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BREVE HISTORIA DE RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR

La RMN en materiales a granel fue informada por primera vez en 1946 por Bloch, Hansen y
Packard en Stanford (1) y por Purcell, Torrey y Pound en Harvard (2). En 1952 se reconoció la
importancia de su descubrimiento cuando se otorgó el Premio Nobel de Física a Bloch y Purcell. En
los últimos 40 años, la espectroscopia de RMN se ha convertido en una herramienta importante en
química analítica, un método valioso para estudiar fenómenos físicos desde la cinética hasta la
superconductividad, una técnica en biología estructural que compite con la cristalografía de rayos
X, un procedimiento de rutina para la obtención de imágenes en radiología diagnóstica. una forma
de estudiar la función metabólica en humanos y animales, y un método en evolución en la ciencia
de los materiales, las mejoras continuas en los instrumentos y técnicas de RMN están fomentando
nuevas e importantes aplicaciones.

En este INFORME se analiza el desarrollo general de la RMN y algunos de los principales hitos de
su historia. En el espacio limitado disponible, no puedo ser exhaustivo al presentar el tema ni dar
crédito a todos los investigadores que han sido pioneros en los avances en los métodos y
aplicaciones de RMN a la física, la química, la biología y otras ciencias. He incluido nombres de
unas 40-50 personas para personalizar la historia de la RMN, pero también se podrían haber
seleccionado muchos otros nombres. Se dan algunas referencias a publicaciones innovadoras,
pero muchas de las citas bibliográficas se refieren a libros o artículos de revisión. (Se prevé una
historia mucho más completa como parte de la Enciclopedia de RMN, que actualmente se está
preparando para su publicación en 1995 [3]). Aunque el desarrollo de la RMN es, por supuesto,
continuo, es útil dividir la historia en décadas,

Prehistoria: 1926-45

Los conceptos de espín del electrón y el momento magnético del electrón se habían establecido
firmemente a principios de la década de 1920 por una serie de estudios, especialmente el
experimento de Stern-Gerlach, en el que los haces de átomos se separaron en un campo
magnético no homogéneo de acuerdo con la orientación de el momento magnético del electrón. A
mediados de la década de 1920, se hizo evidente que muchas características de los espectros
atómicos sólo podían explicarse si ciertos núcleos atómicos poseían igualmente un giro y un
momento magnético. Los refinamientos del experimento de Stern-Gerlach verificaron este
concepto en 1933.

En 1939 Rabi et al. (4) hizo una mejora importante en las técnicas de haz al enviar una corriente de
moléculas de hidrógeno no solo a través del campo magnético no homogéneo requerido para la
deflexión, sino también a través de un campo magnético homogéneo, donde fueron sometidas a
energía electromagnética de radiofrecuencia (rf). La energía fue absorbida por las moléculas a una
frecuencia claramente definida, y la absorción provocó una pequeña pero medible desviación del
rayo. Esta fue la primera observación de RMN, y Rabi recibió el Premio Nobel en 1944. Sin
embargo, tales estudios se limitaron a núcleos en moléculas pequeñas a muy alto vacío en un haz
molecular, cuya desviación sirvió para detectar la resonancia

La contribución de los momentos magnéticos nucleares a la susceptibilidad magnética en masa se

había demostrado en 1937 para el hidrógeno a baja temperatura (alrededor de 2 K), pero este
enfoque tenía limitaciones (5). En 1936, Gorter intentó sin éxito observar la resonancia magnética
en el LiF sólido y otras sales inorgánicas detectando el calor producido cuando se absorbía la
energía de rf resonante. En 1942 volvió a intentarlo, esta vez buscando una dispersión anómala del
campo de radiofrecuencia (6). El fracaso de estos intentos se debió en gran parte a la
desafortunada elección de LiF, que tiene un largo tiempo de relajación, como muestra.

