrecruzamiento intermolecular en
comparación con la GTA sola[110]. La irradiación de
microondas se ha utilizado con éxito para estimular la
reticulación del colágeno con GTA y se encontró menos
inflamación in vivo alrededor de los implantes con
tratamiento de microondas en comparación con el
tratamiento convencional con glutaraldehído[111-113].
Además, el control de las características mecánicas y la
cinética de degradación a través del reticulado GTA
pueden utilizarse para materiales compuestos a base de
colágeno[57]. Varios estudios informaron sobre la
respuesta in vivo a los materiales de colágeno tratados
con GTA en varios modelos animales, así como en el
cultivo celular[40,68,114-119] resultaron en datos
contradictorios dependientes de la concentración de
GTA aplicada. Las preocupaciones sobre el tratamiento
GTA surgen de un efecto exacerbante sobre la
calcificación de los materiales protésicos[114], la
citotoxicidad debido a la despolimerización
postimplantación y la liberación de monómeros del
polímero glutaraldehído[116-118,120,121]. Sin
embargo, se ha demostrado que el tratamiento con
glutaraldehído reduce la inmunogenicidad del material
colágeno[68,115] y aumenta su resistencia a la
degradación enzimática.
3.4.4. Hexametilendiisocianato
Como alternativa al tratamiento con aldehído, se puede
obtener colágeno resistente y fuerte utilizando
hexametilendiisocianato (HDC) como reticulante[98]. El
HDC se disuelve en agua con tensioactivos o se disuelve
en 2-propanol y forma enlaces cruzados con dos grupos
e-amino a través de las variedades tipo urea, un
principio que también se utiliza en los expansores
plasmáticos a base de gelatina reticulada[74,122- 126].
Van Luyn et al.[117,118] encontraron menos efectos
citotóxicos en comparación con el material tratado con
GTA y evaluaron la citotoxicidad primaria debido a la
liberación de extractables y los efectos secundarios
resultantes de la liberación de productos de degradación
citotóxicos[117,118]. Tanto el material GTA como, en
menor medida, el HDC reticulado indujeron efectos
citotóxicos primarios y secundarios, en contraste con el
material no reticulado, que sólo condujo a una baja
inhibición primaria de la proliferación celular. Mientras
que el material reticulado GTA mostró efectos fuertes
debido a la hidrólisis, el efecto secundario del HDC fue
leve y debido a la descomposición enzimática del
biomaterial.
3.4.5. Compuestos poliepoxínicos
Varios estudios se han centrado recientemente en el
uso del epoxi (éter de etilenglicol diglicidil éter, éter de
glicerol poliglicídil éter, éter de metilglicidil éter)[127-
134]. La funcionalidad epoxi reacciona
predominantemente con los grupos amino sobre la
lisina, muy similar a la GTA. Los ligamentos cruzados de
los ligamentos cruzados anteriores con epoxi ocurren un
poco más lentos que con la GTA[131] pero el
tratamiento con epoxi hizo que el tejido fuera más
flexible y disminuyó la incidencia de calcificación in
vivo[131,135]. La citotoxicidad de los componentes de la
polipoxia también ha demostrado ser aceptable[136].
3.4.6. Carbodiimidas
Crosslinking con carbodiimides, especialmente 1-etil-3-
(3- dimethylaminopropyl)carbodiimide (EDC) ofrece la
ventaja principal sobre aldehídos, HDC, o compuestos de
epoxy en que estos carbodiimides sólo facilitan la
formación de enlaces de amida entre grupos carboxílicos
y amino sobre las moléculas de colágeno sin llegar a ser
parte de la vinculación real. De este modo se evitan los
agentes reticulantes bifuncionales. Carbodiimide la
primera pareja a un grupo carboxílico para formar
estructuras de oisoacylurea. El intermediario activado
resultante es atacado por un grupo de aminoácidos
nucleofílicos primarios para formar un enlace cruzado de
amida y el isoureaderivado de la carbodiimida aplicada
es eliminado y puede ser lavado[60,74,103,137]. El pH
óptimo es de aproximadamente 5[138]. La
susceptibilidad del material reticulado de carbodiimida a
la degradación enzimática puede controlarse variando el
grado de reticulación a través de las condiciones de
reacción[58]. In vivo, el colágeno dérmico de oveja
reticulado con carbodiimida fue lentamente degradado y
permitió que la nueva formación de colágeno funcionara
como guía para el crecimiento muscular excesivo en
defectos de la pared abdominal[94].
