Cadena Respiratoria Y

Fosforilación
oxidativa

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 CADENA RESPIRATORIA
FOSFORILACION OXIDATIVA

•Transferencia de electrones

•Complejos proteicos

•Síntesis de ATP

•Inhibidores de la respiración
celular

•Desacopladores

•Lanzaderas

Estos son los principales puntos a tratar en la clase

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 CONTEXTO……

Fosforilación a nivel de sustrato

Fosforilación oxidativa

Toda célula requiere formar ATP, ésta molécula energética que permite que
ocurran diversos procesos celulares, como la contracción muscular, el
funcionamiento de las bombas proteicas, el movimiento de organelos y
vesículas intracelulares, etc, se forma principalmente por 2 mecanismos:
i) Fosforilación a nivel de sustrato, reacción que permite la transferencia de un
grupos fosfato desde una molécula de alta energía hacia el ADP gracias a una
quinasa, tal y como ocurre en la fase 2 de la glicólisis
ii) Fosforilación oxidativa: proceso que requiere de la ATP sintasa, la cual
forma ATP a partir de ADP y Pi y cuyo funcionamiento depende la existencia
de un gradiente de protones, pues la energía en este caso, proviene del flujo
de protones.

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 MÁS CONTEXTO……

Transporte de electrones: Fosforilación

Electrones llevados en oxidativa: La gradiente
las coenzimas reducidas de protones es la fuerza
producidas en el ciclo de Krebs son motriz que permite la
pasados a través de una cadena de sintesis de ATP
proteinas y coenzimas generando
una gradiente de protones en el
interior de las membranas de la
mitocondria

Debido a que la ATP sintasa requiere de una gradiente de protones, es que se

necesita la cadena transportadora de electrones, que es la encargada de
generar esta gradiente de protones, pero para hacerlo, requiere de NADH o
FADH, ambas moléculas formadas principalmente durante el ciclo de Krebs,
por esto, tal y como muestra la imagen. Los 3 procesos están relacionados y
son secuenciales.
NADH se forma también durante la reacción de oxidación del piruvato, cuando
el piruvato se transforma en acetil CO-a, este NADH al igual que los del ciclo
de Krebs, se forman en la matriz mitocondrial.
Es importante además destacar que NADH se forma también durante la
glicolisis, sin embargo, este proceso ocurre en el citoplasma de la célula

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 Localización

Tanto la cadena transportadora de electrones como la fosforilación oxidativa,

son procesos que se llevan a cabo en la mitocondria, organelo fundamental
para que la respiración celular se lleve a cabo.
La mitocondria presenta distintas regiones que son:
i) La membrana externa
ii) La membrana interna que presenta pliegues (también llamadas crestas
mitocondriales), y es acá donde encontraremos a los complejos que
forman la cadena transportadora y también a la ATP sintasa
iii) El espacio intermembrana, que juega un rol protagónico pues en esta
región se acumulan los protones que son movilizados por la cadena
iv) La matriz mitocondrial, que el la región donde se lleva a cabo, la oxidación
del piruvato, el ciclo de Krebs y donde finalmente se forma el ATP gracias
a la ATP sintasa

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 Transporte de Electrones
Se requiere de:
• Cuatro complejos proteicos localizados en la
membrana interna de la mitocondria
• Coenzimas liposolubles llamada ubiquinona
(UQ) o coenzima Q (CoQ)
• Una proteína soluble del espacio
intermembrana (cyt c) traspasan los
electrones entre los complejos proteicos.

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 Componentes proteicos de la cadena

En esta tabla se pueden vizualizar los componentes proteicos que

forman la cadena transportadora de electrones
Se pueden ver entonces, que la cadena está conformado por 4
complejos proteicos, además, del citocromo c
OJO: la coenzima Q no aparece pues es una molécula lipídica, pero SI
forma parte de la cadena
Tanto el citocromo c como la Coenzima Q, son elementos móviles de la
cadena
En la tabla, se pueden ver, además, los difrentes grupos prostético que
forman parte de cada complejo, y que son los encargados de movilizar
los electrones

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 Importancia de ADN mitocondrial

Esta imagen muestra que varias cadenas peptídicas que forman los
complejos de la cadena y también de la ATP sintasa están codificadas en
genes del ADN mitocondrial
Es importante mencionar además, que muchos libros denominan a la ATP
sintasa como complejo V, para reafirmar la idea de secuencia y relación entre
su función y el de la cadena, pero se puede prestar para confusión, pues
puede inducir al error de creer que este complejo también participa del
movimiento de electrones y forma parte de la cadena transportadora en sí.

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 Potencial de reducción
ΔG=-nFΔε

Pero…¿Qué guía a los electrones a ser traspasados de una molécula a otra,

es decir, que factor, dirige la direccionalidad de este movimiento y por ende
que ocurran las reacciones de redox? La respuesta a esto se encuentra en el
potencial de reducción estándar, este valor, representa la tendencia de una
molécula a recibir electrones, además, los electrones siempre se transfieren
de una molécula o ión, con menor potencial de reducción a otra con mayor
potencial de reducción.
Finalmente el cambio en el potencial de reducción determina el ∆G de una
reacción, es decir, si esa reacción redox, libera o no energía.
En la tabla de la imagen vemos que los electrones son entregados desde, por
ejemplo el NADH, con bajo potencial estándar de reducción hasta por
ejemplo, el oxígeno, el cual posee una elevado potencial de reducción. La
imagen muestra además, que las reacciones redox mediadas por los
complejos I, III y IV generan energía.

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 Centros Hierro-Azufre Grupos HEM

Para participar de la cadena, los complejos proteicos que lo forman,

deben poseer grupos prostéticos que participen de reacciones redox.
En esto, el hierro es un bioelemento importante, y lo podemos
encontrar presente tanto en centro denominados hierro/azufre, como
formando parte de los grupos Hemo (presente en los citocromos)
En cualquiera de estos casos, estos grupos prosteticos participan de de
reacciones redox de un electron.
Se puede ver, además, que en los grupos Hemo, el anillo porfirinico
rodea al átomo de hierro, y que los distintos tipos de citocromos,
difieren entre sí, en las cadenas que laterals que se unen al anillo
central

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 FMN

Este grupo prostético participa de la transferencia de 2 electrones, y es

fundamental, pues forma parte del complejo I y es el encargado de
captar los 2 electrons que son entregados por el NADH, si bien,el FMN
recibe 2 electrones,quedando como FMNH2, puede transfiere a su vez
estos electrones, pero 1 por vez a los centros hiero-azufre, quienes
sólo pueden portar un electron por vez. Esto se logra, gracias a que el
FMN, tiene un estado de semiquinona o forma radicalaria, por lo cual,
puede entregar 1 electron primero, quedando como radical, y
posteriormente el otro quedando totalmente oxidado (FMN)

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 CoQ-Ubiquinona (UQ)

La ubiquinona, nombre que recibe esta molécula en su estado totalmente

oxidado, también tiene un estado radicalario o semiquinona, es decir, también
puede recibir o entregar en total 2 electrones, pero 1 por vez. Cuando porta
ambos electrones se denomina ubiquinol.
Algunos libros le dan la denominación de coenzima Q, pues en el ser humano,
esta molécula presenta 10 repeticiones de su cadena lateral (R)

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 Elementos que contribuyen con electrones
para formar UBIQUINOL

La molécula de ubiquinol, es lipídica y se mueve por la membrana

mitocondrial interna gracias a sus cadenas laterales largas (Q10 por ejemplo).
En su formación, es decir, le entregan electrones, varios complejos proteícos,
particularmente importante son el complejo I, quien recibe los electrones
desde el NADH y los moviliza hasta la coenzima Q, los mismo hace el
complejo II, pero con electrones provenientes del FADH, formado em el ciclo
de Krebs.
La imagen también muestra el rol de la acil-CoA deshidrogenasa, que
participa de la oxidación de ácidos grasos, y que por formar FADH2, también
aporta con electrones que llevan a la formación de ubiquinol.

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 Cadena Respiratoria
Transporte de Electrones

Vista del flujo de los electrones con énfasis en los grupos prostéticos de cada
complejo, que son los encargados de movilizar los electrones, la fecha indica
el flujo que estos electrones seguirán hasta llegar al oxígeno

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 Complejo I
NADH-CoQ Reductasa
• Transferencia de electrones desde NADH a CoQ
• Mas de 30 subunidades proteicas componen este
complejo – masa de 850 kD
• Ruta de los electrones:
NADH → FMN → Fe-S → UQ→ FeS → UQ
• Cuatro H+ se traspasan por 2 e-

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El NADH entrega sus 2 electrones de una vez y son recibidos por el FMN,
quedando convertido en FMNH2, éste ahora debe hacer entrega a los centros
Fe-S, pero que sólo pueden recibir 1 por vez, por esto es importante la forma
radicalaria FMNH*, pues, entrega 1 electrón al centro Fe-S, espera que este lo
entregue a otro centro Fe-S, y entonces hace entrega del segundo electrón
que poseía, quedando nuevamente como FMN, para hacer otra ronda.

