10.1016@j.jnutbio.2019.108318.en - Es (1) Traducido

Prueba previa de la revista
El kéfir mejora la hipertensión a través del mecanismo intestino-cerebro en

ratas espontáneamente hipertensas
Mirian de Almeida Silva, Francesca Elisabeth Mowry, Sarah

Christine Peaden, Tadeu Uggere Andrade, Vinicia Campana
Biancardi
PII: S0955-2863 (19) 30518-2
DOI: https://doi.org/10.1016/j.jnutbio.2019.108318
Referencia: JNB 108318
Aparecer en: La Revista de Bioquímica Nutricional
Fecha recibida: 17 de mayo de 2019
Fecha revisada: 6 de noviembre de 2019
Fecha de aceptación: 27 de noviembre de 2019
Por favor, cite este artículo como: M. de Almeida Silva, FE Mowry, SC Peaden, et al., Kefir mejora la
hipertensión a través del mecanismo intestino-cerebral en ratas espontáneamente hipertensas, La
Revista de Bioquímica Nutricional (2019), https://doi.org/10.1016/j.jnutbio.2019.108318
Este es un archivo PDF de un artículo que ha sufrido mejoras después de la aceptación, como la
adición de una portada y metadatos, y el formato para facilitar la lectura, pero aún no es la versión
definitiva del registro. Esta versión se someterá a corrección de estilo adicional, composición
tipográfica y revisión antes de que se publique en su forma final, pero estamos proporcionando esta
versión para dar visibilidad temprana del artículo. Tenga en cuenta que, durante el proceso de
producción, se pueden descubrir errores que podrían afectar el contenido, y todas las renuncias
legales que se aplican a la revista pertenecen.
© 2019 Publicado por Elsevier.

El kéfir mejora la hipertensión a través del mecanismo intestino-cerebro en
ratas espontáneamente hipertensas
Mirian de Almeida Silva *a, b, Francesca Elisabeth Mowry *a, Sarah Christine Peadena,
Tadeu Uggere Andradeb +, Vinicia Campana Biancardia, c +
* Los autores contribuyeron por igual a este trabajo.
a - Anatomía, fisiología y farmacología, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad de

Auburn. 217 Greene Hall, Auburn, AL, EE. UU. 36849
ta
b - Departamento de Farmacia, Universidade Vila Velha. Avenida Comissario Jose
vis
Dantas de Melo, 21, Boa Vista, Vila Velha, ES, BRA. 29107-372
c - Centro de Iniciativa de Investigación en Neurociencias, Universidad de Auburn, Auburn, AL, EE. UU. 36849
re
la
de
via
+ Autores para
e
correspondencia: Vinicia C.
pr
Biancardi, PhD 217 Greene Hall,

ba
Auburn, AL 36849
ue
Teléfono: 334844 5304

Pr
Fax: (+1) 334844 5388

vbiancardi@auburn.edu
Tadeu Uggere Andrade

Avenida Comissario Jose Dantas de Melo, 21,
Boa Vista, Vila Velha, ES, BRA, 29107-372
Teléfono: (+55) 27 3421-2091
Fax: (+55) 27 3421 2087
tadeu.andrade@uvv.br
Página 1 de 30
Resumen
La hipertensión se asocia con disbiosis intestinal y desregulación del eje intestino-cerebro.
y trabajos anteriores han demostrado que los tratamientos probióticos ejercen beneficios cardiovasculares
efectos en humanos y modelos animales de hipertensión. Junto con la evidencia de
flujo de salida simpático elevado e inflamación crónica en la hipertensión,
planteó la hipótesis de que los mecanismos mediados tanto centralmente como periféricamente subyacen
efectos antihipertensivos del kéfir, un probiótico obtenido de la fermentación de la leche por
ta
granos de kéfir. Ratas espontáneamente hipertensas (SHR) de ocho semanas fueron tratadas por
vis
sonda oral con un vehículo o kéfir (0,3 ml / 100 g / día; 9 semanas; SHR-Kéfir), y
re
apareados por edad con ratas Wistar Kyoto tratadas con vehículo (WKY). Tratamiento de kéfir a largo plazo
la
elevaciones atenuadas de la presión arterial media en SHR-Kefir en relación con las tratadas con vehículo
de
SHRs. Periféricamente, los SHR exhibieron diferencias en la pared del yeyuno (menos Paneth
via
células por cripta de Lieberkϋhn y aumento del grosor de la túnica muscular) y superior
e
pr
niveles séricos de lipopolisacáridos en comparación con WKY, alteraciones que se revirtieron en

ba
SHR-Kefir. Centralmente, el tratamiento con kéfir redujo las densidades de proteínas de IL-6 y TNF-α, y
ue
abolió la activación microglial observada en el núcleo paraventricular hipotalámico

Pr
y médula ventrolateral rostral de SHR. Tomados en conjunto, nuestros hallazgos indican que el
Los efectos antihipertensivos del tratamiento con kéfir a largo plazo se producen, al menos en parte, a través de
integridad estructural y funcional mejorada de la pared intestinal y protección contra
neuroinflamación dentro de los núcleos cardiorreguladores.
Palabras clave: Hipertensión, probióticos, patología intestinal, microglía, neuroinflamación
Página 2 de 30
1. Introducción
La hipertensión es una enfermedad multifactorial asociada con un mayor riesgo de padecer
eventos cardiovasculares como insuficiencia cardíaca, accidente cerebrovascular y enfermedad coronaria [1].
A pesar de los recientes avances farmacológicos en el tratamiento de la hipertensión, una gran
parte de los pacientes presentan hipertensión resistente o refractaria, lo que subraya la necesidad de
opciones terapéuticas adicionales y una comprensión más completa de esta enfermedad
proceso. Un trabajo reciente ha revelado un vínculo potencial entre la hipertensión y
ta
alteraciones gastrointestinales, incluidos cambios morfológicos, compromiso intestinal
vis
integridad de la barrera, desregulación del microbioma intestinal y señalización interrumpida a lo largo del
re
eje intestino-cerebro [2-4]. Estos estudios apuntan a la posibilidad de apuntar al intestino para mejorar
la
resultados en individuos hipertensos, potencialmente a través de intervenciones no farmacológicas.
de
via
Los probióticos, por consenso, se definen como “microorganismos vivos que, cuando
e
administrados en cantidades adecuadas, confieren un beneficio para la salud del huésped ”[5]. Kéfir es un
pr
producto lácteo fermentado probiótico derivado de los granos de kéfir, que consisten en un complejo
ba
Mezcla microbiana simbiótica, que incluye bacterias del ácido láctico, bacterias del ácido acético y
ue
especies de levadura, encerradas en una matriz de polisacáridos y proteínas [revisado en 6, 7].

Pr
Con orígenes que datan antes del 2000 a.C., la incorporación dietética de kéfir ha sido durante mucho tiempo
vinculado a mejoras en la salud en general, incluidos los beneficios cardiovasculares. sin embargo, el
magnitud y mecanismos de los efectos protectores sugeridos por el kéfir en el contexto de
las enfermedades cardiovasculares no son bien conocidas. Es importante destacar que los metanálisis de aleatorizados
ensayos controlados han informado que el consumo de probióticos puede reducir la presión sistólica
presión arterial (PA) en pacientes prehipertensos e hipertensos [8, 9], destacando
Página 3 de 30
la importancia clínica potencial de evaluar más a fondo los efectos antihipertensivos de
probióticos.
Hasta la fecha, numerosos péptidos de kéfir con potencial actividad antihipertensiva a través de
Se ha identificado la inhibición de la enzima convertidora de angiotensina (Ang) (ECA) [10-12].
Friques et al. (2015) demostraron la capacidad del kéfir para mejorar la disfunción endotelial.
en ratas espontáneamente hipertensas (SHR), un modelo genético ampliamente utilizado de
hipertensión. El tratamiento diario con kéfir disminuyó la PA, atenuó la disfunción endotelial,
ta
restablecimiento de la desregulación de especies reactivas de oxígeno intravascular (ROS) / óxido nítrico (NO),
vis
y aumento del reclutamiento de células progenitoras endoteliales. Es de destacar que estos efectos fueron
re
dependiente del tiempo, que ocurre a un nivel significativo después de ocho semanas de tratamiento [13].
la
También se ha demostrado que el tratamiento a largo plazo con kéfir en SHR reduce la frecuencia cardíaca
de
hipertrofia, mejorar la sensibilidad barorrefleja y mejorar el control autónomo cardíaco de

via
frecuencia cardíaca [14]. A pesar de la evidencia de que el kéfir disminuye la PA y mejora en general
e
pr
función cardiovascular en la hipertensión, los mecanismos subyacentes para tales beneficiosos

ba
los efectos aún no se han dilucidado por completo.