3.4.7. Método de acil azida
La formación intermedia de Acyl azide es un método
alternativo al uso de carbodiimidas que resulta en la
inducción de enlaces de amida[139]. Los grupos
carboxílicos son metilados y convertidos en hidrazidas,
seguidos de una reacción con nitruro de sodio para
formar la acíl azida o pueden ser modificados con
difenilfosforilo azida. Estas funcionalidades de la azida se
combinan con grupos de aminoácidos para dar enlaces
cruzados de amida. Las mejoras en la estabilidad térmica
y la resistencia a la digestión de la colagenasa fueron
similares después del procedimiento de acyl azide y el
tratamiento de glutaraldehído[139] con
citocompatibilidad superior para el material tratado con
acyl azide[140]. In vivo, una esponja de colágeno-
glicosaminoglicanos reticulada vía acyl azide fue
rápidamente invadida por células mononucleares con la
formación de tejido de granulación. El tratamiento con
acil azida aumentó la persistencia de una esponja de
colágeno-glicosaminoglicanos hasta 3 meses y la
calcificación inhibida, mientras que las esponjas tratadas máximo bastante limitado de reticulación debido al
con glutaraldehído fueron completamente calcificadas pequeño número de residuos de tirosina y fenilalanina
después de 15 días[61]. en el colágeno. Por lo tanto, los tiempos de exposición
pueden ser breves, ya que la densidad de reticulación
Van Wachem comparó los cuatro métodos de
alcanza pronto sus límites[147]. Sin embargo, la
reticulación GTA, acyl azide, HDC y EDC con respecto a la
radiación UV mejora la resistencia mecánica[146].
biocompatibilidad y la capacidad de regeneración
tisular[50]. Los resultados más prometedores se 3.5. Esterilización
obtuvieron con el material reticulado EDC, que dio lugar
Idealmente, los procedimientos de esterilización liberan
a una respuesta celular leve después de la implantación
biomateriales basados en colágeno de todos los
con un aumento de los neutrófilos y la infiltración de
microorganismos viables sin inducir cambios en la
macrófagos. En combinación con la lenta tasa de
química de las proteínas, las propiedades mecánicas y el
degradación permitió el reemplazo por colágeno recién
comportamiento de degradación. Sin embargo, todos los
formado y la regeneración de tejidos.
métodos utilizados actualmente dañarán y alterarán el
3.4.8. Tratamiento físico colágeno de forma inherente de una manera que podría
afectar su tasa de absorción in vivo, resistencia mecánica
Una desventaja importante de los agentes químicos
o rendimiento en combinación con medicamentos.
reticulantes es el efecto tóxico potencial de moléculas
Como alternativa, es factible un procesamiento aséptico
residuales y/o compuestos formados durante la
costoso y complejo, y las preparaciones de colágeno
degradación in vivo. Por lo tanto, se buscan métodos
soluble pueden ser filtradas estérilmente. El calor
físicos alternativos, incluyendo calor seco, exposición a
húmedo no se puede utilizar para la esterilización de los
la radiación ultravioleta o g-irradiación[98]. Tanto el
productos de colágeno, ya que el autoclave
tratamiento deshidrotérmico (DHT) como la exposición a
desnaturaliza térmicamente la proteína hidratada. Se
la luz ultravioleta a 254 nm incrementan la temperatura
pueden aplicar temperaturas más altas después de
de contracción del colágeno, la resistencia a la
eliminar la humedad completamente. Sin embargo, el
degradación colagenoolítica y la durabilidad bajo carga
calor seco induce al mismo tiempo la desnaturalización
de la colagenasa[141-148]. Sin embargo, el colágeno se
parcial y la reticulación y se utiliza para deshidratar
desnaturaliza parcialmente por estos tratamientos
térmicamente el colágeno de las reticulaciones (véase la
físicos[147]. Para reducir al mínimo la degradación de las
sección 3.2). Por lo tanto, aunque la esterilización con
tres capas es fundamental que el tratamiento DHT
calor seco puede hacer que el material tenga una
reduzca el contenido de agua a través del vacío lo más
resistencia a la tracción aceptable u otras propiedades
posible antes del calentamiento. Incluso pequeñas
físicas, la degradación in vivo puede verse
cantidades de humedad residual pueden causar la
sustancialmente alterada. Las porciones
ruptura de las estructuras helicoidales y la
desnaturalizadas de colágeno pueden ser más
proteólisis[141]. La deshidratación severa en sí misma ya
susceptibles a las proteasas no específicas y la absorción
induce a la formación de amidas y a la esterificación
puede acelerarse con una rápida pérdida de resistencia a
entre los grupos carboxi y amino libre e hidroxilo,
la tracción[147].