Gracias a la energía de las reacciones REDOX, este complejo bombea

protones desde la matriz al espacio intermembrana (en contra de la gradiente)

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 Complejo II
Succinate-CoQ Reductasa
• Lo componen la succinato deshydrogenasa (del
ciclo TCA!)
• Cuatro subunidades, que incluyen 2 centros Fe-S
• Ruta de los electrones:
succinato → FADH2 → 2Fe2+ → UQH2
• Reacción Neta:
– succinato + UQ → fumarato + UQH2

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Es importante ver que el complejo I y el II no actúan de manera secuencial.
Ambos son puntos de entrada de los electrones a la cadena transportadora, El
complejo I recibe los electrones del NADH y el complejo II del FAH2

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 Complejo III
CoQ-Cytochrome c Reductasa
• CoQ traspasa los electrones al cyt c (y bombea
protones) en un único ciclo redox conococido
como el ciclo Q
• La principal proteína transmembrana en el
complejo III es el citocromo b – con grupos
hemos bL y bH
• Citocromos, al igual que los cluster de Fe, son
agentes para transfererir electrones
• UQH2 es un carrier de electrones lipo-soluble
• cyt c es un carrier soluble en agua

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El complejo III transfiere los electrones del ubiquinol al citocromo c, note que
tanto el ubiquinol formado por la acción del complejo I, como el formado por la
acción del II, son recibidos por el complejo III.
El flujo a través de este complejo es complicado, debido a que sólo posee
aceptores de 1 electrón, le entrega al citocromo c, que acepta 1 electrón, pero
debe recibir del ubiquinol que porta 2 electrones. La ruta de los electrones
desde el ubiquinol y hasta el citocromo c se describe a través del ciclo Q
Gracias a la energía de las reacciones REDOX, este complejo bombea
protones desde la matriz al espacio intermembrana (en contra de la gradiente)

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 Ciclo Q

El ciclo Q consta de 2 rondas, lo importante es que el la primera ronda el

ubiquinol de convierte en semiquinona, y en el paso 2 o ciclo 2, se regenera el
ubiquinol. Note entonces que para que este complejo funcione, requiere 1
ubiquinol en el ciclo 1, y otra en el ciclo 2, sin embargo, como se regenera 1,
el NETO es 1 ubiquinol.

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 Complejo IV
Cytochrome c Oxidasa
• Electrones desde el cyt c son usados
en la reducción del O2 para producir
2H2O
• Oxigeno es el aceptor terminal de
electrones en la ruta del transporte de
electrones- the end!
• Citocromo c oxidasa utiliza 2 grupos
hemos (a and a3) y 2 sitios de cobre
• Complejo IV también transporta H+

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En este caso el citocromo c lleva los electrones desde el complejo III al
complejo IV. El complejo IV es el último de la cadena, sus centros redox
incluyen grupos HEMO y iones cobre. En este complejo se logra la reducción
del oxígeno con la consecuente formación de agua. Se desconoce la
secuencia exacta de transferencia de electrones en este complejo. Se
requieren 4 electrones para reducir 1 O2 a 2 H2O.
Gracias a la energía de las reacciones REDOX, este complejo bombea
protones desde la matriz al espacio intermembrana (en contra de la gradiente)

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 Acoplamiento del transporte de
e- y la fosforilación oxidativa
HIPÓTESIS DEL ACOPLAMIENTO QUIMIOSMÓTICO

La energía del transporte electrónico impulsa un sistema de transporte

activo que bombea protones fuera de la matriz mitocondrial, lo cual genera
un gradiente electroquímico que posibilita la síntesis de ATP.

Esta hipótesis se basa en:

i)la existencia de un gradiente electroquímico: Se genera una diferencia de

potencial (voltaje) de transmembrana y de pH pues el
pHmatriz > pHintermembrana

ii) un sistema de membrana intacta o en forma de vesícula cerrada.

