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Bio-utilización de desechos de fabricación de queso (polvo de suero de queso) para bioetanol y especi fi c
producción de producto (ácido galactónico) a través de un bioproceso de dos pasos

Xin Zhou un , si , C , Xia Hua un , si , C , Lu Huang un , si , C , Yong Xu un , si , C , •

un Centro de Innovación Jiangsu de E ffi Procesamiento y utilización de recursos forestales, Universidad Forestal de Nanjing, Nanjing 210037, Gente ' s República de China
si Colegio de Ingeniería Química, Universidad Forestal de Nanjing, Nanjing 210037, Gente ' s República de China
C Provincia de Jiangsu Laboratorio clave de combustibles y productos químicos a base de biomasa verde, Nanjing 210037, personas ' s República de China

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO RESUMEN

Palabras clave: El suero de queso, producido a partir de la coagulación de la leche durante la fabricación del queso, es un contaminante ambiental importante. El
Suero de queso en polvo (CWP) Etanol componente más abundante en el suero de queso es la lactosa, que es un recurso potencial para varios productos químicos de valor agregado. Aquí, un
bioproceso de dos pasos usando Saccharomyces cerevisiae y Gluconobacter oxydans bioconvertir suero de queso en etanol y ácido galactónico fue fi primero
Ácido galactónico
propuesto. Primero, la lactosa en el suero de queso en polvo se pretrató con β- galactosidasa para obtener glucosa y galactosa. Posteriormente, la glucosa
Gluconobacter oxydans (G. oxydans)
fue fermentada selectivamente a etanol por S. cerevisiae para permitir G. oxydans- biooxidación mediada de galactosa a ácido galactónico. Finalmente, se
Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae)
produjeron aproximadamente 110 g de etanol, 320 g de galactonato y 150 g de proteína mixta (proteína residual de suero de leche y proteína celular) a partir
de 1 kg de CWP. Estos resultados sugieren métodos alternativos para el manejo del suero de queso, que pueden reducir su impacto en el medio ambiente y
dar como resultado la producción de productos bioquímicos de valor agregado.

1. Introducción
La fabricación de queso produce grandes volúmenes de aguas residuales, de las cuales el
suero de queso es el principal subproducto después de la precipitación y eliminación de la caseína
de la leche durante la producción de queso. Con el aumento en la producción de queso, el volumen
de aguas residuales producidas en la industria de fabricación de queso ha aumentado. Actualmente,
la producción mundial total de suero de queso se estima en aproximadamente
2015 ) Al ser un producto de desecho, el suero posee ventajas sobre la materia prima de fermentación
relacionada con los alimentos, como el maíz y la yuca. Por lo tanto, los estudios sobre la conversión del
suero de queso en productos económicamente viables de valor agregado siguen aumentando. El suero
de queso en polvo (CWP) es una forma concentrada de suero de queso con ventajas considerables
como sustrato, como volumen reducido, contenido concentrado de lactosa, estabilidad a largo plazo,
fácil almacenamiento y transporte ( Kargi y Ozmihci, 2006; Ozmihci y Kargi, 2007 ) Por lo tanto,
utilizamos CWP para experimentos posteriores en este estudio.

1,8 - 1.9 × 10 8 toneladas por año ( Baldasso et al., 2011 ) El suero de queso típico contiene
principalmente lactosa (4.5 - 5.0% p / v), proteínas solubles (0.6 - 1.0% p / v), lípidos (0.4 - 0,5% p / v) y
sales minerales (6 - 10% de extracto seco) ( Siso, 1996 ) Hasta ahora, la eliminación del suero de
queso todavía se considera un problema difícil para la protección del medio ambiente debido a su
alto contenido orgánico (lactosa y proteína residual). Las emisiones de suero de queso pueden
conducir al consumo excesivo de oxígeno y la eutrofización. Hoy en día, el suero de queso, una
materia prima de bajo costo, se está utilizando como sustrato para diversos procesos microbianos /
enzimáticos para obtener productos finales valiosos como bioetanol, alimento para animales,
bioproteína (proteína de una sola célula), ácidos orgánicos, enzimas, gomas biológicas,
exopolisacáridos y bioplásticos ( Kosseva et al., 2009; Prazeres et al., 2012; Panesar et al., 2013;
Schultz et al., 2006; Venetsaneas et al., 2009; Yadav y col.
Dado que la lactosa, un ingrediente importante del suero de queso, es un disacárido que no se
puede fermentar fácilmente ( Mawson, 1994 ), por lo tanto, la hidrólisis de lactosa se realiza antes de
la fermentación en ciertos casos. Como los microorganismos no pueden hidrolizar la lactosa, a veces
se usan tratamientos ácidos o enzimáticos para la hidrólisis de la lactosa en sus componentes de
monosacáridos, glucosa y galactosa. La hidrólisis ácida requiere el uso de alta concentración de
ácido (pH <1.5) y temperatura ( ≥ 150 ° C) ( Sungur e Yildirim, 1999; Guimarães et al., 2010 ) Además,
la hidrólisis ácida puede provocar desnaturalización de proteínas, agregar un proceso de
desmineralización, profundizar el color debido a la reacción de Maillard y formar subproductos
indeseables ( Siso, 1996 ) Por lo tanto, se prefiere la hidrólisis enzimática para la hidrólisis de lactosa ( Regenhardt