respectivamente. Pero el efecto es insignificante y las
condiciones típicas de DHT son de 110°C durante varias 3.5.1. Óxido de etileno
horas hasta unos pocos días[146.148]. La combinación
El tratamiento con óxido de etileno se utiliza para
de degradación y reticulación permite a las enzimas
esterilizar colágeno de forma fiable. Este procedimiento
inespecíficas atacar y solubilizar fragmentos del material
requiere humidificación de la cámara de esterilización y
reticulado. Como Gorham et al.[143] demostró, la
temperaturas ligeramente elevadas[149]. En estas
sensibilidad del material de colágeno a la tripsina se
condiciones, sólo se produce una pequeña
incrementó después del tratamiento con DHT, mientras
desnaturalización[1]. Pero el análisis de aminoácidos
que la degradación por la pepsina y las catepsinas
indica una reacción intensiva del óxido de etileno con los
lisosómicas se redujo. In vivo hubo poca diferencia entre
grupos de aminoácidos presentados por el colágeno en
las muestras de control y las de curado al calor, excepto
forma de residuos de lisina e hidroxi-lisina y lleva a un
para el material tratado a 120°C que se biodegradó a un
aumento del pH[74,99,150]. Así, la estabilidad de la
ritmo significativamente más rápido. Se cree que la
hélice disminuye, como lo indica una menor
formación de enlaces cruzados durante la radiación UV
temperatura de contracción y desnaturalización del
se inicia con radicales libres formados sobre residuos de
colágeno dérmico de ovejas y tendones bovinos[99,150].
aminoácidos aromáticos[147] lo que indica un grado
Además, el colágeno dérmico de oveja dérmico
esterilizado con óxido de etileno mostró una
degradación más lenta por colagenasa en comparación
con el material no esterilizado, lo que se explica por la
menor adsorción de colagenasa en la matriz de
colágeno[150]. En nuestras pruebas no pudimos
encontrar este efecto del óxido de etileno en las
esponjas de colágeno bovino[99]. Dado que el colágeno
se altera permanentemente por la esterilización con
óxido de etileno y que tanto el rendimiento físico como
el biológico se ven afectados por el proceso, la
consistencia en el tratamiento es importante. Esto se
refiere específicamente al proceso de humidificación, al
tratamiento del gas y al posterior proceso de aireación,
que es fundamental para reducir al mínimo la
concentración de óxido de etileno residual a fin de
cumplir con los límites reglamentarios y evitar los
efectos citotóxicos[151].
3.5.2. g-irradiación
En los últimos años, la irradiación g de una fuente de
60Co se ha convertido en un método de elección para
esterilizar los biomateriales de colágeno principalmente
por su alta eficacia y dosis controlada con precisión. Se
considera el método de esterilización más confiable
disponible[74]. Se considera que una dosis de 2,5 Mrad
logra la esterilización completa[152]. Los estudios sobre
el efecto de la radiación G en la estructura del colágeno
indican claramente que la escisión en cadena resulta en
una fracción de material de menor peso molecular[153].
