Suscríbete a DeepL Pro para poder editar este documento.

Entra en www.DeepL.com/pro para más información.

Hormozi y otros. Inflamación y regeneración(2019) 39:7

Inflamación y regeneración
https://doi.org/10.1186/s41232-019-0097-x

A RT Í CU LO DE INV ES T IGA C I ÓNA br ir acceso

La Caléndula officinalis estimula la

proliferación de los fibroblastos
embrionarios de los ratones a través de
expresión de los factores de
crecimiento TGFβ1 y bFGF
Maryam Hormozi1,2, Mohammadreza Gholami3, Ayda Babaniazi4 y Anneh Mohammad Gharravi5*

Resumen
Antecedentes: TGF-β tiene un papel importante en el proceso de curación de heridas y formación de cicatrices. El
objetivo de este estudio es determinar los efectos de los extractos etanólicos y metanólicos de Caléndula officinalis
en la expresión de TGFβ1 y bFGF en las células de fibroblastos embrionarios (MEF) de ratones.
Métodos: Se compró el extracto de Caléndula officinalis y se definieron diferentes sustancias con cromatografía
de gases y espectrometría de masas. Se prepararon los MEF y después de incubar durante 15 minutos, se analizó
la viabilidad de las células. Se evaluó la expresión génica del TGF β 1 y del bFGF mediante PCR en tiempo real.
TGFβ1 y la expresión de la proteína bFGF fue analizada por ELISA. El análisis estadístico de los datos se realizó
utilizando el software SPSS. Las diferencias se consideraron significativas en (P < 0,05).
Resultados: Los resultados de la prueba de MTT mostraron que las concentraciones de 5 μg/ml y10 μg/ml eran
más adecuadas para la proliferación celular. Hubo un aumento en la expresión del gen TGF β 1 en los MEF. La
expresión del gen TGF β 1 permanece igual después de 24 h. La expresión del gen bFGF mostró un patrón similar
con la expresión del TGF β 1 para ambos disolventes. El análisis de la expresión de la proteína TGFβ1 mostró un
aumento en la expresión del gen TGFβ1 en los MEF. La expresión proteínica del bFGF en los MEF aumentó en
diferentes concentraciones a las 12 y 24 h después del tratamiento (P < 0,05 y P < 0,01 respectivamente).
Conclusión: La Caléndula officinalis estimula la proliferación de MEF. La caléndula a través del aumento de la expresión
de los factores de crecimiento (TGFβ1 y bFGF) en las primeras 12 h y la disminución de estos factores a las 24 h después
del tratamiento puede mejorar la función de los FEM en la cicatrización de las heridas.
Palabras clave: Calendula officinalis, bFGF, TGFβ1, Fibroblastos embrionarios de ratón
Antecedentes El factor de crecimiento TGF-β tiene un papel importante
El crecimiento de nuevos tejidos y la formación de en el proceso, no sólo en la curación de las heridas sino
cicatrices son dos cuestiones importantes en la lesión de también en la cicatrización de las mismas. El TGF-β aplica
tejidos. Los fibroblastos son las principales células en el sus efectos a través de la vía intracelular SMAD. [1, 2]. Se
proceso de curación de la herida porque migran y ha demostrado que TGFβ1 activa la angiogénesis
proliferan al lugar de la lesión después de 2 o 3 días. estimulando la migración de células del músculo liso
Luego, las células producen una matriz extracelular, vascular [3-5]. La importancia de este factor en la
especialmente colágeno. Los factores de crecimiento creación y mantenimiento del sistema vascular ha sido
juegan un papel importante en la pro-vida, la migración y demostrada por numerosos estudios. TGFβ1 y sus
la producción de sustancias de MEC por los fibroblastos. receptores conducen a la muerte del feto debido a la
Recientemente, las investigaciones mostraron que el alteración del vaso para...
de la producción [6, 7]. TGFβ1 induce la maduración de la
retinoica
* Correspondencia: annehgh@yahoo.com; gharravi@shmu.ac.ir Ciencias Médicas de Shahroud, Shahroud, Irán
5Centro de Ingeniería de Tejidos e Investigación de Células Madre, Universidad de La lista completa de información sobre los autores se encuentra al final del
artículo Por lo tanto, el gen I inducible por el ácido (RIGI),
estimula la formación e intensificación de la interacción
entre las células epiteliales y la membrana basal de las
células murales [8-10]. También el bFGF, (FGF 2 o FGF-
β) contribuye a

El autor(es). 2019 Acceso abierto Este artículo se distribuye bajo los términos de la licencia internacional Creative Commons
Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/) que permite el uso, la distribución y la reproducción sin
restricciones en cualquier medio, siempre que se dé el crédito apropiado al autor o autores originales y a la fuente, se
proporcione un enlace a la licencia Creative Commons y se indique si se han realizado cambios. La exención de la
Dedicación al Dominio Público de Creative Commons (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) se aplica a los datos
disponibles en este artículo, a menos que se indique lo contrario.
Hormozi y otros. Inflamación y regeneración (2019) 39:7
control de la migración de células endoteliales y
fibroblastos, que son responsables de la angiogénesis y la
formación de colágeno de la capa epitelial [1, 9, 11].
La Caléndula officinalis L. (Asteráceas) ha sido
tradicionalmente utilizada en el tratamiento de varias
enfermedades como tumores de la piel, lesiones
dermatológicas e hinchazones. A pesar de la larga
tradición de uso de la Caléndula officinalis L., el aspecto
bio-lógico de su actividad no ha sido explorado pro-
mente. Investigaciones recientes apoyan el potencial
medicinal de la Caléndula officinalis L. Las propiedades
de la Caléndula officinalis L. deben ser investigadas para
determinar sus variadas actividades bio-lógicas y su
mecanismo de acción. Para determinar la eficacia de la
Caléndula officinalis L. en el tratamiento de los trastornos
dermatológicos, es necesario realizar más investigaciones
para comprender el mecanismo de acción de esta planta.
Por lo tanto, el objetivo de este estudio es determinar el
efecto del extracto de Caléndula officinalis L. en la
proliferación y expresión de dos importantes factores de
crecimiento, TGFβ1 y bFGF, en los MEF.
Materiales y métodos
Preparación del extracto de Caléndula officinalis
Se recogieron 20 gramos de flores secas de Calendula
officinalis del Centro de Investigación y Educación
Agrícola y de Recursos Naturales de Lorestan y se
pusieron a remojo en 120 ml de etanol al 50% o metanol
durante 72 h en la oscuridad. En el siguiente paso, se
centrifugó y pasó por el filtro y se secó a temperatura
ambiente para obtener un extracto del 8,7% p/p. Luego el
extracto se almacenó a - 20 °C hasta su posterior utilización.
Análisis de GC-MS del extracto de Caléndula officinalis
Diferentes sustancias dentro del extracto de Caléndula
officinalis definidas con cromatografía de gases y
espectrometría de masas (GC-MS) en la Universidad de
Lorestan.
Aislamiento y cultura de los MEF
El aislamiento y el cultivo de fibroblastos embrionarios de
ratón (FEM) se realizaron según el protocolo descrito en
otra parte [12]. En el resumen, un ratón embarazado a los
13 o 14 días post-coito (d.p.c) fue sacrificado por
dislocación de las vértebras cervicales y los cuernos
uterinos fueron disecados y enjuagados en etanol al 70%
(v/v) y colocados en un tubo Falcon con tampón PBS, sin
calcio y mag-
iones de nesio. Los embriones fueron separados de sus em-
el saco briótico y la placenta. Luego, se añadió 1 ml de
tripsina/EDTA al 0,05% (Gibco, Invitrogen) conteniendo
100 K unidades de DNasa I por cada embrión y se incubó
a temperatura ambiente durante 15 min. Las células
fueron disociadas por pipeteo cada 5 min. La tripsina se
Página 2 de
7
Ensayo MTT
Para evaluar la viabilidad celular, se incubaron células de
fibroblastos con diferentes concentraciones de Caléndula
officinalis (5 μg/ml, 10 μg/ml, 20 μg/ml, 40 μg/ml, y 50
μg/ml) durante 12, 24, 48, y 72 h. Luego, se añadieron 20
μl de MTT (5 mg/ml, Sigma) en solución de PBS en cada
uno de los pozos, y la placa se incubó nuevamente durante
4 h. En el siguiente paso, 200 μl de DMSO añadidos en
cada pozo, incubados durante 15 min para disolver la
formación de cristales formados y la absorción de luz
medida con un lector de ensayo inmunoenzimático
(ELISA). La viabilidad celular expresada como un
porcentaje de los valores de absorbancia en las células
tratadas.
Análisis de la expresión de los genes TGF β 1 y bFGF por
PCR en tiempo real
Los FEM se expusieron a diferentes concentraciones de
extractos de etanol y metanol de Caléndula officinalis (5
μg/ml y 10 μg/ml) y luego se recogieron células a las 12 y
24 h utilizando tripsina/EDTA. Se aisló el ARN total y se
determinó la concentración y la pureza del ARN con un
biofotómetro (Eppendorf, Hamburgo, Alemania). La
concentración y calidad de las muestras de ARN
confirmadas por electroforesis en un gel de agarosa
desnaturalizado al 1%.
Se realizaron los siguientes procedimientos:
1) Generación de ADNc de primera línea con 1 μg
de ARN total utilizando el kit de síntesis de
ADNc (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim,
Alemania).
2) Selección de HPRT como el gen de la casa.
3) PCR cuantitativa en tiempo real utilizando el Rotor-
Gen 6000 y el kit de PCR cuantitativa SYBR-Green
(qPCR) (Jena Bioscience, Cat No. 311S)
Las secuencias de oligonucleótidos de los cebadores y
sus características se presentan en la Tabla 1.
El análisis de la expresión de las proteínas TGFβ1 y bFGF por
medio de los FEM ELISA se cultivaron en placas de 6
pocillos (105 células por pocillo) y se expusieron al
extracto etanólico y metanólico de Caléndula officinalis (5
μg/ml, 10 μg/ml) y super- natant se recogieron a las 12 y
24 h. Las muestras se congelaron a - 20 °C. La
concentración de proteínas del TGF-β1 en los
sobrenadantes de cultivos celulares fue medida por el kit
ELISA de citoquinas Ready-Set-GO TGF-β1 de
eBioscience (San Diego, CA,
Cuadro 1 Secuencias de cebadores para la PCR cuantitativa
en tiempo real
inactivó por la adición de 1 volumen de medio MEF recién
preparado. Luego, las células fueron centrifugadas y el
pellet de células fue lavado en un medio MEF caliente.
Hormozi y otros. Inflamación y regeneración (2019) 39:7 Página 3 de
Gene Primer Productosize Tm
7
HPRT Sentido:CCTCCTCAGACCGCTTTTT 91 79.5
Antisentido: AACCTGGTTCATCATCGCTAA
FGF2 Sentido: AACGGCGGCTTCTCTG 133 78.9
Antisentido: TGGCACACACTCCCTTGATAG
TGFβ1 Sentido: ATTCCTGGCGTTACCTTGG 117 76.9
Antisentido: CCTGTATTCCGTCCTTGG
Hormozi y otros. Inflamación y regeneración (2019) 39:7 Página 4 de
7

