PRUEBAS DE RECONOCIMIENTO DE AMINOÁCIDOS Y SEPARACIÓN POR

CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA

I. C. Ceballos , J. V. Acero. Laboratorio de Bioquímica. Universidad Jorge Tadeo

Lozano, Bogotá, Colombia. Agosto 25, 2021

RESUMEN: El objetivo general de esta práctica de laboratorio es identificar algunos aminoácidos y

sus grupos característicos en las cadenas laterales por medio de reacciones que permiten diferenciar
cambios de color. Además, para identificarlos y poderlos separar debido a sus diferentes afinidades
por las fases móvil y estacionaria se usa la técnica de cromatografía en capa delgada (CCD). Como
resultado de las diferentes reacciones se deberán presentar diferentes cambios físicos en los
aminoácidos para su respectiva identificación estos procesos se denominan reacciones cualitativas
donde se usa por ejemplo reacción con ninhidrina entre otras. Para separar e identificar los
aminoácidos se usó espinaca fresca y por medio de la técnica de cromatografía, empleando acetato
de celulosa como fase estacionaria y butanol-acetona-ácido acética como fase móvil. En conclusión,
existen diversas formas para identificar aminoácidos y además de separarlos cuando se trata de una
muestra con gran cantidad de AA.

PALABRAS CLAVE: Cromatografía, extracto etanólico, fase estacionaria, fase móvil, Rf.

ABSTRACT: The general objective of this laboratory practice is to identify some amino acids and
their characteristic groups in the side chains by means of reactions that allow differentiating color
changes. In addition, the thin layer chromatography (TLC) technique is used to identify and separate
them due to their different affinities for the mobile and stationary phases. As a result of the different
reactions, different physical changes in the amino acids must be presented for their respective
identification, these processes are called qualitative reactions where, for example, reaction with
ninhydrin is used, among others. To separate and identify the amino acids, fresh spinach was used
and by means of the chromatography technique, using cellulose acetate as the stationary phase and
butanol-acetone-acetic acid as the mobile phase. In conclusion, there are several ways to identify
amino acids and also to separate them when dealing with a sample with a large amount of AA.

KEY WORDS: Chromatography, ethanolic extract, stationary phase, mobile phase, Rf..

INTRODUCCIÓN:

METODOLOGÍA:

Extracción Etanólica de Aminoácidos

Para este procedimiento se pesó en un vidrio de reloj 5 g de espinaca seca

previamente picada, posteriormente se llevó al mortero para elaborar dos
extracciones con ayuda de etanol al 70% en una dosificación de 15 ml.

Los dos extractos son centrifugados y depositados en un vaso de precipitados de

100mL el cual se dispone a baño maría para evaporar la cuarta parte de etanol
presente en la solución.

Preparación de los patrones de Aminoácidos

Se suspende 1mg de cada aminoácido en una solución de metanol-agua al 50-50

con un pah de 17. Con esto se calcula que cada solución de aminoácido contenga
un porcentaje 39,6% (mada/volumen).
Se colocaron 10 mL de la mezcla de los solventes en cada una de las cámaras del
monitor, posteriormente se dejan en reposo.

Cromatoplacas

Se traza una línea de con ayuda de un lápiz en la fase estacionaria con una
ubicación de 1,5 cm del borde inferior. Línea la cual es denominada la línea de
siembra. Con ayuda de un tubo capilar se adicionan 5 gotas de extracto etanólico de
espinaca sobre las líneas de siembra junto con 3 gotas de cada aminoácido patrón.

Secar las gotas aplicadas en la placa con ayuda de una estufa y colocar
rápidamente la placa en la cámara de cromatografía verificando que los solventes
queden por debajo de la línea de aplicación y tapar.

Cuando las gotas asciendan completamente se procede a secar la placa a una

temperatura de 100°C. Al estar completamente seca se aplica solucion re ninhidrina
y se seca nuevamente a la misma temperatura por 5 minutos aproximadamente o
hasta notar el cambio de color.

Para finalizar se identifican todas las manchas con ayuda de un lápiz indicando el
centro de cada una de ellas para poder generar los datos que contribuyen para
calcular el Rf. Marcar, envolver en película plástica y llevar a destino final.

RESULTADOS:

1. Cromatografía:

2. Reacciones de reconocimiento:

a. Reacción con ninhidrina:

-Blanco (agua -Blanco (agua

destilada) destilada)

-Alanina (Al) -BSA (Muestra

proteica)
→
→
 -Blanco (agua -Blanco (agua
destilada) destilada)

-Asparagina (As) -Glicina (Gly)

→ →

-Blanco (agua -Blanco (agua

destilada) destilada)

-Prolina (Pro) -OVA (muestra

proteica)
→
→

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

BIBLIOGRAFÍA: