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Subsecretaria de Educación Media Superior


Unidad de Educación Media Superior Tecnológica industrial y de servicios
Centro de Bachillerato Tecnológico industrial y de servicio No.198

Manual de prácticas de
Laboratorio
Submódulo:
Realiza Análisis
Inmunológicos
Elaboro:
IBQ. Magaly Carranza
Jacobo
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Contenido
Practica No. 1 Determinación cualitativa de la Gonadotropina Coriónica humana
(hGC).........................................................................................................................1
Practica No. 2 Determinación de grupo sanguíneo “Prueba directa”.......................3
Practica No. 3 Determinación de Grupo Sanguíneo “Prueba Inversa”.....................5
Practica No. 4 “Determinación de Antígenos febriles/ Reacciones febriles”.............6
Practica No. 5 Determinación cualitativa de anticuerpos anti-Brucella “Rosa de
bengala”.....................................................................................................................8
Práctica No.6 Determinación cualitativa de Proteína C Reactiva (PCR)................9
Práctica No.7 Determinación cualitativa de Factor Reumatoide (FR).................10
Práctica No.8 Determinación cualitativa de Antiestreptolisinas O (ASO)............11
Práctica No.9 Determinación cualitativa de Reaginas Plasmáticas Reactivas
(RPR).......................................................................................................................12
Práctica No.10 Inmunoensayo cromatográfico para la detección cualitativa de
anticuerpos del Virus de Inmunodeficiencia Humana VIH tipo 1 y 2......................14
Práctica No.11 Prueba rápida cuantitativa para la detección del Anticuerpo
específico del virus de Hepatitis C (HCV) en suero o plasma................................16
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Practica No. 1 Determinació n cualitativa de la Gonadotropina


Corió nica humana (hGC)
Competencia profesional: Realiza Inmunoensayos.

Objetivo: El alumno aprenderá la prueba rápida para la detección cualitativa de


Gonadotropina Coriónica humana (hGC) en orina o suero.

Introducción:

La prueba de la gonadotropina coriónica humana (hCG, por sus siglas en inglés)


se realiza para detectar la hormona hCG en la sangre o la orina. Algunas pruebas
de hCG miden la cantidad exacta. Otras solo verifican la presencia de la hormona.
La hCG se produce en la placenta durante el embarazo. La prueba puede usarse
para ver si una mujer está embarazada. O se puede hacer como parte de una
prueba de detección de anomalías congénitas (de nacimiento).
La hCG también puede ser producida por ciertos tumores, especialmente aquellos
que provienen de un óvulo o de un espermatozoide. (Estos se conocen como
tumores de células germinales). Los niveles de hCG con frecuencia se
comprueban en mujeres que podrían tener un crecimiento de tejido anormal en el
útero. Esta prueba también puede realizarse para detectar un embarazo molar o
cáncer en el útero. Es posible que se realicen varias pruebas de hCG después de
un aborto espontáneo para asegurarse de que no haya un embarazo molar. En los
hombres, los niveles de hCG podrían medirse para ayudar a ver si tienen cáncer
de los testículos.

Procedimiento:

1. Dejar estabilizar la bolsa a temperatura ambiente antes de abrirla.


2. Extraer la tira de la bolsa sellada.
3. Con las flechas señalando hacia la muestra de orina o suero, sumerja la tira
verticalmente en la muestra de orina o suero al menos durante 10-15
segundos. No sumergir por encima de la línea MAX de la tira.
4. Coloque la tira en una superficie plana no absorbente, ponga en marcha el
cronómetro y espere hasta que aparezcan una o dos líneas coloreadas.

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5. Lea el resultado a los 3 minutos cuando se analice una muestra de orina o


a los 5 minutos cuando se analice una muestra de suero.

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Practica No. 2 Determinació n de grupo sanguíneo “Prueba


directa”
Competencia profesional: Realiza Inmunoensayos.

Objetivo: El alumno determinará de manera directa el grupo sanguíneo,


identificando los tipos de antígenos presentes en la membrana del eritrocito a
través de antisueros comerciales.

Introducción:

De acuerdo con la sociedad internacional de transfusiones


sanguíneas (International Society of Blood Transfusion, los grupos sanguíneos
humanos se descubrieron en 1901 (Karl Landsteiner, Premio Nobel de Medicina
en 1930) y se define como un método de clasificación de la sangre basado en la
presencia o ausencia de varias Proteínas antigénicas (Antígeno) en la superficie de
los glóbulos rojos.

Existen distintos sistemas de clasificación de grupo sanguíneo definidos cada uno


de ellos por uno o más antígenos controlados por un único gen (o por dos o más
genes muy relacionados entre sí). El sistema más conocido es el ABO. Su nombre
proviene de los cuatro tipos de grupos que se identifican con este sistema: los de
antígeno A, de antígeno B, AB y O. Así, como se ve en la imagen, las personas
del grupo A poseen glóbulos rojos en cuya superficie está el antígeno A, las del
grupo B expresan el antígeno B, las del grupo AB, tienen los dos antígenos y las
del grupo O no poseen ninguno de estos dos antígenos.

Procedimiento:

1. Recolectar 3 mL de sangre por punción venosa empleando el tubo lila


(EDTA)
2. Separar el plasma (10 min, 4000 rpm)
3. Lavar el paquete celular de 2 a 3 veces empleando solución salina al 0.85%
4. Preparar una solución al 5% de eritrocitos lavados (colocar en un tubo de
ensaye 4.5 mL de solución salina al 0.85% y adicionar 5 gotas de eritrocitos
lavados)
5. Rotular 4 tubos de ensaye como: A, B, AB y D

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6. Adicionar una gota de antisuero correspondiente A, B, AB y D;


posteriormente adicionar a cada tubo uno gota de la suspensión de
eritrocitos al 5%
7. Centrifugar 1 minuto a 1000 rpm
8. Resuspender y leer aglutinación:

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Practica No. 3 Determinació n de Grupo Sanguíneo “Prueba


Inversa”
Competencia profesional: Realiza Inmunoensayos.

Objetivo:

Al término de la práctica el alumno estará capacitado para comprobar e


identificar la tipificación sanguínea de forma inversa.

Introducción:

En la especie humana existen varios genes diferentes implicados en la


compatibilidad o incompatibilidad de las transfusiones de sangre. Los dos grupos
principales se conocen como ABO y RH.

El sistema ABO es consecuencia de la presencia de una cubierta de


proteína en la cubierta de los glóbulos rojos.

Para esta proteína se conoce de dos formas inmunológicamente diferentes


la forma A y la forma B se refiere al tipo de proteínas que presentan los glóbulos
rojos; en el caso de que no se presente esta proteína se incluye a estos individuos
en el grupo sanguíneo O.

La determinación del grupo sanguíneo se efectúa enfrentando los hematíes


problema con reactivos es indicativa de la presencia de los correspondientes
antígenos.

Procedimiento:

1. Recolectar 3 ml de sangre/ punción venosa s/anticoagulante


2. Dejar coagular
3. Separar el suero (centrifugar 10 minutos a 4000rpm
4. Rotular 3 tubos (A,B, O)
5. Adicionar 2 gotas de suero y posteriormente 2 gotas de suspensión de
eritrocitos al 5% (A, B, O).
6. Centrifugar 1 min, 1000rpm
7. Resuspender y leer aglutinación
8. Reportar resultados.

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Practica No. 4 “Determinació n de Antígenos febriles/ Reacciones


febriles”
Competencia profesional: Realiza Inmunoensayos

Objetivo:

El alumno aprenderá a realizar una prueba de aglutinación en suero sanguíneo,


para identificar de manera cuantitativa los antígenos febriles.

Introducción:

Es una prueba de método útil en el laboratorio para seguir la secuencia de ciertas


infecciones con acceso febril, causadas por bacterias.

Son reacciones de aglutinación entre los antígenos de Salmonella, Brucella y


Proteus y los anticuerpos contra estos antígenos presentes en el suero del
paciente.

Las reacciones febriles son un conjunto de pruebas de aglutinación que buscan


apoyar o descartar el diagnóstico de infecciones causadas por Salmonella typhi,
Salmonella paratyphi y Brucella abortus, agentes etiológicos de infecciones
comúnmente conocidas como Fiebre tifoidea o Fiebre ondulante, Paratifoidea y
Fiebre de malta o Brucelosis respectivamente.

Para esto se utilizan antígenos que constan de suspensiones bacterianas de


cepas patógenas específicas que han sido muertas por procesos especiales que
dejan íntegros el antígeno contra los que reaccionan los anticuerpos producidos
por el sujeto infectado.

Procedimiento:

1. Recolectar 5 mL de sangre / punción venosa s/anticoagulante


2. Dejar coagular
3. Separar el suero (centrifugar 10 min, 4000 rpm)
4. Calcular 0.04 mL de suero problema en cada círculo de la placa de vidrio
para reacciones febriles
5. Adicionar una gota de c/Antígeno
6. Mezclar cada una con diferente aplicador de madera
7. Llevar al agitador mecánico de 2 a 3 minutos (120 rpm)
8. Leer aglutinación a luz directa.

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9. Reportar resultado

ml Suero Dilución Grado de


aglutinación
0.08 1:20 1/20
100 % 4+
0.04 1:40 1/40 75% 3+
0.02 1:80 1/80 50% 2+
0.01 1:160 1/160 25% 1+
0.005 1:320 1/320 0% ----

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Practica No. 5 Determinació n cualitativa de anticuerpos anti-


Brucella “Rosa de bengala”

Competencia profesional: Realiza Inmunoensayos

Objetivo:

El alumno aprenderá la técnica correspondiente para la detección cualitativa y


semincuantitativa de Ac anti-Brucella en suero humano.

Introducción:

Es una  prueba, basada en la aglutinación como respuesta a la presencia


de alguna de las aglutininas de Brucella (abortus, mellitensis y suis). Bacterias
causantes de la Brucelosis (también conocida como fiebre de Malta), organismos
virulentos e infecciosos para el hombre que adquiere generalmente por vía
mucocutánea, por consumir carne contaminada con la bacteria, abrasiones o
cortes en la piel, inhalación de aerosol o contaminación de la conjuntiva;
invadiendo el sistema linfático y puede alcanzar a diversos órganos.

Por ello se realiza la prueba de Rosa de Bengala por ser una prueba
sensible y rápida que permite una aproximación diagnóstica inmediata.

Emplea como antígeno una suspensión bacteriana a la que se ha añadido


el colorante rosa de bengala, enfrentándola al suero sin diluir del enfermo.

Procedimiento:

1. Recolectar 4 ml de sangre por punción venosa sin anticoagulante


2. Dejar coagular
3. Separar el suero (centrifugar 10min, 4000rpm)
4. Atemperar los reactivos
5. Colocar 50 microlitros o 0.05 mL de suero del paciente y una gota de los
controles
6. Adicionar 1 gota de reactivo RB en cada suero
7. Mezclar cada uno con diferente aplicador
8. Agitar a 120 rpm por 4min
9. Leer la aglutinación. La presencia de aglutinación indica una concentración
de Ac igual o superior a 25UI/mL.

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Prá ctica No.6 Determinació n cualitativa de Proteína C Reactiva


(PCR)
Competencia profesional: Realiza Inmunoensayos

Objetivo: El alumno será capaz de realizar esta prueba de laboratorio, e identificar


la presencia de PCR en el suero del paciente.

