Práctica 3:

“Aislamiento e identificación de microorganismos”

I. Introducción

El aislamiento de microorganismos ha sido base central para el estudio de la

microbiología. Esto ha permitido que diversos microorganismos se puedan

descubrir individualmente en un espacio determinado y de manera pura y existen

variaciones en cuanto al metabolismo y la morfología. Según profesionistas de la

Universidad Libre (2017), un cultivo puro es aquel que contiene una sola clase de

microorganismo. Es importante aislar y luego identificarlos.

En la práctica los cultivos puros son útiles por diferentes razones: mantienen

los organismos viables, permiten hacer subcultivos para someterlos a diferentes

análisis e intercambiarlos con otros laboratorios.

 II. Objetivo

Describir las técnicas de aislamiento e identificación de cultivos en el laboratorio.

Objetivos específicos

 Poner en práctica los conocimientos del material de laboratorio y la

función que tienen.

 Conocer el procedimiento que se debe de llevar a cabo al realizar un

medio de cultivo.

III. Materiales y equipo

 Cajas de Petri con medio de cultivo

 Asa bacteriológica

 Mechero de Bunsen

 Cultivo de bacterias o levaduras

(Muestra líquida)

 Marcador (Para dividir secciones)

IV. Desarrollo de la practica

En esta práctica simplemente se realiza una parte del proceso de aislamiento

del cultivo para posteriormente identificarlo. Primero se debe de asegurar de que el

material este esterilizado y el ambiente sea aséptico. Después se toma el inóculo,

que sería básicamente la muestra de la bacteria o microorganismo a cultivar

recogida por el asa, y se toma la caja Petri y se hacen varias líneas rectas en la
superficie del medio que contiene y posteriormente se cierra y se coloca en posición

invertida. Luego se esteriliza el asa con ayuda del mechero y se hacen unas líneas

onduladas en este caso la estría continua donde el asa se inclina y se distribuye el

inoculo con estrías cerradas hasta que se cubra un tercio de la superficie del medio

de la caja Petri. Ahora no se separa el asa, sino que solo se cambia a una posición

vertical y se hacen estrías más separadas que cubran toda la superficie. El ultimo

tipo de estrías que vemos en esta práctica son las de cuadrantes. Primero

separamos nuestro medio de la caja de Petri en 4 secciones y tomamos el inóculo

con el asa y se coloca en un punto del primer cuadrante haciendo estrías cerradas

hasta llegar el centro de la placa. Luego tapamos la caja y giramos al segundo

cuadrante donde se esteriliza el asa nuevamente y se toma el inóculo de la última

estría del primer cuadrante y se hace lo mismo, pero ahora en el segundo cuadrante

y se repite el mismo proceso para el tercer y cuarto, tomando inóculos de la última

estría del cuadrante anterior y se pone de forma invertida sobre la mesa. Cuando

queremos hacer una estría de cuadrante radial, se distribuye el inóculo hasta la

tercera parte de la caja y se cierra y se gira a 90° de la zona estriado, se repite el

mismo paso sin tocar las estrías previas y se vuelve a girar 90° con los mismos

pasos otras 2 veces. Este mismo método tiene una variante, que es la estría cruzada

y es donde se estría el primer sector, se esteriliza el asa, se deja enfriar y se cruza

la parte final de las estrías haciéndolas cerradas y repitiendo el paso para cada

sección, entonces podríamos decir que es lo mismo que la anterior, solo que este

caso si se tocan y cruzan. Finalmente, cuando se tiene ya estriadas todas las cajas,

se pasa a la interpretación.
 V. Resultados

En los resultados del video, se pudo inferir

que, con la estría recta, se pudo observar alguna

característica metabólica o un efecto antagónico.

Y por el otro lado, en la ondulada, se busca diluir

progresivamente la muestra, que permite formar colonias aisladas. Los resultados

varían en cuanto a los métodos y técnicas de aislamiento que se usen como se

ilustra en las imágenes y la identificación de estos dependerá de su morfología,

color, textura, y otras características.

VI. Discusión

Como se pudo observar en el video se mencionan algunas maneras de aislar

cultivos, por lo que reforzare lo visto en el video añadiendo datos importantes.

Según la revista, FBio, “el método más utilizado es la siembra por estrías” (2004), y

lo pudimos comprobar ya que fueron todos los que vimos en el video. Básicamente

estos son los que se hacen al utilizar las cajas de Petri sobre un medio de cultivo

sólido. Se realiza el mismo procedimiento que vimos anteriormente, y esto va a

hacer que las células bacterianas queden inmovilizadas en el medio. Cada célula

incubada, va a crear una colonia con muchas divisiones celulares. Es muy

importante hacer muchas estrías, ya que así es como se verán reflejadas las

colonias. Las primeras estarán pegadas y fluyentes, mientras las últimas se notan

menos y van a estar más separadas. Estos procesos se pueden hacer de varios

trazados. Existe el agotamiento de ansa, que es cuando se esteriliza el asa y tras

tocar la siembra, se hacen estrían en 2 placas Petri consecutivamente sin

recargarla.

Otra técnica sería la de dilución previa en solución fisiológica o caldo. En esta

se toma la muestra y se le suspende en un caldo nutritivo mixto, luego se hacen

diluciones seriadas decimales en condiciones asépticas y se estría una placa

individual por cada una para saber cuántas bacterias hay en el caldo. Para realizar

las diluciones previamente mencionadas, se usan tubos que tienen una disolución

mineral isotónica que mantiene las células viables y no las deja dividirse. Esta tiene

otra variación, que es la de extensión en superficie con espátula de Drigalski, donde

también se hacen diluciones solo

que se pone solo una gota sobre

la placa y se extiende con una

espátula.
 Como mencione en la introducción hay diversas maneras de aislar cultivos

aparte de la de diseminación, como la que se hace por mezcla o por métodos

especiales. Cuando se hace por mezcla, se calcula el número de bacterias, y se

pone el mismo volumen de diluciones en cada tubo esterilizado, para después

verterle un medio de cultivo fundido a 45°C y por medio de rotación homogeneizar

la mezcla para ponerla sobre las placas de Petri e incubarlas. Tiene una variación

donde las colonias aparecen en todo el agar, no solo en la superficie. Los métodos

especiales se basan en las características del germen que se quiere aislar: existe

por calentamiento, por agregado de ácido, variación en las temperaturas, cambios

en el pH y presencia de sales o colorantes.

Posteriormente se recurre a la identificación de estos mismos cultivos y esta se

hace tanto a nivel micro como macroscópico. En el macroscópico se checa la

turbidez, grumos, sedimentos, velos y color (si es un medio liquido) si es sólido, se

checa el tamaño, consistencia (viscosa, seca, blanda), forma (bordes y espesores)

de las colonias, y por lo tanto se clasifican en cuanto a sus pigmentaciones, el olor

y la hemólisis de las bacterias usando otro tipo de técnicas. Cuando se hace la

observación a nivel microscópico es cuando se ve la morfología del cultivo y se

aplican las coloraciones (diferenciales, de esporas, tinciones, simples, etcétera)

dependiendo de los rasgos que se quieran tomar en cuenta.

VII. Conclusiones
 En mi opinión, el aislamiento de

cultivos es herramienta

fundamental para el conocimiento

de los microorganismos y su

identificación no sería posible sin

esta anterior tampoco. Hay aún un

mundo muy extenso por conocer, y

es gracias a estas herramientas

que podemos clasificarlos y abrir las puertas a conocer nuevas cepas que se

pueden llegar a formar. Es muy importante conocer todas las técnicas y métodos

de estudiar estos ya que nos permitirán tener buenos resultados dependiendo

de lo que busquemos saber u aprender. El video fue muy entretenido y preciso

además de entendible.

A lo largo de la práctica se pudieron apreciar más a fondo algunas técnicas y

pude expandir más mi conocimiento. Los métodos más conocidos y eficaces

siempre serán los básicos, además de que haya nuevas herramientas que

faciliten estos procesos, hay cosas que nunca pasaran de moda ni dejaran de

brindar buenos resultados como las técnicas de estrías.

VIII. Bibliografía

 Brune KD, Bayer TS. Engineering microbial consortia to enhance biomining

and bioremediation. Front Microbiol. 2012;3(1):203.

Doi:10.3389/fmicb.2012.00203
 UNR, Siembra, aislamiento e identificación de microorganismos, Revista

FBio, 2004. Recuperado

de:https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/202403/mod_resourc

e/content/1/2020%20TP2%20BIOQ%20Y%20LCTA.pdf

 Centro de Investigación y Asistencia en Tecnología y Diseño del Estado de

Jalisco, A.C. Av. Normalistas 800, Colinas de La Normal, C.P. 44270,

Guadalajara, Jalisco, México. Recuperado de:

http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0185-

33092017000300509

 Tovar, Felix, TECNICAS Y METODOS DE AISLAMIENTO Y SELECCIÓN

DE MICROORGANISMOS, Conalep,México, 2012. Recuperado de:

https://conalepfelixtovar.wordpress.com/2012/09/26/tecnicas-y-metodos-de-

aislamiento-y-seleccion-de-microorganismos/

 https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/tecnicas-de-aislamiento