LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

PRÁCTICA #8: CONTROL DE MICROORGANISMOS

JENNIFER GUZMAN ORTIZ

ALEJANDRO TORO LOPERA

PROFESORA
VALENTINA CARDONA HERNÁNDEZ

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y ALIMENTARIAS
TECNOLOGÍA EN REGENCIA DE FARMACIA

MEDELLIN
2017
 METODOLOGÍA
Para esta práctica se llevaron a cabo varios procedimientos los cuales constan de
métodos físicos, métodos químicos y agentes antimicrobianos, los cuales se
describen a continuación:
De manera general:
1. Recordar que se debe esterilizar las asas que se van a utilizar, antes y
después de su uso con el fin de no contaminar las demás muestras.
La esterilización de las asas se realiza flameándolas en un mechero hasta
conseguir que la punta se observe de un color rojo para garantizar la
adecuada esterilización.

2. Para la siembra de las cepas en tubos de ensayo en medio líquido, tener

presente que hay que flamear la boca de los tubos antes y después de
cada siembra y al momento de la inoculación hacer uso del asa de argolla
haciéndola rotar en el medio con el fin de hacer una adecuada siembra.

3. En cada siembra tener cerca el mechero para evitar que se contaminen las
siembras por agentes externos del ambiente.

ACCIÓN DE LA RADIACIÓN CON LUZ ULTRAVIOLETA

Sembrar en 3 cajas de Petri, con agar nutritivo, los siguientes microorganismos
colocando un microorganismo diferente en cada caja: Escherichia coli,
Staphylococcus aureus, Bacillus cereus.
Hacer una siembra uniforme, con la ayuda de un hisopo estéril esparcir en tres
direcciones y pasar el hisopo por el borde de la placa.
Reemplazar la tapa de la caja por un pedazo de papel que en el centro va a estar
recortado en forma de flecha, corazón, trébol, etc. Procurando que el diseño
recortado quede bien centrado en el agar.
Poner la caja bajo la luz ultravioleta durante 10 minutos. Pasado el tiempo de 10
minutos, retirar el papel de la caja e incubar los cultivos a 37°C en oscuridad
durante 48 horas.
Revisar los cultivos y hacer una descripción de los resultados obtenidos.

CAMBIO EN LA TEMPERATURA Y EL TIEMPO DE EXPOSICIÓN

Tomar 3 tubos de ensayo con caldo nutritivo y sembrar en cada uno de los tubos
una cepa Staphylococcus aureus, proceder de igual manera con una cepa de
Bacillus cereus.
Preparar baños de María a temperatura de 50°C, 70°C y 80°C.
Luego preparar 3 cajas de Petri que con agar nutritivo para cada cepa que
corresponde a cada temperatura y dividir cada una de las cajas en 4 sectores de
la siguiente manera: C (control), 5 min, 10 min y 15 min.
Tomar una muestra del cultivo antes de someter al calor y sembrar en el sector
marcado como C (control) para las dos cepas.
Colocar los tubos en los respectivos baños María y cada 5 minutos sacar una
muestra y sembrar en el sector que le corresponde.
Incubar las cajas a 37°C durante 48 horas y pasado este tiempo hacer la
descripción de los resultados.

CAMBIO EN LA PRESIÓN OSMÓTICA

Tomar 5 tubos de ensayo con caldo nutritivo, ajustados a las siguientes
concentraciones de glucosa: 0%, 10%, 15%, 20% y 25%.
Inocular cada uno de los tubos con las cepas de Escherichia coli y Staphylococcus
aureus en los diferentes medios de cultivo.
Incubar cada uno de los tubos a 37°C en oscuridad por un tiempo de 48 horas.
Revisar los cultivos pasado el tiempo de incubación y realizar una descripción de
los resultados que se observen.

CAMBIO EN EL PH
Tomar 5 tubos de ensayo con caldo nutritivo y ajustar el pH con (HCL o NaOH
según el caso) a los siguientes valores: 3.0, 5.0, 7.0, 9.0,11.0.
Hacer una siembra en cada uno de los tubos con una cepa Escherichia coli.
Proceder de la misma manera, pero con una cepa de Staphylococcus aureus.
Incubar los tubos de ensayo con la siembra de cada una de las cepas a 37°C por
un tiempo de 48 horas y hacer la observación de los resultados obtenidos.

ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS

Tomar dos cajas de Petri con agar nutritivo y hacer una siembra con cepas de
Escherichia coli y Staphylococcus aureus respectivamente.
Con el aplicador colocar los discos con los antibióticos a evaluar los cuales son:
penicilina(P), gentamicina(CN) y tetraciclina(TE) en cada una de las cajas de Petri.
Incubar a 37°C por 48 horas y después de este tiempo realizar las observaciones
de los resultados.

ACCCIÓN DE LOS AGENTES QUÍMICOS

Tomar 2 cajas de Petri con agar nutritivo y sembrar con las cepas de Escherichia
coli y Staphylococcus aureus respectivamente.
Dividir cada caja en 5 sectores e impregnar 5 discos de papel filtro con los agentes
químicos a utilizar: límpido, listerine, antibacterial, fabuloso y loción. Después
colocar los discos en la caja con el fin de que queden distribuidos en los 5
sectores respectivamente.
Realizar el mismo procedimiento para cada cepa, pero en cajas de Petri que
contengan agar nutritivo + peptona.
Incubar a 37°C durante 48 horas para después hacer la descripción de los
resultados.

RESULTADOS
ACCIÓN DE LA RADIACIÓN CON LUZ ULTRAVIOLETA
 S. aureus B. cereus E. coli
Microorganismo Si (en el centro No (en el centro Más o menos (en
sensible a la luz del agar solo se del agar se el centro del agar
ultravioleta observó el presentó un crecieron unos
crecimiento de 3 crecimiento pequeños puntos,
colonias, por lo abundante de la lo que indica un
que el crecimiento bacteria). crecimiento
se vio en gran escaso).
parte inhibido por
la luz ultravioleta).

CAMBIO EN LA TEMPERATURA Y EL TIEMPO DE EXPOSICIÓN

 Temperaturas (S. aureus)
Tiempo 50°C 70°C 80°C
control La siembra de la La siembra de la La siembra de la cepa
cepa de la bacteria cepa de la bacteria de la bacteria se
se realizó sin se realizó sin realizó sin exponerla
exponerla a calor y exponerla a calor y a calor y se observa
se observa se observa crecimiento en toda la
crecimiento en toda crecimiento en todo línea de inoculación.
la línea de el tramo de
inoculación. inoculación.
5 min Se observa un Se observa un Se da un crecimiento
crecimiento crecimiento de moderado de
moderado en todo colonias colonias.
el sector donde se relativamente
realizó la siembra. abundante.
10 min Se observa un Se observa el Se observan muy
crecimiento crecimiento muy pocas colonias, se da
abundante de la abundante de las un crecimiento
bacteria. colonias. escaso de estas.
15 min Este sector también En este sector se Solo se observa una
presenta un observa un colonia, se da un
crecimiento crecimiento crecimiento muy
abundante de las moderado de las escaso de la bacteria.
colonias. colonias.
 Temperaturas (B. cereus)
Tiempo 50°C 70°C 80°C
control La siembra de la La siembra de la La siembra de la
cepa de la bacteria cepa de la bacteria cepa de la bacteria
se realizó sin se realizó sin se realizó sin
exponerla a calor y exponerla a calor y exponerla a calor y
se observa el se observa su se observa su
crecimiento de 4 crecimiento con crecimiento en todo
colonias. colonias separadas este sector.
en todo este sector.
5 min Se observa un Se observa un Se observa un
crecimiento crecimiento crecimiento
abundante con moderado de abundante de las
colonias muy grandes colonias. colonias.
en todo el sector.
10 min Al igual que en el En la mayoría del Se presenta un
 anterior sector se sector se evidencia crecimiento
observa un un crecimiento abundante de las
crecimiento abundante de colonias.
abundante con colonias.
colonias en todo el
sector.
15 min Se observa un A comparación del Se presenta un
crecimiento anterior sector, se crecimiento
moderado con observa un abundante de las
colonias en gran crecimiento colonias.
parte del sector. moderado de las
colonias.

CAMBIO EN LA PRESIÓN OSMÓTICA

[ ] 0% [ ] 10% [ ] 15% [ ] 20% [ ] 25%

concentraciones de sacarosa (S. aureus)

[ ] 0% [ ] 10% [ ] 15% [ ] 20% [ ] 25%

La bacteria no Se presenta Se presenta Se presenta Se presenta
presenta turbidez en el turbidez en el turbidez en el también
crecimiento medio y un medio y un medio y un turbidez y un
en esta leve leve leve sedimento pero
concentración sedimento en sedimento en sedimento en muy escaso a
de sacarosa. el fondo del el fondo del el fondo del comparación de
tubo. tubo. tubo. las 3
concentraciones
anteriores.
 Concentraciones de sacarosa (E. coli)

[ ] 0% [ ] 10% [ ] 15% [ ] 20% [ ] 25%

La bacteria no Se presenta Se presenta Se presenta Se presenta
presenta mayor mayor mayor turbidez en el
crecimiento turbidez en el turbidez en el turbidez en el medio y un
en esta medio y un medio y un medio y un mayor
concentración leve mayor mayor sedimento en
de sacarosa. sedimento en sedimento en sedimento en el fondo del
el fondo del el fondo del el fondo del tubo.
tubo. tubo. tubo.

CAMBIO EN EL PH
 Escalas de pH (S. aureus)
3 5 7 9 11
Se presenta Se presenta Se presenta Se da un Se presenta
un escaso también un turbidez en el resultado una turbidez
crecimiento escaso medio y con similar que en muy
con un leve crecimiento sedimento en el 7, se moderada al
sedimento en pero con un la parte presenta igual que el
la parte moderado inferior del turbidez en el sedimento en
inferior del sedimento en tubo. medio y con el fondo del
tubo. la parte sedimento en tubo.
inferior del la parte
tubo. inferior del
tubo.

Escalas de pH (E. coli)

3 5 7 9 11
Se observa un Se presenta Se presenta Se observa Se presenta
sedimento en un sedimento un sedimento resultados un sedimento
la parte en la parte en la parte similares que en el fondo
inferior del inferior del inferior del en las escalas del tubo pero
tubo pero con tubo y una tubo y una de 5 y 7 pero muy poca
muy poca película en la película en la no tan turbidez en el
turbidez. superior del superior del abundantes. medio.
tubo. tubo.
ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS

S. aureus E. coli

Antibióticos
Bacteria Penicilina (P) Gentamicina (CN) Tetraciclina (TE)
S. aureus La bacteria creció El crecimiento de El crecimiento de
de manera la bacteria se vio la bacteria se vio
normal, no se inhibido en una inhibido en una
presentó halo de mínima parte, el mayor parte, el
inhibición. halo de inhibición halo de inhibición
presenta un presenta un
diámetro muy diámetro más
pequeño. grande.
E. coli La bacteria creció El crecimiento de El crecimiento de
de manera la bacteria se vio la bacteria se vio
normal, no se inhibido en una inhibido en una
presentó halo de mínima parte, el mayor parte, el
inhibición halo de inhibición halo de inhibición
presenta un presenta un
diámetro muy diámetro más
pequeño. grande.

ACCCIÓN DE LOS AGENTES QUÍMICOS

  En agar nutritivo:

S. aureus E. coli

Agentes químicos
Bacteria Listerine Antibacterial Fabuloso Límpido Loción
S. aureus No se Se presenta No se No se Se
presenta una escasa presenta presenta presenta
crecimiento inhibición crecimiento crecimiento una escasa
de la del de la de la inhibición
bacteria, el crecimiento bacteria, el bacteria, el del
diámetro de la diámetro diámetro crecimiento
del halo de bacteria, el del halo de del halo de de la
inhibición halo de inhibición inhibición bacteria, el
es bastante inhibición es bastante es bastante halo de
grande. presenta un grande. grande. inhibición
diámetro presenta
pequeño. un
diámetro
pequeño.
E. coli No se Se presenta Se No se Se
presenta crecimiento presenta presenta presenta
crecimiento de la crecimiento crecimiento crecimiento
de la bacteria de de la de la de la
bacteria, manera bacteria de bacteria, el bacteria de
aunque el normal, no manera diámetro manera
diámetro se observa normal, no del halo de normal, no
del halo de halo de se observa inhibición se observa
inhibición inhibición. halo de es el mayor halo de
es menor inhibición. que se inhibición.
 al observa.
compararlo
con el del
límpido.

 Con agar nutritivo + peptona

Bacteria Listerine Antibacterial Fabuloso Límpido Loción

S. aureus Se Se presenta Se Se Se
presenta un presenta presenta presenta
un crecimiento un un un
crecimiento normal de la crecimiento crecimiento crecimiento
moderado bacteria, no moderado moderado normal de
de la hay halo de de la de la la bacteria,
bacteria, se inhibición. bacteria, se bacteria, se no hay halo
observa observa observa de
halo de halo de halo de inhibición.
inhibición inhibición inhibición
pero un pero un pero un
poco más poco más poco más
pequeño. pequeño. pequeño.
E. coli Se Se presenta Se Es en el Se
presenta un presenta único presenta
un crecimiento un sector un
crecimiento normal de la crecimiento donde se crecimiento
normal de bacteria, no normal de inhibe el normal de
la bacteria, hay halo de la bacteria, crecimiento la bacteria,
no hay halo inhibición. no hay halo de la no hay halo
de de bacteria y de
inhibición. inhibición. se observa inhibición.
un
diámetro
grande del
halo.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS
ACCIÓN DE LA RADIACIÓN CON LUZ ULTRAVIOLETA
La radiación con luz ultravioleta es un método físico para la esterilización de
microorganismos, donde las ondas ultravioletas tienen la energía suficiente para
causar roturas en el ADN, produciendo la muerte del microorganismo.
La luz ultravioleta tiene poca capacidad para penetrar la materia por lo que solo
los microorganismos que se encuentran en la superficie de los objetos que se
exponen directamente a la acción de la luz ultravioleta son susceptibles de ser
destruidos.
Este método se ha utilizado principalmente para la eliminación de agentes
patógenos como lo son microorganismos de Escherichia coli y Staphylococcus
aureus que además son sensibles a la luz ultravioleta ya que se inhibe su
crecimiento.
Aunque encontramos que tanto E. coli como S. aureus son sensibles a la luz
ultravioleta, al observar los resultados después de realizada la práctica se
encontró que en la mitad del agar donde estaba el recorte del diseño y que fue la
parte que se expuso a la luz ultravioleta había un leve crecimiento de ambas
cepas, posiblemente no se tuvo la suficiente longitud de onda y el tiempo indicado
de exposición para que el crecimiento se inhibiera en su totalidad. Por otra parte,
la B. cereus otra de las cepas que se sembró y a la que también se expuso a la luz
ultravioleta si fue capaz de crecer en la mitad del agar ya que esta bacteria no
hace parte de los microorganismos sensibles a la luz ultravioleta, además de que
tiene esporas las cuales le provee mayor resistencia frente a los factores físicos en
los que se vea afectada la bacteria.