Introducción:

La Proteína C Reactiva (PCR) es un componente sérico, producido por el


organismo cuando se presenta un proceso inflamatorio. La PCR es un polímero de
alto peso molecular, compuesto de polipéptidos no glicosilados, los cuales
interactúan con el polisacárido C presente en el Pneumococo (de ahí el nombre de
Proteína C Reactiva). En el organismo humano, La PCR se sintetiza en el hígado,
y fisiológicamente se relaciona con la respuesta inmune y la regulación de los
procesos inflamatorios, por lo que sus niveles séricos tienden a elevarse durante:
procesos inflamatorios, infecciones agudas, cirugías, infartos agudos al miocardio,
etc. Inclusive, después de desaparecer el proceso inflamatorio, los niveles de PCR
pueden permanecer elevados. La concentración sérica normal en los adultos
sanos, usualmente es inferior a 1 mg/L, aumentando ligeramente en la vejez. En
mujeres embarazadas al final de la gestación y en inflamación leve e infecciones
virales, oscila entre 1 –4 mg/L. En proceso inflamatorios activos e infección
bacteriana, entre 4–20 mg/L y en infecciones bacterianas severas y quemaduras
>20 mg/L. La PCR se usa como marcador de inflamación. Aparte de un fallo
hepático, se conocen pocos factores que intervengan con la producción de PCR.

Procedimiento:

1. Recolectar 4 ml de sangre por punción venosa sin anticoagulante.


2. Dejar coagular.
3. Separar el suero (centrifugar 10min, 4000rpm)
4. Atemperar los reactivos
5. Colocar 50 microlitros o 0.05 mL de suero del paciente y una gota de los
controles.
6. Adicionar 1 gota de reactivo PCR-látex en cada suero
7. Mezclar cada uno con diferente aplicador
8. Agitar a 120 rpm por 4min
9. Leer la aglutinación y reportar el resultado. La presencia de aglutinación
indica un valor de referencia de hasta 6 mg/L.

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Prá ctica No.7 Determinació n cualitativa de Factor Reumatoide


(FR)
Competencia profesional: Realiza Inmunoensayos

Objetivo: El alumno aprenderá a determinar el Factor Reumatoide, de forma


correcta para dar un diagnóstico eficaz, así como a tener conocimiento de su
aplicación y la importancia clínica.
Introducción:
Los Factores Reumatoides (FR) son auto anticuerpos de diferentes clases de
inmunoglobulinas dirigidas primariamente contra sitios específicos de la región Fc
de moléculas de IgG. El factor reumatoide en suero, aparece más comúnmente,
con mayores títulos, en pacientes con una enfermedad sistémica crónica llamada
artritis reumatoide. Estos anticuerpos son detectados en aproximadamente 70 –
80 % en los pacientes con artritis reumatoide del adulto.
El origen y la patogenia del factor reumatoide, todavía no es claro.
Mientras tanto, inmunocomplejos capaces de activar complemento y que están
constituidos por factor reumatoide IgM e IgG, se encuentran depositados en la
región sinovial y vasos sanguíneos de pacientes portadores de artritis reumatoide.
Pueden tomarse medidas terapéuticas para suprimir las manifestaciones
inflamatorias de la enfermedad y ayudar a la reducción de la disfunción músculo
esquelético. Por lo tanto, los tests usados para la detección precoz del factor
reumatoide, tiene un significado clínico importante.

Procedimiento:
1. Recolectar 4ml de sangre por punción venosa S/Anticoagulante
2. Dejar coagular
3. Separar el suero (centrifugar 10 min, 4000 ml rpm)
4. Atemperar los reactivos
5. Colocar 50 microlitros o 0.5 mL del suero del paciente y una gota de los
controles.
6. Adicionar una gota de reactivo FR-látex en cada suero.
7. Mezclar con diferente aplicador.
8. Agitar a 120 rpm durante 2 min
9. Leer aglutinación. La presencia de aglutinación indica un valor de referencia
de hasta 8 UI/mL.

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Prá ctica No.8 Determinació n cualitativa de Antiestreptolisinas


O (ASO)
Competencia profesional: Realiza Inmunoensayos

Objetivo: El alumno aprenderá la forma correcta de realizar la determinación de


Antiestreptolisinas para brindar un resultado eficaz y conocer la relevancia clínica.