USA, Número de Catálogo: 88-8350) y el kit FGF ELISA
(Cat no. ELH-bFGF-001; RayBiotech, Inc., St. Louis, MO).
Análisis estadístico
El análisis estadístico de los datos se realizó utilizando el
software SPSS. Las diferencias entre los grupos fueron
analizadas usando la prueba de Wilcoxon. Las diferencias
se consideraron significativas a (P < 0,05).
Resultados
Análisis de GC-MS
El análisis de GC-MS mostró que los principales
componentes presentes en el extracto de Caléndula
officinalis son el carvacrol, el timol, el hexadecanoato de
etilo y el viridifloreno (Tabla 2).
El efecto del extracto de Caléndula officinalis en la viabilidad
de los MEF
Los resultados del ensayo MTT para determinar si el
extracto etanólico/metanólico de Caléndula officinalis
afecta a la viabilidad de las células
de FEM a diferentes concentraciones (5 μg/ml, 10 μg/ml, 20
μg/ml, 40 μg/ml) mostraron que el extracto de Caléndula
officinalis que utilizaba ambos disolventes no era tóxico
para las células. Las concentraciones de 5 μg/ml y 10 μg/ml
eran más adecuadas para la proliferación celular. Por lo
tanto, este estudio se evaluó en estas concentraciones (Fig.
1).
TGF β 1 y expresión de genes bFGF
El análisis de la expresión del gen TGF β 1 para el
extracto etanólico (Fig. 2a) y el extracto metanólico
(Fig. 2b), reveló un aumento de la expresión del gen
TGF β 1 en los FEM a diferentes concentraciones (5
μg/ml, 10 μg/ml) a las 12 h después del tratamiento (P <
0,05 y P < 0,01 respectivamente). Pero la expresión del
gen TGF β 1 permaneció igual 24 h a las dos
concentraciones después del tratamiento con extracto
etanólico (Fig. 2a y Tabla 3). Los resultados del
extracto metanólico revelaron un aumento en la
expresión de los dos extractos a las 12 h y un descenso
en la expresión del gen

Tabla 2 El análisis de GC-MS mostró que los principales componentes presentes en el extracto de Caléndula officinalis son el carvacrol,
el timol, el hexadecanoato de etilo y el viridifloreno
t'R(A) RI(Calc) RI(STD) Similitudes Nombre compuesto Superficie (%)
4.092 832.5714286 800 83% Hexanal 1.005961
4.233 846 830 95% Furfural 1.415797
4.375 859.5238095 851 92% Alcohol furfurílico 1.453055
4.958 910.5333333 899 80% Heptanal 1.19225
5.267 931.1333333 998 81% Octanal 1.254347
5.933 975.5333333 957 94% Furfural 5-metilo 1.20467
6.175 991.6666667 911 80% Acetato de amilo 3.551913
6.517 1010.432692 950 93% Glicerina 19.54794
7.592 1062.115385 1112 80% Acetato de Hepatilo 2.707402
8.092 1086.153846 1106 77% Maltol 1.800795
10.767 1185.402504 1171 70% Umbellulona 0.384998
12.2 1230.191458 1228 85% Citronellol 1.477894
14.433 1295.964654 1285 80% Acetato de boro 0.471932
14.642 1301.899736 1290 93% Thymol 1.328862
14.967 1310.474934 1298 95% Carvacrol 7.19076
19.658 1432.944162 1439 82% Aromadendreno 0.422255
20.517 1454.746193 1458 87% Beta Farneseno 0.981123
22.192 1497.258883 1467 83% Caryophyllene 0.695479
22.467 1504.249364 1493 93% Viridifloreno 3.154496
23.433 1528.829517 1524 91% Delta Cadinene 1.043219
24.708 1561.272265 1549 90% Elemol 0.34774
26.142 1597.760814 1600 90% Hexadecano 0.471932
29.125 1674.806202 1658 80% Eudesmol 2.309985
29.275 1678.682171 1691 80% Alcanfor de enebro 0.471932
29.992 1697.209302 1700 87% Heptadecano 0.397417
39.675 1967.424242 1959 90% Ácido hexadecanoico 0.894188
40.633 1996.454545 1993 93% Hexadecanoato de etilo 0.558867
Hormozi y otros. Inflamación y regeneración (2019) 39:7
Fig. 1 Efecto del extracto etanólico (a) y metanólico (b) de Caléndula en la viabilidad de los FEM. Las células fueron tratadas con diferentes
concentraciones de caléndula durante 12, 24, 48 y 72 h y la viabilidad celular se midió mediante el ensayo MTT
a las 24 h (Fig. 2b y Tabla 4) (P < 0,05 y P < 0,01
respectivamente). La expresión del gen del bFGF en los
FEM indicó un patrón similar con la expresión del TGF
β 1 para ambos disolventes, un aumento de la expresión
del gen del bFGF en los FEM a diferentes
concentraciones (5 μg/ml, 10 μg/ml) a las 12 h después
del tratamiento (P < 0,05 y P < 0,01 respectivamente).
Pero la expresión del gen bFGF permaneció igual 24 h
en las dos concen- traciones después del tratamiento
con extracto etanólico (Fig. 3a y Tabla 5). Los
resultados del extracto metanólico indicaron un
aumento en la expresión de los dos extractos a las 12 h
y un descenso en la expresión del gen a las 24 h (Fig.
3b y Tabla 6) (P < 0,05 y P < 0,01 respectivamente) (Tabla
2).
TGFβ1 y la expresión de la proteína bFGF
El análisis de la expresión de la proteína TGFβ1 del
extracto etanólico (Fig. 4a) y del extracto metanólico (Fig.
4b) volvió a poner de manifiesto un aumento de la
expresión del gen TGFβ1 en los FEM a diferentes
concentraciones (5 μg/ml, 10 μg/ml) a las 12 h (P < 0,05
y P < 0,01 respectivamente). Pero la expresión de la
proteína TGFβ1 se redujo ligeramente, 24 h a las dos
Página 5 de
7
concentraciones después del tratamiento con extracto
etanólico (Fig. 4a). Los resultados del extracto metanólico
indicaron un patrón de simbiosis (Fig. 4b) (P < 0,05 y P <
0,01 respectivamente).
La expresión de la proteína del bFGF en los FEM
reveló un aumento de la expresión de la proteína del
bFGF a diferentes concentraciones (5 μg/ml, 10 μg/ml)
de 12 h después del tratamiento (P < 0,05 y P < 0,01
respectivamente). Se observó la misma pauta de aumento
de la expresión de la proteína del bFGF 24 h en las dos
concentraciones después del tratamiento con extracto
etanólico. Los resultados del extracto metanólico
indicaron un patrón similar al del extracto etanólico, en
comparación con el control (P < 0,05 y P < 0,01
respectivamente).
Cuando se compararon los extractos etanólicos y
metanólicos de la Caléndula officinalis, el extracto
etanólico indicó que era más efectivo para estimular los
FEM (Figs. 2, 3 y 4 y Tablas 3, 4, 5 y 6).
Discusión
Los resultados del presente estudio indicaron que tanto el
metanol como los extractos de etanol de la Caléndula
officinalis
Hormozi y otros. Inflamación y regeneración (2019) 39:7 Página 6 de
7

Fig. 2 Expresión relativa del gen TGF β 1 en los FEM que fueron tratados con diversas concentraciones de etanol (a) y metanol (b) extractos de
caléndula en diferentes intervalos de tiempo de tratamiento (12 y 24 h). Todas las comparaciones se hicieron en comparación c on el grupo de control. *P <
0,05, **P < 0,01.
Regulación del gen Abs: Regulación absoluta del gen
Hormozi y otros. Inflamación y regeneración (2019) 39:7 Página 7 de
7

Tabla 3 La relación de expresión total del gen de TGFβ1 en los FEM tratados con diversas concentraciones de extracto eólico
de caléndula (5 y 10 μg/ml) en relación con el grupo de control se presenta en cada momento (12 y 24 h después del
tratamiento). La prueba estadística de significación es la prueba de reasignación aleatoria, implementada en la herramienta
informática de expresión relativa. Bajas o subidas significativas de los genes resaltados
12 h después del 24 h después del
tratamiento tratamiento
5 μg/ml 10 μg/ml 5 μg/ml 10 μg/ml
Expresión relativa 1.7 2.3 0.7 0.62
Error estándar ± 0.21 ± 0.28 ± 0.24 ± 0.16
Valor P 0.235 0.001 0.490 0.359
Aumentar/disminuir el tamaño + 1.7 + 2.3 - − 1.4 - − 1.6

Cuadro 4 La relación de expresión total del gen de TGFβ1 en los FEM tratados con diversas concentraciones de extracto de
metanol de caléndula (5 y 10 μg/ml) en relación con el grupo de control se presenta en cada momento (12 y 24 h después del
tratamiento). La prueba estadística de significación es la prueba de reasignación aleatoria, implementada en la herramienta
informática de expresión relativa. Bajas o subidas significativas de los genes resaltados
12 h después del 24 h después del
tratamiento tratamiento
5 μg/ml 10 μg/ml 5 μg/ml 10 μg/ml
Expresión relativa 1.3 2.1 0.7 0.62
Error estándar ± 0.23 ± 0.24 ± 0.2 ± 0.13
Valor P 0.265 0.001 0.661 0.001
Aumentar/disminuir el tamaño + 1.3 + 2.1 - − 1.06 - − 2.5

Fig. 3 Expresión relativa del gen bFGF en los FEM que fueron tratados con diversas concentraciones de etanol (a) y metanol (b) extractos de caléndula
en diferentes intervalos de tiempo de tratamiento (12 y 24 h). Todas las comparaciones se hicieron en comparación con el grupo de control. P < 0,05,P <
0,01. Regulación del gen Abs: Regulación absoluta del gen

Cuadro 5 La relación de expresión total del gen del bFGF en los FEM tratados con diversas concentraciones de extracto de
etanol de caléndula (5 y 10 μg/ml) en relación con el grupo de control se presenta en cada ocasión (12 y 24 h después del
tratamiento). La prueba estadística de significación es la prueba de reasignación aleatoria, implementada en la herramienta
informática de expresión relativa. Bajas o subidas significativas de los genes resaltados
12 h después del 24 h después del
tratamiento tratamiento
5 μg/ml 10 μg/ml 5 μg/ml 10 μg/ml
Expresión relativa 1.9 2.2 0.42 0.39
Error estándar ±0.24 ±0.29 ±0.19 ±0.18
Valor P 0.256 0.001 0.001 0.001
Aumentar/disminuir el tamaño + 1.9 + 2.2 - − 2.4 −2.5
Hormozi y otros. Inflamación y regeneración (2019) 39:7 Página 6 de
7

Cuadro 6 La relación de expresión total del gen del bFGF en los FEM tratados con diversas concentraciones de extracto de
metanol de caléndula (5 y 10 μg/ml) en relación con el grupo de control se presenta en cada ocasión (12 y 24 h después del
tratamiento). La prueba estadística de significación es la prueba de reasignación aleatoria, implementada en la herramienta
informática de expresión relativa. Bajas o subidas significativas de los genes resaltados
12 h después del 24 h después del
tratamiento tratamiento
5 μg/ml 10 μg/ml 5 μg/ml 10 μg/ml
Expresión relativa 1.5 2.1 0.52 0.34
Error estándar ± 0.25 ± 0.27 ± 0.17 ± 0.19
Valor P 0.231 0.001 0..275 0.001
Aumentar/disminuir el tamaño + 1.5 + 2.1 - − 1.9 - − 2.96

tenía efectos no tóxicos de diferente concentración. Los
ex-tramos similares a los estudios anteriores aumentaron la
proliferación de los FEM [13, 14]. Entre las diferentes
concentraciones de extracción de caléndula 5 y 10 μg/ml
fueron más adecuadas para la proliferación celular.
Investigaciones anteriores revelaron que la Caléndula
officinalis puede inhibir la degradación del colágeno y la
actividad de la metaloproteína-teinasa de la matriz (MMP), e
inducir la neovascularización en la membrana corioalantoica
y la herida de la piel.
La quercetina, uno de los componentes activos de la
caléndula, puede disminuir la expresión del factor de
necrosis tumoral-α (TNF-α), interleucina-1β, IL-6, y IL-8
[14-17].
Durante el proceso de curación de la herida, los
fibroblastos juegan un papel crucial. Entonces, las
células proliferan y migran al área de la herida, síntesis
de la matriz extracelular (EXM), y la expresión de
gruesos paquetes de actina como miofibroblastos [18,
19].
Citocinas importantes que producen por fibroblasto son
TGFβ1 y bFGF. TGFβ1 y el bFGF influyen en la división
celular, la migración celular, la diferenciación celular, la
ex-presión de las proteínas y la producción de enzimas y
tienen la potente capacidad de curar heridas mediante la
estimulación de factores de angiogénesis y la proliferación
celular que afecta a la producción y degradación de la
MEC a través de
su papel quimiotáctico en las células inflamatorias y los
fi- broblastos [20].
Varios estudios indicaron que el aumento de la
regulación de TGFβ1 puede estimular la producción de
trastornos fibróticos [21, 22].
En el presente estudio, la Caléndula officinalis aumentó
TGFβ1 y el bFGF en las primeras 12 h, por lo tanto,
estimula la curación de las heridas. Luego, la disminución
de estos factores a las 24 h suprimió la expresión de
TGFβ1 y el bFGF y puede inhibir el proceso fibrótico. La
caléndula al principio puede subir - regular la expresión
de TGFβ1 y bFGF, pero después puede bajar la
expresión de estos genes.
Conclusión
La Caléndula officinalis no sólo no muestra efectos de
citotoxicidad en los FEM, sino que también estimula la
proliferación de estas células. La caléndula a través de una
mayor expresión de los factores de crecimiento (TGFβ1 y
bFGF) en las primeras 12 h, y una disminución de estos
factores a las 24 h después del tratamiento puede mejorar
la función de los fibroblastos durante la curación de la
herida.
Abreviaturas
bFGF: Factor de crecimiento básico de los fibroblastos; cADN: Ácido
desoxirribonucleico complementario; DMEM: medio de Dulbecco modificado por
Eagle; ELISA: ensayo inmunoenzimático; FBS: suero bovino fetal; HPRT:
hipoxantina.
Hormozi y otros. Inflamación y regeneración (2019) 39:7 Página 7 de
7