ue
Estudios previos han demostrado que la disbiosis intestinal, combinada con periféricos y centrales
Pr
inflamación, conduce al desarrollo, establecimiento y mantenimiento de PA alta [3,
4, 15]. Dentro de las regiones cardiorreguladoras del sistema nervioso central (SNC), como el
núcleo paraventricular hipotalámico (PVN) y médula ventrolateral rostral
(RVLM), la actividad neuronal aberrante está directamente involucrada en la patogenia de
hipertensión [16, 17]. Además, la neuroinflamación dentro de estos núcleos es una
Fenómenos comúnmente observados en la hipertensión, como lo demuestra la activación microglial.
y la liberación asociada de citocinas proinflamatorias, quimiocinas y ROS [18,
Página 4 de 30
19]. Recientemente, Sharmaet al. (2019) demostraron que la inhibición de la microglía PVN en
ratas hipertensas resulta en una fuerte atenuación de la patología intestinal y alteración microbiana intestinal
comunidades [20].
Dado que el kéfir presenta propiedades eubióticas y antiinflamatorias intestinales [7], este
plantea la cuestión de si sus efectos antihipertensivos están regulados, en parte, a través de
el eje intestino-cerebro. Por lo tanto, planteamos la hipótesis de que las mejoras cardiovasculares
observado en SHR después de un tratamiento de kéfir a largo plazo como resultado de una combinación de
ta
mecanismos mediados periférica y centralmente, a saber, la restauración del intestino
vis
estructura y reducción de la neuroinflamación dentro de los núcleos cardiorreguladores del SNC.
re
la
2. Materiales y métodos
de
2.1.Animales y grupos experimentales

via
Ratas macho Wistar Kyoto (WKY) y SHR de ocho semanas de edad (Charles River Laboratories,
e
pr
Wilmington, MA, EE. UU.) Se mantuvieron en las instalaciones de cuidado de animales de la Universidad de Auburn.
en Auburn, AL, EE. UU. Las ratas se alojaron en temperatura (20-26 ° C), humedad (30-
ba
ue
70%) y habitaciones controladas con luz (12 h día / 12 h noche) con comida para ratas estándar y agua
Pr
disponible gratuitamente en todo momento. Cuidado y uso institucional de animales de la Universidad de Auburn
El comité aprobó todos los protocolos animales y procedimientos experimentales (2017-3055).
Los animales se dividieron aleatoriamente en tres grupos experimentales (n = 9 / grupo): 1) control
WKY tratada con vehículo (leche entera; 3,25% de grasa láctea), 2) control SHR tratada con
vehículo, y 3) SHR-Kefir tratado con bebida de kéfir.
2.2 Fermentación de kéfir
Página 5 de 30
La bebida de kéfir se preparó diariamente durante el período de tratamiento de nueve semanas, como
descrito anteriormente [21]. Brevemente, se agregaron granos de kéfir a la leche entera pasteurizada en un
proporción del 5% (p / v) y se mantuvo a temperatura ambiente (23 ° C). Después de 24 h, se colocó un tamiz de plástico.
utilizado para colar la mezcla, y el producto filtrado se refrigeró (4 ° C) durante 24 h para
permitir el crecimiento de la levadura. El kéfir resultante se administró por sonda oral (0,3 ml / 100 g
BW) [13]. Los granos de kéfir fueron amablemente donados por el Dr. Ferreira de la Universidad Federal de
Vicosa, Minas Gerais, Brasil.
ta
2.3 Mediciones BP
vis
re
Las mediciones de PA no invasivas se realizaron con una cola de registro de presión de volumen
la
sistema de manguito para ratas, según el protocolo del fabricante (CODA-6; Kent Scientific
de
Corporation, CT, EE. UU.). Los animales se aclimataron al soporte y los puños durante tres
via
días consecutivos antes de las mediciones de la PA basal. Durante el período de tratamiento, BP

e
Las mediciones se tomaron semanalmente y consistieron en cinco ciclos de aclimatación, seguidos de

pr
veinte mediciones consecutivas de PA. Un promedio de la PA consecutiva

ba
Las mediciones de cada grupo se utilizaron para el análisis estadístico.

ue
Pr
2.4 Ensayo de lipopolisacárido (LPS)
Al concluir el tratamiento de nueve semanas, un subgrupo de animales estaba profundamente
anestesiado (isoflurano al 5%) y sacrificado por decapitación rápida. La sangre del tronco era
se recogen inmediatamente en tubos estériles libres de pirógenos y se incuban durante 30 min a 4 ° C.
La sangre se centrifugó a 7000 gramo durante 10 min a 23ºC. El suero se recogió y almacenó en
- 20 ° C hasta su uso. Las concentraciones séricas de LPS se analizaron mediante una detección colorimétrica
método (lector de microplacas, espectrofotómetro) usando el PierceTM Limulus Amebocito
Página 6 de 30
Kit de cuantificación de endotoxinas cromogénicas de lisado (LAL) (CAT: 88282; Thermo Scientific,
Rockford, IL, EE. UU.), De acuerdo con las instrucciones del fabricante.
2.5 Análisis histológico
Las muestras histológicas del intestino delgado se prepararon como se describió anteriormente.
[22]. Brevemente, las muestras se fijaron en la solución de Bouin (Electron Microscopy Sciences,
Hatfield, PA, EE. UU.) Durante 48 horas a temperatura ambiente. Las muestras se lavaron en alcohol al 70%.
para eliminar el exceso de fijador, embebido en parafina y seccionado a 6 µm con un
ta
vis
micrótomo (Reichert-Jung 2040 Autocut, Leica Biosystems Nusslock GmbH, Nussloch,
re
DELAWARE). Las secciones de tejido se montaron con medio de montaje Eukitt (microscopía electrónica
la
Sciences, Hatfield, PA, EE. UU.) Y se examinó mediante microscopía óptica con una cámara digital.
de
(QImaging Retiga 2000R) acoplado a un microscopio óptico (Nikon Eclipse E800).

via
2.5.1. Tinción de células caliciformes y evaluación morfológica

e
pr
Las secciones se tiñeron con azul alcián / ácido periódico-Schiff (PAS), se tiñeron con contraste con
ba
hematoxilina y diferenciada con alcohol ácido antes de la deshidratación, aclaramiento y

ue
montaje [23]. Imágenes de aumento de 20x de cada sección histológica en áreas donde
Pr
las vellosidades no se curvaron o se superpusieron para cuantificar las células caliciformes. El número de
Se midieron las células caliciformes por vellosidad, la longitud de las vellosidades y el grosor de la túnica muscular.
utilizando el software ImageJ (NIH).
2.5.2. Celdas de Paneth
Las secciones se tiñeron con floxina-tartrazina, como se describió anteriormente [24]. Brevemente,
Las secciones se rehidrataron con xileno y etanol, se trataron con hematoxilina seguido de
Página 7 de 30
una solución acuosa de cloruro de calcio al 0,5% de floxina al 0,5% y se secó. El final
Los pasos incluyeron la diferenciación con una solución saturada de tartrazina en solvente Cello,
seguido de un breve enjuague con etanol absoluto y deshidratación con xileno [24]. La
Se contó el número de células de Paneth por cripta de Lieberkϋhn en cada
sección, trabajando con un aumento de 60x [25]. Las cuantificaciones se realizaron de forma ciega.
manera por un solo investigador.
2.6. Inmunohistoquímica
ta
vis
Los animales se perfundieron transcardialmente con solución salina tamponada con fosfato 0,01 M (PBS; 150
re
mL) seguido de formaldehído al 4% (PFA; 350 mL). Los cerebros se fijaron posteriormente durante 3 h en el 4%
la
PFA y crioprotegido en PBS que contiene sacarosa al 30% durante 3 días a 4 ° C. Rebanadas de 30
de
μm y 40 μm que contienen PVN y RVLM, respectivamente, se recogieron mediante criostato

via
seccionamiento (criostato Microm HM 525). Las muestras se almacenaron a -20 ° C en crioprotector
solución (450 mL dH2O, 300 ml de etilenglicol [Aldrich, EE. UU.], 200 ml de glicerol [RNase-
e
pr
Libre; Sigma, EE.UU.], 75 ml de PBS 0,3 M).

