INSTITUTO TECNOLÓGICO

DE ESTUDIOS SUPERIORES
DE ZAMORA

INGENIERÍA EN INNOVACIÓN AGRÍCOLA

SUSTENTABLE

4°SEMESTRE

REPORTE DE EXAMEN FINAL

(MICROBIOLOGÍA)

AYALA CÁRDENAS MARCO JESÚS

PROF. RODRIGO ESPARZA VÁZQUEZ

ZAMORA, MICHOACÁN DE OCAMPO 09 DE JUNIO

DE 2021
Examen final práctico: Aislamiento de microorganismos a partir de muestra de suelo.

1. Objetivos:

• Lograr el crecimiento de un inóculo microbiano a partir de una muestra de suelo.

• Aislar colonias microbianas mediante la técnica de siembra por estría cruzada, usando el

inóculo crecido de una muestra de suelo.

• Realizar una tinción simple para reconocer la morfología microbiana presente en el

inóculo crecido de una muestra de suelo.

• Realizar una tinción diferencial de Gram para reconocimiento de los tipos de

microorganismos presentes en la muestra.

• Presentar un listado de los posibles géneros microbianos presentes en la muestra.

2. Introducción

Los microorganismos son organismos ubicuos y en los ambientes naturales se encuentran

usualmente como poblaciones mixtas, por lo que es necesario tenerlos como cultivos puros
por medio de aislamientos, para así poder identificarlos y caracterizarlos. La preparación de
un cultivo puro implica no solo el aislamiento de un determinado microorganismo, sino su
mantenimiento y el de su descendencia. Es importante determinar los diferentes medios de
cultivo y condiciones de incubación óptimas para cada uno de ellos y así lograr la formación
de colonias visibles aisladas.

Es posible utilizar diferentes estrategias para el aislamiento e identificación de

microorganismos: Separación física mediante diluciones seriadas y siembra en placa mediante
estrías cruzadas; utilización de medios de cultivos selectivos y diferenciales, así como el
aprovechamiento de características particulares de los microorganismos. Para facilitar y
mejorar el proceso generalmente se combinan estas estrategias.

3. Materiales

Reactivos Herramientas y objetos

Safranina 1 paquete de algodón

-Verde de malaquita Tubo de ensayo con inóculo

Cristal violeta 1 caja de portaobjetos

Yodo - lugol 1 caja de cubreobjetos

Alcohol-acetona 1 botella de agua purificada

Alcohol a 90% 1 lata de alcohol sólido

Asa bacteriológica
 Jeringa de 5 ml

Microscopio plegable

Charola para enjuague de tinciones

2 placas con medio de cultivo estéril

2 frascos de vidrio con tapa y hervido o en su

defecto un frasco para muestra de laboratorio.

Una cuchara de metal

4. Procedimiento

4.1.- Preparación del inóculo

1. Tomar una cucharada de muestra de suelo, colocarlo en el frasco de vidrio o de muestra,

con la jeringa añadir 10 ml de agua purificada y homogenizar (agitar hasta mezclar
perfectamente).

2. En el segundo frasco añadir primero 9 ml de agua purificada y posteriormente añadir 1 ml

del líquido clarificado de la muestra.
3. Mediante técnica aséptica, tomar una asada de la dilución del segundo frasco e inocular en
el tubo de ensayo con medio estéril.

4. Incubar a temperatura ambiente, en un lugar oscuro durante al menos 24 horas.

4.2.- Aislamiento de colonias mediante la técnica de estría cruzada.

1. Mediante la técnica aséptica, tomar una asada del inóculo previamente incubado del
procedimiento anterior.
2. Mediante la técnica aséptica sembrar por estría cruzada.

3. Repetir el proceso con las placas disponibles.

4. Incubar durante 24 horas dentro de la caja-incubadora, haciendo uso del parche

termogénico; colocando este en una de las paredes de la caja, para evitar el calor directo en
las placas.
4.3.- Tinción simple

1. Realizar el ensamblaje del microscopio plegable.

2. Preparar un frotis, con el inóculo del punto 4.1 en un portaobjetos y fijar con calor

calentando suavemente con la llama.

3. Cubrir el frotis con cualquier colorante y dejar reposar durante 2 minutos.

4. Eliminar el exceso de colorante enjuagando con una jeringa limpia y agua

purificada.