Esta fragmentación puede compensarse mediante la
formación de enlaces cruzados adicionales, en función
del contenido de humedad del producto[150,154]. Estos
cambios moleculares debidos a la esterilización g
reducen la fuerza mecánica del colágeno[150]. Al mismo
tiempo, los materiales se vuelven más sensibles al
ataque enzimático de la colagenasa[150] pero más
resistentes a la degradación por la pronasa[153]. Las
pruebas enzimáticas in vitro deben interpretarse con
cuidado, ya que no pueden reflejar completamente la
situación in vivo.
4. Applications
The attractiveness of collagen as a biomaterial rests
largely on the view that it is a natural material of low
immunogenicity and is therefore seen by the body as a
normal constituent rather than foreign matter [25].
Collagen can be processed into a number of forms such
as sheets, tubes, sponges, powders, fleeces, injectable
solutions and dispersions, all of which have found use in
medical practice [1,74,155]. Furthermore, attempts have
been made to apply these systems for drug delivery in a
variety of applications such as ophthalmology, wound
and burn dressing, tumor treatment, and tissue
engineering (Table 3).
4.1. Ophthalmology
Medical devices based on collagen have numerous
applications in ophthalmology as grafts for corneal
replacement, suture material, bandage lenses, punctual
plugs, or viscous solutions for use as vitreous
replacements or protectants during surgery [156]. One
of the most widely studied drug carrier applications of
collagen are inserts and shields for drug delivery to the
corneal surface or to the cornea itself and delivered
intraocularly.
4.1.1. Inserts
The concept of using ocular collagen inserts to provide
prolonged delivery of medication to the eye was
initiated in the early 1970s. The studies were focused on
fabrication of drug-loaded inserts cut from films or as
molded rods, prepared by air-drying aqueous mixtures
of drug and collagen [157]. Such collagen films delayed
the release of pilocarpine by over 25 min while the
insert dissolved without provoking an inflammatory
response in rabbit eyes [157]. Further prolonged release
in vitro was described for devices crosslinked with
glutaraldehyde, but the authors did not consider
reactions of pilocarpine with the aldehyde and did not
note the pilocarpine content of the devices [158]. Punch
et al. [159] performed preliminary tests on inserts made
from insoluble or soluble, succinylated collagen loaded
with insoluble antibiotics penicillin–procaine,
erythromycin, or erythromycin estolate. The most
promising results were achieved with erythromycin
estolate from succinylated, soluble collagen with
effective concentrations released for more than 12 h.
However, the physical properties were inappropriate
and the systems failed when inserted into the
conjunctival sac of cattle. Bloomfield et al. [3] compared
delivery of gentamicin by ocular inserts made of
succinylated collagen with eyedrops, ointments, and
subconjunctival injection. The collagen wafers gave
higher drug levels in tear film, sclera and cornea.
Succinylation was considered advantageous to enhance
charge interaction between deprotonated carboxyl
groups of succinylated collagen and positive amino
groups of gentamicin [see Section 4.4]. In the late 1980s
studies on inserts were superseded by research work on
collagen shields which became commercially available in
reproducible quality.
4.1.2. Shields
Collagen shields were developed as corneal bandages to
promote wound healing after corneal transplantation,
radial keratomy, in keratorefractive procedures, and for
epithelial debridement procedures [160–163]. The thin
collagen films conform to the shape of the cornea when
applied to the eye, provide sufficient oxygen
transmission to allow corneal metabolism and act as
short term bandage lenses [164]. As the shields dissolve,
they provide a layer of collagen solution that seems to
lubricate the surface of the eye, minimize rubbing of the
lids on the cornea, and foster epithelial healing
[160,165]. Initially, the shields come in a dehydrated
form and have to be soaked with liquid prior to
application. It was recognized that these devices could
be used in order to deliver ophthalmic medication when
immersed in an aqueous drug solution (or suspension)
immediately before placement in the eye. With virtually
any preparation for ophthalmic or parenteral use the
collagen matrix may (i) act as a reservoir, increasing the
contact time between drug and cornea, (ii) reversibly
bind drug molecules which are subsequently released in
a delayed mode, and (iii) reduce the likelihood of
systemic toxicity especially if dose reduction is possible
[165,166]. The systems can either be used solely for
drug delivery purposes or to combine this aspect with
the beneficial effect of collagen on healing after surgery.
