8.

METODOLOGÍA

Tipo de investigación (descriptiva o experimental)

El tipo de investigación es experimental, en tanto se desarrollarán aplicaciones tecnológicas

para la agricultura en diferentes cultivos para predecir estado nutricional de cultivos y
suelos, basados en diferentes parámetros.

Área de estudio

El área que se estudiará es el Desarrollo y Adaptación de Instrumentación para la

Investigación.

8.1. DISEÑO DE UN SISTEMA PORTÁTIL BASADO EN PRINCIPIOS DE

TRANSMISIÓN DE LUZ PARA LA DETERMINACIÓN DE CONTENIDO DE
CLOROFILA EN PLANTAS

La primera fase del experimento dará continuidad a un trabajo previo que consistió en la
demostración de que un accesorio impreso por modelado por deposición fundida (FDM por
sus siglas en inglés) con un LED rojo (luz roja a 663 nm) acoplado al sensor de luz de un
teléfono inteligente era capaz de estimar clorofila mediante transmisión de luz. Dichas
pruebas se realizaron con plantas de sorgo y fueron comparadas con un espectrómetro
estándar y con un SPAD 502TM, obteniéndose buenas correlaciones (Gaviria-Palacio et al.
2017).

Pero esta solo sería la etapa preliminar para el diseño del dispositivo, en tanto es posible
realizar ajustes geométricos en el diseño que eliminen la posibilidad de interferencias de
naturaleza lumínica y ajustes para adaptabilidad del accesorio a diferentes referencias de
teléfono celular.

Los requerimientos a cumplir en la fase final de diseño incluyen:

 Adaptación del accesorio a sensores de luz de celulares de distintas referencias o

marcas.
 Agarre seguro del clorofilo al teléfono.
 Menor cubrimiento posible de la pantalla para facilitar su uso con diferentes tamaños
de hoja.
 Evitar entrada de luz exterior. La luz exterior es un agente que puede generar
variaciones en las medidas teniendo en cuenta que el dispositivo está diseñado para
su uso en campo.
 Botón de encendido que pueda ser usado fácilmente y manipulado con una sola
mano.
 Ergonomía.

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  Sistema de bisagra con el que se sujeten las hojas, con opción de posición estable
y presión suave para sostener las hojas.
 Fácil ensamblaje y desensamble.

Otro de los aspectos a tener en cuenta en esta fase es la funcionalidad del accesorio
acoplado al teléfono inteligente, que tiene que ver con la gestión de los datos y
almacenamiento de información. Si bien está claro que se ha usado el sensor de luz del
teléfono, inicialmente la lectura de transmisión de luz a través del limbo foliar se realizó
mediante la aplicación libre para Android Physics Toolbox Sensor Suite. Esta aplicación
permite usar el sensor de luz para mostrar numérica y gráficamente los valores, los cuales
pueden almacenarse para exportar hojas de cálculo en formato CSV (comma-separated
values) en función del tiempo (Vieyra Software 2018).

La propuesta de cómo mejorar este aparte en el accesorio consiste en que se programe

una aplicación propia para el dispositivo, que ofrezca ventajas similares, pero adaptadas a
las necesidades del medidor de clorofila descrito. Algunas de estas necesidades iniciales
son: aplicación liviana, una interfaz simple y fácil de entender para cualquier usuario, que
permita almacenar y exportar los datos, que puedan generarse registros independientes
dependiendo del cultivo, que puedan capturarse en orden y borrarse datos.

La plataforma de desarrollo que se usará para la aplicación será B4A (Basic for Android),
que tiene similitudes con Visual Basic y es cómoda para el desarrollo de Apps para teléfonos
Android.

8.2. AJUSTE Y CALIBRACIÓN DE UN ACCESORIO ACOPLADO A UN

TELÉFONO CELULAR PARA ESTIMAR CONTENIDO DE CLOROFILA EN
HOJAS

 Extracción de clorofila y medidas con accesorio para teléfono inteligente

la relación entre la concentración de clorofila y las lecturas de transmisión de luz con el

accesorio acoplado a un teléfono inteligente debe comprobarse mediante extracción de
clorofila por métodos clásicos para establecer relaciones matemáticas, como se ha
realizado previamente con ,medidores de clorofila comerciales (Gaviria-Palacio et al.
2017)(Cerovic et al. 2012).

Pese a que existe evidencia de las limitaciones de estas relaciones matemáticas

dependiendo de las especies, etapas y condiciones de crecimiento del cultivo (Hawkins,
Gardiner, and Comer 2009), se establecerá un modelo que permita relacionar
concentraciones de clorofila en hojas de cultivos de interés agronómico con las lecturas de
transmisión de luz con el accesorio diseñado, como son pasto kikuyo, palma africana,
lechuga, papa.

20
Para facilitar el uso del accesorio en un amplio grupo de referencias de teléfonos
inteligentes, se deben realizar pruebas de mediciones en sensores de luz teléfonos móviles
de diferente referencia y marca.

De la misma manera, el desempeño del accesorio se comparará con un espectrómetro de

fibra óptica FLAMETM (Ocean Optics Inc.) y se evaluará su funcionamiento frente a
tecnologías que ya se encuentran en el mercado, como es el caso del popular clorofilometro
SPAD-502 (Konica Minolta, Tokyo, Japan).

 Recolección, transporte y preparación de muestras vegetales.

