Año del Bicentenario del Perú: 200 años de Independencia

FACULTAD DE INGENIERÍA Y GESTIÓN

ESCUELA ACADÉMICA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

LABORATORIO N° 03

CURSO: Ecotoxicología

INTEGRANTES: Espinoza Chavez, Meriam Margot

Martinez Valenzuela, Elizabeth Yolanda
Perez Ale, Kevin Eduardo
Quiquia Arias, Betzabe Evelyn
Sandoval Shuña, Dyck Berening
Torres Urquia, Bonny Estefanny
Veliz Rojas, Sandra Brigitte

CICLO DE ESTUDIOS: VI

DOCENTE: Dr. José Alfonso Apesteguía Infantes

2021
 PRACTICA N° 3

DETERMINACIÓN DE LA DL50 ORAL POR EL MÉTODO DE LAS CLASES

TÓXICAS AGUDAS

INTRODUCCIÓN

La toxicidad aguda determina la clasificación de los efectos adversos de una sustancia durante
un periodo próximo a las 24 horas. El método emplea 3 dosis fijas, separadas de forma
conveniente para la clasificación del compuesto a partir de los resultados del estudio.

En estos ensayos se determinará la DL50, es decir, la dosis a las que mueren el 50% de las
especies de experimentación. Para este ensayo se usan 2 grupos por cada etapa, uno de machos
y uno de hembras, con 3 animales en cada uno. Se comienza administrando la dosis letal más
tóxica (5mg/kg) en hembras. Si se observa que mueren dos o tres, la sustancia se clasifica en
la clase 1. En caso de que muera uno o ninguno, el experimento se realiza en machos con la
misma dosis. Si mueren dos o tres, la sustancia se introduce dentro de la clase 1, si muere uno
o ninguno, se repite el experimento con otras tres hembras y la dosis siguiente (50 mg/kg). De
esta forma, se clasificará la sustancia según los resultados observados con las diferentes dosis.

OBJETIVOS

Clasificar la sustancia utilizando el método de las clases tóxicas agudas - OCDE 423, cuya
aplicación se realizará en 3 grupos de ratas nulíparas.

MATERIALES

● 3 ratas
● Sustancia: Estricnina
● Guantes
● Mascarillas
● Libreta de anotaciones.
● Cronómetro

PROCEDIMIENTO

1. Selección de la especie animal

Se trabajarán con 3 ratas nulíparas entre 8 y 12 semanas que tengan un peso de

aproximadamente 200 a 250 gramos.

2. Condiciones de almacenamiento.
 Se mantendrán las ratas a una temperatura ambiente de 22ºC +/-3°C. Y humedad
relativa de aproximadamente 30% a 70%
3. Preparación de animales

Seleccionar al azar las ratas por jaula, que no pasen de 5. Y dejarlas entre 5 a 7 días.

4. Preparación de la dosis

Se debe tener en consideración que las ratas pueden mantener como máximo 5 mL de
líquido en su estómago.
● Administración de la dosis
Hasta las 24 horas (preferible en una sola toma).
● Se prepararon 4 niveles de dosis:
5 mg/kg, 50 mg/kg ,300 mg/kg y 2000 mg/kg.

5. Se insertará la sonda gástrica y/o la cánula a las ratas según con las dosis respectivas
por cada rata.

6. Observación y descripción de las reacciones tóxicas que le ocurren a las ratas y tomar
el tiempo en que mueren.

I. CÁLCULOS

Para la dosis de 5mg/kg (DL50)

5mg → 1000g =1kg Peso de las ratas:

X → 250g 250g aprox.
X= 1.25 mg

100mg → 100ml Concentración de la

1.25 mg → X Sust.conocida : 100 mg %
X= 1.25mL

Para esta dosis se utilizará 1.25ml de estricnina.

Se aplicará la misma dosis para las tres ratas.

➔ DATOS - EXPERIMENTALES
En la presente experiencia se obtuvieron los siguientes datos:
 RATA N° 01

Signos 10 seg

Temblor 15 seg

Convulsión 21 seg

Letargia 25 seg

Sueño 30 seg

Coma 65 seg

Muerte 123 seg

RATA N° 02

Signos 12 seg

Temblor 16 seg

Convulsión 18 seg

Letargia 26 seg

Sueño 35 seg

Coma 70 seg

Muerte 180 seg

RATA N° 03

Signos 14 seg

Temblor 15 seg

Convulsión 17 seg

Letargia 28 seg

Sueño 33 seg

Coma 74 seg

Muerte 150 seg

 II. RESULTADOS

● Las ratas mueren a partir de los 3 minutos de exposición a la estricnina.

