Columnas y

precolumnas

Equipo 2
Alma Laura González Hernández
Adriana González Martínez
Fernando Aldair Morales Hurtado
Gustavo Pérez Garfias
Stephanie A. Romero Blancas
Columnas
Están hechas de tubería de acero inoxidable
o tubería de vidrio o polímeros como
polieteretercetona (PEEK)

También hay columnas de acero inoxidable

recubiertas con vidrio o PEEk

El costo de una columna no especializada

de tamaño estándar va de 200 a más de 500
dólares
Columnas analiticas

● Longitud de entre 5 y 35 cm
● Diámetros internos de 3 a 5 mm
● Tamaño de partícula para
empacamiento es de 3. 5 y 10 micras
● Siempre se utilizan columnas rectas

*La más utilizada es de

● 10-15 cm de longitud
● 4.6 mm de diámetro interno
● Empaquetada con tamaño de
partículas de 5 μm
● Tienen de 40,000 a 60000
platos/metro
Partes

Las columnas más utilizadas son las de

relleno, consisten en un tubo generalmente
de acero, relleno de una fase estacionaria
adecuada al tipo de separación que se
pretende llevar a cabo

El diámetro interno varía entre 2 y 60 mm, la

longitud varía entre 5 y 30 cm

Tubos de acero inoxidable

● Longitud :10-30 cm
● Diámetro interno:2-5 mm
● Partículas para empaquetamiento
de la columna 3-10 micrometros
Micro-columnas
Tienen diámetro menor a 1mm.

3 tipos

● Tubular abierto
● Parcialmente empacadas
● Fuertemente empacadas

Permite trabajar con volúmenes muy

pequeños, disminuyendo el flujo y volumen
de solvente usado
 Pre-columnas
Para aumentar la vida de la columna
analitica se coloca delante una pre-columna
que elimina la materia en suspensión y los
contaminantes de los disolventes

Actúan como un filtro, si ésta, empieza a

bloquearse(la presión aumentará, para
mantener la misma velocidad de flujo, de ser
necesario la precolumna puede ser
removida, limpiarla y reemplazarla)

La regla general para seleccionar una

precolumna es que sea similar a la columna
analitica. Los diámetros internos tienen que
ser muy parecidos y tanto la fase como el
tamaño de partícula deberían de ser los
mismos o semejantes
Se utilizan dos tipos de precolumnas

● De desperdicios : Entre el reservorio de fase móvil y el inyector

para acondicionar la fase móvil. El disolvente se disuelve
parcialmente en el empacamiento de sílice y asegura que la
fase móvil se sature con ácido silico antes de entrar a la
columna analitica

Esta saturación minimiza las pérdidas de la fase estacionaria de

la columna analitica

● De protección: Entre el inyector y la columna analitica. El

propósito de la columna de protección es prevenir que
impurezas como los compuestos altamente retenidos y la
materia particulada alcncen y contamienen a la columna
analitica.

Se reemplaza de manera regular y sirve para incrementar la

vida media de la columna
Empacamientos de columnas

Partículas peliculares y Partículas porosas

Originalmente eran perlas de vidrio o de polímero, esféricas, no porosas y con diámetros de

30 y 40 um

Capa delgada de sílice o alúmina depositada en la superficie de estas perlas

Las micropartículas porosas pequeñas han reemplazado a estas partículas peliculares grandes

El empacamiento de partículas porosas para cromatografía líquida consiste en

micropartículas porosas con diámetros que van de los 3 a los 10 um.

Estas partículas están compuestas de sílice o alúmina, siendo las de sílice el

empacamiento más común para cromatografía líquida
 Muestra

Peso molecular
<2000

Soluble en
Soluble en
agua
disolvente
orgánico

1
5
3
Soluble en metanol
hexano acetonitrilo Soluble en THF No iónica Iónica

2 4
1 Modo de fase normal con sílice sin tratar.
Modo de fase normal con fase ligada.