Para realizar las mediciones de clorofila con el accesorio acoplado al teléfono inteligente no
es necesaria la destrucción de las muestras, sin embargo para las extracciones de clorofila
con un método tradicional (Hiscox and Israelstam 1979) se requiere recolectar muestras
foliares de los diferentes cultivos. Las muestras se depositarán en bolsas plásticas
herméticas, refrigeradas y aisladas de la luz hasta su llegada al laboratorio de microbiología
de suelos de la Universidad Nacional de Colombia sede Medellín.

 Determinación de concentración de clorofila extraíble

Cada hoja será medida con el dispositivo acoplado a un teléfono celular y será extraída un
área de tamaño similar a la cubierta por este accesorio.

Para extraer clorofila en hojas se adaptará una metodología basada en las presentadas por
(Hiscox and Israelstam 1979), en la cual se pone en contacto del tejido foliar con el solvente
Dimetilsulfoxido CH₃SOCH₃ (DMSO) para propiciar la extracción de clorofila.

Cada muestra con solvente se incuba a 65°C y al visualizar el fin de la extracción se

realizala lectura en espectrofotómetro de absorbancia a 665 y 648 nm.

Para ello se utilizará un espectrómetro de fibra óptica FLAMETM (Ocean Optics Inc.).

La concentración de clorofila total extraíble se calcula según la expresión propuesta por

Propuesta por Barnes et al. (1992).

𝐶𝑎+𝑏 = 7,49𝐴664,9 + 20,34𝐴648,2 (1) (Barnes et al. 1992)

Donde 𝐶𝑎+𝑏 es la concentración de clorofila a y b y A es el valor de absorbancia

correspondiente a 665 y 648 nm respectivamente.

8.3. ANÁLISIS ESTADÍSTICO Y PREPARACIÓN DE DATOS

Los datos serán tratados, analizados estadísticamente, ajustados y graficados mediante el

uso de varios softwares, como Excel 2016 (Microsoft, Redmond, Washington), Image J de
National Institutes of Health (free and open-source software) y la norma ASTM E178-16ª.
La precisión de los modelos ajustados y de la predicción del contenido de clorofila extraíble
se evaluará mediante el coeficiente de determinación (R2), la suma de cuadrados residuales
(RSS), el error cuadrático medio (RMSE).

21
 8.4. NUEVO MÉTODO RÁPIDO PARA LA DETERMINACIÓN DE
MINERALES EN PLANTAS Y CONTENIDO DE MATERIA ORGÁNICA EN
SUELOS USANDO UNA CÁMARA MULTIESPECTRAL

Se tomarán 150 muestras de suelos de diferente procedencia para determinar su contenido

de materia orgánica por el método combustión húmeda de Walkley-Black. Se tomarán 100
muestras de tejido foliar de palma africana a las cuales se les determina contenido de
nitrógeno foliar por método Kjeldahl. Se tomarán muestras de flores con un análisis mineral
completo. Los análisis mencionados se realizarán en el laboratorio de suelos de la
Universidad Nacional de Colombia sede Medellín.

En los tres casos, las muestras de diferentes manejos agronómicos serán fotografiadas en
una cámara multiespectral desarrollada (Ver Figura 1) apoyada en un software que permite
la toma automática de 18 fotografías iluminadas a diferentes longitudes de onda entre el
espectro visible e infrarrojo cercano. Posteriormente los conjuntos de imágenes obtenidas
se procesarán con una macro del software libre Image J para determinar valores de gris
medio.

Figura 1. Imagen del sistema

Se aplicará el método de regresión por mínimos cuadrados parciales (PLS) usando el

programa “RStudio” con el paquete estadístico “pls” con los valores de gris medio para cada
muestra a cada longitud de onda (428nm, 445nm, 465nm, 493nm, 525nm, 560nm, 590nm,
607nm, 630nm, 650nm, 730nm, 780nm, 840nm, 850nm, 870nm, 910nm, 940nm). Una vez
creado el modelo se valida el método, se predice las muestras de validación y se observa
el coeficiente de correlación (R2) más alto.

22
 CRONOGRAMA

ACTIVIDADES MESES

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36
REVISION
CONCEPTUAL
CONSTRUCCIÓN Y
EVALUACIÓN DE
MEDIDORES
MICROCONTROLADOS
DE HOJAS BASADOS
EN PRINCIPIOS DE
TRANSMISIÓN Y
REFLEXIÓN DE LUZ.
DISEÑO DE UN
MEDIDOR PORTÁTIL
DE LUZ TRANSMITIDA
Y REFLEJADA POR
HOJAS, ACOPLADO A
UN TELÉFONO
CELULAR.
EVALUACIÓN DE LA
SENSIBILIDAD EN
SENSORES DE
DIFERENTES
EQUIPOS MÓVILES
DESARROLLO DE
SOFTWARE BAJO
INTERFAZ ANDROID
PARA CAPTURA Y
ALMACENAMIENTO DE
DATOS DEL SENSOR
DE LUZ.
AJUSTES DE DISEÑO Y
SOFTWARE -
CONSTRUCCIÓN
CALIBRACIÓN
INSTRUMENTAL
FRENTE A
TECNOLOGÍAS
PORTÁTILES Y
TRADICIONALES.
ANÁLISIS DE
LABORATORIO
CAPTURA DE
IMÁGENES
MULTIESPECTRALES
EN PLANTAS Y
SUELOS,
PROCESAMIENTO DE
IMÁGENES.
ANÁLISIS
ESTADÍSTICOS Y
PRESENTACIÓN DE LA
INFORMACIÓN
REDACCIÓN Y
SOMETIMIENTO DE
DOS ARTÍCULOS
CIENTÍFICOS
ELABORACION DE
INFORME FINAL
ENTREGA DE
INFORMES