Introducción:

La antiestreptolisina O es un examen de sangre para medir los anticuerpos contra


estreptolisina 0 (ASO por sus siglas en ingles), una sustancia producida por la
bacteria estreptococo del grupo A.

Los anticuerpos son proteínas que nuestros cuerpos producen cuando detectan
sustancias nocivas, tales como las bacterias.

¿Para qué hacer el análisis?


Para conocer si una persona ha presentado recientemente una infección por
estreptococo del grupo A; para poder confirmar que existen secuelas post-
estreptocócicas como una fiebre reumática o una glomerulonefritis (tipo de
enfermedad renal).

Procedimiento:

1. Recolectar 4 ml de sangre por punción venosa S/Anticoagulante


2. Dejar coagular
3. Separar el suero (centrifugar 10 min, 4000 rpm)
4. Atemperar los reactivos
5. Colocar 50 microlitros o 0.05mL de suero del paciente y una gota de los
controles.
6. Adicionar una gota del reactivo ASO-Látex en cada suero
7. Mezclar con diferente aplicador.
8. Agitar a 120 rpm durante 2 min.
9. Leer aglutinación. La presencia de aglutinación indica un valor de referencia
de hasta 200 UI/mL (adultos) y 100 UI/mL (niños menores de 5 años).

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Prá ctica No.9 Determinació n cualitativa de Reaginas


Plasmá ticas Reactivas (RPR)
Competencia profesional: Realiza Inmunoensayos

Objetivo: El alumno será capaz de identificar pruebas no Treponémicas en porta


para la detección cualitativa de Reaginas plasmáticas en suero humano.

Introducción

La sífilis es una enfermedad venérea causada por el Treponema pallidum, que


invade las mucosas intactas o la piel en áreas de abrasiones. El contacto sexual
es la forma más común de transmisión. La detección y tratamiento de la
enfermedad en sus estadios tempranos es fundamental a fin de evitar
complicaciones graves como sífilis cardiovascular, neurosífilis y sífilis congénita. El
diagnóstico de esta enfermedad sufre la carencia de un método para cultivar el
microorganismo en medios de laboratorio y la dificultad para detectarlo en estadios
de la enfermedad en los que no se observan lesiones epidérmicas. Sin embargo,
desde el comienzo de la infección aparecen en el suero del individuo infectado
ciertas sustancias denominadas "reaginas", que reaccionan con antígenos de
cardiolipina, lecitina y colesterol. Estas reaginas junto a los signos clínicos son por
lo tanto los procedimientos más rápidos y útiles disponibles para diagnóstico de
sífilis.

Procedimiento:

1. Recolectar 3 ml de sangre, por punción venosa, (sin anticoagulante).


2. Separar el suero (4 min, 4000 rpm).
3. Atemperar los reactivos.
4. Colocar 50 microlitros o 0.05mL de suero del paciente y una gota de los
controles.
5. Colocar una gota del reactivo RPR carbón a cada suero.
6. Mezclar con diferente aplicador.
7. Agitar de 80-1000 rpm, durante 8 min.
8. Leer aglutinación.

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9. Interpretación de resultado:

Tipos de aglutinación Lectura Resultado


Agregados grandes o R Reactivo
medianos
Agregados pequeños W Débilmente reactivo
Ningún agregado N No reactivo

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Prá ctica No.10 Inmunoensayo cromatográ fico para la detecció n


cualitativa de anticuerpos del Virus de Inmunodeficiencia
Humana VIH tipo 1 y 2.
Competencia profesional: Realiza Inmunoensayos

Objetivo: El alumno será capaz de emplear pruebas cromatográficas para la


detección cualitativa de anticuerpos VIH 1 y 2 en sangre total y/o suero humano.

Introducción:

VIH significa virus de la inmunodeficiencia humana. Éste daña el sistema


inmunitario mediante la destrucción de los glóbulos blancos que combaten las
infecciones. Esto lo pone en riesgo de contraer infecciones graves y ciertos tipos
de cáncer. SIDA significa síndrome de inmunodeficiencia adquirida. Es la etapa
final de la infección con el VIH. No todas las personas con VIH desarrollan SIDA.

El VIH suele contagiarse a través de relaciones sexuales sin protección con una
persona infectada. También puede propagarse por intercambio de agujas para
inyectarse drogas o por contacto con la sangre de una persona infectada. Las
mujeres pueden infectar a sus bebés durante el embarazo o el parto.

Los primeros síntomas de la infección por VIH pueden ser inflamación de los
ganglios y síntomas parecidos a la gripe. Estos pueden aparecer y desaparecer
dentro de dos a cuatro semanas. Los síntomas graves pueden no aparecer hasta
meses o años después.

Con un análisis de sangre se puede saber si una persona tiene una infección por
VIH.

Procedimiento:

1. Atemperar los reactivos.


2. Recolectar 3ml de sangre por punción venosa
3. Separar el suero esto se lograra centrifugando 10 minutos a 4000 r.p.m.
4. Colocamos 1 gota de suero del paciente en el pequeño pocillo del cartucho
5. Añadimos dos gotas del diluyente Anti-VIH

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6. Interpretar resultados 10 minutos después:

C C

PRUEBA NEGATIVA (-) PRUEBA POSITIVA (+)

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Prá ctica No.11 Prueba rá pida cuantitativa para la detecció n del


Anticuerpo específico del virus de Hepatitis C (HCV) en suero o
plasma.
Competencia profesional: Realiza Inmunoensayos

Objetivo: El alumno será capaz de emplear pruebas rápidas para la detección del
Anticuerpo específico del virus de Hepatitis C en suero o plasma.

Introducción:

El virus de la hepatitis C (VHC) es un virus ARN monocatenario pequeño con


envoltura y de sentido positivo. Actualmente se sabe que el VHC es la principal
causa de la transmisión por vía parenteral de la hepatitis que no es del tipo A ni B.
El anticuerpo del VHC se encuentra en más del 80% de los pacientes con hepatitis
correctamente demostrada de tipo diferente a A y B.
Con los métodos convencionales no se ha conseguido aislar el virus en el cultivo
celular ni visualizarlo con un microscopio electrónico. La clonación del genoma
viral ha permitido desarrollar ensayos serológicos que emplean antígenos
recombinantes.1,2 En comparación con los principales inmunoensayos (EIA)
comerciales para VHC de primera generación que empleaban antígenos
recombinantes sencillos, se han incorporado múltiples antígenos que emplean
péptidos sintéticos y/o proteínas recombinantes a los nuevos análisis serológicos
para evitar la reactividad cruzada no específica y aumentar la sensibilidad a las
pruebas de anticuerpos del VHC.3,4
La Prueba Rápida HCV en Cassette (Suero/Plasma) es una prueba rápida para
detectar cualitativamente la presencia de anticuerpos de HCV en una muestra de
suero o plasma. La prueba utiliza un conjugado de oro coloidal de proteínas HCV
recombinantes para detectar selectivamente anticuerpos de HCV en suero o
plasma. Las proteínas recombinantes HCV utilizadas en el kit de la prueba están
codificadas por genes para ambas proteínas estructurales (nucleocápside) y no
estructurales.

Procedimiento:

1. Recolectar 3ml de sangre por punción venosa S/Anticoagulante


2. Separar el suero (10 min, 4000 rpm)
3. Dejar que el sobre alcance la temperatura ambiente antes de abrirla.

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4. Retire el casette de la bolsa sellada y coloque en una superficie limpia y lisa


5. Transferir 1 gota del suero o plasma al pocillo de la muestra del cassette de
la prueba.
6. Seguidamente añadir 2 gotas del buffer e iniciar el cronometro.
7. Espere a que aparezca la linea(s) coloreada. El examen debe ser leído en
10 minutos.

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