CAMBIO EN LA TEMPERATURA Y EL TIEMPO DE EXPOSICIÓN

Para el crecimiento de los microorganismos, la temperatura es uno de los factores
ambientales más importantes que ayudan a su óptimo crecimiento y
supervivencia, si no se tiene una temperatura óptima de acuerdo al tipo de
microorganismo se puede ver afectada su velocidad de crecimiento.
De acuerdo a lo anterior, se puede decir que cada microorganismo tiene
temperaturas de crecimiento que lo distinguen de otros microorganismos y se
pueden clasificar de la siguiente manera:
 Microorganismos psicrófilos: capaces de vivir a temperaturas por debajo de
los 5 °C, sus temperaturas óptimas de desarrollo se encuentran entre 12 y
15 °C y sus temperaturas de desarrollo máximas son de 15 a 20 °C.
 Microorganismos mesófilos: presentan temperaturas óptimas a los 25-40ºC
y máximas entre 35 y 47ºC. 
 Microorganismos termófilos: presentan temperaturas óptimas a los 50-75ºC
y máximas entre 80 y 113ºC.
Si tenemos en cuenta lo anterior, si una bacteria es sometida a una temperatura
mayor a la que normalmente crece, esta puede ocasionar daños en sus proteínas
y ácidos nucleicos. También es importante conocer acerca del punto térmico
mortal, el cual hace referencia a la temperatura mínima que mata a todas las
bacterias en un tiempo determinado y normalmente es de 10 minutos.
Analizando los microorganismos trabajados:
S. aureus: Es una bacteria mesófila, pero es resistente al medio y puede soportar
temperaturas hasta los 70°C.
B. cereus: Es una bacteria esporulada, su temperatura óptima de crecimiento es
de 30 a 40 °C, pero sus esporas son moderadamente resistentes al calor ya que
resisten 100° durante 5 a 10 minutos.
Después de haber sometido cada bacteria a temperaturas diferentes y tiempos
diferentes de exposición, se puede decir que el tiempo óptimo para que hubiera
menos crecimiento de las bacterias fue de 15 minutos.

CAMBIO EN LA PRESIÓN OSMÓTICA

CAMBIO EN EL PH
El pH es un parámetro crítico para el crecimiento de los microorganismos debido a
que cada microorganismo tiene un rango de pH en el que se puede desarrollar
adecuadamente, esos rangos de pH son tolerables por diferentes
microorganismos y fuera de ese rango pueden morir. Es por eso que cada especie
crece en un rango determinado de pH y tiene un pH óptimo de crecimiento.
De acuerdo al pH óptimo los microorganismos pueden ser:
 Acidófilos: si crecen de modo óptimo entre pH 0 y 5
 Neutrófilos: si crecen de modo óptimo entre pH 5.5 y 8
 Alcalófilos: si crecen de modo óptimo entre pH 8.5 y 11.5
Las bacterias son en su gran mayoría neutrófilas y muchas de ellas modifican el
pH del medio para poder resistir a entornos acidófilos o alcalófilos.
A pesar de que los microorganismos pueden crecer en un pH relativamente amplio
alrededor del óptimo, cuando se presentan cambios bruscos en ese pH se puede
ocasionar daños en la membrana y por ende en el transporte de solutos inhibiendo
las enzimas.
Si analizamos la bacteria E. coli para sus condiciones de crecimiento tiene un pH
mínimo de 4.4, un pH óptimo entre 6-7 y un pH máximo de 10. Es decir que para
nuestro caso en la escala de pH que trabajamos la cual fue entre 3-11 obtuvimos
crecimiento de la bacteria con mayor turbidez entre los pH de 5 a 9, ya que estos
eran más óptimos para su crecimiento. Y de acuerdo a su pH óptimo se puede
clasificar dentro de los microorganismos neutrófilos.
Para la bacteria S. aureus dentro de sus condiciones de crecimiento tiene un pH
mínimo de 4, un pH óptimo entre 7-8 y un pH máximo de 9,6. En nuestros
resultados en las escalas de pH ya mencionadas, se tuvo un mayor crecimiento de
la bacteria en los pH de 5 a 9 y de acuerdo a esto también puede ser considerada
como neutrófila de acuerdo a su pH óptimo.

ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS

ACCCIÓN DE LOS AGENTES QUÍMICOS

CONCLUSIONES
 Se logró conocer diferentes métodos existentes al momento de tener un
control sobre los microorganismos e identificar que hay métodos físicos y
químicos y que además se debe saber cuál es la respuesta de los
microorganismos frente a los diferentes tipos de compuestos que son
utilizados para llevar a cabo un control sobre estos, para así tener a nuestro
alcance los métodos que son más eficaces si queremos desarrollar
estrategias que ayuden a nuestro bienestar y salud.
Referencias
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