TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE ZACATEPEC

DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA Y BIOQUÍMICA

MICROBIOLOGÍA

GUÍA MEDIOS DE CULTIVO:

“Cultivo de microorganismos”

DOCENTE:
GUTIÉRREZ BOTELLO MARLLA DUBRAVKA

EQUIPO:

✓ ESTRADA SEVERIANO DANIELA

✓ PASTRANA CARREÑO MARICARMEN
✓ RAMÍREZ DOMINGUEZ JAIRO JORAM
✓ RAMÍREZ MILLÁN FRIDA ISABEL

GRUPO:

WA
 GUÍA PARA IDENTIFICAR LOS MEDIOS DE CULTIVO Y SU PREPARACIÓN

DEFINICIÓN DE MEDIO DE CULTIVO:

Los medios de cultivo son mezclas de substancias nutritivas que se combinan para favorecer el crecimiento, aislamiento e identificación de microorganismos. Los
requisitos nutricionales de las bacterias reflejan su capacidad biosintética y ellas pueden obtener sus nutrientes para desarrollarse tomándolos directamente del
medio o sintetizándolos a partir de otros materiales; además de los nutrientes, los medios de cultivo deben reunir condiciones físico - químicas específicas de
actividad de agua, pH y potencial de óxido-reducción y, generalmente tienen condiciones de isotonía, aunque las bacterias son muy tolerantes a las variaciones de
presión osmótica; existen inclusive, microorganismos osmofílicos y halofílicos que necesitan altas concentraciones de carbohidratos o sales para su crecimiento.
El pH es muy importante para un buen desarrollo bacteriano, la mayoría de las bacterias crece a un pH cercano a la neutralidad, sin embargo, hay microorganismos
que requieren pH ácido o alcalino.

Clasificación de los medios de cultivo

Según su origen

a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición
química no se conoce exactamente.
b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) SEMISINTÉTICO: son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo
extracto de levadura.

Según su consistencia

a) LÍQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.

b) SÓLIDOS: se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón de 15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato de carbono)
que se extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no constituye ningún elemento nutritivo. Este conjunto convenientemente
esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias, "procesos que antes no
eran posibles en medio líquido".
c) SEMISÓLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar la motilidad de las especies en estudio. Actualmente se encuentran
disponibles comercialmente con el agregado de agar.
 Por su composición y utilidad práctica:

a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los microorganismos poco existentes. Es el medio más frecuentemente
utilizado para mantener colonias microbianas. Por ejemlo: agar común o caldo común.
b) COMPLEJOS. Son medios que contienen algunos ingredientes cuya composición química se desconoce. Estos medios son muy útiles, pues un único
medio complejo puede ser suficientemente rico para satisfacer las necesidades nutricionales de diversos microorganismos.
c) ENRIQUECIDOS. Son aquellos que favorecen el crecimiento de un determinado tipo de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento de los
demás.
d) SELECTIVOS. Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás.
e) DIFERENCIALES. Son aquellos en los que se pone de manifiesto propiedades que un determinado tipo de microorganismos posee.
f) DE TRANSPORTE: son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin multiplicación significativa de los microorganismos desde el momento de
su extracción hasta su posterior estudio.

TIPO DE MEDIO NOMBRE COMPONENTES PREPARACIÓN MICROORGANISMOS RESULTADOS DEL

DE CULTIVO DEL QUE IDENTIFICAR CRECIMIENTO
MEDIO DE
CULTIVO

Líquidos o Caldo ✓ Peptona de ✓ Suspender 8 gramos ➢ Streptococcus

caldos/ nutritivo gelatina 5 g de medio en un litro pyogenes
comunes o ✓ Extracto de de agua destilada. ➢ Enterobacter
universales carne 3 g ✓ Mezclar bien y aerogenes
disolver calentando ➢ Staphylococcus
con agitación epidermidis
frecuente. ➢ Escherichia coli
✓ Hervir durante un ➢ Salmonella typhi
minuto hasta
disolver por
completo.
El caldo nutritivo para la
Dispensar el medio
separación listery
en recipientes
adecuados y
esterilizar en
autoclave a 121 ° C
durante 15 minutos.
Líquidos o Agua de ✓ Hidrolizado ✓ Se vierte 25,5 g de ➢ Vibrio cholerae
caldos/ peptona enzimático de polvo en 1,0 L deagua ➢ Escherichia coli
comunes o caseína 10,0 g; purificada. ➢ Escherichia coli
universales ✓ Cloruro de ✓ Se mezcla bien. En ➢ Staphylococcus
sodio 5,0 g; caso de ser aureus
✓ Fosfato necesario, se calienta ➢ Pseudomonas
dihidrogenado la solución para aeruginosa
de potasio 1,5 g; disolver ➢ Salmonella
✓ Hidrogenofosfa completamente el typhimurium
to de sodio polvo. ➢ Salmonella
dodecahidrato ✓ Se dispersa y se enteritidis
9,0 g esteriliza en
✓ El pH final es de autoclave a 121°C por
7,0 ± 0,2 a 25°C. 15 minutos.
Líquidos o Caldo ✓ Dextrosa 2 g ✓ Suspender 37 ➢ Neisseria
caldos/ Infusión ✓ Fosfato gramos del medio en meningitidis
Enriquecidos Cerebro disódico 2,5 g un litro de agua ➢ Streptococcus
Corazón ✓ Peptona de destilada. Mezclar pyogenes
(BHI) gelatina 10 g bien y disolver ➢ Brucella abortus
✓ Cloruro sódico calentando con ➢ Streptococcus
5g agitación frecuente. pneumoniae
✓ Infusión de Hervir durante un
corazón 10 g minuto hasta disolver
✓ Infusión de por completo.
cerebro 7,5 g ✓ Dispensar en
recipientes
apropiados y
esterilizar a 121 ºC
durante 15 minutos.
El medio preparado
debe almacenarse a
2-8 ºC. Para obtener
mejores resultados el
medio debe usarse el
mismo día, de no ser
así, debe calentarse
en agua hirviendo
para expulsar el
oxígeno disuelto y
dejar enfriar antes de
usar.

Líquidos o Caldo ✓ Dextrosa 20 g ✓ Suspender 30 ➢ Candida albicans

caldos/ Dextrosa ✓ Mezcla de gramos del medio en ➢ Aspergillus
Enriquecidos Sabouraud digerido un litro de agua brasiliensis
péptico de destilada. ➢ Escherichia coli
tejido animal y ✓ Mezclar bien y ➢ Candida albicans
pancreático de disolver con calor y ➢ Escherichia coli
caseína (1:1) 10 con agitación Lactobacillus
g frecuente. casei
Candida albicans
 ✓ Hervir durante un ➢ Saccharomyces
minuto hasta su cerevisiae
completa disolución.
✓ Dispensar en
recipientes
apropiados y
esterilizar en
autoclave a 118-121
ºC durante 15
minutos. NO
SOBRECALENTAR.

Semisólidos/ Agar MIO ✓ Glucosa 1 g ✓ Suspender 31 g del ➢ Enterobacter

Diferenciales ✓ Extracto de polvo en 1 litro de aerogenes
levadura 3 g agua purificada. ➢ Escherichia coli
✓ Peptona 10 g Calentar, agitando ➢ Proteus mirabilis
✓ Tripteína 10 g frecuentemente y ➢ Klebsiella
✓ Clorhidrato de l- llevar a ebullición pneumoniae
ornitina 5 g hasta completa
✓ Púrpura de disolución.
bromocresol ✓ Distribuir en tubos y
0.02 g esterilizar en
✓ Agar 2 g autoclave a 121 ºC
✓ pH FINAL: 6.5 ± durante 15 minutos.
0.2 ✓ Enfriar y dejar
solidificar en
posición vertical
 Citrobacter amalonaticus en
medio MIO positivo para
Motilidad e Indol

Semisólidos/ Agar SIM ✓ Agar ✓ Suspender 30 ➢ Shigella flexneri

Diferenciales bacteriológico gramos del medio en ➢ Salmonella
3,5 g un litro de agua typhimurium
✓ Peptona de destilada. ➢ Escherichia coli
caseína 20 g ✓ Mezclar bien y
✓ Peptona de disolver calentando
carne 6,1 g con agitación
✓ Tiosulfato de frecuente.
Sin inocular, E.coli,
sodio 0,2 g ✓ Hervir durante un
Salmonella indol-, Salmonella
✓ Sulfato de minuto hasta disolver
indol +, Shigella
amonio férrico por completo.
0,2 g ✓ Distribuir en
recipientes
apropiados y
esterilizar en
autoclave a 121 ° C
durante 15 minutos
Sólidos/ Agar ✓ Extracto de ✓ Suspender 60 ➢ Escherichia coli
Selectivo Salmonella carne: 5.00 g gramos del medio en ➢ Enterococcus
–Shigella ✓ Digesto un litro de agua faecalis
(Agar SS) pancreático de destilada. ➢ Salmonella
caseína: 2.50 g ✓ Mezclar bien hasta Typhimurium
✓ Digesto péptico obtener una ➢ Shigella flexneri
de tejidos suspensión
animales: 2.50 g homogénea.
✓ Lactosa: 10.00 g ✓ Calentar con Salmonella Typhimurium
✓ Mezcla de sales agitación frecuente y
biliares: 8.50 g hervir durante un
✓ Citrato de minuto hasta disolver
sodio: 8.50 g por completo. NO
✓ Tiosulfato de AUTOCLAVAR.
Sodio: 8.50 g ✓ Enfriar a 45-50 °C y
✓ Citrato fèrrico: distribuir en placas
1.00 g de Petri.
✓ Rojo neutro:
0.025 g
✓ Agar
bacteriológico: On Salmonella-Shigella agar
13.50 g the E. coli produced slight
pinkish colonies.
 ✓ Verde brillante
(mg/L): 0.33 g
✓ pH final medio
de cultivo listo
para el uso: 7.0
+/- 0.2
Sólidos/ Agar ✓ Dextrosa 40 g ✓ Suspender 65 ➢ Candida albicans
Selectivo Dextrosa ✓ Agar gramos del medio en ➢ Aspergillus
Sabouraud bacteriológico un litro de agua brasiliensis
15 g destilada. ➢ Escherichia coli
✓ Mezcla de ✓ Mezclar bien y ➢ Lactobacillus
digerido disolver con calor y rhamnosus
péptico de agitación frecuente. ➢ Saccharomyces
tejido animal y ✓ Hervir durante un cerevisiae
pancreático de minuto hasta la
caseína (1:1) 10 disolución completa.
g ✓ Distribuir en
recipientes Candida albicans
adecuados y
esterilizar en
autoclave a 118-121
ºC durante 15
minutos. NO
SOBRECALENTAR,
ya que facilita la
hidrólisis de los
componentes y que
el medio permanezca
blando. Penicillium spp. hongo sobre
Sabouraud Dextrose Agar
(SDA)
Sólido/ Agar ✓ Agar ✓ Suspender 36 ➢ Pseudomonas
Selectivo/De Eosina y bacteriológico gramos de medio en aeruginosa
enriquecimiento Azul de 13,5 g un litro de agua ➢ Enterobacter
Metileno ✓ Peptona destilada. aerogenes
(EMB) bacteriológica ✓ Mezclar bien y ➢ Salmonella
10 g disolver calentando typhimurium
✓ Fosfato con agitación ➢ Escherichia coli
dipotásico 2 g frecuente. ➢ Staphylococcus
✓ Eosina Y 0,4 g ✓ Hervir durante un aureus
✓ Lactosa 5 g minuto hasta disolver ➢ Citrobacter spp
✓ Azul de por completo. ➢ Candida albicans
metileno 0,065 g ✓ Esterilizar en ➢ Klebsiella
✓ Sacarosa 5 g autoclave a 121 ºC pneumoniae
durante 15 minutos. ➢ Candida albicans
✓ Enfriar a 45-50 ºC,
mezclar bien, evitar la
formación de
burbujas y dispensar
cuidadosamente en
placas de Petri. NO
SOBRECALENTAR.
Brillo metálico de
Escherichia coli en agar EMB
Sólidos/ Agar ✓ Agar ✓ Suspender 52 ➢ Neisseria
Selectivo Infusión bacteriológico gramos del medio en meningitidis
Cerebro 15 g un litro de agua ➢ Aspergillus
Corazón ✓ Infusión de destilada. brasiliensis
(Agar ICC) corazón de vaca ✓ Mezclar bien y ➢ Streptococcus
10 g disolver con calor y pyogenes
✓ Dextrosa 2 g agitación frecuente. ➢ Streptococcus
✓ Fosfato ✓ Hervir durante un pneumoniae
disódico 2,5 g minuto hasta disolver ➢ Saccharomyces
✓ Mezcla de por completo. cerevisiae
peptona 10 g ✓ Esterilizar en
✓ Cloruro sódico autoclave a 121 ºC
5g durante 15 minutos.
✓ Infusión de
cerebro de
ternera 7,5 g

Líquidos / jugo de ✓ 1 g suelo de ✓ Mezclar el gramo de ➢ Guehomyces

Naturales/ manzana Antártida suelo de Antártida pullulans
Comunes ✓ 9 mL jugo de con el jugo de ➢ Cystofilobasidium
manzana. manzana. infirmominiatum
✓ En un envase de ➢ Metschnikowia
cristal se incuba pulcherrima
durante 10 días a una ➢ Leucosporidium
temperatura entre 8 – scottii
10 °C ➢ Rhodotorula
✓ Se aísla en Agar jugo mucilaginosa
de manzana y se ➢ Cryptococcus
mantiene en neoformans
incubación durante 7 ➢ Debaryomyces
– 10 días a 8 – 10°C hansenii
➢ Candida albicans
Líquidos/ jugo de ✓ 2 mL de jugo de ✓ En la caja petri ➢ Alicyclobacillus
Naturales/ naranja naranja sin mezclar el jugo spp
Comunes pasteurizar pasteurizado junto
✓ 5 mL de jugo de con el agua y la
naranja muestra de suelo.
pasteurizado. Incubar durante 5
✓ 5 mL de agua y días a 50°C.
suelo donde se ✓ Agregar los 2 mL de
cultivó la jugo de naranja sin
naranja. pasteurizar y volver a
incubar durante 2
días a 50 °C
Sólidos/ Papa ✓ 1 papa dañada • La papa dañada se ➢ Enterobacter
Naturales/ (pudrición o envuelve en papel aerogenes
Comunes necrosis) absorbente y se mete a ➢ Pseudomonas
✓ Papel absorbente una bolsa de polietileno, fluorescens
✓ Bolsa de polietileno se cierra y se deja a ➢ Streptomyces
temperatura ambiente ➢ Fusarium
durante 4 días. oxysporum
➢ F. solani
➢ F. verticillioides
➢ Rhizoctonia
solani
➢ Alternaria sp.
➢ Colletotrichum
sp.
➢ Clonostachys sp.
➢ Geotrichum sp
Spongospora
subterranea
Líquidos/ jugo de ✓ 2 mL de agua ✓ Mezclar 3 mL de jugo ➢ Klebsiella
Naturales/ vegetales destilada V8 y cada uno de los pneumoniae
Comunes ✓ 6 mL de jugo V8 demás componentes ➢ Staphylococcus
✓ Muestra de en un matraz y dejar aureus
suelo de cultivo incubar tapado ➢ Candida
durante 1 día a 35°C. ➢ Bacillus
Posteriormente
pasarlo a una caja
Petri y agregar otros
3 mL e incubar
durante 4 días a 35°C

Sólidos/ Agar ✓ Nitrato sódico ✓ Disolver 46 g en 1 ➢ Candida albicans

Sintéticos/ De Czapek 2,00 g litro de agua ➢ Aspergillus niger
enriquecimiento DOX ✓ Cloruro destilada. ➢ Penicillium
potásico 0,50 g ✓ Calentar y agitar atrovenetum
✓ Sulfato hasta su completa
magnésico 0,50 disolución.
g ✓ Autoclavar a 115 ºC
✓ Sulfato ferroso durante 20 minutos.
0,01 g ✓ Mezclar bien antes de
✓ Fosfato verter en las placas.
dipotásico 1,00 ✓ Para ajustar el pH a
g 3’5, añadir 10 ml de
✓ Sacarosa 30,00 solución estéril de
g ácido láctico al 10%
✓ Agar agar 12,00 por litro de medio.
g ✓ No recalentar.
Líquidos/ Caldo ✓ Fosfato ✓ Suspender 5,7 ➢ Escherichia coli
Sintéticos/ De Citrato monopotásico 1 gramos del medio en ➢ Enterobacter
enriquecimiento Koser g/L un litro de agua aerogenes
✓ Citrato de sodio destilada.
3 g/L ✓ Mezclar bien y
✓ Fosfato de disolver por
sodio y amonio calentamiento
1,5 g/L agitando con
✓ Fosfato frecuencia.
magnésico 0,2 ✓ Hervir durante un
g/L ✓ minuto hasta su
completa disolución.
✓ Dispensar en tubos
con tapón de rosca y
esterilizar en
autoclave a 121 ºC
durante 15 minutos.
✓ Ajustar bien las
✓ tapas después de la
esterilización.
Sólidos/ Extracto de Fórmula (en ✓ Se suspendieron ➢ Aspergillus
Semisintéticos/ levadura gramos por litro) todos los brasiliensis
Diferencial ✓ Extracto de ingredientes en 1litro ➢ Saccharomyces
✓ Levadura 5.0 de agua purificada. cerevisiae
✓ Glucosa 20.0 ✓ Se dejó reposar 5
✓ Cloranfenicol minutos.
0.1 ✓ Se calentó con
✓ Agar 14.9 agitación frecuente y
llevó a ebullición para
disolución total.
✓ Se distribuyó en
recipientes
adecuados y
esterilizó en
autoclave durante 15
minutos a 121°C. Se
distribuyó en placas
de Petri estériles en
condiciones
asépticas controlado
por monitoreo
ambiental.
 ✓ Cada placa de Petri
fue sellada con
parafilm.