Década del descubrimiento: 1946-55

tomó un enfoque diferente. Sabía que, mediante la aplicación de energía de rf, la magnetización
nuclear macroscópica podría rotarse alejándose de su posición de equilibrio paralela al campo
magnético aplicado (Figura 1). A partir de las leyes de la física, sabía que esta magnetización
desplazada precesaría entonces alrededor del campo magnético a una frecuencia bien definida.
Bloch razonó que esta magnetización de precesión induciría una señal eléctrica en una bobina de
cobre colocada apropiadamente a esta frecuencia, que está en el rango de rf. Bloch, Hansen y
Packard (1) probaron el experimento con una muestra de agua. Funcionó y nació la RMN (o
inducción nuclear, como la llamó Bloch). Mientras tanto, Purcell, Torrey y Pound habían podido
medir directamente la pequeña absorción de energía rf por los momentos magnéticos del protón
en un bloque de parafina (2). Aunque su experimento fue bastante diferente al de Bloch, están
involucrados los mismos fenómenos y los dos enfoques funcionaron igualmente bien.
Curiosamente, Bloch y Purcell nunca se habían conocido en el momento en que aparecieron sus
periódicos, con solo unas semanas de diferencia. Los primeros días de la RMN deben haber sido
emocionantes: se aclararon los principios básicos y se exploraron las aplicaciones del nuevo
método. La construcción de imanes que fueran suficientemente homogéneos y estables para
permitir la observación de resonancias nucleares razonablemente estrechas en líquidos fue un
tour de force. Asimismo, se hizo un gran esfuerzo en el diseño y construcción de circuitos
electrónicos a partir de los componentes primitivos disponibles para detectar la señal débil de
RMN en presencia de ruido eléctrico inevitable generado térmicamente. El rápido desarrollo de la
RMN se debe en gran parte a la decisión inicial de Russell Varian de producir un sistema comercial
basado en un electroimán homogéneo. Los investigadores podían comprar un sistema básico y,
aunque podrían tener que modificarlo, no tenían que construir imanes y amplificadores desde
cero. Los primeros trabajos de Bloembergen, Purcell y Pound (7) explicaron los conceptos de
relajación nuclear y mostraron por qué las señales de RMN de los sólidos son órdenes de magnitud
más anchas que las de los líquidos, donde el rápido movimiento browniano molecular hace que las
interacciones dipolo-dipolo magnético nuclear promedien a cero. A medida que mejoraba la
homogeneidad del imán, las líneas de resonancia de los líquidos se volvían cada vez más estrechas,
lo que permitía una medición más precisa de las frecuencias de resonancia. Los investigadores
podían comprar un sistema básico y, aunque podrían tener que modificarlo, no tenían que
construir imanes y amplificadores desde cero. Los primeros trabajos de Bloembergen, Purcell y
Pound (7) explicaron los conceptos de relajación nuclear y mostraron por qué las señales de RMN
de los sólidos son órdenes de magnitud más anchas que las de los líquidos, donde el rápido
movimiento browniano molecular hace que las interacciones dipolo-dipolo magnético nuclear
promedien a cero. A medida que mejoraba la homogeneidad del imán, las líneas de resonancia de
los líquidos se volvían cada vez más estrechas, lo que permitía una medición más precisa de las
frecuencias de resonancia. Los investigadores podían comprar un sistema básico y, aunque
podrían tener que modificarlo, no tenían que construir imanes y amplificadores desde cero. Los
primeros trabajos de Bloembergen, Purcell y Pound (7) explicaron los conceptos de relajación
nuclear y mostraron por qué las señales de RMN de los sólidos son órdenes de magnitud más
anchas que las de los líquidos, donde el rápido movimiento browniano molecular hace que las
interacciones dipolo-dipolo magnético nuclear promedien a cero. A medida que mejoraba la
homogeneidad del imán, las líneas de resonancia de los líquidos se volvían cada vez más estrechas,
lo que permitía una medición más precisa de las frecuencias de resonancia. y Pound (7) explicaron
los conceptos de relajación nuclear y mostraron por qué las señales de RMN de los sólidos son
órdenes de magnitud más anchas que las de los líquidos, donde el movimiento browniano
molecular rápido hace que las interacciones dipolo-dipolo magnéticas nucleares promedien a cero.
A medida que mejoraba la homogeneidad del imán, las líneas de resonancia de los líquidos se
volvían cada vez más estrechas, lo que permitía una medición más precisa de las frecuencias de
resonancia. y Pound (7) explicaron los conceptos de relajación nuclear y mostraron por qué las
señales de RMN de los sólidos son órdenes de magnitud más anchas que las de los líquidos, donde
el movimiento browniano molecular rápido hace que las interacciones dipolo-dipolo magnéticas
nucleares promedien a cero. A medida que mejoraba la homogeneidad del imán, las líneas de
resonancia de los líquidos se volvían cada vez más estrechas, lo que permitía una medición más
precisa de las frecuencias de resonancia.

La relación básica de RMN es

ω = ϕβnúcleo

donde la frecuencia de resonancia ω depende de la relación magnetogyric γ (una propiedad del

núcleo) y el campo magnético aplicado al núcleo B „3. Se anticipó que un núcleo dado mostraría la
misma frecuencia a un valor fijo de la magnética aplicada campo, independientemente del
compuesto químico en el que resida el núcleo. En 1949 y 1950, sin embargo, las observaciones de
las señales de 19F y 31P mostraron variaciones en la frecuencia que estaban más allá del error
experimental (todavía bastante grande). Por lo tanto, se postuló que las propiedades magnéticas
de los electrones que rodean el núcleo proporcionan un blindaje σ del campo magnético aplicado
Bα.

donde el valor de σ depende de la densidad y configuración de los electrones. Este cambio en la

frecuencia de resonancia de lo que se había anticipado se llamó cambio químico. Inicialmente fue
una molestia para los físicos que descubrieron que los cambios químicos limitaban la precisión de
sus mediciones de las proporciones magnetogíricas, pero resultó que proporcionó la piedra
angular para aplicar la RMN a la química.

El cambio químico para 1H se demostró sólo después de nuevas mejoras en la homogeneidad y

estabilidad de los campos magnéticos, porque, como sabemos ahora, el rango de blindajes para
protones es órdenes de magnitud menor que el rango de blindajes para otros núcleos. En 1951, la
espectacular demostración del cambio químico de * H en el etanol {8) (Figura 2) dejó en claro a los
químicos lo que la espectroscopia de RMN podría hacer como método analítico.

Mientras tanto, nuevas mejoras en la resolución revelaron que incluso las resonancias
químicamente desplazadas eran, en muchos casos, colecciones de líneas de resonancia separadas.
Cuando los análisis de Gutowsky y McCall (9) indicaron que los espines de los núcleos vecinos son
responsables de estas múltiples líneas, se tuvo que construir un nuevo mecanismo, porque se
sabía que las interacciones dipolares magnéticas promedian a cero en moléculas que giran
rápidamente. Así se concibió el concepto de acoplamiento espín-espín indirecto o acoplamiento
escalar (10). No mucho después, se descubrió que algunos acoplamientos de espín (como en el
grupo OH del etanol) no producían los multipletes esperados y se desarrolló la idea del
intercambio químico.

El procedimiento estándar para observar una línea de resonancia era variar la frecuencia (o, más
comúnmente, la fuerza del campo magnético) a través de la condición de resonancia, mostrar la
desviación en un osciloscopio y registrarla. Este método de onda continua (cw) siguió siendo el
estándar durante muchos años porque permite la observación secuencial de cada una de las
muchas líneas de resonancia en un espectro. Sin embargo, la representación fiel de la forma lineal
requiere un paso lento a través de la resonancia, lo que requiere una estabilidad mejorada del
instrumento y varios minutos para completar un escaneo.

Bloch sugirió un método alternativo de excitación utilizando un pulso de rf corto (11). En 1949,
Hahn demostró que este procedimiento producía efectivamente una señal de precesión libre.
Además, mostró que las secuencias de pulsos podrían usarse para generar información adicional
en forma de eco de espín (12). Los métodos de pulso entraron en uso, en gran parte por parte de
los físicos, para estudiar sistemas con una sola línea, como la línea ancha de una muestra sólida.
Sin embargo, durante muchos años el método fue de poca utilidad para los químicos debido a la
complejidad de la señal de desintegración por inducción libre (FID) obtenida después del pulso de
excitación.

Década de aplicaciones químicas: 1956-65

A mediados de la década de 1950, se había dilucidado la física básica de la RMN y su valor

potencial en química, y se disponía de instrumentos comerciales. Los instrumentos eran muy
primitivos para los estándares actuales. En 1956, la frecuencia de observación para la
espectroscopia de RMN 1H era de solo 40 MHz, fijada por un cristal a una frecuencia específica. El
campo del electroimán se estabilizó independientemente del rf mediante grandes tubos de vacío
que controlaban la corriente y mediante un circuito de retroalimentación del recién inventado
"superestabilizador". El imán tuvo que ajustarse para lograr una homogeneidad óptima colocando
calzas metálicas delgadas detrás de las piezas polares y apretando el conjunto con una llave
enorme. (El término "ajuste de campo" aún persiste y se entiende que significa optimización de la
homogeneidad. Hoy, sin embargo, La homogeneidad del imán se ajusta variando las corrientes
eléctricas en bobinas que se colocan junto con el imán.) El escaneo del campo magnético a través
del rango de resonancias 1H usualmente tomó alrededor de 5 a 10 min, lo suficiente para evitar
serias distorsiones de forma lineal. El escaneo no pudo demorar más, porque la deriva aleatoria
del campo magnético podría convertirse en un factor dominante. De hecho, debido a la desviación
del campo, cada espectro tuvo que calibrarse por separado y, a menudo, se utilizó el promedio de
varios escaneos para mejorar la precisión. La obtención de espectros de RMN era un trabajo que
requería mucho tiempo para un especialista instrumental. Pero las recompensas por obtener un
buen espectro fueron excelentes. Los químicos orgánicos pronto descubrieron que la
espectroscopia de RMN era una técnica ideal para dilucidar o verificar la estructura de moléculas
de tamaño moderado. Casi todos los compuestos en el estante proporcionaron datos nuevos e
interesantes. Cada mes, Varian publicaba una serie de anuncios llamados "NMR en el trabajo" en
el Journal of the American Chemical Society, demostrando nuevas aplicaciones para la
espectroscopia de NMR. Los químicos orgánicos y la nueva generación de espectroscopistas de
RMN esperaban estos anuncios con tanta ansiedad como anticipaban los artículos de
investigación. El artículo clásico de Shoolery y Rogers (13) en 1958 demostró la utilidad de la
espectroscopia de RMN en el estudio de los esteroides. Incluso a 40 MHz, los espectros de RMN
1H mostraron que los desplazamientos químicos de los grupos metilo angulares tienen valor
diagnóstico. Otros trabajos realizados aproximadamente al mismo tiempo mostraron la gran
cantidad de información que podía obtenerse de los espectros de RMN de alcaloides, azúcares,
porfirinas y otros compuestos. Pronto Karplus (14) demostró que los acoplamientos escalares de
tres enlaces vecinos dependen de los ángulos de enlace, y los estudios de conformación,
especialmente en azúcares, se hicieron populares. El libro de Jackman (15) en 1959 resumió una
gran cantidad de material sobre las correlaciones entre los espectros de RMN y las características
estructurales dentro de una molécula, y el libro de Roberts (16) dio una descripción simple de los
principios básicos que la mayoría de los químicos podrían comprender fácilmente. También
durante este período, se lograron grandes avances en la comprensión del origen de los espectros
complejos que se observaban cada vez más, donde las simples consideraciones de múltiples
espines interactuando para dar multipletes sin complicaciones no son válidas. Los tratamientos
cuánticos de las interacciones de espín y las consideraciones de simetría mostraron claramente lo
que deberíamos esperar, y se desarrollaron programas de computadora para ayudar en el análisis
de espectros complejos. El tratado de Pople, Schneider y Bernstein (17) reunió este material, junto
con muchos antecedentes teóricos escritos desde la perspectiva de los químicos. Durante esta
década, las mejoras en el diseño y la construcción de los imanes permitieron un aumento en la
intensidad del campo de modo que la frecuencia de RMN XH aumentó de 40 MHz a 60 MHz a 100
MHz. Junto con los avances en la electrónica, el aumento de la fuerza del campo magnético dio
como resultado una mayor sensibilidad y espectros que, en algunos casos, fueron más fáciles de
interpretar. Sin embargo, el mayor avance en instrumentación fue el espectrómetro Varian A-60.
Este instrumento incorporó un medio sencillo y práctico para utilizar una señal de RMN para
mantener una relación constante entre el campo magnético y la rf aplicada a la muestra en
estudio. Por lo tanto, se compensó la siempre presente deriva aleatoria del campo magnético, y
cada espectro se pudo obtener a una velocidad de exploración conocida. ¡De repente, las cartas de
RMN preimpresas se volvieron factibles! Además, debido a las mejoras en el diseño, el imán, su
fuente de alimentación y la unidad de agua de refrigeración se redujeron de tamaño; el
instrumento ahora podría caber en un laboratorio de química ordinario y el costo disminuyó. El
espectrómetro A-60 realmente llevó la espectroscopía de RMN a las masas (de los químicos); Se
vendieron más de 1000 instrumentos en todo el mundo antes de que el mercado cediera el paso a
fines de la década de 1960 a instrumentos basados en electrónica de estado sólido. Merecen
mención otros dos desarrollos especialmente significativos en la metodología de RMN. Una es la
resonancia doble, en la que dos campos de rf de diferentes frecuencias se aplican
simultáneamente: uno para observar una señal mientras que el otro perturba el sistema de espín.
El concepto de doble resonancia se conocía desde hacía muchos años, pero no fue hasta la década
de 1960 que la teoría fue desarrollada en detalle, principalmente por Baldeschwieler (entonces en
Harvard) y por Freeman y Anderson (luego en Varian). Los accesorios se desarrollaron para
permitir estudios de doble resonancia con instrumentos comerciales. Se llevaron a cabo
numerosas aplicaciones, que van desde el simple desacoplamiento de multipletes de espín hasta
investigaciones detalladas de los niveles de energía mediante el cosquilleo de espín hasta estudios
de conformación molecular por el efecto nuclear Overhauser (NOE), introducido por primera vez
en la estereoquímica orgánica en 1965 (18). Los accesorios se desarrollaron para permitir estudios
de doble resonancia con instrumentos comerciales. Se llevaron a cabo numerosas aplicaciones,
que van desde el simple desacoplamiento de multipletes de espín hasta investigaciones detalladas
de los niveles de energía mediante el cosquilleo de espín hasta estudios de conformación
molecular por el efecto nuclear Overhauser (NOE), introducido por primera vez en la
estereoquímica orgánica en 1965 (18). Los accesorios se desarrollaron para permitir estudios de
doble resonancia con instrumentos comerciales. Se llevaron a cabo numerosas aplicaciones, que
van desde el simple desacoplamiento de multipletes de espín hasta investigaciones detalladas de
los niveles de energía mediante el cosquilleo de espín hasta estudios de conformación molecular
por el efecto nuclear Overhauser (NOE), introducido por primera vez en la estereoquímica
orgánica en 1965 (18).