5. Dejar secar al aire.

4.4.- Tinción diferencial de Gram

1. Preparar un frotis y fijar con calor calentando suavemente con la llama.

2. Cubrir el frotis con cristal violeta. Dejar reposar durante 2 minutos.

3. Eliminar el exceso de colorante enjuagando con una jeringa limpia y agua purificada. Secar
al aire 4. Cubrir con Lugol y dejar reposar durante 2 min.
5. Enjuagar con agua destilada.

6. Decolorar con alcohol- acetona hasta que el enjuague residual sea incoloro. Y secar al aire

7. Contrarrestar la tinción con solución de safranina durante 2 min.

8. Enjuagar con una jeringa y agua purificada y secar al aire.

5.- Interpretación de resultados.

Se logró realizar de forma exitosa todos los objetivos de la práctica:

• Lograr el crecimiento de un inóculo microbiano a partir de una muestra de suelo. En este

se logró que las bacterias del suelo, proliferaran sin problema alguno, después de 24hrs al

observar el inóculo a contra luz era visible una turbulencia del inóculo, presentando

conjuntos de colonias de bacterias en él.

• Aislar colonias microbianas mediante la técnica de siembra por estría cruzada, usando el

inóculo crecido de una muestra de suelo. Se logró que las bacterias crecieran en el agar,

logrando un buen estriado en el agar, dando pie a un aislado de colonias adecuado.

• Realizar una tinción simple para reconocer la morfología microbiana presente en el

inóculo crecido de una muestra de suelo. La tinción se realizó de buena forma, aunque no

con los resultados esperados, ya que, se esperaba observar más bacterias, sin embargo, es

consecuencia de haber realizado el frotis con el inóculo con solo 24hrs de incubación,

contrario a lo que ocurre en la siguiente tinción.

• Realizar una tinción diferencial de Gram para reconocimiento de los tipos de

microorganismos presentes en la muestra. Se realizó exitosamente y obteniendo resultados

óptimos con la tinción. Se llegó a la conclusión de que realizar una tinción simple es la

mejor opción cuando requieres resultados rápidos, sin embargo, la tinción de gram, revela

mejores resultados, ya que la combinación de tinciones tinta mejor a los microorganismos.

• Presentar un listado de los posibles géneros microbianos presentes en la muestra.

La práctica se realizó con una muestra de tierra extraída de un huerto en casa el cuál ya no se
utiliza. Haciendo una observación y comparación con muestras de microscopio observadas
dentro del laboratorio en el Instituto Tecnológico de Estudios Superiores Zamora (ITESZ),
pues esa era nuestro punto de comparación del cómo deberían observarse las colonias de
bacterias que proliferarían en nuestro inóculo.

(Colonia de bacterias observadas en el ITESZ)

Consiguiente a la observación y análisis que se le dio al frotis de nuestro inóculo, se logró

llegar a una teoría la cuál consistía en que las bacterias del inóculo no tenían similitud con las

observadas en el ITESZ, ya que esta presentaba estructuras fibrosas más complejas, incluso

con movimiento de los microorganismos, a pesar de haberse sometido al fuego.

Después de investigar, se encontró similitud con los microorganismos Proteeae que

forman parte de la flora fecal normal, también presente en orina de perros y gatos.

La subfamilia Proteeae incluye al menos 3 géneros de microorganismos gramnegativos:

• Proteus: P. mirabilis, P. vulgaris, y P. myxofaciens

 • Morganella: M. morganii

• Providencia: P. rettgeri, P. alcalifaciens, y P. stuartii

Se encontró mayor similitud con Proteus Mirabilis es bien conocido por su amplia motilidad,

esta se puede evidenciar en medios nutritivos como agar sangre, agar nutritivo, agar BHI,

entre otros. Se forman una especie de ola alrededor de las colonias bacterianas y esta se

desplaza de forma radial, a este fenómeno se le llama efecto de swarming el cual es

característico de Proteus sp.Colonias medianas, convexas, blanquecinas o translucidas, forma

circular, bordes redondeados hay presencia de swarming.

6. Referencias.
Microbitos, G. (18 de agosto de 2012). Morfología colonial bacteriana en medios de cultivo.
Obtenido de http://microbitosblog.com/2010/06/14/morfologia-colonial-bacteriana/

Wikipedia, c. d. (10 de mayo de 2021).

https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Proteus_mirabilis&oldid=135429319.
Obtenido de
https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Proteus_mirabilis&oldid=135429319