Semisólidos/ Medio ✓
Peptona 5 g ✓ Colocar los frascos ➢ Aspergillus
Semisintéticos/ glucosado ✓
Tripteína 5 g cerrados en baño brasiliensis
Diferencial de ✓
Glucosa 40.0 g maría y llevar a ➢ Candida albicans
Sabouraud ✓
Cloranfenicol ebullición para ➢ Trichophyton
0.05 g ✓ fundir el medio de mentagrophytes
✓ Agar 15.0 g cultivo sólido ➢ Saccharomyces
✓ Agua purificada contenido en los cerevisiae
1000 ml mismos.
✓ Una vez que se ha
fundido el medio de
cultivo, retirar
cuidadosamente los
frascos del baño
maría y dejar enfriar.
✓ Cuando alcanzan
temperatura 45-50 ºC,
abrirlos y distribuir
aproximadamente 15
ml en placas de Petri
estériles
Semisólidos/ Medio de ✓ Pulpa de ✓ La pulpa de plátano ➢ Klebsiella
Semisintéticos/ plátano plátano 60 g es triturada en un pneumoniae
Común – de (banana) ✓ Ácido tartárico mortero, mezclada ➢ Enterococcus
enriqusimiento al 1% 100 ml ✓ con el ácido tartárico ➢ Candida albicans
✓ Agar GC 32.5 g y 300 ml de agua ➢ Staphylococcus
✓ Agua bidestilada, y spp-
bidestilada 400 ✓ calentada hasta la ➢ Hongo
ml ebullición. filamentoso.
✓ Debe regularse el pH
a 5 con
✓ ácido tartárico. Se fi
ltra en gasa. Se añade
el agar previamente
✓ disuelto en los 100 ml
de agua bidestilada
restantes.
✓ Debe calentarse
hasta la ebullición y
 completarse la
homogeneización.
✓ El pH debe ajustarse
a 6 a 6.5. Se
distribuye dentro de
tubos y se esteriliza
en autoclave a 121 °C
por 15
✓ minutos.
Semisintéticos/ Agar ✓ Semilla de niger ✓ Debe remojarse el ➢ Cryptococcus
De alpiste o alpiste negro alpiste negro en 1 L neoformans
enriquecimiento negro (Guizotia de agua, hervir
abyssinica) ✓ por 30 minutos y
pulverizado, luego filtrarlo en gasa
✓ 70 g. y papel filtro.
✓ Cloranfenicol ✓ Se repone
50 mg ✓ el volumen a 1 L de
✓ Agar agua y se esteriliza a
bacteriológico 120 °C durante 20
20 g ✓ minutos.
✓ Agua destilada
1 000 ml

Sólidos/ Medios Recuento FÓRMULA (en ✓ Suspender 23,5 g del ➢ Escherichia coli
de cultivo en Placa gramos por litro) polvo en 1 litro de ➢ Staphylococcus
preparados a Agar ✓ Extracto De agua purificada. aureus
partir de Levadura 2.5 ✓ Dejar reposar 5 ➢ Bacillus subtilis
fórmulas ✓ Tripteína 5.0 minutos. ➢ Lactobacillus
deshidratadas/ ✓ Glucosa 1.0 ✓ Calentar con fermentum
Diferencial ✓ Agar 15.0 agitación constante y
llevar a ebullición
para disolver
completamente.
✓ Distribuir en
recipientes
apropiados y
esterilizar en
autoclave a 121 ºC
durante 15 minutos.
Sólidos/ Medios Bacillus FÓRMULA (en ✓ Suspender 40 g del ➢ Bacillus cereus
de cultivo cereus gramos por litro) polvo en 950 ml de ➢ Staphylococcus
preparados a Selectivo ✓ Peptona de agua purificada. aureus
partir de Agar carne 1.0 Dejar reposar 5 a 10 ➢ Bacillus subtilis
fórmulas ✓ Manitol . 10.0 minutos.
deshidratadas/ ✓ Cloruro de ✓ Calentar con
Diferencial sodio 2.0 agitación frecuente y
✓ Sulfato de hervir durante 1
magnesio 0.1 minuto hasta
✓ Fosfato completar disolución.
disódico 2.5 ✓ Distribuir en
✓ Fosfato recipientes
monopotásico ✓ apropiados y
0.25 esterilizar en
✓ Azul de autoclave a 121°C
bromotimol 0.12 durante 15 minutos.
✓ Piruvato de ✓ Enfriar a 50°C y
sodio 10.0 asépticamente
✓ Agar 14 agregar 50 ml de
emulsión yema
Sólidos/ Medios DNAsa FÓRMULA (en ✓ Suspender 42 ➢ Sthaphylococcus
de cultivo Agar gramos por litro) gramos del polvo en aureus
preparados a ✓ Tripteína 20.0 1 litro de agua ➢ Staphylococcus
partir de ✓ Acido purificada. Dejar epidermidis
fórmulas desoxirribonucl ✓ reposar 5 minutos. ➢ Klebsiella
deshidratadas/ eico 2.0 Calentar con pneumoniae
Enriquecido ✓ Cloruro de agitación frecuente y ➢ Serratia
sodio 5.0 llevar a ebullición marcescens
✓ Agar 15.0 para disolución ➢ Enterobacter
completa. cloacae
✓ Distribuir en
recipientes
apropiados
✓ y esterilizar en
autoclave a 121 ºC
durante 15 minutos.
Distribuir en
✓ placas de Petri
estériles.
Sólidos/ Medios Bilis FÓRMULA (en ✓ Suspender 64,5 g del ➢ Enterococcus
de cultivo Esculina gramos por litro) polvo en 1 litro de faecalis
preparados a Agar ✓ Extracto de agua purificada. ➢ Proteus mirabilis
partir de carne 3.0 Dejar
fórmulas ✓ Peptona de ✓ reposar 5 minutos.
deshidratadas/ carne 5.0 ✓ Calentar a ebullición
Enriquecido ✓ Bilis de buey hasta su completa
40.0 disolución.
✓ Esculina 1.0 ✓ Distribuir en tubos u
✓ Citrato férrico otros recipientes
0.5 apropiados y
✓ Agar 15.0 esterilizar en
autoclave a 121
✓ ºC durante 15
minutos

Semisólido/ De Medio ✓ Glicerofosfato ✓ Disolver 14,1 g del ➢ Neisseria

transporte Stuart sódico 10.0 medio en 1 litro de meningitidis
✓ Tioglicolato agua destilada. ➢ Haemophilus
sódico 1.0 ✓ Calentar agitando influenzae
✓ Cloruro cálcico 0.1 hasta ebullición para ➢ Streptococcus
✓ Azul de Metileno su disolución. pyogenes
0.002 ✓ Dispensar en tubos o ➢ Streptococcus
✓ Agar-agar en escobillones y pneumoniae
bacteriológico autoclavar a 121ºC ➢ Corynebacteri
3.00 durante 15 minutos. um diphteriae
✓ (Fórmula en ✓ Enfriar rápidamente y ➢ Bordetella
gramos por litro) almacenar el medio pertusis
pH final: ajustar a preparado a 2-8ºC.
7,4 ± 0,2 ✓ El medio final debe ser
azul en su superficie.
Semisólidos/ Amies sin ✓ Agar N° 2 7, ✓ Suspender 13,2 ➢ Neisseria
Conservación Carbón ✓ Cloruro cálcico gramos del medio en gonorrhoeae
/De transporte 0,1 un litro de agua ➢ Shigella flexner
✓ Cloruro destilada. ➢ Brucella
magnésico ✓ Mezclar bien y disolver abortus
anhidro 0,1 con calor y agitación ➢ Streptococcus
✓ Cloruro potásico frecuente. pneumoniae
0,2 ✓ Hervir durante un ➢ Salmonella
✓ Dihidrogenofosfa minuto hasta disolver typhi
to de potasio 0,2 por completo. ➢ Brucella
✓ Cloruro sódico 3 ✓ Distribuir en tubos y abortus
✓ Hidrogenofosfat esterilizar en autoclave ➢ Streptococcus
o de sodio 1,1 a 121 °C durante 15 pneumoniae
✓ Tioglicolato de minutos.
sodio 1

Semisólidos/ Cary-Blair. ✓ Cloruro sódico ✓ Disolver 13,2 g del ➢ Shigella flexneri

De transporte 5g medio en 1 litro de ➢ Neisseria
✓ Tioglicolato agua destilada. meningitidis
sódico 1,5 g ✓ Calentar agitando ➢ Haemophilus
✓ Cloruro cálcico hasta ebullición para influenzae
0,09 g su disolución. ➢ Neisseria
✓ Disodio fosfato ✓ Dispensar en tubos gonorrhoeae
1,1 g con escobillones. ➢ Streptococcus
✓ Agar-agar 5,5 g ✓ Autoclavar a 116 ºC pneumoniae
(Fórmula por durante 15 minutos. ➢ Bordetella
litro) pH final: 5,3 ✓ Cerrar cada tubo con pertussis
± 0,2 escobillón en cuanto
se enfríe el medio.
 Base salina ✓ Disuelva los productos ➢ Neisseria
Líquidos/ De de glicerol ✓ Cloruro de sodio químicos secos en el meningitidis
transporte tamponado 4.2 g agua y ajuste el pH a ➢ Staphylococcus
✓ Hidrogenofosfat 7,2. aureus
o disódico. 3.1 g ✓ Agregue la solución de ➢ Staphylococcus
✓ Dihidrogenofosfa rojo de fenol y el epidermidis
to de potasio 1 g glicerol. Mezclar ➢ Streptococcus
✓ Rojo fenol, 1% p / bien. Dispensar en pneumoniae
v *0.3ml cantidades de 7 ml en ➢ Streptococcus
✓ Glicerol 300 ml frascos con tapón de pyogenes
✓ Agua destilada rosca.
700 ml ✓ Esterilizar en
autoclave (con las
tapas sueltas) a 121 ° C
durante 15
minutos. Cuando esté
frío, apriete las tapas.
✓ Etiqueta las
botellas. Feche el
medio y asígnele un
número de lote.

✓ Infusión de carne ✓ Disolver 38 g de medio ➢ Staphylococcus

Sólidos/ Agar Mueller 2,0 g en 1 litro de agua aureus
Enriquecidos Hinton ✓ Peptona de destilada. ➢ Streptococcus
caseína 17,5 g ✓ Calentar hasta pyogenes
✓ Almidón 1,5 g ebullición, agitando ➢ Proteus
✓ Agar agar 17,0 g para su disolución. mirabilis
✓ Autoclavar a 121 ºC ➢ Pseudomonas
durante 15 minutos, o aeruginosa
bien a 116 ºC durante ➢ Enterococcus
15-30 minutos. faecalis
Sólidos/ Agar ✓ Pluripeptona (5.0g) ✓ Suspender 31 g del ➢ Escherichia
Complejos nutritivo ✓ Extracto de carne polvo en 1 litro de agua coli
(3.0g) purificada. ➢ Staphylococcu
✓ Cloruro de sodio ✓ Mezclar y dejar reposar s aureus
(8.0) 5 minutos. ➢ Enterococcus
✓ Agar (15.0g) ✓ Calentar agitando faecalis
✓ pH final: 7.3 ± 0.2 frecuentemente y ➢ Pseudomonas
hervir 1 o 2 minu aeruginosa
✓ tos hasta su disolución
total.
✓ Distribuir en
recipientes apropiados Placa de nativo agar
y esterilizar en
autoclave a 121°C
durante 15 minutos.

Inoculación de cepas patógenas en

cajas con agar nutritivo

Sólidos/ Agar ✓ Hidrolizado ✓ Retirar el paquete de la ➢ Haemophilus

Enriquecidos chocolate pancreático de refrigeración y, en influenzae
caseína (7.5g) ambiente aséptico, ➢ Neisseria
✓ Peptona de carne separar las placas que gonorrhoeae
(7.5g) se utilizarán, ➢ Neisseria
✓ Fosfato dipotásico devolviendo el resto al meningitidis
(4.0g) refrigerador ➢ Streptococcus
✓ Fosfato ✓ Colocar las placas en pneumoniae
monopotásico estufa bacteriológica ➢ Moraxella
(1.0g) entre 35-37ºC por el catarrhallis
✓ Almidón de maíz tiempo necesario para
(1.0g) que adquieran esta
✓ Cloruro de sodio temperatura o dejar Placa de agar chocolate
(5.0g) estabilizar/secar a
✓ Agar Base (13.0g) temperatura ambiente
✓ Hemoglobina ✓ Usando
(10.0g) procedimientos
✓ Complemento VX adecuados, proceder a
(10 mL) la inoculación del
✓ H2O ultra material directamente
 purificada (1L) en la superficie del
✓ pH final: 7,3 ±0,2 a medio
25ºC ✓ Incubar el material
bajo tensión de CO2 en
estufa bacteriológica
entre 35-37ºC/18-24h
✓ Tras la incubación,
verificar el crecimiento
y la ocurrencia de
hemólisis si fuera el
caso (evidenciada a
través de la
visualización de un
halo alrededor de la
colonia)
✓ Tras el total desarrollo
de las colonias,
proceder con los
procesos de
identificación
conforme establecido
en su laboratorio.

Sólidos/ Agar ✓ Peptona de ✓ Rehidratar 50 g del ➢ Escherichia

Selectivos MacConkey especial (3.0g) medio en un litro de coli (rosado-
✓ Peptona de agua destilada. rojizo)
gelatina (17.0g) Reposar 10 a 15 ➢ Klebsiella
✓ Lactosa (10.0g) minutos. pneumoniae
✓ Mezcla de sales ✓ Calentar agitando (rosado-rojizo)
biliares nº3 (1.5g) frecuentemente hasta ➢ Salmonella
✓ Cloruro de sodio el punto de ebullición typhinmurium
(5.0g) durante 1 minuto para (incoloro)
✓ Rojo neutro (0.03g) disolverlo por ➢ Shigella
✓ Cristal violeta completo. flexneri
(0.001g) ✓ Esterilizar en autoclave (incoloro)
✓ Agar (13.5g) a 121ºC (15 lbs de ➢ Proteus
✓ pH final: 7.2 ± 0.2 presión) durante 15 mirabilis Placa de agar MacConkey con
minutos. (incoloro) crecimiento característico de
✓ Enfriar Escherichia coli.
aproximadamente a
45°C.
 ✓ Vaciar en cajas de Petri
estériles. Conservar en
refrigeración de 2 a
8ºC.

Colonias de Shigella flexneri y

Escherichia coli en agar MacConkey
(AMC)

Sólidos/ Agar CLED ✓ Agar ✓ Suspender 36 gramos ➢ Enterobacter

Diferencial (cistina- bacteriológico del medio en un litro de aerogenes
lactosa (15.0g) agua destilada. (Medio
deficiente en ✓ Azul de ✓ Mezclar bien y disolver amarillo claro-
electrolitos) bromotimol (0.02g) calentando con azul)
✓ Peptona de agitación frecuente. ➢ Proteus
caseína (4.0 g) ✓ Hervir durante un vulgaris
✓ Peptona de minuto hasta disolver (Medio azul-
gelatina (4.0g) por completo. azul verdoso)
✓ Lactosa (10.0g) ✓ Esterilizar en autoclave ➢ Klebsiella
✓ L-Cistina (0.128g) a 121 ºC durante 15 pneumonieae
✓ Extracto de carne minutos. ➢ Enterococcus
(3.0g) ✓ Dejar enfriar a 50 ºC, faecalis (Medio Crecimiento bacteriano sobre agar
mezclar bien y amarillo claro) CLED
distribuir en placas. ➢ Escherichia
coli (Medio
amarillo)
➢ Staphylococcu
s aureus
(Medio
amarillo claro)

fotografía del cultivo de las bacterias

más frecuentes causantes de
infección urinaria
Sólidos/ Agar ✓ Agar ✓ Suspender 39 gramos ➢ Candida
Semisintéticos/ Dextrosa y bacteriológico 15 g de medio en un litro de albicans
Enriquecidos Patata ✓ Dextrosa 20 g agua destilada. ➢ Aspergillus
✓ Almidón de patata ✓ Mezclar bien y disolver brasiliensis
(equivalente a 200 con calor y agitación ➢ Trychophyton
g de Infusión de frecuente. mentagrophyt
patatas) 4 g ✓ Hervir durante un es
minuto hasta la ➢ Saccharomyce
disolución completa. s cerevisiae
✓ Esterilizar en autoclave
a 118-121 ºC durante 15
minutos.
✓ Enfriar a 45-50 ºC,
mezclar bien y
distribuir en placas.
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