El otro desarrollo importante fue la espectroscopia de RMN 13C. Debido a su baja sensibilidad
inherente en relación con Ή y 19F y la abundancia natural de 13C de solo 1.1%, el primer estudio
de 13C NMR en una serie de compuestos orgánicos no apareció hasta el artículo clásico de
Lauterbur (19) en 1957. Demostró que el 13C los cambios químicos abarcan una amplia gama y
proporcionan información potencialmente útil. Incluso entonces, poco se pudo hacer de una
manera práctica hasta que se aplicaron los métodos de doble resonancia para colapsar los
multipletes de espín e introducir mejoras de NOE, que en conjunto aumentaron la intensidad de la
señal hasta el punto en que la observación práctica era factible. El trabajo más extenso en el
desarrollo de la sistemática de la espectroscopia de RMN 13C y su aplicación a problemas
orgánicos provino de los laboratorios de Strothers (Universidad de Western Ontario), Roberts
(Instituto de Tecnología de California) y Grant (Universidad de Utah) quienes obtuvieron
instrumentos especializados optimizados para el estudio de este núcleo "menos receptivo".
Wenkert (ahora en la Universidad de California-San Diego) fue pionero en la espectroscopia de
RMN 13C para la determinación de la estructura en moléculas más complejas.

Década de la tecnología: 1966-75

Imanes superconductores.Con el desarrollo de los instrumentos de 100 MHz, la tecnología de los

electroimanes de núcleo de hierro se había llevado hasta donde podía llegar, porque el hierro se
satura cerca de la intensidad de campo de 2,35 T. Los aumentos adicionales en la intensidad de
campo solo podrían provenir de superconductores de baja temperatura. solenoides. Aunque la
tecnología de los materiales superconductores era bien conocida, se necesitaban grandes
esfuerzos para producir un imán de alta intensidad de campo que fuera capaz de operar
constantemente con poca o ninguna deriva, tuviera una excelente homogeneidad, tuviera un
volumen lo suficientemente grande para tubos de muestra y estuviera alojado en un Dewar capaz
de retener helio líquido y nitrógeno líquido durante períodos adecuados. Varios de estos imanes
se construyeron en laboratorios individuales, pero el primer imán comercial exitoso fue la base del
Varian HR-220 en 1966.

Desde entonces, un flujo constante de mejoras en la tecnología de imanes, encabezado en gran

parte por Richards (Universidad de Oxford) en colaboración con Oxford Instruments y Bruker
Instruments, permitió aumentos en la frecuencia de RMN Ή a 270 MHz, 360 MHz y 400 MHz. Un
instrumento de 500 MHz se introdujo alrededor de 1978. Un instrumento de 600 MHz que utiliza
un imán no persistente se desarrolló en la Universidad Carnegie Mellon en 1978 y, en 1987, se
introdujo un instrumento comercial de 600 MHz que utiliza un imán persistente. Actualmente, se
están desarrollando comercialmente sistemas de 750 MHz. Los imanes superconductores
permitieron a los investigadores extender el espectro expresado en unidades de frecuencia y
distinguir los cambios químicos en moléculas grandes que casi podrían coincidir en campos
magnéticos más bajos, facilitando así la interpretación de espectros de compuestos orgánicos
complejos. Este aumento de la dispersión del cambio químico, junto con el aumento continuo de
la sensibilidad instrumental, permitió un ataque serio sobre péptidos, oligonucleótidos y otras
moléculas bioquímicas. Ciertamente, Jardetzk y (Stanford), Cohn (Universidad de Pensilvania) y
otros habían estudiado moléculas como los aminoácidos y los nucleótidos a baja intensidad de
campo en la década de 1950. El primer espectro de RMN de una proteína (un espectro de 40 MHz
que mostraba solo una amplia envolvente de las resonancias esperadas de más de 800 protones)
fue informado por Saunders, Wishnia y Kirkwood en 1957 (20). Aunque los espectros de proteínas
desnaturalizadas mostraban líneas nítidas, se pudo obtener poca información estructural útil. Por
lo tanto, la mayor parte del trabajo inicial sobre sistemas bioquímicos tuvo como objetivo obtener
los parámetros de RMN necesarios para aminoácidos, péptidos pequeños, mononucleótidos y
azúcares simples. McDonald y Phillips (21) informaron en 1967 de los primeros espectros de
proteínas que obtuvieron una fuerza de campo magnético en el muslo utilizando un imán
superconductor (21). Demostraron que se podía obtener una resolución mejorada utilizando una
mayor intensidad de campo, lo que significaba que se podía obtener información mucho más
detallada a partir de dichos espectros. Se encontró que los cambios de desplazamiento químico
estaban asociados con cambios conformacionales en las proteínas y con la ionización de protones
a medida que variaba el pH. Sin embargo, muchos de estos estudios se limitaron principalmente a
un examen de resonancias de histidina, porque están muy desprotegidos y se encuentran en una
región espectral relativamente despejada. Los avances adicionales en la espectroscopia de RMN
biológica tendrían que esperar dos mejoras tecnológicas. Demostraron que se podía obtener una
resolución mejorada utilizando una mayor intensidad de campo, lo que significaba que se podía
obtener información mucho más detallada a partir de dichos espectros. Se encontró que los
cambios de desplazamiento químico estaban asociados con cambios conformacionales en las
proteínas y con la ionización de protones a medida que variaba el pH. Sin embargo, muchos de
estos estudios se limitaron principalmente a un examen de resonancias de histidina, porque están
muy desprotegidos y se encuentran en una región espectral relativamente despejada. Los avances
adicionales en la espectroscopia de RMN biológica tendrían que esperar dos mejoras tecnológicas.
Demostraron que se podía obtener una resolución mejorada utilizando una mayor intensidad de
campo, lo que significaba que se podía obtener información mucho más detallada a partir de
dichos espectros. Se encontró que los cambios de desplazamiento químico estaban asociados con
cambios conformacionales en las proteínas y con la ionización de protones a medida que variaba
el pH. Sin embargo, muchos de estos estudios se limitaron principalmente a un examen de
resonancias de histidina, porque están muy desprotegidos y se encuentran en una región espectral
relativamente despejada. Los avances adicionales en la espectroscopia de RMN biológica tendrían
que esperar dos mejoras tecnológicas. Sin embargo, muchos de estos estudios se limitaron
principalmente a un examen de resonancias de histidina, porque están muy desprotegidos y se
encuentran en una región espectral relativamente despejada. Los avances adicionales en la
espectroscopia de RMN biológica tendrían que esperar dos mejoras tecnológicas. Sin embargo,
muchos de estos estudios se limitaron principalmente a un examen de resonancias de histidina,
porque están muy desprotegidos y se encuentran en una región espectral relativamente
despejada. Los avances adicionales en la espectroscopia de RMN biológica tendrían que esperar
dos mejoras tecnológicas.

Espectroscopía FT-NMR.

La sensibilidad adecuada siempre ha sido un problema en la espectroscopia de RMN. Como los

investigadores han estudiado muestras diluidas o de cantidad limitada, y han extendido la
espectroscopia de RMN a núcleos menos sensibles (como 13C y 15N), la relación señal-ruido a
menudo se convierte en el factor limitante para determinar lo que se puede estudiar. A principios
de la década de 1960, se aplicó un promedio de tiempo coherente a la espectroscopía de RMN.
Debido a que Ν exploraciones consecutivas registradas en la memoria digital y agregadas de
manera coherente producen una señal Ν veces más grande que una exploración, mientras que el
ruido aleatorio es solo N1 '2 veces más grande, la relación señal / ruido se puede mejorar con el
gasto de más tiempo.

El problema es que los métodos de cw requieren una exploración de frecuencia secuencial a una
velocidad lo suficientemente lenta como para evitar la distorsión de las líneas espectrales. Este es
un proceso ineficaz, porque solo se estudia una región estrecha del espectro a la vez.
Particularmente con el aumento de la dispersión de frecuencia que acompaña a los campos
magnéticos más altos y la extensión de los métodos de RMN a núcleos como el 13C con un amplio
rango de desplazamiento químico, se podrían necesitar muchos minutos para obtener un
espectro. Aunque es aceptable para un solo escaneo, no es factible hacer 10,000 de tales escaneos
para mejorar la relación señal / ruido en un factor de 100. Claramente, se necesitaba un método
para excitar todo el espectro simultáneamente. En espectroscopia óptica e IR, excitación y el
múltiplex resultante (Felgett ' Las ventajas se obtuvieron mediante el uso de un interferómetro y la
posterior transformación de Fourier de la respuesta en el tiempo. Para la espectroscopia de RMN,
la excitación correspondiente se encontró en un pulso de rf corto. Lowe y Norberg (22)
demostraron en 1957 que el FID que sigue un pulso de rf podría, en principio, transformarse en el
espectro que se habría obtenido mediante un barrido lento. Pero no fue hasta la publicación del
artículo fundamental de Ernst y Anderson (23) en 1966 que se pudo hacer que el proceso
funcionara en la práctica. Sus estudios iniciales involucraron un largo procesamiento de datos, en
el que los FID se agregaron de manera coherente y luego se convirtieron con cinta de papel, cinta
magnética y tarjetas perforadas en una forma que podría procesarse en una computadora digital
grande en un sitio remoto. Afortunadamente, se estaban desarrollando miniordenadores que
podían conectarse directamente al espectrómetro. El progreso en la espectroscopia FT-NMR se
debe mucho a estas computadoras y al software bastante fácil de usar. El desarrollo de métodos
FT-NMR realmente ha revolucionado el campo. No solo se podría mejorar la sensibilidad
promediando el tiempo de manera práctica, sino que la velocidad del método FT de pulso podría
aprovecharse alternativamente para estudiar procesos rápidos como reacciones químicas y
fenómenos de RMN dependientes del tiempo (por ejemplo, relajación). Las secuencias de pulsos e,
como la del eco de espín que se había utilizado solo para sistemas de una sola línea, ahora podían
aplicarse a moléculas químicamente interesantes con muchas resonancias. El estudio de núcleos
menos receptivos, como el 13C, se convirtió en algo habitual. No solo se podría mejorar la
sensibilidad promediando el tiempo de manera práctica, sino que la velocidad del método FT de
pulso podría aprovecharse alternativamente para estudiar procesos rápidos como reacciones
químicas y fenómenos de RMN dependientes del tiempo (por ejemplo, relajación). Las secuencias
de pulsos e, como la del eco de espín que se había utilizado solo para sistemas de una sola línea,
ahora podían aplicarse a moléculas químicamente interesantes con muchas resonancias. El
estudio de núcleos menos receptivos, como el 13C, se convirtió en algo habitual. No solo se podría
mejorar la sensibilidad promediando el tiempo de manera práctica, sino que la velocidad del
método FT de pulso podría aprovecharse alternativamente para estudiar procesos rápidos como
reacciones químicas y fenómenos de RMN dependientes del tiempo (por ejemplo, relajación). Las
secuencias de pulsos e, como la del eco de espín que se había utilizado solo para sistemas de una
sola línea, ahora podían aplicarse a moléculas químicamente interesantes con muchas
resonancias. El estudio de núcleos menos receptivos, como el 13C, se convirtió en algo habitual.
ahora podría aplicarse a moléculas químicamente interesantes con muchas resonancias. El estudio
de núcleos menos receptivos, como el 13C, se convirtió en algo habitual. ahora podría aplicarse a
moléculas químicamente interesantes con muchas resonancias. El estudio de núcleos menos
receptivos, como el 13C, se convirtió en algo habitual.

Además de los avances en la espectroscopia de RMN de líquidos, los nuevos desarrollos en la

comprensión de las interacciones en los sólidos, especialmente por Waugh (MIT) y Pines
(Universidad de California-Berkeley), permitieron el desarrollo de nuevos métodos de pulso para
estrechar artificialmente las líneas inherentemente amplias en sólidos. Los métodos FT
permitieron el estudio de sólidos con líneas desplazadas químicamente. El giro del ángulo mágico,
descubierto en 1959, ahora podría usarse junto con nuevas técnicas que transfieren la
magnetización de una especie nuclear a otra (polarización cruzada) para obtener espectros de alta
resolución de 13C y otros núcleos en sólidos.

Espectroscopía de RMN 2D.

Durante los últimos años de la década, el área nueva más emocionante fue la espectroscopia de
RMN 2D, en la que se permite que las magnetizaciones nucleares precesen durante un período de
tiempo inicial, se aplican varias secuencias de pulsos y se registra un FID. La transformación
bidimensional de Fourier de los dos dominios de tiempo independientes da como resultado un
espectro que se puede mostrar a lo largo de dos dimensiones de frecuencia ortogonales. Jeener
(Universidad Libre de Bruselas) originó la idea de la espectroscopia de RMN 2D en 1971, pero Ernst
fue la figura clave para convertirla en un método práctico y útil a mediados de la década de 1970
(24). A lo largo de los años, se han ideado literalmente cientos de diferentes métodos 2D y
mejoras en los métodos anteriores, cada uno de los cuales tiene como objetivo correlacionar
resonancias en diferentes frecuencias sobre la base de alguna interacción entre los núcleos
responsables de las resonancias.

Década de aplicaciones biológicas: 1976-85

En los primeros 30 años de la RMN se había desarrollado un vasto arsenal de equipos y técnicas.
Junto con potentes espectrómetros que utilizan imanes de alto campo, hardware y software de
computadora adaptados para aplicaciones, técnicas de FT bien desarrolladas y métodos en
evolución para RMN 2D y estrechamiento de línea en sólidos, la espectroscopia de RMN se utilizó
durante esta década para resolver problemas en muchas áreas de Ciencias

Las estructuras de moléculas orgánicas complejas que se habían dilucidado solo con la tediosa
aplicación de métodos de doble resonancia ahora podían determinarse de manera sistemática y
eficiente mediante métodos 2D. Los problemas de la química y la física del estado sólido que
habían desafiado el ataque de la espectroscopia de RMN ahora podrían resolverse con
combinaciones de métodos 2D y de estrechamiento de líneas. Sin embargo, los avances de mayor
alcance se produjeron en aplicaciones a una variedad de sistemas biológicos. No solo se pudieron
realizar estudios de alta resolución de biopolímeros en solución con mucha más eficacia que antes,
sino que los avances en las técnicas permitieron la investigación de la RMN en sistemas vivos.

Estructura macromolecular.

Los estudios de biopolímeros recibieron un impulso significativo con la introducción de imanes de

alto campo que permitieron la separación de líneas espectrales causadas por núcleos
químicamente distintos. Sin embargo, los espectros presentaron una vergüenza de riquezas
porque la interpretación depende en gran medida de la asignación de cada una de las cientos de
líneas al núcleo responsable de esa resonancia. En moléculas más pequeñas, los métodos de doble
resonancia desempeñaron un papel importante en la elaboración de esquemas de enlaces
químicos a través de conectividades de acoplamiento de espín que podrían investigarse mediante
desacoplamiento de espín selectivo; en casos favorables, las mediciones de NOE proporcionaron
información valiosa sobre distancias internucleares.

Estos métodos se aplicaron a proteínas y otros biopolímeros, pero con un éxito limitado. Se
requirieron cientos de tediosos experimentos separados, y la interpretación de los resultados no
siempre fue sencilla. Probablemente el mayor éxito se produjo con las hemoproteínas, donde los
grandes cambios causados por los iones paramagnéticos y las corrientes de anillos aromáticos
simplificaron considerablemente la interpretación de grandes partes de los espectros. El
verdadero avance se produjo cuando Nagayama, Wiithrich, Bachmann y Ernst demostraron que
los métodos de RMN 2D se podían aplicar a los biopolímeros (26). La espectroscopia
correlacionada (COSY) y sus ramificaciones permitieron el establecimiento de conectividades de
acoplamiento de espín para facilitar las asignaciones espectrales, y la espectroscopia de mejora
nuclear de Over Hauser (NOESY) permitió que los efectos de relajación se utilizaran para estimar
distancias internucleares.

En principio, la información obtenida de los experimentos COSY y NOESY podría haber sido
extraída de un gran número de mediciones secuenciales de ID spin-desacoplamiento y NOE. Sin
embargo, el enfoque 2D permite mediciones simultáneas en todo el espectro, proporcionando el
mismo tipo de mejora general en la eficiencia que la espectroscopia FTNMR le había dado a la
adquisición espectral de ID. La interpretación de esta amplia gama de datos en términos de una
conformación molecular 3D requirió el desarrollo de métodos sofisticados de análisis de datos y
coordinación con programas de dinámica molecular que evalúan las energías relativas de varias
conformaciones. Como en el desarrollo temprano de la espectroscopia FT-NMR,

En 1980, tres años después de que se obtuvieron los primeros espectros 2D de una proteína, se
habían desarrollado métodos de supresión de señal de solvente hasta el punto en que los
espectros de proteínas en agua podían registrarse, permitiendo que las resonancias de péptidos
NH se incluyeran en el acoplamiento de espín y Vías NOE. Con esta información adicional crucial,
fue posible determinar las estructuras 3D completas de proteínas pequeñas, y en 1985 se publicó
la estructura de una proteína de 57 residuos (28). El tamaño de las moléculas que podían
estudiarse era todavía muy pequeño para los estándares de proteínas, pero la espectroscopia de
RMN se estableció como una alternativa a la cristalografía de rayos X para biopolímeros.

Espectroscopía de RMN in vivo.

Si bien los métodos tradicionales de RMN de alta resolución se refinaron y aplicaron a moléculas
cada vez más grandes y complejas, individuales y bien definidas, algunos investigadores estaban
explotando la velocidad y la sensibilidad de los métodos de RMN-FT para observar la compleja
mezcla de moléculas pequeñas en las células vivas. , organismos y, eventualmente, animales
enteros y humanos. De alguna manera, estos estudios no eran nuevos. Bloch comentó en broma
que había llevado a cabo el primer experimento de RMN in vivo en 1946, cuando metió el dedo en
la sonda y obtuvo una señal del agua. A lo largo de los años, se llevaron a cabo estudios de RMN
en agua en las células sanguíneas, sodio en los músculos y células sanguíneas y agua en un ratón.
La mayoría de las investigaciones se limitaron a sustancias abundantes que dan grandes señales,
principalmente agua, y solo se pudo obtener una cantidad limitada de información.

En 1973 Moon y Richards (29) observaron señales de RMN 3 1P separadas de los constituyentes
intracelulares de los reticulocitos, y en 1974 Hoult et al. (30) demostraron que los cambios
metabólicos en un músculo vivo extirpado podían ir seguidos de la observación de las señales del
trifosfato de adenosina, así como del fosfato de creatina, el fosfato inorgánico y otros fosfatos.

Durante la década de 1976 a 1985, muchos grupos hicieron incursiones en los estudios
metabólicos mediante espectroscopia de RMN. Se inventaron métodos para mantener vivas las
células y hacerlas crecer en tubos de RMN para permitir estudios en sistemas celulares (31). Los
órganos extirpados se perfundieron con soluciones nutritivas en tubos de RMN y se siguió su
metabolismo. Las bobinas de superficie se desarrollaron para obtener señales de volúmenes
localizados cerca de la piel de animales de experimentación. Se diseñaron pulsos de profundidad
para adaptar la excitación de rf y definir con mayor precisión el volumen de interés, y se
implantaron bobinas de rf en animales para examinar los órganos internos.

Radda (Universidad de Oxford) y Shulman (Yale) fueron pioneros en el estudio no invasivo de RMN
del metabolismo en humanos con grandes imanes superconductores. La mayoría de estos estudios
se basaron en la espectroscopia de RMN 3 1P, pero las muestras enriquecidas con 13C añadieron
una dimensión al estudio del metabolismo. Se hizo algún uso de la espectroscopia de RMN 1H,
pero la gran señal de agua interfirió seriamente con los estudios de metabolitos a niveles
milimolares.

Imágenes de RMN. Una línea de desarrollo separada que tendría efectos profundos en la
espectroscopia de RMN in vivo comenzó en 1973 cuando Lauterbur (32) mostró que se podían
obtener imágenes 2D imponiendo gradientes de campo magnético a través de una muestra. Con
tal gradiente, la ecuación de Larmor se modifica y se convierte en
donde G es el gradiente en la dirección r. Por tanto, la frecuencia de RMN se convierte en una
medida de posición a lo largo del gradiente. Repitiendo la medición con gradientes en diferentes
direcciones, es posible reconstruir una imagen 2D. En 1975, Kumar, Welti y Ernst (33) demostraron
que la entonces nueva técnica de RMN 2D proporcionaba una forma más eficiente de obtener una
imagen y, con algunas modificaciones adicionales, se convirtió rápidamente en el método de
elección para 2D (y más tarde 3D ) imágenes.

Inmediatamente se hizo evidente que las imágenes por RMN tenían un gran potencial para
investigar la anatomía humana y animal. Debido a las diferencias en el contenido de agua y los
tiempos de relajación, los tejidos biológicos se pueden distinguir con secuencias de pulsos de RMN
adecuadas, y se pueden obtener fácilmente imágenes con una exquisita discriminación entre
tejidos normales y patológicos. El desarrollo comercial de las imágenes por RMN, abreviado como
imágenes por resonancia magnética (IRM), comenzó a fines de la década de 1970. A principios de
la década de 1980, comenzaron a aparecer instrumentos de diagnóstico prácticos en los
departamentos de radiología y el mercado de la resonancia magnética creció exponencialmente.
Los métodos de formación de imágenes por RMN también proporcionan el método más general
para localizar un volumen de interés para la espectroscopia. En 1985 se estaban desarrollando
técnicas para integrar imágenes y espectroscopia en animales vivos y seres humanos.

Década actual: medicina, biología estructural y ciencia de los materiales: 1986-95

Con un tercio de la década actual restante, es demasiado pronto para caracterizar cuáles pueden
ser, en última instancia, los principales impulsos de la RMN. Sin embargo, es seguro destacar tres
áreas diferentes en las que los avances han sido tan rápidos y profundos que se ubicarán a la
vanguardia de los desarrollos contemporáneos en RMN.

Diagnostico medico.En 1987, la resonancia magnética se había generalizado lo suficiente como

para generar una Conferencia de consenso en los Institutos Nacionales de Salud para abordar
preguntas sobre su seguridad y eficacia como herramienta de diagnóstico para una amplia gama
de enfermedades. En muchos sentidos, se determinó que la resonancia magnética era
significativamente superior a otras modalidades de imagen como la tomografía axial
computarizada (TAC) de rayos X y, en muchos otros sentidos, estuvo a punto de sobresalir. Hoy en
día, es difícil encontrar un hospital grande en los Estados Unidos en el que no se disponga de
resonancia magnética. Claramente, a $ 2 millones a $ 3 millones por instrumento, ¡la resonancia
magnética se ha convertido en la cola que mueve al perro de RMN!

En el área de la investigación biomédica, la resonancia magnética está experimentando nuevos

avances. Las imágenes eco-planas (EPI) proporcionan un método alternativo para obtener
imágenes de RMN en una fracción del tiempo que se necesita actualmente (50 ms frente a ~ 5
min) (34). Aunque solo ahora se está desarrollando comercialmente, EPI se deriva de un método
de obtención de imágenes introducido por Mansfield (Universidad de Nottingham) poco después
de la invención de Lauterbur. En EPI, los artefactos de movimiento se pueden eliminar y mejorar la
resolución de muchos órganos internos.

Las imágenes funcionales, en las que se hace hincapié en algún tipo de función en lugar de
meramente en la anatomía, se están volviendo más útiles en la investigación y el diagnóstico (35).
Los estudios del flujo sanguíneo y la difusión de agua y metabolitos en los tejidos utilizan métodos
de eco de espín que se han comprendido y aplicado durante mucho tiempo en la espectroscopia
de RMN de alta resolución. Los efectos de la susceptibilidad magnética de la desoxihemoglobina
paramagnética permiten el estudio de la función cerebral localizada en regiones donde se
consume oxígeno. Con el desarrollo de excelentes técnicas para suprimir la señal del agua y
localizar un pequeño volumen de interés, la espectroscopia de RMN XH está comenzando a
proporcionar información valiosa sobre la función metabólica en varios órganos, incluido el
cerebro.

Biología estructural.Recientemente se han logrado avances dramáticos en la aplicación de la

espectroscopia de RMN de alta resolución para la determinación de la estructura 3D de
biopolímeros, especialmente proteínas. Los estudios anteriores se habían restringido a proteínas
de peso molecular 5000 - 10,000 Da, debido a que la complejidad de los espectros 2D y los anchos
de línea aumentan rápidamente con el tamaño molecular.

La extensión a proteínas más grandes requirió el desarrollo de nuevos métodos ingeniosos que
dependen de la disponibilidad de proteínas enriquecidas uniformemente en 13C y / o 15N, que a
menudo se pueden preparar de forma económica mediante técnicas de ADN recombinante.

Estos nuevos métodos transfieren la magnetización de] H a través del enlace peptídico de un
residuo de aminoácido a otro y permiten que las asignaciones de secuencias se realicen mediante
métodos de RMN 3D y 4D (36). Estas últimas son extensiones lógicas de las técnicas 2D
comúnmente utilizadas, pero requieren una gran cantidad de tiempo de adquisición de datos y
capacidades computacionales intensivas. Se han informado estructuras completas de proteínas de
pesos moleculares cercanos a 20.000 Da, y los métodos actuales parecen ser aplicables hasta
aproximadamente 30.000 Da. La precisión de los métodos de RMN es ahora aproximadamente tan
buena como la de la cristalografía de rayos X, y la espectroscopia de RMN tiene la ventaja de
determinar la estructura en solución, donde se pueden examinar los procesos dinámicos
importantes para el funcionamiento de las proteínas (37). Las estructuras de los complejos de
proteínas y los ácidos nucleicos también se determinan mediante espectroscopía de RMN. Por
supuesto, el enfoque de RMN tiene algunas limitaciones en el sentido de que ciertas proteínas
muestran una dispersión de desplazamiento químico inadecuada y los anchos de línea para
proteínas más grandes impiden su análisis por los métodos actuales. Además, el enfoque de RMN
sigue siendo muy laborioso para analizar espectros multidimensionales.

Ciencia de los Materiales. Hasta que se desarrollaron los métodos de flecha de lino, la
espectroscopia de RMN proporcionaba solo información limitada sobre materiales sólidos. Ahora,
no solo se pueden obtener espectros de resolución relativamente alta en sólidos, sino que los
métodos de obtención de imágenes, desarrollados principalmente para aplicaciones biomédicas,
se pueden combinar con técnicas de estrechamiento de líneas para obtener imágenes de sólidos.
La espectroscopia de RMN proporciona así un nuevo enfoque para la investigación de la estructura
detallada en materiales heterogéneos como las cerámicas poliméricas y sus compuestos (38).
Otros avances en las técnicas de hilado de muestras han permitido obtener líneas estrechas para
núcleos cuadrupolares, abriendo así estudios de RMN de alta resolución en muchos sólidos
inorgánicos. Se han desarrollado nuevos métodos para estudiar la estructura de sólidos con gases
sonda, como el xenón.

Otros aspectos
En esta breve historia, ni siquiera he podido mencionar otras áreas en las que la RMN ha jugado un
papel importante. La RMN se ha utilizado en la física del estado sólido desde sus inicios para
investigar una amplia gama de fenómenos en metales, semiconductores y otros materiales. Los
geólogos usan magnetómetros de RMN; Los exploradores de petróleo utilizan RMN en el registro
de pozos (la sonda de RMN encaja dentro de la muestra). La industria alimentaria lo utiliza para
medir el contenido de humedad y los estudios agrícolas se han centrado en la naturaleza no
invasiva de la RMN para observar semillas y plantas. Estas y otras aplicaciones de la RMN
continúan expandiéndose. Se estima que, en total, hay unos 15.000 instrumentos de RMN de un
tipo u otro en todo el mundo. De estos, alrededor de 5000 están en el campo médico y
representan una gran fracción del dinero gastado en instrumentación de RMN. Sin embargo,