ba
ue
Las rodajas se bloquearon en PBST (PBS 0,01 M, NaN al 0,04%3, Tritón al 0,1%) que contiene un 10%
Pr
suero de burro normal (Jackson ImmunoResearch, EE. UU.) durante 1 h. Anticuerpos primarios
incluyó la molécula adaptadora de unión a calcio ionizada anti-conejo 1 (IBA1; 1: 2000; Wako
Chemicals, EE. UU.), Vasopresina anti-cobaya (VP; 1: 10000; Peninsula Laboratories
International, EE. UU.), Anti-tirosina hidroxilasa de ratón (TH; 1: 250; Santa Cruz
Biotecnología, EE. UU.), TH anti-conejo (1: 1000; EnCor Biotechnology, EE. UU.), Anti-ratón
interleucina-6 (IL-6; 1: 100; Santa Cruz Biotechnology, EE. UU.) y tumor antirratón
factor de necrosis-α (TNF-α; 1: 100; Santa Cruz Biotechnology, EE. UU.). Las muestras fueron
Página 8 de 30
incubados durante 48 h (IBA1) o 24 h (IL-6, TNF-α, VP y TH) con anticuerpos primarios en
PBST, se lavó con PBS y se incubó con anticuerpos secundarios durante 4 horas (Alexa
Fluor® AffiniPure Burro IgG (H + L) anti-ratón 488 [1: 250], anti-conejo 594 [1: 250],
anti-conejillo de indias 594 [1: 250] y anti-conejillo de indias 647 [1:50]; Jackson ImmunoResearch,
EE.UU). Las muestras se lavaron y se montaron en portaobjetos con Vectashield Antifade
Medio de montaje (Vector Laboratories, EE. UU.).
Se examinó la inmunofluorescencia con una Nikon Eclipse TE2000-E invertida
ta
microscopio acoplado a un microscopio láser confocal Nikon A1. Las tinciones VP y TH fueron
vis
utilizados como marcadores anatómicos para el PVN y RVLM, respectivamente. Proyección máxima
re
Se utilizaron imágenes de pilas z de espesor completo con aumento de 60x con tinción IBA1 para
la
evaluar la morfología de la microglía, como se describió anteriormente [26]. Brevemente, una serie de digitales
de
Las transformaciones se realizaron utilizando el software ImageJ (NIH) para generar un

via
imagen esqueletizada. La longitud total de la rama y los puntos finales se calcularon para cada imagen.
e
pr
utilizando el complemento AnalyzeSkeleton, con una reducción relativa en estos valores siendo
ba
indicativo de un aumento de la activación microglial. Se obtuvieron densidades de IL-6 y TNF-α

ue
a partir de imágenes de proyección máxima de pilas z de grosor completo tomadas con un aumento de 20x
Pr
utilizando ImageJ.
2.7. análisis estadístico
Los valores se expresan como media ± error estándar de la media (SEM). Estadístico
Las comparaciones se realizaron mediante análisis de varianza unidireccional (ANOVA) con Tukey
pruebas post hoc. Un valor dep <0,05 se consideró estadísticamente significativo. Estadístico
Los análisis se realizaron utilizando el software GraphPad Prism® 7.
Página 9 de 30
3. Resultados
3.1 El tratamiento con kéfir a largo plazo disminuye la PA en las SHR
Evaluar el efecto del tratamiento con kéfir sobre la presión arterial media (PAM) en
animales hipertensos, se tomaron medidas indirectas de PA en el manguito de la cola al inicio y
semanalmente durante todo el período de tratamiento (Figura 1). Antes del inicio del tratamiento, MAP
de animales SHR y SHR-Kefir fue significativamente mayor que WKY. Considerando que SHR
MAP se mantuvo significativamente más alto que el de WKY durante las nueve semanas
ta
(178,5 ± 3,32 frente a 122,7 ± 2,72 mmHg en la semana 9), el tratamiento con kéfir atenuó la PAM en SHR-
vis
Kéfir (149,3 ± 3,21 mmHg), que demuestra un efecto antihipertensivo significativo del kéfir
consumo en estos animales.

re
la
de
3.2 El kéfir revierte parcialmente las alteraciones fisiopatológicas de la barrera intestinal

via
Celda de Paneth (Figura 2A-C) y celda caliciformeFigura 2D-E) las poblaciones se utilizaron como
e
pr
índices de integridad de la barrera epitelial en el intestino delgado. En SHR, tanto el número de

ba
Células de Paneth / cripta (1,66 ± 0,16 células) y el número de células caliciformes / vellosidad (12,23 ± 0,77
ue
células) se redujeron en comparación con WKY (células de Paneth / cripta: 2,44 ± 0,17; copa
Pr
células / vellosidad: 16,69 ± 1,23). El número de células de Paneth / cripta se normalizó con kéfir
tratamiento (2,23 ± 0,31 células / cripta) (Figura 2G). Por el contrario, el número de copa
células / vellosidad no se alteró en animales SHR-Kefir (11,41 ± 0,56 células) en comparación con el control
SHR (Figura 2H), sugiriendo efectos diferenciales del kéfir en las células gastrointestinales
poblaciones.
3.3.Kefir rescata cambios morfológicos de la barrera intestinal
Página 10 de 30
Los efectos del tratamiento con kéfir sobre el grosor de la túnica muscular (Figura 3A-C) y
longitud media de las vellosidadesFigura 3D-F) se analizaron en el intestino delgado. La
El grosor de la túnica muscular se incrementó en SHR (58,72 ± 2,34 µm) en comparación con
a WKY (43,92 ± 1,53 µm), y esta alteración se revirtió con el tratamiento con kéfir
(48,75 ± 0,85 µm). No se observaron diferencias en la longitud de las vellosidades entre los grupos (WKY:
231,7 ± 16,15 µm; SHR: 212,6 ± 13,52 µm; Grupo SHR-Kefir: 240,0 ± 15,16 µm).
3.4 El kéfir normaliza los niveles elevados de LPS en suero
ta
vis
Las concentraciones de LPS en suero sanguíneo aumentaron en SHR (0,71 ± 0,04 EU / mL) a medida que
re
en comparación con WKY (0,54 ± 0,07 EU / mL). Se encontraron niveles de LPS normalizados en el SHR-
la
Grupo de kéfir (0,54 ± 0,02 UE / ml) (Figura 4).
de
3.5 El kéfir atenúa la activación microglial en el PVN y RVLM

via
Se utilizaron alteraciones en la morfología microglial para evaluar la activación. Como anteriormente

e
pr
detallado, una reducción relativa en la complejidad de la ramificación microglial (es decir, rama más corta
ba
longitud y menos puntos finales, expresados como cambio porcentual del control) se utilizó como
ue
una indicación de desramificación microglial hacia un proinflamatorio activado