Bio-Cor (Bausch and Lomb, Rochester, NY) made of
porcine scleral collagen (as is Kerashield, Ioptex
Research Inc. Irwindale, CA [167]) was the first shield
commercially available and is the most widely tested.
The shields are crosslinked using UV-irradiation during
manufacturing to achieve 12, 24 or 72 h absorption time
after insertion [164,165]. Other products on the market
(MediLens, Chiron, Irvine, CA and ProShield, Alcon,
Fort Worth, TX) are prepared from bovine corium tissue
and last between 24 and 48 h on the cornea [168]. Drugs
used in combination with collagen shields are often
water-soluble antibiotics like gentamicin [169,170],
vancomycin [171], tobramycin [160,172–177], netilmicin
[178], polymyxin B sulfate [167], or trimethoprim [167]
as well as amphotericin B as antimycotic [179,180],
steroids [167,169,176,181,182], pilocarpine [176], or
flurbiprofene sodium [176]. A soak time of 5–10 min is
sufficient [171,175,182]. For example collagen shield
immersed in tobramycin can enhance epithelial healing
after surgery as well as provide antibiotic prophylaxis
against infection [160,172–177]. Tobramycin delivery to
the cornea was significantly improved with collagen
shields over either combinations with hydrophilic soft
contact lenses or eye drops as controls [172]. Unterman
[173] demonstrated that collagen shields were effective
in delivering sustained therapeutic concentrations of
tobramycin to the cornea and aqueous humour of
rabbits. The antibiotic level depended on the loaded
dose. For treatment of bacterial keratitis, the application
of tobramycin in the presence of a collagen shields was
significantly more effective than application of drug
alone. In addition, soaked shields (200 mg/ml
tobramycin) produced a significantly higher
concentration of antibiotic in the cornea 1 h after
application than the subconjunctival injection of 20 mg
tobramycin. This effect helps to reduce the applied
antibiotic dose and Hobden et al. [175] showed that
collagen shields containing tobramycin were as effective
as drop treatment every 30 min in experimental keratitis
with the drug load in drops being an order of magnitude
higher due to repeated application. In vivo studies with
steroids showed that combination with collagen was
superior to simple drop treatment [181]. An additional
variation is the combination of collagen shield treatment
with the repeated application of drops which resulted in
higher drug levels than the use of drops alone [182].
Solubility of the drug and its concentration in the soak
liquid determine the concentrations found in the tear
film, cornea, and aqueous humour. In attempts to
further improve the system, collagen shields were also
impregnated with liposomes [183,184]. Grammer et al.
[184] investigated collagen corneal shields soaked with
liposomal formulations which were labeled either with a
water soluble marker in the aqueous interior or with a
lipophilic marker in the bilayers. The liposomes
remained intact in the course of uptake into and release
from the shields. The results indicated that surface
charge and bilayer fluidity are of minor importance for
the interaction of liposomes with collagen shields.
However, since the release kinetics of
liposomeencapsulated hydrophilic and lipophilic markers
were similar to the release of a non-encapsulated drug,
the combination may be useful with respect to
encapsulation of drugs which do not penetrate the
ocular surface as well as to prolong the corneal contact
time of the liposomes. For postoperative treatment after
glaucoma filtering surgery collagen shields loaded with
5-fluorouracil (5-FU) have been tested in a
subconjunctival implantation scenario. However, in vitro
test results indicated complete release of 5-FU within 15
min and histology showed that collagen implants incited
granulomatous inflammatory response in monkeys
[185,186]. The application of collagen shields for drug
delivery is limited by several disadvantages: (i) the
shields are not fully transparent, reduce visual acuity,
and cause slight discomfort, (ii) the insertion technique
is complex, and (iii) they last only a brief period. Due to
fibrillogenesis at neutral pH, clear acidic solutions
convert to opaque dispersions when the pH is brought
to neutrality for preparation of ophthalmological
systems. However, most implant materials useful in
ophthalmology have to be transparent and clear [187].
Collagen fibrillogenesis at neutral pH can be prevented
by chemical modification of the molecule to change its
pKa to either side of neutrality. The most widely used
method is acylation with succinic or glutaric anhydride
[156].