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 Acoplamiento quimiosmótico

El desequilibrio de protones representa una fuente de energía

denominada proton motriz, tanto la concentración de protones
(potencial químico) como su carga (potencial electrico) contribuyen a la
síntesis de ATP. Esta síntesis de ATP es llevada a cabo por la ATP
sintasa

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 Este acoplamiento fue un misterio por
muchos años

• Peter Mitchell propuso una idea nueva - la

gradiente de protones generada en la
membrana interna de la mitocondria podría
ser usada para dirigir la síntesis de ATP
• Mitchell fue ridiculizado, pero más tarde la
hipotesis quimioosmótica ganó un premio
Nobel

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 ATP Sintetasa
La difusión de protones a través de proteinas
dirige la síntesis de ATP!
• ATP sintetasa se divide dos partes: F1 y F0
• Racker & Stoeckenius confirmaron la
hipotesis de Mitchell
• Paul Boyer’s planteó el mecanismo
ganando el Nobel en Química en 1997

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 MECANISMO DE LA ATP SINTASA

Según la hipótesis de Boyer (hipótesis del cambio de enlace) el

movimiento de protones que se genera a través de los canales en la base
F0 y la cabeza F1 de la ATP sintasa inducen cambios conformacionales
que alteran la afinidad de la enzima por el ATP, el ADP y el Pi.

La transposición de protones impulsa la rotación del anillo c (parte de

F0), esto impulsa cambios conformacionales en F1 que le permiten a la
ATP sintasa unirse a ADP y Pi, fosforilar el ADP y liberar ATP.

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 Mecanismo de la ATP sintetasa

El diagrama muestra las subunidades catalíticas β del componente F1. Cada

una de las 3 subunidades β que presenta la ATP sintasa adopta una
conformación distinta: Abierta (O), Laxa (L) o Tensa (T).
Los sustratos ADP y Pi se unen al sitio laxo (L), el ATP se sintetiza cuando el
sitio esta tenso (T), y el ATP se libera cuando la subunidad se abre (O). Los
cambios conformacionales son inducidos por la rotación, y cada subunidad
puede adoptar sólo un estado por vez.

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 ATP-ADP Translocasa
ATP debe ser transportado fuera de la
mitocondria
• ATP fuera, ADP dentro – a través de la
"translocasa"

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Inhibidores de la Cadena y la
Fosforilación Oxidativa

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 Inhibidores de la Fosforilación
Oxidativa

• Rotenona inhibe al Complejo I – y ayuda a

los nativos del Amazonas a pescar!
• Cianuro, azida and CO inhiben al
Complejo IV, uniendose firmemente al
(Fe3+) del a3
• Oligomicina y DCCD son inhibidores de la
ATP sintetasa

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 Desacopladores
Desacopladores del transporte de e- y la
fosforilación oxidativa
• Desacopladores disrumpen el acoplamiento
entre el transporte de electrones y la
fosforilación oxidativa porque disipan la
gradiente de protones
• Desacopladores son moleculas hidrofobicas
• Estos atraviesan la membrana disipando la
gradiente

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 Desacoplantes
• Un desacoplante utilizado
experimentalmente es el DNP
(dinitrofenol)
• El desacoplamiento fisiológico se lleva
acabo por proteínas denominadas
termogeninas o UCP, pues participan en
la termogénesis (producción de calor)

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 El desacoplamiento en la grasa parda genera calor

Este desacoplamiento ocurre en tejido adiposo pardo, su nombre se debe a la

alta concentración de mitocondrias que posee. En este tejido las UCP
devuelven a la matriz los protones bombeados por la cadena al espacio
intermembrana, estos protones entonces, no son usados por la ATP sintasa,
es decir, en este caso, la energía libre de los protones se usa para generar
calor en lugar de para sintetizar ATP. Esto es de vital importancia para
organismo que hibernan.

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 Sistema de lanzadera de e -
Mucho del NADH usado en el transporte de
electrones es citosólico y el NADH no
atraviesa la membrana interna de la
mitocondria
• "Sistema de lanzadera" se mueve electrones
sin la presencia directa del NADH. Existen 2:
• Lanzadera del Glicerolfosfato guarda
electrones en el glicerol-3-P, el cual transfiere
electrones al FAD
• Lanzacera Malato-Aspartato usa malato para
llevar electrones a través de la membrana

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 Lanzadera del Glicerolfosfato - Glicerol 3-P deshidrogenasa

En esta lanzadera, los electrones del NADH citoplasmático son traspasados al

FAD y por lo tanto lo utilizable en la mitocondria en este caso es FADH2

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Acá se ve el aporte de esta lanzadera.

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 Lanzadera Malato-Aspartato

En esta lanzadera los electrones del NADH citoplasmáticos son usados para
generar NADH mitocondrial.

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Rendimiento neto de ATP desde
la glucosa
Depende del sistema de lanzadera
usada!
• 30 ATP por glucosa si es usada la
lanzadera del glicerol-3-P
• 32 ATP por glucosa si es usada la
lanzadera del malato
• En bacteria:
~ 3 ATP/NADH
~ 2 ATP/FADH2

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