Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales

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Actividad Enzimática
Laura Preciado-Natalia Monsalvea y Paula- Mamancheb
a
BIOQUIMICA

Palabras Clave RESUMEN

Enzima
Sobrenadante Durante esta práctica se determinó la actividad enzimática de la catalasa en dos muestras,
Concentración teniendo en cuenta el efecto de la concentración de enzima a utilizar para realizar de la
Habichuela
Sustrato manera más adecuada los análisis para tal fin se prepararon unos extractos de catalasa a
inhibidores partir de una muestra de papa y habichuela, esto con el fin de identificar la acción de la
catalasa en ambas muestras, en el caso de la papa esta se hizo cruda y cocida para poder ver
Enzyme el efecto del pH y temperatura sobre la actividad enzimática de esta, en donde se logró
Supernatant evidenciar que estos factores dañan la actividad enzimática y para la habichuela se analizó
Concentration el efecto de la concentración de la enzima, efecto de inhibidores sobre la actividad
Habichuela enzimática, Efecto de la concentración del sustrato, en donde se evidencia que la
Substrate
inhibitors concentración de la enzima va a afectar siempre la formación del producto, así como también
si se cuenta con una mayor concentración de sustrato la velocidad de la reacción aumenta,
generando más rápido el producto y en el caso de los inhibidores no tiene relación con el
producto sino que estos afectan la velocidad de la reacción.

ABSTRAC
During this practice the enzymatical activity of the catalasa decided in two samples, bearing
in mind the effect of the concentration of enzyme to using to realize in a most suitable way
the analyses for such an end a few extracts were prepared of catalasa from a dad's sample
and kidney-bean, this in order to identify the action of the catalasa in both samples, in case
of it eats this one it was done raw and cooked to be able to see the effect of the pH and
temperature on the enzymatical activity of this one, where it was achieved to demonstrate
that these factors damage the enzymatical activity and for the kidney-bean there was
analyzed the effect of the concentration of the enzima, effect of inhibiting on the enzymatical
activity, Effect of the concentration of the substratum, where there is demonstrated that The
concentration of the enzima is going to affect always the formation of the product, as well
as also if one possesses a major concentration of substratum the speed of the reaction it
increases, generating more rapid the product and in case of the inhibiting ones it does not
have relation with the product but these affect the speed of the reaction.
 1. Resultados y discusión
- ACCIÓN DE LA CATALASA (PAPA)
Para dar inicio a la práctica en primer lugar, se determinó la
acción de la catalasa en cuatro muestras diferentes que
contenían papa cruda y papa cocida en pequeños trozos con
H2O2 y H2O, ya que la catalasa se encuentra en las células
de tejidos vegetales. La función en los tejidos es necesaria
porque durante el metabolismo celular, se forma
una molécula toxica que es el PEROXIDO DE
HIDROGENO. A partir de esto se busca hallar la acción de
la catalasa presente en la papa.
La papa contiene la enzima llamada catalasa (del tipo
oxidorreductasas), esta es un potente antioxidante que puede
catalizar la conversión de peróxido de hidrógeno en agua y
oxígeno. Al combinar en cada tubo estos dos elementos se
produce una reacción que separa el agua del oxígeno:
1 y las enzimas son sensibles a altos cambios de
𝐻2 𝑂2 (𝑙) → 𝐻2 𝑂(𝑙) + 𝑂2 (𝑔)
2
Ecuación 1. Reacción redox de Peróxido de hidrógeno
Tubo N° Volúmenes+ pedazo de
papa
1 1mL H2O2
2 1mL H2O
3 1mL H2O2
4 1mL H2O
Tabla 1.
Tubo 1
En donde se usó papa con el peróxido de hidrogeno
se observó la producción de espuma, esto se debe a
que la enzima llamada catalasa, cataliza la
descomposición del peróxido de hidrógeno (H202).
Las burbujas o espuma que se producen en este tipo
de reacciones enzimáticas son básicamente oxígeno
que se desprende de la reacción entre las moléculas
de peróxido de hidrógeno y la enzima catalasa, que
la degrada en agua y oxígeno molecular que se
libera en forma de gas (Simmons, M. 2017). Es
decir que en la papa en contacto con el peróxido de
hidrogeno la enzima genera la catálisis.
Tubo 2
En donde se agregó agua en contacto con el pedacito
de papa no se generó ningún efecto. No se generó
espuma, por el efecto que genera el pH del agua
destilada, Cada enzima realiza su acción dentro de
un determinado intervalo de pH, dentro de este
intervalo habrá un pH óptimo donde la actividad
enzimática será máxima. Por debajo del pH mínimo
o por encima del pH máximo el enzima se inactiva
ya que se desnaturaliza. En la mayoría de las
enzimas el pH óptimo está próximo a la neutralidad,
aunque hay excepciones. (Campbell, N. Reece,
J.2005) esto debido a que el pH de la catalasa es de
7,6 y el del agua destilada pH 8,3 (Fernández, J.
1973) esto disminuirá la actividad de la enzima es
decir la acción de la catalasa, cuando esta se
encuentra en contacto con el agua destilada.
Tubo 3-4
El pedacito de papa cocida en contacto con el
peróxido de hidrogeno y la papa cocida con agua no
se presentó ningún cambio; Esto se debe a que como
la papa se colocó a altas temperaturas para cocinarla
temperatura. Los aumentos de temperatura aceleran
las reacciones químicas: por cada 10ºC de
incremento, la velocidad de reacción se duplica. Las
reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley
general. Sin embargo, al ser proteínas o
carbohidratos, a partir de cierta temperatura, se
empiezan a desnaturalizar por el calor. La
temperatura a la cual la actividad catalítica es
máxima se llama temperatura óptima, por encima
de esta temperatura, el aumento de velocidad de la
reacción debido a la temperatura es contrarrestado
por la pérdida de actividad catalítica debida a la
desnaturalización térmica, y la actividad enzimática
decrece rápidamente hasta anularse. (Campbell, N.
Reece, J.2005)
- ACCIÓN DE LA CATALASA
(HABICHUELA)
Preparación de la enzima (catalasa) a partir de la
habichuela.
Las habichuelas son una fuente de cobre. Este mineral es
necesario para la producción de lysyl oxidase, una enzima
que trabaja a favor de la elasticidad de los vasos sanguíneos,
los huesos y las articulaciones. El cobre, a su vez, en
conjunto con el manganeso produce una enzima llamada
Superoxide dismutase (catalasa), la cual elimina los
radicales libres que se producen al interior de la mitocondria
(la fábrica de producción de energía al interior de nuestras
células). (Reardon, J.2003).
En esta parte, se estudiarán algunos de los factores que
influyen en la actividad de una enzima como lo es el efecto
del pH, la concentración de la enzima y del sustrato, así
como efectos de inhibidores de la misma. Para ello se
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titularán las soluciones preparadas en diferentes tubos de
ensayo.
• Efecto del PH en la actividad enzimática
Para analizar el efecto del pH en la actividad enzimática se
tituló con permanganato las soluciones a diferentes ph con
el fin de encontrar el valor en cual la catalasa tiene una mejor
acción catalítica.
En la tabla 2 se muestran los volúmenes empleados en cada
titulación, el pH óptimo se eligió teniendo en cuenta el
menor volumen gastado de permanganato.
Vol. Titulación
Tubo pH (mL)
1 4 15,5
2 5 14,1
3 6 14,1
4 7 14,1
5 8 14,8
Blanco 14,7
Tabla 2. Efecto del pH en la actividad enzimática
El pH influye en la actividad de la enzima ya que cualquier
cambio brusco de este puede alterar el carácter iónico de los
grupos amino y carboxilo en la superficie proteica afectando
así las propiedades catalíticas de la enzima. Un pH muy alto
(disminución radicales básicos ionizables) o muy bajo
(disminución de radicales ácidos ionizables) puede producir
la desnaturalización de las enzimas y como consecuencia su
inactivación.
• Efecto de la concentración de la enzima
Tubo N° Volumen titulante ml
1 3,15
2 0,2
3 2,2
4 2,6
Blanco 3,4
Tabla 3. Efecto de la concentración de la enzima
Para el efecto de la concentración se usó el buffer de fosfatos
pH 6, peróxido de hidrógeno, la enzima a volúmenes
ascendentes, ácido sulfúrico quien ayuda a desnaturalizar la
enzima y facilita la identificación de la concentración de la
enzima ya que en medio ácido el permanganato se reduce y
efectúa el cambio de color que determinará el fin de la
titulación. Sabiendo que la concentración del KMnO4 es de
0,005M, teniendo los volúmenes para cada titulación y los
adicionados de enzima se puede determinar la concentración
empleando la siguiente ecuación:
𝐶1 𝑉1
𝑉1 𝐶1 = 𝑉2 𝐶2 → 𝐶2 =
𝑉2
Ecuación 2. Determinación de concentración o volumen
desconocido.
Para este caso, V1 corresponde al volumen de KMnO4 y C1
de su concentración. V2 es el volumen de enzima y C2 su
concentración. El proceso matemático fue empleado en los
cinco valores obtenidos experimentalmente, los resultados
se resumen en la Tabla 3 mostrada anteriormente.
La velocidad de reacción es directamente proporcional a la
concentración de la enzima siempre y cuando haya un
sustrato al cual unirse, cuando todo el sustrato está adherido,
la reacción desacelera ya que no hay nada a lo que las
enzimas adicionales se puedan unir. Teniendo en cuenta los
datos obtenidos se puede decir que el Tubo 1 obtuvo una
mayor velocidad de reacción en comparación a los otros
tubos, el tubo 3 es el de velocidad más lenta
La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas, la medida de la velocidad puede
medirse con relativa facilidad ya que en la mayoría de los
casos no es necesario purificar o aislar la enzima, pero si se
debe hacer en condiciones óptimas de pH (por ello se elige
previamente le buffer de fosfatos), presencia de inhibidores
(que se estudiará más adelante) o cofactores. (Cinética
enzimática, 17 de febrero de 2010)
• Efecto de la concentración del sustrato
En este caso, se añadieron los mismos reactivos que en los
pasos anteriores con una variación, la enzima se adiciona a
un volumen igual (0,5ml) mientras que el sustrato (el
peróxido de hidrógeno) se agrega en volúmenes ascendentes
como se muestra en la Tabla 3, allí también se presenta el
volumen de titulante gastado en cada uno de los tubos.
Tubo N° H2O2 Ml Volumen titulante
ml
1 0,5 3,45
2 1,0 8,80
3 1,5 8,20
4 2,0 9,20
Blanco 2,0 11,8
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Tabla 4. Efecto de la concentracion del sustrato en hielo de diferentes mascas y se realizo un blanco y una solucio
patron, la primer titulacion que se realize fue el blanco el
Cuando hay una mayor cantidad de moléculas de sustrato cual contenia 1ml de ácido acético y 5 ml de agua destilada,
habrá más sustancias que pueden unirse a la enzima en la segunda titulacion el cual corresponde a la solución
aumentando así la velocidad de la reacción, pero solo hasta patron, contenía solución patron de ácido ascórbico y 1ml
de ácido acético, por ultimo, se titulo las muestras de
cierto punto ya que cuando todas las enzimas se han diferentes mascar en el erlenmeyer se le añadió
adherido al sustrato, cualquier aumento de este no tendrá aproximadamente 0,5g de la muestra 4 ml de agua destilada
efecto porque las enzimas disponibles estarán saturadas y y 1 ml de ácido acético
trabajando a su máxima capacidad. El efecto de la Para determinar la cantidad de vitamina C que se encontraba
concentración de la enzima y del sustrato tienen efectos en el medicamento se tomaron los pesos que se pueden ver
similares. en la tabla
• Efecto de inhibidores sobre la actividad De las muestras se peso aproximadamente 0,5g de cada una
en la table 6 se puede obervar el valor que se tomo en la
enzimática practica. La reacción entre el colorante y el ácido ascórbico
se observa en la Ilustración 2.
Volumen Titulante
T. De ensayo NaCN(gotas) (mL) Muestra Peso (g)
MK 0,516 g
1 5 11
ECAR 0,510 g
2 10 10,3
VICAL 0,514 g
3 10 10,50 Tabla 7. Peso de la pastilla de vitamina C
Blanco ---- 11,8

Tabla 5. Efecto o accion de la catalasa

Los iones de cianuro previenen la producción de ATP a

través de la respiración aeróbica, provocando la muerte
final. Se une a un sitio alostérico en el citocromo oxidasa,
una molécula portadora que forma parte de la cadena de
transporte de electrones. Al cambiar la forma del sitio Ilustracion 1. Reacción ácido ascórbico y 2,6-
activo, el citocromo oxidasa ya no puede pasar electrones al diclorofenolindofenol.
aceptor final (oxígeno). Por lo tanto, la cadena de transporte
de electrones no puede seguir funcionando y el ATP no se Para realizar el cálculo correspondiente se realizó una
titulación a un blanco, una solución patrón de ácido
produce a través de la respiración aeróbica ascórbico y a una solución que contenía los 0,5g de la
muestra de vitamina C.
• Medicamento-Vitamina C
La fórmula para determinar el contenido de Vitamina C en
Muestra Volumen titulacion una muestra es:
Blanco 0,1ml
Solucion patron 0,3 ml
MK 0,7 ml
ECAR 0,6 ml Siendo; T el volumen titulado para la muestra problema, Pt
el volumen titulado para la solución patrón y BI el volumen
VICAL 0,5 ml titulado para el blanco.

Tabla 6. Volúmenes de titulante 2,6-

diclorofenolindofenol

En la práctica de cuantificacion de vitamina C se realize

la cuantificación por titulación con 2,6-
diclorofenoloindofenol, para lo cual se usaron tresmuestras
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3. Referencias bibliográficas.

• CAMPBELL, N., REECE, & J. (2005). Biología.

Ed. Panamericana (Argentina).

• SIMMONS, M. (2017). Principios de

bioquímica médica. Ed. Elsevier (España).

• FERNÁNDEZ, J. (1973).
Investigación de sistemas químicos.
Ed. Reverté S.A (Mexico).
Se obtuvo que de las tres muestras la que mas tiene
contenido de ácido ascórbico es la pastilla de MK con • REARDON, J. (2003). North Carolina
2,06mg/ 100ml. Department of Agriculture. Estados
Unidos.
2. Conclusiones:
1. La papa cocida no genera ninguna acción catalítica,
ya que al agregar el agua y el peróxido de hidrogeno
no se generan efectos.
2. La generación de espuma en una muestra se genera
porque la enzima cataliza la descomposición del
peróxido de hidrógeno (H202) en oxígeno y agua.
3. La papa cocida daña la enzima, ya que estas son
sensibles a altas temperaturas, pH por ende no se da
la acción catalítica de la enzima.
4. El pH y la temperatura afectan la catálisis de la
enzima catalasa tanto en la papa como en la
habichuela.
5. La concentración del producto es afectada por la
concentración de la enzima, ya que esta procesa
cierta cantidad de sustrato y por ende la formación
del producto no se daría en su totalidad.
6. A mayor concentración de sustrato el producto se
forma de manera más rápida, debido a que el
producto es el sustrato transformado.
7. Los inhibidores afectan la velocidad de las
reacciones entre la enzima y el sustrato, generando
que se retarde la formación del producto.
8. La vitamina C es imprescindible, es esencial para
mantener la función el organismo estable junto con
su componente el ácido ascórbico que es el
encargado de cicatrización de tejidos y formación
de colágeno.
9. De las tres tres pastillas la de mayor contenido de ácido
ascórbico es la MK con 2,06mg/ 100ml.
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