TALLER LABORATORIO BACTERIOLOGIA GENERAL

ELABORADO POR:
KIMBERLY DAYANA GOMEZ RAMIREZ C.C. 1004967180
HENRY EDUARDO ZAPATA SANTAMARIA C.C. 1000781627 Fecha: 01/06/2020
LAURA ISABEL MEJIA ZAMBRANO CC. 1124867328

DETERMINACIÓN DE ENZIMAS BACTERIANAS

PRUEBA SUSTRATO TECNICA DE ENZIMA PRODUCTO REVELADOR FUNDAMENTO LECTURA E CONTROLES

/MEDIO DE SIEMBRA Y INTERPRETACIÓN
CULTIVO CONDICIONES
DE
INCUBACIÓN
CATALASA Peróxido de Con un palillo, Catalasa O2 y Agua No se usa La catalasa es una POSITIVO/NEGATIV POSITIVO:
Hidrógeno 3% transferir enzima que O Staphylococcu
células de otra descompone el La bacteria produce la s sp.
colonia a la Peróxido de enzima catalasa
superficie del Hidrógeno (H2O2) degradando el NEGATIVO:
portaobjeto. en Oxígeno y agua. peróxido de hidrógeno Streptococcus
Añadir 1-2 en Oxígeno y agua sp.
gotas de
peróxido de
Hidrógeno al
3% y mezclar
COAGULASA Plasma Se toman 0,5 ml coagulasa Fibrina y coagulos No se usa Es una enzima Positivo(coagula) POSITIVO:
humano de plasma producida por S. Al observar grumos o Staphylococcu
recolectado humano en un aureus capaz de coagulos en la muestra s aureus
con EDTA tubo estéril, se transformar el hasta en la mínima
adicionan 2-3 fibrinógeno en cantidad representa NEGATIVO:
colonias, se fibrina, provocando presencia de la Staphylococcu
mezcla e incuba la formación de enzima. s epidermidis
a 37C. coágulos en un
sistema analítico.
OXIDASA hemoproteína se añade unas oxidasa Agua y compuestos diclorohidrato Esta enzima oxida Positivo: POSITIVO:
s que con gotas del oxidados de p- el reactivo desarrollan en Pseudomonas
hierro reactivo de fenilendiamina fenilendiamina segundos un intenso sp.
(citocromos) oxidasa, o en . gracias a la color azul-violeta en el
O tiras, discos o presencia de sitio del extendido NEGATIVO:
Compuestos pastillas oxigeno y Escherichia coli
reducidos comerciales el citocromo es negativo:
impregnados hemoproteína con incolora
con reactivos, hierro y son el
en seco. último eslabón de la
cadena respiratorio
aerobia,
transfiriendo
electrones con
formación de agua.
HEMOLISINA Glóbulos Se realiza hemolisina Hemolisis Presencia de La hemólisis es un Alfa: se observa una POSITIVO:
S Rojos/Agar siembra por Y destrucción de hemolisis total fenómeno de lisis coloración de verde a Staphylococcu
Sangre agotamiento en eritrocitos o media o de eritrocitos que se marrón. s aureus
Agar sangre. ausencia de la observa cuando Beta: se observa una (beta)
Incubar a 37°C misma. algunas cepas se zona clara traslúcida
por 24 horas. siembran en Agar alrededor de la Streptococcus
sangre causado por colonia. pneumoniae.
enzimas llamadas Gamma: no presenta (alfa)
hemolisinas hemolisis
UREASA Urea/Medio o Se siembra por Ureasa. Amoniaco, CO2 y Colorantes La ureasa es una Positivo: POSITIVO:
Caldo de Urea estría en la agua indicadores de enzima que poseen color fucsia en el Klebsiella
superficie pH como rojo muchas especies medio por pH pneumoniae,
fenol de Proteus sp.
microorganismos negativo:
que pueden color amarillo- NEGATIVO:
hidrolizar la urea anaranjado en el Escherichia coli
produciendo medio por pH
amoníaco, CO2 y
agua.
AMILASA Almidón/Medio Sembrar 2 Amilasa. glucosa Lugol de Gram Las amilasas son Positivo: POSITIVO:
de Almidón estrías de una enzimas producidas Bacillus cereus.
 colonia de un por algunas Se ve una zona clara
cultivo axénico bacterias capaces adyacente al NEGATIVO:
del de hidrolizar el crecimiento bacteriano Pseudomonas
microorganism almidón para aeruginosa
o en una caja producir glucosa. Negativo:
de Agar Se ve un color azul
almidón y oscuro al formar un
incubar complejo con el yodo
DNAsa DNA/Medio Sembrar a partir Desoxirribonucleas desoxirribonucleas ácido Microorganismos positivo/negativo POSITIVO:
DNAsa de un cultivo a a clorhídrico productores de Staphylococcu
joven (DNAsa) desoxirribonucleas según presente zona s aureus,
realizando un a hidrolizarán el clara alrededor del Serratia
cuadrado o una ADN presente en el crecimiento. (HALO) marcescens.
estría de los medio de cultivo,
organismos a característica que NEGATIVO:
prueba ayuda a la Escherichia
identificación de coli.
microorganismos

GELATINASA gelatina Sembrar por gelatinasa Aminoácidos y No se usa La capacidad de Positivo/negativo. POSITIVO:
punción a una polipéptidos ciertas bacterias Staphylococcu
profundidad para producir Los microorganismos s aureus,
aproximada de enzimas hacen licuefacción de Serratia
2 cm en estado proteolíticas de tipo forma lenta dando marcescens,
sólido. gelatinasa se como positivo. Pseudomonas
detecta por la aeruginosa.
capacidad de
digerir o licuar la NEGATIVO:
gelatina presente Escherichia coli
en el medio de
cultivo.
 METABOLISMO BACTERIANO: UTILIZACIÓN DE FUENTES DE CARBONO, NITRÓGENO Y AZUFRE

Siembra y Carbohidrato(s Aminoácido Fuente Indicador Revelador(es Fundamento Lectura Interpretación

condiciones ) de prueba s de prueba de S de pH )
de incubación
TEST O-F Se utilizan dos Glucosa Ninguno Ninguno Azul de Ninguno Se usa para determinar si Oxidación (O) Si el tubo sin
tubos con el bromotimol las bacterias usan los Amarillo (A)
aceite es
mismo azúcar, carbohidratos por la vía Verde (-)
amarillo, y el que
se siembran oxidativa o fermentativa. Pseudomona tiene aceite da
por picadura aeruginosa verde, significa
hasta el fondo, Fermentación que es una
a uno de los (F) bacteria
tubos se le (anaerogénica) oxidadora.
adiciona 1 ml Amarillo (A)
Si el tubo sin
de aceite Amarillo (A)
aceite da
mineral. Se Enterobacterias amarillo y el que
incuba a 37C Fermentación tiene aceite
por 24 h (F) (aerogénica)también,
Amarillo (AG)significa que
Amarillo (AG)tiene un
Enterobacterias metabolismo
Ni fermentación,fermentativo.
Ni oxidaciónSi ambos tubos
Azul o verde (-)son verdes,
Verde (-) significa que el
microorganismo
no utiliza el
carbohidrato por
ninguna vía
metabólica.
CALDO ROJO Inocular el Glucosa, lactosa Ninguno Ninguno Rojo de Ninguno El rojo de metili es un Color del tubo: Si hay
DE FENOL caldo de Rojo fenol indicador de pH con un Resultado fermentación del
de Fenol con rango entre 6 (amarillo) y Microorganismo carbohidrato el
una colonia de 4.4 (rojo). El pH al cual el Amarillo - caldo tornara de
un cultivo rojo. Y determina la Klebsiella, color amarillo, y
axénico del capacidad de un Enterobacter, puede o no
microorganismo para Serratia Rojo + observarse gas
 Microorganism degradar un carbohidrato Escherichia coli en forma de
o en estudio. específico incorporado en y otras burbujas.
Incubar 24-48 un medio basal y producir Enterobacterias Si no,
horas a 37oC. ácido o ácido con gas + positivo, - desarrollara un
Inocular el visible. negativo. color rojo o
medio rosado.
realizando
siembra mixta
del
microorganism
o en estudio.
Incubar a 37oC
por 24 horas.
TSI Inocular el Glucosa, lactosa Ninguno Sulfato Rojo de Ninguno Es una prueba usada para A/A A/A: la bacteria
medio y sacarosa de hierro fenol observar la fermentación K/A fermenta
realizando de la glucosa, lactosa y K/K glucosa, lactosa
siembra mixta Sacarosa y la producción H2S +,++,+++ y sacarosa
del de H2S por parte de la Gas +,++,+++ K/A: la bacteria
microorganism bacteria. El cambio de solo fermenta la
o en estudio. color rojo glucosa
Incubar a 37oC Anaranjado inicial del K/k: la bacteria
por 24 horas medio a amarillo indica no fermenta
fermentación. ninguno de los 3
Si el cambio de color solo azucares
ocurre en el fondo, es
porque se fermento la
glucosa. Si se fermentan
los 3 azucares habrá
cambio en todo el medio.
La presencia de burbujas
que rompen el medio y a
veces tienden a expulsarlo
Indica presencia de gas
como producto final de la
fermentación.
La producción de H2S se
manifiesta por la aparición
 de un precipitado color
negro debido
a la reducción de la sal de
hierro presente en el
medio.
LIA Inocular Glucosa Ninguno tiosulfato Púrpura de No tiene Es un medio que sirve K/K K/K:
realizando sódico bromocreso para demostrar la K/A Descarboxilacio
siembra mixta l producción de dos R/A n de Lisina.
(con doble enzimas: la
picadura) a lisina descarboxilasa y la K/A:
partir de una lisina desaminasa, Descarboxilacio
colonia de además la presencia de n negativa,
un cultivo sales de hierro sirve Fermentación de
axénico del para detecta la producción Glucosa.
microorganism de H2S por algunos
o en estudio. microorganismos R/A:
Incubar 24 entéricos. Desaminacion
horas a 37ºC. La descarboxilación de la de Lisina,
lisina ocurre en ambiente Fermentación de
anaeróbico, o sea en el Lisina.
fondo del tubo
y se pone de manifiesto H2S +:
por la alcalinización del Precipitado de
medio produciendo un color negro.
viraje del indicador
púrpura de bromocresol. H2S - : Ausencia
La presencia de glucosa de precipitado
en los componentes del de color negro.
LIA determina primero una
reacción de fermentación,
produciendo acidificación
y cambio de color del
medio a amarillo y el pH
favorable para la reacción
de descarboxilación que
ocurre
 después, volviendo a su
color violeta original el
fondo del tubo.
SIM Se siembra por No contiene triptofano Tiosulfat No tiene Reactivo de El indol, es uno de los Sin lectura H2S +:
picadura hasta o de kovac´s productos de la Precipitado de
la mitad del sodio degradación metabólica color negro.
tubo se incuba del
a 37C por 24h aminoácido triptófano. Las H2S - : Ausencia
bacterias que poseen la de precipitado
enzima triptofanasa son de color negro.
capaces de
hidrolizar y desaminar el INDOL +: Rojo
triptófano con producción
de indol, ácido pirúvico y
amoníaco.
La prueba de indol está
basada en la formación de
un complejo rojo cuando
el indol
reacciona con el grupo
aldehído p-
dimetilaminobenzaldehído
. Este es el principio activo
del reactivo de Kovac’s.
Este medio sirve para
comprobar la formación
de H2S a partir del
tiosulfato y
las sales de hierro
incluidas en el medio. La
formación de H2S se hace
evidente por un
precipitado negro
correspondiente a sulfuro
ferroso. El medio es
bastante sensible para la
 detección ya que permite
emplear las dos vías para
producir H2S.
RM-.VP(ROJO Se siembra por Glucosa Ninguno No No tiene Rojo de Metilo Determinar la capacidad Sin lectura Positivo: Rojo
DE METILO) emulsión y se contiene de un microorganismo
incuba a 37C para producir y mantener Negativo:
por 24 horas estables los Amarillo
productos terminales
ácidos de la fermentación
de la glucosa y vencer la
capacidad
amortiguadora del
sistema. La prueba de
Rojo de Metilo es
cuantitativa para la
producción
de ácido y requiere que
los microorganismos
produzcan ácidos fuertes
a partir de glucosa,
de forma que el pH del
medio descienda a menos
de 4.4. Esta distinción
puede hacerse a
través del indicador Rojo
de metilo, que presenta
color amarillo por encima
de un pH de
5.1 y sólo presenta color
rojo cuando el pH
desciende a 4.4.
RM-VP Inocular el Glucosa Pluripeptona No No tiene Alfa naftol Determinar la capacidad Prueba voges Positivo: color
(VOGES caldo e incubar (peptona de contiene KOH 40% de algunas bacterias de positiva Prueba rojo a los 15
PROSKAWER) a 37º C por 24 caseína generar un producto final voges negativa minutos de
horas neutro (acetoina y 2,3 añadir los
butanodiol) a partir de la reactivos
fermentación de la reveladores por
 glucosa. Los productos la presencia de
neutros formados en acetoina.
presencia de oxigeno Negativa: color
atmosférico, álcalis cobrizo
(hidróxido de potasio al
40%) y peptonas, se
oxidan en diacetilo,
reactante para el color
producido en la reacción.
UREA Sembrar por No contiene urea No Rojo de No tiene Determinar que M.O Ureasa positiva Ureasa positiva:
estría el contiene fenol degradan la urea gracias a Ureasa negativa se hidroliza la
microorganism la enzima ureasa urea y el medio
o en estudio. formando amoniaco y cambia a color
En el medio dioxido de carbono el rosado fuerte
líquido amoniaco reacciona con Ureasa
sembrarlo por el rojo fenol y hace que el Negativa: no se
emulsión. medio cambie de color hidroliza la urea
Incubar a 37°C anaranjado a rosa fuerte. y el medio
por 24 horas mantiene su
color amarillo.
CITRATO Se siembra por citrato Fosfato No Azul de No tiene Diferenciación de Positiva, Positiva: color
estría y se monoamónic contiene bromotimol microorganismos por su negativa azul intenso en
incuba a 37º C o capacidad de usar citrato 24-48 horas y
por 24 horas como única fuente de revela que el
carbono y energía microorganismo
en estudio ha
sido capaz de
utilizar el citrato
en el medio con
la formación de
productos
alcalinos.
La prueba
también es
positiva en
ausencia de
color azul si
 existe
crecimiento del
microorganismo
a lo largo de la
estría de
inoculación.
MALONATO Inocular 1-2 Malonato Sulfato de No tiene Azul de No tiene es una sal orgánica que es Positiva azul, Positiva: el
asadas en el amonio bromotimol utilizada por las bacterias negativa no medio cambia de
caldo de una como única fuente de cambia de color color a azul
colonia en carbono con formación de significa que usa
estudio e productos alcalinos que se el malonato
incubar a 37º C evidencia por un viraje de como fuente de
por 24 h verde a azul del indicador carbono
del medio, azul de negativa: el
bromotimol. medio no cambia
Diferencia Enterobacter y de color lo que
Escherichia coli basado significa que usa
en el uso de malonato. el malonato
como fuente de
carbono
FENILALANIN Suspender 23 g No contiene Fenilalanina Ninguno No tiene. Cloruro ferrico La fenilalanina es un Escherichia coli La inmediata
A del polvo en un aminoácido que por – Proteus + aparición de un
litro de agua desaminación forma un color verde
purificada , cetoácido, el ácido intenso indica la
dejar reposar 5 fenilpirúvico. La prueba se presencia de
minutos, basa en la detección del ácido
calentar con ácido fenilpirúvico en el fenilpirúvico y
agitación medio, tras el desarrollo una prueba
frecuente y del microorganismo en positiva. Un
llevar a estudio. La prueba es color amarillo en
ebullición hasta positiva si aparece un el sitio de
disolución color verde visible por inoculación,
total.Distribuir adición de una solución de indica una
en tubos y cloruro férrico al 10%. prueba negativa.
esterilizar en
autoclave a
121° C durante
 15 minutos.
Enfriar y
solidificar en
posición
inclinada para
obtener picos
de flauta
alargados
CALDO Inocular el No contiene Nitrato Acido Zinc Ninguno La capacidad de un Ej
NITRATOS medio de potasico sulfúrico microorganismo de .Microorganism El desarrollo de
nitrato e reducir nitratos a nitritos o Resultado un color rojo
incubar por 24 es una Pseudomonas después de
horas a 37ºc Característica importante aeruginosa + añadir el
utilizada para la Enterococcus reactivo, indica
identificación y faecalis - la presencia de
diferenciación de especies nitritos y
de muchos grupos de representa una
microorganismos. prueba positiva.
Los microorganismos que La ausencia de
reducen los nitratos tienen color tras el
la capacidad de obtener agregado
oxígeno de los nitratos del reactivo
para formar nitritos. La puede indicar
presencia de nitritos se que los nitratos
detecta en el medio, no han sido
añadiendo el reactivo de reducidos, o que
Griess-Ilovays, con la han sido
formación de un colorante Reducido
rojo de diazonio. s a productos
distintos de los
nitritos, como
amoníaco,
nitrógeno
molecular u
óxido nitroso e
hidroxilamina.
Por lo tanto es
necesario añadir
una pequeña
cantidad de
polvo de zinc a
todas las
reacciones
negativas. Los
iones de zinc
reducen los
nitratos a nitritos
y el desarrollo de
un color rojo tras
agregar polvo de
zinc indica la
presencia de
nitratos
residuales y
confirma la
reacción
negativa
verdadera.
Si no hay
cambio de color,
luego de agregar
el polvo de zinc
indica que los
nitratos fueron
reducidos a
otros
compuestos
como amoniaco,
nitrógeno
molecular óxido
nitroso e
hidroxilamina.