● Previo a la muerte presentan síntomas de asfixia y convulsiones.
● Se observa rigidez en las patas de las ratas.

III. DISCUSIÓN

● Las ratas mueren con rapidez, lo cual indica que la sustancia es altamente tóxica.
● Se determina que la sustancia Estricnina es de DL50 oral de 5 mg/kg.
● La estricnina evita que haya rotura a nivel cerebral de las ratas ya que inhibe la
glicina.
● La estricnina causa muerte por asfixia.
● Debido a su toxicidad puede ser utilizada como plaguicida.

IV. CONCLUSIONES

● La eficacia de la estricnina se debe a su carácter convulsionante y estimulador

del sistema nervioso central.
● La estricnina es de eficacia rápida debido a que demora un aproximado de 5
minutos en provocar la muerte de las ratas.

V. ANEXOS

Figura 01. Reacción de la Estricnina durante el primer minuto de digestión.

VI. RECOMENDACIONES
 ● Utilizar adecuadamente los equipos de protección personal debido a que se están
manipulando sustancias tóxicas.
● Tratar con cuidado a las ratas ya que pueden morder.
● Utilizar guantes en todo momento de la experimentación.
● De preferencia grabar la experimentación para un adecuado control del tiempo
de exposición a la sustancia.

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

❖ Centro de Información sobre Desastres y Salud. (2021). Retrieved 9 May 2021, from
http://cidbimena.desastres.hn/pdf/spa/doc13777/doc13777-2e.pdf
❖ Ferrer, A. (2003). Intoxicación por plaguicidas. In Anales del sistema sanitario de
Navarra (Vol. 26, pp. 155-171). Gobierno de Navarra. Departamento de Salud.
❖ Gobernación Chacabuco. (2021). Retrieved 9 May 2021, from
http://www.gobernacionchacabuco.gov.cl/filesapp/Toxico.pdf.pdf
❖ Guerrero, J. (1985). Toxicidad de los plaguicidas, su desconocimiento y un manejo
irresponsable puede tener graves consecuencias. Investigación y Progreso
Agropecuario Carillanca.
❖ Sanz Tejedor, A. (2021). Química Orgánica Industrial. Retrieved 9 May 2021, from
https://www.eii.uva.es/organica/qoi/tema-12.php
❖ SCCS. The sccs's notes of guidance for the testing of cosmetic th substances and their
safety evaluation. 8 revision 11 december 2012.
❖ S.R.L., E. (n.d.). Clasificación toxicológica de plaguicidas. Retrieved from
https://entolux.com/page.php?id=16

VIDEO
https://www.youtube.com/watch?v=y5l3YSFwWxo

CUESTIONARIO

1. Indique Ud. 5 sustancias con DL50 oral de 5 mg/Kg

Sustancias con DL50 oral de 5 mg/Kg en ratas:

● Picrotoxina
● Aflatoxina B1
● Cloruro de mercurio
● Cianuro de sodio
● Estricnina

2. Indique Ud. 5 sustancias con DL50 oral de 50 mg/Kg

Sustancias con DL50 oral de 50 mg/Kg en ratas:

 ● Metanfetamina
● Nicotina
● Fluoruro de sodio
● Capsaicina
● Compuestos a base de Arsénico

3. Indique Ud. 5 sustancias con DL50 oral de 300 mg/Kg

Sustancias con DL50 oral de 300 mg/Kg en ratas:

● 2,4-D amina
● Oxicloruro de cobre
● Clorpirifos
● Pentaclorofenol
● Carbaryl

4. Indique Ud. 5 sustancias con DL50 oral de 2000 mg/Kg.

Sustancias con DL50 oral de 2000 mg/Kg en ratas:

● Deltametrina
● Hidrametilnona
● Azametiphos
● Pirimifos metil
● Permetrina

5. Indique Ud. El mecanismo de acción bioquímico (toxicodinamia) de la estricnina.

El mecanismo de acción de la estricnina es la acción de forma primordial sobre la
médula espinal, aumentado su excitabilidad refleja de la cual derivan síntomas más o
menos característicos de esta intoxicación.
la estricnina, que a pequeñas dosis tiene un efecto terapéutico, a dosis mayores produce
manifestaciones tóxicas evidentes
la estricnina produce:
● sobreaguda
● dosis letal 1 mg/kg
● latencia de 1 hora
● muerte en una 3 hora (promedio)
● signos: hipertonía, ataxia, hiperreflexia
● muerte por asfixia
● convulsiones tónicas-opistótonos

6. Cómo realizaría la administración de una dosis de 300 mg/Kg de estricnina en una

rata de 222 g, para lo cual contamos con una solución de 300 mg%.
Cálculos
300mg --- 100 g
x------------222 g
 X= 666 mg
Para 300 mg%
300 mg ----- 100 ml
666 mg ----- x
X= 222 ml
7. Indique Ud. y haga un resumen de un ensayo de determinación de dosis letal 50
dérmica aguda según la OECD.
Estos requisitos se han de exigir para todos los plaguicidas agrícolas a registrarse,
tomando en consideración los criterios de gradualidad y especificidad, indicados y
establecidos por la ANC.

Toxicidad Dérmica:

● Se deben reportar conjuntamente con la DL50 Dermal otros parámetros

relevantes observados durante la prueba.

Aplicabilidad:

● Procede cuando existe el riesgo potencial de contaminación por inhalación o

contacto.

Métodos:

● Preferentemente cualquiera de los métodos indicados.

● Estudio de toxicidad dérmica con dosis repetidas 21/28 días Guía OECD 410
(mayo de 1981).
● Estudios de toxicidad subcrónica, dosis repetida noventa (90) días vía dérmica,
Guía OECD 411 (mayo de 1981).
● Guía OECD 402 de Febrero 1987 para estudios toxicológicos: DL50 dermal. UE
B.3 Métodos para determinación de DL50 dermal.

8. Indique Ud. y haga un resumen de un ensayo de determinación de dosis letal 50

inhalatoria aguda según la OECD.

Los ensayos de toxicidad aguda describen los efectos adversos para la salud después de
una única aplicación del producto según la vía de administración; oral, dérmica o
inhalatoria. Durante muchos años se llevó a cabo un ensayo que permitía la
determinación de la dosis que provoca la muerte de la mitad de los animales expuestos
(DL) 50 descrito en las guías de trabajo de la OECD (OECD 401).

Principales ensayos para la evaluación de toxicidad in vivo donde ahí se encuentran los
estudios de Toxicidad por vía inhalatoria (OCDE 403) en el cual consiste evaluar y
estimar las propiedades tóxicas de gases, volátiles, aerosoles y materias particuladas.
Donde las condiciones para ser realizadas son la siguientes. 10 animales (5M +5H), 3
 niveles de concentración, Tiempo de exposición < 4 horas, Observación 14 días,
Examen clínico dos veces al día, luego los animales son analizados por daños y muerte.

El siguiente estudio por vía inhalatoria - Procedimiento de la contracción fija (OCDE

433) consiste en evaluar y estimar las propiedades tóxicas de gases, volátiles, aerosoles
y materias particuladas para luego clasificar el producto, teniendo en cuenta las
siguientes condiciones. 5 animales (solo un sexo), concentraciones fijas dependiendo
de si es vapor, gas o polvo, tiempo de exposición < 4 horas, Observación 14 días,
Examen clínico dos veces al día, Luego son analizados por daños y muerte.

Debido al excesivo número de animales que se utilizaban, este ensayo se sustituye por
otros tres procedimientos que utilizan menos animales, con la idea de aplicar la R de
Reducción dentro del concepto de 3Rs. Estos métodos son: el ensayo de la dosis fija
(OECD 420), el ensayo clásico de clase toxicidad aguda (OECD 423) que permite
calcular un valor aproximado de dosis letal y el método Up & Down (OECD 425) que
así mismo permite una estimación del valor de DL. 50.

9. Indique que otras instituciones científicas cuentan con técnicas para la

determinación de la DL50 oral, inhalatoria y dérmica agudas.

● Servicio Nacional de Sanidad y Calidad de la Salud

● PAHO - Organización Panamericana de la salinidad