• Autor para correspondencia en: Facultad de Ingeniería Química, Universidad Forestal de Nanjing, No. 159 Longpan Road, Nanjing 210037, Personas ' s República de China.

Dirección de correo electrónico: 1030731413@qq.com (Y. Xu).

https://doi.org/10.1016/j.biortech.2018.10.001
Recibido el 28 de agosto de 2018; Recibido en forma revisada el 29 de septiembre de 2018; Aceptado el 1 de octubre de 2018

Disponible en línea el 02 de octubre de 2018

0960-8524 / © 2018 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

X. Zhou y col.
et al., 2013 ) β- La galactosidasa, que se usa más comúnmente en la industria alimentaria, puede ff Hidrolizar2.3. Preparación de inóculos y fermentaciones.
efectivamente la lactosa en glucosa y galactosa ( Chanalia et al., 2018 ), que puede utilizarse
posteriormente. Aunque, la lactosa en CWP puede ser e ffi cientificamente bioconvertido en etanol ( Kargi
y Ozmihci, 2006 ), el valor del etanol es notablemente más bajo que el de otros bioquímicos de valor
agregado, como los ácidos de azúcar. Recientemente, los ácidos de azúcar han llamado la atención
debido a sus posibles aplicaciones económicas en las industrias farmacéutica, alimentaria,
cosmética y de la construcción ( Chun et al., 2006; Werpy y Petersen, 2004 ) La glucosa y la galactosa
de la lactosa pueden fermentarse en ácidos aldónicos (ácido glucónico y ácido galactónico), que son
valiosas materias primas ( Dowdells et al., 2010; Toivari et al., 2012; Zhou et al., 2018 ) El ácido
glucónico como ácido aldónico bien conocido ya se ha utilizado ampliamente en la industria, y su
demanda aumenta constantemente más de 60,000 toneladas por año ( Sauer et al., 2008; Toivari et
al., 2012 ) El ácido galactónico, un ácido de azúcar, es químicamente similar al ácido glucónico y, por
lo tanto, tiene el potencial de usarse en una variedad de aplicaciones similares, como en acidulantes
de alimentos, edulcorantes, intermedios farmacéuticos, dispersión y retardador de pozos de petróleo
( Ramachandran et al., 2006 ) Hasta ahora, el éxito comercial de la producción de ácido glucónico /
gluconato por biocatálisis ya ha promovido el desarrollo de otros ácidos azucarados ( Dowdells et al.,
2010; Taraboulsi et al., 2011 ) Gluconobacter oxydans (G. oxydans) se ha informado que puede e ffi Biooxidar
la glucosa y la galactosa en ácido glucónico y ácido galactónico ( Deppenmeier et al., 2002; Prust et
al., 2005; Š vitel y Š Turdík, 1994; Zhou et al., 2018 ) Aunque la glucosa y la galactosa pueden
convertirse en ácidos de azúcar correspondientes durante G. oxydans- fermentación mediada, el
ácido glucónico se metaboliza fácilmente en ácidos cetónicos, que son di ffi culto a separarse del
producto mezclado. Por lo tanto, en este estudio, propusimos un bioproceso de dos pasos para la
coproducción de etanol y ácido galactónico a partir de CWP como materia prima, lo que podría
impulsar una mayor explotación de lactosa de suero como materia prima de fermentación. Para
mejorar el rendimiento económico y simplificar el proceso, fermentamos selectivamente glucosa a
etanol a través de la represión del catabolito de carbono de
Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), que se eliminó y cosechó fácilmente por destilación ( Gancedo, de la fermentación de galactosa se ajustó mediante la adición de 5% de NH 3 · H 2 O. La densidad de
1998 ) A continuación, utilizamos G. oxydans para biooxidación incompleta de galactosa a ácido
galactónico. Usando esta estrategia, los productos objetivo fueron relativamente fáciles de separar de
la solución, lo que beneficiará fi t futuros estudios sobre la aplicación de ácido galactónico.
2. Materiales y métodos
2.1. Mantenimiento de microorganismos
Gluconobacter oxydans NL71 ( G. oxydans NL71), originario de la cepa ATCC 621, se mantuvo
en sorbitol - placas de agar (sorbitol 50 g / L, extracto de levadura 5 g / L, agar 15 g / L) a 4 ° C ( Miao
et al., 2015 )
S. cerevisiae proporcionado por el instituto de investigación de ingeniería bioquímica de la
Universidad Forestal de Nanjing, se mantuvo en glucosa - placas de agar (glucosa, 10 g / L; peptona, 5 g
/ L; extracto de levadura, 5 g / L y agar 15 g / L) a 4 ° C.
2.2. Hidrólisis enzimática de suero de queso en polvo
La empresa Hengwei (Henan, China) suministró suero de queso en polvo (CWP), que incluía
70.0% de lactosa, 11.0% de proteínas, 7.2% de humedad y 4.0% de cenizas. La hidrólisis enzimática
de la lactosa en glucosa y galactosa se realizó en un biorreactor de 3 L (New Brunswick Gelligen
115, Eppendorf Company, Nueva Jersey, EE. UU.) Que contenía una solución de 1,0 L a 55 ° C y
100 rpm durante 72 h. Ensayos con una carga sólida del 20% (p / v) y una dosis de enzima de 10 U g -
1 sustrato Aquí, β-
galactosidasa ≥ 2600 unidades / g) se produjo por fermentación sumergida de una cepa seleccionada
de la levadura Kluyveromyces lactis de Sigma (G3665). Después de la hidrólisis enzimática, se
utilizaron hidrolizados enzimáticos CWP para experimentos de fermentación.
71
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2.3.1. Fermentación por G. oxydans
El inóculo de G. oxydans NL71 se preparó en agitador Erlenmeyer de 250 ml fl preguntar que
contiene 50 ml de medio (sorbitol 50 g / L, extracto de levadura 5 g / L) y cultivado durante 24 - 36 ha
200 rpm y 30 ° C. El medio de fermentación (g / L) estaba compuesto de extracto de levadura (1.0),
MgSO 4 ( 0.1), K 2 HPO 4 ( 2.0) y (NH 4) 2 ENTONCES 4 ( 1.0), y el pH se controló mediante la adición de 5%
de NH 3 · H 2 O ( Zhou et al., 2018 ) La fermentación se realizó en agitador Erlenmeyer de 250 ml. fl pide
que contenga 50 ml de medio de simulación o hidrolizados de CWP y se cultive a 200 rpm y 30 ° C.
Además, la densidad de inicial G. oxydans el inóculo celular fue de 2 g / l (peso seco). El contenido de
la fuente de carbono en el medio de simulación fue (g /
L): glucosa (65) y galactosa (65). El medio de fermentación utilizado para verificar el e ff ect de etanol
y S. cerevisiae contenía 65 g / L y 80 g / L de galactosa, respectivamente.
2.3.2. Fermentación por S. cerevisiae
El inóculo de S. cerevisiae fue preparado en agitador Erlenmeyer de 250 ml fl preguntar que
contiene 50 ml de medio (glucosa 20 g / L, peptona, 10 g /
L y extracto de levadura, 10 g / L), y se cultivaron durante 24 ha 150 rpm y 30 ° C. La fermentación
usando simulación o medio de hidrolizados se realizó a 30 ° C en Erlenmeyer 250 ml. fl pregunta con
50 ml de medio que contiene (g / L): MgSO 4 ( 0.1), ZnCl 2 ( 0.1), CaCl 2 ( 0.1), extracto de levadura (1.0) y
(NH 4) 2 ENTONCES 4 ( 1.0) La densidad de los inóculos iniciales fue de 1 - 8 g /
L. La solución se incubó en un agitador rotatorio a 150 rpm. El contenido de la fuente de carbono en
el medio de simulación fue (g / L): glucosa (65) y galactosa (65).
2.3.3. Fermentación secuencial
El medio de fermentación secuencial contenía (g / L): MgSO 4 ( 0.1),
ZnCl 2 ( 0.1), CaCl 2 ( 0.1), extracto de levadura (1.0), K 2 HPO 4 ( 2.0) y (NH 4) 2 ENTONCES 4 ( 1.0), y el pH
los inóculos fue de 1 g / L de peso seco de S. cerevisiae y 2 g / L de peso seco de G. oxydans NL71,
respectivamente, y se inocularon secuencialmente en un agitador Erlenmeyer de 500 ml. fl preguntar
que contiene 100 ml de medio. Primero, la fermentación de etanol se realizó a 150 rpm y 30 ° C;
cuando se consumió glucosa, el etanol se eliminó por destilación en un evaporador rotativo BÜCHI
(R-
200, BÜCHI Shanghai Trading LLC, Shanghai, China) a 70 ° C y
1.60 × 10 4 4 Pa. Segundo, el experimento de fermentación de galactosa se realizó a 200 rpm y 30 °
C.
2.4. Determinación de azúcares, metabolitos de interés y subproductos.
El contenido de proteína se determinó mediante el método Kjeldahl ( William, 1980 ) La
concentración de etanol se estimó mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) (Agilent
1260) equipada con una columna Aminex Bio-Rad HPX-87H con 5 mmol / LH 2 ENTONCES 4 4 a 0.6 ml
/ min como la fase móvil. La galactosa, la glucosa, el ácido glucónico, el ácido galactónico y el ácido
2-cetoglucónico (2-KGA) se analizaron en cromatografía de intercambio aniónico de alto rendimiento
(Dionex ICS-5000) vinculada a un CarboPac ™ Columna PA 200 con NaOH y acetato de sodio como
eluyentes y un
fl velocidad de flujo de 0.25 ml / min. El rendimiento de la hidrólisis enzimática se calculó a partir de la
glucosa y la galactosa liberadas dividido por el contenido inicial de lactosa en CWP; El rendimiento
de los ácidos glucónico / galactónico se calculó a partir de la producción final de los ácidos glucónico
/ galactónico dividido por el contenido inicial de galactosa y multiplicado por la constante de
0.918, que es el factor de conversión de glucosa / galactosa a ácidos glucónicos / galactónicos
equivalentes basado en el equilibrio estequiométrico. Los resultados fueron valores medios de tres
determinaciones.
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Glucosa y galactosa (g / L)
90120150
Lactosa (g / L)

60 80100

30 40 60

0 0 20
00 12 24 36 48 60 60 72

Tiempo (h)

Lactosa Glucosa Galactosa

Figura 1. Curso temporal de la concentración de glucosa y galactosa después de 72 h de hidrólisis

Figura 2. Fermentación simultánea de glucosa y galactosa utilizando G. oxydans.
enzimática.

el ácido glucónico y el ácido galactónico fueron di ffi culto a lograr. En el proceso de fermentación, el

3. Resultados y discusión
contenido de células viables al inicio del cultivo fue de 1,03 g de biomasa por litro, que aumentó
progresivamente, alcanzando 3,61 g / L de biomasa en 36 h. Eso ' s indicó que se usó
3.1. Hidrólisis enzimática de CWP
aproximadamente 5% de glucosa para el crecimiento de G. oxydans célula. Y el rendimiento de
2-KGA fue solo del 60%. Ese ' Es decir, varios subproductos (como 2,5-KGA, datos no mostrados) se
CWP fue hidrolizado por β- galactosidasa a una concentración de sustrato del 20% a 55 ° C y
produjeron y coexistieron con productos objetivo. Sin embargo, los productos químicos de valor
100 rpm durante 72 h. Como se muestra en Figura 1 , la hidrólisis procedió rápidamente al principio y
agregado (2-KGA y ácido galactónico) podrían producirse simultáneamente, separación y puri fi El
disminuyó gradualmente. El rendimiento de hidrólisis a las 72 h alcanzó el 93,9% con las
catión de estos productos fue un desafío debido a la naturaleza complicada de los subproductos. Por
correspondientes concentraciones de glucosa y galactosa de 68,8 g / ly 67,1 g / l, respectivamente.
lo tanto, elegimos fermentar glucosa a etanol, que es fácil de separar del caldo. Posteriormente, la
Los resultados mostraron que CWP era un material atractivo para generar glucosa y galactosa
separación del ácido galactónico y la proteína es relativamente fácil. Mientras tanto, para reducir la
debido a su alto contenido de lactosa. Los resultados mostraron que solo cosechamos 58.8 g / L de
formación de subproductos y mejorar la pureza y el rendimiento del ácido galactónico de los
glucosa y 58.3 g / L de galactosa a las 36 h, el rendimiento de hidrólisis de lactosa correspondiente a
hidrolizados enzimáticos CWP, introdujimos S. cerevisiae en el sistema para fermentar glucosa a
las 36 h fue solo del 82.3%. El rendimiento de hidrólisis a las 48 h alcanzó el 91,7% con una
etanol, que puede aplicarse en las industrias alimentaria, farmacéutica y cosmética y también como
concentración de glucosa correspondiente de 65,1 g / L y una concentración de galactosa de
un combustible alternativo respetuoso con el medio ambiente.

64,3 g / l. En general, no hubo mucho di ff diferencia en el rendimiento de glucosa y galactosa a las 48

hy 72 h. Por lo tanto, 48 h de hidrólisis enzimática fue económicamente más factible y adecuada para
la hidrólisis enzimática a gran escala, lo que también redujo el costo de producción. Además,
aproximadamente el 11% de proteína del CWP original permaneció en solución, que se puede
extraer como proteína de alimentación. 3.3. Fermentación simultánea de galactosa y glucosa usando S. cerevisiae

S. cerevisiae es ampliamente utilizado en varios procesos industriales, que implican la

3.2. Fermentación simultánea de galactosa y glucosa utilizando G. oxydans
G. oxydans, Una bacteria aerobia gramnegativa y obligada, se aplica ampliamente para oxidar
de manera incompleta diversos azúcares y alcoholes de azúcar. Investigación preliminar de la
fermentación simultánea de glucosa y galactosa utilizando G. oxydans se realizó en medio de
simulación (la relación de concentración fue similar a la de los hidrolizados enzimáticos que
contenían 65 g / L de glucosa y 65 g / L de galactosa). Como se muestra en Figura 2 , reveló que G.
oxydans fue capaz de convertir glucosa y galactosa en los correspondientes ácidos de azúcar o
ácidos ceto-azúcar, y todos los azúcares se convirtieron completamente en ácidos en 48 h. Las
curvas del proceso de fermentación revelaron que la presencia de glucosa reprimía el metabolismo
de galactosa, en el que se utilizaba la glucosa. fi primero, seguido de galactosa. Allí, la glucosa era fi Primerometabolismo de la glucosa y la galactosa seguía un patrón diauxico, en el que la glucosa se
se transformó en ácido glucónico con un rendimiento del 91,1% (64,6 g / L) en 12 h. A partir de este
momento, los niveles de galactosa y ácido glucónico comenzaron a disminuir considerablemente
hasta las 36 h, mientras que los de ácido galactónico y ácido 2-cetoglucónico (2KGA) se generaron
simultáneamente. Después de 40 h de fermentación,
43,1 g / L de 2-KGA y 62,2 g / L de ácido galactónico se produjeron por separado a partir de la
oxidación de ácido glucónico y galactosa. La galactosa y los ácidos glucónicos se oxidaron
simultáneamente para producir hidrógeno reductor cuando se consumió glucosa. En una palabra, la
coproducción de
fermentación de etanol debido a su excelente capacidad de fermentación y alta tolerancia al etanol,
lo que permite la producción de hasta 20% (v / v) de etanol, y la posibilidad de utilizar su biomasa
como alimento para animales (proteína de célula única) que se puede coproducir con etanol), que es
importante para economizar el proceso industrial ( Antoni et al., 2007; Bai et al., 2008 ) El PRO fi archivos
de galactosa y glucosa que fueron fermentados simultáneamente por S. cerevisiae con di ff El
contenido diferente de la celda se muestra en
Fig. 3 (1 g / L, 2 g / L, 4 g / L y 8 g / L S. cerevisiae se cargaron por separado en el medio de
simulación que contiene 65 g / L de galactosa y 65 g / L de glucosa). Los resultados mostraron que S.
cerevisiae utilizó glucosa preferentemente sobre galactosa, mientras que la tasa de utilización de
galactosa fue comparativamente más lenta. Las curvas del proceso de fermentación revelaron que el
metabolizaba. fi primero, seguido de galactosa. Este fenómeno está relacionado con la represión del
catabolito de carbono (conocida como represión de la glucosa) ( Gancedo, 1998 ) En otras palabras,
cuando S. cerevisiae Se cultiva en un medio que contiene una mezcla de glucosa y otros azúcares
fermentables como galactosa y manosa, la presencia de glucosa reprimiría el metabolismo de otras
fuentes de carbono. Aunque todos los azúcares se consumieron por completo al final de la
fermentación, la galactosa comenzó a utilizarse cuando se consumió la mayor parte de la glucosa. La
glucosa se consume completa y rápidamente con mayor S. cerevisiae contenido celular; sin embargo,
la tasa de pérdida de galactosa también aumentó simultáneamente. Nosotros

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75
Inicial 1 g / L 75
Inicial 2 g / L

