Código:

Centro Nacional de Asistencia Técnica a la Industria – ASTIN 9230-FP-F-322

Versión: 2
ESTUDIO DE CASO: TECNICAS INSTRUMENTALES

1. IDENTIFICACIÓN DEL INSTRUMENTO:

Programa de Formación: Ficha de caracterización:2105962
Química Aplicada a la Industria
Nombre de la Guía: Código de la Guía:
Nombre del Instructor: Jorge Andrés Ríos Flórez
Nombre del aprendiz:
Ciudad y fecha: Cali,

2. PRESENTACIÓN E INSTRUCCIONES PARA EL DILIGENCIAMIENTO:

Señor/a Aprendiz:
 Resuelva los problemas o casos planteados.
 Sustente las respuestas a su instructor.

3. CUERPO DEL INSTRUMENTO:

Basado en el método ICUMSA GS7/4/8-23 (2011) Responda:

1. Explique cómo se da la afinidad entre la fase estacionaria y los analitos.

Dependiendo los tiempos de elusión, ya que según la geometría los grupos hidroxilo de los
diferentes azucares interaccionan con los cationes, además entre más grande las moléculas,
estas no penetran fácilmente la resina por lo cual fluyen fácilmente por ella

2. Cómo está conformada la fase móvil y por qué tiene tales componentes?
Según la norma hay 2 tipos de fase móvil
Para la base sódica: Solución de sulfato de sodio
Para la base cálcica: Solución de EDTA
Tiene estos componentes ya que la columna de base requiere una resina de intercambio
catiónico que presenten propiedades de intercambio de ligando como de exclusión por tamaño y
estas dos bases poseen las características necesarias

3. Busque la información técnica de los estándares y escríbala en la siguiente tabla

Estándar Pérdida en
No. Rotación
secado a 105 Apariencia % Pureza
CAS especifica o
C
Sacarosa grado Alfa 20/D; Forma
reactivo 57-50-1 26% agua = <= 0.1% solido, color 99.5%
analítico 66.3-67.0 crema
Glucosa grado
Solido
reactivo 50-99-7 - - 97.5%
analítico incoloro
Fructosa grado Forma
reactivo 57-48-7 -93.5 - -91.0 <= 0.5% solido, color 99.0%
analítico crema

4. En la técnica se emplea una bomba Isocratica.

a. Que es elución Isocratica?
Sustancia que utiliza una fase móvil para migrar atravez de una columna del equipo de HPLC
b. De una breve descripción de la bomba Isocratica Agilent Series 1200.
Bomba con diseño en serie de dos émbolos y dos canales que abarca todas las funciones
esenciales que debe cumplir cualquier sistema de flujo de disolventes. La medida y
suministro de disolvente a la zona de alta presión se realiza mediante un dispositivo que
puede generar hasta 400 bares.
 Código:
Centro Nacional de Asistencia Técnica a la Industria – ASTIN 9230-FP-F-322

Versión: 2
ESTUDIO DE CASO: TECNICAS INSTRUMENTALES

5. En técnica se emplea una balanza analítica de 0,1 mg. Suponga que dicho instrumento es marca
Sartorius serie 5034. Complete el siguiente cuadro:
Dimensiones
Capacidad Alimentacion
Referencia Fabricante Imagen (largo, ancho, Sensibilidad
max(g) (Voltaje)
profundo) (mm)
KBF006 Nahita 120 195x400x275 0,0001 Adaptador
mm CA 220 V

6. En técnica se emplea una columna “Sugar peak 300 x 6,5 mm”. Escriba la información técnica
del accesorio en el siguiente cuadro:

Presion
Descripcion del Diámetro Tamaño de
Fabricante Imagen Longitud (mm) máxima
producto interno (mm) particula (µm)
(Bar)
Columna cuya Waters 6.5 300 10 6000 psi
función separa (41.36854
los alcoholes y MPa)
monosacáridos
del azúcar
atravez de un
intercambio
cationico

7. La presión máxima del método es 4 Mpa. La columna Waters “Sugar Peak” se puede someter a
esta presión?. Explique.
 Código:
Centro Nacional de Asistencia Técnica a la Industria – ASTIN 9230-FP-F-322

Versión: 2
ESTUDIO DE CASO: TECNICAS INSTRUMENTALES

Si ya que la presión máxima de la columna es de 41.37 MPa

8. El cromatografo HPLC cuenta con un detector de índice de refracción “ 1260 Infinity” de la marca
Agilent. Indique si este detector cumple con la especificación de temperatura descrita en el
método. Explique.
Sí cumple con la especificación de temperatura del método ya que esta es de 35 °C y el detector
Agilent mencionado permite ubicar el control de temperatura ambiente entre +5°C a 55°C

9. Por qué un refractómetro acoplado al cromatografo es un medio adecuado para detectar

azucares?
Si, puesto que fundamentalmente según el grado de rotación de los azucares, así mismo se
refractará la luz en las disoluciones, permitiendo así que el refractómetro identifique el tipo de
azucar

10. Por qué se decide por medir la respuesta del equipo en términos de altura de pico en lugar de
área bajo la curva?
Porque el área bajo la curva determina el tiempo de elución, el pico detecta la concentración del
analito

11. Basado en la afinidad de la fase estacionaria por cada azúcar, azucares por la columna, indique
el nombre del azúcar que corresponda a los picos 1, 2 y 3.

Fructosa Glucosa Sacarosa

12. Calcule la resolución, el número de platos teóricos, el factor de retención y el

factor de selectividad de los picos 2 y 3 del cromatograma del punto 11. Por que el pico 3
tiene mayor resolución o está mejor resuelto?.
 Código:
Centro Nacional de Asistencia Técnica a la Industria – ASTIN 9230-FP-F-322

Versión: 2
ESTUDIO DE CASO: TECNICAS INSTRUMENTALES

El pico 3 esta mayor resuelto es decir fue la sustancia que estuvo mas retenida por ser la
sustancia mas pesada
13. Observa pico con tiempo muerto? Si, no? Por que?.
En el cromatograma no se observa un pico de ruido o perturbación puesto que el eje x
inicia desde el 1.10 min
14. Si el método exige una resolución mínima de 2,0 y Número de platos mínimo de 2000.
Explique si los picos 2 y 3 del cromatograma del punto 11 cumplen con estos parámetros
de separación.
Según mis datos calculado la resolución del pico 2 no cumple con el parámetro pero si con
el mínimo número de platos, para el pico 3 cumple con ambos parámetros.
 Código:
Centro Nacional de Asistencia Técnica a la Industria – ASTIN 9230-FP-F-322

Versión: 2
ESTUDIO DE CASO: TECNICAS INSTRUMENTALES

15. A partir de las fórmulas y los datos descritos a lo largo del método analítico, realice los cálculos
necesarios para obtener los porcentajes de las réplicas 1, 2 y los promedios de azucares en la
muestra, los cuales están consignados en la tabla 3:
 Código:
Centro Nacional de Asistencia Técnica a la Industria – ASTIN 9230-FP-F-322

Versión: 2
ESTUDIO DE CASO: TECNICAS INSTRUMENTALES
 Código:
Centro Nacional de Asistencia Técnica a la Industria – ASTIN 9230-FP-F-322

Versión: 2
ESTUDIO DE CASO: TECNICAS INSTRUMENTALES

16. A partir de los resultados expuestos en el método, el % de glucosa, fructosa y sacarosa en melaza
cumplen con la precisión requerida, expresada como RSD?. Explique.

El método indica que el RSD para el sacarosa debe ser menor al 1% por lo tanto si cumple y para la
glucosa y la fructosa debe ser menor al 2% que también cumple con la norma

17. Por qué cree usted que el porcentaje de sacarosa en la muestra es tan elevado comparado con los
monosacáridos también presentes.

RESPUESTAS
 Código:
Centro Nacional de Asistencia Técnica a la Industria – ASTIN 9230-FP-F-322

Versión: 2
ESTUDIO DE CASO: TECNICAS INSTRUMENTALES
 Código:
Centro Nacional de Asistencia Técnica a la Industria – ASTIN 9230-FP-F-322

Versión: 2
ESTUDIO DE CASO: TECNICAS INSTRUMENTALES

4. PRODUCTO (S):
1. Taller resuelto
Observaciones y/o recomendaciones: