Fitosanidad

ISSN: 1562-3009
nhernandez@inisav.cu
Instituto de Investigaciones de Sanidad
Vegetal
Cuba

Alarcón Pérez, Luciano; Reyes Rondón, Teresa; Rodríguez Gutiérrez, Giselle; Pupo Zayas, Ana D.
EFECTIVIDAD IN VITRO DE TRICHODERMA HARZIANUM (RIFAI) EN EL BIOCONTROL DE
RHIZOCTONIA SOLANI KÜHN Y PYRICULARIA GRISEA (SACC.) EN EL CULTIVO DEL ARROZ
(ORYZA SATIVA L.)
Fitosanidad, vol. 9, núm. 3, septiembre, 2005, pp. 57-60
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal
La Habana, Cuba

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FITOSANIDAD vol. 9, no. 3, septiembre 2005
EFECTIVIDAD IN VITRO DE TRICHODERMA HARZIANUM
(RIFAI) EN EL BIOCONTROL DE RHIZOCTONIA SOLANI KÜHN
Y PYRICULARIA GRISEA (SACC.) EN EL CULTIVO DEL ARROZ
(ORYZA SATIVA L.)
Luciano Alarcón Pérez, Teresa Reyes Rondón, Giselle Rodríguez Gutiérrez y Ana D. Pupo Zayas
Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Calle Genaro Rojas 86 e/ Marcelino Diéguez y Antonio
Barrera, Las Tunas, Cuba, CP 75200, c.e.: lapsavlt@enet.cu.
RESUMEN
A partir de plantas de arroz (Oryza sativa L.) de la variedad J-104 con
síntomas de Pyricularia grisea Cav. y Rhizoctonia solani Kühn se rea-
lizaron siembras in vitro de partes de tallos, hojas y raíces dañadas
en agar-agar y agar-peptona-dextrosa por los métodos tradicionales
de siembra. Se realizaron las identificaciones y descripciones de los
síntomas observados según las claves CMI, 1983, con el objetivo de
comprobar la efectividad antagónica e hiperparasítica de Trichoderma
harzianum contra ambos patógenos presentes en el cultivo. Para los
ensayos de biocontrol se realizaron pruebas in vitro en cultivo dual
de agar-peptona-dextrosa entre los patógenos y dos aislamientos de
T. harzianum, procedentes del cepario de mantenimiento del Labora-
torio Provincial de Sanidad Vegetal de Las Tunas (cepas A-53 y
A-34), generalizadas en la producción para el biocontrol de diferen-
tes patógenos del suelo. Diariamente se midió el diámetro de las
colonias, así como el nivel de competencia por el sustrato y el
hiperparasitismo del patógeno, según el nivel de crecimiento y
esporulación sobre las colonias. Se demostró la elevada actividad
hiperparasítica y competitiva de las cepas A-34 y A-53 de T. harzianum,
que exhibieron buenas potencialidades para el control de estos
patógenos. Estadísticamente se encontraron diferencias altamente
significativas a las 96 h, con un crecimiento promedio lineal en 7,37
cm en la cepa A-53 y 7,10 cm en la cepa A-34. En el caso de los
patógenos el crecimiento promedio fue de 3,63 cm en P. grisea y 2,62 cm
en R. solani.
Palabras clave: Pyricularia grisea, Rhizoctonia solani, Trichoderma
harzianum, antagonista, hiperparasitismo, hongos del suelo
INTRODUCCIÓN
El arroz es considerado, junto al trigo y el maíz, el
cereal que ocupa la preferencia en el consumo mundial,
superado únicamente por el trigo [FAO, 1981). En los
últimos años su cultivo ha mantenido una evolución
positiva, con una tendencia ascendente en áreas sem-
bradas y rendimiento. Junto al incremento de las siem-
bras se han presentado problemas fitosanitarios, en que
las enfermedades fungosas, insectos, virus y ácaros son
los que han hecho peligrar la cosecha. Las plagas del arroz
destruyen 35% de la producción mundial, y correspon-
ABSTRACT
Starting from plants of rice (Oryza sativa L.) variety J-104 with syntoms
of Pyricularia grisea (Sacc.) and Rhizoctonia solani Kühn, seeding
were made in vitro with afected parts such as steams, leaves and
roots. The samples were processed according traditional methods of
seeding agar-agar and agar-peptone-dextrose. Observed syntoms
were identificated and described by CMI keys, 1983, for verifying the
antagonic effectivity and hyperparasitic of Trichoderma harzianum
against both present pathogens. Were realized biossays test of dual
cultures, agar-peptone-dextrose between the pathogens, and two T.
harzianum strains (A-34 and A-53) from the mantaince strainer
department of biological control in the Provincial Vegetable Health
Laboratory of Las Tunas, generalized in mass production against
different soil pathogens. Daily were measured the diameter of colonies
and the competence level by the sustrate and the hyperparasitism of
the pathogen, according to the growing level and sporulation over
colonies. The obtained results demonstrated high hyperparasitic and
competitive activity of the strains A-34 and A-53 of T. Harzianum,
sampling good powerness for thr control of these pathogens. The
statistic test paired samples indicated highly significative diferences
to 96 hours with a linel rate growing on 7.37 cm in A-34 strain and 7.10
cm in A-53 strain. In the case of patogens the rate growing was 3.63
cm P. Grisea (Sacc.) and 2.62 cm R. solani Künh.
Key words: Pyricularia grisea, Rhizoctonia solani, Trichoderma
harzianum, antagonist, hyperparasitism, soil fungi
de a los patógenos 12% [Pantoja et al., 1997].Durante
los últimos quince años la producción arrocera en Cuba
se ha sustentado en la variedad J-104, que ha ocupado
más de 70% del área sembrada durante este período
por la alta adaptabilidad y potencial de rendimiento
agrícola que presenta [IIA, 2001].La piriculariosis cau-
sada por Pyricularia grisea (Sacc.) constituye mundial-
mente la más difundida y destructiva entre las enfer-
medades del arroz. Ha sido reportada en más de setenta
países altamente productores de este cereal [Cordero y
fitosanidad/57
 Alarcón y otros
Rivero, 2001]. El hongo afecta todas las partes aéreas
de la planta: la hoja, los nudos del tallo, el cuello de la
panícula y la panícula misma. Las temperaturas de 22-
29oC y humedad relativa superior a 90% son responsa-
bles de pérdidas considerables. Si su ataque ocurre en
la fase de plántulas o de macollamiento, estas quedan
totalmente destruidas [Correa-Victoria y Guimarães,
1995]. El añublo de la vaina causado por Rhizoctonia
solani Kühn es considerado actualmente una de las prin-
cipales enfermedades del cultivo en las regiones tropi-
cales y subtropicales. Se califica de alto riesgo en varios
países de América Latina, y su incidencia ha causado
la disminución de los rendimientos hasta 40% en la
variedad Orizica 1 en Colombia. Los síntomas se ob-
servan inicialmente sobre las vainas y luego en las ho-
jas de la base del tallo. La enfermedad progresa rápi-
damente desde el inicio, y se extiende desde la vaina
hacia la hoja, y en ataques severos destruye el tallo. El
patógeno está presente en todas las zonas arroceras, y
la disminución del rendimiento, en condiciones de hu-
medad y temperaturas altas, se ha estimado de varias
maneras: en la hoja bandera pueden llegar hasta 20%,
y cuando todas las vainas y láminas foliares están to-
talmente infectadas esa pérdida puede alcanzar hasta
40% [Correa-Victoria, 1992].
A partir de 1990 se realizaron diversos estudios de pros-
pección de cepas promisorias, mecanismos de acción,
compatibilidad con agroquímicos, parámetros de repro-
ducción y aplicación, que permitieron la incorporación
del hongo antagónico Trichoderma harzianum a las me-
didas para combatir los patógenos fúngicos del suelo
en diversos cultivos [Stefanova y Sandoval, 1995;
Stefanova, 1997, citados por Stefanova et al., 2004].
Actualmente se emplean formulados a base del hongo
antagonista Trichoderma sp. para el control biológico de
hongos del suelo como Rhyzoctonia, Sclerotium, Fu-
sarium, etc., así como de enfermedades foliares como mil-
diu y alternaria, que afectan un amplio rango de culti-
vos. T. harzianum se encuentra en el suelo en diversos
sistemas de producción de arroz y despliega mayor ac-
tividad bajo condiciones de secano. Tiene la habilidad
de descomponer los residuos de cosecha y de parasitar
a R. solani. Poco se sabe sobre su manejo y su eficiencia
en el campo [Correa-Victoria y Guimarães, 1995].
Sobre la base de los resultados con el antagonista
Trichoderma sp. en el control de enfermedades fungosas
en otros cultivos, se trazó como objetivo comprobar la
efectividad antagónica e hiperparasítica de T. har-
zianum contra los patógenos P. grisea y R. solani en
la variedad de arroz J-104.
58/fitosanidad
MATERIALES Y MÉTODOS
A partir de plantas de arroz (Oryza sativa L.) con sínto-
mas de P. oryzae y R. solani se realizaron siembras de par-
tes del tallo, hojas y raíces afectadas. Las muestras fue-
ron procesadas según los métodos tradicionales de siembra
en agar-agar y en agar-papa-dextrosa, y las identificacio-
nes y descripciones de los patógenos se realizaron de acuer-
do con las claves correspondientes [CMI, 1983].
Para los ensayos del biocontrol se realizaron pruebas
in vitro en cultivo dual agar-dextrosa-peptona entre los
patógenos P. grisea y R. solani procedentes de la colec-
ción de la sección de Micología del laboratorio y dos
aislamientos de T. harzianum (cepas A-34 y A-53) de
la sección de Lucha Biológica, utilizados como antago-
nistas de diferentes patógenos del suelo.
Por cada aislamiento se establecieron seis réplicas. La
incubación se realizó a 26 ± 2oC. Se midió diariamente el
diámetro de las colonias hasta su enfrentamiento y se de-
terminó el nivel de competencia por el sustrato, así como
el hiperparasitismo por el antagonista de acuerdo con el
nivel de crecimiento y esporulación sobre la colonia.
Se utilizó un diseño completamente aleatorizado con
seis réplicas y cuatro tratamientos. Los datos fueron
procesados mediante el test de student para muestras
pareadas mediante el programa Statistica, para el cre-
cimiento de las colonias de los fitopatógenos y la
interacción entre el antagonista y estos. La compara-
ción de medias se realizó mediante la prueba de
Newman-Keuls del programa [ICA, 1998].
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Entre el comportamiento del crecimiento de las colo-
nias de la cepa A-53 y A-34 de T. harzianum y los
patógenos P. grisea y R. solani se produjeron diferen-
cias significativas en el desarrollo del antagonista y
los patógenos a las 24, 48, 72 y 96 h. El crecimiento
promedio lineal fue de 7,375 cm en la cepa A-53 y 7,125
cm en la cepa A-34, y de 3,633 y 2,620 cm en P grisea
y R. solani respectivamente (Tabla 1). Estos resulta-
dos en la prueba in vitro demostraron que T. har-
zianum presentó una elevada actividad antagónica
e hiperparasítica contra los patógenos R. solani y
P. grisea, al mostrar una colonización total sobre am-
bos a las 120 h, y se observó que ambos aislados del
antagonista mostraron una actividad parasítica ele-
vada y buenas potencialidades contra los patógenos
ensayados.
 Efectividad in vitro de Trichoderma...
Tabla 1. Crecimiento lineal promedio de las colonias de las cepas
A-53 y A-34 de T. harzianum y de los patógenos R. solani y P. grisea
Variables
24 h
T. harzianum (A-53) 1,625 a
T. harzianum (A-34) 0,425 b
R. solani 0,000 c
P. grisea 0,000 c
p < 0,05
Existió una alta significación entre las medias del creci-
miento (Fig. 1) y la desviación estándar del antagonista
con los patógenos, con valores de t alcanzados de 8,15 y
10,44 para la cepa A-53 en ambos patógenos, y la cepa
A-34 con valores de t de 8,35 y 10,53 (Tabla 2). Se eviden-
ció que la cepa A-34 frente a estos patógenos mostró
una capacidad parasítica superior a la cepa A-53. Los
Resultados similares cosechó González (2004) en ensa-
yos in vitro con T. harzianum (cepa A-34), con el mayor
efecto antagónico sobre R. solani, así como el más alto
hiperparasitismo con la cepa C-66 y T. viride en frijol.
Srivastava et al. (2002) trataron semillas de garbanzo
afectadas por R. solani con T. viride (cepa PDBCTV 23
y 32) o T. harzianum (cepa PDBCRH 10). La cepa
PDBCTV 32 de T. viride resultó ser la de mayor compo-
sición proteínica en la raíz (378 µg/mL) y la de más
baja incidencia de la enfermedad en el cultivo (10,6%).
Varón y Ramírez (2004) recogieron buenos resultados
con T. lignorum (Tricogen WP) en Colombia contra
R. solani en la desinfección de semillas de arroz con
dosis de 400, 300 y 200 g/kg de semilla, con título de
1010 esporas/g, con incidencias superiores a 55% en el
testigo e inferiores a 13% de infestación en plantación,
así como un índice de 0,62 en los tratamientos y de 3,0
en el testigo.
Quarles (1993), Lorito et al. (1993), Ghisalberti y
Sivasithamparan (1991), Sivan y Chet (1989), citados
por Stefanova et al. (2004) han informado la eficacia de
T. harzianum contra los hongos del suelo, y su activi-
dad como antagonista se atribuye al micoparasitismo,
producción de antibióticos y enzimas hidrolíticas.
Crecimiento lineal (cm)
48 h 72 h 96 h
2,575 a 4,975 a 7,375 a
2,300 b 4,750 b 7,125 b
0,180 c 0,800 c 2,620 c
0,633 d 1,700 d 3,633 d
resultados concuerdan con los estudios realizados por
Sandoval et al. (1993, 1995 y 1997), quienes plantearon
que la cepa estándar (A-34) de T. harzianum es la más
efectiva y de mayor espectro de acción, lo que demostró
buenas potencialidades en el control de R. solani, así como
su efectividad contra el patógeno en su competencia por
el sustrato y el hiperparasitismo mostrado.
En el caso de P. grisea no se ha tenido conocimiento
sobre estudios realizados con este hongo; pero sí se co-
noció que en trabajos hechos por investigadores del
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal acerca
de la bioefectividad de Trichoderma sobre hongos del
orden Deuteromycetes, orden al que pertenece este pa-
tógeno con resultados satisfactorios [INISAV, 1992].
El empleo de T. harzianum como biocontrol de hongos
del suelo ha sido señalado como efectivo en diversos
cultivos, incluido el pepino. Los estudios relativos a su
uso como biopreparado foliar son relativamente nue-
vos. En Cuba, Pérez y Echemendía (1994) informaron
20% de disminución del patógeno con la aplicación de
T. harzianum en plantas de cebolla, en condiciones de
campo, bajo infección natural de Alternaria porri.
Rodríguez et al. (1998) mostraron igualmente el efecto
foliar de T. harzianum contra mildiu velludo y mildiu
polvoriento en pepino, con reducciones de la incidencia
en 35 y 23,2% respectivamente, y estimulación del de-
sarrollo de las plantas, incrementos en la longitud del
tallo y frutos, así como el peso de los frutos.
El crecimiento del antagonista Trichoderma (cepas A-53
y A-34) frente a los patógenos R. solani y P. oryzae
fitosanidad/59
 Alarcón y otros
ocurrió a las 24 h después de sembrado. El patógeno R. so-
lani comenzó su crecimiento a las 48 h y P. oryzae a las
72 h. Esto demostró la capacidad de Trichoderma para
establecerse y competir, con la obtención de diferencias
Figura 1. Efecto antagónico de las cepas A-53 y A-34 de T. harzianum contra R. solani y P. grisea en arroz, variedad J-104.
CONCLUSIONES
• Trichoderma harzianum mostró ser un buen
hiperparásito y antagonista de los hongos Pyricularia
grisea (Sacc.) y Rhizoctonia solani Kühn in vitro.
• La cepa A-34 (T. harzianum) fue la más efectiva y de
mayor espectro de acción sobre los aislados de P. grisea
(Sacc.) y R. solani Kühn.
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