60 60

45 45

30 30
Concentración (g / L)

15 15

0 0
00 12 24 36 48 60 60 72 00 12 24 36 48 60 60 72
75 75

Inicial 4 g / L Inicial 8 g / L
60 60

45 45

30 30

15 15

0 0
00 12 24 36 48 60 60 72 00 12 24 36 48 60 60 72

Tiempo (h)

Glucosa Galactosa Etanol Biomasa

Fig. 3. Fermentación simultánea de glucosa y galactosa con di ff inóculo actual S. cerevisiae.

dedujo que la galactosa se usaría inevitablemente a una velocidad baja en presencia de glucosa.
Cuando inicial S. cerevisiae la concentración celular fue de 1 g / L, la cantidad de glucosa a las 36 h
fue inferior a 3 g / L, mientras que la de galactosa fue de 60,4 g / L. Además, la cantidad de etanol
acumulado fue de 22.1 g / L y S. cerevisiae la densidad celular fue de 5,41 g / l. En este caso, la
fermentación se puede detener manualmente cuando se consume glucosa, y el etanol se puede
separar fácilmente. Mientras tanto, la galactosa se puede conservar selectivamente en el caldo. En
general, los resultados demuestran que la fermentación de etanol por la represión de catabolitos de
carbono de S. cerevisiae Era un método factible y práctico para eliminar la glucosa. Al mismo tiempo,
la galactosa se conservó en el medio para la biotransformación aguas abajo en ácido galactónico.
oxidado a ácido acético a baja velocidad. En comparación con el control (solo 60 g / L de galactosa
como fuente de carbono sin carga de etanol), la producción de ácido galactónico fue mucho menor
en presencia de etanol. Cuando se cargaron 20 g / L de etanol en el medio, el e ffi competencia de G.
oxydans
la fermentación disminuyó, solo se utilizaron 20 g / L de galactosa y la producción máxima de ácido
galactónico fue de 18,6 g / L. Suponemos que el etanol o el ácido acético ejercen una e negativa ff ect
en la permeabilidad de la membrana celular o la vitalidad de la deshidrogenasa, que redujo el
rendimiento de bioconversión de G. oxydans. Por lo tanto, el etanol debe separarse del sistema de
biorreacción antes de la fermentación de galactosa.

La fermentación de etanol también aumenta la S. cerevisiae masa celular S.

3.4. Simulación de la producción de ácido galactónico a partir de una mezcla de glucosa y galactosa utilizando
G. oxydans
Según el resultado óptimo de la fermentación de etanol del medio de simulación, se acumularon
aproximadamente 60 g / L de galactosa, 20 g / L de etanol y 5 g / L de biomasa en el caldo de
fermentación. Estudios anteriores muestran que el etanol puede metabolizarse a ácido acético
mediante G. oxydans;
sin embargo, se ha informado que el etanol puede inhibir el rendimiento de bioconversión de G.
oxydans ( Gupta et al., 2001; Zhou et al., 2017 ) Zhou y col. informó que la producción de ácido
xilónico utilizando G. oxydans estaba restringido en presencia de etanol ( Zhou et al., 2017 ) Por lo
tanto, realizamos G. oxydans fermentación con 20 g / L de etanol y 60 g / L de galactosa (cantidades
iniciales). Como se muestra en Fig. 4 a, el rendimiento del metabolismo de galactosa se restringió
notablemente aunque el etanol fue
cerevisiae las células se pueden eliminar fácilmente por centrifugación o ultra fi ltración Sin embargo,
si S. cerevisiae las células no afectan el rendimiento de bioconversión de G. oxydans, solo el etanol
puede eliminarse por destilación, mientras que el S. cerevisiae Se puede permitir que las células
permanezcan en el sistema de fermentación, lo que simplificará los pasos de procesamiento y
reducirá el costo de producción. Finalmente, S. cerevisiae y G. oxydans Las células pueden extraerse
simultáneamente como proteína celular. Cuando la mayoría del etanol se destiló del caldo de
fermentación, el caldo se concentró a aproximadamente 3/4 de su volumen original en un evaporador
rotativo, después de lo cual la concentración de galactosa y biomasa aumentó a 82.6 g / L y
7,1 g / l, respectivamente. además, el S. cerevisiae Las células se inactivaron después del proceso de
destilación. Por lo tanto, para evaluar la e ff ect de células inactivadas en la productividad de G. oxydans- fermentación
mediada, 7 g / L inactivada S. cerevisiae Las células se cargaron en galactosa (80 g / L) como la única
fuente de carbono en el medio. Como se muestra en Fig. 4 b, experimentos con respecto a la e ff ect de S.
cerevisiae células en el rendimiento de fermentación indicado

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un 75 Destilación y concentración

80100
60

60 20

Concentración (g / L)

Biomasa total (g / L)
45
Concentración (g / L)

40 16
30

20 8 12
15

0 04

0 00 12 24 36 48 60 60 72 84
00 12 24 36 48 Tiempo (h)

Tiempo (h) Glucosa Etanol

Control de galactosa Control de ácido galactónico Galactosa Ácido galactónico Biomasa total

Etanol Ácido acético Galactosa Ácido galactónico

Fig.5. Fermentación en dos pasos usando S. cerevisiae y G. oxydans.

si
Evitar la reducción en la producción de ácido galactónico. Después de la coproducción de etanol y ácido
galactónico por fermentación en dos etapas, que fue fi En primer lugar, una cantidad notable de proteína
80100
(proteína celular del crecimiento de S. cerevisiae y G. oxydans) podría obtenerse simultáneamente
mediante el proceso de secado por pulverización, que puede mejorar aún más la utilización de los
recursos ( Guimarães et al., 2010 )
60
Concentración (g / L)

3.5. Bioproceso de dos pasos con S. cerevisiae, G. oxydans e hidrolizados de CWP

40

20 En nuestro estudio anterior, la glucosa era e ffi transformado cientificamente en etanol por S.

cerevisiae y la galactosa fue oxidada a ácido galactónico por
G. oxydans. El CWP, que normalmente contiene signi fi Cantidades pequeñas de lactosa, fueron
0 hidrolizadas con éxito en glucosa y galactosa por β-
00 12 24 36 48 tratamiento con galactosidasa. Por lo tanto, en un intento de obtener ácido galactónico de CWP, el
Tiempo (h) enfoque de fermentación en dos pasos usando S. cerevisiae y

Control de galactosa Galactosa G. oxydans se realizó con los hidrolizados enzimáticos de CWP como sustrato de partida. En este

Control de ácido galactónico Ácido galactónico estudio, se liberaron aproximadamente 330 g de glucosa y galactosa en fracciones líquidas
(hidrolizados) después de la hidrólisis enzimática de 1 kg de CWP. Los resultados detallados del
Fig.4. Evaluación de la e ff ect de etanol e inactivado S. cerevisiae célula en fermentación de galactosa.
experimento sobre hidrolizados enzimáticos se muestran en Fig. 5 . La glucosa se consumió en 40 hy
(a) Investigado e ff ect de etanol para G. oxydans con 60 g / L de contenido inicial de galactosa; (b)
se produjo 23,8 g / L de etanol mediante una concentración inicial de 1 g / L de S. cerevisiae. Observablemente,
investigado e ff ect de inactivado S. cerevisiae celda para G. oxydans con 80 g / L de contenido inicial de
la tasa de utilización de glucosa disminuyó ligeramente, lo que podría deberse a la baja regulación de
galactosa. Control: sin etanol (a) e inactivado S. cerevisiae celda (b).

S. cerevisiae rendimiento por los hidrolizados complejos. Sin embargo,

que el rendimiento de bioconversión de G. oxydans fue un poco un ff efectuado, y el mayor
Se preservaron 64.8 g / L de galactosa para la siguiente ronda de biocatálisis por
rendimiento de ácido galactónico fue del 94,3% en 36 h, que difirió mínimamente del control (solo 80
G. oxydans. Los resultados indicaron que el fi La concentración de etanol y galactosa fue ligeramente
g / L de galactosa como fuente de carbono sin inactivar S. cerevisiae carga de celdas). Así, S.
superior al nivel del experimento de simulación. Y encontramos que la lactosa restante del proceso
cerevisiae células negativamente un ff Afectó solo a la productividad volumétrica general, que mostró
de hidrólisis enzimática se degradó gradualmente junto con la utilización de glucosa. En el fi primer
una leve disminución. Razonamos que la densidad de la S. cerevisiae la suspensión aumentó la
paso de fermentación, S. cerevisiae se cargó directamente en los hidrolizados enzimáticos que no se
viscosidad del medio, lo que disminuyó la cantidad de oxígeno disuelto, impidiendo así el crecimiento
habían esterilizado ni eliminado β- galactosidasa Por lo tanto, concluimos que el aumento de la fi La
de G. oxydans, como señal de bacteria aeróbica obligada fi depende del suministro de oxígeno para la
concentración final de etanol y galactosa se derivó de la hidrólisis de lactosa. De todas formas,
supervivencia o el metabolismo. Por lo tanto, el rendimiento de bioconversión de G. oxydans fue
restringido En otras palabras, inactivado S. cerevisiae las células regularon ligeramente el rendimiento
de bioconversión de G. oxydans. Por lo tanto, decidimos realizar una fermentación en dos pasos, que
El 92,9% de etanol se destiló y recicló después de la destilación. Mientras tanto, inactivado S.
implica la fermentación de etanol por S. cerevisiae seguido de destilación para eliminar el etanol,
cerevisiae las células y la galactosa se concentraron a 7,42 g / ly 84,8 g / l, respectivamente, y se
mientras que S. cerevisiae las células permanecieron en el sistema, y ​luego la bioconversión de la
retuvieron en el destilado de destilación. En resumen, se podrían cosechar aproximadamente 110 g
galactosa restante en el caldo a ácido galactónico por G. oxydans. Además, es digno de mención que
de etanol por S. cerevisiae fermentación y posterior destilación, además, quedaron 305 g de
el ácido galactónico también se puede metabolizar a ácido cetogalactónico cuando la galactosa se
galactosa en el destilado de destilación que se usó para la siguiente producción de ácido galactónico.
consumió por completo durante G. oxydans fermentación. Por lo tanto, la biorreacción de G. oxydans debe
detenerse a tiempo para

En segundo lugar, 2 g / l G. oxydans se agregó para la conversión de galactosa y detuvimos

manualmente la biorreacción en 84 h. Observamos que el rendimiento de bioconversión de G.
oxydans También se vio ligeramente afectado por la composición complicada y la mayor viscosidad
de la solución, y el

74
X. Zhou y col.
Fig.6. Principales pasos en la bioconversión de CWP.
El mayor rendimiento de ácido galactónico fue inferior al obtenido en la fermentación del medio de
simulación. Finalmente, se produjeron 84,2 g / L de ácido galactónico con un rendimiento del 91,8% y
biomasa total (inactivada S. cerevisiae células y G. oxydans) alcanzó 11.1 g / L. Aunque el bioproceso
de dos pasos no logró el rendimiento deseado de ácido galactónico, todavía proporcionó una
metodología simple para bioproducir ácido galactónico a partir de CWP. Después fi Al filtrar el caldo de
ácido galactónico, la resina 335 básica de intercambio aniónico débil se usó para purificar y acidificar
sincrónicamente el ácido galactónico con una tasa de recuperación de hasta el 95% ( Hua et al., 2018 )
Por otra parte, Zhou et al. informó que el galactonato de calcio es solo ligeramente soluble en agua y
se cristaliza fácilmente ( Zhou et al., 2018 ), que puede ser un método alternativo para puri de ácido
galactónico fi catión y separación. Los pasos principales se describen en Fig. 6 . En total, obtuvimos
aproximadamente 110 g de etanol y 320 g de galactonato a partir de 1 kg de CWP después de la
hidrólisis enzimática y la fermentación en dos etapas. Después de la separación del ácido
galactónico, la mezcla de proteína de suero de queso residual y proteína de las células se puede
cosechar mediante secado por pulverización. Aproximadamente 150 g de proteína mixta (contiene
8.0% de humedad) se cosecharon adicionalmente, lo que puede usarse potencialmente como
proteína de alimentación. En resumen, las características centrales de este método permitirán la
coproducción de etanol, ácido galactónico y proteínas a partir de desechos de fabricación de queso.
Además, desarrollamos una estrategia para obtener ácido galactónico relativamente puro, lo que
beneficiaría fi t estudios posteriores sobre la posible aplicación del ácido galactónico.
4. Conclusiones
El suero de queso, un recurso rico en lactosa, es cada vez más reconocido como una fuente de
productos de valor agregado. Llegamos a la conclusión de que una fermentación de dos pasos, que
implica la fermentación de etanol por S. cerevisiae seguido de fermentación de ácido galactónico por G.
oxydans, CWP bioconvertido con éxito en bioetanol y ácido galactónico. Además, una cierta cantidad
de proteína mixta (proteína residual de suero de leche y proteína celular) se puede cosechar
adicionalmente después de S. cerevisiae y G. oxydans fermentación. La fermentación microbiana es
una alternativa interesante para la biorremediación de CWP y las características clave de este
bioproceso pueden ser útiles para e ffi Utilización eficiente e integral de CWP.
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Bioresource Technology 272 (2019) 70–76
Agradecimientos
La investigación fue apoyada por el Programa clave de investigación y desarrollo de Jiangsu,
People ' s República de China (BE2015758), y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China,
People ' s República de China (31370573).
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