COLORACIONES BACTERIANAS- COLORACIÓN GRAM

Prof. Alejandro Mendoza Rojas

I. INTRODUCCION

El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que

resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal
dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la
rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es la
utilización de colorantes.

Si se desea simplemente aumentar el contraste de las células para

la microscopía, son suficientes los procedimientos que usan un
solo colorante llamado de tinción simple. Sin embargo, a menudo
se utilizan métodos que no tiñen de igual modo todas las células,
es el proceso denominado tinción diferencial. Uno muy usado en
microbiología es la tinción Gram.
Basándose en su reacción a la tinción Gram, las bacterias pueden
dividirse en dos grupos: Gram positivas y gramnegativas. Esta
tinción tiene gran importancia en taxonomía bacteriana ya que
indica diferencias fundamentales de la pared celular de las
distintas bacterias.
Mientras que las bacterias gramnegativas son constantes en su
reacción, los microorganismos Gram positivos pueden presentar
respuestas variables en ciertas condiciones (son Gram lábiles).

Por ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias Gram

positivas pierden la propiedad de retener el cristal violeta, y en
consecuencia, se tiñen por la safranina apareciendo como
gramnegativos. Análogo efecto se produce en ocasiones por
cambio en el medio del organismo, o por ligeras modificaciones en
la ejecución de la técnica. Por este motivo, es preciso atenerse,
en la práctica, al procedimiento establecido.

II. OBJETIVOS

 Clasificar algunas especies bacterianas en Gram positivas o

Gram negativas de acuerdo a esta tinción.


III. MARCO TEORICO

Para explicar el mecanismo de la tinción de Gram se han

propuesto varias hipótesis fundadas en la naturaleza química
de las paredes celulares de los microorganismos.

¿El mecanismo de la tinción Gram es la reseñado en el siguiente

esquema:
 Productos
que se Reacción y coloración de las bacterias
utilizan
GRAM + GRAM -
1) Cristal Células color violeta Células color violeta
violeta

2) Lugol Se forma el complejo CV-I. Las Se forma el complejo CV-I.

solución células continúan teñidas de color Las células continúan teñidas
yodada violeta. de color violeta.

3) Alcohol Se deshidratan las paredes Eliminación por extracción de

celulares. Se  contraen los poros.
Disminuye la permeabilidad. El
complejo CV-I no sale de las
células que continúan teñidas de
color violeta.
grasas de las paredes
celulares. Aumenta la
porosidad. El complejo CV-I
se separa de la célula.

4) Safranina Células no decoloradas; quedan Células decoloradas; se tiñen

teñidas de color violeta. de color rosado.

IV. MATERIALES

 1 microscopio
 Aceite de inmersión
 Alcohol acetona
 Lugol
 Violeta de genciana
 Cronometro o reloj
 Mecheros
  Muestras bacterianas de origen natural o medios de cultivo
con bacterias

V. PROCEDIMIENTO

Preparación del frotis

Se procede a extraer la muestra frotando un hisopo o aza de Kolle,
dentro de la cavidad bucal o tomando muestras de cultivos ( previamente
trabajados)

Fijación del frotis

Luego se frota el hisopo o aza de kolle, teniendo cuidado de esparcir
bien la muestra sobre la lámina, luego secar en el mechero.

Tinción diferencial de Gram.

1. Cubrir la muestra con violeta de genciana durante 1 minuto.

2. Lavar cuidadosamente la muestra con agua para eliminar el exceso de
colorante.
3. Sacudir un poco y dejar secar, cubrir la muestra con lugol por 1
minuto
4. Repetir el paso 2
5. aplicar gota a gota el decolorante (alcohol acetona) por 5 a 10
segundos
6. repetir el paso 2.
7. Aplicar safranina 30 segundos
8. Repetir el paso 2 y Observar al microscopio con objetivo de inmersión
(1000 X)

VI.- CONCLUSIONES

Aunque las bacterias no aparecen en diferentes medio que las rodea,

difieren mucho químicamente esta diferencia química es los que permite
distinguir las bacterias por Tinción, pues generalmente, el colorante
reacciona con la célula bacteriana, pero no reacciona con su medio
exterior.

Debido a eso la Tinción es importante para la microbiología debido a que:

 Proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo
rodea, permitiendo diferenciar varios tipos morfológicos.
 Permite diferenciar entre cocos, bacilos y otras formas bacterianas


Permite saber que antibióticos son más eficaces en cada caso.

OBSERVACIONES REALIZADAS