Universidad Pontificia Bolivariana

Facultad de Ingenierías
Ingeniería Agroindustrial

Práctica N°11
“Métodos instrumentales: Determinación de
vitamina C por el método colorimétrico de la 2-ni-
troanilina.”

Presentado a
Prof. Gustavo Adolfo Hincapié Llanos

Presentan
Barrón Jiménez Ana Guadalupe
Osorio Restrepo Valentina

Medellín, Antioquía. 09 de noviembre de 2016.

Cálculos y resultados
MÉTODOS INSTRUMENTALES: Determinación de vitamina C por el método colorimétrico de
la 2-nitroanilina.

Considerando que: Abs = Absorbancia

Se realizaron las mediciones y cálculos necesarios para completar la siguiente tabla:

TUBO Mg Vitamina C Abs
B 0 00
1 0,02 0,038
2 0,04 0,017
3 0,06 0,127
4 0,08 0,183
5 0,1 0,112
6 0,14 0,162
7 0,20 0,181
8A 0,0967 0,214
9A 0,1057 0,234
8B - 0,398
9B - 0,238

 Curva de calibración con los tubos del B al 7.

Gráfica 1.

Absorbancia vs mg de Vitamina C
0.2
0.18 y = 2.2135x
0.16 R² = 0.9948
0.14
Absorbancia

0.12
0.1
Series1
0.08
Lineal (Series1)
0.06
0.04
0.02
0
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1
Mg de Vitamina C
 Contenido de la muestra problema.

8A

9A

 mg de vitamina C en la muestra problema

Dada la pendiente de la ecuación de la curva de calibración (y=2,2135x), se realizan los
siguientes cálculos: X= De dónde y es la absorbancia y x son los mg de Vitamina C.

8A = = 0,0967 mg

9A = = 0,1057 mg

 mg de vitamina C por cada 100g de muestra.

8A = = 95.1771 mg Vit C/100g muestra

9A = = 52.0177 mg Vit C/100g muestra.

 ppm de vitamina C

8A = = 951.771 mg Vit C/1kg muestra = 951.771 ppm Vit C

9A = = 520.177 mg Vit C/1kg muestra = 520.177 ppm Vit C

 Ajuste a la curva de calibración

Gráfica 2.

Absorbancia vs mg de Vitamina C
0.25

y = 2.2135x
0.2 R² = 0.9977

0
Absorbancia

0.15
0.02
0.06
0.1
0.08
0.0967
0.05
0.1057

0
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12
Mg de Vitamina C
  % Error:

Dato teórico: 225 a 816 ppm de Vit C Dato experimental: 951.71 y 520.15 ppm de Vit C.
(Revista consumer, 2007)

Para la toma 8A se obtuvo el siguiente porcentaje de error:

Para la toma 9A no se obtuvo error, ya que se encuentra dentro del rango establecido por el dato
teórico.

Análisis de resultados

La vitamina C, o ácido ascórbico, es una vitamina soluble en agua que influencía las reacciones de
óxido-reducción y es un nutriente esencial en los seres humanos. La espectroscopía
Se realizó la evaluación del contenido de ácido ascórbico de una naranja con ayuda de un
espectrofotometro UV-Vis a 540 nm que nos midiera la absorbancia. Inicialmente, se realiza una
curva de calibración con 8 tubos base que se llenan de la siguiente manera (Siendo el tubo “B” el
blanco):

Tubo B 1 2 3 4 5 6 7
Sln de 2-nitroanilina (mL) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
Nitrato de sodio 0.08% (mL) Recién
preparado, mezclar bien, esperar 1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
min.
Se debe producir decoloración. Si no, agregar 0.1 mL más de nitrito de sodio en
todos los tubos o utilizar una solución fresca del 0.1 %.
Etanol absoluto (mL) 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8
Sln patrón de ác. Ascórbico (mL) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.7 1.0
Ác. Oxálico 0.15% (mL) Mezclar bien
1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.3 0
y dejar en reposo 5 min.
NaOH 10% (mL) 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2
Agua destilada 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8

Una vez que se tienen todos los tubos completos, se toma una muestra de cada uno en la celda de
vidrio y se colocan en el espectrofotómetro para medir su absorbancia. Como en estos tubos se
conoce la concentración exacta de ácido ascórbico presente en ellos, se puede realizar la curva de
calibración al graficar la absorbancia vs los mg de vitamina C contenidos en cada muesta. Para
graficar, se tuvieron que omitir los resultados de los tubos 2, 5, 6 y 7; porque a pesar de aumentar
en concentración de vitamina C, no aumentaba la absorbancia, por lo que la R 2 quedaba muy por
debajo de 1. Así pues, tomando los valores obtenidos para los tubos B, 1, 3 y 4, se graficó y se
obtuvo una ecuación de la recta de y=2.2135x.
Por otro lado, se extrajo el jugo de una naranja y se filtró para descartar los sólidos para
que quede el puro líquido (o jugo). Posteriormente, se pesaron 5mL de dicho jugo para calcular la
densidad. Del jugo se tomaron 2mL y se adicionaron 8 mL de ácido oxálico, se agitó por 30
segundos, dejándose en reposo durante 3 minutos. Después, se coló con papel filtro, obteniendo el
extracto problema. Con ello, se prepararon los tubos 8A y 9A como se muestra a contiuación:
Tubo 8ª 9A
Sln de 2-nitroanilina (mL) 0.1 0.1
Nitrato de sodio 0.08% (mL) Recién preparado, mezclar
0.1 0.1
bien, esperar 1 min.
Se debe producir decoloración. Si no, agregar 0.1 mL más
de nitrito de sodio en todos los tubos o utilizar una solución
fresca del 0.1 %.
Etanol absoluto (mL) 3.8 3.8
Extracto problema de ácido ascórbico (mL) 0.5 1.0
Ác. Oxálico 0.15% (mL) Mezclar bien y dejar en reposo 5
0.5 0
min.
NaOH 10% (mL) 1.2 1.2
Agua destilada 3.8 3.8

Una vez que se tienen preparados los dos tubos con muestra problema, se toma un poco de cada
uno para llevar al espectrofotómetro para medir su absorbancia, la concentracion exacta de
vitamina C se obruvo con ayuda de la pendiente obtenida en la gráfica 1, una vez que se realizan
los cálculos, se agregan a la grafica ambos valores (obteniendo la gráfica 2) donde se observan de
color rojo y se aprecia que quedan dentro de la curva. Al realizar los calculos necesarios para
obtener el porcentaje de vitamina C encontramos que el tubo 8A tiene una concentracion de
951.771 ppm Vit C, o lo que es lo mismo, 95.1771 mg de Vitamina C en cada 100g de muestra.
Mientras que en el tubo 9A se encontró una concentración de 520.15 ppm de Vitamina C, o lo que
es lo mismo, 52.015 mg de Vitamina C en cada 100g de muestra.
Según la Revista Consumer (2007) se establecen los valores teóricos de vitamina C
contenidos en una naranja de 225 a 816 ppm de Vitamina C. Considerando estos valores como
los datos teóricos, se estableció el porcentaje de error de la muestra 8A en un 16.63%. Mientras
que para la muestra 9A, no se presentó error ya que se encontraba dentro del rango.
Una vez analizados todos los resultados y observando que se tuvieron que descartar 4 de
los 8 tubos que se prepararon para la curva de calibración; así como que de las muestras
problemas la concentración de vitamina C disminuyó aunque el contenido aumentaba. Se cree que
el error se encontró en la manera experimental de preparar los tubos, ya que no se respetaron los
tiempos determinados de espera al agregar ciertos reactivos. Sin embargo, el procedimiento de
medición en el espectrofotómetro se llevó a cabo satisfactoriamente.

Bibliografía

[1] Hincapié Llanos, G. A., (2013). “Química agroindustrial”. Universidad Pontificia Bolivariana,
Medellín, Colombia.
[2] Montoya, N, C, H. (2005). “Manual del laboratorio de análisis de alimentos.” Colombia.
Universidad Tecnológica de Pereira.
[3] Revista consumer (2007). “Los de naranjas exprimidas cuestan el doble pero saben mejor.”
A fondo, análisis, Informe. Disponible en:
http://revista.consumer.es/web/es/20080701/pdf/analisis.pdf