Fig. 4 Efecto de diversas concentraciones de etanol (a) y metanol (b) extractos de caléndula la expresión de la proteína TGFβ1 en los
sobrenadantes de cultivo de los MEF. Los FEM se trataron con diferentes concentraciones de extractos de etanol y metanol de caléndula (5 y 10
μg/ml) en diferentes intervalos de tiempo de tratamiento (12 y 24 h) y la expresión de la proteína TGFβ1 fue evaluada por ELI SA
Hormozi y otros. Inflamación y regeneración (2019) 39:7 Página 8 de
7

7. Kim SI, Kwak JH, Na H-J, Kim JK, Ding Y, Choi ME. El TGF-β1 activa la TAK1
por medio de la autofosforilación mediada por TAB1, independiente de la
fosforibosiltransferasa; MEF: Fibroblasto embrionario de ratón; MTT: bromuro
actividad de la cinasa receptora del TGF-β en las células mesangiales. J Biol
de 3-(4, 5- dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolio; nm: Nanómetro; Chem. 2009;284(33):22285–96.
PBS: Solución salina amortiguadora de fosfatos; Pg/ml: Picogramos por
mililitro; PCR en tiempo real: Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo
real; TGFβ1: Transformación del crecimiento
factor β1; Tm: Temperatura de fusión; TMB: 3, 3′, 5, 5′-Tetram etilbencidina

Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la Universidad de Ciencias Médicas de Lorestan,
Khorramabad, Irán.

Financiación
No es aplicable.

Disponibilidad de datos y materiales

Todos los datos generados o analizados durante este estudio están
incluidos en este artículo publicado.

Contribuciones de los autores

MH, AB, MRG y AMG diseñaron el concepto y el diseño del estudio. MH y AB
recogieron los datos. MG y AMG redactaron el manuscrito. Todos los autores
han visto y aprobado el manuscrito.

Aprobación ética y consentimiento para participar

Todos los manuales de experimentación con animales se realizaron con el
acuerdo de los protocolos del cuidado de los animales de laboratorio. Estos
principios fueron aprobados por el Comité de Ética Animal de la
Universidad de Ciencias Médicas de Lorestan.

Consentimiento para la publicación

No es aplicable.

Intereses competitivos...
Los autores declaran que no tienen intereses contrapuestos.

Nota del editor

Springer Nature se mantiene neutral con respecto a las reclamaciones
jurisdiccionales en
mapas publicados y afiliaciones institucionales.

Detalles del autor

1Centro de Investigación de Medicina Herbal Razi, Universidad de Ciencias Médicas

Lorestan, Khorramabad, Irán. 2Departamento de Bioquímica, Universidad de

Ciencias Médicas de Lorestan, Khorramabad, Irán. 3Departamento de Ciencias
Anatómicas, Universidad de Ciencias Médicas de Kermanshah, Kermanshah,
Irán.
4Comité de Investigación Estudiantil, Universidad de Ciencias Médicas Lorestan,

Khorramabad, Irán. 5Centro de Ingeniería de Tejidos e Investigación de Células

Madre, Universidad de Ciencias Médicas Shahroud, Shahroud, Irán.

Recibido: 12 de febrero de 2019 Aceptado: 8 de abril de 2019

Referencias
1. Guo S, DiPietro LA. Factores que afectan a la curación de las heridas.
J Dent Res. 2010;89(3):219-29.
2. Sadava EE, Krpata DM, Gao Y, Rosen MJ, Novitsky YW. Proceso de
curación de la herida y mediadores: implicaciones de las modulaciones para
la reparación de la hernia y la integración de la malla. J Biomed Mater Res A.
2014;102(1):295-302.
3. Atiba A, Nishimura M, Kakinuma S, Hiraoka T, Goryo M, Shimada Y, et al. La
administración oral de aloe vera acelera la curación aguda de las heridas
retardada por la radiación al estimular la producción del factor de crecimiento
transformante-β y del factor de crecimiento de los fibroblastos. Am J Surg.
2011;201(6):809-18.
4. Ferrari G, Cook BD, Terushkin V, Pintucci G, Mignatti P. El factor de
crecimiento transformante beta 1 (TGF-β1) induce la angiogénesis a través de
la apoptosis mediada por el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF). J
Cell Physiol. 2009;219(2):449-58.
5. Ma J, Wang Q, Fei T, Han J-DJ, Chen Y-G. El MCP-1 media la angiogénesis
inducida por el TGF-β al estimular la migración de las células del músculo liso
vascular. Sangre. 2007;109(3):987–94.
6. Larsson J, Goumans MJ, Sjöstrand LJ, van Rooijen MA, Ward D, Levéen P,
et al. Angiogénesis anormal pero potencial hematopoyético intacto en
ratones con deficiencia de receptores TGF-β tipo I. EMBO J.
2001;20(7):1663-73.
Hormozi y otros. Inflamación y regeneración (2019) 39:7 Página 9 de
7
8. Sánchez-Elsner T, Botella LM, Velasco B, A, Attisano L, Bernabéu C.
Synergistic cooperation between hypoxia and transforming growth factor-β
pathways on human vascular endothelial growth factor gene expression.
J Biol Chem. 2001;276(42):38527–35.
9. Mason JC, Lidington EA, Ahmad SR, Haskard DO. El bFGF y el VEGF
mejoran sinérgicamente la citoprotección endotelial mediante la inducción
del factor acelerador de la descomposición. Am J Phys Cell Phys.
2002;282(3):C578-C87.
10. Ponce CC, Chauffaille MLLF, Ihara SSM, Silva MRR. Aumento de la
angiogénesis en la mielofibrosis primaria: factor de crecimiento transformante
latente-β como posible factor angiogénico. Rev Bras Hematol Hemoter.
2014;36(5):322–8.
11. Hom DB, Unger GM, Pernell KJ, Manivel JC. Mejorando la curación de la
herida quirúrgica con el factor de crecimiento básico de los fibroblastos
después de la radiación. Laringoscopio. 2005;115(3):412–22.
12. Jozefczuk J, Drews K, Adjaye J. Preparación de células fibroblásticas
embrionarias de ratón adecuadas para el cultivo de células madre
pluripotentes embrionarias e inducidas humanas. J Vis Exp. 2012;(64).
https://doi.org/10.3791/3854.
13. Fronza M, Heinzmann B, Hamburger M, Laufer S, Merfort I. Determinación del
efecto curativo de los extractos de caléndula usando el ensayo de raspado
con fibroblastos 3T3. J Etnofarmacol. 2009;126(3):463–7.
14. Saini P, Al-Shibani N, Sun J, Zhang W, Song F, Gregson KS, et al. Efectos
de la Caléndula officinalis en los fibroblastos gingivales humanos.
Homeopatía.
2012;101(2):92–8.
15. Min YD, Choi CH, Bark H, Son HY, Park HH, Lee S, et al. La quercetina
inhibe la expresión de citoquinas inflamatorias a través de la atenuación de
NF-kappaB y p38 MAPK en la línea de mastocitos humanos HMC-1.
Inflamm Res. 2007;56(5):210-5.
16. Parente LM, Andrade MA, Brito LA, Moura VM, Miguel MP, Lino-Junior Rde
S, et al. Actividad angiogénica de las flores de Caléndula officinalis L. en
ratas. Acta Cir Bras. 2011;26(1):19–24.
17. Patrick K, Kumar S, Edwardson P, Hutchinson J. Inducción de
vascularización por un extracto acuoso de las flores de Caléndula officinalis
L. la caléndula europea. Fitomedicina. 1996;3(1):11–8.
18. Gurtner GC, Werner S, Barrandon Y, Longaker MT. Reparación y
regeneración de heridas. La naturaleza. 2008;453(7193):314–21.
19. Schafer M, Werner S. Control transcripcional de la reparación de la herida.
Annu Rev Cell Dev Biol. 2007;23:69-92.
20. Ganapathy N, Venkataraman SS, Daniel R, Aravind RJ, Kumarakrishnan
VB. Biología molecular de la curación de heridas. J Pharm Bioallied Sci.
2012; 4(Suppl 2):S334-7.
21. Isaka YTM, Ando Y, Nakamura H, Kaneda Y, Imai E, Hori M. Factor de
crecimiento transformante-beta 1 oligodo-oxinucleótidos antisentido
bloquean la fibrosis intersticial en la obstrucción ureteral unilateral.
Kidney Int. 2000;58:1885-92.
22. Song L, Tian Y, Xu Z-J, Zhang C-P. La adrenalina inhibió la proliferación
celular y reguló la expresión del TGF-beta1 y el bFGF en fibroblastos
cicatrizados hipertróficos humanos cultivados a través de un receptor alfa.
EXCLI J. 2008;7:1-12.