Pr
fenotipoFigura 5A-C) [26]. En comparación con los WKY, la microglía SHR había disminuido
longitud de la rama (PVN: -45,6 ± 3,5%; RVLM: -39 ± 4,2%) y puntos finales totales (PVN: -
44,5 ± 3,2%; RVLM: -42,6 ± 2,9%). El tratamiento con kéfir normalizó la morfología de la microglía en el
PVN (longitud de la rama: -18,6 ± 7,4%; puntos finales: -6,6 ± 7,2%) y RVLM (longitud de la rama: -
2,9 ± 6,9%; puntos finales: 13,2 ± 6,2%) de SHR-Kefir (Figura 5D-G), sugiriendo un papel para
kéfir en la disminución de la activación microglial durante la hipertensión.
Página 11 de 30
3.6 El kéfir protege contra niveles elevados de TNF-α e IL-6 en el PVN y el RVLM
Examinar los efectos del kéfir sobre las citocinas neuroinflamatorias, inmunofluorescencia
Las densidades de señal de TNF-α e IL-6 se cuantificaron dentro del PVN y RVLM, y
comparado como cambio porcentual de WKY (Figura 6). Dentro del PVN, las densidades de proteínas de
TNF-α e IL-6 estaban significativamente elevados en SHR en comparación con WKY (TNF-α:
147,2 ± 44,5%; IL-6: 19,9 ± 5,2%), mientras que estos valores se normalizaron en SHR-Kefir
animales (TNF-α: 19,5 ± 4,9%; IL-6: -0,5 ± 5,5%; Figura 6G-H). Asimismo, TNF-α e IL-6
ta
Los niveles fueron mayores en el RVLM de SHRs (TNF-α: 119,6 ± 19,9%; IL-6: 61,0 ± 8,1%), con
vis
densidad de TNF-α normalizada en SHR-Kefir y niveles significativamente reducidos de IL-6 (TNF-α:
2,0 ± 4,1%; IL-6: 32,7 ± 9,6%;Figura 6I-J).

re
la
de
4. Discusión
via
Nuestros hallazgos demuestran, por primera vez, que el tratamiento con kéfir a largo plazo en SHR (1)
e
mejora las alteraciones patológicas del intestino delgado, incluida la restauración de Paneth
pr
poblaciones de células y grosor de la túnica muscular; (2) normaliza el LPS sérico circulante
ba
ue
niveles; y (3) reduce los marcadores de neuroinflamación en el PVN y RVLM (es decir,
Pr
activación microglial y niveles de densidad proteica de TNF-α e IL-6). Estos efectos del kéfir
se asociaron con una atenuación sostenida de MAP elevada en SHR tratados. Nuestra
Los resultados proporcionan una nueva perspectiva de las propiedades antihipertensivas del kéfir, lo que sugiere que
Mecanismos de acción mediados central y periféricamente para este probiótico.
El kéfir es representativo de múltiples cepas de probióticos que contienen un complejo, simbiótico
mezcla de más de 50 especies de microorganismos [27]. Varios estudios, incluido nuestro
propios, han demostrado que el probiótico de kéfir disminuye la PA en animales SHR [13, 14,
Página 12 de 30
21, 28]. Sin embargo, los mecanismos subyacentes de tales efectos no han sido completamente
aclarado.
La microbiota intestinal es reconocida como un actor clave en múltiples enfermedades a través de
sus interacciones con los sistemas endocrino, nervioso e inmunológico del huésped [29-32]. A ese
Al final, la evidencia indica un papel importante para la disbiosis intestinal en la fisiopatología de
hipertensión, tanto en modelos animales [15] como en pacientes hipertensos [3, 33].
Las reducciones en la riqueza de genes microbianos contribuyen a la inflamación crónica de bajo grado [34,
ta
35], una observación común en la hipertensión [36]. Además, la neuroinflamación y
vis
La activación microglial dentro de los centros cerebrales cardiorreguladores está implicada como una
re
mecanismo fisiopatológico subyacente a la patogenia de la hipertensión [18, 20,
la
37]. Junto a su influencia sobre la actividad simpática y la PA, trabajos recientes han
de
demostró un papel de la microglía en la modulación de la microbiota intestinal [20]. Residencia en

via
acumulación de evidencia de señalización desregulada del eje intestino-cerebro, disbiosis intestinal y

e
pr
inflamación crónica de bajo grado en la hipertensión, combinada con la conocida inflamación intestinal
ba
propiedades eubióticas, antiinflamatorias y antihipertensivas del kéfir, hipotetizamos

ue
que el tratamiento con kéfir mejoraría las alteraciones deletéreas en el tracto gastrointestinal
Pr
morfología y función, disminuyen la neuroinflamación y, en última instancia, disminuyen la sangre
presión en animales hipertensos.
Trabajos anteriores han demostrado que los SHR de 20 semanas con hipertensión establecida exhiben
alteraciones fisiopatológicas en el intestino [4, 15], que están ausentes en los jóvenes (4 semanas de edad)
SHR prehipertensivos [15]. De acuerdo con este trabajo, encontramos un engrosamiento de la
túnica muscularis intestinal y poblaciones disminuidas de células caliciformes y células de Paneth en
el intestino delgado de los SHR en comparación con los WKY. Por el contrario, sin embargo, no
Página 13 de 30
observar un acortamiento distintivo de las vellosidades intestinales en SHR. Una posible explicación para esto
La diferencia es que nuestros SHR eran más jóvenes en el momento de la observación (17 semanas de edad). Si,
como Santisteban et al. sugieren, las alteraciones morfológicas dependen de la edad en
SHR, puede ser que se produzca un retraso en el crecimiento significativo de las vellosidades en un momento posterior en el
progresión de la hipertensión. Además, tal dependencia de la edad o el tiempo puede
explicar la falta de diferencia en la altura de las vellosidades observada en la rata más joven con infusión de AngII
modelo en el mismo estudio de Santisteban et al., a pesar de la consistencia de otros
cambios patológicos en el intestino [15].
ta
vis
Mientras que el tratamiento con kéfir no mejoró el número de células caliciformes en los SHR, tanto el
re
El grosor de la túnica muscular y el número de células de Paneth se normalizaron en
la
animales tratados con kéfir. Situadas en la base de las criptas de Lieberkühn, las celdas de Paneth están
de
células epiteliales especializadas del intestino delgado responsables de la secreción de diversos

via
péptidos antimicrobianos que neutralizan los productos microbianos [25]. Tratamiento de kéfir a largo plazo
e
pr
normalizó el número de células de Paneth en SHR, de acuerdo con trabajos anteriores que mostraban
ba
aumento del recuento de células de Paneth en el intestino delgado de ratones tras la administración de
ue
probióticos orales, con el consiguiente aumento de ex vivo actividad microbicida [25].

Pr
La interrupción de la barrera intestinal que conduce a la hiperpermeabilidad permite un aumento
Translocación microbiana desde la luz intestinal hacia el torrente sanguíneo. LPS es un
producto inmunogénico resultante de la degradación de bacterias gramnegativas
membranas. El LPS se encuentra entre los productos microbianos a los que se dirigen las secreciones de células de Paneth para
neutralización, y el LPS sérico se considera un biomarcador para la salud del epitelio intestinal,
reflejando la translocación microbiana [33]. De acuerdo con un informe reciente de Toralet al.
(2019), encontramos niveles elevados de LPS en suero en SHR [38], que fueron normalizados por
Página 14 de 30
tratamiento con kéfir, lo que indica que, además de atenuar las alteraciones estructurales en el intestino,
El consumo de kéfir probablemente mejora las alteraciones funcionales de la barrera intestinal. LPS
se ha relacionado con la patogenia de la hipertensión a través de su capacidad para activar la
receptor de reconocimiento de patrones, receptor tipo Toll 4 (TLR4), que da como resultado la producción
de citocinas proinflamatorias, quimiocinas y especies reactivas de oxígeno (ROS) en ambos
la periferia y el SNC [39]. En particular, Gomez-Guzmanet al. (2015) demostró que
tratamiento con cepas probióticas de Lactobacillus, que representan la mayor parte del kéfir
composición del grano, reduce la producción de ROS en los anillos aórticos de SHR a través de
ta
vis
atenuación del aumento de ARNm de TLR4 y actividad oxidasa de NADPH [40]. Por lo tanto, la habilidad
re
de kéfir para combatir la translocación anormal de LPS en el torrente sanguíneo puede disminuir
la
Señalización mediada por TLR4 y representan una vía de sus efectos antihipertensivos.
de
Trabajos anteriores han mostrado reducciones en los niveles circulantes de IL-6 y en la proporción de TNF-α
via
a IL-10 después de 4 semanas de tratamiento con kéfir en un modelo de ratón de aterosclerosis (bajo
e
pr
knockout del receptor de lipoproteínas de densidad) [41], lo que demuestra un efecto antiinflamatorio de
ba
kéfir similar al observado en modelos de diabetes tipo 1 [42, 43], síndrome metabólico
ue
[44] y asma [45]. Mientras que los estudios anteriores se han centrado en el antiinflamatorio periférico del kéfir
Pr
propiedades inflamatorias y antioxidantes, se sabe poco sobre los efectos centrales de
Consumo de kéfir a largo plazo.
El PVN y el RVLM son centros integradores clave para la regulación cardiovascular autónoma
[46, 47]. Una asociación entre AngII, activación microglial y aumento del simpático
Se ha demostrado actividad dentro del PVN de animales hipertensos [18, 19]. A largo plazo
La inflamación sistémica inducida por LPS activa la microglía y aumenta los efectos proinflamatorios
citocinas en el RVLM durante la hipertensión neurogénica [48]. Microglia, la residente
Página 15 de 30
células inmunes innatas del SNC, son macrófagos residentes en tejidos derivados únicamente de
progenitores del saco vitelino [49] ya menudo se consideran los mediadores primarios de
neuroinflamación. Las alteraciones en el estado de activación microglial se reflejan en
cambios morfológicos. La microglía de vigilancia (es decir, en reposo / inactivada) son
caracterizada por cuerpos de células pequeñas y amplia arborización de su altamente móvil
procesos, mientras que la microglia proinflamatoria (M1) activada clásicamente exhibe
alteraciones morfológicas hacia una forma ameboide con un soma de células agrandadas y
procesos abreviados [26, 50].
ta
vis
Utilizando un análisis morfológico de inmunofluorescencia IBA1, observamos una disminución
re
en la longitud de la rama microglial y los puntos finales en el PVN y RVLM de SHR en relación con
la
WKY, que demuestran una complejidad de ramificación reducida que refleja la activación microglial.
de
Es importante destacar que el tratamiento con kéfir normalizó la morfología de la microglía en ambos núcleos, lo que indica una
via
papel protector del kéfir contra la activación microglial crónica. Esto es apoyado además por
e
pr
nuestros datos con respecto a las densidades de proteínas de citocinas proinflamatorias en el PVN y RVLM.
ba
Mientras que los niveles de proteína TNF-α e IL-6 estaban elevados en el PVN y RVLM de SHR,
ue
las densidades de estas citocinas después del consumo de kéfir a largo plazo fueron comparables
Pr
a los de WKY. Colectivamente, estos hallazgos revelan, por primera vez, un anti-
papel inflamatorio del kéfir en los núcleos cardiorreguladores durante la hipertensión.
Una posible explicación de la capacidad del kéfir para reducir la neuroinflamación es a través de
ambas mejoras en la patología intestinal, con una disminución resultante en los niveles séricos de LPS, y
su capacidad para modular el sistema renina-angiotensina. LPS puede alterar la sangre-cerebro
barrera (BBB), permitiendo que los factores circulantes lleguen a regiones protegidas del
cerebro [51]. Para agravar este efecto de LPS, la interrupción de BBB como resultado de la circulación
Página dieciséis de 30
AngII se evidencia en la hipertensión [52], y nuestro grupo ha demostrado inhibidores de la ECA
actividad del kéfir en SHR [21]. Por tanto, es tentador especular que la combinación de
los efectos beneficiosos del kéfir en la barrera intestinal y la capacidad del kéfir para disminuir la AngII
La producción conduce a reducciones en la permeabilidad BBB y, en consecuencia,
neuroinflamación. Por el contrario, tanto LPS como AngII, así como muchos de los pro-
citocinas inflamatorias y ROS producidas en respuesta a estas moléculas, son capaces de
activar directamente la microglía. Como tal, reducciones en estos factores debido al consumo de kéfir.
ta
puede amortiguar la neuroinflamación independientemente del impacto en la integridad de la BBB.
vis
Si bien los mecanismos precisos que subyacen a los efectos antiinflamatorios centrales del kéfir son
re
no conocida, nuestros hallazgos proporcionan una nueva perspectiva sobre el papel antihipertensivo del kéfir. Como nosotros
la
han informado recientemente, el tratamiento con kéfir a largo plazo disminuye los niveles de proteína TH (un marcador
de
de actividad simpática) dentro del PVN y RVLM de SHRs [28]. Además, el soluble
via
Se ha demostrado que una fracción de kéfir mejora la sensibilidad barorrefleja SHR [21]. Dado que
e
pr
asociación evidenciada entre la activación de la microglía y el aumento de la actividad simpática

ba
en la hipertensión, la influencia del kéfir en la actividad simpática, la sensibilidad barorrefleja y,

ue
En última instancia, la presión arterial puede estar parcialmente mediada por reducciones en
Pr
factores neuroinflamatorios.
En conclusión, nuestros resultados ilustran que el tratamiento a largo plazo con kéfir disminuye la sangre
presión, mejora la integridad de la barrera intestinal y combate
neuroinflamación dentro del PVN y RVLM de SHR. En conjunto, estos hallazgos
sugieren acciones antihipertensivas del kéfir tanto periférica como centralmente, y
Apoyar el uso de kéfir en el tratamiento complementario de la hipertensión. Dado el en curso
necesidad de opciones de tratamiento novedosas y eficaces para el manejo de la hipertensión, comprensión
Página 17 de 30
y evaluar la posible aplicación clínica de los probióticos, como el kéfir, es fundamental
importancia. Sin embargo, no se sabe con certeza si los efectos intestinales y neurales observados
las mejoras derivan indirectamente de la reducción de la presión arterial o son un resultado directo
de kéfir, que surge de los numerosos péptidos biológicamente activos de este nutracéutico y
contribuyendo a sus efectos antihipertensivos. Sugerimos la última de estas posibilidades
basado en trabajos previos que demuestran diversas alteraciones patológicas dentro de los intestinos
[53, 54] y SNC [52] son independientes de los cambios de presión arterial por sí solos. Sin emabargo,
más investigaciones están justificadas y son necesarias para dilucidar completamente la precisión
ta
vis
Relaciones de causa y efecto subyacentes a las acciones antihipertensivas del kéfir.
re
la
de
e via
pr
ba
ue
Pr
Página 18 de 30
Fuentes de financiamiento
Este trabajo fue financiado en parte por la Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de
Nível Superior - Brasil (CAPES; Código de Finanzas 001 y CAPES - PDSE
88881.133261 / 2016-01 a MAS), y fondos de puesta en marcha de la Universidad de Auburn para VCB. TUA
recibe una beca del Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e
Tecnológico (CNPq: subvención número 311925 / 2018-9).
Declaración de interés
ta
Ninguno
vis
Expresiones de gratitud
re
la
Los autores agradecen a la Dra. Iryna Sorokulova, Ludmila Globa y al Dr. Henri.
de
Alexandre Giblot Ducray, del Departamento de Anatomía, Fisiología y

via
Farmacología; Auburn University, AL, por su excelente asistencia técnica en el

e
recolección y procesamiento de tejidos intestinales para evaluación morfológica.

pr
ba
ue
Pr
Página 19 de 30
Referencias
[1] Benjamin EJ, Virani SS, Callaway CW, Chamberlain AM, Chang AR, Cheng S, et al. Estadísticas de
enfermedades cardíacas y accidentes cerebrovasculares, actualización de 2018: informe de la Asociación
Estadounidense del Corazón. Circulación. 2018; 137: e67-e492.
[2] Mell B, Jala VR, Mathew AV, Byun J, Waghulde H, Zhang Y, et al. Evidencia de un vínculo
entre la microbiota intestinal y la hipertensión en la rata Dahl. Genómica fisiológica. 2015;
47: 187-97.
[3] Yang T, Santisteban MM, Rodríguez V, Li E, Ahmari N, Carvajal JM, et al. La disbiosis intestinal
está relacionada con la hipertensión. Hipertensión. 2015; 65: 1331-40.
[4] Yang T, Aquino V, Lobaton GO, Li H, Colon-Perez L, Goel R, et al. La reducción sostenida de
ta
la presión arterial inducida por captopril se asocia con alteraciones en el eje cerebro-intestino
vis
en la rata espontáneamente hipertensa. J Am Heart Assoc. 2019; 8: e010721.
re
[5] Hill C, Guarner F, Reid G, Gibson GR, Merenstein DJ, Pot B, et al. Documento de
la
consenso de expertos. Declaración de consenso de la Asociación Científica Internacional
de
de Probióticos y Prebióticos sobre el alcance y el uso apropiado del término probiótico.

Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2014; 11: 506-14.
via
[6] Ahmed Z, Wang Y, Ahmad A, Khan ST, Nisa M, Ahmad H, et al. Kéfir y salud: una
e
perspectiva contemporánea. Crit Rev Food Sci Nutr. 2013; 53: 422-34.
pr
[7] Rosa DD, Dias MMS, Grzeskowiak LM, Reis SA, Conceicao LL, Peluzio M. Kéfir de leche:
ba
beneficios nutricionales, microbiológicos y para la salud. Nutr Res Rev.2017; 30: 82-96.
[8] Dong JY, Szeto IM, Makinen K, Gao Q, Wang J, Qin LQ, et al. Efecto de la leche fermentada
ue
probiótica sobre la presión arterial: un metanálisis de ensayos controlados aleatorios. Br J

Pr
Nutr. 2013; 110: 1188-94.

[9] Khalesi S, Sun J, Buys N, Jayasinghe R. Efecto de los probióticos sobre la presión arterial:
una revisión sistemática y un metanálisis de ensayos controlados aleatorios. Hipertensión.
2014; 64: 897-903.
[10] Amorim FG, Coitinho LB, Dias AT, Friques AGF, Monteiro BL, Rezende LCD, et al.
Identificación de nuevos péptidos bioactivos de la leche de kéfir mediante proteopeptidómica:
Bioprospección de moléculas antihipertensivas. Química de Alimentos. 2019; 282: 109-19.
Página 20 de 30
[11] Quiros A, Hernandez-Ledesma B, Ramos M, Amigo L, Recio I. Actividad inhibidora de la

enzima convertidora de angiotensina de péptidos derivados del kéfir caprino. J Dairy Sci. 2005;
88: 3480-7.
[12] Ebner J, Asci Arslan A, Fedorova M, Hoffmann R, Kucukcetin A, Pischetsrieder M. El perfil
de péptidos del kéfir bovino revela 236 péptidos únicos liberados de las caseínas durante su
producción por cultivo iniciador o granos de kéfir. J Proteomics. 2015; 117: 41-57.
[13] Friques AG, Arpini CM, Kalil IC, Gava AL, Leal MA, Porto ML, et al. La
administración crónica del kéfir probiótico mejora la función endotelial en ratas
espontáneamente hipertensas. Revista de medicina traslacional. 2015; 13: 390.
[14] Klippel BF, Duemke LB, Leal MA, Friques AG, Dantas EM, Dalvi RF, et al. Efectos del kéfir
ta
sobre los tonos cardíacos autónomos y la sensibilidad barorrefleja en ratas espontáneamente
vis
hipertensas. Frente Physiol. 2016; 7: 211.
re
[15] Santisteban MM, Qi Y, Zubcevic J, Kim S, Yang T, Shenoy V, et al. Alteraciones
fisiopatológicas ligadas a la hipertensión en el intestino. Circ Res. 2017; 120: 312-23.
la
[16] Allen AM. La inhibición del núcleo paraventricular hipotalámico en ratas
de
espontáneamente hipertensas reduce drásticamente el tono vasomotor simpático.

via
Hipertensión. 2002; 39: 275-80.

[17] Guyenet PG, Stornetta RL, Holloway BB, Souza G, Abbott SBG. Médula
e
pr
ventrolateral rostral e hipertensión. Hipertensión. 2018; 72: 559-66.

[18] Shi P, Diez-Freire C, Jun JY, Qi Y, Katovich MJ, Li Q, et al. Citocinas microgliales
ba
cerebrales en hipertensión neurogénica. Hipertensión. 2010; 56: 297-303.

ue
[19] Santisteban MM, Ahmari N, Carvajal JM, Zingler MB, Qi Y, Kim S, et al. Afectación
Pr
de las células de la médula ósea y neuroinflamación en la hipertensión. Circ Res. 2015;

117: 178-91.
[20] Sharma RK, Yang T, Oliveira AC, Lobaton GO, Aquino V, Kim S, et al. Las células microgliales
impactan la microbiota intestinal y la patología intestinal en la hipertensión inducida por angiotensina II.
Circ Res. 2019.
[21] Brasil GA, Silva-Cutini MA, Moraes FSA, Pereira TMC, Vasquez EC, Lenz D, et al. Los beneficios
de la fracción soluble no bacteriana de kéfir sobre la presión arterial y la hipertrofia cardíaca en
ratas hipertensas están mediados por un aumento de la sensibilidad barorrefleja y una disminución
de la actividad de la enzima convertidora de angiotensina. Nutrición. 2018; 51-52: 66-72.
Página 21 de 30
[22] Giblot Ducray HA, Globa L, Pustovyy O, Reeves S, Robinson L, Vodyanoy V, et al. Mitigación de las
complicaciones relacionadas con el estrés por calor mediante un producto fermentado de levadura. J Therm
Biol. 2016; 60: 26-32.
[23] Gill GW, Frost JK, Miller KA. Una nueva fórmula para una solución de hematoxilina semi-
oxidada que no se tiñe ni requiere diferenciación. Acta cytologica. 1974; 18: 300-11.
[24] Di Sabatino A, Miceli E, Dhaliwal W, Biancheri P, Salerno R, Cantoro L, et al. Distribución,
proliferación y función de las células de Paneth en la enfermedad celíaca del adulto complicada y
sin complicaciones. Soy J Clin Pathol. 2008; 130: 34-42.
[25] Cazorla SI, Maldonado-Galdeano C, Weill R, De Paula J, Perdigon GDV. La administración

oral de probióticos aumenta las células de Paneth y la actividad antimicrobiana intestinal.
ta
Fronteras en microbiología. 2018; 9: 736.
vis
[26] Morrison HW, Filosa JA. Un análisis espacio-temporal cuantitativo de la morfología de la microglía
re
durante el accidente cerebrovascular isquémico y la reperfusión. J Neuroinflamación. 2013; 10: 4.
[27] Kim DH, Kim H, Jeong D, Kang IB, Chon JW, Kim HS, et al. El kéfir alivia la obesidad y la esteatosis
la
hepática en ratones alimentados con una dieta alta en grasas mediante la modulación de la microbiota
de
intestinal y la micobiota: análisis comunitario dirigido y no dirigido con correlación de biomarcadores. La

via
Revista de bioquímica nutricional. 2017; 44: 35-43.
[28] Silva-Cutini MA, Almeida SA, Nascimento AM, Abreu GR, Bissoli NS, Lenz D, et al. El
e
pr
tratamiento a largo plazo con probióticos de kéfir mejora la función cardíaca en ratas
espontáneamente hipertensas. La Revista de bioquímica nutricional. 2019; 66: 79-85.
ba
[29] Yang T, Richards EM, Pepine CJ, Raizada MK. La microbiota intestinal y el eje
ue
braingut-riñón en la hipertensión y la enfermedad renal crónica. Nat Rev Nephrol.

Pr
2018; 14: 442-56.

[30] Kang Y, Cai Y. Microbiota intestinal e hipertensión: de la patogénesis a nuevas
estrategias terapéuticas. Clin Res Hepatol Gastroenterol. 2018; 42: 110-7.
[31] Richards EM, Pepine CJ, Raizada MK, Kim S. El intestino, su microbioma y la
hipertensión. Curr Hypertens Rep.2017; 19:36.
[32] Carding S, Verbeke K, Vipond DT, Corfe BM, Owen LJ. Disbiosis de la microbiota intestinal
en la enfermedad. Microb Ecol Health Dis. 2015; 26: 26191.
Página 22 de 30
[33] Kim S, Goel R, Kumar A, Qi Y, Lobaton G, Hosaka K, et al. Desequilibrio del microbioma
intestinal y disfunción de la barrera epitelial intestinal en pacientes con presión arterial
alta. Clin Sci (Lond). 2018; 132: 701-18.
[34] Cotillard A, Kennedy SP, Kong LC, Prifti E, Pons N, Le Chatelier E y otros. Impacto de la intervención
dietética en la riqueza de genes microbianos intestinales. Naturaleza. 2013; 500: 585-8.
[35] José PA, Raj D. Microbiota intestinal en la hipertensión. Curr Opin Nephrol Hypertens.
2015; 24: 403-9.
[36] Solak Y, Afsar B, Vaziri ND, Aslan G, Yalcin CE, Covic A, et al. La hipertensión como
enfermedad autoinmune e inflamatoria. Hypertens Res. 2016; 39: 567-73.
[37] Santisteban MM, Kim S, Pepine CJ, Raizada MK. Eje cerebro-intestino-médula ósea:
ta
implicaciones para la hipertensión y terapias relacionadas. Circ Res. 2016; 118: 1327-36.
vis
[38] Toral M, Robles-Vera I, de la Visitacion N, Romero M, Yang T, Sanchez M, et al. Papel
re
crítico de la interacción Microbiota intestinal - Sistema nervioso simpático en la regulación
de la presión arterial. Frente Physiol. 2019; 10: 231.
la
[39] Nunes KP, de Oliveira AA, Mowry FE, Biancardi VC. Dirigirse a las vías de señalización del
de
receptor 4 de tipo toll: ¿puede la terapéutica pagar el precio de la hipertensión? Br J Pharmacol.

via
2019; 176: 1864-79.
[40] Gómez-Guzmán M, Toral M, Romero M, Jiménez R, Galindo P, Sánchez M, et al. Efectos

e
pr
antihipertensivos de los probióticos cepas de Lactobacillus en ratas espontáneamente

hipertensas. Mol Nutr Food Res. 2015; 59: 2326-36.
ba
[41] Santanna AF, Filete PF, Lima EM, Porto ML, Meyrelles SS, Vasquez EC, et al. La
ue
administración crónica de la fracción soluble no bacteriana de kéfir atenúa la deposición

Pr
de lípidos en ratones LDLr (- / -). Nutrición. 2017; 35: 100-5.

[42] Hadisaputro S, Djokomoeljanto RR, Judiono, Soesatyo MH. Los efectos de la suplementación con
kéfir simple oral sobre las propiedades de las citocinas proinflamatorias de las ratas Wistar con
hiperglucemia inducidas por la estreptozotocina. Acta Med Indones. 2012; 44: 100-4.
[43] Punaro GR, Maciel FR, Rodrigues AM, Rogero MM, Bogsan CS, Oliveira MN, et al. La
administración de kéfir redujo la progresión de la lesión renal en ratas diabéticas STZ al reducir el
estrés oxidativo. Óxido nítrico. 2014; 37: 53-60.
Página 23 de 30
[44] Rosa DD, Grzeskowiak LM, Ferreira CL, Fonseca AC, Reis SA, Dias MM, et al. El kéfir reduce
la resistencia a la insulina y la expresión de citocinas inflamatorias en un modelo animal de
síndrome metabólico. Funct de alimentos. 2016; 7: 3390-401.
[45] Lee MY, Ahn KS, Kwon OK, Kim MJ, Kim MK, Lee IY, et al. Efectos antiinflamatorios y
antialérgicos del kéfir en un modelo de asma de ratón. Inmunobiología. 2007; 212: 647-
54.
[46] Koba S, Hanai E, Kumada N, Kataoka N, Nakamura K, Watanabe T.
Simpatoexcitación por neuronas del núcleo paraventricular hipotalámico que se
proyectan a la médula ventrolateral rostral. J Physiol. 2018; 596: 4581-95.
[47] Gabor A, Leenen FH. Vías neuromoduladoras centrales que regulan la actividad simpática
ta
en la hipertensión. J Appl Physiol (1985). 2012; 113: 1294-303.
vis
[48] Wu KL, Chan SH, Chan JY. La neuroinflamación y el estrés oxidativo en la médula
re
ventrolateral rostral contribuyen a la hipertensión neurogénica inducida por la
inflamación sistémica. J Neuroinflamación. 2012; 9: 212.
la
[49] Ginhoux F, Greter M, Leboeuf M, Nandi S, véase P, Gokhan S, et al. El análisis de mapas de
de
destino revela que la microglía adulta se deriva de macrófagos primitivos. Ciencias. 2010; 330:
via
841-5.
[50] Kreutzberg GW. Microglia: un sensor de eventos patológicos en el SNC. Trends
e
pr
Neurosci. 1996; 19: 312-8.

[51] Varatharaj A, Galea I. La barrera hematoencefálica en la inflamación sistémica. Brain
ba
Behav Immun. 2017; 60: 1-12.

ue
[52] Biancardi VC, Son SJ, Ahmadi S, Filosa JA, Stern JE. La angiotensina II circulante accede al
Pr
hipotálamo y al tronco encefálico durante la hipertensión a través de la ruptura de la barrera

hematoencefálica. Hipertensión. 2014; 63: 572-9.
[53] Patten GS, Abeywardena MY. Efectos de los agentes antihipertensivos sobre la
contractilidad intestinal en ratas con hipertensión espontánea: regulación a la baja del sistema
receptor de angiotensina por losartán. J Pharmacol Exp Ther. 2017; 360: 260-6.
[54] Shi Y, Liu T, He L, Dougherty U, Chen L, Adhikari S, et al. La activación del sistema
renina-angiotensina promueve el desarrollo de colitis. Sci Rep.2016; 6: 27552.
Página 24 de 30
Cifras
ta
vis
re
Figura 1. El tratamiento con kéfir atenúa las elevaciones de la presión arterial media (PAM) en las
SHR. MAP de normotensos WKY (n = 9), SHR (n = 9) y SHR-Kefir (n = 9). Los datos se compararon mediante
la
ANOVA unidireccional con pruebas post-hoc de Tukey en cada punto de tiempo. Los valores se expresan
como media ± SEM; ***p <0,001 frente a WKY; +++p <0,001 frente a SHR.
de
e via
pr
ba
ue
Pr
Página 25 de 30
ta
vis
re
la
de
e via
pr
Figura 2. Efecto del tratamiento con kéfir sobre las poblaciones de células de Paneth y células
ba
caliciformes dentro de las SHR del intestino delgado. Imágenes representativas de secciones transversales
ue
del intestino delgado teñidas con floxina-tartrazina (C.A) y azul alcián / ácido periódico-Schiff (DF)
de normotensos WKY (n = 6; A, D), SHR (n = 6; SER), y SHR-Kéfir (n = 4; C, F).
Pr
Cajas en C.A. mostrar células de Paneth ampliadas digitalmente. Resumen de datos de las células de Paneth / cripta
de Lieberkϋhn (GRAMO) y células caliciformes / vellosidadesH). Los datos se compararon mediante ANOVA
unidireccional con pruebas post-hoc de Tukey. Los valores se expresan como media ± SEM; *p <0,05 frente a WKY;
* p*<0,01 frente a WKY; +p <0,05 frente a SHR; barra de escala = 250 µm.
Página 26 de 30
ta
vis
re
la
de
e via
pr
Figura 3. El tratamiento con kéfir revierte los cambios morfológicos en la túnica muscular de las
ba
SHR. Imágenes representativas de secciones transversales de intestino delgado teñidas con azul
alcián / ácido periódico-Schiff y hematoxilina de WKY normotensos (n = 6; A,
ue
D), SHR (n = 6; SER), y SHR-Kéfir (n = 4; C, F). Las flechas negras muestran el grosor de la túnica muscular (C.A)
y altura de las vellosidadesDF). Resumen de datos del grosor de la túnica muscular (GRAMO) y altura de las
Pr
vellosidadesH). Los datos se compararon mediante ANOVA de una vía con pruebas post-hoc de Tukey. Los
valores se expresan como media ± SEM; ***p <0,001 frente a WKY; +p <0,05 frente a SHR; barra de escala =
250 µm.
Página 27 de 30
Figura 4. Los niveles elevados de endotoxina sérica en SHR se revierten mediante el tratamiento
con kéfir. Concentración de lipopolisacárido (LPS) sérico en WKY normotensos (n = 3), SHR (n = 4) y SHR-
ta
Kefir (n = 3). Los datos se compararon mediante ANOVA de una vía con pruebas post-hoc de Tukey. Los
vis
valores se expresan como media ± SEM; *p <0,05 frente a WKY;
+p <0,05 frente a SHR.
re
la
de
e via
pr
ba
ue
Pr
Página 28 de 30
ta
vis
re
la
de
e via
pr
Figura 5. El kéfir suprime la activación microglial dentro del núcleo paraventricular

ba
hipotalámico (PVN) y la médula ventrolateral rostral (RVLM) en SHR.

Ejemplo de imágenes de proyección máxima de microglía teñidas con proteína adaptadora de
ue
unión a calcio ionizada 1 (IBA1) en el PVN de WKY (A; n = 5), SHR (B; n = 5) y SHR-Kefir (C;
Pr
n = 5). Datos resumidos que muestran criterios de valoración microgliales totales (D, F) y longitud de la rama (P.EJ)
por imagen dentro del PVN (DELAWARE) y RVLM (FG). Los datos se compararon mediante ANOVA de una vía
con pruebas post-hoc de Tukey. Los valores se expresan como media ± SEM; ***p <0,001 frente a WKY; ++p <
0,01 frente a SHR; +++p <0,001 frente a SHR; barra de escala = 25 µm.
Página 29 de 30
ta
vis
re
la
de
e via
pr
ba
ue
Pr
Figura 6. El kéfir atenúa la densidad proteica de citocinas proinflamatorias en el núcleo

paraventricular hipotalámico (PVN) y la médula ventrolateral rostral (RVLM) en SHR.
Imágenes de proyección máxima representativas del factor de necrosis tumoral α (TNF-α; verde;
C.A) e interleucina-6 (IL-6; verde; DF) dentro del PVN de normotensos WKY (n = 5), SHR (n = 5) y
SHR-Kefir (n = 5), utilizando vasopresina como marcador anatómico (rojo; recuadros). Análisis de
densitometría de PVN TNF-α (GRAMO), PVN IL-6 (H),
RVLM TNF-α (I), y RVLM IL-6 (J) se muestran como% de cambio en la señal de inmunofluorescencia (% de área)
en comparación con WKY. Los datos se compararon mediante ANOVA de una vía con pruebas post-hoc de
Tukey. Los valores se expresan como media ± SEM; *p <0,05 frente a WKY; **p <0,01 frente a WKY; ****p <
0,0001 frente a WKY; +p <0,01 frente a SHR; ++++p <0,0001 frente a SHR; barra de escala = 100 µm.
Página 30 de 30

10.1016@j.jnutbio.2019.108318.en - Es (1) Traducido

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

10.1016@j.jnutbio.2019.108318.en - Es (1) Traducido

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Prueba previa de la revista

El kéfir mejora la hipertensión a través del mecanismo intestino-cerebro en

Mirian de Almeida Silva, Francesca Elisabeth Mowry, Sarah

PII: S0955-2863 (19) 30518-2

Referencia: JNB 108318

Aparecer en: La Revista de Bioquímica Nutricional

Fecha recibida: 17 de mayo de 2019

Fecha revisada: 6 de noviembre de 2019

Fecha de aceptación: 27 de noviembre de 2019

© 2019 Publicado por Elsevier.

El kéfir mejora la hipertensión a través del mecanismo intestino-cerebro en

ratas espontáneamente hipertensas

* Los autores contribuyeron por igual a este trabajo.

a - Anatomía, fisiología y farmacología, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad de

Biancardi, PhD 217 Greene Hall,

Teléfono: 334844 5304

Fax: (+1) 334844 5388

Tadeu Uggere Andrade

La hipertensión se asocia con disbiosis intestinal y desregulación del eje intestino-cerebro.

efectos en humanos y modelos animales de hipertensión. Junto con la evidencia de

flujo de salida simpático elevado e inflamación crónica en la hipertensión,

efectos antihipertensivos del kéfir, un probiótico obtenido de la fermentación de la leche por

niveles séricos de lipopolisacáridos en comparación con WKY, alteraciones que se revirtieron en

abolió la activación microglial observada en el núcleo paraventricular hipotalámico

integridad estructural y funcional mejorada de la pared intestinal y protección contra

neuroinflamación dentro de los núcleos cardiorreguladores.

Palabras clave: Hipertensión, probióticos, patología intestinal, microglía, neuroinflamación

La hipertensión es una enfermedad multifactorial asociada con un mayor riesgo de padecer

A pesar de los recientes avances farmacológicos en el tratamiento de la hipertensión, una gran

opciones terapéuticas adicionales y una comprensión más completa de esta enfermedad

proceso. Un trabajo reciente ha revelado un vínculo potencial entre la hipertensión y

especies de levadura, encerradas en una matriz de polisacáridos y proteínas [revisado en 6, 7].

magnitud y mecanismos de los efectos protectores sugeridos por el kéfir en el contexto de

presión arterial (PA) en pacientes prehipertensos e hipertensos [8, 9], destacando

la importancia clínica potencial de evaluar más a fondo los efectos antihipertensivos de

Se ha identificado la inhibición de la enzima convertidora de angiotensina (Ang) (ECA) [10-12].

en ratas espontáneamente hipertensas (SHR), un modelo genético ampliamente utilizado de

hipertrofia, mejorar la sensibilidad barorrefleja y mejorar el control autónomo cardíaco de

función cardiovascular en la hipertensión, los mecanismos subyacentes para tales beneficiosos

los efectos aún no se han dilucidado por completo.

inflamación, conduce al desarrollo, establecimiento y mantenimiento de PA alta [3,

núcleo paraventricular hipotalámico (PVN) y médula ventrolateral rostral

(RVLM), la actividad neuronal aberrante está directamente involucrada en la patogenia de

hipertensión [16, 17]. Además, la neuroinflamación dentro de estos núcleos es una

Fenómenos comúnmente observados en la hipertensión, como lo demuestra la activación microglial.

y la liberación asociada de citocinas proinflamatorias, quimiocinas y ROS [18,

plantea la cuestión de si sus efectos antihipertensivos están regulados, en parte, a través de

2.1.Animales y grupos experimentales

El comité aprobó todos los protocolos animales y procedimientos experimentales (2017-3055).

Los animales se dividieron aleatoriamente en tres grupos experimentales (n = 9 / grupo): 1) control

vehículo, y 3) SHR-Kefir tratado con bebida de kéfir.

2.2 Fermentación de kéfir

utilizado para colar la mezcla, y el producto filtrado se refrigeró (4 ° C) durante 24 h para

Vicosa, Minas Gerais, Brasil.

días consecutivos antes de las mediciones de la PA basal. Durante el período de tratamiento, BP

Las mediciones se tomaron semanalmente y consistieron en cinco ciclos de aclimatación, seguidos de

veinte mediciones consecutivas de PA. Un promedio de la PA consecutiva

Las mediciones de cada grupo se utilizaron para el análisis estadístico.

2.4 Ensayo de lipopolisacárido (LPS)

Al concluir el tratamiento de nueve semanas, un subgrupo de animales estaba profundamente

se recogen inmediatamente en tubos estériles libres de pirógenos y se incuban durante 30 min a 4 ° C.

método (lector de microplacas, espectrofotómetro) usando el PierceTM Limulus Amebocito

2.5 Análisis histológico