2 Modo de fase reversa con fase ligada.

3 Permeación en gel (molécula pequeña).

4 Modo de fase reversa con fase ligada.

5 Modo de fase reversa con fase ligada utilizando el control

de ionización.
Modo de fase reversa con fase ligada utilizando un agente
de par iónico.
Modo de fase reversa con sílice sin tratar.
Modo de intercambio iónico.
 Muestra

Peso molecular
>2000

Soluble en
Soluble en
agua
disolvente
orgánico

Modo de Modo de fase

Cromatografía de intercambio iónico reversa con
Cromatografía de material de poro
permeación en gel filtración en gel con material de
poro ancho ancho
E j e m p l o s
 Poroshell 120
● Alta eficiencia y alta resolución.

● 50% menos de presión que las columnas sub 2 micras.

● forma de pico definida.

Tamaño de partícula de 2.7 µm

Este tamaño de partícula reducido consigue una alta eficiencia,
similar a la de columnas sub 2 micras pero con un 40-50% menos
de presión.

La capa exterior porosa y el núcleo sólido limitan la distancia de

difusión y mejoran la velocidad de separación, al tiempo que la
estrecha distribución de tamaños de partícula mejora la eficiencia y
la resolución
Ejemplo de columna de alta ZORBAX StableBond de 80 Å
duración.

Buena reproducibilidad en
separaciones de pH bajo. pH = 1

Uso recomendado incluso a elevadas

temperaturas sin degradación.

Óptima forma de pico.

La sílice de alta pureza y baja acidez

proporciona una forma de pico excelente con
compuestos ácidos, básicos y neutros,
 Proporcionan picos simétricos
Estándar de referencia de las para mejorar la resolución de
columnas para HPLC de sílice compuestos ácidos, neutros y
básicos

Con fases móviles de pH

incorporan un relleno basado bajo, estas columnas tienen
en sílice Disponibles en tamaños una vida útil que supera al
de partículas de 5 y 10 de otras columnas para
µm. HPLC
 pueden usarse para el desarrollo
ZORBAX Eclipse XDB inicial del método a pHs bajos
(2-3) y proporcionará una alta
resolución y forma de pico
Es una opción de confianza para métodos analíticos. excelente en todos los tipos de
compuestos.

La misma columna puede usarse

• Buena forma de pico para compuestos
para el desarrollo del método en
básicos, ácidos y neutros
regiones con pHs medios (6-8).
• Alto rendimiento en un amplio rango de
pH (de 2 a 9)

• Disponibles en tamaños de partícula de

1,8 µm a 7 µm
 Compuestos polares
● rendimiento
● versatilidad
● retención

Compatibilidad con fase móviles totalmente acuosas

Para maximizar la retención de los compuestos polares con métodos de fase

reversa sin correr el riesgo de que se produzca una deshumectación de los poros
ni el colapso hidrofóbico de la fase estacionaria.

Larga vida útil de las columnas con fases móviles de ph bajo.

Resiste la hidrólisis del ligando cuando se usa fases móviles muy

ácidas, lo que mantiene la eficacia del método, la retención del
compuesto y la selectividad crítica del analito..
 Separaciones a pH altos

● mejora las formas de picos de los compuestos básicos

Eficacia de la sílice con la estabilidad de los polímeros

Empleo de fase estacionaria basada en polímeros. Como resultado, un

material robusto con resistencia mecánica elevada, alta eficacia, forma
de picos excelente para bases y un escalado sencillo de la
cromatografía analítica a la preventiva.
 Separar con facilidad las coeluciones de analitos más dificultosas
● mejora la capacidad para separar picos que eluyen muy cerca
● proporciona la mayor capacidad de carga de analito que se encuentra disponible
● reduce el tiempo y costos asociados al desarrollo de métodos

Aislamiento y purificación

Proporciona de forma sistémica picos estrechos bajo

condiciones de carga altas y otorgan al técnico en
cromatografía la posibilidad de separar productos de
degradación o impurezas a nivel de trazas y, por tanto, permite
una mayor capacidad de carga reduciendo el tiempo y
consumo de eluyente.
Gracias
REFERENCIAS

● http://cientificanacional.com.ar/v2/catalogos/Croma%20-%20Columnas%20HP
LC%20-%20Catalogo.pdf
● https://www.waters.com/webassets/cms/library/docs/720003995es.pdf
● Daniel C. Harris. (2007). Análisis químico cuantitativo. Barcelona. España: Reverte.
● Douglas. A. Skoog. (2015). Fundamentos de Química Analítica, novena edición. México. Cengage
Learning.